JP2021040512A - 基質培養物の製造方法及び基質培養物 - Google Patents
基質培養物の製造方法及び基質培養物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021040512A JP2021040512A JP2019164037A JP2019164037A JP2021040512A JP 2021040512 A JP2021040512 A JP 2021040512A JP 2019164037 A JP2019164037 A JP 2019164037A JP 2019164037 A JP2019164037 A JP 2019164037A JP 2021040512 A JP2021040512 A JP 2021040512A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substrate
- culture
- producing
- substrate culture
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 151
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 98
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 95
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims abstract description 60
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 53
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 37
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 21
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 14
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 14
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 14
- 239000002435 venom Substances 0.000 claims description 10
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 claims description 10
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 claims description 10
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 claims description 8
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000459887 Aspergillus luchuensis Species 0.000 claims description 3
- 241000131386 Aspergillus sojae Species 0.000 claims description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 90
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 44
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 32
- 101150048253 PHYA gene Proteins 0.000 description 26
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 20
- 108010011619 6-Phytase Proteins 0.000 description 17
- 101150081158 crtB gene Proteins 0.000 description 17
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 17
- 229940085127 phytase Drugs 0.000 description 17
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 17
- 101100434873 Drosophila melanogaster Amy-d gene Proteins 0.000 description 16
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 15
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 14
- 235000019779 Rapeseed Meal Nutrition 0.000 description 14
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 14
- 239000004456 rapeseed meal Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 12
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 108010038851 tannase Proteins 0.000 description 12
- 101150021205 xlnB gene Proteins 0.000 description 12
- 101150015836 ENO1 gene Proteins 0.000 description 11
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 11
- 101150033625 enoA gene Proteins 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 10
- 241000375392 Tana Species 0.000 description 9
- 101150015195 pgaB gene Proteins 0.000 description 9
- 101100519800 Aspergillus kawachii (strain NBRC 4308) pgaII gene Proteins 0.000 description 8
- 101100463779 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pgaI gene Proteins 0.000 description 8
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 8
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 101150095344 niaD gene Proteins 0.000 description 7
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 7
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 7
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 7
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 6
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 6
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 5
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 5
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 5
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 description 5
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 4
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 4
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 4
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 3
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 3
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 235000021329 brown rice Nutrition 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 3
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 3
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000003507 refrigerant Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 2
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 2
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- ZRWPUFFVAOMMNM-UHFFFAOYSA-N Patulin Chemical compound OC1OCC=C2OC(=O)C=C12 ZRWPUFFVAOMMNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 108010029182 Pectin lyase Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 2
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 2
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 101150108303 prtA gene Proteins 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- -1 threlligmatocystin Chemical compound 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- MBMQEIFVQACCCH-XVNBXDOJSA-N (S,E)-Zearalenone Chemical compound O=C1OC(C)CCCC(=O)CCC\C=C\C2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-XVNBXDOJSA-N 0.000 description 1
- GUWSQVZFXHIGLN-UHFFFAOYSA-M 1-(4-amino-2-methylpyrimidin-5-ylmethyl)-3-(2-hydroxyethyl)-2-methylpyridinium bromide Chemical compound [Br-].NC1=NC(C)=NC=C1C[N+]1=CC=CC(CCO)=C1C GUWSQVZFXHIGLN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 1
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100126955 Arabidopsis thaliana KCS2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000120 Artificial Saliva Substances 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 description 1
- 108700038091 Beta-glucanases Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 244000260524 Chrysanthemum balsamita Species 0.000 description 1
- 235000005633 Chrysanthemum balsamita Nutrition 0.000 description 1
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 101100028194 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) alp1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 101150001753 MPL gene Proteins 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 101100243750 Salmonella typhimurium (strain LT2 / SGSC1412 / ATCC 700720) pgtE gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 1
- 238000004378 air conditioning Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 235000019606 astringent taste Nutrition 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- LINOMUASTDIRTM-QGRHZQQGSA-N deoxynivalenol Chemical compound C([C@@]12[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1C=C(C([C@@H](O)[C@@]13CO)=O)C)C)O2 LINOMUASTDIRTM-QGRHZQQGSA-N 0.000 description 1
- 229930002954 deoxynivalenol Natural products 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000010794 food waste Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000003008 fumonisin Substances 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229930183344 ochratoxin Natural products 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 235000019629 palatability Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 101150045694 prt gene Proteins 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N trans-Zearalenon Natural products O=C1OC(C)CCCC(=O)CCCC=CC2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037426 transcriptional repression Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- LINOMUASTDIRTM-UHFFFAOYSA-N vomitoxin hydrate Natural products OCC12C(O)C(=O)C(C)=CC1OC1C(O)CC2(C)C11CO1 LINOMUASTDIRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N zearalenone Chemical compound O=C1O[C@@H](C)CCCC(=O)CCC\C=C\C2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/10—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for ruminants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
- C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/0102—Tannase (3.1.1.20)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
- C12Y301/03008—3-Phytase (3.1.3.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
- C12Y301/03026—4-Phytase (3.1.3.26), i.e. 6-phytase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01015—Polygalacturonase (3.2.1.15)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
- C12Y402/0201—Pectin lyase (4.2.2.10)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Botany (AREA)
- Birds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
Description
麹菌ゲノムデータベース(http://www.aspgd.org/)およびグルコシルハイドロラーゼのデータベースCAZy(http://www.cazy.org/fam/acc_GH.html)を利用して、フィターゼ、ポリガラクチュロナーゼ、キシラナーゼ、又はタンナーゼをコードする遺伝子を探索して、フィターゼについてはphyAを候補遺伝子とし、ポリガラクチュロナーゼについてはpgaBを候補遺伝子とし、キシラナーゼについてはxynG1を候補遺伝子とし、タンナーゼについてはtanAを候補遺伝子とした。phyAのDNA配列は、配列表の配列番号1の通りであり、pgaBのDNA配列は、配列表の配列番号2の通りであり、xynG1のDNA配列は、配列表の配列番号3の通りであり、tanAのDNA配列は、配列表の配列番号4の通りである。また、後述するAmyBプロモーター及びAmyBターミネーターを含むアミラーゼ(AmyB)のDNA配列を、配列表の配列番号28に示す。さらに、後述するenoAプロモーター及びenoAターミネーターを含むエノラーゼ(enoA)のDNA配列を、配列表の配列番号29に示す。
NBRC(独立行政法人製品評価技術基盤機構)で分譲を受けた麹菌の野生株(Aspergillus oryzae、RIB40)を液体培養し、以下の方法により、ゲノムDNAを抽出した。すなわち、前記野生株の分生子を液体培地に植菌し、30℃で2〜3日間静置培養して得た菌体にガラスビーズを加えて激しく撹拌し、凍結融解を繰り返してゲノムDNAを抽出した。なお、この野生株は、カビ毒非生産菌である。
上記の方法により抽出したゲノムDNAをテンプレートとして、図3に示した発現カセット1ないし5を作製した。発現カセット1又は2は、RIB40のゲノム遺伝子由来のアミラーゼプロモーター(AmyBプロモーター)と、RIB40のゲノム遺伝子由来のアミラーゼターミネーター(AmyBターミネーター)との間に目的の分解酵素として、RIB40のゲノム遺伝子に由来するphyA又はpgaBをそれぞれ接合した塩基配列を有する。アミラーゼプロモーターは、高発現用プロモーターとして機能する。
AmyBプロモーターについては、図3及び配列表に示したセンスプライマー5及びアンチセンスプライマー6を設定して、以下の条件でPCRを行うことにより、AmyBプロモーターを増幅した。センスプライマー5は、図3においては符号5で示し、その塩基配列は配列表の配列番号5に示した通りである。アンチセンスプライマー6は図3においては、符号6で示し、その塩基配列は配列表の配列番号6に示した通りである。このように、本明細書、図3、図4、図5、及び配列表において、図面に記載した符号と、明細書に記載したプライマー番号と、配列表に記載した配列番号とは、相互に一致するものとする。例えば、センスプライマー19の塩基配列は、配列表の配列番号19に示した配列とされる。配列番号は配列表において<210>で示される。以下同様とする。
(PCR反応液の組成)
テンプレート(RIB40ゲノムDNA) 1μl
10mMdNTP 1μl
5×Q5緩衝液 10μl
50μMセンスプライマー5 0.5μl
50μMアンチセンスプライマー6 0.5μl
DNAポリメラーゼ(Q5) 0.5μl
蒸留水 36.5μl
(PCR反応の条件)
1.98℃、30秒
2.(98℃、10秒→72℃、30秒)のサイクルを30回
3.72℃、5分
4.12℃に維持
発現カセット1で使用するphyA遺伝子については、図3及び配列表に示したセンスプライマー7及びアンチセンスプライマー8を設定して、以下の条件でPCRを行うことにより、phyA遺伝子を増幅した。
(PCR反応液の組成)
テンプレート(RIB40ゲノムDNA) 1μl
10mMdNTP 1μl
5×Q5緩衝液 10μl
50μMセンスプライマー7 0.5μl
50μMアンチセンスプライマー8 0.5μl
DNAポリメラーゼ(Q5) 0.5μl
蒸留水 36.5μl
(PCR反応の条件)
1.98℃、30秒
2.(98℃、10秒→72℃、1分)のサイクルを30回
3.72℃、5分
4.12℃に維持
(PCR反応液の組成)
テンプレート(RIB40ゲノムDNA) 1μl
10mMdNTP 2μl
2×KOD緩衝液 25μl
50μMセンスプライマー15 0.2μl
50μMアンチセンスプライマー16 0.2μl
DNAポリメラーゼ(KOD Fx neo) 1μl
蒸留水 20.6μl
(PCR反応の条件)
1.94℃、2分
2.(98℃、10秒→58℃、30秒→68℃、1分15秒)のサイクルを40回
3.68℃、5分
4.12℃に維持
図3に示した発現カセット1については、上述のセンスプライマー5と図3及び配列表に示すアンチセンスプライマー27を使用して、以下の条件でPCRを行うことにより、phyA遺伝子を増幅した。なお、KOD Fx neo(東洋紡株式会社)は、市販のDNAポリメラーゼである。
(PCR反応液の組成)
テンプレート(AmyBプロモーター) 1μl
テンプレート(AmyBターミネーター) 1μl
テンプレート(発現カセット1用のphyA) 1μl
10mMdNTP 2μl
2×KOD緩衝液 25μl
50μMセンスプライマー5 0.2μl
50μMアンチセンスプライマー27 0.2μl
DNAポリメラーゼ(KOD Fx neo) 1μl
蒸留水 18.6μl
(PCR反応の条件)
1.94℃、2分
2.(98℃、10秒→58℃、30秒→68℃、2分)のサイクルを40回
3.68℃、5分
4.12℃に維持
酒造用の麹菌として市販されているAspergillus oryzae(AOK11)から、Mon Gen Genet(1989)218:99-104に記載された方法でniaD欠損株を選抜した。この欠損株は、カビ毒非生産菌である。このniaD欠損株に対して、図4に示したように、上述の方法で作製した発現カセット1、発現カセット2及びniaD遺伝子をコトランスフォーメンションした。
(PCR反応液の組成)
テンプレート(RIB40ゲノムDNA) 2μl
10mMdNTP 1μl
5×Q5緩衝液 10μl
50μMセンスプライマー23 0.5μl
50μMアンチセンスプライマー24 0.5μl
DNAポリメラーゼ(Q5) 0.5μl
蒸留水 35.5μl
(PCR反応の条件)
1.98℃、30秒
2.(98℃、10秒→72℃、2分30秒)のサイクルを30回
3.72℃、5分
4.12℃に維持
図5に示したように、発現カセット1及び発現カセット2に替えて、発現カセット4及び発現カセット5を使用した点以外は、2−4株の作製方法と同様にして、phyA遺伝子とxynG1遺伝子との両方が導入された形質転換体を得た。
(PCR反応液の組成)
テンプレート(pPTRI) 2μl
10mMdNTP 1μl
5×Q5緩衝液 10μl
50μMセンスプライマー25 0.5μl
50μMアンチセンスプライマー26 0.5μl
DNAポリメラーゼ(Q5) 0.5μl
蒸留水 35.5μl
(PCR反応の条件)
1.98℃、30秒
2.(98℃、10秒→72℃、1分)のサイクルを30回
3.72℃、5分
4.12℃に維持
AOK11野生株(以下、「野生株」と称する)、又はセルフクローニングにより育種した前記2−4株、又は3−12株の種菌を、それぞれ基質であるふすまに種付けし、固体培養を行った。具体的な培養条件は、以下の通りである。
含水率11%のふすま160kgに対して、含水率58%となるように加水して撹拌した後、0.2MPaで加圧蒸煮処理した。蒸煮処理が完了した後、ふすまが30℃前後になるまで冷却し、AOK11野生株の種菌を一定量種付けし、均一になるよう丁寧に混合した。種付け後の原料の含水率は60%であった。この原料を培養装置の培養床へ盛込み、層厚が一定になるよう均してから培養を開始した。培養中は厳密に温湿度管理された空気を基質へ通風し、ベースパターンの品温経過となるよう品温制御を行った。ベースパターンの品温経過を、表1に示す。なお、ベースパターンでは、培養時間21時間以降が酵素生産期にあたる。
含水率11%のふすま160kgに対して、含水率58%となるように加水して撹拌した後、0.2MPaで加圧蒸煮処理した。蒸煮処理が完了した後、ふすまが30℃前後になるまで冷却し、2−4株の種菌を一定量種付けし、均一になるよう丁寧に混合した。種付け後の原料の含水率は60%であった。この原料を培養装置の培養床へ盛込み、層厚が一定になるよう均してから培養を開始した。培養中は厳密に温湿度管理された空気を基質へ通風し、ベースパターンの品温経過となるよう品温制御を行った。
含水率11%のふすま160kgに対して、含水率48%となるように加水して撹拌した後、0.2MPaで加圧蒸煮処理した。蒸煮処理が完了した後、ふすまが30℃前後になるまで冷却し、2−4株の種菌を一定量種付けし、均一になるよう丁寧に混合した。種付け後の原料の含水率は50%であった。この原料を培養装置の培養床へ盛込み、層厚が一定になるよう均してから培養を開始した。培養中は厳密に温湿度管理された空気を基質へ通風し、ベースパターンの品温経過となるよう品温制御を行った。
含水率11%のふすま160kgに対して、含水率58%となるように加水して撹拌した後、0.2MPaで加圧蒸煮処理した。蒸煮処理が完了した後、ふすまが30℃前後になるまで冷却し、3−12株の種菌を一定量種付けし、均一になるよう丁寧に混合した。種付け後の原料の含水率は60%であった。この原料を培養装置の培養床へ盛込み、層厚が一定になるよう均してから培養を開始した。培養中は厳密に温湿度管理された空気を基質へ通風し、ベースパターンの品温経過となるよう品温制御を行った。
含水率11%のふすま160kgに対して、含水率48%となるように加水して撹拌した後、0.2MPaで加圧蒸煮処理した。蒸煮処理が完了した後、ふすまが30℃前後になるまで冷却し、3−12株の種菌を一定量種付けし、均一になるよう丁寧に混合した。種付け後の原料の含水率は50%であった。この原料を培養装置の培養床へ盛込み、層厚が一定になるよう均してから培養を開始した。培養中は厳密に温湿度管理された空気を基質へ通風し、ベースパターンの品温経過となるよう品温制御を行った。
含水率11%のふすま160kgに対して、含水率58%となるように加水して撹拌した後、0.2MPaで加圧蒸煮処理した。蒸煮処理が完了した後、ふすまが30℃前後になるまで冷却し、3−12株の種菌を一定量種付けし、均一になるよう丁寧に混合した。種付け後の原料の含水率は60%であった。この原料を培養装置の培養床へ盛込み、層厚が一定になるよう均してから培養を開始した。培養中は厳密に温湿度管理された空気を基質へ通風し、低温パターンの品温経過となるよう品温制御を行った。低温パターンの品温経過を、表1に示す。なお、低温パターンでは、培養時間27時間以降が酵素生産期にあたる。
前記(1)〜(6)の基質培養物に含まれる酵素活性を評価した。各基質培養物からの粗酵素液の抽出及び各酵素活性の測定は、公知の方法で行った。酵素活性の評価は、前記(1)における各酵素活性をコントロールとし、前記(2)〜(6)における各酵素活性がコントロールの何倍相当であるかによって評価した。
前記(2)及び(3)の基質培養物に含まれるフィターゼ活性は、コントロールに比して9〜17倍であった。また、前記(2)及び(3)の基質培養物に含まれるポリガラクチュロナーゼ活性は、コントロールに比して14〜15倍であった。これらの結果から、2種類の分解酵素、フィターゼ及びポリガラクチュロナーゼを高発現するよう育種した2−4株は、セルフクローニングによって目的の分解酵素を高生産することを確認した。
前記(4)、(5)及び(6)の基質培養物に含まれるタンナーゼ活性は、コントロールに比して2〜4倍であった。また、前記(4)、(5)及び(6)の基質培養物に含まれるキシラナーゼ活性は、コントロールに比して21〜43倍であった。また、前記(4)、(5)及び(6)の基質培養物に含まれるフィターゼ活性は、コントロールに比して11〜18倍であった。これらの結果から、3種類の分解酵素、タンナーゼ、キシラナーゼ及びフィターゼを高発現するよう育種した3−12株は、セルフクローニングによって目的の分解酵素を高生産することを確認した。
消化試験装置(ANKOM DAISY II インビトロインキュベーター)を用いて、人工ルーメン法による消化率の評価を行った。まず、前記消化試験装置の構成部品であるガラス瓶(消化ジャー)に、牛の第一胃より採取したルーメンジュースを4倍希釈した液400mLと、牛の人工唾液1600mLを投入し、よく混合したものを反応液とした。次に、大豆粕または菜種粕を、それぞれポリエステル製のメッシュバッグに各0.4gずつ入れてシールし、前記反応液中に大豆粕入りメッシュバッグ10袋、菜種粕入りメッシュバッグ10袋を投入した。ここに、前記(1)〜(6)の基質培養物のうち1種類を1g添加し、二酸化炭素ガスを封入した後、39℃に保った前記消化試験装置内で48時間反応させた。そして、24時間経過後と48時間経過後の時点において、前記メッシュバッグを各5袋ずつ取り出して流水で十分にすすぎ、90℃の乾燥機で15時間放置(絶対乾燥)した後、各メッシュバッグの重量を測定した。大豆粕および菜種粕の消化率は、反応前後の重量変化から算出した。なお、前記反応液とメッシュバッグを投入した消化ジャーに、固体培養する前の基質(ふすま)を1g添加したものをコントロールとした。
品温パターンをベースパターンとし、初期含水率60%で培養した野生株の基質培養物(前記(1)の基質培養物)を添加した試験区に比して、同一の品温パターンかつ同一の初期含水率で培養した2−4株の基質培養物(前記(2)の基質培養物)を添加した試験区の方が、大豆粕の消化率は最大9.9%、菜種粕の消化率は最大10.5%高かった。また、品温パターンをベースパターンとし、初期含水率60%で培養した野生株の基質培養物(前記(1)の基質培養物)を添加した試験区に比して、3−12株の基質培養物(前記(4)の基質培養物)を添加した試験区の方が、大豆粕の消化率は最大13.1%、菜種粕の消化率は最大14.7%高かった。
初期含水率50%の基質培養物(前記(3)の基質培養物)を添加した試験区に比して、初期含水率60%の基質培養物(前記(2)の基質培養物)を添加した試験区の方が、大豆粕の消化率は1.6%〜8.2%、菜種粕の消化率は3.5%〜5.1%高かった。
初期含水率50%の基質培養物(前記(5)の基質培養物)を添加した試験区に比して、初期含水率60%の基質培養物(前記(4)の基質培養物)を添加した試験区の方が、大豆粕の消化率は1.9%〜5.5%、菜種粕の消化率は2.2%〜4.0%高かった。
ベースパターンの基質培養物(前記(4)の基質培養物)を添加した試験区に比して、低温パターンの基質培養物(前記(6)の基質培養物)を添加した試験区の方が、大豆粕の消化率は最大1.0%、菜種粕の消化率は最大0.8%高かった。
Claims (8)
- 飼料として用いる基質培養物の製造方法であって、
セルフクローニングによって目的の分解酵素を高生産するように育種した糸状菌を基質へ種付けし、
前記基質に通風して固体培養することにより、
機能性を有する基質培養物を製造する基質培養物の製造方法。 - 前記糸状菌は、カビ毒非生産菌である請求項1記載の基質培養物の製造方法。
- 前記カビ毒非生産菌は、Aspergillus oryzae、Aspergillus sojae又はAspergillus luchuensisである請求項2記載の基質培養物の製造方法。
- 基質に供給する空気の温度又は湿度のうち少なくともいずれか一方を調整することによって品温を制御して前記固体培養を行う請求項1〜3のいずれかに記載の基質培養物の製造方法。
- 散水又は乾燥により基質培養物の含水率を調整する請求項1〜4のいずれかに記載の基質培養物の製造方法。
- 前記基質培養物は、前記糸状菌の菌糸を構成する多糖類を含む請求項1〜5のいずれかに記載の基質培養物の製造方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の方法で製造された基質培養物と、培養を行っていない新たな基質とを混合する工程をさらに行う基質培養物の製造方法。
- セルフクローニングによって目的の分解酵素を高生産するように育種された糸状菌の菌糸及び前記糸状菌により生産された目的の分解酵素が含まれた固体状の基質培養物。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019164037A JP7491542B2 (ja) | 2019-09-09 | 2019-09-09 | 基質培養物の製造方法及び基質培養物 |
CA3056774A CA3056774A1 (en) | 2019-09-09 | 2019-09-26 | Method for producing substrate culture product and substrate culture product |
US16/587,289 US10995326B2 (en) | 2019-09-09 | 2019-09-30 | Method for producing substrate culture product and substrate culture product |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019164037A JP7491542B2 (ja) | 2019-09-09 | 2019-09-09 | 基質培養物の製造方法及び基質培養物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021040512A true JP2021040512A (ja) | 2021-03-18 |
JP7491542B2 JP7491542B2 (ja) | 2024-05-28 |
Family
ID=74849520
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019164037A Active JP7491542B2 (ja) | 2019-09-09 | 2019-09-09 | 基質培養物の製造方法及び基質培養物 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10995326B2 (ja) |
JP (1) | JP7491542B2 (ja) |
CA (1) | CA3056774A1 (ja) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62269645A (ja) * | 1986-05-16 | 1987-11-24 | Kibun Kk | 飼料 |
JP2007300851A (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Ichibiki Kk | 醤油粕入り発酵飼料の製造方法 |
WO2011158623A1 (ja) * | 2010-06-17 | 2011-12-22 | キッコーマン株式会社 | 麹菌染色体における大領域重複の作製方法 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5105691B2 (ja) | 2003-05-09 | 2012-12-26 | 月桂冠株式会社 | アスペルギルス属糸状菌由来の環状ヌクレオチド、アスペルギルス属糸状菌セルフクローニング株の製造方法及びセルフクローニング株 |
JP5025177B2 (ja) | 2006-02-20 | 2012-09-12 | 出光興産株式会社 | 動物用飼料添加剤 |
WO2010101129A1 (ja) * | 2009-03-04 | 2010-09-10 | 財団法人野田産業科学研究所 | マンナン加水分解酵素群又はセルロース加水分解酵素群転写制御因子及び該転写制御因子遺伝子 |
CN102363762B (zh) | 2011-12-05 | 2014-01-29 | 河南科技大学 | 转芽孢杆菌源α-淀粉酶基因重组乳酸杆菌及制品和应用 |
JP7388628B2 (ja) | 2019-05-15 | 2023-11-29 | 雪印種苗株式会社 | セルロース分解能増強組成物及びセルロース分解能増強変異株 |
-
2019
- 2019-09-09 JP JP2019164037A patent/JP7491542B2/ja active Active
- 2019-09-26 CA CA3056774A patent/CA3056774A1/en active Pending
- 2019-09-30 US US16/587,289 patent/US10995326B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62269645A (ja) * | 1986-05-16 | 1987-11-24 | Kibun Kk | 飼料 |
JP2007300851A (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Ichibiki Kk | 醤油粕入り発酵飼料の製造方法 |
WO2011158623A1 (ja) * | 2010-06-17 | 2011-12-22 | キッコーマン株式会社 | 麹菌染色体における大領域重複の作製方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3056774A1 (en) | 2021-03-09 |
JP7491542B2 (ja) | 2024-05-28 |
US10995326B2 (en) | 2021-05-04 |
US20210071154A1 (en) | 2021-03-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Daba et al. | The ancient koji mold (Aspergillus oryzae) as a modern biotechnological tool | |
CN100406561C (zh) | 微生物表达的用于动物饲料的耐热植酸酶 | |
CN1561391B (zh) | 重组细菌肌醇六磷酸酶及其用途 | |
DE69133533T2 (de) | Expression von Phytase in Pflanzen | |
CN102669448B (zh) | 一种肉大鸡低能量饲料及其制备方法 | |
CN111631311A (zh) | 发酵豆粕及其制备方法 | |
CN101080491B (zh) | 具有植酸酶活性的多肽和编码多肽的核苷酸序列 | |
CN105418283A (zh) | 一种改善金针菇培养基持水性和通气性的培养基配方及其制备方法 | |
US6063431A (en) | Production of enzyme products and raw feed materials using grain seeds | |
CN107699497B (zh) | 一种黑曲霉及其在辣木叶发酵中的应用 | |
KR101317549B1 (ko) | 발효 옥수수글루텐의 제조방법 | |
CN106551132A (zh) | 一种能提高猪肉肉质的微生物发酵饲料制作方法 | |
CN106854657B (zh) | 一种能辅助降解蛋白质并分泌抗菌肽的益生重组酿酒酵母 | |
JP2021040512A (ja) | 基質培養物の製造方法及び基質培養物 | |
Singh et al. | Enhanced phytase production by Bacillus subtilis subsp. subtilis in solid state fermentation and its utility in improving food nutrition | |
Muthusamy et al. | Enzymes from genetically modified organisms and their current applications in food development and food chain | |
JP4304319B2 (ja) | 米糠を基質とした麹培養方法と玄米麹 | |
CN105176945B (zh) | 一种新型脂肪酶 | |
CN102876694A (zh) | 优化的葡聚糖酶基因及其重组植物表达载体和应用 | |
CN102174561B (zh) | 大豆胰蛋白酶抑制剂KTi和凝集素SBA双价RNAi表达载体及应用 | |
TWI830742B (zh) | 使用酵母以製備具有經改良之氣味的發酵組成物的方法、所使用之酵母、及包含其的組成物 | |
CN109486841B (zh) | 一种利用稻麦种子生产饲料复合酶的方法 | |
WO2023017710A1 (ja) | 糸状菌固体培養物、組成物、及び、食品、動物用飼料、食品添加剤、又は動物用飼料添加剤、並びに糸状菌固体培養物の製造方法 | |
CN105400706B (zh) | 仔猪饲用微生态发酵剂及其制备方法和活性固态发酵饲料 | |
CN105670967A (zh) | 育肥猪饲用微生态发酵剂及其制备方法和活性发酵饲料 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20191002 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220405 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20220405 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20230324 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230418 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230608 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230808 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231031 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20231211 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240228 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20240228 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240430 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240509 |