JP2021059554A

JP2021059554A - 増殖性硝子体網膜症用メトトレキサート

Info

Publication number: JP2021059554A
Application number: JP2020202357A
Authority: JP
Inventors: エリオット，ディーン; Dean Elliot; ピー．ストリジュースキー，トーマス; P Stryjewski Tomasz
Original assignee: Massachusetts Eye and Ear Infirmary
Current assignee: Massachusetts Eye and Ear
Priority date: 2014-07-30
Filing date: 2020-12-07
Publication date: 2021-04-15
Also published as: US10098884B2; EP3174540B9; ES2969374T3; EP3174540B1; EP3791883B1; JP2023145527A; EP4311575A3; EP3174540A4; US20200085827A1; US10272089B2; WO2016019165A1; CA3200870A1; US20170216294A1; EP4311575A2; US20170368067A1; US20210283135A1; EP3791883A1; JP7097181B2; US10828306B2; CA2991921A1

Abstract

【課題】対象における増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）または網膜前膜（ＥＲＭ）のリスクを処理または低減する方法を提供する。【解決手段】少なくとも１カ月、２カ月、または３カ月以上の期間にわたり、週１回を限度として、複数回、例えば１０回以上のメトトレキサートの硝子体内注射を投与するステップを含む。【選択図】なし

Description

優先権の主張
本願は、２０１４年７月３０日に出願された米国特許出願第６２／０３０，７７８号明
細書の利益を主張するものである。前述の文献の内容は全て、参照により本明細書に組み
込まれる。

本発明は、網膜剥離を処置するための外科的硝子体切除および／または強膜バックルの
後の、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）または網膜前膜（ＥＲＭ）のリスクを低減するため
の、メトトレキサート、例えばメトトレキサートの反復投与製剤または持続放出性製剤の
使用に関する。

網膜剥離（ＲＤ）は、米国において突発性視力喪失の重要な原因であり、年間およそ４
０，０００症例が発生している。処置が遅れると、永久的に視力が失われる。

網膜剥離は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）からの網膜神経感覚上皮（neurosensory retina
）の分離と定義される。非病的状態では、網膜色素上皮は密着結合によって閉塞された連
続的な上皮単層であり、この密着結合によって下にある脈絡膜毛細血管床が感覚網膜の光
受容体から厳密に分離維持され、このようにして外側血液網膜関門が形成されている。網
膜色素上皮の機能には、光受容体の栄養供給、老廃物の除去および網膜下液の再吸収が含
まれる。

網膜剥離の最終的な処置は外科的修復である。処置担当網膜学専門家（treating retin
ologist）には多くの手術技法が利用可能であるが、網膜剥離の処置の根本的な原則は依
然として同じである。すなわち、網膜下腔から液体を除去すること、現存する牽引のいず
れをも緩和させること、ならびに液体の移入の根本原因が網膜裂隙または滲出プロセスの
いずれにあっても、それに対する処置および予防をすることである。

増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）は、網膜剥離手術の失敗の最も一般的な原因であり、全
ての網膜剥離手術の５〜１０％に発生する合併症である。ＰＶＲは、手術をしない場合に
も自然発症的に発生する可能性がある。ＰＶＲは、眼に繰り返し外科用器具を使用した後
、外傷などで眼に著しい生理学的損傷を受けた後、および多数の裂孔、巨大裂孔、硝子体
の出血によって併発した網膜剥離において、またはぶどう膜炎を有する眼において、発症
する可能性が最も高い。

ＰＶＲの比較的軽度な形態は、黄斑パッカーまたは網膜前膜（ＥＲＭ）と呼ばれ、ＲＤ
手術の２０〜３０％の術後経過を複雑化し、これらの半数は視覚的な歪みが大きいため、
患者には手術が必要になる。さらに、剖検研究は、ＲＤ手術を受けた患者の７５〜８０％
近くに、増殖性膜の組織学的証拠があることを示している。このことは、多くの患者がＲ
Ｄ手術の術後に完全な視力が得られないが、臨床的に明白なＥＲＭは何ら有していないこ
との理由を説明し得るものである。さらに、ＥＲＭは自然発症的に発症する可能性がある
。

ＰＶＲまたはＥＲＭを予防する処置はこれまで見出されていない。ＰＶＲまたはＥＲＭ
が発症すると、手術が唯一の処置となる。

本発明は、少なくとも一部は、ＰＶＲまたはＥＲＭを発症するリスクを処理および低減
する方法の開発に基礎を置くものである。

したがって、本発明は、第１の態様において、対象における増殖性硝子体網膜症（ＰＶ
Ｒ）または網膜前膜（ＥＲＭ）のリスクを処理または低減する方法を提供する。この方法
は、少なくとも１カ月、２カ月、または３カ月以上の期間にわたり、週１回を限度として
、複数回、例えば１０回以上のメトトレキサートの硝子体内注射を投与するステップを含
む。

いくつかの実施形態では、各注射は０．１ｍｌ中４００ｍｃｇの用量のメトトレキサー
トを供給する。

いくつかの実施形態では、メトトレキサートは角膜輪部の後側に投与される。

いくつかの実施形態では、対象は、ＥＲＭまたはＰＶＲを対象が発症するリスクを増加
させる眼科の外科的処置、例えば、経扁平部硝子体切除（ＰＰＶ）、網膜剥離（ＲＤ）手
術、ＥＲＭ手術、強膜バックル手術、または他方の眼の処置を受けている。いくつかの実
施形態では、対象は、外傷に続発する裂孔原性網膜剥離、既存の増殖性硝子体網膜症（例
えばグレードＣ以上）を処置するために；またはＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う他の適
応症、例えば、巨大網膜裂孔（巨大網膜裂孔は、眼球の外周の９０°以上にわたる裂孔と
定義される）、３乳頭領域より大きい網膜裂隙、長年の網膜剥離もしくは出血を伴う剥離
のために、ＰＰＶを必要とする。

いくつかの実施形態では、最初の注射は外科的処置の最後に投与され、８回の週１回の
注射が術後２カ月目まで投与され、および最後の１０回目の注射は術後３カ月目に投与さ
れる。

いくつかの実施形態では、本方法は、９回連続の週１回の注射、および最初の注射から
３カ月後の１０回目の注射を投与するステップを含む。

いくつかの実施形態では、本方法は、最後の、例えば１０回目の注射の後に、追加の注
射を月１回投与するステップを含む。

いくつかの実施形態では、本方法は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８
回または９回の追加の注射を、例えば月１回で、１０回目の注射の後に投与するステップ
を含む。

本発明は、別の態様において、対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または
低減する方法を提供する。本方法は、少なくとも３カ月間にわたってメトトレキサートの
持続放出性製剤を硝子体内に投与するステップを含む。

いくつかの実施形態では、持続放出性製剤は、脂質でカプセル化した製剤、メトトレキ
サート（ＭＴＸ）の多胞リポソーム（ＭＶＬ）製剤、ナノもしくはマイクロ粒子、ポリイ
オンコンプレックス（ＰＩＣ）ミセル、または生体接着性ポリマーである、またはこれら
を含む。いくつかの実施形態では、生体接着性ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリアクリル酸（ＰＡ
Ａ）またはヒアルロン酸（ＨＡ）のうち１種または複数種を含む。

本発明は、さらなる態様において、対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理ま
たは低減する方法を提供する。本方法は、メトトレキサートを持続放出するデバイスを、
少なくとも３カ月間にわたって対象の眼内に埋め込んでおくステップを含む。

いくつかの実施形態では、デバイスは非生分解性である。

一般に、本明細書に記載している方法において、対象はがんに罹患しておらず、例えば
眼がん（ocular cancer）に罹患しておらず、例えば眼球リンパ腫にもＢ細胞リンパ腫に
も罹患していない。いくつかの実施形態では、対象はぶどう膜炎に罹患していない。いく
つかの実施形態では、本方法は、対象がＰＶＲもしくはＥＲＭを発症するリスクを有して
いるもしくはそのリスクにさらされている、または副作用としてのＰＶＲもしくはＥＲＭ
の高リスクを伴う処置を受けようとしていることを判断するステップと、対象を選択する
ステップとを含む。

別段の定義がされていない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は
、本発明が属する技術分野の当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する
。方法および材料は、本発明において使用するために本明細書に記載しているが、当技術
分野において公知の他の好適な方法および材料も使用することができる。材料、方法およ
び実施例は、説明するためのものに過ぎず、限定するものではない。本明細書に挙げてい
る全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベース記載事項および他の参考文献は、
その全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾する場合は、定義を含む本明細書に
より管理する。

本発明の他の特長および利点は、以下の詳細な説明および図面から、ならびに特許請求
の範囲から明らかになるであろう。

本方法を使用する例示的な処置プロトコールを示すフローチャートである。それぞれ、１２ウェルにウェル当たり３０，０００細胞でプレーティングしたヒトＰＶＲ細胞の９枚一組の画像であり、メトトレキサートが培養物中でヒト増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）細胞の増殖を抑制したことを示す。図のように、細胞を１００μＭ、２００μＭまたは４００μＭのメトトレキサート（ＭＴＸ）で処理し、画像を７２時間後（２Ａ）、１週間後（２Ｂ）または２週間後（２Ｃ）に撮影した。７２時間時点で（２Ａ）、顕微鏡写真は、対照プレート（最上段）でも３種のメトトレキサート濃度（２〜４段）でも類上皮細胞形態は類似しており、集密は限定的であることを示した。１週間時点では（２Ｂ）、対照プレート（１段）は均一で集密な細胞シートを示したが、メトトレキサート４００、２００および１００にそれぞれ曝露した２〜４段は成長抑制および集密の欠如を示し、見たところ類上皮細胞が少なかった。２週間時点では、対照プレート（１段）は継続して均一で集密な細胞シートであったが、メトトレキサート４００、２００および１００にそれぞれ曝露した２〜４段は、継続して成長が抑制され、集密が欠如していた。それぞれ、１２ウェルにウェル当たり３０，０００細胞でプレーティングしたヒトＰＶＲ細胞の９枚一組の画像であり、メトトレキサートが培養物中でヒト増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）細胞の増殖を抑制したことを示す。図のように、細胞を１００μＭ、２００μＭまたは４００μＭのメトトレキサート（ＭＴＸ）で処理し、画像を７２時間後（２Ａ）、１週間後（２Ｂ）または２週間後（２Ｃ）に撮影した。７２時間時点で（２Ａ）、顕微鏡写真は、対照プレート（最上段）でも３種のメトトレキサート濃度（２〜４段）でも類上皮細胞形態は類似しており、集密は限定的であることを示した。１週間時点では（２Ｂ）、対照プレート（１段）は均一で集密な細胞シートを示したが、メトトレキサート４００、２００および１００にそれぞれ曝露した２〜４段は成長抑制および集密の欠如を示し、見たところ類上皮細胞が少なかった。２週間時点では、対照プレート（１段）は継続して均一で集密な細胞シートであったが、メトトレキサート４００、２００および１００にそれぞれ曝露した２〜４段は、継続して成長が抑制され、集密が欠如していた。それぞれ、１２ウェルにウェル当たり３０，０００細胞でプレーティングしたヒトＰＶＲ細胞の９枚一組の画像であり、メトトレキサートが培養物中でヒト増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）細胞の増殖を抑制したことを示す。図のように、細胞を１００μＭ、２００μＭまたは４００μＭのメトトレキサート（ＭＴＸ）で処理し、画像を７２時間後（２Ａ）、１週間後（２Ｂ）または２週間後（２Ｃ）に撮影した。７２時間時点で（２Ａ）、顕微鏡写真は、対照プレート（最上段）でも３種のメトトレキサート濃度（２〜４段）でも類上皮細胞形態は類似しており、集密は限定的であることを示した。１週間時点では（２Ｂ）、対照プレート（１段）は均一で集密な細胞シートを示したが、メトトレキサート４００、２００および１００にそれぞれ曝露した２〜４段は成長抑制および集密の欠如を示し、見たところ類上皮細胞が少なかった。２週間時点では、対照プレート（１段）は継続して均一で集密な細胞シートであったが、メトトレキサート４００、２００および１００にそれぞれ曝露した２〜４段は、継続して成長が抑制され、集密が欠如していた。

増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）は、網膜剥離手術後の一般的な事象である。ＰＶＲは、
手術後、重大な外傷後、または自然発症的にでも、眼内に形成する「瘢痕化」状態である
。その発病機序は網膜色素上皮層の破壊であり、炎症、（神経）網膜表面への細胞の遊走
および増殖を伴う。次の４〜１２週間にわたり、網膜表面上の膜が増殖し、収縮し、網膜
に牽引を適用し、その結果、網膜のＲＰＥからの再剥離が起こる。ＰＶＲが発生し、網膜
が２回目の剥離を起こすと、視力が回復する見込みはない。

増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）および網膜前膜（ＥＲＭ）の病理生物学
網膜前膜（ＥＲＭ）は、典型的には眼の疾患に対する応答において、細胞（例えば、網
膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、グリア細胞、線維芽細胞およびマクロファージ）が網膜表面
で異常に増殖することによって起こり、膜は収縮する傾向があり、皺が発生し、このため
黄斑の歪みが生じる。例えば、Hiscott et al., Br J Ophthalmol. 68(10):708-15 (1984
); Hiscott et al., Eye 16, 393-403 (2002);およびAsato et al., PLoS One. 8(1): e5
4191 (2013)を参照されたい。

ＥＲＭと同様に、ＰＶＲは硝子体および網膜の異常な創傷治癒応答であり、増殖能をも
つ細胞が、炎症伝達物質に駆り立てられて網膜表面で増殖し、収縮し、最終的に再発性網
膜剥離（ＲＤ）を引き起こす臨床症候群である。ＰＶＲの発病機序は、ＲＰＥ細胞が硝子
体腔内に導入されることで始まる。この細胞は網膜裂孔自体の発生時に導入されることも
あり、医原的に、例えば冷凍療法または網膜切除の使用によって導入されることもある。
ＰＶＲを有するサルの眼に関する諸研究は、ミュラー細胞の導入、ならびに潜在的には線
維細胞の導入も同様に生じることも前提としている。ＲＰＥ細胞の導入と同時に、成長因
子（血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、フィブロネクチ
ン、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）を含む）および他の伝達物質の導入または上方調
節が生じる。このプロセスは、グリア、ＲＰＥおよび他の細胞構成要素が増殖し、分化形
質転換（transdifferentiate）して収縮筋線維細胞になる自己分泌ループを開始する。病
理学検査をすると、マクロファージおよび線維芽細胞が、ＰＶＲの試料中によく確認され
ている。

ＲＰＥが破壊した時点で、炎症がＰＶＲの発症に重要な役割をすることも提唱されてい
る。サイトカインであるＩＬ−６、ＩＬ−１、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γが、硝子体中
で、ＰＶＲの初期の増殖期に高濃度で確認されているが、これらは瘢痕形成期には正常レ
ベルまで減少する。これらのサイトカインは、ＰＶＲを発症していない眼内には存在しな
い。

ＰＶＲを予防するための薬理学的助剤の使用は、眼科学において実現が困難な目標であ
った。過去のＰＶＲ研究において用いられた一般的な薬理学的戦略は、種々の薬剤、例え
ばダウノルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、トリアムシノロン、低分子量ヘ
パリンおよびナプロキセンなどの、単回、硝子体内、術中投与であった^{１０〜１５}。硝子
体に送達した薬物の排除は、薬物の分子量、血液網膜関門の状態、硝子体腔の容積などを
含む複数の要因に依存するが、これらの過去のＰＶＲ研究で使用された薬物は、その投与
から数日内に眼から排除された可能性が高い。逆に、ＰＶＲは、手術から少なくとも６〜
８週間後までは、臨床的に認められる病理学的な疾患にならない。

メトトレキサート
メトトレキサートは非天然の化学物質であり、Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−６
−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸としても知ら
れる。葉酸類似体であるメトトレキサートは、ジヒドロ葉酸還元酵素を可逆的に抑制する
ことにより、抗増殖剤として作用すると考えられており、ジヒドロ葉酸が還元されてテト
ラヒドロ葉酸になるのを防ぎ、プリンヌクレオチドの合成に使用されている。

抗炎症性作用の機序は明らかではないが、提唱されている機序には、そのアデノシンの
細胞外濃度を高める能力、炎症促進性サイトカインの抑制、活性化Ｔ細胞のアポトーシス
の誘導および活性化Ｔ細胞の細胞内接着の抑制が含まれる。

いくつかの実施形態では、メトトレキサートは、例えば、平衡塩類溶液に溶解し、２５
ｍｇバイアルから滅菌の４００ｍｃｇ／０．１ｍｌの単回使用用量にして、反復注射用に
製剤化される。

いくつかの実施形態では、メトトレキサートは持続放出性に製剤化される。メトトレキ
サートの複数種の持続放出性製剤が当技術分野において公知であり、以下を含むが、これ
らに限定されるものではない：脂質でカプセル化した製剤などの生分解性埋め込み剤、例
えばBonetti et al., Cancer Chemother Pharmacol 33:303-306 (1994)およびChatelut e
t al., J Pharm Sci. 1994 Mar;83(3):429-32に記載されているデポ／メトトレキサート
；メトトレキサート（ＭＴＸ）の多胞リポソーム（ＭＶＬ）製剤、例えば、国際公開第２
０１１１４３４８４号パンフレットに記載されているもの；ナノまたはマイクロ粒子、例
えばVijayaragavan et al., Int J Pharm Res 3(1):39-44 (2011)に記載されているα−
ラクトアルブミンマイクロ粒子、またはTaheri et al., J Nanomaterials 2011 (dx.doi.
org/10.1155/2011/768201)に記載されているコンジュゲートしたメトトレキサート−ヒト
血清アルブミンのナノ粒子；ポリイオンコンプレックス（ＰＩＣ）ミセル；生体接着性ポ
リマー、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチル
セルロース（ＣＭＣ）およびポリアクリル酸（ＰＡＡ）誘導体、ならびにヒアルロン酸（
ＨＡ）、例えば可溶性ヒドロキシプロピルセルロースの眼球インサートであるＬａｃｒｉ
ｓｅｒｔ（ＡｔｏｎＰｈａｒｍａ）。

代替としてまたは追加として、持続放出性は、硝子体内埋め込み剤などの持続放出性デ
バイスを使用して実現することができる。硝子体内埋め込み剤には、例えば、Palakurthi
et al., Current Eye Research、35(12):1105-1115 (2010)に記載されているもの、もし
くはＲｅｔｉｓｅｒｔ（Ｂａｕｓｃｈ＆Ｌｏｍｂ）、Ｏｚｕｒｄｅｘ（Ａｌｌｅｒｇ
ａｎ）に類似のもの；または非生分解性埋め込み剤、例えば、Ｉｌｕｖｉｅｎ（Ａｌｉｍ
ｅｒａ）もしくはＶｉｔｒａｓｅｒｔ（Ｂａｕｓｃｈ＆Ｌｏｍｂ）埋め込み剤に類似
のもの；Ｉ−ｖａｔｉｏｎプラットフォーム（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓＩｎｃ．）などがあ
る。Lee et al., Pharm Res. 27(10):2043-53 (2010); Haghjou et al., J Ophthalmic V
is Res. 6(4):317-329 (2011); Kim et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45(8):272
2-2731 (2004);およびVelez and Whitcup, Br J Ophthalmol 83:1225-1229 (1999)も参照
されたい。

対象
本明細書に記載している方法は、ＰＶＲまたはＥＲＭを予防（そのリスクを低減）する
ために、以下のような患者において使用することができる。例えば、外傷に続発する裂孔
原性網膜剥離のために経扁平部硝子体切除（ＰＰＶ）が必要な患者において；既存の増殖
性硝子体網膜症グレードＣ以上のためにＰＰＶが必要な患者において；および／またはＰ
ＶＲ発症の高リスク状態を伴う他の適応症、例えば、巨大網膜裂孔（巨大網膜裂孔は、眼
球の外周の９０°以上にわたる裂孔と定義される）、３乳頭領域より大きい網膜裂隙、長
年の網膜剥離もしくは出血を伴う剥離のためにＰＰＶが必要な、網膜剥離を有する患者に
おいて、使用することができる。

ＰＶＲに加えて、持続性のメトトレキサートの眼内使用は他に、以下が挙げられる。

網膜剥離（ＲＤ）手術後の網膜前膜の予防
ＲＤ症例のおよそ２０〜３０％が臨床的に認められるＥＲＭを発症する。この半数は視
覚的な歪みが大きいため、患者には手術が必要になる。さらに、剖検研究は、ＲＤ手術を
受けた患者の７５〜８０％近くに、ある程度の増殖性膜があることを示している。このこ
とは、多くの患者はＲＤ手術の術後に完全な視力が得られないにもかかわらず、ヒトの肉
眼で認められるＥＲＭは何ら有していないことの理由を説明し得るものである。

自然発症的に発症するＥＲＭの予防
ＥＲＭは自然発症的に発症することがあり、その場合手術が必要になる。対象が一方の
眼にＥＲＭを発症した場合、他方の眼にＥＲＭを予防するためのデバイスを埋め込むと、
その眼における発症を予防することが可能である。

ＥＲＭ手術後の二次的なＥＲＭの予防
ＥＲＭを発症している患者について、ＥＲＭは除去することができるが、一部は再発し
、再手術が必要になる。埋め込み剤を残しておくと、再発性のＥＲＭを予防することが可
能である。

本明細書に記載している方法には、上記の状態の結果としてのＰＶＲまたはＥＲＭの発
症を予防するための処置を必要とする対象を識別および／または選択するステップ（例え
ば、上記の状態の結果としての処置の必要性（例えば、上記の状態の結果としてＰＶＲま
たはＥＲＭを発症するリスクの上昇）に基づいて対象を選択するステップ）を含めること
ができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載している方法で処置される対象は眼
がんに罹患しておらず、例えばリンパ腫（例えばＢ細胞リンパ腫）に罹患しておらず、お
よび／またはぶどう膜炎に罹患していない。

ＰＶＲの症状は、臨床的に広範な表現型を包含する。ＰＶＲは、軽度の細胞の濁り（グ
レードＡ）から、特徴的な硬化した漏斗状の網膜剥離を引き起こす厚い線維膜（グレード
Ｄ）まで、様々であり得る。複数のグレード付け方式が使用されており、例えば、Ryan,
Retina, 5^th ed (Elsevier 2013); Retina Society Terminology Committee. The classi
fication of retinal detachment with proliferative vitreoretinopathy. Ophthalmolo
gy 1983;90:121-5 (1983); Machemer R, Aaberg TM, Freeman HM, et al. Am J Ophthalm
ol 112:159-65 (1991); Lean J, Irvine A, Stern W, et al. Classification of prolif
erative vitreoretinopathy used in the silicone study. The Silicone study group.
Ophthalmology 1989;96:765 - 771を参照されたい。いくつかの実施形態では、本方法は
、低グレード（例えば、グレードＡまたはグレード１）ＰＶＲに罹患している対象、また
はＥＲＭに罹患している対象を識別、選択、および／または処置するステップを含む。い
くつかの実施形態では、本方法は、ＰＶＲまたはＥＲＭの発症の早期徴候、すなわち、細
胞増殖を示す「硝子体の曇り」の存在（発達して最終的に器質化シートになり得る）につ
いて対象をモニターするステップと、本明細書に記載のとおり１回または複数回の用量の
ＭＴＸを投与するステップとを含む。初期グレードＡのＰＶＲと初期のＥＲＭとは、互い
を識別するのが困難な場合があるが、最終的に、未処置のＰＶＲは進行し；ＥＲＭは黄斑
に軽度の牽引を生じさせて変視症をもたらすが、網膜の剥離を起こすことはなく、一方、
未処置のＰＶＲは剥離を起こし、最終的に、漏斗状の萎縮性網膜に至る。本方法は、現時
点でＰＶＲの徴候はなくてもＰＶＲまたはＥＲＭのリスクがある対象を処置するために使
用することもできる。

ＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減する方法
本明細書に記載している方法は、最初のもしくは再発性のＰＶＲまたはＥＲＭを発症す
るリスクがある対象、例えば、上記のように、ＲＤ手術またはＥＲＭ手術を受けている対
象、およびＰＶＲまたはＥＲＭに罹患している、またはＰＶＲまたはＥＲＭを発症するリ
スクがある対象における、メトトレキサートの使用を含む。いくつかの実施形態では、本
明細書に記載している方法は、経扁平部硝子体切除（ＰＰＶ）または強膜バックル（ＳＢ
）を受けた、受けている、または受ける予定の対象における、メトトレキサートの使用を
含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＰＰＶ、ＲＤ手術またはＥＲＭ手術を行うス
テップを含む。これらの手術を行う方法は当技術分野において公知であり、例えば、通常
、ＰＰＶは、局所または全身麻酔下で、２３ゲージまたは２０ゲージの３ポートの強膜切
開を使用して行われる。存在する網膜前膜はいずれも、例えば膜ピックおよび鉗子を使用
して切り剥がすことができる。術中組織染色、ペルフルオロカーボン、冷凍凝固、眼内レ
ーザー、強膜バックリングおよび水晶体切除術も必要に応じて行うことができる。標準的
なタンポン充填剤、例えばシリコーン油またはガスなどを使用することができる。

本明細書に記載している方法は、有効量のメトトレキサートの使用を含む。「有効量」
とは、有益なまたは所望の結果、例えば所望の治療効果（すなわち、ＰＶＲまたはＥＲＭ
を発症するリスクを低減する予防的有効量）をもたらすのに十分な量のことである。有効
量は、１回または複数回の投与、適用または投与量で投与することができる。メトトレキ
サートの治療有効量は、例えば注射１回につき４００μｇ／０．１ｍｌとすることができ
、例えば少なくとも１０回の注射で、１０回の注射全体の累積用量４，０００μｇを投与
するが、いくつかの実施形態では、本方法は１０回を超える注射を投与するステップを含
み、累積用量は４，０００μｇを超える。いくつかの実施形態では、本方法は、１０回未
満の注射を投与するステップを含み、累積用量は４，０００μｇ未満である。組成物は、
１日１回または複数回から、１週間に１回または複数回、１カ月に１回または複数回投与
することができ、２日に１回を含む。当業者は、疾患または障害の重症度、以前の処置、
対象の全身の健康状態および／または年齢ならびに罹患している他の疾患を含むがこれら
に限定されないある種の要因が、対象を効果的に処置するために必要な投与量およびタイ
ミングに影響を及ぼし得ることを理解されよう。

いくつかの実施形態では、メトトレキサートの硝子体内注射は、麻酔および消毒剤、例
えば５％ポビドンヨウ素を結膜嚢に局所適用してから、無菌で行われる。いくつかの実施
形態では、各対象は、メトトレキサート、例えば４００ｍｃｇ／０．１ｍｌのメトトレキ
サートの硝子体内注射を、水晶体の状態に応じて角膜輪部の３．０〜３．５ｍｍ後側に、
３０ゲージニードルで投与される。

いくつかの実施形態では、対象は、その術後の期間に、複数回のメトトレキサートの硝
子体内注射を投与される。最初の注射は術中に投与することができ、続いて注射を、術後
１週目、２週目、３週目、４週目、５週目、６週目、７週目および８週目、ならびに術後
３カ月目に投与することができ、合計１０回の注射とすることができる。例えば図１を参
照されたい。いくつかの実施形態では、本方法は、メトトレキサートを、１０回分の用量
で、もしくは１０回分以上の用量で、または１０回分未満の用量で、３カ月間以上にわた
って投与するステップを含み、注射は週１回を限度として投与されることになる。いくつ
かの実施形態では、本方法は、その後は週１回、隔週１回または月１回の頻度での、その
後の追加の１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、
８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間または１２カ月間の追加の用量を含む。い
くつかの実施形態では、本方法は、図１に示すように、３カ月にわたる１０回分の用量と
、任意選択による、その後は１カ月おきの頻度での、その後の追加の１カ月間、３カ月間
または６カ月以上の間の、追加の１回分または複数回分の用量とを含む。

いくつかの実施形態では、対象は、例えば上記のように、ＭＴＸを経時で、例えば、１
週間、２週間、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月または１年にわたって放出する持続放出
性埋め込み剤を投与される。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも６カ月間、
１年間または２年以上の間ＭＴＸ投与を供給するための、後続の埋め込み剤を投与するス
テップを含む。
実施例

本発明を以下の実施例においてさらに説明するが、以下の実施例は、特許請求の範囲に
記載の本発明の範囲を限定するものではない。

増殖性硝子体網膜症のリスクが高いシリコーン充填した術後の眼内の、持続性のメトトレ
キサート
術後の増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）の発症について高リスクの特徴を有する眼内に、
複数回のメトトレキサートの硝子体内注射を投与すると、視力の予後が改善し、解剖学的
最終再付着率が高くなり、再手術率が低減し、術後４カ月でのＰＶＲの発生が低減するで
あろうという仮説を立てた。

ＰＶＲを発症するリスクが高い臨床的因子を有する網膜剥離の患者１０名において、小
規模の試験的研究を行った。

男女１８歳〜８９歳の患者を、外傷に続発する裂孔原性網膜剥離のために経扁平部硝子
体切除（ＰＰＶ）が必要な場合、既存の増殖性硝子体網膜症グレードＣ以上のためにＰＰ
Ｖが必要な場合、またはＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う他の適応症、すなわち、巨大網
膜裂孔（巨大網膜裂孔は、眼球の外周の９０°以上にわたる裂孔と定義される）、３乳頭
領域より大きい網膜裂隙、長年の網膜剥離、出血を伴う剥離のためにＰＰＶが必要な網膜
剥離を有する場合、この試験に適格とした。

ＰＰＶを、局所または全身麻酔下で、２３ゲージまたは２０ゲージの３ポート強膜切開
を使用して行った。存在する網膜前膜はいずれも、膜ピックおよび／または鉗子を使用し
て切り剥がした。術中組織染色、ペルフルオロカーボン、冷凍凝固、眼内レーザー、強膜
バックリングおよび水晶体切除術を必要に応じて行った。シリコーン油またはガスをタン
ポン充填剤として使用した。

散瞳眼底検査を要する定期的な術後通院は、術後１日目、７日目、１カ月目、２カ月目
および３カ月目とした。患者は、シリコーン油の除去のために、最初の手術の３カ月後に
再来院して手術室に入り、４カ月後に診察を受けた。

上記の標準治療を施すことに加えて、患者にはその術後の期間に、複数回のメトトレキ
サートの硝子体内注射を投与した。最初の注射を術中に投与し、続いて術後１週目、２週
目、３週目、４週目、５週目、６週目、７週目、８週目および術後３カ月目に注射し、合
計１０回の注射とした。メトトレキサートの硝子体内注射は、麻酔および５％ポビドンヨ
ウ素を結膜嚢に局所適用してから、無菌で行った。各患者に、４００ｍｃｇ／０．１ｍｌ
のメトトレキサートの硝子体内注射を、水晶体の状態に応じて角膜輪部の３．０〜３．５
ｍｍ後側に、３０ゲージニードルで投与した。

注射後、十分な散瞳眼底検査などで、有害事象について患者をモニターした。

統計および術前の視力
男性８名および女性２名を試験に登録した（表１）。患者の年齢は１８歳〜６３歳の範
囲であった。患者２名（＃４および＃９）は登録時に外傷性網膜剥離（網膜全剥離、３６
０度の巨大網膜裂孔、および眼球開放創後の強膜の創傷への網膜の嵌頓）があった。その
他の患者８名は、過去に複数回の（平均２．５回）増殖性膜に続発する網膜剥離に罹患し
ていた。患者１名（ＭＴＸ０８Ｍ）には、手術をする眼に、強度の病的近視、ぶどう腫、
萎縮、格子状変性および敷石状変性を伴う、ベースラインの網膜の重大な併存症があった
。術前の視力の中央値は手動弁（Hand Motion）で２フィートであった。

手術の詳細
各患者の手術の詳細を表２に示す。手術時間を、外科的複雑度を示す代替として記録し
た。全ての患者に、硝子体切除、広範な膜剥離、網膜減張切除（relaxing retinectomy）
、ペルフルオロカーボン液、眼内レーザーおよびシリコーン油注射を施した。過去に外科
的介入された対象４名は、依然として眼球に適切な凹みを設けているバックルを有してお
り、このため原位置に残した。

視力および解剖学的結果
試験に登録した対象全員の視力および解剖学的予後はきわめてよくないものであったに
もかかわらず、処置プロトコールの３カ月間、メトトレキサートを投与している間にＰＶ
Ｒを発症した対象はいなかった。興味深いことであるが、外傷患者のうちの１名（＃４）
には、注射プロトコールの終了から２週間後（術後３．５カ月）に広範囲のＰＶＲが発生
したが、試験中の週１回の検査では増殖細胞の証拠は見られなかった。これはきわめて異
例であり、メトトレキサートを３カ月間存在させて、その後に非存在にすることで説明す
ることができる。この患者には再手術が必要になった。他の対象２名は、網膜の下に液体
の再蓄積が発生し、再手術が必要になったが、膜は認められなかった。

安全性および有害事象
観察された有害事象が表３に報告されている。対象全員に、シリコーン油の使用に応じ
て、ある程度の結膜充血が見られた。点状表層角膜症（ＳＰＫ）が、無症候の患者１名に
、１回の臨床検査で観察された。１週間後の検査では正常な角膜表面が見られ、さらなる
続発症は観察されなかった。患者１０名の追跡調査期間は４カ月〜３９カ月に及び、追跡
調査期間中央値は２５カ月であった。数か月から数年後の追跡調査データでも、重要な有
害事象は観察されなかった。最終の追跡調査来院時の視力および眼圧は、患者全員におい
て、試験期間の終了である術後４カ月目に観察した視力および眼圧と類似しており、良好
な長期安全性を示唆していた。

さらに、ＳＰＫを発症した同じ患者において、眼圧上昇が１回の検査で記録された（Ｇ
ｏｌｄｍａｎｎＴｏｎｏｍｅｔｒｙにより４４ｍｍＨｇ）。患者報告によると、この女
性患者は、Ｆｌｏｎａｓｅ（フルチカゾン経鼻剤）を「１日に何回も」使用し、Ｐｒｅｄ
Ｆｏｒｔｅ点眼薬を１日２回さすように指示されていたが、ＰｒｅｄＦｏｒｔｅを１
日４回さしていた。この女性患者の眼圧は検査室で局所治療によって正常化した。硝子体
内注射を予定どおり投与し、この女性患者は正常眼圧になって退院した。この女性患者に
は、緑内障サービスで追跡調査をする計画と共にＡｌｐｈａｇａｎおよびＸａｌａｔａｎ
の処方箋を出した。さらなる眼圧上昇は、試験期間中も追跡調査でも観察されず、この女
性患者の一過性の眼圧上昇は、予想どおり、過剰なステロイド使用による可能性が最も高
いことが示唆された。患者ＭＴＸ０８Ｍは、試験終了時の視力が無光覚視力（NLP vision
）であった。この男性患者には、手術をする眼に、病的近視、ぶどう腫、萎縮、格子状変
性および敷石状変性の既往があった。この男性患者の手術（患者にとってその眼における
３回目の硝子体内手術であり、本試験の手術日）から１カ月後に、乳頭蒼白が見られた。
その網膜の光干渉断層撮影写真には、術前後ともに、男性患者の先行網膜疾患に続発した
崩壊性薄膜が見られた。このとき、この男性患者の視力は光覚弁（LP）であった。この男
性患者に、継続的に注射を投与したが、視力の改善は限定的であり、最終来院時に無光覚
と確認した。

試験プロトコール中にＰＶＲの発症がほとんどないという優れた解剖学的結果が見られ
たことに加えて、このプロトコールには優れた視力の結果が伴った。術後視力中央値は２
０／２００であった。これは注目に値する。なぜなら、他の１群はＰＶＲを含む多種多様
な状態でメトトレキサートを眼内に使用しているが、これまで予後の改善を示した者は１
名もいないからである。Ｈａｒｄｗｉｇらは、患者５名に、種々の用量のメトトレキサー
トを硝子体内注射したが、何らかの視力の改善があったのは患者１名のみで、群について
は視力の変化がなかった（Hardwig et al., Retina 28:1082-1086 (2008)）。さらに、こ
の試験では有効性を検証する試みがなされなかった。また、２００６年にＨａｒｄｗｉｇ
らは、１用量のメトトレキサートを、ＰＶＲを有する患者１名の前眼房内に注射したが、
本明細書に記載しているように硝子体内腔に注射したのではなかった（Hardwig et al.,
Am J Ophthalmol 2006;142:883-885 (2006)）。

本結果はきわめて有望であり、偶然によって説明されるとは考えにくい。１０回のメト
トレキサートの硝子体内注射を投与した患者は、ＰＶＲのリスクが最も高い患者として意
図的に選択されたため、その状態の重症度を考慮すると、きわめて良好な結果を出した。

持続性のメトトレキサートはｉｎｖｉｔｒｏで増殖性硝子体網膜症の成長を抑制する
メトトレキサートが培養物中でヒト増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）細胞を抑制するであ
ろうとの仮説を立てた。ＰＶＲ膜切除を、ＰＶＲに続発した網膜剥離の修復を受けている
患者に行った。細胞分離技術を使用して、ＰＶＲ膜の細胞構成要素を細胞外マトリックス
膜から分離した。ウェル当たり３０，０００細胞を標準的な１２ウェルプレートに置いた
。１２ウェルの全てに、内皮細胞成長培地を追加の成長因子と共に与えた。それぞれが３
ウェルからなる４群を設定した。第１の群は、標準的な成長培地を与えられるが他の介入
は受けない、対照としての役目をした。残りのウェルは処置群として設定した。３ウェル
からなる第２の群は第１の処置群としての役目をし、細胞を４００マイクログラムのメト
トレキサートに曝露した。それぞれが３ウェルからなる第３および第４の群では、培養し
た細胞をそれぞれ２００マイクログラムおよび１００マイクログラムのメトトレキサート
に曝露した。

７２時間時点で、典型的な類上皮細胞形態でのＰＶＲ細胞の成長は類似しており、集密
は限定的であることが観察された（図２ａ）。播種から１週間後（図２ｂ）、ＰＶＲ対照
細胞は集密な細胞シートを示したが、メトトレキサートに曝露した細胞は、全ての濃度で
、成長抑制、集密の欠如を示し、見たところ類上皮細胞が少なかった。２週間時点で（図
２Ｃ）、細胞の集密度の抑制が続いていたが、対照プレートでは増殖し続けていた。

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他の実施形態
本発明を、その詳細な説明をしながら記載してきたが、当然のことながら、上記の記載
は説明することを目的とし、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲を限
定するものではない。他の態様、利点および変更は以下の特許請求の範囲内にある。

他の実施形態
本発明を、その詳細な説明をしながら記載してきたが、当然のことながら、上記の記載は説明することを目的とし、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲を限定するものではない。他の態様、利点および変更は以下の特許請求の範囲内にある。

本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．対象における増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）または網膜前膜（ＥＲＭ）のリスクを処理または低減する方法であって、少なくとも１カ月、２カ月、または３カ月以上の期間にわたり、週１回を限度として、複数回のメトトレキサートの硝子体内注射を投与するステップを含む方法。
２．１０回以上のメトトレキサートの硝子体内注射を投与するステップを含む上記１に記載の方法。
３．各注射が０．１ｍｌ中４００ｍｃｇの用量のメトトレキサートを供給する、上記１に記載の方法。
４．前記メトトレキサートが角膜輪部の後側に投与される、上記１に記載の方法。
５．ＥＲＭまたはＰＶＲを前記対象が発症するリスクを増加させる眼科の外科的処置を、前記対象が受けている、上記１に記載の方法。
６．前記眼科の外科的処置が、経扁平部硝子体切除（ＰＰＶ）、網膜剥離（ＲＤ）手術、ＥＲＭ手術、強膜バックル手術、または他方の眼の処置である、上記５に記載の方法。
７．前記対象が、外傷に続発する裂孔原性網膜剥離、既存の増殖性硝子体網膜症を処置するために；またはＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う他の適応症のために、ＰＰＶを必要とする、上記６に記載の方法。
８．前記ＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う適応症が、巨大網膜裂孔、３乳頭領域より大きい網膜裂隙、長年の網膜剥離もしくは出血を伴う剥離である、上記７に記載の方法。
９．最初の注射が前記外科的処置の最後に投与され；
８回の週１回の注射が術後２カ月目まで投与され；および
最後の１０回目の注射が術後３カ月目に投与される、
上記５に記載の方法。
１０．９回連続の週１回の注射、および最初の注射から３カ月後の１０回目の注射を投与するステップを含む上記１に記載の方法。
１１．１０回目の注射の後に、追加の注射を月１回投与するステップを含む上記１に記載の方法。
１２．１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回または９回の追加の注射を、前記１０回目の注射の後に投与するステップを含む上記１１に記載の方法。
１３．前記追加の注射が月１回投与される、上記１２に記載の方法。
１４．対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減する方法であって、少なくとも３カ月間にわたってメトトレキサートの持続放出性製剤を硝子体内に投与するステップを含む方法。
１５．前記持続放出性製剤が、脂質でカプセル化した製剤、メトトレキサート（ＭＴＸ）の多胞リポソーム（ＭＶＬ）製剤、ナノもしくはマイクロ粒子、ポリイオンコンプレックス（ＰＩＣ）ミセル、または生体接着性ポリマーである、またはこれらを含む、上記１４に記載の方法。
１６．前記生体接着性ポリマーが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）またはヒアルロン酸（ＨＡ）のうち１種または複数種を含む、上記１４に記載の方法。
１７．対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減する方法であって、前記対象の眼内に、持続放出性のメトトレキサートを供給するデバイスを、少なくとも３カ月間にわたって埋め込んでおくステップを含む方法。
１８．前記デバイスが非生分解性である、上記１７に記載の方法。
１９．対象における増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）または網膜前膜（ＥＲＭ）のリスクの処理または低減において使用するためのメトトレキサートを含む組成物であって、前記メトトレキサートが、少なくとも１カ月、２カ月、または３カ月以上の期間にわたり、週１回を限度として、複数回の硝子体内注射によって投与される、組成物。
２０．１０回以上のメトトレキサートの硝子体内注射の投与を含む上記１９に記載の組成物。
２１．各注射が０．１ｍｌ中４００ｍｃｇの用量のメトトレキサートを供給する、上記１９に記載の組成物。
２２．前記メトトレキサートが角膜輪部の後側に投与される、上記１９に記載の組成物。
２３．ＥＲＭまたはＰＶＲを前記対象が発症するリスクを増加させる眼科の外科的処置を、前記対象が受けている、上記１９に記載の組成物。
２４．前記眼科の外科的処置が、経扁平部硝子体切除（ＰＰＶ）、網膜剥離（ＲＤ）手術、ＥＲＭ手術、強膜バックル手術、または他方の眼の処置である、上記１９に記載の組成物。
２５．前記対象が、外傷に続発する裂孔原性網膜剥離、既存の増殖性硝子体網膜症を処置するために；またはＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う他の適応症のために、ＰＰＶを必要とする、上記２４に記載の組成物。
２６．前記ＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う適応症が、巨大網膜裂孔、３乳頭領域より大きい網膜裂隙、長年の網膜剥離もしくは出血を伴う剥離である、上記２５に記載の組成物。
２７．最初の注射が前記外科的処置の最後に投与され；
８回の週１回の注射が術後２カ月目まで投与され；および
最後の１０回目の注射が術後３カ月目に投与される、
上記２３に記載の組成物。
２８．９回連続の週１回の注射、および最初の注射から３カ月後の１０回目の注射の投与を含む上記１９に記載の組成物。
２９．１０回目の注射の後の、追加の注射の月１回の投与を含む上記１９に記載の組成物。
３０．１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回または９回の追加の注射の、前記１０回目の注射の後での投与を含む上記２９に記載の組成物。
３１．前記追加の注射が月１回投与される、上記３０に記載の組成物。
３２．対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減するためのメトトレキサートの持続放出性製剤であって、前記メトトレキサートが少なくとも３カ月間にわたって硝子体内に投与される、メトトレキサートの持続放出性製剤。
３３．前記持続放出性製剤が、脂質でカプセル化した製剤、メトトレキサート（ＭＴＸ）の多胞リポソーム（ＭＶＬ）製剤、ナノもしくはマイクロ粒子、ポリイオンコンプレックス（ＰＩＣ）ミセル、または生体接着性ポリマーである、またはこれらを含む、上記３２に記載の製剤。
３４．前記生体接着性ポリマーが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）またはヒアルロン酸（ＨＡ）のうち１種または複数種を含む、上記３２に記載の製剤。
３５．対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減するための、メトトレキサートを持続放出する埋め込み式眼用デバイスであって、メトトレキサートを少なくとも３カ月間にわたって前記対象の眼内に放出するデバイス。
３６．非生分解性である上記３５に記載のデバイス。

Claims

対象における増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）または網膜前膜（ＥＲＭ）のリスクを処理
または低減する方法であって、少なくとも１カ月、２カ月、または３カ月以上の期間にわ
たり、週１回を限度として、複数回のメトトレキサートの硝子体内注射を投与するステッ
プを含む方法。
１０回以上のメトトレキサートの硝子体内注射を投与するステップを含む請求項１に記
載の方法。
各注射が０．１ｍｌ中４００ｍｃｇの用量のメトトレキサートを供給する、請求項１に
記載の方法。
前記メトトレキサートが角膜輪部の後側に投与される、請求項１に記載の方法。
ＥＲＭまたはＰＶＲを前記対象が発症するリスクを増加させる眼科の外科的処置を、前
記対象が受けている、請求項１に記載の方法。
前記眼科の外科的処置が、経扁平部硝子体切除（ＰＰＶ）、網膜剥離（ＲＤ）手術、Ｅ
ＲＭ手術、強膜バックル手術、または他方の眼の処置である、請求項５に記載の方法。
前記対象が、外傷に続発する裂孔原性網膜剥離、既存の増殖性硝子体網膜症を処置する
ために；またはＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う他の適応症のために、ＰＰＶを必要とす
る、請求項６に記載の方法。
前記ＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う適応症が、巨大網膜裂孔、３乳頭領域より大きい
網膜裂隙、長年の網膜剥離もしくは出血を伴う剥離である、請求項７に記載の方法。
最初の注射が前記外科的処置の最後に投与され；
８回の週１回の注射が術後２カ月目まで投与され；および
最後の１０回目の注射が術後３カ月目に投与される、
請求項５に記載の方法。
９回連続の週１回の注射、および最初の注射から３カ月後の１０回目の注射を投与する
ステップを含む請求項１に記載の方法。
１０回目の注射の後に、追加の注射を月１回投与するステップを含む請求項１に記載の
方法。
１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回または９回の追加の注射を、前記１
０回目の注射の後に投与するステップを含む請求項１１に記載の方法。
前記追加の注射が月１回投与される、請求項１２に記載の方法。
対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減する方法であって、少なく
とも３カ月間にわたってメトトレキサートの持続放出性製剤を硝子体内に投与するステッ
プを含む方法。
前記持続放出性製剤が、脂質でカプセル化した製剤、メトトレキサート（ＭＴＸ）の多
胞リポソーム（ＭＶＬ）製剤、ナノもしくはマイクロ粒子、ポリイオンコンプレックス（
ＰＩＣ）ミセル、または生体接着性ポリマーである、またはこれらを含む、請求項１４に
記載の方法。
前記生体接着性ポリマーが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カル
ボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）またはヒアルロン酸（Ｈ
Ａ）のうち１種または複数種を含む、請求項１４に記載の方法。
対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減する方法であって、前記対
象の眼内に、持続放出性のメトトレキサートを供給するデバイスを、少なくとも３カ月間
にわたって埋め込んでおくステップを含む方法。
前記デバイスが非生分解性である、請求項１７に記載の方法。
対象における増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）または網膜前膜（ＥＲＭ）のリスクの処理
または低減において使用するためのメトトレキサートを含む組成物であって、前記メトト
レキサートが、少なくとも１カ月、２カ月、または３カ月以上の期間にわたり、週１回を
限度として、複数回の硝子体内注射によって投与される、組成物。
１０回以上のメトトレキサートの硝子体内注射の投与を含む請求項１９に記載の組成物
。
各注射が０．１ｍｌ中４００ｍｃｇの用量のメトトレキサートを供給する、請求項１９
に記載の組成物。
前記メトトレキサートが角膜輪部の後側に投与される、請求項１９に記載の組成物。
ＥＲＭまたはＰＶＲを前記対象が発症するリスクを増加させる眼科の外科的処置を、前
記対象が受けている、請求項１９に記載の組成物。
前記眼科の外科的処置が、経扁平部硝子体切除（ＰＰＶ）、網膜剥離（ＲＤ）手術、Ｅ
ＲＭ手術、強膜バックル手術、または他方の眼の処置である、請求項１９に記載の組成物
。
前記対象が、外傷に続発する裂孔原性網膜剥離、既存の増殖性硝子体網膜症を処置する
ために；またはＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う他の適応症のために、ＰＰＶを必要とす
る、請求項２４に記載の組成物。
前記ＰＶＲ発症の高リスク状態を伴う適応症が、巨大網膜裂孔、３乳頭領域より大きい
網膜裂隙、長年の網膜剥離もしくは出血を伴う剥離である、請求項２５に記載の組成物。
最初の注射が前記外科的処置の最後に投与され；
８回の週１回の注射が術後２カ月目まで投与され；および
最後の１０回目の注射が術後３カ月目に投与される、
請求項２３に記載の組成物。
９回連続の週１回の注射、および最初の注射から３カ月後の１０回目の注射の投与を含
む請求項１９に記載の組成物。
１０回目の注射の後の、追加の注射の月１回の投与を含む請求項１９に記載の組成物。
１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回または９回の追加の注射の、前記１
０回目の注射の後での投与を含む請求項２９に記載の組成物。
前記追加の注射が月１回投与される、請求項３０に記載の組成物。
対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減するためのメトトレキサー
トの持続放出性製剤であって、前記メトトレキサートが少なくとも３カ月間にわたって硝
子体内に投与される、メトトレキサートの持続放出性製剤。
前記持続放出性製剤が、脂質でカプセル化した製剤、メトトレキサート（ＭＴＸ）の多
胞リポソーム（ＭＶＬ）製剤、ナノもしくはマイクロ粒子、ポリイオンコンプレックス（
ＰＩＣ）ミセル、または生体接着性ポリマーである、またはこれらを含む、請求項３２に
記載の製剤。
前記生体接着性ポリマーが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カル
ボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）またはヒアルロン酸（Ｈ
Ａ）のうち１種または複数種を含む、請求項３２に記載の製剤。
対象におけるＰＶＲまたはＥＲＭのリスクを処理または低減するための、メトトレキサ
ートを持続放出する埋め込み式眼用デバイスであって、メトトレキサートを少なくとも３
カ月間にわたって前記対象の眼内に放出するデバイス。
非生分解性である請求項３５に記載のデバイス。