JP2021017416A - Ａｌｋ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物 - Google Patents
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Abstract
【課題】ＡＬＫ２の切断活性を有するＡＤＡＭ１９又はその断片を含有する、ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療、又は予防用医薬組成物の提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込んだ発現ベクターを含有する、ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物。ＡＬＫ２の変異を有する疾患としては、進行性骨化性線維異形成症、又はびまん性橋膠腫。【選択図】なし
Description
本開示は、ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物等に関する。
進行性骨化性線維異形成症（Fibrodysplasia Ossificans Progressiva：ＦＯＰ）は、筋肉組織、腱、靭帯が骨組織に変化し硬化する症状を示す疾患である。２００万人に１人の割合で発症し、日本では指定難病２７２に指定されおり、有効な治療法の開発が望まれている。
びまん性橋膠腫（Diffuse Intrinsic Pontine Glioma：ＤＩＰＧ）は、グリア細胞が変異した癌であるグリオーマが、脳幹部（主に橋）に発生する疾患であり、橋グリオーマとも称される。１年生存率は５０％と言われており、有効な治療法の開発が望まれている。
ＦＯＰ患者は、骨形成タンパク質（以下、「ＢＭＰ」と表記することもある）受容体の一部を構成するタンパク質であるＡＬＫ２（activin receptor-like kinase、ＡＣＶＲ１（Activin A receptor type-I）とも称される）の恒常活性型変異を有していることが知られている（非特許文献１）。また、ＤＩＰＧ患者においても、ＡＬＫ２の恒常活性型変異を有していることが報告されている（非特許文献１）。
ＡＤＡＭ１９（A Disintegrin And Metalloproteinase19）は、ＡＤＡＭファミリーに分類されるタンパク質である。ＡＤＡＭ１９は、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、システインリッチドメイン、ＥＧＦ様ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインから構成されるタンパク質である。
ＡＤＡＭ１９は、プロセシングを受けて、プロペプチドドメインが切断された後に、システインリッチドメインにある自己切断部位において切断されることが知られている（非特許文献２）。また、ＡＤＡＭ１９は、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを有しない、分泌型のＡＤＡＭ１９であっても、同様にプロセシングによってプロペプチドドメインが切断され、タンパク質分解活性を示すことが知られている（非特許文献２）。
Shared ACVR1 mutations in FOP and DIPG: Opportunities and challenges in extending biological and clinical implications across rare diseases, Bone, 2018, 109, 91-100
Autolytic Processing at Glu586-Ser587within the Cysteine-rich Domain of Human Adamalysin 19/Disintegrin-Metalloproteinase 19 Is Necessary for Its Proteolytic Activity, J Biol Chem, 2002, 277, 48514-48522
本開示は、ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物を提供することを課題とする。
本発明者らは、ＡＤＡＭ１９がＡＬＫ２を切断することを見出し、さらに改良を重ねた。
本開示は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
下記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる群より選択される少なくとも１種：
（ａ）
（ａ−１）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−２）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−３）配列番号３に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−４）配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−５）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−６）配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−７）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−８）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−９）配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１０）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１１）配列番号５に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は
（ａ−１２）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｂ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｄ）前記（ａ）〜（ｃ）に記載のいずれかのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込んだ発現ベクター；
を含有する、
ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物。
項２．
（ｂ）のポリペプチドが、
（ｂ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ｂ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
である、項１に記載の医薬組成物。
項３．
（ｃ）のポリペプチドが、
（ｃ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ｃ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
である、項１に記載の医薬組成物。
項４．
前記（ａ）〜（ｃ）に記載のポリペプチドが、ＡＬＫ２特異的な切断活性を有するポリペプチドである、項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
項５．
ＡＬＫ２の切断活性を有するＡＤＡＭ１９又はその断片を含有する、ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物。
項６．
前記ＡＬＫ２の変異を有する疾患が、進行性骨化性線維異形成症、またはびまん性橋膠腫である、項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
項７．
注射剤である、項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
項１．
下記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる群より選択される少なくとも１種：
（ａ）
（ａ−１）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−２）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−３）配列番号３に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−４）配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−５）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−６）配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−７）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−８）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−９）配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１０）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１１）配列番号５に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は
（ａ−１２）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｂ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｄ）前記（ａ）〜（ｃ）に記載のいずれかのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込んだ発現ベクター；
を含有する、
ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物。
項２．
（ｂ）のポリペプチドが、
（ｂ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ｂ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
である、項１に記載の医薬組成物。
項３．
（ｃ）のポリペプチドが、
（ｃ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ｃ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
である、項１に記載の医薬組成物。
項４．
前記（ａ）〜（ｃ）に記載のポリペプチドが、ＡＬＫ２特異的な切断活性を有するポリペプチドである、項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
項５．
ＡＬＫ２の切断活性を有するＡＤＡＭ１９又はその断片を含有する、ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物。
項６．
前記ＡＬＫ２の変異を有する疾患が、進行性骨化性線維異形成症、またはびまん性橋膠腫である、項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
項７．
注射剤である、項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物を提供することができる。
以下、本開示に包含される各実施形態について、さらに詳細に説明する。
本開示は、下記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる群より選択される少なくとも１種：
（ａ）
（ａ−１）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−２）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−３）配列番号３に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−４）配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−５）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−６）配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−７）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−８）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−９）配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１０）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１１）配列番号５に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は
（ａ−１２）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｂ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｄ）前記（ａ）〜（ｃ）に記載のいずれかのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込んだ発現ベクター；
を含有する組成物を包含する。また本開示は、ＡＬＫ２の切断活性を有するＡＤＡＭ１９又はその断片を含有する組成物をも好ましく包含する。以下、これらの組成物を「本開示の組成物」などと表記することがある。
（ａ）
（ａ−１）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−２）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−３）配列番号３に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−４）配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−５）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−６）配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−７）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−８）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−９）配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１０）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１１）配列番号５に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は
（ａ−１２）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｂ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｄ）前記（ａ）〜（ｃ）に記載のいずれかのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込んだ発現ベクター；
を含有する組成物を包含する。また本開示は、ＡＬＫ２の切断活性を有するＡＤＡＭ１９又はその断片を含有する組成物をも好ましく包含する。以下、これらの組成物を「本開示の組成物」などと表記することがある。
一実施形態において本開示の組成物は、（ａ）（ａ−１）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、（ａ−２）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、（ａ−３）配列番号３に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、（ａ−４）配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、（ａ−５）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、（ａ−６）配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、（ａ−７）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、（ａ−８）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、（ａ−９）配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、（ａ−１０）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、（ａ−１１）配列番号５に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は（ａ−１２）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含有することが好ましい。以下、当該ポリペプチドを「（ａ）のポリペプチド」などと表記することがある。
配列番号１に示されるアミノ酸配列は、ヒト由来のＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列の一部である。より具体的には、配列番号１に示されるアミノ酸配列は、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、及びシステインリッチドメインの前半部分（自己切断部位まで）から構成される。
配列番号２に示されるアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対応するマウス由来のアミノ酸配列である。換言すれば、配列番号２に示されるアミノ酸配列は、マウス由来のＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列の一部である。より具体的には、配列番号２に示されるアミノ酸配列は、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、及びシステインリッチドメインの前半部分（自己切断部位まで）から構成される。
配列番号３に示されるアミノ酸配列は、分泌型のヒト由来のＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列である。換言すれば、配列番号３に示されるアミノ酸配列は、ヒト由来のＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列の全長から、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを除いたアミノ酸配列である。より具体的には、配列番号３に示されるアミノ酸配列は、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、システインリッチドメイン、及びＥＧＦ様ドメインから構成される。要するに、配列番号３に示されるアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、システインリッチドメインの後半部分（自己切断部位以降）、及びＥＧＦ様ドメインから構成される。
配列番号４に示されるアミノ酸配列は、配列番号３に示されるアミノ酸配列に対応するマウス由来のアミノ酸配列である。換言すれば、配列番号４に示されるアミノ酸配列は、分泌型のマウス由来のＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列である。要するに、配列番号４に示されるアミノ酸配列は、マウス由来のＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列の全長から、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを除いたアミノ酸配列である。より具体的には、配列番号４に示されるアミノ酸配列は、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、システインリッチドメイン、及びＥＧＦ様ドメインから構成される。要するに、配列番号４に示されるアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、システインリッチドメインの後半部分（自己切断部位以降）、及びＥＧＦ様ドメインから構成される。
配列番号５に示されるアミノ酸配列は、ヒト由来のＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列の全長である。より具体的には、配列番号５に示されるアミノ酸配列は、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、システインリッチドメイン、ＥＧＦ様ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインから構成される。要するに、配列番号５に示されるアミノ酸配列は、配列番号１に示されるアミノ酸配列、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、システインリッチドメインの後半部分（自己切断部位以降）、ＥＧＦ様ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインから構成される。
配列番号６に示されるアミノ酸配列は、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対応するマウス由来のアミノ酸配列である。換言すれば、配列番号６に示されるアミノ酸配列は、マウス由来のＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列の全長である。より具体的には、配列番号６に示されるアミノ酸配列は、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、システインリッチドメイン、ＥＧＦ様ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインから構成される。要するに、配列番号６に示されるアミノ酸配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列、シグナルペプチド、プロペプチドドメイン、システインリッチドメインの後半部分（自己切断部位以降）、ＥＧＦ様ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインから構成される。
なお、（ａ−１）のポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸残基を含んでいてもよい。また、（ａ−２）のポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸残基を含んでいてもよい。また、（ａ−３）のポリペプチドは、配列番号３に示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸残基を含んでいてもよい。また、（ａ−４）のポリペプチドは、配列番号４に示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸残基を含んでいてもよい。また、（ａ−５）のポリペプチドは、配列番号５に示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸残基を含んでいてもよい。また、（ａ−６）のポリペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸残基を含んでいてもよい。（ａ−１）〜（ａ−６）において、配列番号１、２、３、４、５、又は６に示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸残基の個数の上限は、それぞれ独立して、例えば、１００個、９５個、９０個、８５個、８０個、７５個、７０個、６５個、６０個、５５個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、又は２個である。
（ａ−１）〜（ａ−６）のポリペプチドは、ＡＬＫ２の切断活性を有することが好ましい。本明細書においてＡＬＫ２の切断活性は、ＡＬＫ２の切断断片をウェスタンブロット法によって検出することで確認することができる。具体的には、後述の実施例に記載するように、ＡＬＫ２の切断活性を確認するポリペプチドと、ＡＬＫ２とを共発現する細胞を培養し、当該細胞の抽出物とＡＬＫ２を検出可能な抗体（例えば、タグ抗体）とを用いて、ウェスタンブロット法により、ＡＬＫ２の切断断片を検出することで、ＡＬＫ２の切断活性を確認することができる。
一実施形態において本開示の組成物は、（ｂ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチドを含有することが好ましい。以下、当該ポリペプチドを「（ｂ）のポリペプチド」などと表記することがある。
（ｂ）のポリペプチドは、（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドであることが好ましい。
アミノ酸配列の同一性は、全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ）http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/を用いて、算出することができる。
（ｂ）のポリペプチドは、ＡＬＫ２の切断活性を有することが好ましい。ＡＬＫ２の切断活性は上述した方法により確認することができる。
（ｂ）のポリペプチドは、活性中心を維持するとの観点から、（ｂ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｂ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。保存されているアミノ酸残基の数は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又は全部であってもよい。また、（ｂ）のポリペプチドは、（ｂ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また（ｂ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｂ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また（ｂ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。
一実施形態において本開示の組成物は、（ｃ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチドを含有することが好ましい。以下、当該ポリペプチドを「（ｃ）のポリペプチド」などと表記することがある。
「（ｃ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列」において、欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸の個数の上限は、それぞれ独立して、例えば、１００個、９５個、９０個、８５個、８０個、７５個、７０個、６５個、６０個、５５個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、又は２個である。
１個若しくは２個以上のアミノ酸の欠失、置換、若しくは付加といった変異を特定のアミノ酸配列に加える技術は当該技術分野において公知であり、任意の手法を用いて行うことができる。例えば、制限酵素処理、エキソヌクレアーゼやＤＮＡリガーゼ等による処理、位置指定突然変異導入法、ランダム突然変異導入法等を利用して行うことができる。
（ｃ）のポリペプチドは、ＡＬＫ２の切断活性を有することが好ましい。ＡＬＫ２の切断活性は上述した方法により確認することができる。
（ｃ）のポリペプチドは、活性中心を維持するとの観点から、（ｃ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。また、（ｃ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されていることが好ましい。保存されているアミノ酸残基の数は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、又は全部であってもよい。また、（ｃ）のポリペプチドは、（ｃ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。また、（ｃ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目、第１４６番目、第１４９番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基が保存されていることがより好ましい。
（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドは、後述するポリヌクレオチドを利用して、遺伝子工学的な手法で製造することができる。また、（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドは、配列番号１〜６に示されるアミノ酸配列の情報に基づいて、一般的なタンパク質の化学合成法（例えば、液相法及び固相法）を用いて製造することも可能である。
一実施形態において本開示の組成物は、前記（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込んだ発現ベクターを含有することが好ましい。
（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの塩基配列は特に制限されない。例えば、配列番号７又は８に示される塩基配列などが例示される。なお、配列番号７は、配列番号５のアミノ酸配列をコードする塩基配列である。また、配列番号８は、配列番号６のアミノ酸配列をコードする塩基配列である。また、（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ヒトのコドン使用頻度に適合したポリヌクレオチドであってもよい。「ヒトのコドン使用頻度に適合した」とは、１つのアミノ酸に対応するコドンが複数ある場合に、ヒトにおいて最も使用頻度の高いコドンが用いられることを意味する。（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのオープンリーディングフレームの５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上がヒトのコドン使用頻度に適合したポリヌクレオチドであることが好ましい。
（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドをコードする塩基配列に基づいて、化学的なポリヌクレオチドの合成法（例えば、フォスフォアミダイト法）や遺伝子工学的手法を用いて容易に取得することができる。
本開示に用いられるベクターは、（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを発現可能な様式で含むことが好ましい。また、本開示に用いるベクターとしては、例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター等のウイルスベクター；プラスミドベクターなどが挙げられる。
（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドは、ＡＬＫ２を特異的に切断することがより好ましい。本明細書において、「ＡＬＫ２を特異的に切断する」とは、ＢＭＰレセプターの中でも、ＡＬＫ２を選択的に切断することを意味する。より具体的には、（ａ）〜（ｃ）のポリペプチドは、例えば、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２等のＡＬＫ２以外のＢＭＰレセプターを切断しないことが好ましい。
本明細書において、「ＡＬＫ２を特異的に切断する」ことは、上述したＡＬＫ２の切断活性の確認方法において、レセプターとしてＡＬＫ２以外のＢＭＰレセプターを用いた場合に、当該ＢＭＰレセプターの切断断片が検出されないことによって確認することができる。具体的には、後述の実施例に記載するように、切断活性を確認するポリペプチドと、ＡＬＫ２、又はＡＬＫ２以外のＢＭＰレセプターとしてＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、若しくはＢＭＰＲ２とを共発現する細胞を培養し、当該細胞の抽出物と各レセプターを検出可能な抗体（例えば、タグ抗体）とを用いて、ウェスタンブロット法により、ＡＬＫ２の切断断片を検出すること、及びＡＬＫ２以外のＢＭＰレセプターの切断断片が検出されないことで、ＡＬＫ２を特異的に切断することを確認することができる。
一実施形態において本開示の組成物は、ＡＬＫ２の切断活性を有する、ＡＤＡＭ１９又はその断片を含有することが好ましい。
ＡＤＡＭ１９は、例えば、ＡＬＫ２を切断し、約５０ｋＤａの断片を生成することができる。
本開示の組成物に用いられるＡＤＡＭ１９の断片は、ＡＬＫ２の切断活性を有する限り特に限定されない。ＡＤＡＭ１９の断片としては、例えば、シグナルペプチドを含有する断片であってもよく、シグナルペプチドを含有しない断片であってもよい。また、ＡＤＡＭ１９の断片としては、例えば、プロペプチドドメインを含有する断片であってもよく、プロペプチドドメインを含有しない断片であってもよい。また、ＡＤＡＭ１９の断片としては、例えば、ＥＧＦ様ドメインを含有する断片であってもよく、ＥＧＦ様ドメインを含有しない断片であってもよい。また、ＡＤＡＭ１９の断片としては、例えば、膜貫通ドメインを含有する断片であってもよく、膜貫通ドメインを含有しない断片であってもよい。また、ＡＤＡＭ１９の断片としては、例えば、細胞質ドメインを含有する断片であってもよく、細胞質ドメインを含有しない断片であってもよい。また、例えば、ＡＤＡＭ１９の断片としては、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを含有しない分泌型のAＤＡＭ１９断片であってもよい。また、ＡＤＡＭ１９の断片としては、例えば、システインリッチドメインにある自己切断部位において切断された後の断片であってもよい。換言すれば、ＡＤＡＭ１９の断片としては、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、及びシステインリッチドメインの前半部分（自己切断部位まで）から構成される断片であってもよい。また、例えば、ＡＤＡＭ１９の断片は、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含有することが好ましく、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメインを含有することがより好ましい。また、ＡＤＡＭ１９の断片は、例えば、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン及びディスインテグリンドメインを含有していてもよく、活性中心部位（亜鉛結合ドメイン）を含むメタロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、及びシステインリッチドメインを含有していてもよい。なお、ＡＤＡＭ１９の断片は、ＡＬＫ２の切断活性を有する限り、上述したドメインの全長を含有していてもよく、上述したドメインの一部分を含有していてもよい。要するに、ＡＤＡＭ１９の断片は、ＡＬＫ２の切断活性を有する限り、ＡＤＡＭ１９を構成するアミノ酸配列の一部から構成される断片であってもよい。ＡＬＫ２の切断活性は上述した方法により確認することができる。
ＡＤＡＭ１９の由来としては、特に制限されず、例えば、ヒト；チンパンジー、オランウータン、マカク、マウス、ラット、イヌ、ウマ、ウシ、オポッサムなどの非ヒト哺乳動物；ニワトリ等の鳥類；ゼブラフィッシュ、メダカ、テトラオドン、フグ等の魚類等が例示される。
ＡＬＫ２の切断活性を有する、ＡＤＡＭ１９又はその断片は、商業的に入手可能なものを使用することができ、ＡＬＫ２の切断活性を有する、ＡＤＡＭ１９又はその断片をコードするポリヌクレオチドを利用して遺伝子工学的な手法で製造することもできる。また、例えば、公知のＡＤＡＭ１９のアミノ酸配列の情報に基づいて、一般的なタンパク質の化学合成法（例えば、液相法及び固相法）を用いて製造することも可能である。商業的に入手可能なものとしては、例えばＡＤＡＭ１９ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ：：Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １９ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ（＃ＭＢＳ１４３７３２６、＃ＭＢＳ７０４２０８４、Ｍｙ Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ社製）、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｍｏｕｓｅ ＡＤＡＭ１９ Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｃｒｅａｔｉｖｅ ＢｉｏＭａｒｔ社製）などが挙げられる。
本開示の医薬組成物は、上述の成分の他に、医薬組成物に含有させることができる公知の成分を含んでいてもよい。当該他の成分としては、薬学的に許容される基剤、担体、及び／又は添加剤（例えば溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、抗酸化剤、保存剤、コーティング剤、着色料、胃粘膜保護剤などのその他の薬剤等）等が例示できる。なお、このような公知の成分は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
本開示の医薬組成物の形態としては、特に限定されず、錠剤、丸剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、チュアブル剤、ペレット剤、トローチ剤、ゼリー剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、吸入剤、注射剤、坐剤、保持型浣腸剤、点鼻剤、口腔洗浄剤、並びに軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、ローション、ゲル剤、制御放出パッチ剤、貼付剤などの皮膚外用剤などが挙げられる。中でも、注射剤であることが好ましい。
本開示の組成物は、ＡＬＫ２の切断活性を有するため、ＡＬＫ２の機能を抑制することができる。このため、本開示の組成物は、ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用として、好適に用いることができる。また、本開示の組成物は、ＡＬＫ２の恒常活性型変異を有する疾患の治療または予防用として、より好適に用いることができる。ＡＬＫ２の変異を有する疾患としては、例えば、進行性骨化性線維異形成症、またはびまん性橋膠腫（橋グリオーマとも称される）などが挙げられる。また、本開示の組成物は、ＡＬＫ２の切断活性を有するため、ＡＬＫ２の機能を抑制することによって、ＡＬＫ２を介したＢＭＰシグナルを減少させることができる。このため、本開示の組成物は、進行性骨化性線維異形成症、またはびまん性橋膠腫の治療または予防用として、好適に用いることができる。
医薬組成物を投与される対象は、哺乳動物が好ましい。ヒトのみならず、非ヒト哺乳動物であってもよい。医薬組成物を投与されるヒトとしては、例えば、ＡＬＫ２の変異を有する疾患を有する、又は当該疾患を有すると疑われる人；ＡＬＫ２の恒常活性型変異を有する疾患を有する、又は当該疾患を有すると疑われる人；進行性骨化性線維異形成症、びまん性橋膠腫、橋グリオーマを有する、又はこれらの疾患を有すると疑われる人などが挙げられる。また、非ヒト哺乳動物としては、例えばペット、家畜、実験動物等として飼育される哺乳動物などが例示される。このような非ヒト哺乳動物としては、例えば、イヌ、ネコ、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、マウス、ラット、ラクダ、リャマ等が挙げられる。
投与方法としては、例えば、経口投与、及び非経口（例えば静脈、動脈、筋肉、皮下、腹腔、直腸、経皮、局所など）投与により、投与することができる。
本開示の組成物の投与（摂取）量は、特に限定されず、摂取する対象の年齢、性別、症状の程度、摂取方法等により決定される。
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。また、本開示は、本明細書に説明した構成要件を任意の組み合わせを全て包含する。
また、上述した本開示の各実施形態について説明した各種特性（性質、構造、機能等）は、本開示に包含される主題を特定するにあたり、どのように組み合わせられてもよい。すなわち、本開示には、本明細書に記載される組み合わせ可能な各特性のあらゆる組み合わせからなる主題が全て包含される。
本開示の内容を以下の試験例等を用いて具体的に説明する。しかし、本開示はこれらに何ら限定されるものではない。下記において、特に言及する場合を除いて、実験は大気圧及び常温条件下で行っている。また特に言及する場合を除いて、「％」は「質量％」を意味する。
１．ＢＭＰレセプター発現細胞の作製
以下の方法により、ＢＭＰレセプターとして、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ｍＡＬＫ２、又はｈＡＬＫ２を発現する細胞を作製した。
Ｃ末端にＭｙｃ ｔａｇが付加された、マウスＢＭＰレセプター発現プラスミド（ＢＭＰＲ１Ａ：＃ＭＧ５００７８−ＣＭ、ＢＭＰＲ１Ｂ：＃ＭＧ５０００４−ＣＭ、ｍＡＬＫ２：＃ＭＧ５０２９７−ＣＭ）、およびヒトＡＬＫ２プラスミド（ｈＡＬＫ２：＃ＨＧ１４８７５−ＣＭ）をＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．から購入した。また、Ｍｏｕｓｅ Ｂｍｐｒ２ ｃＤＮＡに関してはマウス心臓発現ＲＮＡから逆転写により合成し、ｐＣＭＶ３−Ｃ−Ｍｙｃ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ；＃ＣＶ０１４）へサブクローニングし獲得した。いくつかの実験においてはＨＡ ｔａｇまたは３ｘＦＬＡＧ ｔａｇをＢＭＰレセプターのシグナル配列直後にＰＣＲにより挿入した。これらのベクターをＬｉｐｏｆｅｃｔＡｍｉｎｅ２０００またはＰＥＩＭＡＸによりＨＥＫ２９３Ｔ細胞へトランスフェクション後ＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ処理による薬剤セレクションを行った。薬剤セレクション後の細胞をａｎｔｉ−ＨＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｈ３６６３；１：４００）、ａｎｔｉ−ＡＬＫ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＡＢ６３７；１：２００）、ａｎｔｉ−ＦＬＡＧ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｆ１８０４；１：４００）のいずれかの抗体を用いてセルソーティングにより、細胞表面にＢＭＰレセプター（ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ｍＡＬＫ２、又はｈＡＬＫ２）を高発現している細胞集団を回収し、これらの細胞をライン化した。
以下の方法により、ＢＭＰレセプターとして、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ｍＡＬＫ２、又はｈＡＬＫ２を発現する細胞を作製した。
Ｃ末端にＭｙｃ ｔａｇが付加された、マウスＢＭＰレセプター発現プラスミド（ＢＭＰＲ１Ａ：＃ＭＧ５００７８−ＣＭ、ＢＭＰＲ１Ｂ：＃ＭＧ５０００４−ＣＭ、ｍＡＬＫ２：＃ＭＧ５０２９７−ＣＭ）、およびヒトＡＬＫ２プラスミド（ｈＡＬＫ２：＃ＨＧ１４８７５−ＣＭ）をＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．から購入した。また、Ｍｏｕｓｅ Ｂｍｐｒ２ ｃＤＮＡに関してはマウス心臓発現ＲＮＡから逆転写により合成し、ｐＣＭＶ３−Ｃ−Ｍｙｃ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ；＃ＣＶ０１４）へサブクローニングし獲得した。いくつかの実験においてはＨＡ ｔａｇまたは３ｘＦＬＡＧ ｔａｇをＢＭＰレセプターのシグナル配列直後にＰＣＲにより挿入した。これらのベクターをＬｉｐｏｆｅｃｔＡｍｉｎｅ２０００またはＰＥＩＭＡＸによりＨＥＫ２９３Ｔ細胞へトランスフェクション後ＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ処理による薬剤セレクションを行った。薬剤セレクション後の細胞をａｎｔｉ−ＨＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｈ３６６３；１：４００）、ａｎｔｉ−ＡＬＫ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＡＢ６３７；１：２００）、ａｎｔｉ−ＦＬＡＧ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｆ１８０４；１：４００）のいずれかの抗体を用いてセルソーティングにより、細胞表面にＢＭＰレセプター（ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ｍＡＬＫ２、又はｈＡＬＫ２）を高発現している細胞集団を回収し、これらの細胞をライン化した。
２．ＢＭＰレセプター及びＡＤＡＭ１９共発現細胞の作製
ヒトＡＤＡＭ１９（ｈＡＤＡＭ１９）、又はマウスＡＤＡＭ１９（ｍＡＤＡＭ１９）の発現ベクターはＴｈｅ Ｔｅｔ−ｏｎシステムをベースとしたＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ． ２０１６）（Ａｄｄｇｅｎｅ ｐｌａｓｍｉｄ ＃８０４７８；ＲＩＫＥＮ ＢＲＣ＃ＲＤＢ１３２４６）発現誘導ベクターにＧａｔｅｗａｙ ｓｙｓｔｅｍを使用し、組み込んだ。ｈＡｄａｍ１９ ｃＤＮＡ（＃ＨＧ１８７６０−Ｕ）はＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．より購入し、ｍＡｄａｍ１９ ｃＤＮＡはマウス心臓で発現するＲＮＡから逆転写反応により合成した。まずｈＡｄａｍ１９又はｍＡｄａｍ１９ ｃＤＮＡをｐＤＯＮＲ ｖｅｃｔｏｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に導入しそれぞれのエントリーベクターとした。また、プロテアーゼ活性失活変異体であるｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６ＡとｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａは上記のエントリーベクターを鋳型とし、ｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６Ａについては、配列番号９、及び１０に示すプライマーを、ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａについては配列番号１１、及び１２に示すプライマーを用いたＰＣＲにより獲得した。その後Ｇａｔｅｗａｙ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２ Ｔｅｔ−ｏｎ ｖｅｃｔｏｒへ組み込んだ。ＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２−ｈＡＤＡＭ１９、ＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２−ｍＡｄａｍ１９遺伝子およびそれぞれの変異体の遺伝子はｐＣＡＧ−Ｐｂａｓｅ（ｐｉｇｇｙＢａｃ ｔｒａｎｓｐｏｓａｓｅ）遺伝子と分子量比が７：１になるように、それぞれ、上述の１において作製したＢＭＰレセプター発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞へ遺伝子導入した。その後、ｐｕｒｏｍｙｃｉｎによる薬剤セレクションを行ない、Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ（Ｄｏｘ）添加によるＡＤＡＭ１９タンパク質の発現を行う細胞をＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２に組み込まれているｍｃｈｅｒｒｙの蛍光でセルソーティングにより、回収しその後解析を行う細胞株とした。
ヒトＡＤＡＭ１９（ｈＡＤＡＭ１９）、又はマウスＡＤＡＭ１９（ｍＡＤＡＭ１９）の発現ベクターはＴｈｅ Ｔｅｔ−ｏｎシステムをベースとしたＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ． ２０１６）（Ａｄｄｇｅｎｅ ｐｌａｓｍｉｄ ＃８０４７８；ＲＩＫＥＮ ＢＲＣ＃ＲＤＢ１３２４６）発現誘導ベクターにＧａｔｅｗａｙ ｓｙｓｔｅｍを使用し、組み込んだ。ｈＡｄａｍ１９ ｃＤＮＡ（＃ＨＧ１８７６０−Ｕ）はＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．より購入し、ｍＡｄａｍ１９ ｃＤＮＡはマウス心臓で発現するＲＮＡから逆転写反応により合成した。まずｈＡｄａｍ１９又はｍＡｄａｍ１９ ｃＤＮＡをｐＤＯＮＲ ｖｅｃｔｏｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に導入しそれぞれのエントリーベクターとした。また、プロテアーゼ活性失活変異体であるｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６ＡとｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａは上記のエントリーベクターを鋳型とし、ｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６Ａについては、配列番号９、及び１０に示すプライマーを、ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａについては配列番号１１、及び１２に示すプライマーを用いたＰＣＲにより獲得した。その後Ｇａｔｅｗａｙ ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２ Ｔｅｔ−ｏｎ ｖｅｃｔｏｒへ組み込んだ。ＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２−ｈＡＤＡＭ１９、ＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２−ｍＡｄａｍ１９遺伝子およびそれぞれの変異体の遺伝子はｐＣＡＧ−Ｐｂａｓｅ（ｐｉｇｇｙＢａｃ ｔｒａｎｓｐｏｓａｓｅ）遺伝子と分子量比が７：１になるように、それぞれ、上述の１において作製したＢＭＰレセプター発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞へ遺伝子導入した。その後、ｐｕｒｏｍｙｃｉｎによる薬剤セレクションを行ない、Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ（Ｄｏｘ）添加によるＡＤＡＭ１９タンパク質の発現を行う細胞をＰＢ−ＴＡＣ−ＥＲＰ２に組み込まれているｍｃｈｅｒｒｙの蛍光でセルソーティングにより、回収しその後解析を行う細胞株とした。
３．細胞培養
上述の２において作製した各ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株は１０％ＦＢＳ（Ｍｏｒｅｇａｔｅ）含有のＤＭＥＭ（Ｎａｃａｌａｉ）で３７℃、５％ＣＯ２の条件のもと、２４時間培養した。各ベクターの存在下に合わせて１００μｇ／ｍｌのｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ（Ｗａｋｏ）と１μｇ／ｍｌのｐｕｒｏｍｙｃｉｎ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。また、Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ（Ｄｏｘ）によりＡＤＡＭ１９の発現を誘導する場合には、２μｇ／ｍｌのｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ（ＬＫＴ Ｌａｂｓ）を添加し、培養した。
ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ活性を阻害する場合（試験例２、３）、Ｄｏｘの添加と同時に１５μＭのＢＢ９４（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ；ＭｅｄＣｈｅｍ Ｅｘｐｒｅｓｓ）を添加した。また、切断されたＢＭＰレセプターのプロテアソーム分解を抑制するために１０μＭのｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ（ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を、培養終了６時間前に添加した。
ＢＭＰ６の反応応答性実験（試験例４）においては、細胞を３６時間２μｇ／ｍｌのｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ存在下または非存在下で培養した。培養終了１２時間前に１０μＭのｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂを添加し、培養終了３時間前に、終濃度１００ｎｇ／ｍｌとなるようにｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ＢＭＰ−６（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を添加した。
上述の２において作製した各ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株は１０％ＦＢＳ（Ｍｏｒｅｇａｔｅ）含有のＤＭＥＭ（Ｎａｃａｌａｉ）で３７℃、５％ＣＯ２の条件のもと、２４時間培養した。各ベクターの存在下に合わせて１００μｇ／ｍｌのｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ（Ｗａｋｏ）と１μｇ／ｍｌのｐｕｒｏｍｙｃｉｎ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。また、Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ（Ｄｏｘ）によりＡＤＡＭ１９の発現を誘導する場合には、２μｇ／ｍｌのｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ（ＬＫＴ Ｌａｂｓ）を添加し、培養した。
ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ活性を阻害する場合（試験例２、３）、Ｄｏｘの添加と同時に１５μＭのＢＢ９４（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ；ＭｅｄＣｈｅｍ Ｅｘｐｒｅｓｓ）を添加した。また、切断されたＢＭＰレセプターのプロテアソーム分解を抑制するために１０μＭのｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ（ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を、培養終了６時間前に添加した。
ＢＭＰ６の反応応答性実験（試験例４）においては、細胞を３６時間２μｇ／ｍｌのｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ存在下または非存在下で培養した。培養終了１２時間前に１０μＭのｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂを添加し、培養終了３時間前に、終濃度１００ｎｇ／ｍｌとなるようにｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ＢＭＰ−６（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を添加した。
４．ウェスタンブロットによるタンパク質の検出
上述の３において培養したＨＥＫ２９３Ｔ細胞は１％プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｎａｃａｌａｉ）含有のＲＩＰＡバッファー（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４，１５０ｍＭＮａＣｌ，１ｍＭＥＤＴＡ，０．１％ＳＤＳ，１％ＮＰ−４０，０．１％ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）に溶解し、マグネティックスターラーで４℃、１時間攪拌を行なった。その後１５０００ｒｐｍで１５分遠心し、上清をサンプルバッファーに回収し、９５℃、５分処理したものをサンプルとした。ＳＤＳ−ＰＡＧＥで泳動後ＰＶＤＦメンブレン（Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）にトランスファーを行い、適当な一次抗体で反応させた（ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ−Ｍｙｃ ｔａｇ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２２７６Ｓ，９Ｂ１１；１：２，０００）、ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ＡＤＡＭ１９（ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｅｈａｒａ ｌａｂ；１：２，０００）、ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ−β−ａｃｔｉｎ （Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ｓｃ−６９８７９，ｃｌｏｎｅ ＡＣ−１５；１：２，０００）、ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ−ＨＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｈ３６６３；１：２，０００）、ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｍａｄ１／５／９（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１３８２０；１：４００）、ａｎｔｉ−Ｓｍａｄ１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６９４４，Ｄ５９Ｄ７；１：２，０００））。一次抗体と反応させたメンブレンは０．１％Ｔｒｉｔｏｎ含有のＰＢＳで洗浄後ＨＲＰ−共役ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ抗体、又はａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；１：５，０００）で反応させ、その後ＥＣＬ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）による化学発光により、目的タンパク質の検出を行なった。各データはＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＬＡＳ ４０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用し、獲得した。なお、各試験において用いた一次抗体は、各図中の四角枠で囲んだＷＢ：以降に記載の抗体を用いた。各図中、ｐｒｏはプロペプチドドメインを含有するタンパク質であることを、ｍａｔｕｒｅはプロペプチドドメインを含有しないタンパク質であることを意味する。また、各図中、ＦＬは全長（Ｆｕｌｌ Ｌｅｎｇｔｈ）を、ＣＴＦはＣ末端フラグメント（Ｃ Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｆｒａｇｍｅｎｔ）を意味する。
上述の３において培養したＨＥＫ２９３Ｔ細胞は１％プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｎａｃａｌａｉ）含有のＲＩＰＡバッファー（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４，１５０ｍＭＮａＣｌ，１ｍＭＥＤＴＡ，０．１％ＳＤＳ，１％ＮＰ−４０，０．１％ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）に溶解し、マグネティックスターラーで４℃、１時間攪拌を行なった。その後１５０００ｒｐｍで１５分遠心し、上清をサンプルバッファーに回収し、９５℃、５分処理したものをサンプルとした。ＳＤＳ−ＰＡＧＥで泳動後ＰＶＤＦメンブレン（Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）にトランスファーを行い、適当な一次抗体で反応させた（ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ−Ｍｙｃ ｔａｇ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２２７６Ｓ，９Ｂ１１；１：２，０００）、ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ＡＤＡＭ１９（ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｅｈａｒａ ｌａｂ；１：２，０００）、ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ−β−ａｃｔｉｎ （Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ｓｃ−６９８７９，ｃｌｏｎｅ ＡＣ−１５；１：２，０００）、ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ−ＨＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｈ３６６３；１：２，０００）、ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｍａｄ１／５／９（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１３８２０；１：４００）、ａｎｔｉ−Ｓｍａｄ１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６９４４，Ｄ５９Ｄ７；１：２，０００））。一次抗体と反応させたメンブレンは０．１％Ｔｒｉｔｏｎ含有のＰＢＳで洗浄後ＨＲＰ−共役ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ抗体、又はａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；１：５，０００）で反応させ、その後ＥＣＬ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）による化学発光により、目的タンパク質の検出を行なった。各データはＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＬＡＳ ４０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用し、獲得した。なお、各試験において用いた一次抗体は、各図中の四角枠で囲んだＷＢ：以降に記載の抗体を用いた。各図中、ｐｒｏはプロペプチドドメインを含有するタンパク質であることを、ｍａｔｕｒｅはプロペプチドドメインを含有しないタンパク質であることを意味する。また、各図中、ＦＬは全長（Ｆｕｌｌ Ｌｅｎｇｔｈ）を、ＣＴＦはＣ末端フラグメント（Ｃ Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｆｒａｇｍｅｎｔ）を意味する。
試験例１．ＡＤＡＭ１９による各種ＢＭＰレセプターの切断活性
以下に示す細胞を用いたウェスタンブロットの結果を図１に示す。
・ＨＡ−ＢＭＰＲ１Ａ−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９（Ｌａｎｅ１）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ１Ａ−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ（Ｌａｎｅ２）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ１Ｂ−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９（Ｌａｎｅ３）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ１Ｂ−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ（Ｌａｎｅ４）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９（Ｌａｎｅ５）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ（Ｌａｎｅ６）
・ＨＡ−ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９（Ｌａｎｅ７）
・ＨＡ−ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ（Ｌａｎｅ８）
以下に示す細胞を用いたウェスタンブロットの結果を図１に示す。
・ＨＡ−ＢＭＰＲ１Ａ−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９（Ｌａｎｅ１）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ１Ａ−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ（Ｌａｎｅ２）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ１Ｂ−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９（Ｌａｎｅ３）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ１Ｂ−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ（Ｌａｎｅ４）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９（Ｌａｎｅ５）
・ＨＡ−ＢＭＰＲ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ（Ｌａｎｅ６）
・ＨＡ−ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９（Ｌａｎｅ７）
・ＨＡ−ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ（Ｌａｎｅ８）
図１に示す通り、ｍＡＬＫ２とｍＡＤＡＭ１９とを共発現する細胞において、ＡＬＫ２の切断断片が確認された（Ｌａｎｅ７）。これに対して、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、又はＢＭＰＲ２とｍＡＤＡＭ１９とを共発現する細胞においては、各ＢＭＰレセプターの切断断片は確認されなかった（Ｌａｎｅ１、３、５）。なお、プロテアーゼ活性失活変異体であるｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａと各ＢＭＰレセプターとを共発現する細胞においては、いずれもＢＭＰレセプターの切断断片は確認されなかった（Ｌａｎｅ２、４、６、８）。この結果から、ＡＤＡＭ１９は、ＢＭＰレセプターの中でもＡＬＫ２を特異的に切断することが分かった。
試験例２．ＡＤＡＭ１９によるＡＬＫ２の切断活性に対するプロテアーゼインヒビター添加の影響
以下に示す細胞を用いたウェスタンブロットの結果を図２に示す。
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加なし（Ｌａｎｅ１）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加なし（Ｌａｎｅ２）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ添加あり（Ｌａｎｅ３）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、Ｄｏｘ添加あり（Ｌａｎｅ４）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加あり（Ｌａｎｅ５）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加あり（Ｌａｎｅ６）
以下に示す細胞を用いたウェスタンブロットの結果を図２に示す。
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加なし（Ｌａｎｅ１）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加なし（Ｌａｎｅ２）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ添加あり（Ｌａｎｅ３）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、Ｄｏｘ添加あり（Ｌａｎｅ４）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加あり（Ｌａｎｅ５）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加あり（Ｌａｎｅ６）
図２に示す通り、Ｄｏｘを添加するとＡＤＡＭ１９が発現し、ＡＬＫ２の切断断片としてＡＬＫ２のＣ末端フラグメントが検出された（Ｌａｎｅ３）。これに対して、メタロプロテアーゼインヒビターであるＢＢ９４を添加すると、ＡＤＡＭ１９の発現は確認されたものの、ＡＬＫ２の切断断片は確認されなかった（Ｌａｎｅ５）。この結果から、ＡＤＡＭ１９によるＡＬＫ２の切断は、ＡＤＡＭ１９の活性に依存していることが分かった。
試験例３．ヒトＡＤＡＭ１９によるヒトＡＬＫ２の切断活性
以下に示す細胞を用いたウェスタンブロットの結果を図３に示す。
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９−ＨＡ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加なし（Ｌａｎｅ１）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６Ａ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加なし（Ｌａｎｅ２）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９−ＨＡ、Ｄｏｘ添加あり（Ｌａｎｅ３）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６Ａ、Ｄｏｘ添加あり（Ｌａｎｅ４）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９−ＨＡ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加あり（Ｌａｎｅ５）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６Ａ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加あり（Ｌａｎｅ６）
以下に示す細胞を用いたウェスタンブロットの結果を図３に示す。
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９−ＨＡ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加なし（Ｌａｎｅ１）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６Ａ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加なし（Ｌａｎｅ２）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９−ＨＡ、Ｄｏｘ添加あり（Ｌａｎｅ３）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６Ａ、Ｄｏｘ添加あり（Ｌａｎｅ４）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９−ＨＡ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加あり（Ｌａｎｅ５）
・３ｘＦＬＡＧ−ｈＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６Ａ、Ｄｏｘ及びＢＢ９４添加あり（Ｌａｎｅ６）
図３に示す通り、ヒトＡＤＡＭ１９もＡＬＫ２の切断活性を有していることが分かった（Ｌａｎｅ３）。また、マウスを用いた試験結果と同様、プロテアーゼ活性失活変異体であるｈＡＤＡＭ１９ Ｅ３４６ＡはＡＬＫ２の切断活性を有していないこと（Ｌａｎｅ４）、ＢＢ９４を添加すると、ＡＤＡＭ１９によるＡＬＫ２の切断活性が消失すること（Ｌａｎｅ５）が確認された。
試験例４．ＡＤＡＭ１９によるＡＬＫ２の切断活性が及ぼすＢＭＰシグナルへの影響
以下に示す細胞を用いたウェスタンブロットの結果を図４に示す。
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ及びＢＭＰ６添加なし（Ｌａｎｅ１、２）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、ＢＭＰ６添加あり（Ｌａｎｅ３、４）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ及びＢＭＰ６添加あり（Ｌａｎｅ５、６）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、ＢＭＰ６添加あり（Ｌａｎｅ７）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、Ｄｏｘ及びＢＭＰ６添加あり（Ｌａｎｅ８）
以下に示す細胞を用いたウェスタンブロットの結果を図４に示す。
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ及びＢＭＰ６添加なし（Ｌａｎｅ１、２）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、ＢＭＰ６添加あり（Ｌａｎｅ３、４）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９、Ｄｏｘ及びＢＭＰ６添加あり（Ｌａｎｅ５、６）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、ＢＭＰ６添加あり（Ｌａｎｅ７）
・ｍＡＬＫ２−Ｍｙｃ ｔａｇ Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａ、Ｄｏｘ及びＢＭＰ６添加あり（Ｌａｎｅ８）
図４に示す通り、Ｄｏｘを添加しない、つまりＡＤＡＭ１９の発現を誘導しない場合において、ＡＬＫ２のリガンドであり骨形成を誘導するＢＭＰ６を添加すると（Ｌａｎｅ３、４）、ＢＭＰ６非添加の場合（Ｌａｎｅ１、２）と比較して、リン酸化されたＳＭＡＤ１／５／９が増加したことが確認され、ＢＭＰシグナルの伝達が亢進したこと分かった。これに対して、Ｄｏｘを添加してＡＤＡＭ１９の発現を誘導した場合には、リン酸化されたＳＭＡＤ１／５／９が減少したことが確認された（Ｌａｎｅ５、６）。このとき、ＡＬＫ２の切断断片が確認されたことも踏まえると、ＡＤＡＭ１９がＡＬＫ２を切断することによって、ＢＭＰ６によるＳＭＡＤを介したＢＭＰシグナルの伝達が抑制されたことが分かった。なお、ｍＡＤＡＭ１９に代えて、プロテアーゼ活性失活変異体であるｍＡＤＡＭ１９ Ｅ３４７Ａを用いた場合には、ＡＬＫ２の切断断片が確認されず、リン酸化されたＳＭＡＤ１／５／９の減少も確認されなかった（Ｌａｎｅ８）。
これらの結果から、ＡＤＡＭ１９は、ＡＬＫ２を切断することができるため、ＡＬＫ２の機能が抑制され、ＡＬＫ２の変異を有する疾患を治療または予防することができることが推察された。
Claims (10)
- ＡＬＫ２の切断活性を有するＡＤＡＭ１９又はその断片を含有する、ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物。
- 下記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる群より選択される少なくとも１種：
（ａ）
（ａ−１）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−２）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−３）配列番号３に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−４）配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ａ−５）配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ａ−６）配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｄ）前記（ａ）〜（ｃ）に記載のいずれかのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込んだ発現ベクター；
を含有する、
ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物。 - （ｂ）のポリペプチドが、
（ｂ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ｂ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
である、請求項２に記載の医薬組成物。 - （ｃ）のポリペプチドが、
（ｃ−１）（ａ−１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−２）（ａ−２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−３）（ａ−３）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−４）（ａ−４）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−５）（ａ−５）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ｃ−６）（ａ−６）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
である、請求項２に記載の医薬組成物。 - 下記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる群より選択される少なくとも１種：
（ａ）
（ａ−７）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−８）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−９）配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１０）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ａ−１１）配列番号５に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は
（ａ−１２）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｂ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ）（ａ）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｄ）前記（ａ）〜（ｃ）に記載のいずれかのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込んだ発現ベクター；
を含有する、
ＡＬＫ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物。 - （ｂ）のポリペプチドが、
（ｂ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号１に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号２に示されるアミノ酸配列において、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号３に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号４に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｂ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号５に示されるアミノ酸配列において、第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ｂ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有し、且つ配列番号６に示されるアミノ酸配列において、第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
である、請求項５に記載の医薬組成物。 - （ｃ）のポリペプチドが、
（ｃ−７）（ａ−７）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−８）（ａ−８）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号２に示されるアミノ酸配列の第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−９）（ａ−９）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号３に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−１０）（ａ−１０）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号４に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
（ｃ−１１）（ａ−１１）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号５に示されるアミノ酸配列の第２０４番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、又は
（ｃ−１２）（ａ−１２）のポリペプチドのアミノ酸配列において、１個若しくは２個以上のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されており、且つ、配列番号６に示されるアミノ酸配列の第２０５番目のアミノ酸残基から数えて、第１４２番目、第１４３番目、第１４５番目〜第１５０番目、第１５２番目、及び第１５３番目のアミノ酸残基からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が保存されており、ＡＬＫ２の切断活性を有するポリペプチド、
である、請求項５に記載の医薬組成物。 - 前記（ａ）〜（ｃ）に記載のポリペプチドが、ＡＬＫ２特異的な切断活性を有するポリペプチドである、請求項２〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
- 前記ＡＬＫ２の変異を有する疾患が、進行性骨化性線維異形成症、またはびまん性橋膠腫である、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
- 注射剤である、請求項１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2019134122A JP2021017416A (ja) | 2019-07-19 | 2019-07-19 | Ａｌｋ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2021017416A true JP2021017416A (ja) | 2021-02-15 |
Family
ID=74193965
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019134122A Pending JP2021017416A (ja) | 2019-07-19 | 2019-07-19 | Ａｌｋ２の変異を有する疾患の治療または予防用医薬組成物 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2021017416A (ja) |
| WO (1) | WO2021015029A1 (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3252074A4 (en) * | 2015-01-30 | 2018-07-11 | Saitama Medical University | Anti-alk2 antibody |
-
2019
- 2019-07-19 JP JP2019134122A patent/JP2021017416A/ja active Pending
-
2020
- 2020-07-13 WO PCT/JP2020/027186 patent/WO2021015029A1/ja active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2021015029A1 (ja) | 2021-01-28 |
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