JP2021109877A - 癌化学療法に起因する耐性の除去および癌化学療法の効果の強化のための医薬組成物およびその使用 - Google Patents

Abstract

【課題】癌細胞転移、癌細胞増殖、腫瘍成長、および／または血管新生の抑制を含む癌の予防、治療、および抑制を目的とする新規の安全な治療法を提供する。【解決手段】抗癌剤耐性の除去および抗癌剤の感受性を高めるための医薬組成物であって、ＯＮＣＯ Ｐ−８（配列番号１：ＧＳＫＥＬＲＣＱＣＩＲＳＹＳＫＰＦＨＰＫＦＩＫＥＬＲＶＩＰＡＳＱＦＣＡＮＴＥＩＩＶＫＬＳＤＧＲＥＬＣＬＤＰＫＥＮＷＶＱＲＶＶＥＫＦＬＫＲＡＥＮＳ）から選択されるケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチド、化学療法剤、薬学的に許容可能な緩衝液、希釈剤、担体、アジュバントまたは賦形剤を含む薬物、を含む医薬組成物を提供する。【選択図】図１

Description

発明の分野
本発明は、医薬組成物に関する。特に、本発明は、抗癌剤耐性を除去する、および抗癌剤の感受性を高めるための医薬組成物に関する。

より具体的には、本発明はさらに、抗癌剤耐性を克服し、薬剤耐性癌および薬剤耐性癌の患者を治療し、腫瘍増殖および／または転移を抑制するための、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドと組み合わせた化学療法剤を含む医薬組成物に関する。

癌は、ヒトの健康にとって大きな負担となり、毎年、全死亡の推定１３％を占める。世界中の急速な人口増加および高齢化に伴い、多くの国において、死亡の主要な原因としての癌の顕著な増大として現れている面もある。

癌の治療は、今日でも、医療の難題の１つとして残されている。後期および転移癌の治療は、大きな挑戦として残されている。例えば、膵癌は、壊滅的悪性腫瘍であり、副作用を低減させた効果的治療の開発は難題であることが立証された。膵臓癌は致命的なヒト悪性腫瘍であり、ステージＩの５年生存率は１４％未満であり、ステージＩＶでは１％未満である。ほとんどの症例が進行期で診断されるという事実のために、膵臓癌の治療選択肢は極めて限られており、主に対症療法である。分子および遺伝的ベースの膵臓癌は、広範に研究されてきたが、治療の選択肢は、依然として限られている。

現在では、癌治療は、患者の癌細胞を根絶するために、古典的な化学毒性化学療法、手術、および／または放射線療法を必要とする。これらの手法の全ては、患者にとって重大な不利益をもたらす。

化学療法は、多くの癌の標準治療と考えられている。化学療法は多くの場合、腫瘍サイズを小さくし、その後の手術と、それに続く放射線療法およびさらなるアジュバント化学療法を可能とする。しかし、ごく最近の抗癌剤が、癌性細胞と正常細胞との間を大きく区別しないことを考慮すると、これらの化学療法剤に関連する全身毒性および有害作用は、それらの治療効力を制限する。さらに、腫瘍疾患の治療に利用できる種々の化学療法剤が存在する。

他方では、手術は、患者の健康に起因して禁忌となる場合、または患者に受け入れられない場合がある。さらに、手術は、腫瘍組織を完全には除去できない可能性がある。放射線療法は、照射される癌組織が、正常な組織より高い感受性を示す場合にのみ効果的であり、放射線療法もまた、深刻な副作用を誘発する場合がある。

いずれかの化学療法剤、および生物学的薬物ならびに放射線療法を含む多くの腫瘍治療薬が現在使用されている。

ゲムシタビンは、限定されないが、膵臓癌および結腸直腸癌を含む広範囲の腫瘍用として承認された化学療法剤である。しかし、ゲムシタビンの効力はわずかであり、膵臓癌患者の場合には特に、余命はまれにしか延長されない。ゲムシタビン投与の副作用は、他の化学療法剤と比べた場合、比較的穏やかであり、感染症のリスクが増大する骨髄抑制、出血、悪心、嘔吐のリスクが増大する血小板数の減少、肝臓機能血液検査値の増加および疲労からなる。しかし、一般的に、ゲムシタビンは、患者の対するその少ない毒作用およびその結果のより良好な生活の質のために、他の治療法を置換してきた。

他方では、最近、腫瘍形成の新規モデルが、広く受け入れられてきており、このモデルでは、全腫瘍量の小さな部分のみが腫瘍内の腫瘍原性活性に関与していることを仮定している。新規なモデルによる腫瘍原性細胞のこの小さな部分は、幹細胞様特性を有する形質転換細胞であり、「癌幹細胞」（ＣＳＣ）と呼ばれる。

生存している癌幹細胞は腫瘍を再生息させ、再燃をもたらし得るため、抗癌療法はＣＳＣに対する戦略を含むことが必須となっている。癌幹細胞を選択的に標的にすることによって、攻撃的な切除できない腫瘍および難治性または再発性癌の患者を治療し、さらに腫瘍転移および再発を予防することが可能となる。癌幹細胞を標的とする特異的療法の開発は、癌患者、特に転移性癌患者の生存および生活の質の改善に対する希望をもたらすものである。

しかし、癌の治療で腫瘍学者が直面する最も深刻な問題は、化学療法剤の細胞傷害性を低減させる腫瘍の薬剤耐性の存在である。いくつかの癌は、治療の前に薬剤耐性であり、一方、その他の癌は、治療中に薬剤耐性を生ずる。

さらに、固形腫瘍増殖は通常、血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）（血管新生（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ））依存性である。脈管構造中の内皮細胞（ＥＣ）は、血管新生で重要な役割を果たし、従って、この活性を標的とする治療薬の必要性が存在する。血管新生中の血管内皮細胞の増殖、遊走および分化は、種々のケモカインおよびケモカイン受容体の複雑な相互作用により、正常および疾患状態の両方において調節されていると理解されている。現時点では、多くの異なるタイプの腫瘍が、特に、ＣＸＣＬ８と呼ばれるＥＬＲ−ＣＸＣケモカインを、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２と共に、内皮細胞（ＥＣ）で分泌できることが立証されている。

これらの問題を考慮すると、癌細胞転移、癌細胞増殖、腫瘍成長、および／または血管新生の抑制を含む癌の予防、治療、および抑制を目的とする新規の安全な治療法が、当該技術分野において求められている。

本発明の目的は、薬剤耐性を克服するための薬剤／薬物／医薬組成物、または抗癌剤耐性を克服するための薬剤／薬物／医薬組成物を提供することである。

本発明の別の態様は、癌の治療方法、薬剤耐性癌の治療方法、および薬剤耐性癌の対象などの対象の癌の治療に使用するための医薬組成物を提供する。

本発明の別の態様は、個体の癌を治療する方法を提供し、該方法は、１個または複数のケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび１種または複数の薬物を含む併用療法剤を個体に投与することを含む。

他の実施形態は、化学療法剤、薬学的に許容可能な緩衝液、希釈剤、担体、アジュバントまたは賦形剤と組み合わせて投与される場合に、個体の癌を治療するための薬物の製造におけるケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドの使用；およびケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドと組み合わせて投与される場合に、個体の癌を治療するための化学療法剤、薬学的に許容可能な緩衝液、希釈剤、担体、アジュバントまたは賦形剤の使用を提供する。

まとめると、これらおよび他の目的は、高められた有効性および生存率ならびに化学療法剤に通常付随する副作用および毒性の低減を実証する本開示により達成された。

以下の実施形態では、添付図面を参照しながら本発明が詳細に説明される。

ＯＮＣＯ Ｐ−８がＣＸＣＬ８の効力を中和し、ヒト膵臓癌（ＰＤＡＣ）細胞の侵襲率を低減できることを示す。データは、平均±ＳＤとして示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＯＮＣＯ Ｐ−８がＣＸＣＬ８の効力を中和し、ＢｘＰＣ−３のコロニー形成率を低減できることを示す。データは、平均±ＳＤとして示す。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ゲムシタビン耐性膵管腺癌（ＰＤＡＣ）細胞株の樹立を示す。この図は、ＢｘＰＣ−３ＧＲの樹立を示す。 ゲムシタビン耐性膵管腺癌（ＰＤＡＣ）細胞株の樹立を示す。この図は、ＭＩＡＰａＣａ２の樹立を示す。 親細胞およびゲムシタビン投与によるゲムシタビン耐性細胞のＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を示す。この図は、ＢｘＰＣ−３と比較したＢｘＰＣ−３ＧＲのｍＲＮＡ発現を示す。 親細胞およびゲムシタビン投与によるゲムシタビン耐性細胞のＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を示す。この図は、ＭＩＡＰａＣａ２と比較したＭＩＡＰａＣａ２ＧＲのｍＲＮＡ発現を示す。データは、平均±ＳＤとして示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ゲムシタビン投与またはＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビン投与によるゲムシタビン耐性細胞のＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を示す。この図は、ＢｘＰＣ−３と比較したＢｘＰＣ−３ＧＲのｍＲＮＡ発現を示す。 ゲムシタビン投与またはＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビン投与によるゲムシタビン耐性細胞のＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を示す。この図は、ＭＩＡＰａＣａ２と比較したＭＩＡＰａＣａ２ＧＲのｍＲＮＡ発現を示す。データは、平均±ＳＤとして示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ細胞の侵襲能力を抑制できることを示す。この図は、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで処理した、またはＯＮＣＯ Ｐ−８およびＩＬ−８と組み合わせたゲムシタビンで処理した、またはＩＬ−８と組み合わせたゲムシタビンで処理したＢｘＰＣ−３ＧＲの侵襲率を示す。 ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ細胞の侵襲能力を抑制できることを示す。この図は、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで処理した、またはＯＮＣＯ Ｐ−８およびＩＬ−８と組み合わせたゲムシタビンで処理した、またはＩＬ−８と組み合わせたゲムシタビンで処理したＭＩＡＰａＣａ２ＧＲの侵襲率を示す。 ゲムシタビン耐性癌細胞の増殖速度が、ゲムシタビンにより高められ、ＯＮＣＯ Ｐ−８により抑制され得ることを示す。 ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ゲムシタビン耐性癌細胞の遊走速度を低下させることができることを示す。 ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ゲムシタビン耐性癌細胞の侵襲率を低下させることができることを示す。 細胞形態と、ＢｘＰＣ−３ＧＲ親細胞とＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドとの間のＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２遺伝子発現の比較を示す。この図は、ＢｘＰＣ−３ＧＲ親細胞の細胞形態を示す。 細胞形態と、ＢｘＰＣ−３ＧＲ親細胞とＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドとの間のＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２遺伝子発現の比較を示す。この図は、ＢｘＰＣ−３ＧＲ親細胞とＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドとの間の細胞形態の比較を示す。この図は、ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来のスフェロイドの細胞形態を示す。 細胞形態と、ＢｘＰＣ−３ＧＲ親細胞とＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドとの間のＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２遺伝子発現の比較を示す。この図は、ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来のスフェロイド上のＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２のＲＮＡ発現が親ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞よりも多いことを示す。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞およびＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドの主要転写因子ＮＡＮＯＧのＲＴ−ＰＣＲによるＲＮＡ発現分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞およびＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドの主要転写因子ＯＣＴ４のＲＴ−ＰＣＲによるＲＮＡ発現分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞およびＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドの主要転写因子ＳＯＸ２のＲＴ−ＰＣＲによるＲＮＡ発現分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞およびＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドの主要転写因子ＡＬＤＨＡ１のＲＴ−ＰＣＲによるＲＮＡ発現分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞およびＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドの主要転写因子ＢＭＩ−１のＲＴ−ＰＣＲによるＲＮＡ発現分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞およびＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドの主要転写因子ＫＬＦ４のＲＴ−ＰＣＲによるＲＮＡ発現分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞およびＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドの主要転写因子ネスチンのＲＴ−ＰＣＲによるＲＮＡ発現分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 １００ｎＭのゲムシタビン（ＧＥＭ）処理後のＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドのＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイド中のＮＡＮＯＧの発現レベルに対するゲムシタビンと組み合わせたＯＮＣＯ Ｐ−８の効果を測定するために実施したＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。薬物濃度：ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ；すなわち４７ｎＭ）、ゲムシタビン（１００ｎＭ）。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイド中のＯＣＴ４の発現レベルに対するゲムシタビンと組み合わせたＯＮＣＯ Ｐ−８の効果を測定するために実施したＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。薬物濃度：ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ；すなわち４７ｎＭ）、ゲムシタビン（１００ｎＭ）。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイド中のＳＯＸ２の発現レベルに対するゲムシタビンと組み合わせたＯＮＣＯ Ｐ−８の効果を測定するために実施したＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。薬物濃度：ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ；すなわち４７ｎＭ）、ゲムシタビン（１００ｎＭ）。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイド中のＡＬＤＨＡ１の発現レベルに対するゲムシタビンと組み合わせたＯＮＣＯ Ｐ−８の効果を測定するために実施したＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。薬物濃度：ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ；すなわち４７ｎＭ）、ゲムシタビン（１００ｎＭ）。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイド中のＢＭＩ−１の発現レベルに対するゲムシタビンと組み合わせたＯＮＣＯ Ｐ−８の効果を測定するために実施したＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。薬物濃度：ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ；すなわち４７ｎＭ）、ゲムシタビン（１００ｎＭ）。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイド中のＫＬＦ４の発現レベルに対するゲムシタビンと組み合わせたＯＮＣＯ Ｐ−８の効果を測定するために実施したＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。薬物濃度：ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ；すなわち４７ｎＭ）、ゲムシタビン（１００ｎＭ）。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイド中のネスチンの発現レベルに対するゲムシタビンと組み合わせたＯＮＣＯ Ｐ−８の効果を測定するために実施したＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。薬剤耐性関連ＣＳＣマーカー：ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２。細胞侵襲関連ＣＳＣマーカー：ＡＬＤＨＡ１、ＢＭＩ−１。腫瘍増殖関連ＣＳＣマーカー：ＫＬＦ４、ネスチン。薬物濃度：ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ；すなわち４７ｎＭ）、ゲムシタビン（１００ｎＭ）。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルの腫瘍増殖を抑制し、寿命を延長することを示す。ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルを、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８で治療した、またはＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで治療した、またはゲムシタビンで治療した、またはＰＢＳで治療した。ゲムシタビン投与は、約１００ｍｇ／ｋｇ対象重量を週２回とした。ＯＮＣＯ Ｐ−８投与は、約５００μｇ／ｋｇ対象重量を週３回とした。この図は、異種移植モデルの腫瘍サイズ（ｍｍ３）を示した。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルの腫瘍増殖を抑制し、寿命を延長することを示す。ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルを、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８で治療した、またはＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで治療した、またはゲムシタビンで治療した、またはＰＢＳで治療した。ゲムシタビン投与は、約１００ｍｇ／ｋｇ対象重量を週２回とした。ＯＮＣＯ Ｐ−８投与は、約５００μｇ／ｋｇ対象重量を週３回とした。この図は、異種移植モデルの体重（ｇ）を示した。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルの腫瘍増殖を抑制し、寿命を延長することを示す。ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルを、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８で治療した、またはＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで治療した、またはゲムシタビンで治療した、またはＰＢＳで治療した。ゲムシタビン投与は、約１００ｍｇ／ｋｇ対象重量を週２回とした。ＯＮＣＯ Ｐ−８投与は、約５００μｇ／ｋｇ対象重量を週３回とした。この図は、異種移植モデルの生存率（％）を示した。ＯＮＣＯ Ｐ−８で治療した、またはＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで治療した異種移植モデルの生存率は、約１００％である。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルのゲムシタビン耐性腫瘍増殖を抑制し、寿命を延長することを示す。ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルを、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで治療した、またはゲムシタビンで治療した。ゲムシタビン投与は、約１００ｍｇ／ｋｇ対象重量を腹腔内（ＩＰ）経路経由で週２回とした。ＯＮＣＯ Ｐ−８投与は、約５００μｇ／ｋｇ対象重量を腹腔内（ＩＰ）経路経由で週３回とした。この図は、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルの実験手順を示す概略図であった。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルのゲムシタビン耐性腫瘍増殖を抑制し、寿命を延長することを示す。ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルを、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで治療した、またはゲムシタビンで治療した。ゲムシタビン投与は、約１００ｍｇ／ｋｇ対象重量を腹腔内（ＩＰ）経路経由で週２回とした。ＯＮＣＯ Ｐ−８投与は、約５００μｇ／ｋｇ対象重量を腹腔内（ＩＰ）経路経由で週３回とした。この図は、ゲムシタビン耐性異種移植腫瘍モデルの腫瘍サイズ（ｍｍ３）を示した。データは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝８）として示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルのゲムシタビン耐性腫瘍増殖を抑制し、寿命を延長することを示す。ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルを、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで治療した、またはゲムシタビンで治療した。ゲムシタビン投与は、約１００ｍｇ／ｋｇ対象重量を腹腔内（ＩＰ）経路経由で週２回とした。ＯＮＣＯ Ｐ−８投与は、約５００μｇ／ｋｇ対象重量を腹腔内（ＩＰ）経路経由で週３回とした。この図は、７２日目の屠殺後に取得された腫瘍の外観を示した（スケールバー＝１０ｍｍ）。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルのゲムシタビン耐性腫瘍増殖を抑制し、寿命を延長することを示す。ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルを、それぞれ、ＯＮＣＯ Ｐ−８と組み合わせたゲムシタビンで治療した、またはゲムシタビンで治療した。ゲムシタビン投与は、約１００ｍｇ／ｋｇ対象重量を腹腔内（ＩＰ）経路経由で週２回とした。ＯＮＣＯ Ｐ−８投与は、約５００μｇ／ｋｇ対象重量を腹腔内（ＩＰ）経路経由で週３回とした。この図は、「ゲムシタビン群」と比較した７２日目までの「ＯＮＣＯ Ｐ−８＋ゲムシタビン群」の生存率を示す。データは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝８）として示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルのＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を低減させることを示す。この図は、「ゲムシタビン＋ＯＮＣＯ Ｐ−８群」と「ゲムシタビン群」との間で比較したＩＬ−８ ｍＲＮＡ発現を示す。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルのＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を低減させることを示す。この図は、「ゲムシタビン＋ＯＮＣＯ Ｐ−８群」と「ゲムシタビン群」との間で比較したＣＸＣＲ１ ｍＲＮＡ発現を示す。 ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用が、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ異種移植腫瘍モデルのＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を低減させることを示す。この図は、「ゲムシタビン＋ＯＮＣＯ Ｐ−８群」と「ゲムシタビン群」との間で比較したＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を示す。 ＯＮＣＯ Ｐ８−ＣＸＣＲ２複合体形成の結合能力を、ＩＬ−８−ＣＸＣＲ２複合体形成と比較して示す。この図は、ＯＮＣＯ Ｐ８−ＣＸＣＲ２複合体形成の結合能力を示した。 ＯＮＣＯ Ｐ８−ＣＸＣＲ２複合体形成の結合能力を、ＩＬ−８−ＣＸＣＲ２複合体形成と比較して示す。この図は、ＩＬ−８−ＣＸＣＲ２複合体形成の結合能力を示した。 ＯＮＣＯ Ｐ８−ＣＸＣＲ１複合体形成の結合能力を、ＩＬ−８−ＣＸＣＲ１複合体形成と比較して示す。この図は、ＯＮＣＯ Ｐ８−ＣＸＣＲ１複合体形成の結合能力を示した。 ＯＮＣＯ Ｐ８−ＣＸＣＲ１複合体形成の結合能力を、ＩＬ−８−ＣＸＣＲ１複合体形成と比較して示す。この図は、ＩＬ−８−ＣＸＣＲ１複合体形成の結合能力を示した。

次の定義は、定義される用語を明確にすることを意図するものであり、限定するものではない。本明細書で使用される特定の用語が具体的に定義されない場合に、このような用語を、明確でないと見なすべきではない。むしろ、用語は、当業者により認められている意味の範囲内で使用される。

本明細書で使用される場合、「薬剤」という用語は、患者に対する薬理活性または効果を有する化合物を意味する。用語の「薬剤」、「有効成分」、「化合物」、および「薬物」は、本明細書では同じ意味で用いられる。

用語の「サイトカイン」は、機能的な小さいペプチドを意味し、生理的条件下で、種々の体組織内の細胞間通信を制御する。サイトカインは、インターロイキン、モノカイン、リンホカイン、ケモカインおよび成長因子とも呼ばれる。局所組織または循環サイトカインレベルは、多数の癌中で変化し、これが、発生／進行、治療および予後に影響を与えることがある。例えば、上昇したサイトカインレベルは、種々の治療の抗癌活性の低減と関連付けられてきた。また、サイトカインは、化学療法剤の毒作用を悪化させ、薬物代謝に影響を与えることが実証されてきた。腫瘍微小環境中で生成されるインターフェロンおよびインターロイキンなどの炎症性サイトカインは、疾患進行の刺激または抑制に関与する。

本明細書で使用される場合、用語の「医薬併用剤」または「組み合わせ」は、治療薬の併用投与を意味し、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドであり得る、または／化学療法剤と組み合わされ得る。本発明では、治療薬は、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドを含む、または／独立に、同時にもしくは組み合わせ相手が相乗的効果を示すことを可能とするような時間間隔以内に別々に投与できる化学療法剤と組み合わされる。

本明細書で使用される場合、用語の「相乗的」または「相乗的効果」は、本発明の組み合わせで、および／または本発明の癌の治療方法により達成される治療効果を意味し、この効果は、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび化学療法剤単独を別々に用いて得られる効果の合計よりも大きい。好都合にも、治療薬間のこのような相乗作用は、片方または両方の治療薬のより少ない投与量の使用を可能にし、同じ投与量でより大きな効果をもたらす、および／または薬剤耐性の形成を防ぐまたは遅らせる。相乗的効果は、本明細書に記載の医薬併用剤または組成物中に含まれる治療薬の同時処方により、または単位剤形を用いて前記治療薬の同時投与によりもしくは別々の配合物として同時にまたは順次の投与により達成できる。

本明細書で使用される場合、用語の「治療有効量」は、癌を罹患している特定の患者（対象）において所望の治療反応を生成するのに効果的な一定量のケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドまたは／化学療法剤との組み合わせを意味する。特に用語の「治療有効量」は、投与時に所望の治療効果を達成する量の治療薬を含む。本発明では、所望の治療効果には、対象における、癌転移を含む癌の進行の部分的または全体的な抑制、遅延または防止；癌転移を含む癌の再発の抑制、遅延または防止；および／または癌の発生または発達の防止が含まれる。治療薬、すなわち、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドまたは／化学療法剤と組み合わせの治療量については、対象の治療に使用されるそれぞれの治療薬の量は、健全な医学的判断の範囲内で、望ましくないまたは重度の副作用を回避するのに十分な低い量であることも考慮される。組み合わせて使用される場合、治療有効量は、最終使用者の年齢および健康状態、癌の重症度、治療期間、いずれか他の併用療法の性質、治療に用いられる治療薬の具体的種類、治療薬を含む医薬組成物に利用される特定の薬学的に許容可能な担体およびその他の関連因子と共に変化する。

本明細書で使用される場合、用語の「対象」は、動物、特に哺乳動物、より具体的には、ヒトを意味する。本明細書で使用される場合、用語の「哺乳動物」は、ヒトを含む、哺乳綱の温血脊椎動物を意味する。用語の哺乳動物には、ネコ、イヌ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、サル、マウス、ラット、スナネズミ、モルモット、ブタおよびヒトなどの動物が含まれる。用語の「対象」は、用語の患者と同義に使用され得る。本発明では、表現「それを必要としている対象」は、癌の治療を必要としている対象を意味する。あるいは、表現「それを必要としている対象」は、癌と診断された対象（患者）を意味する。

用語の「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」または「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」は、本発明の化合物の機能を実行するために、その化合物を対象に導入する経路を含む。使用し得る投与経路の例には、注射（皮下、静脈内、非経口、腹腔内、くも膜下腔内）、経口、吸入、直腸および経皮が挙げられる。医薬製剤は、それぞれの投与経路に好適な形態で投与され得る。

本明細書で使用される場合、「治療すること（Ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、哺乳動物（特にヒトまたは伴侶動物）などの対象／患者の疾患または病状（例えば、癌、腫瘍、新生物状態）の治療をすることまたは治療を意味し、これには、疾患または病状を回復させること、すなわち、対象／患者の疾患または病状を取り除くことまたは退行させること；疾患または病状を抑制すること、すなわち、対象／患者の疾患または病状の発生を遅らせることまたは抑止すること；または対象／患者の疾患または病状の症状を緩和することを意味する。

本明細書で使用される場合、用語の「薬学的に許容可能な」は、組成物中で使用される担体、希釈剤、賦形剤、および／または塩が、他の製剤成分と適合し、そのレシピエントに有害であってはならないことを意味する。「薬学的に許容可能な」はまた、組成物または剤形が、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症がなく、動物またはヒトなどの対象のための使用に好適し、合理的利益／リスク比率に見合っていることを意味する。

本明細書で使用される場合、「新生物」という用語は、異常な細胞または組織増殖を意味し、良性、すなわち、非癌性増殖、および悪性、すなわち、癌性増殖を含むと理解されている。用語の「新生物の」は、新生物または新生物に関連することを意味する。用語の「抗新生物薬」は、組織、系、動物、哺乳動物、ヒト、または他の対象中で抗新生物作用をもたらす物質を意味すると理解される。

本発明の化合物を用いて治療できる疾患としては、限定されないが、癌、例えば、癌性腫瘍が挙げられる。「癌」は、不適切に高レベルの細胞分裂、不適切に低レベルのアポトーシス、または両方により引き起こされる、またはこれらを生ずる任意の疾患を意味することが意図されている。

本明細書で使用される場合、「膵臓癌」という用語は、膵臓細胞にその起源を有する任意の癌を意味し、転移性および局所形の膵臓癌を含む。特定の実施形態では、特定の膵臓癌患者亜集団を本発明の併用療法により治療可能である。本発明の薬剤の組み合わせを利用して、効力の増大、および効力を得るための両方の薬剤必要量の低減を促進し得る。

用語の「癌幹細胞」またはＣＳＣは、大幅に増殖し、新しい腫瘍を形成し、癌成長を維持する能力を含む、腫瘍開始および腫瘍維持能力を有する細胞、すなわち、腫瘍の形成および増殖を促進する無限増殖性潜在能力を備えた細胞を意味する。ＣＳＣは、バルク腫瘍細胞とは生物学的に異なり、幹細胞に関連する特性、特に自己再生および増殖し、特定の癌試料中で認められる全ての細胞型を発生させる能力を備える。用語の「癌幹細胞」またはＣＳＣは、幹細胞（ＳＣ）中の遺伝子変化および細胞中のＣＳＣになる遺伝子変化の両方を含む。

ＣＳＣはまた、腫瘍開始細胞、癌幹様細胞、幹様癌細胞、高度に腫瘍原性の細胞、腫瘍幹細胞、固形腫瘍幹細胞、または超悪性細胞とも呼ばれる。他方では、ＣＳＣは、腫瘍形成、癌転移、および癌再発に本質的に関与していることが実証されている。

本明細書で使用される場合、用語の癌幹細胞の「分化」は、癌幹細胞の多能性腫瘍前駆細胞への変化および多能性腫瘍前駆細胞の単能性腫瘍前駆細胞および／または高分化腫瘍細胞への変化の両方を意味する。

用語の「発現」は、遺伝子産物の生合成を意味する。例えば、コード配列の場合、発現は、コード配列のｍＲＮＡへの転写およびｍＲＮＡの１個または複数のポリペプチドへの翻訳を含む。逆に、非コード配列の発現は、非コード配列の転写物への転写のみを含む。

本明細書で使用される場合、「抗増殖剤効果」という用語は、本発明の薬剤または複数薬剤の癌細胞増殖および細胞分裂を抑制する能力または個体における癌細胞増殖および細胞分裂の発生率を減らす能力を意味する。ある実施形態では、本発明の薬剤は、サイトカイン産生に影響を及ぼすことにより、抗増殖効果をもたらす。ある実施形態では、本発明の薬剤または複数薬剤は、個体における癌細胞増殖および細胞分裂の発生率を、抗増殖剤効果を有することが既知の既存の薬物と比較して、約１％〜約９９．０％低減させる。

本明細書で使用される場合、「抗侵襲効果」という用語は、個体における本発明の薬剤または複数薬剤の癌侵襲または腫瘍侵襲発生率を減らす能力を意味する。ある実施形態では、本発明の薬剤または複数薬剤は、個体における腫瘍侵襲の発生率を、抗侵襲効果を有することが既知の既存の薬物と比較して、約１％〜約９９．０％低減させる。

本明細書で使用される場合、「抗遊走効果」という用語は、個体における本発明の薬剤または複数薬剤の癌の細胞遊走を防ぐまたは腫瘍細胞の遊走の発生率を低減する能力を意味し、侵襲の過程は、これらの細胞が基底膜および細胞外マトリックスを通過する際に誘発され、それらがリンパまたは血管循環中に侵入するに伴い、血管内異物侵入へ進行する。その後、転移性細胞は、血管外漏出の過程で、循環系を通って移動し、血管基底膜および細胞外マトリックスに侵入する。最終的に、これらの細胞は、新しい位置に付着し、増殖して二次腫瘍を生成する。ある実施形態では、本発明の薬剤または複数薬剤は、個体における腫瘍細胞の遊走の発生率を、抗遊走効果を有することが既知の既存の薬物と比較して、約１％〜約９９．０％低減させる。

本明細書で使用される場合、「抗転移効果」という用語は、転移過程における次記のステップの少なくとも１つの発生を防止、または低減させる能力を意味する：（１）原発性部位からの癌細胞の脱離、（２）新しい血管中への導入および侵入、（３）血液循環からの退出、および（４）離れた位置での新しいコロニーの樹立。ある実施形態では、本発明の薬剤または複数薬剤は、個体の転移過程における１つのステップの発生率を、抗転移効果を有することが既知の既存の薬物と比較して、約１％〜約９９．０％低減させる。

「臨床的便益」は、癌を治療している医師および／または臨床医により用いられる表現を意味する。この用語は、治療中に対象／患者により理解されたまたは認知された任意の利益を包含する。本明細書で使用される場合、この用語は、限定されないが、１つまたは複数の臨床的便益が、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の抑制または減少；進行、無新規腫瘍または病変までの時間の遅延、新規腫瘍の形成の減少、生存または無増悪生存期間の増加、および無転移の内の１つまたは複数であることを含む。

一態様では、本発明は、抗癌剤耐性を除去し、抗癌剤の感受性を高めるための医薬組成物を提供し、該組成物は、少なくとも、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドを含む。加えて、医薬組成物は、化学療法剤をさらに含む。

用語の「アミノ酸配列」、「タンパク質」、「ポリペプチド」および「ペプチド」は、本明細書では同じ意味で用いられ、アミド結合または等価物で共有結合された２個以上のアミノ酸、または「残基」を意味する。アミノ酸配列は、非天然および非アミド化学結合により結合され得る。

任意選択で、本発明の例示的実施形態では、本発明のケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドは、限定されないが、ＯＮＣＯ Ｐ−８（配列番号１）を含む。

本発明により用いることができるＯＮＣＯ Ｐ−８（配列番号１）の配列を以下に示す：
配列番号１：
ＧＳＫＥＬＲＣＱＣＩＲＳＹＳＫＰＦＨＰＫＦＩＫＥＬＲＶＩＰＡＳＱＦＣＡＮＴＥＩＩＶＫＬＳＤＧＲＥＬＣＬＤＰＫＥＮＷＶＱＲＶＶＥＫＦＬＫＲＡＥＮＳ

さらに、ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）の類似タンパク質として設計され、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２のアンタゴニストとなった。

一実施形態では、本発明において、ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）に直接的に結合し、それにより、ＩＬ−８のその受容体ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２への結合を阻害する。

別の実施形態では、医薬組成物は、薬物をさらに含み、該薬物は、化学療法剤、薬学的に許容可能な緩衝液、希釈剤、担体、アジュバントまたは賦形剤を含む。

いくつかの異なるタイプの化学療法剤としては、例えば、代謝拮抗物質、抗生物質、アルキル化剤、植物アルカロイド、ホルモン剤（例えば、副腎皮質ステロイドホルモン、性ホルモン）、免疫調節剤、抗凝固剤、抗血栓薬、ニトロソウレア、有糸分裂阻害剤、Ｌ−アスパラギナーゼ、トレチノインおよび他の天然産物が挙げられる。これらの種類の薬物、ならびにそれらの使用により治療できる癌の具体的非限定例は、下記の通りである。

代謝拮抗薬は、新規ＤＮＡの作製を必要とするものを含めて、正常な代謝経路と干渉すると考えられている。一般的代謝拮抗薬としては、限定されないが、葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキセート、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））、プリンアンタゴニスト（例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビン、ダカルバジン、クラドリビン、およびペントスタチン）、およびピリミジンアンタゴニスト（例えば、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、カペシタビン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ（例えば、カペシタビン））、シタラビン（シトシンアラビノシドまたはＡｒａ Ｃ）、およびアザシチジン（Ｖｉｄａｚａ（登録商標）））が挙げられる。

ゲムシタビンは、一般グループの化学療法剤に属し、放射線増感剤としても作用する、代謝拮抗薬として知られるピリミジン類似体である。ゲムシタビンは、細胞分裂相特異性を示し、主として、ＤＮＡ合成を受けている細胞、すなわち、Ｓ期細胞を死滅させ、Ｇ１／Ｓ期境界を通る細胞の進行を遮断する。

さらに一緒に使用できる代謝拮抗薬には、限定されないが、例えば、テガフール、ラルチトレキセド、ヒドロキシ尿素、およびフロクスウリジンなどが挙げられる。硝酸ガリウムは、リボヌクレオチドレダクターゼを阻害する別の代謝拮抗薬である。前述のような代謝拮抗薬を１種または複数の他の代謝拮抗薬および／または１種または複数の異なるクラスの化学療法剤と組み合わせて使用できる。

上記のように、使用できる別のクラスの化学療法剤には、抗癌抗生物質が含まれる。これらには、例えば、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ））、エピルビシン、ダウノルビシン、およびイダルビシン）、ダクチノマイシン、イダルビンシン、プリカマイシン、マイトマイシン、およびブレオマイシンが挙げられる。

より具体的には、抗腫瘍抗生物質は、限定されないが、アクチノマイシンＤ、ミトキサントロン、アクラルビシンおよびネオカルチノスタチンからなる群より選択される。

アルキル化剤は、ＤＮＡ上の負に帯電している部位（例えば、酸素、窒素、リンおよび硫黄原子）を攻撃し、ＤＮＡに結合し、従って、複製、転写および塩基対さえも変える化学療法剤である。ＤＮＡのアルキル化はまた、ＤＮＡ鎖の切断およびＤＮＡ鎖の架橋をもたらす。このようにしてＤＮＡを変えることにより、細胞活性が効果的に停止され、癌細胞は死滅することになる。一般的アルキル化剤としては、限定されないが、プロカルバジン、イソホスファミド（ＩＦＯ）、シクロホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、デカルバジン、ブスルファン、チオテパ、アルトレタミン、シスプラチン、カルボプラチン、ニトロソウレア、カルムスチン、スルホン酸アルキル、エチレンイミン、アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン）、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン）、テモゾロミド、イミダゾテラジン、ストレプトゾシン、トリアゼン、テモゾロミド、メクロレタミン、ムスチン、ウラムスチン、ウラシルマスタード、イホスファミド、オキサリプラチン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、などが挙げられる。前述のようなアルキル化剤を１種または複数の他のアルキル化剤および／または１種または複数の異なるクラスの化学療法剤と組み合わせて使用できる。

本発明により投与できる追加のタイプの化学療法剤は、植物アルカロイド、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、エトポシド、テニポシド、トポテカン、イリノテカン、パクリタキセル、およびドセタキセルである。

またさらに、いくつかの実施形態では、植物アルカロイドは、ベルベリン、オキシベルベリン、ベルバミン、パルマチン、マグノフロリン、フェロデンドリン、ジャテオリジン、カンジシン、メニスペリン、コプチシン、ウォレニン、コルンバミン、エピベルベリン、ヒドラスチン、カナジン、ヒドラスチジン、オキシシアンチン、ベルベルビンおよびイソテトランジンからなる群より選択される。

本発明により使用できるさらなるタイプの抗癌剤は、抗凝固剤および抗血栓剤である。例えば、ヘパリン（例えば、低分子量ヘパリンまたはヘパリン硫酸）またはワーファリンを使用できる。

さらなる実施形態では、有糸分裂阻害剤は、限定されないが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびエトポシドからなる群より選択される。

ホルモン療法剤は、細胞受容体を遮断し、ホルモンのインビボ産生を抑制し、および／または細胞上のホルモン受容体を除去または改変し、これら全ての最終結果は、腫瘍増殖の遅延化または停止をもたらす。通常のホルモン療法剤には、限定されないが、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、フルベストラント、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、イドキシフェンなど）、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール、など）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、ボロゾール、エキセメスタン、ファドロゾール、アミノグルテチミド、エキセメスタン、１−メチル−１，４−アンドロスタジエン−３，１７−ジオンなど）、抗アンドロゲン剤（例えば、ビカルチミド、ニルタミド、フルタミド、酢酸シプロテロンなど）、黄体形成ホルモン放出されるホルモンアゴニスト（ＬＨＲＨアゴニスト）（例えば、ゴセレリン、ロイプロリド、ブセレリンなど）；５−α−レダクターゼ抑制剤、例えば、フィナステリド、などが挙げられる。

「免疫調節剤」は、哺乳動物、例えば、ヒトなどの任意の好適な供給源から得られる、例えば、サイトカインまたはアジュバントなどの任意の好適な免疫調節剤であり得る。望ましくは、免疫調節剤は、細胞株により発現されたウイルス抗原に対し免疫応答を誘発または刺激する。細胞標的化手段はまた、免疫調節剤と考えることができる。同様に、抗体（または抗原に反応するそのフラグメント）、アンチセンス分子、ｄｓＲＮＡｉ、などはまた、所望に応じて、それらがウイルス遺伝子産物の能力を抑制または遮断して、インターフェロンの作用を阻止する程度に、免疫調節剤であると考えることができる。

好適な免疫調節性サイトカインの例としては、インターフェロン（例えば、ＩＦＮα、ＩＦＮβおよびＩＦＮγ）、インターロイキン、腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦαおよびＴＮＦβ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、ＦＬＴ−３リガンド、ｇＩｐ１０、ＴＣＡ−３、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ならびに前出のいずれかの機能性フラグメントが挙げられる。最も好ましい免疫調節性サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦ、例えば、その機能的性フラグメントを含むヒトＧＭ−ＣＳＦである。アジュバントの例としては、これらに限定されないが、ヒートショックタンパク質、ＣｐＧ、リステリア・モノサイトゲネス、水酸化アルミニウム（可溶性抗原と共に使用するための）、リン酸アルミニウム（ミョウバン；可溶性抗原と共に使用するための）、ムラミルジペプチド、ムラミルトリペプチド、結核菌、ＱｕｉｌＡ（植物キラヤ・サポナリア由来の精製サポニン）の単独、またはグリコシド、コレステロール、および／またはリン脂質、空のアデノウィルスカプシド、とのさらなる組み合わせが挙げられる。

ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドと、化学療法剤との間には、重量比、体積比および濃度比に関して特別な制約は存在しない。当業者なら、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドが化学療法剤との組み合わせにより相乗的効果を示す場合には特に、疾患に応じて、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドと化学療法剤との間の適切な比率を選択できる。ある実施形態では、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチド投与は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ対象（患者）体重の週１回〜３回である。

加えて、本発明は、抗癌剤耐性を除去し、抗癌剤の感受性を高めるための医薬組成物の使用、および癌の治療、癌細胞増殖の抑制および／または癌転移の抑制のための該医薬組成物を提供する。

本発明の医薬組成物は、対象の血管新生関連疾患または血管新生依存性疾患を抑制できる。血管新生関連疾患または血管新生依存性疾患としては、限定されないが、血管侵襲および異常細胞増殖、例えば、腫瘍または癌が挙げられる。本発明における癌としては、限定されないが、胸部癌、腹部癌、胃腸癌、頭頸部癌、脳癌、内分泌癌、泌尿器癌、男性生殖器系新生物、婦人科癌、血液癌、皮膚癌、および肉腫が挙げられる。

胸部癌は、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）および／または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む肺癌から選択される。ＮＳＣＬＣは、肺腺癌、扁平上皮細胞癌および／または大細胞癌から選択できる。ＳＣＬＣは、小細胞癌および混合型小細胞／大細胞癌または混合型小細胞肺癌から選択できる。

腹部癌としては、限定されないが、肝臓癌、結腸直腸癌、膵臓癌、腎臓癌（腎細胞癌）、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ））、副腎皮質癌、原発性腹膜癌、腹膜中皮腫が挙げられる。

胃腸癌としては、限定されないが、食道癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ））、肝臓癌（肝細胞癌）、胆嚢および胆道癌、膵臓癌、結腸直腸癌、小腸癌、および肛門癌が挙げられる。

頭頸部癌としては、限定されないが、喉頭および下咽頭癌、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、口腔および中咽頭癌、および唾液腺癌が挙げられる。

脳腫瘍のタイプには、原発性脳腫瘍または二次性脳腫瘍が挙げられる。脳腫瘍としては、限定されないが、星状細胞腫、神経膠芽腫、髄芽腫、乏突起細胞腫、神経膠腫、および脳転移が挙げられる。

内分泌癌としては、限定されないが、副腎腫瘍、神経内分泌腫瘍、副甲状腺腫瘍、下垂体腫瘍、および甲状腺障害が挙げられる。

泌尿器癌としては、限定されないが、膀胱癌および尿道癌が挙げられる。

男性生殖器系新生物としては、限定されないが、前立腺癌、陰茎癌、精巣セミノーマ、および精巣胎児性癌が挙げられる。

婦人科癌としては、限定されないが、子宮頸癌、卵巣癌、子宮癌（子宮内膜癌）、膣癌、および外陰癌が挙げられる。

血液癌としては、限定されないが、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および多発性骨髄腫が挙げられる。

皮膚癌としては、限定されないが、基底細胞皮膚癌、扁平細胞皮膚癌、黒色腫皮膚癌、およびメルケル細胞皮膚癌が挙げられる。

肉腫としては、限定されないが、軟部肉腫、骨肉腫（ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ）（骨肉腫（ｂｏｎｅ ｓａｒｃｏｍａ））、および横紋筋肉腫が挙げられる。

新生物または／および癌には、限定されないが、乳癌、および神経芽腫がさらに含まれる。

ある実施形態では、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドまたは／化学療法剤との組み合わせは、限定されないが、経口、血管内、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内の、腫瘍内、非経口、経鼻、直腸、舌下、局所、エアロゾル、または気管内を含む従来の投与経路により投与できる。

ある実施形態では、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または１種または複数の化学療法剤は、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁液、顆粒、粉剤、カシェ剤、乳剤、カプセル剤、シロップ、エリキシル剤などの経口投与に好適な形態で投与できる。

別の実施形態では、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または１種または複数の化学療法剤は、筋肉内、くも膜下腔内、皮下、腹腔内、静脈内ボーラス注入または静脈内注入などの非経口で投与できる。非経口的投与は、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または化学療法剤を溶液または懸濁剤中に取り込むことにより実現できる。

一実施形態では、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または１種または複数の化学療法剤は、前記ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または１種または複数の化学療法剤および少なくとも１種の薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む医薬組成物の形態で投与できる。

医薬組成物は、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または少なくとも１種の化学療法剤および１種または複数の薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む。丸薬、錠剤、被覆錠剤および硬ゼラチンカプセルの作製のために、使用できる薬学的に活性な賦形剤には、限定されないが、ラクトース、コーンスターチまたはその誘導体、アラビアゴム、マグネシアまたはグルコースなどが挙げられる。軟ゼラチンカプセルおよび坐剤用として使用できる担体には、限定されないが、油脂、ワックス、天然または硬化油、などが挙げられる。溶液を作製するために好適な担体は、例えば、注入溶液、または乳剤またはシロップ用として、例えば、水、生理学的塩化ナトリウム溶液、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、またはアルコール、例えば、エタノール、プロパノールまたはグリセロール、グルコース溶液またはマンニトール溶液などの糖溶液、または前述の種々の溶媒の混合物が挙げられる。医薬組成物に使用される薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体は、従来から既知の薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体であってよく、これらは、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または化学療法剤の剤形および投与経路に応じて選択できる。

一般に、医薬用途向けの組成物は、医薬組成物の製造用に当技術分野で既知の任意の方法により作製できる。
本明細書で記載の組成物は、例えば、錠剤、カプセル、トローチ剤、または顆粒などの固形剤形；乳剤、溶液、懸濁液などの液体剤形などの経口投与に好適する形態；例えば、無菌溶液、懸濁剤または乳剤などの非経口注射（静脈内、皮下、筋肉内、血管内または注入を含む）に好適する形態；例えば、軟膏、クリーム、ゲルまたはローションとして局所投与に好適する形態であってよい。

経口投与用の組成物は、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、粒剤、粉剤、カシェ剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与に好適する組成物には、標準的ビークルを含み得る。このようなビークルは、医薬品グレードが好ましい。

軟膏およびクリームの場合、有効成分（ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または化学療法剤）は、水中油型または油中水型基剤中で処方できる。

筋肉内、腹腔内、皮下、および静脈内使用の場合、有効成分（ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または化学療法剤）の無菌溶液が通常用いられ、溶液のｐＨは、適宜調整および緩衝されなければならない。

さらに、医薬組成物中に含まれるケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または化学療法剤の抗癌効力は、適切な処方により遅延または遷延させることができる。

しかし、投与に使用されるケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または化学療法剤の有効量は、対象（患者）の疾患（癌）の重症度、症状の重症度、年齢、性別、体重および感受性の差異、投与の方法、時間、間隔および期間、製剤の性質およびタイプに応じて変化する。特定の実施形態では、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび／または１種または複数の化学療法剤は、両方の薬剤がまだ活性である時間枠中に投与できる。当業者なら、投与される治療薬の半減期を測定することにより、このような時間枠を決定できるはずである。本明細書で前に示したように、本発明による、医薬併用剤および／または癌の治療方法および／または癌の治療のための使用では、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび１種または複数の化学療法剤を、同時にまたは順次に投与でき、順次の場合には、任意の順に投与できる。別の実施形態では、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドおよび化学療法剤は、１種の薬剤のピーク薬物動態学的効果がもう一方の薬剤のピーク薬物動態学的効果と一致するように、投与できる。

しかし、別の選択肢では、本発明のケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドまたは／および化学療法剤は、１種または複数の追加の癌治療薬と組み合わせて使用し得る。例えば、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドまたは／および化学療法剤は、１種、２種、３種、４種、５種以上の癌治療薬と組み合わせて使用し得る。

用語の「組み合わせて」により、本発明は、医薬組成物が、同じ療法過程で１種または複数の癌治療薬を受けている対象に投与されることを含む。従って、この用語は、１種または複数の追加の癌治療薬（例えば、急速投与または注入として）による医薬組成物に付随する投与のみでなく、これらの癌治療薬の時間的に離れた投与も同様に包含する。例えば、医薬組成物は、種々の要因のいずれか、例えば、症状の重症度などに応じて、医薬組成物の前に、同時にまたは後に投与される１種または複数の追加の癌治療薬を含めるように患者の腫瘍学者により決定された治療スケジュール／サイクル内に投与され得る。

別の実施形態では、特定の癌の治療のための、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドまたは／および化学療法剤の治療有効量は、癌のタイプおよび性質、その大きさ、進行、および転移状態に依存し、担当医師に相談して決定されるべきである。

例えば、いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、月１回、月２回、月３回、１週おき、週１回、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、１日おき、毎日、１日２回、または１日３回、投与される。

使用される医薬組成物の投与量は、特定のケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチドの活性および治療される状態に応じて変化するが、単回用量当たり、体重当たり、０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇの範囲、特に単回用量当たり、体重当たり、０．０２〜１ｍｇ／ｋｇの範囲で選択される投与量を目安として示し得る。一方、この投与計画は、数日間継続するのが当該患者には適切であるが、投与量は、所望により、いくつかの別々の投与に分割され得る。

ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチド投与の場合の代表的な非限定的許容可能投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ対象（患者）体重の週１回〜３回である。

ゲムシタビン投与の場合の代表的な非限定的許容可能投与量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ対象（患者）体重の週１回〜３回である。

一実施形態では、本発明により提供される組み合わせは、特定のアッセイシステム、およびいくつかの異なるインビトロ投与スケジュールで評価された。実験の詳細は、本明細書で提供される。本明細書で提示されるデータは、ケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチド、特にＯＮＣＯ Ｐ−８は、標的薬物と組み合わされた場合に相乗的効果を示すことを明確に示す。さらに、一実施形態では、対象は、臨床的便益を得られる。

追加の本発明の特定の実施形態は、限定されないが、以下を含む。

細胞株
ヒト膵臓癌（ＰＤＡＣ）細胞株、ＢｘＰＣ３およびＭＩＡＰａＣａ２を本発明で使用した。ＢｘＰＣ３細胞を漸増濃度のゲムシタビンを含む培地中で培養した後、０．５μＭのゲムシタビンで維持することにより、ゲムシタビン耐性ＢｘＰＣ３細胞株（ＢｘＰＣ３ＧＲ）をゲムシタビンに対する化学療法抵抗性細胞株として生成した。ＭＩＡＰａＣａ２細胞を漸増濃度のゲムシタビンを含む培地中で培養した後、０．１２μＭのゲムシタビンで維持することにより、ゲムシタビン耐性ＭＩＡＰａＣａ２細胞株（ＭＩＡＰａＣａ２ＧＲ）を生成した。加湿細胞培養インキュベーターを用いて、５％ＣＯ_２、３７℃下で、ＢｘＰＣ３およびＢｘＰＣ３ＧＲを、１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン−ストレプトマイシン、１００ｍＭのＬ−グルタミン、１００ｎＭのＨＥＰＥＳ、１０ｎＭのピルビン酸ナトリウムおよび２５ｎＭのグルコース含有ＲＰＭＩ １６４０培地中で維持する。ＭＩＡＰａＣａ２およびＭＩＡＰａＣａ２ＧＲを、１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン−ストレプトマイシン、および１％Ｌ−グルタミン含有ＤＭＥＭ中で維持する。

ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＬ８遺伝子の定量化
細胞からの総ＲＮＡをＲＮＡ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＲＥｚｏｌ（登録商標）Ｃ ＆ Ｔ，Ｐｒｏｔｅｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ Ｃｏ．，Ｔａｉｗａｎ）により単離し、分光光度計（Ｎａｎｏｄｒｏｐ １０００，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で定量化した。ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ＲＲ０３７Ａ，ＴＡＫＡＲＡ Ｂｉｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて、ユーザーマニュアルに従って、一本鎖ｃＤＮＡを合成した。

全てのリアルタイムＰＣＲ反応を、特異的プライマーおよびｔａｑｍａｎプローブまたはユニバーサルプローブライブラリ（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、ＳｔｅｐＯｎｅ（登録商標）リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標））で実施した。１８ｓを内部負荷対照として用いた。反応を次のように実施した：５０℃で２分および９５℃で１０分の変性、９５℃で１５秒および６０℃で１分の５０サイクル。次の式により遺伝子発現を計算した：遺伝子発現＝２−ΔΔＣｔ。使用した全てのプライマーの配列を下記に記載する（Ｆ：順方向プライマー；Ｒ：逆方向プライマー）：

ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ヒト膵臓癌（ＰＤＡＣ）細胞の侵襲能力を抑制できる
８μｍ細孔径のトランスウェル（Ｃｏｒｎｉｎｇ ＦｌｕｏｒｏＢｌｏｋ（登録商標））を用いて、細胞の侵襲能力測定を実施した。トランスウェルインサートを６０μｌのマトリゲル（無血清培地（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中の３００μｇ／ｍｌ）を用いて、５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃で一晩コートした。０．２ｍＬの無血清成長培地中の２．５×１０４個の細胞を、マトリゲルでコートした上段チャンバー中に播種した後、ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ）の含有／非含有の場合について、ＩＬ−８（２００ｎｇ／ｍｌ）で処理した。５％ＣＯ_２下、３７℃で２４時間インキュベーション後、上段チャンバーの膜をメタノールで固定し、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色した。膜の底部の侵襲細胞を撮像し、倒立蛍光顕微鏡（Ｏｂｓｅｒｖｅｒ．Ｚ１，Ｚｅｉｓｓ）を用いて、各検体の５つのランダム視野（倍率、×１００）で計数した。

細胞侵襲がＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）またはそのシグナルにより順応させられるかどうかを調査するために、本発明は、ＯＮＣＯ Ｐ−８を用いて侵襲実験を実施する。本発明の結果は、ＯＮＣＯ Ｐ−８がＢｘＰＣ−３細胞株中の侵襲率を低減できることを示した。加えて、本発明のデータは、ＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）が細胞侵襲を増強できることも示す。しかし、ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ＣＸＣＬ８の効力を中和し、ＢｘＰＣ−３の侵襲率を低減できる（図１）。

ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ヒト膵臓癌（ＰＤＡＣ）細胞のコロニー形成を抑制できる
細胞をウェル当たり１０００この細胞の濃度で２４ウェルプレートに播種し、播種後、処理を２４時間実施した。処理には、細胞のＩＬ−８（２００ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−８（２００ｎｇ／ｍｌ）＋ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ）、またはＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ）による処理を含めた。２週後、培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、０．１％ｗ／ｖクリスタルバイオレット（メタノールに溶解；３２６７５、Ｆｌｕｋａ（登録商標）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ、ＵＳＡ）で染色した。コロニーの面積をカメラで特定し、ＩｍａｇｅＪ分析ソフトウエアで解析した。結果を以下のように計算した：
コロニー形成率（％）＝（コロニーの処理面積／コロニーのコントロール面積）×１００％

ＰＤＡＣのコロニー形成データも同様に、ＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）が細胞侵襲を増強できることを示す。他方では、ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ＣＸＣＬ８の効力を中和し、ＢｘＰＣ−３のコロニー形成率を低減できることを示す（図２）。

ゲムシタビン耐性癌細胞株の検証
ゲムシタビン耐性膵管腺癌（ＰＤＡＣ）細胞株の樹立を検証するために、親細胞およびゲムシタビン耐性（ＧＲ）細胞を用いてゲムシタビン勾配のＭＴＴを実施した。

ＢｘＰＣ−３およびＢｘＰＣ−３ＧＲを０ｎＭ〜１００ｎＭのゲムシタビンで処理し、ＭＴＴにより測定した（図３ａ）。同様に、ＭＩＡＰａＣａ２およびＭＩＡＰａＣａ２ＧＲを０ｎＭ〜１００ｎＭのゲムシタビンで処理し、ＭＴＴにより測定した（図３ｂ）。

ＧＲ細胞株の薬物耐性は、親細胞よりも３４〜３９倍高い（表１）。比較すると、ＢｘＰＣ−３細胞の場合のゲムシタビンのＩＣ_５０値は６．１２８ｎＭで、ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞では２３６．３ｎＭであった（３８．６倍の耐性）。比較すると、ＭＩＡＰａＣａ２細胞の場合のゲムシタビンのＩＣ_５０値は２５０．７ｎＭで、ＭＩＡＰａＣａ２ＧＲ細胞では８６２０ｎＭであった（３４．４倍の耐性）。

ゲムシタビン誘導のある場合とない場合のゲムシタビン耐性癌細胞中のＣＸＣＬ８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２遺伝子の発現レベルを、親癌細胞と比較した。

親およびゲムシタビン耐性ＢｘＰＣ３およびＭＩＡＰａＣａ２を採取し、ＩＬ８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現をＱ−ＰＣＲにより調べた。図４Ａ〜４Ｂを参照されたい。ＧＲ細胞株は、親細胞に比べて有意により高い発現を示す。換言すれば、ＧＲ細胞（ＢｘＰＣ−３ＧＲ（図４Ａ）およびＭＩＡＰａＣａ２ＧＲ（図４Ｂ））のＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）ｍＲＮＡ、ＣＸＣＲ１ ｍＲＮＡおよびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現は、親細胞（ＢｘＰＣ−３（図４Ａ）およびＭＩＡＰａＣａ２（図４Ｂ））に比べて、それぞれ、有意に高まる。データは、平均±ＳＤとして示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。

ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ細胞株の高いＩＬ−８／ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２遺伝子発現を弱める
さらに、本発明は、ゲムシタビン耐性癌細胞がＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍＬ）と組み合わせた０．１μＭのゲムシタビンにより１ヶ月間処理された後、ＢｘＰＣ−３ＧＲ（図５Ａ）およびＭＩＡＰａＣａ２ＧＲ（図５Ｂ）のＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現が低下することも示した。データは、平均±ＳＤとして示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。すなわち、ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ＩＬ−８と競合し、そのフィードバックを弱め、ＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２の発現を低下させるように調節する。

ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ゲムシタビン耐性ＰＤＡＣ細胞の侵襲能力を抑制できる
侵襲能力アッセイのために、ゲムシタビン耐性癌細胞を、ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍＬ）と組み合わせたゲムシタビン（１００ｎＭ）、またはＯＮＣＯ Ｐ−８およびＩＬ−８（２００ｎｇ／ｍＬ）と組み合わせたゲムシタビン、またはＩＬ−８と組み合わせたゲムシタビンで、それぞれ処理した。

トランスウェル侵襲アッセイの結果は、ＯＮＣＯ Ｐ−８が、対照群と比較して、ＢｘＰＣ−３ＧＲ（図６Ａ）およびＭＩＡＰａＣａ２ＧＲ（図６Ｂ）の侵襲率を低減させることを示す。一方、ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ＢｘＰＣ−３ＧＲ（図６Ａ）およびＭＩＡＰａＣａ２ＧＲ（図６Ｂ）における「ＩＬ−８群」と比較して、ＢｘＰＣ−３ＧＲ（図６Ａ）およびＭＩＡＰａＣａ２ＧＲ（図６Ｂ）における「ＩＬ−８＋ＯＮＣＯ Ｐ−８群」の侵襲率を有意に低減できる。データは平均±ＳＤとして示されている。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１、スチューデントのｔ検定。

ゲムシタビン耐性癌細胞の増殖速度は、ＯＮＣＯ Ｐ−８により抑制できる
細胞計数キット−８（ＣＣＫ−８）（Ｄｏｊｉｎｄｏ，Ｋｕｍａｍｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて、細胞増殖アッセイを実施した。ゲムシタビン耐性癌細胞を、ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍＬ、４７ｎＭ）と組み合わせたゲムシタビン（１００ｎＭ）、またはＯＮＣＯ Ｐ−８およびＩＬ−８（２００ｎｇ／ｍＬ、２３．８ｎＭ）と組み合わせたゲムシタビンで２４時間処理した。ゲムシタビン耐性癌細胞（ＢｘＰＣ−３ＧＲ）の増殖速度は、ＩＬ−８群に比べて、有意に弱められた（図７）。データは平均±ＳＤとして示されている。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。これらのデータは、ゲムシタビンおよびＯＮＣＯ Ｐ−８で同時処理された癌細胞は、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２を下方制御した（図５Ａ〜５Ｂ）ことをさらに確証する。

ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ゲムシタビン耐性癌細胞の遊走能力および侵襲能力を弱めることができる。
さらに、本発明は、ＯＮＣＯ Ｐ−８がゲムシタビン耐性細胞の遊走速度（図８Ａ）および侵襲率（図８Ｂ）を低減できることも示した。加えて、本発明のデータは、ＣＸＣＬ８が細胞遊走および侵襲を増強できることも示す。しかし、ＯＮＣＯ Ｐ−８は、ＣＸＣＬ８の効力を中和し、ＢｘＰＣ−３ＧＲの侵襲率を低減できる。薬物濃度：ＯＮＣＯ Ｐ−８（４００ｎｇ／ｍｌ）、レパリキシン（２００ｎＭ）、ＩＬ−８（２００ｎｇ／ｍｌ）、統計的有意性：＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

ゲムシタビン耐性癌細胞とゲムシタビン耐性癌細胞由来スフェロイドとの間の細胞形態および遺伝子発現の比較
化学療法は腫瘍中の大部分の細胞を死滅させるが、腫瘍幹細胞を後に残すと考えられており、これは、耐性の重要な機序であり得る。

薬剤耐性がＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２により成し遂げられることを調査するために、ＢｘＰＣ−３ＧＲに対する癌幹細胞（ＣＳＣ）特性のいくつかの特性を分析する（図９Ａ〜図９Ｃ、図１０Ａ〜図１０Ｇ、図１１、図１２Ａ〜図１２Ｇ）。

ＢｘＰＣ−３ＧＲ親細胞（図９Ａ）およびＢｘＰＣ−３ＧＲ由来のスフェロイド（図９Ｂ）の細胞形態。灰色矢印は、ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイドを示す。ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来のスフェロイド上のＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２のＲＮＡ発現が親ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞よりも多い（図９Ｃ）。

さらに、データは、ＣＳＣ特性のマーカーが、ＢｘＰＣ−３ＧＲ親細胞の場合よりも、ＢｘＰＣ−３ＧＲ由来スフェロイド中でより多いと評価されることを示す（図１０Ａ〜図１０Ｇ）。この結果は、ＣＳＣの傾向が細胞の化学療法に対する耐性を支援することを示した。さらに、ＯＮＣＯ Ｐ−８によるＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２の抑制は、これらのＣＳＣ特性マーカーの発現を低減させ得る。これらの結果はまた、ＯＮＣＯ Ｐ−８はＣＳＣ転換を抑制することにより、癌細胞が化学療法剤耐性になるのを防ぎ得ることも示す。

換言すれば、本発明は、ＯＮＣＯ Ｐ−８は、膵臓癌細胞の細胞増殖、生存、侵襲、遊走およびＣＳＣマーカーを抑止し得ることを示し、癌細胞中のＩＬ−８Ｒ（ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２）過剰発現を介してＯＮＣＯ Ｐ−８の機能特性を明らかにした。

ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用は、腫瘍増殖を抑制し、インビボ寿命を延長する
ＯＮＣＯ Ｐ−８のインビボ効果を評価するために、４週齢の雄ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのＢｘＰＣ−３モデルを本発明で使用した。ＢｘＰＣ−３細胞をマウスの皮下に接種した。７日後、マウスをＰＢＳまたはＯＮＣＯ Ｐ−８（５００μｇ／ｋｇ）を用いて、週３回のｉ．ｐ．注射により治療した。最初の治療の初期腫瘍サイズは１２８．５±４７．８ｍｍ３であった。ＯＮＣＯ Ｐ−８は、インビボ腫瘍増殖を有意に抑制したことが明らかになった（図１３Ａ）。さらに、ＯＮＣＯ Ｐ−８の治療は、マウスの体重の低下には至らず（図１３Ｂ）、これは、ＯＮＣＯ Ｐ−８がインビボで毒性作用を有さない可能性があることを意味する。これらの結果は、ＯＮＣＯ Ｐ−８が腫瘍増殖を有意に抑制し、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの生存率を有意に向上させ得ることを示した（図１３Ｃ）。

ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用は、ゲムシタビン耐性腫瘍増殖を抑制し、インビボ寿命を延長する
さらに、ＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞株を有するヌードマウス異種移植片モデルを樹立した（図１４Ａ）。４〜６週齢の雄ＢＡＬＢ／ｃマウスをＢｉｏＬＡＳＣＯ Ｔａｉｗａｎ Ｃｏ．，Ｌｔｄから購入した。等体積のマトリゲルと混合した０．２ｍｌのＰＢＳ中の２．５×１０６個のＢｘＰＣ−３ＧＲ細胞（低温のＰＢＳ中に最終濃度１．２×１０７個の細胞／ｍｌで懸濁）を各マウスの背中の皮下に注射した（各群ｎ＝８）。１週間の接種後、「ゲムシタビン群」：ゲムシタビン（ゲムシタビン塩酸塩＞９９％、Ｇ４１７７、ＬＣ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を週２回，ｉ．ｐ．注射する。「ＯＮＣＯ Ｐ−８＋ゲムシタビン群」では、ＯＮＣＯ Ｐ−８（５００μｇ／ｋｇ）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により週３回投与した。７２時間後、薬物を処理した後、全マウスを屠殺した。

「ゲムシタビンと組み合わせたＯＮＣＯ Ｐ−８群」の腫瘍サイズは、「ゲムシタビン群」に比べて、有意に減少する（図１４Ｂ、図１４Ｄ）。腫瘍体積は全て、次の式により計算した。腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝０．５２×（幅２×長さ）。結果は、腫瘍サイズ±ＳＥＭとして示される。

一方、「ＯＮＣＯ Ｐ−８＋ゲムシタビン群」の７２日目までの生存率も、「ゲムシタビン群」と比較して、効果的に３０％高められた（図１４Ｄ）。屠殺後、腫瘍組織のｍＲＮＡ発現を調べた。

ＯＮＣＯ Ｐ−８およびゲムシタビンの組み合わせ使用は、ゲムシタビン耐性腫瘍モデルのＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を弱める
ＢｘＰＣ−３ＧＲ担腫瘍ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを７２日目に屠殺後、「ゲムシタビン群」および「ゲムシタビン＋ＯＮＣＯ Ｐ−８群」の腫瘍組織のＩＬ−８、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２ ｍＲＮＡ発現を調べた（図１５Ａ〜１５Ｃ）。結果は、「ゲムシタビン群」に比べて、「ゲムシタビン＋ＯＮＣＯ Ｐ−８群」において、ＩＬ−８（図１５Ａ）、ＣＸＣＲ１（図１５Ｂ）、およびＣＸＣＲ２（図１５Ｃ）の遺伝子発現の有意な低下を示す。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝８）として示されている。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。

ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２との結合に対して、ＯＮＣＯ Ｐ−８とＩＬ−８との間でのアンタゴニズムの比較
本発明では、間接ＥＬＩＳＡを用いて、ＯＮＣＯ Ｐ−８−ＣＸＣＲ２複合体形成およびＩＬ−８−ＣＸＣＲ２複合体形成を測定することにより、実証した。ＥＬＩＳＡ結合アッセイは、ＯＮＣＯ Ｐ−８（図１６Ａ）が、ＩＬ−８（図１６Ｂ）よりも、ＣＸＣＲ２に対し、３〜４倍強力に結合し得ることを示した。ＯＮＣＯ Ｐ−８のＫ_ｄ値は、１３９ｎＭであった。ＯＮＣＯ ＩＬ−８のＫ_ｄ値は、４７１ｎＭであった。

さらに、本発明は、間接ＥＬＩＳＡを用いて、ＯＮＣＯ Ｐ−８−ＣＸＣＲ１複合体形成およびＩＬ−８−ＣＸＣＲ１複合体形成を測定することにより、さらに実証した。ＥＬＩＳＡ結合アッセイは、ＯＮＣＯ Ｐ−８（図１７Ａ）が、ＩＬ−８（図１７Ｂ）よりも、ＣＸＣＲ１に対し、３〜４倍強力に結合し得ることを示した。ＯＮＣＯ Ｐ−８のＫ_ｄ値は、２８６ｎＭであった。ＩＬ−８のＫ_ｄ値は、８５３ｎＭであった。Ｋ_ｄ式は、次記を含む：（１）ｉ＝Ａ_{４５０ｎｍ}／Ａ^ｍａｘ _{４５０ｎｍ}、ｉ＝リガンド／リガンド^ｍａｘ；（２）１／（１−ｉ）＝（Ｌｉｇ_ｔｏｔ／ｉ）／Ｋ_ｄ−ｂ、ｂ＝ｆｑＳ_ｒｅｃ／Ｋ_ｄ．

まとめると、医薬組成物は、腫瘍微小環境中のＩＬ−８、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２の発現を相乗的効果により弱め、ＩＬ−８を下方制御することにより腫瘍増殖を抑制し、ＩＬ−８下方制御により癌細胞遊走および侵襲を阻止し、および転移を治療または転移拡散を減らす。さらに上記薬剤耐性の細胞は、ＩＬ−８を過剰発現する。

本明細書（いずれかの添付の請求項、要約および図面を含む）で開示のそれぞれの特徴は、明示的に別義が示されない限り、同じ、等価な、または類似の目的を果たす代替特徴により置換可能である。従って、明示的に別義が示されない限り、開示された各特徴は、一般的な一連の等価なまたは類似の特徴の一例に過ぎない。

示されているように、これらの修正は、例示された本発明の実施形態の前述の説明を考慮して、本発明に対し行い得、これらは本発明の趣旨および範囲内に含まれるべきものである。従って、本発明は、その特定の実施形態を参照しながら本明細書で記載されてきたが、修正、種々の変更、および置換の許容範囲は、前述の開示中で考慮されている。いくつかの事例では、記載された本発明の趣旨および範囲から乖離することなく、本発明の実施形態のいくつかの特徴が他の特徴の対応する使用なしに採用される。従って、多くの修正は、本発明の基本的範囲と趣旨に対して、特定の状況または材料を適応させ得る。

Claims (15)

1. 抗癌剤耐性の除去および抗癌剤の感受性を高めるための医薬組成物であって、
   ＯＮＣＯ Ｐ−８（配列番号１）から選択されるケモカイン受容体アンタゴニスト修飾ペプチド、
   化学療法剤、薬学的に許容可能な緩衝液、希釈剤、担体、アジュバントまたは賦形剤を含む薬物、を含む医薬組成物。
2. 前記化学療法剤が、代謝拮抗薬、抗生物質、アルキル化剤、植物アルカロイド、ホルモン剤または免疫調節剤を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記代謝拮抗薬が、葉酸アンタゴニスト、プリンアンタゴニストまたはピリミジンアンタゴニストを含む、請求項２に記載の医薬組成物。
4. 前記ピリミジンアンタゴニストが、ゲムシタビン、カペシタビン、５−フルオロウラシル、シタラビンまたはアザシチジンを含み、前記葉酸アンタゴニストが、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビン、ダカルバジン、クラドリビンまたはペントスタチンを含み、前記プリンアンタゴニストが、メトトレキセートまたはペメトレキセドを含む、請求項２に記載の医薬組成物。
5. 前記医薬組成物が、治療有効量でそれを必要としている対象に投与され、前記対象が癌と診断され、前記癌が前記化学療法剤に耐性がある、請求項２に記載の医薬組成物。
6. 抗癌剤耐性を除去し、抗癌剤の感受性を高める方法であって、治療有効量の請求項１に記載の医薬組成物を、それを必要としている薬剤耐性癌の対象に投与することを含み、癌が前記化学療法剤に耐性がある、方法。
7. 前記化学療法剤が、代謝拮抗薬、抗生物質、アルキル化剤、植物アルカロイド、ホルモン剤または免疫調節剤を含む、請求項６に記載の方法。
8. 前記代謝拮抗薬が、葉酸アンタゴニスト、プリンアンタゴニストまたはピリミジンアンタゴニストを含む、請求項７に記載の方法。
9. 前記ピリミジンアンタゴニストが、ゲムシタビン、カペシタビン、５−フルオロウラシル、シタラビンまたはアザシチジンを含む、請求項８に記載の方法。
10. 前記癌が、胸部癌、腹部癌、胃腸癌、頭頸部癌、脳癌、内分泌癌、泌尿器癌、男性生殖器系新生物、婦人科癌、血液癌、皮膚癌、肉腫、乳癌、および神経芽腫から選択される、請求項６に記載の方法。
11. 前記胃腸癌が、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆嚢および胆道癌、膵臓癌、結腸直腸癌、小腸癌、および肛門癌から選択される、請求項１０に記載の方法。
12. 前記医薬組成物が、相乗的効果により腫瘍微小環境中のＩＬ−８、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２の発現を弱め、ＩＬ−８を下方制御することにより腫瘍増殖を抑制し、ＩＬ−８下方制御により癌細胞遊走および侵襲を阻止し、転移を治療または転移拡散を減らし、および抗癌剤に対する耐性を克服し、薬剤耐性細胞がＩＬ−８を過剰発現し、前記薬剤耐性細胞が癌細胞から選択される、請求項６に記載の方法。
13. 前記癌細胞が、癌幹細胞、癌幹様細胞、幹様癌細胞、腫瘍幹細胞、腫瘍開始細胞、腫瘍前駆細胞、多能性腫瘍前駆細胞、または単能性腫瘍前駆細胞をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
14. 前記治療有効量の前記ＯＮＣＯ Ｐ−８（配列番号１）が、単回用量当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重であり、前記ＯＮＣＯ Ｐ−８が、液体溶液または懸濁剤の吸入により、または前記ＯＮＣＯ Ｐ−８の粉末製剤の吸入により投与される、請求項６に記載の方法。
15. 前記薬剤耐性癌の対象が哺乳動物から選択され、前記哺乳動物が、ネコ、イヌ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、サル、マウス、ラット、スナネズミ、モルモット、ブタおよびヒトから選択される、請求項６に記載の方法。

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