JP2020529221A5 - - Google Patents
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Claims (25)
- デノボ発現エンハンサータンパク質(DEEP)融合タグおよび標的タンパク質を含む、融合タンパク質であって、標的タンパク質は、異種タンパク質の発現または精製を促進するために使用されるペプチドタグまたはポリペプチドドメインではない、融合タンパク質。
- DEEP融合タグが、標的タンパク質に対してN末端にある、請求項１記載の融合タンパク質。
- DEEP融合タグが、複数の表面露出ヒスチジン残基を含む、請求項１または２記載の融合タンパク質。
- DEEP融合タグが、アミノ酸配列:
(配列番号：1)もしくは
(配列番号：10)、または
配列番号：1もしくは配列番号：10のアミノ酸配列に対して、少なくとも約70%の同一性を有するそのバリアント
を含む、請求項１、２または３記載の融合タンパク質。 - DEEP融合タグと標的タンパク質との間にリンカーアミノ酸配列をさらに含む、請求項１〜４いずれか記載の融合タンパク質。
- DEEP融合タグと標的タンパク質との間に切断部位をさらに含む、請求項１〜５いずれか記載の融合タンパク質。
- 該切断部位がプロテアーゼ切断部位である、請求項６記載の融合タンパク質。
- 該切断部位が化学的切断部位である、請求項６記載の融合タンパク質。
- 約4〜約10のpH範囲に対して安定である、請求項１〜８いずれか記載の融合タンパク質。
- 請求項１〜９いずれか記載の融合タンパク質をコードする、核酸分子。
- 請求項１０記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
- a. 請求項１〜９いずれか記載の融合タンパク質をコードするDNA構築物を、宿主細胞に導入する工程；
b. 該宿主細胞中で融合タンパク質を発現させる工程；
c. 融合タンパク質を単離する工程；ならびに
d. 標的タンパク質からDEEP融合タグを分離するために融合タンパク質を切断して、それにより標的タンパク質を得る工程
を含む、標的タンパク質を得る方法。 - 該融合タンパク質が、DEEP融合タグの親和性樹脂への結合により単離される、請求項１２記載の方法。
- DEEP融合タグをコードするヌクレオチド配列および標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列を導入するためのクローニング部位を含む、DNA構築物であって、標的タンパク質は、異種タンパク質の発現または精製を促進するために使用されるペプチドタグまたはポリペプチドドメインではない、DNA構築物。
- 標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１４記載のDNA構築物。
- DEEP融合タグが、アミノ酸配列:
(配列番号：1)もしくは
(配列番号：10)、または
配列番号：1もしくは配列番号：10のアミノ酸配列に対して、少なくとも約70%の同一性を有するそのバリアントを含む、請求項１４または１５記載のDNA構築物。 - DEEP融合タグ、インスリンA鎖ポリペプチドおよびインスリンB鎖ポリペプチドを含む、融合タンパク質。
- インスリンA鎖ポリペプチドが、DEEP融合タグに対してC末端にあり、インスリンB鎖ポリペプチドが、DEEP融合タグに対してN末端にある、請求項１７記載の融合タンパク質。
- DEEP融合タグとインスリンA鎖ポリペプチドとの間に第1のリンカーをさらに含み、DEEP融合タグとインスリンB鎖ポリペプチドとの間に第2のリンカーをさらに含む、請求項１７または１８記載の融合タンパク質。
- 第1のリンカーが第1の切断部位を含み、第2のリンカーが第2の切断部位を含む、請求項１９記載の融合タンパク質。
- 第1の切断部位および第2の切断部位が、同じ条件下で切断可能である、請求項２０記載の融合タンパク質。
- 第1の切断部位および第2の切断部位が、独立して切断可能である、請求項２０記載の融合タンパク質。
- DEEP融合タグが、アミノ酸配列:
(配列番号：1)もしくは
(配列番号：10)、または
配列番号：1もしくは配列番号：10のアミノ酸配列に対して、少なくとも約70%の同一性を有するそのバリアント
を含む、請求項１７〜２２いずれか記載の融合タンパク質。 - アミノ酸配列:
(配列番号：14)または
配列番号：14のアミノ酸配列に対して少なくとも約70%の同一性を有するそのバリアントを含む、請求項１７〜２３いずれか記載の融合タンパク質。 - タンパク質の発現、産生および/または精製を容易にするための融合タグとしての使用のためのデノボ発現エンハンサータンパク質(DEEP)。
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