JP2020519579A - Ｌｒｒｃ３３阻害剤およびその使用 - Google Patents

Ｌｒｒｃ３３阻害剤およびその使用 Download PDF

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Abstract

本明細書において、ＬＲＲＣ３３阻害剤およびその関連する方法および使用が開示される。より具体的には、ＬＲＲＣ３３効果をインビボで阻害する治療的薬剤が提供される。そのような薬剤は、細胞の表面上のＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体を発現している細胞が関与している様々な障害の治療に有用である。【選択図】 なし

Description

［関連出願］
本出願の要旨は、２０１７年５月９日に出願された米国仮出願番号６２／５０３，７８５、２０１７年９月１３日に出願された６２／５５８，０４８、２０１８年４月２６日に出願された６２／６６３，０３０、および、２０１８年５月３日に出願された６２／６６６，１８２に関し、それぞれの内容全体は参照により本明細書中に援用される。
［本発明の分野］
本発明は、概して、ＬＲＲＣ３３阻害剤およびその使用に関する。
本発明の背景
増殖因子の形質転換増殖因子−β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーは、制限されないが：免疫調節／抑制、細胞増殖の阻害、組織恒常性、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）再構築、内皮間葉転換（ＥＭＴ）、細胞遊走および侵襲、ならびに、間葉上皮転換を含む、様々な生物学的プロセスを調節する多くのシグナル伝達カスケードに関与する。
免疫系において、ＴＧＦβリガンドは、制御性Ｔ細胞の機能および免疫前駆細胞の増殖および恒常性の維持を調整する。正常な上皮細胞において、ＴＧＦβは、強力な増殖阻害因子および細胞分化プロモーターである。しかしながら、腫瘍が発生して進行するにつれて、それらは頻繁に、ＴＧＦβに対するそれらの陰性の増殖応答を失う。この状況において、ＴＧＦβは、血管新生を刺激、間質環境を変更、および、局所性および全身性の免疫抑制を誘導するその能力に起因して、腫瘍発達プロモーターとなり得る。ＥＣＭ再構築に関して、ＴＧＦβシグナル伝達は、線維芽細胞集団およびＥＣＭ沈着（例えば、コラーゲン）を増大させ得る。これらおよび他の理由で、ＴＧＦβは、多くの臨床的な徴候（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）のための治療的標的となっている。多くのグループによって現在までになされた多くの努力にもかかわらず、ＴＧＦβ治療の臨床開発はチャレンジングなものになっている。
前臨床試験からの観察は、ラットおよびイヌにおけるものを含み、インビボでＴＧＦβの阻害と関連する特定の毒性を明らかにしている。実際に、ＴＧＦβを標的化する臨床プログラムの大部分（例えば、小分子および生物学的阻害剤）は、有害な副作用の危険のため中止されている。
スーパーファミリー内のＴＧＦβファミリーは、ＴＧＦβの３つのアイソフォーム、すなわち、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３からなる。３つのアイソフォームは全て、同一の受容体を通してシグナル伝達して多彩な細胞効果をトリガーする。これらのアイソフォームの遺伝子ノックアウト試験は、いくつかの手掛かりを提供するが、制限された情報のみが、健康および疾患コンテクストにおけるこれらのアイソフォームのそれぞれの個別の生物学的意義に関して利用可能である。
ＴＧＦβ調節のさらなる局面が、いわゆる「提示分子」とのその相互作用を介して生じると考えられる。これらの分子は、組織特異的な様式で発現されて、細胞外（例えば、細胞表面または細胞外マトリックス）微小環境においてＴＧＦβの不活性型（例えば、潜在型）形態を隔離および「提示」すると考えられる。そこで、ＴＧＦβは特定の刺激に応答して活性化されて、作用部位において潜在型複合体から放出されて、その効果を与える。このようにして、ＴＧＦβは、コンテクスト特異的な様式で局所的なシグナル伝達を調節し得る。
様々なＴＧＦβ提示分子が文献において以前に説明されている。これらは、潜在型ＴＧＦ−β結合タンパク質１（「ＬＴＢＰ１」）、潜在型ＴＧＦ−β結合タンパク質３（「ＬＴＢＰ３」）、糖タンパク質Ａ反復優勢（または、ＬＲＲＣ３２としても知られる「ＧＡＲＰ」）およびロイシンリッチリピート含有３３（「ＬＲＲＣ３３」）を含む。ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３は、細胞外マトリックスの構成要素であり、一方でＧＡＲＰは、ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）上に発現される膜貫通タンパク質である。例えば：ＷＯ２０１４／１８２６７６；ＷＯ２０１７／１５６５００；および、ＷＯ２０１８／０８１２８７を参照。
本発明は、固形腫瘍および血液学的増殖性障害、例えば、血液癌および骨髄障害、ならびに、線維性障害（活性化されたマクロファージが役割を果たす）を含む、特定の増殖性障害のための新規の治療的標的としてのＬＲＲＣ３３の同定を包含する。
本開示は、ＬＲＲＣ３３が、驚くべき程度の選択性で細胞および組織のサブセットにおいて優先的に発現されるという知見に少なくとも一部基づく。より具体的には、ＬＲＲＣ３３発現は、主に、骨髄性およびリンパ系統（例えば、白血球）の細胞に制限される。特に、ＬＲＲＣ３３の過剰発現は、これらの系統の多くの腫瘍細胞型において観察されている。
本開示の発明者は、したがって、これらの細胞／組織におけるＬＲＲＣ３３の選択的標的化は、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している疾患関係の骨髄性細胞が関与する様々な障害を治療するための治療的機会を提供し得ると推論した。これらは、正常な組織恒常性に重要な、他の提示分子によって仲介される本質的なＴＧＦβ機能に広く影響を及ぼさずに、ＴＧＦβが免疫抑制の役割を果たす状態を含む。
マクロファージのような単球におけるＬＲＲＣ３３の発現が以前に報告された。しかしながら、極性化マクロファージにおけるその後の研究は、予期せずに、全てのいわゆる「線維症促進性」Ｍ２様マクロファージがＬＲＲＣ３３を発現するわけではないことを明らかにしている。むしろ、極性化Ｍ２マクロファージのうち、ＬＲＲＣ３３細胞表面の発現は、主に、サブタイプＭ２ｃおよびＴａｍ様（Ｍ２ｄ）（それぞれ、線維症促進性および癌微小環境と関連する表現型である）に限定されるようである。さらに、そのような発現は、特定の疾患由来因子（例えば、サイトカイン）に曝された際に著しく均一になるようである。このことは、単球および血小板のような正常な細胞に負の影響を及ぼさずに、線維症促進性および／または増殖性障害におけるＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３関連のＴＧＦβ活性を選択的に阻害する機会を提示する。一部の実施態様では、標的細胞は、そのようなサイトカインに関する受容体を発現する。一部の実施態様では、標的細胞は、ＣＣＬ２／ＭＣＰ−１に関する受容体であるＣＣＲ２／ＣＤ１９２を発現する。一部の実施態様では、標的細胞は、Ｍ−ＣＳＦに関する受容体であるＣＤ１１５を発現する。
この目的を達成するために、本発明は、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞の選択的標的化を達成するためのＬＲＲＣ３３阻害剤を提供する。
そのような阻害剤の１つのクラスは、ＬＲＲＣ３３によって提示されたｐｒｏＴＧＦβの活性化を選択的に阻害する。
そのような阻害剤の第２のクラスは、細胞上に発現されたＬＲＲＣ３３に選択的に結合して、細胞傷害性効果を誘導する。
そのような阻害剤の第３のクラスは、細胞表面ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体の内在化を、細胞表面からのその除去のために誘導する。１つのモードでは、そのような阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３への選択的な結合およびその後の複合体の内在化の際に、細胞の破壊を引き起こし（すなわち、細胞死）、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞の枯渇をもたらすように、細胞傷害剤を含む。別のモードでは、そのような阻害剤は、細胞を温存（ｓｐａｒｉｎｇ）しながら、細胞表面ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体が、例えば内在化を介して、細胞表面から除去されるようにするＬＲＲＣ３３結合剤である。
上記の任意のシナリオにおいて、本明細書に記載のＬＲＲＣ３３阻害剤は、ｉ）疾患環境（例えば、線維化組織、腫瘍微小環境など）におけるＴＧＦβまたはＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ複合体の利用率を減少させる；ｉｉ）免疫抑制を減少または反転させる；および／または、ｉｉｉ）宿主の免疫（例えば、抗腫瘍免疫）を促進またはブーストすることを目的とする。
したがって、一態様では、本開示は、ＬＲＲＣ３３と関連する（例えば提示される）が他の提示分子とは関連しないＴＧＦβ１の活性化を特異的に阻害する、抗体またはその抗原結合部分のクラスを提供する。一部の実施態様では、抗体またはそのフラグメントは、コンテクスト特異的な様式で、ＬＲＲＣ３３を含む不活性型（例えば、潜在型）ｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合して、それにより、潜在型複合体からのフリーの活性型ＴＧＦβ１の放出を阻害する。一部の実施態様では、抗体またはそのフラグメントは、２以上の異なる提示分子と関連する潜在型ｐｒｏＴＧＦβ１複合体由来のＴＧＦβ１に結合して活性化を阻害することができるという点で、コンテクスト寛容である。例えば、一部の実施態様では、抗体またはそのフラグメントは、ＬＲＲＣ３３、ＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３を含む潜在型複合体からのＴＧＦβ１の放出を阻害することができる。一部の実施態様では、抗体またはそのフラグメントは、ＬＲＲＣ３３またはＧＡＲＰのいずれかを含む潜在型複合体からのＴＧＦβ１の放出を阻害することができる。本発明を行なうために適切な、そのような抗体およびそのフラグメントの非限定的な例は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２１９７２に提供されて、その内容は、それら全体で参照により本明細書中に援用されて、本明細書に記載の効果を達成するために用いられてよい。
別の態様では、本発明は、エフェクター機能を通して、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を標的化および切除または根絶する細胞傷害性抗体またはそのフラグメントのクラスを提供する。一部の実施態様では、そのような抗体は、エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣ）および／または薬物動態を提供または調整するように改変される。一部の実施態様では、そのような抗体は、ＬＲＲＣ３３を発現している標的細胞への結合によってＡＤＣＣを誘導して、それにより細胞溶解を引き起こす。一部の実施態様では、そのような抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってよい。好ましくは、抗体は、完全なヒト抗体またはその変異体、またはヒト化抗体である。一部の実施態様では、抗体は、エフェクター機能を調整するように１つまたは複数の突然変異を含む。例えば、特定の突然変異は、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩａ、Ｃ１ｑ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂに対する、変更された結合を生じさせる。それに加えまたはそれに代替して、特定の突然変異は、インビボでの抗体の半減期を変更してよく；ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを変更してよく；マクロファージ貪食を変更してよく；および／または、Ｆａｂアーム交換を変更してよい。一部の実施態様では、そのような抗体またはフラグメントは、中性ｐＨでそれぞれの抗原に容易に結合して酸性ｐＨで解離するｐＨ感受性抗体である。これらは、いわゆる「スイーピング」抗体および「リサイクリング」抗体を含む。
本発明の抗体またはフラグメントの使用によって標的化される細胞（すなわち、標的細胞）は、細胞表面上にｐｒｏＴＧＦβを提示するＬＲＲＣ３３（「ＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ複合体」と呼ばれる）を発現する。一部の実施態様では、標的細胞は、細胞表面ＬＲＲＣ３３を含む。一部の実施態様では、標的細胞は、細胞表面ＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ１を含む。一部の実施態様では、標的細胞は、骨髄性系統である。一部の実施態様では、標的細胞は単球である。一部の実施態様では、標的細胞はマクロファージである。一部の実施態様では、標的細胞は樹状細胞である。一部の実施態様では、標的細胞は、血液学的癌細胞である。一部の実施態様では、標的細胞は、白血病細胞、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）細胞および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞である。一部の実施態様では、標的細胞は骨髄芽球である。一部の実施態様では、ＡＭＬ細胞は、骨髄芽球性（Ｍ０）細胞、成熟を伴わない骨髄芽球性（Ｍ１）細胞；成熟を伴う骨髄芽球性（Ｍ２）細胞；前骨髄球性（Ｍ３）細胞；骨髄単球性（Ｍ４）細胞；単球性（Ｍ５）細胞；赤白血病（Ｍ６）細胞；および／または巨核球（Ｍ７）細胞である。一部の実施態様では、標的細胞は、循環中および／または骨髄内である。一部の実施態様では、標的細胞は、活性化またはＭ２様マクロファージのようなマクロファージ、例えばＭ２ｃおよびＴａｍ様マクロファージである。一部の実施態様では、標的細胞は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）のような疾患／損傷の部位への動員の際に単球から分化される活性化マクロファージである。そのようなマクロファージは、局所ニッチ内に存在する様々な因子（例えば、増殖因子、サイトカイン、ケモカインおよびＥＣＭ再構築の構成要素など）に曝され得て、マクロファージの腫瘍関連の表現型をさらに促進し得る。腫瘍微小環境のような疾患環境内に存在してマクロファージ極性化／分化に影響を及ぼし得る因子／サイトカインは、限定されないが：インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、ＴＧＦβ１のようなＴＧＦβ、ＣＣＬ２／ＭＣＰ−１、ＳＤＦ−１／ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ４、ＶＥＧ、ＰＤＧＦ、ＣＯＸ−２、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、ＭＭＰ１３およびＭＭＰ９のようなメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、カリクレイン、ＩＬ−４、ｂＦＧＦ、ＴＮＦα、およびＭ−ＣＳＦ／ＣＳＦ−１を含む。したがって、一部の実施態様では、標的細胞は、上記に挙げた因子／サイトカインの１つまたは複数に関する細胞表面受容体（単数または複数）を発現する。一部の実施態様では、標的細胞は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）を発現する。一部の実施態様では、標的細胞は、好中球；特に、活性化された好中球である。一部の実施態様では、標的細胞は、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である。ＭＤＳＣは、癌および／または感染と関連し得る。例えば、ＭＤＳＣは、腫瘍微小環境内に存在し得る。
標的化される細胞（標的細胞）は、マクロファージの（全てではないが）サブセットである。一部の実施態様では、マクロファージのサブセットは、単球由来の集団である。
本発明の抗体またはフラグメントの使用によって標的化される細胞（標的細胞）は、Ｂ細胞を含む。一部の実施態様では、標的細胞は、制御性Ｂ細胞である。一部の実施態様では、標的細胞は、ＣＤ１９＋細胞である。一部の実施態様では、標的細胞は、ＩＬ−１０を発現しているＢ細胞である。一部の実施態様では、標的細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数を少なくすることのできる、ＩＬ−１０を産生する制御性Ｂ細胞である。データは、健康な個体から単離される正常なＢ細胞は、転写レベルでこれらの細胞において観察される相対的に高いｍＲＮＡレベルにもかかわらず、ＦＡＣＳによって測定されるように、細胞表面ＬＲＲＣ３３タンパク質の上昇を示さないことを示唆する。しかしながら、活性化または疾患関連Ｂ細胞（例えば、Ｂ細胞癌、例えば、Ｂ細胞リンパ腫およびＢ細胞白血病）は、ＬＲＲＣ３３発現を上方調節し得て、細胞表面ＬＲＲＣ３３レベルの増大をもたらし、これらの細胞を本明細書に記載のＬＲＲＣ３３阻害療法に対して応答性にさせる。本発明の抗体またはフラグメントの使用によって標的化される細胞は、細胞表面上にｐｒｏＴＧＦβを提示するＧＡＲＰ（「ＧＡＲＰ−ｐｒｏＴＧＦβ複合体」）を発現し得る。一部の実施態様では、標的細胞は、ＧＡＲＰ−ｐｒｏＴＧＦβ１複合体を発現する。一部の実施態様では、標的細胞はリンパ系統である。一部の実施態様では、標的細胞はリンパ球である。一部の実施態様では、標的細胞は、胸腺内で発達した天然ＴｒｅｇおよびナイーブＴ細胞由来ＴｒｅｇのようなＴｒｅｇである。一部の実施態様では、標的細胞は、ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋である。一部の実施態様では、標的細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋／Ｆｏｘｐ３＋である。一部の実施態様では、標的細胞は、腫瘍関連であり（すなわち、腫瘍内に浸潤または存在する）、または、末梢血内に蓄積する。一部の実施態様では、標的細胞は、ＩＤＯ感受性である。
本開示によれば、好ましい標的細胞は、非標的細胞である細胞よりも高いレベルで細胞表面上にＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ複合体を発現する。このように、本発明は、より低いレベルの細胞表面ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体を発現している細胞よりも、高レベルの細胞表面ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体（例えば、ＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ）を発現している細胞を、優先的に阻害することを目的とする。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３の細胞表面発現は、ＣＤ１３３、ＣＤ４４、ＣＤ３３、ＣＤ１３、および／またはＣＤ６４の細胞表面発現と少なくとも同一または同等および好ましくはそれよりも高い。重要なことに、ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体（例えば、ＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ）の細胞表面発現は、現在までに探求された治療的標的と比較して、例えば、疾患関連細胞にのみまたは主に疾患関連細胞に制限された特定の細胞亜集団に対して、より選択的である。細胞の定義された亜集団を標的化する能力は、改善された臨床利益を提供して、有効性および安全性（オフターゲット効果から生じる毒性の低減）の両方を達成する。
したがって、本明細書に記載のＬＲＲＣ３３阻害剤は、治療において用いられ得る。ＬＲＲＣ３阻害剤は、医薬組成物において製剤化されてよい。阻害剤は、血液癌および骨髄障害、固形腫瘍、および／または線維症のような、血液学的増殖性障害を含む、特定の増殖性障害の治療において用いられてよい。ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＬＲＲＣ３３を選択的に阻害し得る。ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を選択的に標的化し得る。標的化される細胞は、上述の標的細胞から選択されてよい。標的化される細胞は、一部の実施態様では、様々な癌細胞株（例えば、本明細書に記載）におけるＬＲＲＣ３３の平均発現レベルと比較して、ＬＲＲＣ３３の過剰発現（例えば、ｍＲＮＡ発現に基づく）を示すタイプの腫瘍細胞であってよい。過剰発現は、有意な（ｑ＜０．０５）過剰発現であってよい。過剰発現は、癌細胞株の範囲内の平均発現レベルに対して４〜１６倍、より高くてよい。癌細胞株は、図２において説明される試験されたものであってよい。本明細書に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＬＲＲＣ３３を発現している急性骨髄性白血病細胞、形質細胞骨髄腫細胞、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病細胞、転化期慢性骨髄性白血病細胞、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病細胞、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫細胞、Ｂ細胞リンパ腫細胞、バーキットリンパ腫細胞、マントル細胞リンパ腫細胞、急性リンパ芽球性白血病細胞の存在によって特徴付けられる、本明細書に記載の１つまたは複数の障害（例えば、血液学的増殖性障害）において、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を選択的に標的化し得る。治療されるべき障害を特徴付けるさらなる細胞は、未分化大細胞型リンパ腫細胞、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞およびホジキンリンパ腫細胞を含んでよい。本明細書に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＬＲＲＣ３３を発現している極性化マクロファージ（Ｍ２ｃおよびＴａｍ様細胞を含む）の存在によって特徴付けられる、本明細書に記載の１つまたは複数の障害（例えば、固形腫瘍のような増殖性障害）において、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を選択的に標的化し得る。マクロファージは、線維症促進性および腫瘍関連マクロファージ様の表現型をそれぞれ有してよい。本明細書において提供されるＬＲＲＣ３３阻害剤は、インビボで、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させ得る。ヒト単球および好中球は、ＣＤ３３と対照的に、エクスビボで直接的にＬＲＲＣ３３の表面発現をほとんどまたは全く示さない。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、単球および／または好中球を標的化しない。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、単球および／または好中球を枯渇させない（例えば、有意に枯渇させない）。極性化Ｍ２マクロファージのうち、ＬＲＲＣ３３細胞の表面発現は、主に、サブタイプＭ２ｃおよびＴａｍ様（Ｍ２ｄ）に限定されると考えられる。Ｍ２ａ、Ｍ２ｂ、Ｍ２ｃ（例えば、線維症促進性）およびＭ２ｄ（腫瘍促進性またはＴａｍ様）。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、Ｍ２ａまたはＭ２ｂ（またはＭ１）マクロファージを標的化しない。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、Ｍ２ａまたはＭ２ｂ（またはＭ１）マクロファージを枯渇させない（例えば、有意に枯渇させない）。
本開示において開示される抗体（またはフラグメント）の１つまたは複数によって製剤化される医薬組成物は、本発明によって包含される。一部の実施態様では、本発明の医薬組成物は、アジュバントを含んでよく、またはアジュバントとともに用いられてよい。特定のアジュバントは、例えば腫瘍抗原に対する対象の免疫応答をブーストして、Ｔエフェクター機能、単球からのＤＣ分化、高い抗原取り込み、および、ＡＰＣによる提示などを助長することができると考えられる。適切なアジュバントは、限定されないが、レチノイン酸に基づくアジュバントおよびその誘導体、水中油エマルションに基づくアジュバント、例えばＭＦ５９、および他のスクアレン含有アジュバント、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＲＬ）リガンド、α−トコフェロール（ビタミンＥ）およびそれらの誘導体を含む。
一部の実施態様では、本発明の医薬組成物は、賦形剤をさらに含んでよい。そのような医薬組成物を製造する方法ならびにそれを含むキットは、本発明に含まれる。
本発明によれば、腫瘍微小環境における宿主免疫抑制は、ＴＧＦβによって仲介され得る。より具体的には、ＴＧＦβ（特にＴＧＦβ１）は、以下のメカニズムの１つまたは複数を介して免疫抑制または免疫排除環境を作ることによって宿主免疫の回避に寄与し得る：ｉ）単球を動員して腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）表現型を誘導する（ＬＲＲＣ３３依存性ＴＧＦβシグナル伝達）；ｉｉ）Ｔエフェクター細胞を抑制する腫瘍浸潤Ｔｒｅｇを誘導する（ＧＡＲＰ依存性ＴＧＦβシグナル伝達）；および、ｉｉｉ）腫瘍増殖および／または侵襲に好適な細胞外再構築を促進する（マトリックス関連またはＬＴＢＰ１／３依存性ＴＧＦβシグナル伝達）。本開示に係るＬＲＲＣ３３阻害剤は、エフェクター細胞が疾患環境（例えば、ＴＭＥ）内の標的細胞に近づくのを可能にするように、免疫抑制を反転させて免疫寛容の環境を作るために用いられ得る。これは、疾患関連ＴＧＦβパスウェイを阻害することによって、および／または、細胞表面ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体を発現している細胞（例えば、活性化マクロファージ）を枯渇させることによって、達成され得る。
したがって、本発明は、ＬＲＲＣ３３の選択的阻害が、様々な増殖性障害の治療に有用であり得るという認識を含む。それに加えまたはそれに代替して、ＬＲＲＣ３３阻害は、直接的または間接的に、宿主における免疫抑制を減少または反転させるのを助け得る。したがって、本発明は、対象における血液学的増殖性障害のような増殖性障害を治療するための方法を提供する。一部の実施態様では、血液学的増殖性障害は、骨髄性またはリンパ系細胞と関連する。一部の実施態様では、血液学的障害は、全身性疾患または局所性障害である。一部の実施態様では、障害は固形腫瘍を含む。
したがって、本発明のさらなる態様は、ＴＧＦβ効果に介入することによって癌進行を阻害するための方法に関する。一部の実施態様では、ＴＧＦβ効果は、ＬＲＲＣ３３によって仲介される。一部の実施態様では、ＴＧＦβ効果は、ＧＡＲＰによって仲介される。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３およびＧＡＲＰの両方の相互作用は、プロセスに関与する。一部の実施態様では、本発明の治療は、対象における免疫抑制を克服または減少させるのに寄与する。したがって、本発明の方法は、体の免疫応答を高めて、またはブーストして、癌を治療する。
特定の血液学的癌細胞がＬＲＲＣ３３発現を選択的に上方調節するという予期しない知見に少なくとも基づき、そのようなＬＲＲＣ３３阻害剤の１つまたは複数を患者へ投与するための方法が提供されて、ここで患者は、ＬＲＲＣ３３の過剰発現と関連する疾患または状態を患っている。一部の実施態様では、疾患または障害の進行は、ＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１によって部分的に仲介される。
一部の実施態様では、血液学的障害は、血液癌および／または骨髄の癌である。一部の実施態様では、血液学的障害は、全身性障害、局所性障害（例えば固形腫瘍）または両方である。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３を発現している、および／または、ＧＡＲＰを発現している免疫細胞は、腫瘍の部位において富化されて、腫瘍関連の局所微小環境を作り出す。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１濃度は、ニッチにおいて上昇する。
本発明の態様は、概して、癌療法としてのＬＲＲＣ３３阻害剤に関する。したがって、一態様では、本発明は、固形腫瘍を含む癌の治療におけるＬＲＲＣ３３阻害剤の使用を提供する。そのようなＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面上のＬＲＲＣ３３に結合する抗体またはその抗原結合部分のような中和剤を含み、それにより、その生物学的機能を中和または干渉する。ＬＲＲＣ３３に対するそのような中和剤の結合は、インビボで、ＬＲＲＣ３３を発現している標的細胞を効果的に枯渇させ得る。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３中和剤（例えば、ＬＲＲＣ３３に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合部分）は、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させることによって対象における癌を治療するために用いられ得る。ＬＲＲＣ３３を発現している細胞は、限定されないが、活性化（極性化）マクロファージ、例えば、腫瘍関連マクロファージ（「ＴＡＭ」）、活性化好中球、例えば、腫瘍関連好中球（「ＴＡＮ」）、および／または癌関連線維芽細胞（「ＣＡＦ」）を含み、その表現型は、筋線維芽細胞様である。一部の実施態様では、ＣＡＦは、アルファ−１１（α１１）鎖を含むインテグリンを発現する。一部の実施態様では、ＣＡＦは、アルファ−１１（α１１）鎖を含むインテグリンに関する細胞表面受容体を発現する。一部の実施態様では、ＣＡＦは、ＩＬ−１１および／またはＩＬ−６を発現する。一部の実施態様では、ＣＡＦは、ＩＬ−１１受容体および／またはＩＬ−６受容体を発現する。そのようなＬＲＲＣ３３阻害剤（例えば、ＬＲＲＣ３３中和剤）は、腫瘍形成（例えば、腫瘍増殖）、転移、血管新生、血管分布、侵襲、および／または免疫抑制の減少のような、インビボでの抗癌効果を有し得ると考えられる。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３の阻害は、腫瘍の部位（例えば、腫瘍微小環境）への免疫細胞の動員を防止または減少させ得る。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３の阻害は、マクロファージの腫瘍浸潤を防止または減少させ得る。
一部の実施態様では、上述のもののようなＬＲＲＣ３３結合剤は、ＴＧＦβ活性に直接影響せずに、インビボで、ＬＲＲＣ３３に結合して生物学的機能を中和する。他の実施態様では、ＬＲＲＣ３３結合剤は、ＴＧＦβ（例えばＴＧＦβ１）の阻害剤として働く。これらは、ＴＧＦβの不活性型または潜在型プロ−タンパク質複合体に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合部分のような、ＴＧＦβ（例えばＴＧＦβ１）の活性化を阻害するＬＲＲＣ３３結合剤を含み、それにより、複合体からの成熟ＴＧＦβ増殖因子の放出を防止する。
一部の実施態様では、そのような疾患は、固形腫瘍を含む。一部の実施態様では、マクロファージのようなＬＲＲＣ３３を発現している免疫細胞は、腫瘍内で富化される。一部の実施態様では、マクロファージは、Ｍ２ｃおよび／またはＴａｍ様表現型である。一部の実施態様では、これらのマクロファージは、抑制Ｔリンパ球を腫瘍微小環境へ動員することが可能である。一部の実施態様では、抑制Ｔリンパ球は、ＧＡＲＰを発現しているＴｒｅｇである。
一部の実施態様では、血液学的障害は、骨髄内の低分化の血液細胞の異常な激増を含む。一部の実施態様では、障害は、骨髄増殖性障害である。一部の実施態様では、骨髄増殖性障害は、骨髄線維症である。
さらなる態様では、本発明は、本発明のＬＲＲＣ３３阻害剤を含む組成物および少なくとも追加の治療を含む併用療法を提供する。併用療法は、一部の実施態様では、単剤療法と比較して補充的な臨床利益を達成する。一部の実施態様では、併用療法は、相加または相乗効果を達成する。
本発明に係る医薬組成物が投与される適切な対象は、１つまたは複数の血液学的増殖性障害を患っている。一部の実施態様では、対象は、従来の治療に対して非応答性であり、または応答性が低い。従来の治療は、本明細書に記載のさらなる治療、例えばＰＤ−１拮抗薬（またはＰＤ−１シグナル伝達の拮抗薬）またはチロシンキナーゼ阻害剤（例えばＢｃｒ／Ａｂｌ阻害剤）を含んでよい。一部の実施態様では、対象は、障害の寛容後の再発を有する。
細胞上に発現されたヒトＬＲＲＣ３３に結合する抗体を含む医薬組成物もまた、本明細書において提供されて、抗体は任意選択でＦｃドメインを含んでよく、抗体はＧＡＲＰに結合しない。抗体は、本明細書において定義されるＬＲＲＣ３３阻害剤抗体であってよい。ＬＲＲＣ３３阻害剤抗体を含む医薬組成物は、本明細書に記載の治療的方法での使用のためのものであってよい。
一態様では、対象における、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させる方法での使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤が本明細書において開示されて、当該方法は、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞の数を減少させるのに効果的な量で、ＬＲＲＣ３３阻害剤を対象に投与するステップを含み、ここで対象は、ＬＲＲＣ３３過剰発現および／または異常なマクロファージ活性化と関連する疾患を患っている。
一実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、対象において、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞の数を減少させるために、ａ）任意選択で細胞傷害性効果を誘導することによって、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞を死滅化させて；および／または、ｂ）細胞表面ＬＲＲＣ３３の内在化を誘導する。
別の実施態様では、対象は、血液学的増殖性障害（例えば、白血病、骨髄線維症および多発性骨髄腫）、固形腫瘍、および／または線維症を有する。一実施態様では、血液学的増殖性障害は、白血病である。一実施態様では、白血病は、ＡＭＬ、ＡＬＬ、ＣＬＬまたはＣＭＬである。一実施態様では、固形腫瘍は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）によって富化される。一実施態様では、線維症は、単球由来マクロファージによって富化された線維化組織を含み、任意選択で線維症は、肺線維症、腎臓線維症、肝臓線維症、心臓の線維症、骨髄線維症および／または皮膚線維症である。
一実施態様では、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞は：ＴＡＭ、ＴＡＮ、ＣＡＦ、白血病細胞、造血幹細胞、骨髄性前駆細胞、リンパ球前駆細胞、巨核球赤血球前駆細胞、巨核球、単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、好酸球、好塩基球、および／またはマクロファージである。
一態様では、体の免疫をブーストする／助長する（ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ）／促進する（ｐｒｏｍｏｔｅ）ように、免疫抑制疾患環境を反転させるための方法での使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤が、本明細書において開示される。一実施態様では、疾患環境は、ＴＭＥまたは線維化組織である。
一実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＡＤＣＣを誘導する。一実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３の内在化を誘導する。
一実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞傷害剤をさらに含む。
別の態様では、対象における白血病を治療するための方法での使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤が本明細書において開示されて、効果的な投与量でのＬＲＲＣ３３阻害剤の投与は、ＣＤ３３治療と比較してより低い毒性を引き起こす。
別の態様では、対象における癌に対する宿主免疫をブーストするための方法での使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤が本明細書において開示されて、対象は、癌療法によって治療されて、任意選択で癌療法は、ＣＡＲ−Ｔ療法、チェックポイント阻害剤療法、化学療法、または放射線療法である。
一実施態様では、宿主免疫は、免疫抑制を減少させることによってブーストされる。
一実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤の使用は、癌療法に癌をより応答性にさせる。
一実施態様では、対象は、単剤療法と比較して減少した量の癌療法を受けて、同一または同等の治療的利益／有効性を達成する。
一実施態様では、細胞表面ＬＲＲＣ３３は、潜在型ＴＧＦβ複合体と関連して、任意選択で潜在型ＴＧＦβ複合体は、潜在型ＴＧＦβ１複合体である。
別の態様では、造血細胞上に発現されたＴＧＦβ１を選択的に阻害するための方法が本明細書において開示されて、当該方法は、ＴＧＦβ１を発現している造血細胞およびＴＧＦβ１を発現している非造血細胞を含む複数の細胞を、ＬＲＲＣ３３阻害剤と接触させるステップを含み、それにより、ＴＧＦβ１を発現している造血細胞内のＴＧＦβ１を阻害するがＴＧＦβ１を発現している非造血細胞内のＴＧＦβ１は阻害せず、ここでＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＬＲＲＣ３３と関連したＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体に結合する単離された抗体またはそのフラグメントであり、それにより、複合体からの活性型ＴＧＦβ１の放出を阻害して；単離された抗体またはそのフラグメントは、ＧＡＲＰまたはＬＴＢＰと関連したＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体には結合しない。
一実施態様では、造血細胞は、骨髄性および／またはリンパ系細胞である。一実施態様では、造血細胞は骨髄腫細胞である。一実施態様では、造血細胞はリンパ腫細胞である。
一実施態様では、抗体は、ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＲＲＣ３３、またはそれらの組み合わせに結合するが、結合フリーの成熟ＴＧＦβ１には結合しない。
一態様では、血液癌を治療するための方法が本明細書において開示されて、当該方法は、血液癌を患っている対象に、有効量のＬＲＲＣ３３阻害剤を投与して、対象における血液癌を阻害するステップを含む。
一実施態様では、血液癌は、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫からなる群より選択される。一実施態様では、白血病は：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）からなる群より選択される。
一実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＬＲＲＣ３３の阻害抗体である。
一実施態様では、阻害抗体は、ａ）ＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体に結合する単離された抗体またはそのフラグメント（それにより、複合体からの活性型ＴＧＦβ１の放出を阻害する）；またはｂ）細胞上に発現されたＬＲＲＣ３３に結合する単離された抗体（抗体は、細胞のＡＤＣＣを誘導するようにＦｃドメインを含む）である。
一実施態様では、阻害抗体は、完全なヒト抗体またはヒト化抗体である。一実施態様では、阻害抗体は、モノクローナル抗体または多量体抗体である。一実施態様では、多量体抗体は二重特異性抗体である。
一実施態様では、対象は、骨髄移植を受けたことがある。
一実施態様では、対象は、血液癌のためのさらなる治療によって治療される。一実施態様では、対象は、さらなる治療に対して非応答性であり、または、応答性が低い。一実施態様では、さらなる治療は、ＰＤ−１拮抗薬またはチロシンキナーゼ阻害剤である。一実施態様では、チロシンキナーゼ阻害剤は、Ｂｃｒ／Ａｂｌ阻害剤である。
一実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、併用療法として投与される。
本開示の全ての目的に関して、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０６８６１３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０３６９３３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５９４６８、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５２０１４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２１９７２の関連のある内容は、参照により本明細書中に援用される。
ＴＧＦβ提示分子の発現において統計的に有意な変化を有する代表的な細胞株をリスト化する情報科学分析の要約を提供する。 癌細胞株におけるＬＲＲＣ３３発現を示す棒グラフを提供する。 癌細胞株におけるＬＲＲＣ３３のｍＲＮＡ発現を提供する。 ＬＲＲＣ３３の上昇した発現およびＴＧＦβ１の同時的な発現を示す癌細胞の部分的リストを提供する。 極性化／活性化マクロファージにおけるＬＲＲＣ３３の相対的な細胞表面の発現を示すグラフを提供する。 極性化マクロファージのサブタイプおよび表現型（Ｏ’Ｎｅｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０１５出展）の概要を提供する。 Ｔエフェクター激増のＴｒｅｇ抑制および阻害抗体の効果を示す２つのパネルを提供する。 刺激の際にＴｒｅｇがＧＡＲＰ発現を上方調節することを示すデータを提供する。 ヒトＴｒｅｇにおける、活性化によって仲介される表現型変化を提供する。 ４Ｔ１転移モデルからのマウス肺における有意なレベルのＴｒｅｇおよびマクロファージの存在を示す。 図１１Ａ、図１１Ｂおよび図１１Ｃは、サイトカインのパネル（ａ ｐａｎｅｌ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）によって誘導されたマクロファージの極性化を示す：（図１１Ａ）マクロファージの４つのサブタイプにおけるＬＲＲＣ３３発現；（図１１Ｂ）ＦＡＣＳデータ；（図１１Ｃ）マクロファージの表面上のＬＲＲＣ３３の表面分子の数。 図１２Ａおよび図１２Ｂは、ＬＲＲＣ３３が、Ｍ−ＣＳＦによって活性化された「ＴＡＭ」マクロファージに関する特異的なマーカーであることを示すデータを提供し、免疫腫瘍学において治療的標的として現在用いられている広範な骨髄性マーカーと比較して、非常に選択的な標的を提供する。 図１３Ａおよび図１３Ｂは、ＣＤ３３のより広範な発現と比較して、ＬＲＲＣ３３の選択的な細胞表面の発現を示すデータを提供する。ヒト単球および好中球は、ＣＤ３３と対照的に、エクスビボで、直接的にＬＲＲＣ３３の表面発現をほとんどまたは全く示さない。 図１４Ａおよび図１４Ｂは、ＬＲＲＣ３３ ＲＮＡが、様々なＡＭＬ型にわたって高く均一に発現されて、より低いレベルで造血性前駆体集団にわたって発現されることを示す、Ｂｌｏｏｄｓｐｏｔ ＲＮＡデータを提供する。 ＬＲＲＣ３３抗体ＳＲＬ１を用いた内在化アッセイからのデータを提供する。それぞれの場合においてポジティブコントロールとして抗ＣＤ３３抗体を用いた。
本開示は、血液学的細胞／組織と関連する増殖性障害を治療するのに有用な治療を提供する。これらの障害は、限定されないが、血液細胞および血液形成組織（例えば骨髄）、ならびに、患者の抗腫瘍免疫を調節する免疫細胞の癌を含む。本発明はしたがって、関連する組成物、その使用、関連する製造方法、ならびに治療方法を含む。本明細書に開示される組成物は、有利に、腫瘍における免疫細胞活性を調整する能力を有し、それにより、一態様では、直接的または間接的に腫瘍の増殖に影響を及ぼす細胞集団に影響を与えることによって癌を治療する方法を提供する。
［定義］
本開示がより容易に理解され得るために、特定の用語が最初に定義される。これらの定義は本開示の残りの部分に照らして、当業者によって理解されるように読まれるべきである。別段の定義がない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的用語は、当業者によって一般に理解されるのと同一の意味を有する。さらなる定義は、詳細な説明を通して示される。
急性骨髄性白血病：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、骨髄において蓄積されて正常な血液細胞の生産を妨げる異常な白血球の迅速な増殖によって特徴付けられる、血液細胞の骨髄性株の癌である。ＡＭＬは、成人に影響を及ぼす最も一般的な急性白血病である。ＡＭＬのうち、多数のサブタイプならびにそれぞれのカテゴリーと関連する遺伝子突然変異体が同定されている。
抗体：本明細書において用いられる用語「抗体」は、免疫グロブリンまたはネイティブ抗体、それらのフラグメント、それらの変異体、ならびに、改変された抗原結合剤を包含する。したがって、そのような抗体は、任意のアイソタイプまたはキメラ構築物であってよい。本発明の抗体は、ヒト軽鎖、例えば、κおよびλ軽鎖を含んでよい。本発明の抗体は、重鎖、例えばμ、δ、γ、α、およびεを含んでよい（典型的にそれぞれ、抗体のアイソタイプを、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥと定義する）。抗体は、主としてエフェクター機能を担うＦｃ領域のようなエフェクター機能を果たすための領域を含んでよい。
抗体依存性細胞毒性：抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）（抗体依存性細胞媒介細胞傷害性とも呼ばれる）は、細胞が介在する免疫防御のメカニズムであり、それにより、免疫系のエフェクター細胞が、標的細胞を活性的に溶解させて、その膜表面抗原は、特異的抗体によって結合されている。ＡＤＣＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球および好酸球のようなエフェクター細胞を必要とする。ＡＤＣＣは、以前の抗体応答に対するその依存性に起因する適応性免疫応答の一部である。抗体による標的細胞のコーティングは、オプソニン作用と呼ばれることがある。
抗体薬物コンジュゲート：用語、抗体薬物コンジュゲート、すなわちＡＤＣは、１つまたは複数の細胞傷害性または細胞死滅剤に結合された抗体または機能的に同等の分子（例えば、結合剤）を指す。例は、正常（健康）細胞上の発現が制限された、または発現がない、腫瘍関連抗原に関するモノクローナル抗体を含み、抗体は、腫瘍細胞内に内在化されて放出された後に標的細胞の死滅を誘導することを目的とする強力な細胞傷害剤（一般に、高い全身性毒性を有する小分子薬物）とコンジュゲートされる。
抗体フラグメント：抗体フラグメントまたは抗原結合部分は、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、ＣＤＲグラフト抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体フラグメント、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、線形抗体；キレーティング組み換え抗体、トリボディまたはバイボディ、イントラボディ、ナノボディ、小モジュラー免疫医薬（ｓｍａｌｌ ｍｏｄｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（ＳＭＩＰ）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化抗体、ＶＨＨ含有抗体、または、それらの変異体または誘導体、および、抗体が所望の生物学的活性を保持する限り、１、２、３、４、５または６個のＣＤＲ配列のような、ポリペプチドに特異的な抗原結合を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含むポリペプチドを含む。
骨髄増殖性障害：本明細書において用いられる用語「骨髄増殖性障害」は、骨髄の細胞が異常な細胞分裂を受ける状態を含む。そのような増殖性障害は、骨髄の癌性（悪性）ならびに非癌性（良性）状態を含む。
癌関連線維芽細胞：癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）は、癌腫関連線維芽細胞とも呼ばれ、これらの用語は、本明細書において相互交換可能に用いられる。それらは、腫瘍微小環境内に存する異種細胞の亜集団を表わす。表現型的に、ＣＡＦは、筋線維芽細胞様であってよく、発癌に向け直されて、例えば、腫瘍増殖、血管新生、炎症、および／または転移を促すことによって形質転換プロセスを促進する。ＣＡＦは通常、周囲間質内の正常の線維芽細胞に由来するが、周皮細胞、平滑筋細胞、線維細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ、しばしば骨髄に由来する）から、または、上皮間葉転換（ＥＭＴ）または内皮間葉転換（ＥｎｄＭＴ）を介して生じてもよい。
細胞表面または細胞関連ＴＧＦβ：本明細書において用いられるプロ−タンパク質形態（したがって、潜在型）ＴＧＦβは、細胞表面上に局所化された提示分子、例えば、細胞膜関連の提示分子によって提示される場合、ＥＣＭまたはマトリックス関連とは逆に、細胞関連であると言われる。細胞表面ｐｒｏＴＧＦβの例は、ＧＡＲＰによって提示されたｐｒｏＴＧＦβおよびＬＲＲＣ３３によって提示されたｐｒｏＴＧＦβを含む。
臨床利益：本明細書において用いられる用語は、治療の有効性および安全性の両方を含むことが意図される。したがって、望ましい臨床利益を達成する治療的治療は、有効性および安全性の両方である（例えば、耐容または許容できる毒性または有害事象を有する）。
併用療法：本明細書において用いられる用語は、２以上の治療的薬剤を含む臨床的な徴候のための治療レジメンを指す。
補体依存性細胞毒性：用語、補体依存性細胞毒性、すなわちＣＤＣは、補体カスケードが活性化されるプロセス（１つまたは複数の膜侵襲複合体（ＭＡＣ）が標的（例えば、病原体）内に挿入されて、致死の膠質浸透性の膨張を引き起こす）を指す。
慢性骨髄性白血病：慢性骨髄性（または骨髄性または骨髄球性）白血病（ＣＭＬ）は、慢性顆粒球性白血病（ＣＧＬ）としても知られ、白血球の癌である。それは、骨髄内の主に骨髄性細胞の増大し無制御の増殖および血液中のこれらの細胞の蓄積によって特徴付けられる白血病の形態である。ＣＭＬは、クローン骨髄幹細胞障害であり、成熟した顆粒球（好中球、好酸球および好塩基球）およびそれらの前駆体の激増が見られる。それは、フィラデルフィア染色体と呼ばれる特徴的な染色体転座と関連する骨髄増殖性疾患の一種である。
枯渇：本開示の文脈における「細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞の枯渇」などは、ｉ）細胞表面ＬＲＲＣ３３またはそれを含む複合体を標的化することによって、そのような細胞を死滅または破壊すること；および／または、ｉｉ）例えば内在化を誘導することによって、そのような細胞から（すなわち、細胞表面から）細胞表面ＬＲＲＣ３３またはそれを含む複合体を除去することを指す。いずれかの作用のモードにおいて、共通する成果は、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現する細胞の数の減少であり、一方で、後者（ｌａｔｔｅｒ）は細胞自体を温存（ｓｐａｒｅ）し得る。
ＥＣＭ関連ＴＧＦβ：本明細書において用いられる、プロ−タンパク質形態（したがって、潜在型）ＴＧＦβは、細胞外に局所化される提示分子、例えば、ＥＣＭの構成要素によって提示される場合、細胞関連（または細胞表面に局所化）とは逆に、ＥＣＭ関連（または「マトリックス関連」）であると言われる。ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３によって提示されるｐｒｏＴＧＦβは、ＥＣＭ関連ＴＧＦβの例である。
有効量：有効量（または治療的有効量）は、患者集団において統計的に有意な臨床利益を達成する用量または投与レジメンである。したがって、有効量のＬＲＲＣ３３阻害剤は、対象または患者集団に投与された場合に耐容できる毒性で十分な有効性を達成する。
Ｆｃ領域：本開示によって包含される抗体またはフラグメントは、エフェクター機能を与える領域／ドメインを含んでよい。抗体のＦｃ領域は、その血清半減期およびエフェクター機能、例えば、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を仲介する。ＦｃまたはＦｃ様領域を含むように改変された治療的抗体（例えば、モノクローナル抗体およびＦｃ融合タンパク質）は、本発明によって包含される。
ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体：本明細書において用いられる用語「ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体」は、形質転換増殖因子β１（ＴＧＦβ１）タンパク質および糖タンパク質Ａ反復優勢タンパク質（ＧＡＲＰ）のプロ−タンパク質形態または潜在型形態を含むタンパク質複合体を指す。一部の実施態様では、ＴＧＦβ１タンパク質のプロ−タンパク質形態または潜在型形態は、「前駆体／潜在型ＴＧＦβ１タンパク質」と呼ばれ得る。一部の実施態様では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体は、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して前駆体／潜在型ＴＧＦβ１と共有結合されたＧＡＲＰを含む。他の実施態様では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体は、前駆体／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合したＧＡＲＰを含む。一部の実施態様では、ＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体は、細胞内のＧＡＲＰ−ＴＧＦβ１複合体のような天然起源複合体である。
血液学的癌：用語「血液学的癌」は、骨髄のような血液形成組織において、または免疫系の細胞において始まる癌を指す。血液学的癌の例は、白血病、リンパ腫、骨髄線維症、および多発性骨髄腫を含む。
血液学的増殖性障害：本明細書において用いられる用語「血液学的増殖性障害」は、血液細胞または血液形成組織内、例えば、骨髄内の細胞内の異常な細胞分裂（悪性または良性）によって特徴付けられる状態を指す。
白血病：白血病は、骨髄およびリンパ系を含む体の血液形成組織の癌であり、急性または慢性であってよい。白血病の一部の形態は、子どもにおいてより一般的であり、一方で、白血病の他の形態は、主に成人において生じる。白血病は通常、白血球（例えば、骨髄性細胞およびリンパ系細胞）が関与する。白血病の４つの主なタイプは：急性骨髄性（または骨髄性）白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性（または骨髄性）白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ球性（またはリンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）；および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。
局所化された腫瘍：本開示の文脈において、用語「局所化された」（「局所化された腫瘍」など）は、全身性疾患とは逆に、解剖上単離される、または単離可能な異常、例えば、固形悪性腫瘍を指す。特定の白血病は、例えば、疾患に対して、局所化された構成要素（例えば、骨髄）および全身性の構成要素（例えば、循環する血液細胞）の両方を有してよい。
ＬＲＲＣ３３阻害剤：本明細書において用いられる用語「ＬＲＲＣ３３阻害剤」は、ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体に結合して、それにより、その機能または利用率をかき乱し、または妨げる薬剤を指す。好ましくは、そのような薬剤は、細胞表面上に存在するＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体上のエピトープに特異的に結合する抗体またはそのフラグメントである。ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＴＧＦβ増殖因子の利用率または活性化を調整することによって、阻害効果を与えてよく、または、与えなくてよい。
ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体：本明細書において用いられる用語「ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体」は、形質転換増殖因子β１（ＴＧＦβ１）タンパク質のプロ−タンパク質形態または潜在型形態およびロイシンリッチリピート含有タンパク質３３（ＬＲＲＣ３３；活性酸素種のネガティブレギュレーター（Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｏｆ Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｏｘｙｇｅｎ Ｓｐｅｃｉｅｓ）またはＮＲＲＯＳとしても知られる）の間の複合体を指す。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して前駆体／潜在型ＴＧＦβ１と共有結合したＬＲＲＣ３３を含む。他の実施態様では、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、前駆体／潜在型ＴＧＦβ１と非共有結合したＬＲＲＣ３３を含む。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体は、細胞内のＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体のような天然起源複合体である。
マクロファージ：マクロファージは、免疫系の白血球の一種であり、異種の、細胞の表現型的に様々な亜集団を含む。一部のマクロファージは、骨髄由来の循環している単球から分化して、一方で、他のものは、特定の解剖学的または組織位置内に存在する組織特異的なマクロファージ（「常在性」マクロファージ）である。組織特異的なマクロファージは、限定されないが：脂肪組織マクロファージ；クッパー細胞（肝臓）；洞組織球（リンパ節）；肺胞マクロファージ（または塵埃細胞、肺の肺胞）；巨大細胞（結合組織）へ導く組織マクロファージ（組織球）；ランゲルハンス細胞（皮膚および粘膜）；ミクログリア（中枢神経系）；ホーフバウアー細胞（胎盤）；糸球体内メサンギウム細胞（腎臓）；破骨細胞（骨）；類上皮細胞（肉芽腫）；赤脾髄マクロファージ（または類洞内皮細胞、脾臓の赤脾髄）；腹膜マクロファージ（腹膜腔）；および、ＬｙｓｏＭａｃ（パイエル板）を含む。マクロファージ、例えば、骨髄由来単球は、特定の刺激（例えばサイトカイン）によって活性化され得て、極性化した表現型、例えば、Ｍ１およびＭ２をもたらす。Ｍ２に偏ったマクロファージは、いくつかの表現型的に別個のサブタイプ、例えばＭ２ａ、Ｍ２ｂ、Ｍ２ｃ（例えば、線維症促進性）およびＭ２ｄ（腫瘍促進性またはＴａｍ様）にさらに分類される。
微小環境：本明細書において用いられる用語「微小環境」は、「疾患微小環境」のように、目的の特定の特性（単数または複数）と関連する生体系内の局所ニッチ、例えば、特定の細胞／組織区画または疾患部位を指す。そのような疾患または疾患部位は、線維化組織（例えば、線維性臓器または骨髄）、腫瘍、筋障害（例えば、心筋症）などを含んでよい。したがって、「腫瘍微小環境」は、周囲血管、免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症性細胞、リンパ球、シグナル伝達分子および細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を含む、腫瘍が中に存在する細胞／組織環境を意味する。微小環境の腫瘍および周囲の構成要素は、密接に関連していて、常に相互作用している。腫瘍は、細胞外シグナルを放出して、腫瘍血管新生を促進して、末梢免疫耐性を誘導することによって、微小環境に影響を及ぼし得て、一方で、免疫細胞のような微小環境の構成要素は、癌性細胞の増殖および進化に影響を及ぼし得る。
多発性骨髄腫：多発性骨髄腫（ＭＭ）は、形質細胞骨髄腫としても知られ、形質細胞の癌であり、通常は抗体産生を担う白血球の一種である。はじめは、症候（ｓｙｍｐｔｏｍ）は気付かれないことがしばしばある。進行すると、骨の痛み、出血、頻繁な感染、および貧血が生じ得る。合併症はアミロイドーシスを含み得る。
骨髄線維症：骨髄線維症は、骨骨髄線維症としても知られ、相対的に珍しい骨髄増殖性障害であり、骨髄増殖性障害と呼ばれる疾患のグループに属する。骨髄線維症は、骨髄増殖性新生物のフィラデルフィア染色体ネガティブ（−）ブランチに分類される。骨髄線維症は、骨髄における造血幹細胞の異常なクローンの激増によって特徴付けられて、他の部位は、線維症、または瘢痕組織による髄質の置換をもたらす。用語、骨髄線維症は、別段の定めのない限り、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）を指す。これは、慢性特発性骨髄線維症（ｃＩＭＦ）とも呼ばれ得る（用語、特発性および原発性は、これらの場合において、疾患が未知または自然発生的起源であることを意味する）。これは、真性多血症または本質的な血小板血症に次いで発症する骨髄線維症とは対照的である。骨髄線維症は、骨髄性異形成の形態であり、骨髄の血液形成組織における細胞型の変化を指し、しばしば２つの用語は同義的に用いられる。用語、突発性骨髄性異形成および骨髄性異形成を有する骨髄線維症（ＭＭＭ）は、原発性骨髄線維症を指すためにも用いられる。
骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）：骨髄系由来サプレッサー細胞、すなわちＭＤＳＣは、骨髄性系統の免疫細胞の異種のグループである。ＭＤＳＣは、免疫抑制特性を有し、変更された造血の結果として慢性感染および癌のような病理学的状況において拡大すると報告されている。ＭＤＳＣは、免疫抑制特性を有する。臨床および実験的証拠は、ＭＤＳＣの浸潤が高い癌組織は、不十分な患者予後および治療耐性と関連することを示す。ＭＤＳＣは、多数のサブタイプを含む。例えば、ＭＤＳＣの１つのサブタイプは、単球に表現型的および形態学的に似ている未熟な単核細胞（例えば、「単球性」であり、したがってＭ−ＭＤＳＣ）の集団である。別のサブタイプは、好中球に表現型的および形態学的に似ている未熟な多核細胞の集団である。ＭＤＳＣ抑制機能は、Ｔ細胞の激増および活性化を阻害するそれらの能力を含む。健康な個体では、骨髄内に形成された未熟の骨髄性細胞は、樹状細胞、マクロファージおよび好中球に分化する。しかしながら、慢性の炎症状態（ウイルスおよび細菌感染）または癌の下では、骨髄性分化は、ＭＤＳＣの拡大に向けて歪められる。これらのＭＤＳＣは、炎症部位および腫瘍に浸潤し、そこで、例えばＴ細胞およびＮＫ細胞を阻害することによって免疫応答を止める。ＭＤＳＣはまた、サイトカインおよびＴＧＦβのような因子の発現を通して血管新生、腫瘍進行および転移の加速もする。
ＭＤＳＣ活性は、Ｔ細胞（特にＣＤ８＋Ｔ細胞応答）のサプレッサーとして元々説明された。ＭＤＳＣ活性の作用の範囲は、ＮＫ細胞、樹状細胞およびマクロファージも包含する。ＭＤＳＣの抑制活性は、リンパ球のエフェクター機能を阻害するそれらの能力によって決定される。阻害は、異なるメカニズムによって引き起こされ得る。それは主に、Ｌ−アルギニンの代謝の効果に起因する。ＭＤＳＣの活性に影響を及ぼす別の重要な因子は、圧制的なＲＯＳである。
制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）：Ｔｒｅｇは、バイオマーカーＣＤ４、ＦＯＸＰ３、およびＣＤ２５の発現によって特徴付けられる。Ｔｒｅｇは、サプレッサーＴ細胞と呼ばれることがあり、免疫系を調整して自己抗原に対する耐性を維持して自己免疫障害を防止するＴ細胞の亜集団を表わす。Ｔｒｅｇは免疫抑制であり、一般に、エフェクターＴ細胞の誘導および激増を抑制または下方調節する。Ｔｒｅｇは、胸腺において発生し得て（いわゆるＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋「ナチュラル」Ｔｒｅｇ）、または、例えば、ＴＧＦβまたはレチノイン酸に対する曝露後に、抹消においてナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞から分化する。
固形腫瘍：用語「固形腫瘍」（または「腫瘍」）は、嚢胞または液体領域を通常は含まない組織の異常な増殖または塊をもたらす増殖性障害を指す。固形腫瘍は、良性（非癌性）、または悪性（癌性）であってよい。固形腫瘍は、一次腫瘍（元からの増殖）または二次腫瘍（一次腫瘍の転移から生じる）を指してよい。固形腫瘍は、：癌性（悪性）細胞、活性化され線維芽細胞を含んでよい周囲間質（例えば、筋線維芽細胞様表現型）、浸潤された免疫細胞、例えばマクロファージおよび好中球、ならびに血管を含んでよい。
標的細胞：本明細書において用いられる標的細胞は、機能が薬理学的にかき乱される細胞を指す。本開示の文脈において、標的細胞は、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現する。本発明に係るＬＲＲＣ３３阻害剤は、標的細胞上に発現されたＬＲＲＣ３３を枯渇または拮抗することが可能である。標的細胞は、ＣＣＬ２／ＭＣＰ−１およびＭ−ＣＳＦのような疾患由来サイトカインに関する細胞表面受容体を発現し得る。
治療（Ｔｒｅａｔｉｎｇ）、治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）：用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」などは、例えば、体の免疫を高める、またはブーストすることによって；免疫抑制を減少または反転させることによって；体から有害な細胞（例えば、ＴＡＭ、ＴＡＮおよびＣＡＦのような腫瘍関連細胞）または物質を減少、除去（例えば枯渇）または根絶することによって；疾患負荷（例えば、腫瘍負荷）を減少させることによって；再発またはぶり返しを予防することによって；および／または、他の方法で生存を改善することによって、患者における治療的利益を生じさせることを、広く意味することが意図される。有害細胞の「枯渇」は、影響を受けた患者からのそのような細胞の物理的除去を必ずしも必要とせず；むしろ、枯渇は、そのような有害細胞と関連する特定の活性または生物学的機能の中和によって達成され得る。用語は、治療的治療、予防的治療、および、対象が障害を発症する危険または他の危険因子を減少させる適用を含む。治療は、障害の完全な治療を必要とせず、症候または根底にある危険因子を減少させる実施態様を包含する。
［ＴＧＦβ］
ＴＧＦβ増殖因子（ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３）は、増殖因子のＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーであり、全てではないとしても、ほとんどの細胞型および組織によって広く発現されている。ＴＧＦβ増殖因子は、細胞分化および激増を含む一連の生物学的プロセスを仲介する。
ヒトにおけるＴＧＦβパスウェイの生物学的重要性は、遺伝子疾患によって評価されている。カムラチ・エンゲルマン病は、ＴＧＦＢ１遺伝子内の常染色体優性の突然変異に起因して骨の形成異常をもたらし、ＴＧＦβ１シグナル伝達の構成的活性化を導く（Ｊａｎｓｓｅｎｓ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ，２００６．４３（１）：ｐ．１−１１）。ロイス・ディーツ症候群を有する患者は、ＴＧＦβシグナル伝達経路の構成要素内に常染色体優性の突然変異を保有し、大動脈動脈瘤、隔離症、および二分口蓋垂を生じさせる（Ｖａｎ Ｌａｅｒ，Ｌ．，Ｈ．Ｄｉｅｔｚ，ａｎｄ Ｂ．Ｌｏｅｙｓ，Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ，２０１４．８０２：ｐ．９５−１０５）。ＴＧＦβパスウェイ調節不全は、多数の疾患に関与しているので、ＴＧＦβパスウェイを標的化するいくつかの薬物が開発されて患者において試験されているが、成功は制限されている。
以前に説明されたように（例えば：ＷＯ２０１４／０７４５３２、ＷＯ２０１４／１８２６７６、およびＷＯ２０１７／１５６５００を参照し、それぞれ、その全体で参照により本明細書中に援用される）、ＴＧＦβ調節の１つの局面は、ＴＧＦβが局所ニッチまたは微小環境内でコンテクスト特異的な生物学的効果を与えることができる、組織特異的な提示分子との、その示差的関連性を含む。ＴＧＦβ複合体の不活性型の潜在型形態（例えば、ｐｒｏＴＧＦβ複合体）と相互作用する（したがって「提示する」）タンパク質は、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２としても知られる）およびＬＲＲＣ３３を含む。ＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３は、分泌タンパク質であり、細胞外マトリックスの構成要素である。それらは元々、形質転換増殖因子の潜在型形態とのそれらの関連性によって同定された。それらは、様々な細胞外マトリックスタンパク質と相互作用して、ＴＧＦβバイオアベイラビリティーの調節において役割を果たし得る。一方で、ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３は、細胞型の小さなサブセットの細胞表面上に発現されて、そこにＧＡＲＰ−ｐｒｏＴＧＦβまたはＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ複合体として潜在型ＴＧＦβを「提示」する。したがって、ＴＧＦβ（ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３、特にＴＧＦβ１）とのその関連性を通して、ＬＲＲＣ３３は、選択されたニッチまたは微小環境におけるＴＧＦβバイオアベイラビリティーおよびシグナル伝達に寄与し得る。
［ＬＲＲＣ３３］
ロイシンリッチリピート含有タンパク質３３（「ＬＲＲＣ３３」；「活性酸素種のネガティブレギュレーター（Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｏｘｙｇｅｎ Ｓｐｅｃｉｅｓ）」または「ＮＲＲＯＳ」とも呼ばれる）は、ＧＡＲＰと密接に関与する膜貫通タンパク質であり、ＴＧＦβ１に関する提示分子として機能することが最近になって確認されたのみである（Ｗａｎｇ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２０１２．２３（６）：１１２９−３９；および、Ｔ．Ａ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｉｎｔ．ＢＭＰ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１６；ＷＯ２０１８／０８１２８７）。ＬＲＲＣ３３タンパク質発現は、主として、単球系統の細胞（例えば、マクロファージおよびミクログリア）に制限されることが報告されている。ＬＲＲＣ３３−／−マウスにおいては、上昇する不全対麻痺が観察されて、その後、四肢麻痺および５月齢までに死亡が観察された（Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｉｎｔ．ＢＭＰ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１６）。ＬＲＲＣ３３−／−マウスにおいて観察された神経変性表現と一致して、Ｓｐｒｉｎｇｅｒグループは、ＬＲＲＣ３３がミクログリアにおいて高く発現されることを見いだした（軸索成長および脳内での誘導において極めて重要な役割を果たすことが知られている）。
本開示の発明者らによるその後の研究は、疾患コンテクストにおいて、様々な血液学的癌細胞が、高いレベルのＬＲＲＣ３３を発現することを明らかにしている。ＴＧＦβ提示分子の発現における有意な変化を有する代表的な細胞株は、限定されないが：急性骨髄性白血病細胞、形質細胞骨髄腫細胞、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病細胞、転化期慢性骨髄性白血病細胞、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病細胞、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫細胞、Ｂ細胞リンパ腫細胞、バーキットリンパ腫細胞、マントル細胞リンパ腫細胞、急性リンパ芽球性白血病細胞、未分化大細胞型リンパ腫細胞、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞およびホジキンリンパ腫細胞を含む。これらの細胞において観察されるＴＧＦβ１の同時的な過剰発現は、ＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１活性が病理学に寄与し得ることを示唆している。
さらに、選択的なＬＲＲＣ３３過剰発現が、極性化マクロファージ、すなわち、Ｍ２ｃおよびＴａｍ様細胞（それぞれ、線維症促進性および腫瘍関連マクロファージ様の表現型である）の全てではないがサブセットの細胞表面上に見られる。これらのＬＲＲＣ３３発現マクロファージ亜集団は、ＴＭＥおよび線維化組織のような疾患環境において、免疫抑制Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および筋線維芽細胞またはＣＡＦのような様々な細胞型の動員および／または分化と直接的に相互作用して影響を及ぼし得る。実際に、Ｔｒｅｇ（刺激の際に、ＧＡＲＰによって提示されるＴＧＦβ１を発現する）は、多数のタイプの固形腫瘍に浸潤することが知られていて、ＬＲＲＣ３３を発現しているマクロファージが、このプロセスをトリガーまたは助長するのに関与し得るという可能性を高める。さらに、Ｍ−ＣＳＦ／ＣＳＦ−１のような特定の疾患関連サイトカインに曝されたマクロファージは、細胞表面ＬＲＲＣ３３のレベルの強い増大を示し、インビボでＴＭＥにおいて、腫瘍由来ＣＳＦ−１が、マクロファージ活性化を腫瘍促進性表現型へさらに誘導し得て、疾患進行へ導くという可能性を高める。これらの観察は、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１軸が、腫瘍微小環境におけるエフェクター細胞の免疫抑制／排除を仲介して腫瘍細胞の免疫回避および疾患進行をもたらす共通因子であり得ることを合わせて示唆した。
［阻害抗体組成物］
したがって、本開示の一部の実施態様は、ＴＧＦβ１シグナル伝達のサブセットを阻害するのに有用である（すなわち、ＬＲＲＣ３３によって仲介される）、単離された抗体またはその機能性フラグメントを含む組成物（例えば、医薬組成物）を含む。任意の実施態様において、用語「抗体」は、標的抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子を指してよく、例えば、キメラ、ヒト化、完全なヒト、および二重特異性抗体を含む。無傷の抗体は一般に、少なくとも２つの全長重鎖および２つの全長軽鎖を含むが、場合によっては、重鎖のみを含み得るラクダ科において天然に生じる抗体のように、より少ない鎖を含んでよい。抗体は、単一の由来からのみ得られてよく、または「キメラ」であってよく、すなわち、抗体の異なる部分が、２つの異なる抗体に由来してよい。抗体、またはその抗原結合部分は、ハイブリドーマにおいて、組み換えＤＮＡ技術によって、または、無傷の抗体の酵素的または化学的切断によって、生産され得る。本明細書において用いられる用語、抗体は、それぞれ、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書において「抗体模倣物」と呼ばれることがある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合（本明細書において「抗体コンジュゲート」と呼ばれることがある）を含む。一部の実施態様では、用語は、ペプチボディも包含する。
天然起源の抗体構造単位は、典型的に四量体を含む。そのような四量体はそれぞれ、典型的に２つの同一のペアのポリペプチド鎖からなり、それぞれのペアは、１つの全長「軽」（特定の実施態様では、約２５ｋＤａ）および１つの全長「重」鎖（特定の実施態様では、約５０〜７０ｋＤａ）を有する。それぞれの鎖のアミノ末端部分は、典型的に抗原認識を担う約１００〜１１０またはより多くのアミノ酸の可変領域を典型的に含む。それぞれの鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を担い得る定常領域を典型的に規定する。ヒト抗体軽鎖は典型的に、κおよびλ軽鎖として分類される。重鎖は典型的に、μ、δ、γ、α、またはεとして分類されて、抗体のアイソタイプを規定する。抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＹ、およびＩｇＥ）およびクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）であってよい。全長軽鎖および重鎖内で、典型的に、可変および定常領域は、約１２またはそれよりも多いアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合されて、重鎖は、約１０個のさらなるアミノ酸の「Ｄ」領域も含む（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照（その全体で参照により援用される））。それぞれの軽鎖／重鎖ペアの可変領域は、典型的に、抗原結合部位を形成する。
可変領域は典型的に、３つの超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる）によって結合された相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同一の一般構造を示す。それぞれのペアの２つの鎖由来のＣＤＲは典型的に、フレームワーク領域によって並べられて、特異的なエピトープに対する結合を可能にし得る。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖および重鎖可変領域の両方とも、典型的に、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。それぞれのドメインに対するアミノ酸の割り当ては、典型的に、Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８−８８３、または、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７および１９９１））のＫａｂａｔ配列の定義に従う。軽鎖のＣＤＲは、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３と呼ばれてもよく、重鎖のＣＤＲは、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３と呼ばれてもよい。一部の実施態様では、抗体は、重鎖（単数または複数）のカルボキシ末端からの少数のアミノ酸欠失を含んでよい。一部の実施態様では、抗体は、重鎖のカルボキシ末端内に１〜５個のアミノ酸欠失を有する重鎖を含む。特定の実施態様では、ＣＤＲの決定的な叙述および抗体の結合部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解明することによって、および／または、抗体リガンド複合体の構造を解明することによって、達成される。特定の実施態様では、それは、Ｘ線結晶解析のような当業者に公知の任意の様々な技術によって達成され得る。一部の実施態様では、分析の様々な方法は、ＣＤＲ領域を同定または概算するために用いられ得る。そのような方法の例は、限定されないが、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、および接触（ｃｏｎｔａｃｔ）定義を含む。
結合タンパク質の「機能性抗原結合部位」は、標的、抗原、またはリガンドに結合することのできるものである。抗原結合部位の抗原結合親和性は、必ずしも抗原結合部位が由来する親の結合タンパク質ほど強くはないが、抗原に結合する能力は、抗原に結合する結合タンパク質を評価するために知られる様々な方法のいずれか１つを用いて測定可能でなければならない。さらに、本明細書における、多重特異性結合タンパク質の抗原結合部位のそれぞれの抗原結合親和性は、定量的に同一である必要はない。
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の軽鎖および／または重鎖の一部を指し、典型的に、重鎖内のおよそアミノ末端１２０〜１３０個のアミノ酸および軽鎖内の約１００〜１１０個のアミノ末端アミノ酸を含む。特定の実施態様では、異なる抗体の可変領域は、同一種の抗体の間でさえ、アミノ酸配列が広範囲にわたって異なる。抗体の可変領域は典型的に、その標的に関する特定の抗体の特異性を決定する。
免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、当技術分野で知られている。
用語「競合する」は、同一エピトープに関して競合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）の関連において用いられる場合、試験される抗原結合タンパク質が、共通の抗原（例えば、ＴＧＦβ１またはそのフラグメント）に対する参照抗原結合タンパク質の特異的な結合を防止または阻害する（例えば減少させる）アッセイによって決定される、抗原結合タンパク質間の競合を意味する。非常に多くのタイプの競合結合アッセイ、例えば：固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ；固相直接ビオチンアビジンＥＩＡ；固相直接ラベル化アッセイ、および固相直接ラベル化サンドイッチアッセイが、一方の抗原結合タンパク質が他方と競合するかどうか決定するために用いられ得る。通常、競合抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合、少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％または７５％以上、共通の抗原に対する参照抗原結合タンパク質の特異的な結合を阻害する（例えば減少させる）。場合によっては、結合は、少なくとも８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、または９７％以上阻害される。
用語「抗原」は、抗原結合タンパク質のような選択的結合剤（例えば抗体を含む）によって結合されることが可能な、エピトープ（例えば、分子または分子の部分、または、分子または分子の部分の複合体）を提供する分子構造を指す。したがって、選択的結合剤は、複合体内の２以上の構成要素によって形成された抗原に特異的に結合し得る。一部の実施態様では、抗原は、その抗原への結合が可能な抗体を産生するために、動物において用いられることができる。抗原は、異なる抗原結合タンパク質（例えば抗体）と相互作用することのできる１つまたは複数のエピトープを保有してよい。本開示との関連では、したがって、抗原は、ＬＲＲＣ３３またはそのフラグメント、またはそれを含むタンパク質複合体を含む。より具体的には、本明細書に記載の発明を実施するためのＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３またはそれを含む複合体の細胞外部分上に存在するエピトープに結合することができる。
本明細書において用いられる用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれにおいて３個のＣＤＲが存在し、可変領域のそれぞれに関して、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と指定される。本明細書において用いられる用語「ＣＤＲセット」は、抗原に結合することのできる単一の可変領域を生じさせる３個のＣＤＲのグループを指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なって定義されている。Ｋａｂａｔによって説明されるシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９８７；１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明白な残基ナンバリングシステムを提供するだけでなく、３個のＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ばれ得る。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；およびＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７−８８３）は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の特定のサブ部分が、アミノ酸配列レベルで非常に多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド主鎖立体構造を取ることを見いだした。これらのサブ部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と指定された（ここで「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖および重鎖領域を指定する）。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと呼ばれ得て、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（１９９５）ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３−１３９およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−４５によって説明されている。さらに他のＣＤＲ境界の定義は、本明細書におけるシステムの１つに厳密に従わなくてよいが、それでもなお、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するが、特定の残基または残基群または実にＣＤＲ全体が抗原結合に著しく影響を与えないという予測または実験的知見に照らすと、それらは短くまたは長くされ得る。本明細書において用いられる方法は、任意のこれらのシステムに従って定義されるＣＤＲを利用し得るが、特定の実施態様は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを用いる。
本明細書において用いられる用語「結晶」および「結晶化」は、結晶の形態で存在する結合タンパク質（例えば、抗体）、またはその抗原結合部分を指す。結晶は、物質の固形状態の１つの形態であり、非晶質の固形状態または液体の結晶状態のような他の形態と異なる。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体のようなタンパク質）、または分子の集合（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な反復する三次元アレイからなる。これらの三次元アレイは、当該分野において十分に理解されている特定の数学的関係に従って並べられる。結晶内で反復される基本単位、すなわちビルディングブロックは、非対称単位と呼ばれる。所定の十分に定義された結晶学的対称に従った配列における非対称単位の反復は、結晶の「単位セル」を提供する。全三次元における規則的な並進（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）による単位セルの反復は、結晶を提供する。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．ａｎｄ Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ ｅａ．，ｐｐ．２０１−１６，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９９９）を参照。
用語「エピトープ」は、結合剤、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することのできる任意の分子決定因子（例えば、ポリペプチド決定因子）を含む。特定の実施態様では、エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルのような分子の化学的に活性の表面グループを含み、特定の実施態様では、特異的な三次元構造特性、および／または特異的な電荷特性を有してよい。エピトープは、結合タンパク質によって結合される抗原の領域である。したがって、エピトープは、特異的な結合パートナー上の相補部位に結合することが知られる抗原（またはそのフラグメント）の領域のアミノ酸残基からなる。抗原性フラグメントは、１よりも多いエピトープを含んでよい。特定の実施態様では、抗体は、タンパク質および／または高分子の複合体混合物内のその標的抗原を認識する場合、抗原に特異的に結合する。例えば、抗体は、抗体が交差競合する（一方が他方の結合または調節効果を妨げる）場合、「同一エピトープに結合する」と言われる。加えて、エピトープの構造的定義（重複、同様、同一）は、情報を与えるが、機能的定義は、構造的（結合）および機能的（調節、競合）パラメーターを包含するので、しばしば、より関連がある。
特定の抗体の阻害活性のメカニズムは変化し得る。一部の実施態様では、阻害抗体は、抗原抗体複合体の内在化を誘導することによって作用して、それにより、細胞表面からの標的抗原（例えば、ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体）のクリアランスを助長する。
［ＬＲＲＣ３３およびＧＡＲＰのコンテクスト選択的阻害剤］
したがって、本開示は、インビボでＴＧＦβシグナル伝達の（全てではないが）サブセットをブロックすることのできる特定の「コンテクスト選択的」阻害剤を含む。そのような阻害剤は、ＬＲＲＣ３３阻害剤およびＧＡＲＰ阻害剤を含む。特定の理論によって拘束されることを望まずに、本発明によって可能にされる選択性（または特異性）は、機能性コンテクストを区別しない、より慣習的なＴＧＦβの阻害剤と比較して、改善された安全性（例えば、制限された毒性）を与え得ると考えられる。
一態様では、ＬＲＲＣ３３特異的阻害剤が提供される。
一部の実施態様では、本発明の態様は、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１複合体（複合体の不活性型の潜在型形態である）に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。そのような抗体（またはフラグメント）は、潜在型複合体からのＴＧＦβ１増殖因子の活性型形態の放出を阻害することができ、それにより、ＬＲＲＣ３３と関連するＴＧＦβ１シグナル伝達を特異的に阻害する。一部の実施態様では、阻害抗体は、不活性型の複合体を安定化することによって作用する。一部の実施態様では、阻害抗体は、抗原抗体複合体の内在化を誘導することによって作用して、それにより、標的抗原（ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体）のクリアランスを助長する。一部の実施態様では、抗体は、潜在型複合体と関連しないＴＧＦβ１増殖因子のフリーの成熟型に結合しない。一部の実施態様では、抗体は、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３に影響を及ぼさずにＴＧＦβ１の活性化を阻害するという点でアイソフォーム特異的である。そのような抗体またはその抗原結合部分は、ＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβ１の過剰発現と関連する疾患の治療に適切である。例えば、本明細書においてさらに詳細に議論されるように、ＬＲＲＣ３３−ＴＧＦβ１に特異的に結合してＴＧＦβ１活性化のステップを阻害するモノクローナル抗体は、血液学的増殖性障害の治療における使用に適切である。
一部の実施態様では、コンテクスト選択的抗体またはその抗原結合部分は、ＬＲＲＣ３３またはＧＡＲＰによって提示されるがＬＴＢＰ１／３によっては提示されないＴＧＦβ１に結合して、活性化（放出）を阻害することができる。２つの提示分子の間で共有される構造相同性に基づき、ｐｒｏＴＧＦβ１複合体を含む抗原の注意深い設計は、目的のｐｒｏＴＧＦβ１複合体の一方または両方のタイプを認識する阻害抗体を産生することができる。生じる抗体は、免疫応答を調整する使用に適切である。
そのような抗体を産生するために用いられる適切な抗原は、目的の提示分子（例えばＬＲＲＣ３３およびＧＡＲＰ）に結合したｐｒｏＴＧＦβ１複合体を含むタンパク質複合体を含む。ｐｒｏＴＧＦβ複合体の不活性型の形態（例えば、前駆体）は典型的に、ｐｒｏＴＧＦβプロタンパク質ポリペプチドの二量体を含み、２対１の化学量論において、単一の提示分子と会合する。一部の実施態様では、二量体はホモ二量体である。一部の実施態様では、二量体はヘテロ二量体である。一部の実施態様では、本明細書に記載の抗体またはそのフラグメントは、二量体のそれぞれに結合する。一部の実施態様では、本明細書に記載の抗体またはそのフラグメントは、二量体または複合体に結合する。一部の実施態様では、そのような抗体によって認識されるエピトープは、複合体の２以上の構成要素によって形成されたコンビナトリアルエピトープであり、構成要素は、提示分子（例えば、ＬＲＲＣ３３）およびｐｒｏＴＧＦβ二量体の部分から選択される。一部の実施態様では、そのような抗体によって認識されるエピトープは、複合体の三次元構造に依存性の立体構造的エピトープである。一部の実施態様では、抗体は、複合体に特異的に結合するが、複合体の構成要素のそれぞれ単独には結合しない。
例示的なＬＲＲＣ３３およびＧＡＲＰアミノ酸配列を以下の表に提供する：


例示的なＴＧＦβアミノ酸配列が、以下の表に提供される：


［ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体の特異的なバインダー］
一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面上に発現されたＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体の特異的なバインダーである。そのような阻害剤は、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している標的細胞を特異的に認識することを目的として、それによって、機能のためのその利用率を阻害する。ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体のそのような特異的なバインダーは、ＴＧＦβ活性化を阻害する能力を有してよく、または有さなくてよい。
一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、潜在型ＴＧＦβと関連したＬＲＲＣ３３（例えば、ＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ１複合体）に特異的に結合するＬＲＲＣ３３結合剤である。
治療的薬剤として効果的であるために、標的分子（例えばＬＲＲＣ３３）の細胞表面発現は、健康細胞よりも疾患関連細胞に対して十分に制限され、または選択的であることが望ましい。この点について、ＬＲＲＣ３３は、特定の細胞亜集団により制限された発現のおかげで、ＣＤ３３のような現在までに商業的に利用されている他の細胞表面抗原よりも有利である。このように、健康細胞が温存され得て（ｍａｙ ｂｅ ｓｐａｒｅｄ）、不要な副作用または毒性を潜在的に減少させる。加えて、細胞表面発現は、阻害剤（ＬＲＲＣ３３バインダー）が容易かつ確実に標的細胞に結合して十分なオプソニン作用を確保することができるように、強くなくてはならない。
これまでに評価された細胞におけるＬＲＲＣ３３の細胞表面密度は、現在までにＡＣＤとして成功的に利用されている市販される治療の標的（例えばＣＤ３３、ＥＧＦＲおよびＨｅｒ２）と同等の発現レベルを示す。本明細書における実施例において示されるように、Ｍ−ＣＳＦ成熟ヒト単球由来マクロファージは、ＬＲＲＣ３３の強くて均一な細胞表面発現を示し、これを、疾患関連細胞を枯渇させるための有利な標的にさせる。とりわけ、単球および／またはマクロファージの亜集団のみが、ＬＲＲＣ３３阻害剤によって標的化される。Ｍ２極性化マクロファージ内でさえ、ＬＲＲＣ３３の細胞表面発現は、Ｍ２ａおよびＭ２ｂ亜集団に著しく影響を及ぼさずに、Ｍ２ｃ（「線維症促進性」）およびＭ２ｄ（「腫瘍促進性」または「Ｔａｍ様」）亜集団において選択的に上方調節される。このことは、骨髄性マーカーのような広範な標的と比較して、疾患関連細胞集団の選択的な標的化を可能にする。
一部の実施態様では、そのような阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体に結合し得て、それにより、その機能を中和（例えばブロック）する。
一部の実施態様では、そのような阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体に結合し得て、それにより、ＬＲＲＣ３３（またはＬＲＲＣ３３含有複合体）の内在化を、細胞表面からそれを除去または取り除くように誘導する。細胞表面ＬＲＲＣ３３の内在化依存性の枯渇は、ＡＤＣが介在する細胞死滅化として利用され得る。本明細書における実施例に例示されるように、一部の実施態様では、阻害剤による細胞表面ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体の結合の際に、細胞表面標的の少なくとも３５％（例えば、少なくとも４０％、４５％、５０％、６０％、７０％および８０％）は、生理学的温度で、３０分以内、６０分以内、９０分以内または１２０分以内に内在化されて、好ましくは内在化のほとんど（例えば、細胞表面標的の少なくとも５０％の内在化）は、標的結合の１時間以内に生じる。
一部の実施態様では、そのような阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３に結合し得て、それにより、標的細胞の抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導する。ＡＤＣＣは、細胞が介在する免疫防御のメカニズムであり、それにより、免疫系のエフェクター細胞が標的細胞を活性的に溶解させる（その膜表面抗原（例えば、ＬＲＲＣ３３）は、特異的な抗体（例えば、抗−ＬＲＲＣ３３抗体またはそのフラグメント）によって結合されている）。ＡＤＣＣは、免疫補体系（それも標的を溶解させるが、いかなる他の細胞も必要としない）から独立している。ＡＤＣＣは、典型的にＩｇＧ抗体と相互作用するエフェクター細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）を必要とする。しかしながら、マクロファージ、好中球および好酸球もまた、ＡＤＣＣを仲介し得る。
好ましい実施態様では、特異的バインダーは、標的細胞の細胞表面上のＬＲＲＣ３３または複合体（例えば、ＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβのようなタンパク質複合体）の細胞外部分への結合に利用可能な、エピトープを認識するモノクローナル抗体またはそのフラグメントである。本発明に包含されるＬＲＲＣ３３のそのような特異的バインダーは、細胞の細胞毒性（例えば、ＡＤＣＣ）および他のエフェクター機能をトリガーするエフェクター領域を含んでよい。例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、腫瘍関連抗原のような疾患関連抗原の特異的認識、および、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、および、補体パスウェイ構成要素を含むエフェクター因子のその後の動員を通して、疾患関連細胞／組織（例えば、腫瘍、線維化組織、負傷組織など）を標的化することができる。そのような動員は、免疫グロブリンγ（ＩｇＧ）結晶化可能フラグメント（Ｆｃ）および免疫細胞受容体様のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）および補体系の補体タンパク質Ｃ１ｑの間の相互作用によって達成される。これらの相互作用は、高い抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）／抗体依存性細胞介在性貪食（ＡＤＣＰ）のための免疫細胞の活性化、膜侵襲複合体の形成、および、樹状細胞に対する抗原のより効率的な提示をもたらす。再生メカニズムを通して、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、Ｆｃ領域とのｐＨ依存性相互作用においてｍＡｂの半減期を延長させる。
一実施態様では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である重鎖可変ドメイン配列；および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である軽鎖可変ドメイン配列を含むＬＲＲＣ３３抗体を提供する。
ＥＶＱＬＱＱＳＧＴＶＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＹＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＮＳＤＴＴＹＮＱＫＦＫＧＫＡＫＬＴＡＶＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＮＥＤＳＡＶＹＹＣＴＮＴＮＷＥＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１）
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２）
一実施態様では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖可変ドメイン配列；および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメイン配列を含むＬＲＲＣ３３抗体を提供する。一実施態様では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列と同一である重鎖可変ドメイン配列；および配列番号２のアミノ酸配列と同一である軽鎖可変ドメイン配列を含むＬＲＲＣ３３抗体を提供する。
一実施態様では、本開示は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である重鎖可変ドメイン配列；および配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である軽鎖可変ドメイン配列を含むＬＲＲＣ３３抗体を提供する。
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＦＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＧＲＧＧＹＤＹＤＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号３）
ＤＩＶＭＴＱＡＡＦＳＮＰＶＴＬＧＴＳＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＱＳＹＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＳＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４）
一実施態様では、本開示は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である重鎖可変ドメイン配列；および配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメイン配列を含むＬＲＲＣ３３抗体を提供する。一実施態様では、本開示は、配列番号３のアミノ酸配列と同一の重鎖可変ドメイン配列；および配列番号４のアミノ酸配列と同一の軽鎖可変ドメイン配列を含むＬＲＲＣ３３抗体を提供する。
一実施態様では、ＬＲＲＣ３３抗体は、重鎖および軽鎖の両方を含み、抗体は、配列番号１／配列番号２（ＳＲＬ１）および配列番号３／配列番号４（ＳＲＬ２）からなる群より選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
別の実施態様では、本開示は、配列番号１に記載の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変ドメインを含み；配列番号２に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む、ＬＲＲＣ３３抗体を提供する。加えて、上記に開示されるように、重鎖可変ドメイン配列は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であってよく、軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であってよい。
別の実施態様では、本開示は、配列番号３に記載の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変ドメインを含み；配列番号４に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む、ＬＲＲＣ３３抗体を提供する。加えて、上記に開示されるように、重鎖可変ドメイン配列は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であってよく、軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であってよい。
一実施態様では、本開示は、配列番号５、６および７からなる群より選択される重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号８、９および１０からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む軽鎖可変ドメインを含む、ＬＲＲＣ３３抗体を提供する。
ＧＹＴＦＴＹＹＷ（配列番号５）
ＩＹＰＧＮＳＤＴ（配列番号６）
ＴＮＴＮＷＥＡＭＤＹ（配列番号７）
ＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹ（配列番号８）
ＬＶＳ（配列番号９）
ＷＱＧＴＨＦＰＴ（配列番号１０）
一実施態様では、本開示は、配列番号１１、１２および１３からなる群より選択される重鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号１４、１５および１６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む軽鎖可変ドメインを含む、ＬＲＲＣ３３抗体を提供する。
ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号１１）
ＩＮＰＹＮＧＤＴ（配列番号１２）
ＧＲＧＧＹＤＹＤＦＤＹ（配列番号１３）
ＫＳＬＬＱＳＹＧＩＴＹ（配列番号１４）
ＱＭＳ（配列番号１５）
ＡＱＮＬＥＬＰＦＴ（配列番号１６）
ＬＲＲＣ３３に特異的に結合するＬＲＲＣ３３阻害剤は、例えば、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させるために用いられ得る（免疫枯渇）。そのような阻害剤は、免疫枯渇剤として用いられて、循環している単球と干渉し、またはその動員を疾患部位（例えば、腫瘍および線維性または負傷組織）に制限するのに有用であり得て、および／または、疾患部位（例えば、腫瘍および線維性または負傷組織）において活性化マクロファージ亜集団を枯渇させるのに有用であり得る。
ＡＤＣＣ適用に関し、ＬＲＲＣ３３結合剤（例えば、抗−ＬＲＲＣ３３抗体またはそのフラグメント）は、適切な特性を含むように改変されてよい。ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）クラスからなり、それらの細胞発現およびＦｃ結合親和性の観点から異種である。ＦｃγＲＩは、約１０−８〜１０−９ＭのＫＤでＦｃ領域に結合して、単核貪食細胞、樹状細胞、およびＩＦＮ−γによって活性化された好中球上に発現される。ＦｃγＲＩＩは、相対的により低い親和性（ＫＤ約１０−７Ｍ）でＦｃ領域に結合して、５個のアイソフォームで存在し；それらのうち、活性化（ＦｃγＲＩＩａ、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフを好中球上に保有する）または阻害（ＦｃγＲＩＩｂ、免疫受容体チロシンに基づく阻害モチーフを主にＢリンパ球上に保有する）は、免疫調節に重要である。ＦｃγＲＩＩＩは、２つのアイソフォームで発現されて、最も低い親和性（ＫＤ約１０−５Ｍ）でＦｃ領域に結合する。これらのうち、ＦｃγＲＩＩＩａは、中程度のＦｃ結合対立遺伝子（Ｖ１５８）および低い結合対立遺伝子（Ｆ１５８）を有し、ＮＫ細胞、マクロファージ、およびＴ細胞のサブセット上に発現されて、ＮＫおよびＴ細胞によって仲介されるＡＤＣＣ応答を活性化して；ＦｃγＲＩＩＩｂは、もっぱら好中球上に存在して、シグナル生成能力がない。
そのようなＬＲＲＣ３３結合剤は、ＬＲＲＣ３３を発現する標的細胞を排除するのに有用である。同様に、同じアプローチを用いて、ＧＡＲＰを発現し細胞の細胞傷害性効果を仲介する標的細胞に特異的に結合する、ＧＡＲＰの特異的阻害剤を設計することができる。そのような結合剤は、疾患状態においてＬＲＲＣ３３および／またはＧＡＲＰを発現している標的細胞の数を減少させるために用いられ得て、これらの標的細胞の過剰発現または激増を減少させるのに有益である。
本発明によって包含される抗体またはその抗原結合部分を含む組成物は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む。したがって、そのような抗体またはそのフラグメントは、抗体抗原相互作用を介して目的の部位へ送達される薬物または「ペイロード」に結合または連結されるように改変されてよい。例えば、抗体またはその抗原結合部分は、目的の「ペイロード」を保有するためのさらなる部分を含んでよい。適切なペイロードの例は、限定されないが：治療薬／薬物、毒素、マーカーおよび検出／イメージングラベル、および任意の他の目的の機能性部分を含む。そのようなペイロードは、化学的物質、小分子、ポリペプチド、核酸、放射性同位体などであってよい。したがって、本発明は、毒素として作用する部分（例えば、化学的物質）を含むことによって、標的細胞の抗体非依存性（例えば、非ＡＤＣＣ介在）の死滅化を誘導する手法を含む。抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の部分は、共有または非共有結合を介して抗体構造に付着またはコンジュゲートされてよい。一部の実施態様では、ＡＤＣは、切断可能または切断不可能な結合を含む。一部の実施態様では、非共有の相互作用（例えば、会合および解離）は、ｐＨ依存性であってよい。任意の適切な毒素が用いられてＡＤＣ分子へ改変されてよい。
ＡＤＣ分子は、細胞傷害剤とＬＲＲＣ３３バインダーを連結することによって生産され得る。典型的に、結合部分（例えば、抗−ＬＲＲＣ３３抗体またはそのフラグメント）および細胞傷害性部分は、リンカーを介してコンジュゲートされる。リンカーは、切断可能なリンカーまたは切断不可能なリンカーであってよい。一部の実施態様では、ＡＤＣは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含んでよい。例えば、ＡＤＣのリンカーは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含んでよい。
任意の適切な細胞傷害剤が用いられてよい。抗癌療法については、そのような薬剤の２つのカテゴリーは、微小管破壊剤およびＤＮＡ改変剤を含む。前者は、制限されずに、ドラスタチン１０およびその誘導体；モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、メイタンシンおよびその誘導体を含む。後者は、制限されずに、デュオカルマイシン類似体およびカリケアマイシンを含む。ＡＤＣの開発で用いられる他の薬剤は、制限されずに、ピロロベンゾジアゼピン、デュオカルマイシン、センタナマイシン（ｃｅｎｔａｎａｍｙｃｉｎ）、イリノテカン、カンプトテシン、およびドキソルビシンを含む。
したがって、本発明の一部の実施態様は、毒素にコンジュゲートされた抗体またはその抗原結合部分を含むＡＤＣに関し（ｄｒａｗｎ ｔｏ）、抗体または抗原結合部分は、ＬＲＲＣ３３上のエピトープ、ＧＡＲＰ上のエピトープ、または、両方に共通のエピトープに結合する。そのような抗体は、疾患組織を優先的に標的化して、患者における不要な毒性（例えば、有害事象）を減少させるために用いられ得る。
一部の実施態様では、抗体または抗原結合部分は、「二重機能」抗体またはそのフラグメントであり、ＴＧＦβ活性化阻害剤として機能し、標的細胞の死滅化のような第二の機能の両方、例えば、ＡＤＣＣおよび毒素依存性効果をさらに含む。そのような二重機能抗体は、目的の提示分子と関連した潜在型ｐｒｏＴＧＦβ複合体に結合するという点で特徴付けられて、それにより、成熟ＴＧＦβが潜在型複合体から放出されるのを阻害して、疾患微小環境内で利用可能なフリーのＴＧＦβの局所的な減少をもたらす。適切な提示分子は、特定の疾患または障害の病理学を駆動するＴＧＦβ活性化のメカニズムに基づいて選択されてよい。さらなる検討は、体内の疾患および正常組織内の特定の提示分子の発現の程度の評価を含むべきである。好ましくは、本発明の抗体は、正常または健康対照物に負の影響を及ぼさずに、異常細胞または疾患組織を特異的に標的化することができる。そのような抗体の非限定的な例は、ＬＲＲＣ３３と関連した、ＧＡＲＰと関連したｐｒｏＴＧＦβ１複合体を標的化して、またはＬＲＲＣ３３−またはＧＡＲＰ−関連のｐｒｏＴＧＦβ１複合体に結合するのに寛容である。一部の実施態様では、そのような抗体は、血液学的増殖性障害、例えば、白血病および骨髄線維症を治療するために用いられる。
癌保有患者における免疫抑制Ｔｒｅｇの蓄積に対抗するために、Ｔｒｅｇを枯渇させるストラテジーを開発するための努力がなされている。例えば、いくつかのグループは、大部分のＴｒｅｇによって発現されるＩＬ−２受容体を標的として目標を定めて、担体としてのＩＬ−２リガンドにコンジュゲートされた毒素を送達した。結果は、制限された成功との混合であった。同様に、ダクリズマブ（抗−ＣＤ２５抗体）を用いてＴｒｅｇを標的化したが、この手法は、ＣＤ−２５を発現しているＴ細胞を不注意に枯渇させるという不要な副作用を生じ、癌細胞の標的化における特異性の重要性を示した。
本明細書に記載の抗体の使用によるＧＡＲＰ選択的ＴＧＦβシグナル伝達の標的化は、この手法が提供する特異性のレベルに起因して安全性プロファイルの改善を可能にしながら、抗腫瘍免疫を高める臨床利益を提供し得る。
本明細書に記載されるように、驚くべき知見の１つは、ＬＲＲＣ３３が、非常に選択的な細胞／組織型のセットにおいて過剰発現されるということである。例えば、極性化した単球のサブセットのみ、すなわち、線維症促進性Ｍ２ｃサブタイプおよび腫瘍関連Ｔａｍ様サブタイプが、上昇したレベルのＬＲＲＣ３３発現を示す。
［ＣＡＲ−Ｔ適用のためのＬＲＲＣ３３］
ＬＲＲＣ３３（例えば、ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体）が、病理学的および／または病原（疾患関連）細胞（例えば、ＡＭＬのような骨髄性白血病および腫瘍関連マクロファージまたは疾患／損傷関連マクロファージ）を標的化して破壊するための、ＡＤＣまたはＡＤＣＣ手法に関して用いられる魅力的な標的であるのと同様の様式で、それはＣＡＲ−Ｔ療法に関する魅力的な標的でもあり得る。このようにして、ＬＲＲＣ３３＋細胞（すなわち、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞）、例えばＡＭＬ芽球は、ＬＲＲＣ３３−細胞がＣＡＲ−Ｔによって結合されないので、最小限の毒性副作用で破壊が潜在的に標的化され得る。
ＬＲＲＣ３３の標的化は、標的細胞をより狭い亜集団に制限するより選択的な発現に起因して、既存のＡＭＬ療法と比較してより安全な代替を提供するはずであると考えられる。このことは、他の方法ではより広範に発現された細胞表面マーカー（例えばＣＤ３３）を標的化する既存の治療によって標的化される、正常な機能に必要な、健康な血小板および骨髄性細胞を温存（ｓｐａｒｅ）するはずである。
現在のところ、ＣＡＲ−Ｔ細胞の多くの並べ替えが存在するが、典型的にそれらは、細胞内活性化および共刺激ドメイン、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ｚおよび／または４−１ＢＢ／ＩＣＯＳ／ＯＸ４０または他のＴ細胞活性化ドメインに融合された特異的抗原（この場合では、ＬＲＲＣ３３またはＬＲＲＣ３３含有複合体、例えばＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ１）を認識するｓｃＦＶからなる。これらは、ＣＤ８ Ｔ細胞（他の遺伝子改変を保有してよい、または保有しなくてよい）にクローン化されて、強力および／または長く生存する抗腫瘍エフェクター細胞にさせる（例：「Ａｒｍｏｒｅｄ ＣＡＲ−Ｔ」はＩＬ−１２を発現する）。このようにして、患者内にトランスフューズされた全てのＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＬＲＲＣ３３またはそれを含む複合体を特異的に認識して、活性化されて、サイトカインおよび細胞傷害性タンパク質の合成（ｅｌａｂｏｒａｔｉｏｎ）を介して応答する。さらなる実施態様では、ＣＡＲ−ＮＫＴおよび／またはＣＡＲ−ＮＫ細胞を設計するために同様の手法が取られてよく、活性化ドメインに融合された同様のｓｃＦＶが、抗腫瘍エフェクターメカニズムの原因としてＮＫＴまたはＮＫ細胞にクローン化される。ＣＡＲ−ＮＫの場合、代替の活性化ドメインが、これらの細胞に内在性の活性化パスウェイに、てこ入れする（ｌｅｖｅｒａｇｅ）ために用いられてよい（ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０およびＣＤ２２６など）。
ＡＭＬのような血液癌細胞におけるＣＡＲ−Ｔ療法は、固形腫瘍に応答して、１つまたは複数の癌療法（単数／複数）と組み合わせて用いた場合により効果的であり得る。ＣＡＲ−Ｔ（および／またはＣＡＲ−ＮＫ、ＣＡＲ−ＮＫＴなど）とともに用いられるさらなる癌療法は、限定されないが、一部の患者のＡＭＬ芽球が免疫抑制に関するメカニズムとしてＰＤＬ１の上方調節を示すので、チェックポイント阻害剤、例えば抗−ＰＤ１または抗−ＰＤＬ１を含む。
白血病細胞のような癌細胞は、場合によっては、ＴＧＦβ１の産生を通して免疫抑制環境および免疫回避を展開するので、ＬＲＲＣ３３のＣＡＲ−Ｔ標的化は、単一の抗原標的化よりも耐久性のある応答を提供し得る。白血病細胞、例えば、Ｔ−ＡＬＬおよびＮＨＬによる表面標的抗原の下方調節は、免疫細胞死滅化からの回避のメカニズムであることが示されている。表面ＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβの下方調節は、ＴＧＦβ１によって駆動される免疫抑制を反転または減少させ得て、したがって、疾患細胞（例えば癌細胞）を、体の免疫が疾患と戦うのを助長する免疫監視に曝させる。
ＣＡＲ−Ｔ細胞の集団は、抗原が消えた時点で自然に収縮する。これらの細胞からの免疫学的記憶生成を改善するために多くの戦略が研究されている。調査されていないニッチ内に癌細胞が存在する場合、天然のＣＤ８ Ｔ細胞の枯死は、耐久性のあるＣＡＲ−Ｔ保護に関するチャレンジであることが示されている。このように、保護は耐久性でなくてよい。高いＬＲＲＣ３３発現は、病理学的骨髄性細胞の特徴であるが、循環している単球の少ないパーセンテージ（約５％）が、検出可能なＬＲＲＣ３３発現を有する。この低レベルの発現は、ＣＡＲＴの循環している集団および不変の監視を維持する抗原持続性に十分であり得る。
さらなる置換は、ＢｉＴｅ、すなわちＢｉ−特異的Ｔ細胞エンゲイジャー（ｅｎｇａｇｅｒ）のための標的としてのＬＲＲＣ３３である。一例として、ＢｉＴｅは、融合したｓｃＦｖであり、一方の末端は腫瘍抗原（ＬＲＲＣ３３）に特異的であり、他方はＴ細胞抗原（ＣＤ３など）に特異的である。このように、ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、標的細胞と接触させられて、ＣＤ３との結合を通して、Ｔ細胞は活性化されて、細胞溶解応答を産生する（ｅｌａｂｏｒａｔｅ）。
［製造方法］
本出願によって包含される有用な抗体およびそのフラグメントは、以前に説明された方法に従って生産されてよい。例示的な方法は、例えば、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０６８６１３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０３６９３３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５９４６８、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５２０１４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２１９７２に提供されて、それぞれの内容は参照により本明細書中に援用される。
好ましい実施態様では、そのような抗体は、少なくとも１つの賦形剤をさらに含む医薬組成物に製剤化され得る。本開示の文脈において、製造は、例えば、抗原または抗原複合体を産生するために行われる様々なステップ、方法およびプロセス、特定のプロファイルの候補薬剤（例えば、バインダーおよび阻害剤）を同定および評価するためのスクリーニングステップ（単数または複数）（例えば、ポジティブ選択およびネガティブ選択ステップ）、スケールアップのプロセス、抗体の設計および／または改変、精製ステップ、分析するステップ、および、ヒトおよび非ヒト対象への投与に適切な医薬組成物に構成要素を処方または混合するステップを包含する。そのような医薬組成物は滅菌される。
典型的に、ＬＲＲＣ３３特異的阻害剤を生産または同定するために、候補薬剤は、ＬＲＲＣ３３、例えば、ＬＲＲＣ３３の細胞外部分（単数または複数）に関する特異的および選択的結合についてスクリーニングされる。そのようなステップは、一般に、ポジティブ選択と呼ばれる。したがって、有用な抗原または免疫原は、組み換えＬＲＲＣ３３またはその細胞外フラグメント、それを含むタンパク質複合体（例えば、ＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ）、ならびに細胞に基づく抗原（細胞表面上に、ｐｒｏＴＧＦβとともにまたは伴わずに、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞）を含む。そのような方法の非限定的な例は、本明細書における実施例において提供される。
一部の実施態様では、ネガティブ選択は、ＬＲＲＣ３３阻害剤を生産または同定する方法に含まれてよい。「ネガティブ選択」（「対抗選択（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」または「対抗スクリーニング（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）」とも呼ばれる）は、一般に、プールからの、望ましくないバインダーまたは候補の除去を指す。
したがって、本発明は、ＬＲＲＣ３３阻害剤を同定するための方法を含む。当該方法は、プール（例えばライブラリー）から、ＬＲＲＣ３３に特異的に結合する１つまたは複数のバインダーを選択するステップを含んでよい。当該方法は、ネガティブ選択を行なうステップ、すなわち、ＬＲＲＣ３３に対して特異的または選択的でない望ましくないバインダーを除去するステップをさらに含んでよい。例えば、望ましくないバインダーは、ＧＡＲＰと交差反応するものを含んでよい。一部の実施態様では、当該方法は、ＬＲＲＣ３３に関する選択性を確認するステップをさらに含む。一部の実施態様では、確認ステップは、種選択性、例えばミューリンＬＲＲＣ３３および／またはヒトＬＲＲＣ３３（好ましくはヒトＬＲＲＣ３３）を確認するステップを含んでよい。一部の実施態様では、確認ステップは、ヒトＬＲＲＣ３３に関する種選択性を確認するステップを含む。しかしながら、一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、インビボでの評価および／またはトランスレータビリティ（ｔｒａｎｓｌａｔａｂｉｌｉｔｙ）を助長するように、ヒトおよび齧歯類（例えば、ミューリン）対照物の両方に関して交差反応性であることが好ましい。一部の実施態様では、当該方法は、候補／試験バインダーが細胞表面ＬＲＲＣ３３に結合することが可能であることを確認するために、ＦＡＣＳに基づくスクリーニングを含んでよい。一部の実施態様では、当該方法は、候補バインダーが標的細胞を枯渇させる能力を評価または確認するために、１つまたは複数の細胞に基づくアッセイ（限定されないが内在化アッセイおよび細胞死滅化（細胞傷害性）アッセイを含む）を含んでよい。
［臨床適用］
本明細書に記載の組成物および関連する方法が治療として有用な臨床的な徴候は、細胞表面ＬＲＲＣ３３発現の上方調節によって特徴付けられる疾患または障害を含む。一部の実施態様では、そのような疾患または障害は、損傷部位（例えば、線維化組織、筋障害、腫瘍など）における単球由来マクロファージ活性化を含む。
したがって、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、癌のような様々な増殖性状態、例えば、全身性癌および局所性癌の治療に用いられてよい。全身性癌の例は、血液学的増殖性障害（例えば、骨髄、血液細胞のような血液形成組織において、および／または免疫系の細胞において始まる癌）を含む。局所性癌の例は、固形腫瘍、例えば、一次腫瘍ならびに二次腫瘍（転移）を引き起こす癌を含む。固形腫瘍は、癌性（すなわち、悪性）細胞に加えて、浸潤された免疫細胞または白血球、例えば、マクロファージ（例えば、腫瘍関連マクロファージまたはＴＡＭ）および免疫抑制Ｔｒｅｇ、ならびに、活性化された好中球（例えば、腫瘍関連好中球またはＴＡＮ）および癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）を含んでよい。
文献の証拠は、単球と同様に、ＴＡＮも腫瘍部位へ動員されて、そこで血管新生および他の局面の疾患進行を助長する役割を果たし得ることを示唆する。ＴＡＮの上昇は、様々なタイプの癌腫における予後不良と相関すると考えられる。極性化マクロファージを思い出すと、ＴＡＮの腫瘍抑制および腫瘍促進サブタイプが存在し、ＴＧＦβは、この転換に関与すると考えられる。活性化されたＴＡＮもまた、マクロファージを動員し得て、癌進行を駆動し得るＬＲＲＣ３３／ＴＧＦβ１によって仲介されるイベントのカスケードが存在し得ることを示唆する。
したがって、本開示は、ＬＲＲＣ３３を発現しているプロ癌細胞、例えば、ＴＡＭ、ＴＡＮおよびＣＡＦを標的化して、癌を治療するための方法を提供する。本開示によれば、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、対象において細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現する細胞を枯渇させる方法において用いられる。本明細書に示されるデータによって証明されるように（例えば図１１および図１２を参照）、Ｍ−ＣＳＦのような疾患関連（例えば、腫瘍由来）サイトカインに曝されたＭ２極性化マクロファージは、ＬＲＲＣ３３の強い細胞表面発現を示す。ＡＭＬ細胞上のＬＲＲＣ３３の細胞表面密度は、例えば、現在までにＡＤＣとして利用された診療所における他の癌タイプの標的と同等の発現レベルを示す。しかしながら、実施例２においてさらに説明されるように、平均して、Ｍ−ＣＳＦによって処理されたマクロファージにおけるＬＲＲＣ３３の細胞表面密度（細胞あたりの細胞表面ＬＲＲＣ３３分子の数）は、Ｔａｍ様マクロファージ亜集団において選択的に、著しく増大する。非常に制限された細胞のサブセットにおける細胞表面ＬＲＲＣ３３のそのような選択的誘導は、正常な生物学的機能に必要な疾患と関連しない亜集団に影響を及ぼさずに、疾患関連マクロファージ亜集団を選択的に標的化する機会を提供する。比較して、ＣＤ３３およびＣＤ１１５のような、骨髄性標的として用いられている（例えば、ＡＭＬ療法のため）、他の公知のマーカーは、より均一な、したがってより選択的でない、異なるマクロファージサブタイプ（例えば、Ｍ１極性化およびＭ−ＣＳＦによって誘導されたＴａｍ様マクロファージ）上の細胞表面発現を示し、これらのより広範に発現されたマーカーを標的化することは、疾患関連（例えば、ＴＡＭ）および疾患に関連しない細胞の両方に影響し得て、それにより、潜在的に不要な副作用を増大させることを示す。本明細書に記載のＬＲＲＣ３３阻害剤の使用は、疾患特性（例えば、腫瘍促進性表現型）と関連する様々な細胞型を選択的に標的化し得る。したがって、標的細胞は、限定されないが：骨髄由来単球、疾患部位における極性化／活性化マクロファージ、分化／組織特異的または常在性マクロファージ、例えば、肺胞マクロファージ（肺内）、破骨細胞（骨髄内）、ミクログリア（ＣＮＳ）、組織球（結合組織内）およびクッパー細胞（肝臓内）、ＭＤＳＣ、ならびに、活性化ＴＡＮおよびＣＡＦを含んでよい。
腫瘍におけるＬＲＲＣ３３発現は、チェックポイント阻害剤療法に応答が不十分である患者集団を同定するための有用なバイオマーカーであり得る。実際に、腫瘍内へのより大きな程度の骨髄性浸潤は、ＰＤ−１阻害剤に対するより低い応答性と相関することが報告されている。Ｍ−ＣＳＦ受容体拮抗薬に関する現行の臨床開発は、有意であるが大きくない生存／腫瘍増殖応答を示し、それは、Ｍ２マクロファージ動員の阻害によって仲介されると考えられる。しかしながらこの手法は、ＭＤＳＣを、これらの細胞はＭ−ＣＳＦ受容体阻害によって阻害されないので、標的として含まない。しかしながら、本明細書に記載される新規の手法を用いることによって、すなわち、ＬＲＲＣ３３を標的化することによって、ＴＡＭ、ＴＡＮ、ＭＤＳＣ、およびＣＡＦを含む、疾患進行に寄与する多数の細胞型が阻害され得て、それにより、臨床効果の見込みを改善する。
したがって、浸潤して疾患進行を悪化させる、ＴＧＦβを発現している免疫細胞を保有する血液学的増殖性障害および疾患組織の治療における、そのような組成物の使用が、本明細書において提供される。したがって、本発明は、患者に（インビボまたはエクスビボで）、ＬＲＲＣ３３、ＧＡＲＰ、または両方を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を、障害を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、血液学的増殖性障害を治療するための方法を含む。
本開示において提供される組成物は、免疫抑制を減少または反転させることによって宿主免疫を高める、またはブーストするために用いられてよい。免疫抑制の反転を達成するための１つの手法は、腫瘍微小環境のような特定の疾患状態において上昇される免疫抑制制御性Ｔ細胞を減少させることである。一部の実施態様では、疾患は、影響を受けた組織の慢性炎症および／または線維症とも関連し得る。一部の実施態様では、そのような方法は、宿主における腫瘍／癌細胞の免疫介在性の除去を達成することを目的とする。一部の実施態様では、腫瘍／癌細胞は、血液癌細胞のような全身性細胞または固形腫瘍のような局所性細胞である。一部の実施態様では、線維症促進性表現型および／または腫瘍関連表現型の、ＬＲＲＣ３３を発現しているマクロファージは、疾患組織／細胞内に存在する。ＬＲＲＣ３３の過剰発現は、疾患部位においてＴＧＦβの増大をもたらし得る。これらのコンテクストにおけるＬＲＲＣ３３の標的化は、臨床利益を提供し得ると考えられる。
一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３を発現している極性化マクロファージの数の上昇は、ＧＡＲＰを発現するＴｒｅｇの、疾患ニッチへの動員を促進し得る。
したがって、本発明の一部の実施態様では、組成物の投与は、疾患の進行に影響を及ぼし得て、例えば、寛解を延長させて、または、悪性腫瘍の再発を遅延させる。一部の実施態様では、これは、宿主における免疫寛容を反転させることによって、および／または、例えば免疫編集を通して癌細胞による宿主免疫の回避を潜在的に克服するための癌細胞の直接的な根絶を介して、達成される。
本発明の組成物が、宿主における免疫抑制を減少させることによって働く場合、抗体またはそのフラグメントはＴｒｅｇを抑制し得て、それにより、エフェクターＴ細胞を促進する。一部の実施態様では、Ｔｒｅｇは、樹状細胞およびマクロファージのようなＩＤＯを発現している細胞に直接反応して、Ｔｒｅｇ細胞の成熟を刺激し得る。ＩＤＯ刺激の上昇は、腫瘍微小環境への免疫抑制Ｔｒｅｇのより大きな動員と相関して、腫瘍増殖を導くことが報告されている。反対に、ＩＤＯ刺激の減少は、腫瘍に浸潤するより少ないＴｒｅｇと相関し、Ｔ細胞によって仲介される抗腫瘍免疫を高める。したがって、これらのシナリオにおいて、ＧＡＲＰによって提示されるＴＧＦβを特異的に阻害する抗体は、サプレッサー細胞を阻害することができ、それにより、エフェクターＴ細胞の抗腫瘍免疫は、疾患と戦うように維持され得る。並行して、ＧＡＲＰ依存性のＴＧＦβシグナル伝達の阻害は、腫瘍微小環境の部位へのＴｒｅｇの動員をブロックし得て、Ｔｒｅｇによる、より少ない腫瘍浸潤をもたらす。腫瘍からの抑制細胞のクリアランスは、エフェクターＴ細胞による抗腫瘍エフェクター機能を促進し得る。これらの細胞は、Ｔｒｅｇを対応する疾患微小環境へ直接的に動員および活性化し得る。ＬＲＲＣ３３を発現しているマクロファージを特異的に標的化する抗体は、したがって、免疫抑制効果を妨げるのを助け得る。
一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３を発現する標的細胞は、血液癌細胞、例えば、白血病細胞である（より詳細には以下を参照）。本明細書に開示されるように、驚くべきことに、ＬＲＲＣ３３およびＴＧＦβ１の両方とも、多くの骨髄性およびリンパ球癌細胞において選択的に上方調節されると考えられる。この選択的発現は、これらの細胞においてＬＲＲＣ３３を直接的に標的化して、例えばＡＤＣＣによって癌細胞の死滅化を誘導するための手段を提供する。
したがって、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞においてＡＤＣＣを誘導するための方法が提供される。当該方法は、ＬＲＲＣ３３に特異的に結合して、標的細胞においてＡＤＣＣを誘導することが可能なＦｃドメインを含む、抗体またはその抗原結合部分を含む有効量の医薬組成物を投与するステップを含む。この方法で標的化され得る血液学的癌（例えば、血液癌）の例は、限定されないが、白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫を含む。
本開示に係る医薬組成物が投与され得る適切な対象は、１つまたは複数の血液学的増殖性障害を患っている者および固形腫瘍または局所腫瘍を有する者（細胞表面上にＬＲＲＣ３３および／またはＧＡＲＰを発現している骨髄性および／またはリンパ系細胞の浸潤を含む）を含む。
本明細書に記載の方法によって治療される対象は、哺乳類、より好ましくはヒトであってよい。哺乳類は、限定されないが、家畜、競技動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットを含む。治療が必要なヒト対象は、上記に記載したもののようなＴＧＦβ関連の徴候を有する、そのリスクがある、または有する疑いがある、ヒト患者であってよい。そのような医薬組成物が、ＴＧＦβ関連の徴候の治療のための抗体またはその抗原結合部分を含む場合、抗体またはその抗原結合部分は、好ましくは、治療される対象において最小限の不要な免疫原性を生じさせるように設計されることが、当業者によって容易に理解される。したがって、ヒト対象に関しては、完全なヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合部分が好ましい。同様に、他の種の対象に関しては、そのような構築物は、治療に対する不要な免疫応答を避けるように、特定の種に密接に合うように改変され得る。
一部の実施態様では、対象は、単剤療法として本発明の組成物によって治療される。一部の実施態様では、本明細書に記載の組成物が投与される対象は、別の治療を受けたことがある。一部の実施態様では、対象は、本発明の組成物を含む併用療法を受ける。一部の実施態様では、対象は、骨髄移植およびまたは幹細胞移植を受けたことがある。一部の実施態様では、対象は寛解中である。一部の実施態様では、対象は、再発を経験したことがある。一部の実施態様では、対象は、標準的な治療に対して非応答性である、または、耐性になっている。
一部の実施態様では、対象は、投与量あたり、約１〜２０ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、例えば、約１ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、２ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、３ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、４ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、５ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、６ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、７ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、８ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、９ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１０ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１１ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１２ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１３ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１４ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１５ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１６ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１７ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１８ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、１９ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、または２０ｍｇのｍＡｂ／ｋｇの投与量で、本発明の組成物によって治療される。一実施態様では、投与量は、約１〜１５ｍＡｂ／ｋｇ、１〜１０ｍＡｂ／ｋｇ、または１〜５ｍＡｂ／ｋｇであってよい。特定の実施態様では、対象は、投与量あたり約１〜２０ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、例えば約１ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、２ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、３ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、４ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、５ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、６ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、７ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、８ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、９ｍｇのｍＡｂ／ｋｇ、または１０ｍｇのｍＡｂ／ｋｇの投与量で、本発明の組成物によって治療される。一部の実施態様では、投与量は、約１〜１０ｍｇのｍＡｂ／ｋｇである。本発明の組成物の投与は、任意の経路、好ましくは静脈内またはインフュージョンによるものであってよい。
一部の実施態様では、対象は、本発明の組成物によって１週間に１回治療される。一部の実施態様では、対象は、本発明の組成物によって隔週で治療される。一部の実施態様では、対象は、本発明の組成物によって４週毎に治療される。一部の実施態様では、対象は、本発明の組成物によって１ヶ月に１回治療される。
一部の実施態様では、投与は、初期段階（例えば、対象が最初に治療を開始する期間）に生じて、維持段階が続く。一実施態様では、投与頻度は、初期段階および維持段階において同じである。一実施態様では、投与頻度は、維持段階と比較して初期段階において異なる。例えば、一実施態様では、初期段階における投与は、１日目および４日目であり、維持段階において毎週または毎月の投与が続けられる。一実施態様では、初期段階における投与は、１日目および７日目であり、維持段階において毎週または毎月の投与が続けられる。一実施態様では、初期段階における投与は、１日目、４日目および７日目であり、維持段階において毎週または毎月の投与が続けられる。一実施態様では、初期段階における投与は、１日目、３日目、５日目および７日目であり、維持段階において毎週または毎月の投与が続けられる。一実施態様では、初期段階における投与は、１日目〜７日目であり、維持段階において毎週または毎月の投与が続けられる。
そのような障害は、限定されないが以下を含む。
固形腫瘍
本発明の組成物および関連する方法は、固形腫瘍を有する対象を治療するのに有用である。したがって、本発明は、対象における固形腫瘍の治療での使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤を含む医薬組成物を含み、対象への有効量の組成物の投与を含む。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ｐｒｏＴＧＦβ複合体に結合して、それにより、複合体からの活性型ＴＧＦβ増殖因子の放出を阻害する。好ましい実施態様では、ｐｒｏＴＧＦβは、ｐｒｏＴＧＦβ１である。
白血病
一部の実施態様では、本発明に従って治療される血液学的増殖性障害は、白血病である。
白血病は、骨髄およびリンパ系を含む体の血液形成組織の癌であり、急性または慢性であってよい。白血病は通常、白血球（例えば、骨髄性細胞およびリンパ系細胞）に関与する。白血病の４つの主なタイプは：急性骨髄性（または骨髄性）白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性（または骨髄性）白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ球性（またはリンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）；および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。
ＡＭＬ
一部の好ましい実施態様では、本発明に従って治療され得る血液学的増殖性障害は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。ＡＭＬは、成人を苦しめる最も一般的な白血病のタイプであり、骨髄性幹細胞または骨髄性芽球から発生し得る。世界保健機関は、ＡＭＬをいくつかのタイプにカテゴリー化している。
再発性の遺伝子異常を有する急性骨髄性白血病は、以下を含む：
・染色体８および２１の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）；］ＲＵＮＸ１／ＲＵＮＸ１Ｔ１；（ＩＣＤ−Ｏ９８９６／３）；
・染色体１６内に転置を有するＡＭＬ−［ｉｎｖ（１６）（ｐ１３．１ｑ２２）］またはその中の内部転座−［ｔ（１６；１６）（ｐ１３．１；ｑ２２）；］ＣＢＦＢ／ＭＹＨ１１；（ＩＣＤ−Ｏ９８７１／３）；
・染色体１５および１７の間に転座を有する急性前骨髄球性白血病−［ｔ（１５；１７）（ｑ２２；ｑ１２）；］ＲＡＲＡ／ＰＭＬ；（ＩＣＤ−Ｏ９８６６／３）；
・染色体９および１１の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）；］ＭＬＬＴ３／ＭＬＬ；
・染色体６および９の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（６；９）（ｐ２３；ｑ３４）；］ＤＥＫ／ＮＵＰ２１４；
・染色体３内に転置を有するＡＭＬ−［ｉｎｖ（３）（ｑ２１ｑ２６．２）］またはその中の内部転座−［ｔ（３；３）（ｑ２１；ｑ２６．２）；］ＲＰＮ１／ＥＶＩ１；
・染色体１および２２の間に転座を有する巨核芽球ＡＭＬ−［ｔ（１；２２）（ｐ１３；ｑ１３）；］ＲＢＭ１５／ＭＫＬ１；
・成熟ＮＰＭ１を有するＡＭＬ
・成熟ＣＥＢＰＡを有するＡＭＬ。
脊髄形成異常関連の変化を有するＡＭＬは、以前に記録された骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）を有していて、それから、ＡＭＬへ転換している患者、または、このタイプのＡＭＬに関する染色体異常特性を有する患者（過去に気付かれずに過ぎ去ったＭＤＳまたはＭＰＤの既往歴を有するが、細胞遺伝学はＭＤＳ／ＭＰＤ歴をまだ示唆している）を含む。このカテゴリーのＡＭＬは、高年者において最も頻繁に生じ、しばしば、より悪い予後を有する：
・複合核型を有するＡＭＬ
・不均衡な異常
−染色体７の欠失を有するＡＭＬ−［ｄｅｌ（７ｑ）；］
−染色体５の欠失を有するＡＭＬ−［ｄｅｌ（５ｑ）；］
−染色体１７内に不均衡な染色体異常を有するＡＭＬ−［ｉ（１７ｑ）／ｔ（１７ｐ）；］
−染色体１３の欠失を有するＡＭＬ−［ｄｅｌ（１３ｑ）；］
−染色体１１の欠失を有するＡＭＬ−［ｄｅｌ（１１ｑ）；］
−染色体１２内に不均衡な染色体異常を有するＡＭＬ−［ｄｅｌ（１２ｐ）／ｔ（１２ｐ）；］
−染色体９の欠失を有するＡＭＬ−［ｄｅｌ（９ｑ）；］
−染色体Ｘ内に異常を有するＡＭＬ−［ｉｄｉｃ（Ｘ）（ｑ１３）；］
・均衡した異常
−染色体１１および１６の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（１１；１６）（ｑ２３；ｑ１３．３）；］、以前の化学療法または電離放射線と関係がない
−染色体３および２１の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（３；２１）（ｑ２６．２；ｑ２２．１）；］、以前の化学療法または電離放射線と関係がない
−染色体１および３の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（１；３）（ｐ３６．３；ｑ２１．１）；］
−染色体２および１１の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（２；１１）（ｐ２１；ｑ２３）；］、以前の化学療法または電離放射線と関係がない
−染色体５および１２の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（５；１２）（ｑ３３；ｐ１２）；］
−染色体５および７の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（５；７）（ｑ３３；ｑ１１．２）；］
−染色体５および１７の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（５；１７）（ｑ３３；ｐ１３）；］
−染色体５および１０の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（５；１０）（ｑ３３；ｑ２１）；］
−染色体３および５の間に転座を有するＡＭＬ−［ｔ（３；５）（ｑ２５；ｑ３４）；］
治療関連の骨髄性新生物は、以前に化学療法および／または放射線を有したことがあり、その後にＡＭＬまたはＭＤＳを発症する患者を含む。これらの白血病は、特定の染色体異常によって特徴付けられてよく、しばしば、より悪い予後をもたらす。
骨髄性肉腫。
ダウン症に関連する骨髄性激増は、いわゆる「一過的に異常な骨髄造血」および「ダウン症と関連する骨髄性白血病」を含む。
芽球性形質細胞様樹状細胞新生物は、いわゆる「芽球性形質細胞様樹状細胞新生物」を含む。
他の方法でカテゴリー化されないＡＭＬは、上記のカテゴリーに入らない以下のようなＡＭＬのサブタイプを含む：
・最小限の分化を伴うＡＭＬ
・成熟を伴わないＡＭＬ
・成熟を伴うＡＭＬ
・急性骨髄単球性白血病
・急性単芽球性および単球性白血病
・急性赤血球白血病
・急性巨核芽球白血病
・急性好塩基性白血病
・骨髄線維症を伴う急性汎骨髄症。
Ｆｒｅｎｃｈ−Ａｍｅｒｉｃａｎ−Ｂｒｉｔｉｓｈ（ＦＡＢ）分類システムは、ＡＭＬを、白血病が発生する細胞のタイプおよびその成熟度に基づいて、Ｍ０からＭ７までの８個のサブタイプに分ける。これは、光学顕微鏡によって、および／または、細胞遺伝学を用いることによって、悪性細胞の様子を試験して、任意の根底にある染色体異常を特性化することによって行われる。サブタイプは、異なる予後および治療応答性を有する。

ＡＭＬの病態生理学は複雑である。ＡＭＬ内の悪性細胞は、骨髄芽球である。正常な造血では、骨髄芽球は、骨髄性白血球の未熟な前駆体であり；正常な骨髄芽球は、次第に成熟白血球に成熟する。しかしながらＡＭＬでは、単一の骨髄芽球は、細胞をその未熟段階に停止させて分化を妨げる遺伝的変化を蓄積する。そのような突然変異のみでは白血病を生じさせないが；そのような「分化阻止」が、激増を制御する遺伝子を破壊する他の突然変異と合わせられると、結果は、細胞の未熟クローンの無防備な増殖であり、ＡＭＬの臨床的存在（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｎｔｉｔｙ）をもたらす。
ＡＭＬの多様性および不均質の多くは、白血病性の転換が、分化パスウェイに沿った多くの異なるステップで生じ得るためである。ＡＭＬに関する現代の分類スキームは、白血病細胞（および白血病）の特性および挙動が、分化が停止された段階に依存し得ることを認識している。
特定の染色体異常は、ＡＭＬを有する多くの人々において見られ得て；染色体異常のタイプは、しばしば、予後的意義を有する。染色体転座は、異常な融合タンパク質、通常は、転写因子をコードし、その変更された特性は、「分化阻止」を引き起こし得る。例えば、急性前骨髄球性白血病では、ｔ（１５；１７）転座は、いくつかの骨髄性特異的遺伝子のプロモーター内のレチノイン酸受容体エレメントに結合して骨髄性分化を阻害するＰＭＬ−ＲＡＲα融合タンパク質を産生する。
臨床的な前兆（ｓｉｇｎ）およびＡＭＬの症候は、白血病性クローン細胞の増殖に起因し、骨髄内の正常な血液細胞の発達を除去（ｄｉｓｐｌａｃｅ）または邪魔する傾向がある。このことは、好中球減少症、貧血、および血小板減少症を導く。ＡＭＬの症候は、次々に、しばしば、これらの正常な血液エレメントの少ない数に起因する。珍しい事例では、ＡＭＬを有する人は、緑色腫、すなわち、骨髄の外側の白血病細胞の固形腫瘍を発症し得て、その位置に応じて様々な症候を引き起こし得る。
典型的に、ＡＭＬの第一線の治療は、主に化学療法からなり、２つの段階に分けられる：導入および寛解後（または強化）療法。導入療法の目標は、白血病細胞の数を検出できないレベルまで減少させることによって完全寛解を達成することであり；強化療法の目標は、任意の残りの検出できない疾患を除去して治癒を達成することである。造血幹細胞移植は通常、導入化学療法が失敗した場合、または、ぶり返した後に検討されるが、ハイリスクの疾患を有する人のための最前線の治療として、移植が用いられることもある。ＡＭＬにおいてチロシンキナーゼ阻害剤を用いる試みが継続している。
最近では、ゲムツズマブオゾガマイシンが、ＣＤ３３陽性の再発または難治性ＡＭＬの治療に関してＦＤＡによって承認された。ゲムツズマブは、カリケアマイシンのクラス由来の細胞傷害剤に結合されたＣＤ３３に対するモノクローナル抗体である。ＣＤ３３またはシグレック−３（シアル酸結合Ｉｇ様レクチン３、ＳＩＧＬＥＣ３、ＳＩＧＬＥＣ−３、ｇｐ６７、ｐ６７）は、典型的に、骨髄性細胞表面抗原と考えられるが、活性化されたＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のような一部のリンパ系細胞上にも見られる。ＣＤ３３は、ほとんどの白血病性芽細胞においても発現されて、この抗原を有用な治療的標的にさせるが、その発現は、正常な造血細胞においても観察されるが発現は幹細胞の成熟とともに一般に少なくなる。
抗−ＣＤ３３療法と関連する一般的な副作用は、悪寒、発熱、吐き気および嘔吐を含んだ。重度の副作用は、重度の骨髄抑制（骨髄の活性抑制、様々な血液細胞の形成に関与する［患者の９８％で見られる］）、呼吸器系の障害、腫瘍溶解症候群、ＩＩＩ型過敏性、静脈閉塞、感染、および死を含んだ。承認された薬物は、マイロターグ（登録商標）として市販され、ラベルは、重度または致命的な肝臓の静脈閉塞疾患（ＶＯＤ）（類洞閉塞症候群（ＳＯＳ）としても知られる）を含む肝毒性に関する枠付き警告文を含む。最も一般的な有害反応（＞１５％）は、出血、感染、発熱、吐き気、嘔吐、便秘、頭痛、ＡＳＴの増大、ＡＬＴの増大、皮疹、および粘膜炎であった。ゲムツズマブオゾガマイシンと関連する重度の有害反応は、肝毒性（静脈閉塞疾患を含む）、インフュージョン関連の反応（アナフィラキシーを含む）、および出血である。
本開示の発明者らは、ＣＤ３３のような広範な骨髄性マーカーの標的化と関連する毒性は、発現が、血小板を含む骨髄性系統の正常／健康細胞を除いて、疾患関連細胞に、より制限される標的を選択することによって、効果的に減少され得ると検討した。ＬＲＲＣ３３発現が、骨髄性細胞の制限されたサブセットに制限されるという認識は、抗−ＣＤ３３療法のような既存の手法によって影響を受ける正常／健康細胞に負の影響を及ぼさずに、疾患関連細胞をより狭く標的化する機会を提供する。
したがって、ＡＭＬ病理学の不均質は、普遍的な治療をチャレンジングなものにさせているが、ＬＲＲＣ３３がＡＭＬ細胞において高く発現されるという知見は、新規の治療的機会を有利に提供する。したがって、本発明は、ＡＭＬの治療のためのＬＲＲＣ３３阻害剤の使用を含む。本発明に係るＬＲＲＣ３３阻害剤は、ヒト対象（例えば、成人および小児対象）におけるＡＭＣ（例えば、新たに診断された／デノボＡＭＬ、再発ＡＭＬ、および難治性ＡＭＬ）の治療において用いられる。一部の実施態様では、治療方法は、ＬＲＲＣ３３に関する結合ドメインおよびＦｃＲに結合するＦｃドメインを含み、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現する標的細胞のＡＤＣＣをトリガーすることが可能な、抗体またはそのフラグメントを含む有効量の医薬組成物を、ＡＭＬを有する患者に投与するステップを含む。そのような治療は、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞、例えば、循環中および骨髄内の両方のＡＭＬ細胞を選択的に標的化して死滅化することを目的とする。そのような治療は、チロシンキナーゼ阻害剤および／または移植（例えば、骨髄移植、幹細胞移植など）のようなさらなる治療とともに施されてよい。
ＬＲＲＣ３３を発現している細胞の標的化は、ＣＤ３３を発現している細胞の標的化と比較して、有害な副作用の減少を示す可能性がある、より安全な治療的手法を提供すると考えられる。したがって、本開示のＬＲＲＣ３３阻害剤は、ヒト対象における現行のＡＭＬ療法（抗−ＣＤ３３療法）と関連する毒性を減少させるための方法において用いられる。抗−ＣＤ３３療法と比較して、ＬＲＲＣ３３阻害剤療法は、限定されないが、以下を含む、より少ない有害事象を生じさせることが予期される：肝毒性（例えば静脈閉塞肝臓疾患）；インフュージョン関連の反応（例えばアナフィラキシー）；出血（例えば、延長された血小板減少症に起因する）；ＱＴ間隔延長；感染（より低い頻度および／またはより低い重症度）；死（すなわち、生存の増大）および、胚胎児毒性。したがって、本明細書に記載される使用のための（特に、ＡＭＬのような白血病の治療での使用のための）ＬＲＲＣ３３阻害剤は、抗−ＣＤ３３療法と比較して減少した有害な副作用（例えば、上述のものから選択される）を引き起こし得る。本明細書に記載される使用のための（特にＡＭＬのような白血病の治療での使用のための）ＬＲＲＣ３３阻害剤は、例えば有効量のＬＲＲＣ３３阻害剤および抗−ＣＤ３３療法を用いた場合、抗−ＣＤ３３療法と比較して減少した毒性を引き起こし得る。抗−ＣＤ３３療法は、ゲムツズマブオゾガマイシンであってよい。ＡＭＬは、ＣＤ３３陽性の再発または難治性ＡＭＬであってよい。加えて、ＬＲＲＣ３３阻害剤療法は、不利なリスク細胞遺伝学を有する患者のサブグループにおける無イベント生存（ｅｖｅｎｔ−ｆｒｅｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ）を改善し得る。
患者において細胞のより選択的な亜集団を標的化するその能力に起因して、ＬＲＲＣ３３阻害剤療法は、現在利用可能な治療よりも改善された有効性を提供し得る。有効性は、例えば、誘導の失敗、ぶり返し、または任意の原因による死までのランダム化の日から測定される無イベント生存に基づいて実証され得る。ＬＲＲＣ３３阻害剤は、新たに診断されたＡＭＬ（単剤療法または併用療法のいずれかを受ける）を有する者、再発および／または難治性ＡＭＬを有する者のような患者集団において、全生存の改善を達成し得ると考えられる。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤療法は、患者集団内の無イベント生存のカプランマイヤープロットのような任意の適切な手段によって決定される、２４月における少なくとも０．４（例えば、０．４０、０．４５、０．５０、０．５５、０．６０など）の生存可能性を達成する。
ＣＭＬ
一部の実施態様では、本発明に従って治療され得る血液学的増殖性障害は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。ＣＭＬは、骨髄における主に骨髄性細胞の増大し無調節の増殖および血液中のこれらの細胞の蓄積によって特徴付けられる白血病の形態である。ＣＭＬは、成熟顆粒球（好中球、好酸球および好塩基球）およびそれらの前駆体の激増が見られるクローンの骨髄幹細胞障害である。それは、フィラデルフィア染色体と呼ばれる特徴的な染色体転座と関連する骨髄増殖性疾患の一種である。ＣＭＬは、今では主として、標的化チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）（Ｂｃｒ−Ａｂｌ）によって治療され、劇的に改善された長期の生存率をもたらしている。
それにもかかわらず、かなりの割合の患者集団が、チロシンキナーゼ阻害剤を含む標準的な治療に対して非応答性または抵抗性である。したがって、本明細書に記載されるＬＲＲＣ３３標的化療法は、ＣＭＬ患者に関する効果的な治療選択肢を提供し得る。したがって、本発明は、ＣＭＬの治療のためのＬＲＲＣ３３阻害剤の使用を含む。一部の実施態様では、治療方法は、ＬＲＲＣ３３に関する結合ドメインおよびＦｃＲに結合するＦｃドメインを含み、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現する標的細胞のＡＤＣＣをトリガーすることが可能な、抗体またはそのフラグメントを含む有効量の医薬組成物を、ＣＭＬを有する患者に投与するステップを含む。そのような治療は、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞、例えば、循環中および骨髄内の両方のＡＭＬ細胞を選択的に標的化して死滅化することを目的とする。そのような治療は、チロシンキナーゼ阻害剤および／または移植（例えば、骨髄移植、幹細胞移植など）のようなさらなる治療とともに施されてよい。
一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＣＭＬを治療するためのＡＤＣ剤として用いられる。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、新たに診断された、再発または難治性ＣＭＬを有する患者の治療のために用いられる。骨髄性細胞を広く標的化する治療と比較して、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、正常な骨髄性細胞を攻撃しない。したがって、ＬＲＲＣ３３は、疾患関連細胞に関するより選択的な標的であり、および他の治療と比較して、改善された安全性および耐容性（減少された毒性）を提供し得る。
ＡＬＬ
一部の実施態様では、本発明に従って治療され得る血液学的増殖性障害は、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）である。急性リンパ芽球性白血病は、急性リンパ球性白血病または急性リンパ球白血病（ＡＬＬ）としても知られ、急性形態の白血病、すなわち白血球の癌であり、リンパ芽球として知られる癌性の未成熟白血球の過剰生産および蓄積によって特徴付けられる。ＡＬＬを有する人々では、リンパ芽球は骨髄内で過剰生産されて、継続的に倍加して、骨髄における正常細胞（例えば赤血球および白血球および血小板）の生産を阻害することによって、および、他の臓器に広まる（浸潤する）ことによって、損傷および死をもたらす。ＡＬＬは、幼年時代に最も一般的である。
一部の癌関連遺伝子の機能性生殖細胞系突然変異は、家族性ＡＬＬにおいて見られていて、または、放射線曝露を伴う場合は富化されていて（例えば、ＰＡＸ５、ＥＴＶ６およびＣＤＫＮ２Ａ）、小さな割合の人々に関するＡＬＬ感受性を説明し、一方で、大きなゲノムワイドの関連性研究は、様々な集団の間で、ＡＲＩＤ５Ｂ、ＩＫＺＦ１、ＣＥＢＰＥ、ＰＩＰ４Ｋ２Ａ、ＧＡＴＡ３、およびＣＤＫＮ２Ａ座における一塩基多型（ＳＮＰｓ）を含むＡＬＬリスクに対する多数の遺伝性体質を明らかにした。
異常なリンパ球の表面マーカーの免疫表現型検査によって同定され得るＡＬＬの３つの治療的に別個のカテゴリーは：Ｂリンパ芽球性ＡＬＬ（このカテゴリーは、正常なＢ細胞発達の段階とＡＬＬ細胞免疫表現型の相関に従って細分化され得る）；バーキットＡＬＬ（ＡＬＬ−Ｌ３に対応）；および、Ｔ細胞ＡＬＬである。ＡＬＬの早期検出が、効果的な治療のために極めて重要である。目標は典型的に、永続する寛解を誘導することであり、体内の検出可能な癌細胞の不存在として定義される（通常、骨髄内の５％未満の芽細胞）。急性白血病に関する治療は、化学療法、ステロイド、放射線療法、強力な併用治療（骨髄または幹細胞移植を含む）、および増殖因子を含んでよい。
寛解誘導の目標は、ほとんどの腫瘍細胞を急速に死滅化して、患者を寛解させることである。これは、正常血液細胞、骨髄内の５％未満の白血病性芽球の存在、および血液由来の腫瘍細胞の不存在、および疾患の他の前兆および症候の不存在として定義される。中枢神経系（ＣＮＳ）予防は、治療のこの段階中に始めて、強化／増強期間中、継続するべきである。理論的根拠は、診断における成人患者の１０％〜４０％におけるＣＮＳ関与の存在に基づく。プレドニゾロンまたはデキサメタゾン、ビンクリスチン、アスパラギナーゼ（小児患者においてより良好な寛容）、およびダウノルビシン（成人ＡＬＬにおいて用いられる）の組み合わせは、寛解を誘導するために用いられる。中枢神経系の予防は、照射、シタラビン＋メトトレキサート、またはリポソームシタラビンを介して達成され得る。フィラデルフィア染色体陽性ＡＬＬでは、最初の誘導治療の強度は、伝統的に与えられているよりも低くてよい。
治療の強化／増強段階において、高い投与量の静脈内多剤化学療法が、腫瘍負荷をさらに減少させるために用いられる。ＡＬＬ細胞は、ＣＮＳに浸透することがあるので、ほとんどのプロトコルは、ＣＮＳ流体への化学療法の送達を含む（例えば、髄腔内化学療法）。一部の中枢は、オマヤレザバー（頭皮の下に外科的に置かれて、ＣＮＳ流体へ薬物を送達して様々な試験のためにＣＮＳ流体を抽出するために用いられるデバイス）を通して薬物を送達する。他の中枢は、試験および治療送達のために、必要に応じて多数の腰椎穿刺を行なう。典型的な増強プロトコルは、ビンクリスチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、エトポシド、チオグアニンまたはメルカプトプリン（異なる組み合わせでブロックとして与えられる）を用いる。ＣＮＳ保護のために、髄腔内メトトレキサートまたはシタラビンが、通常、頭蓋骨−脊椎照射（頭部および脊椎に対する放射線療法の使用）と組み合わせてまたは組み合わせずに用いられる。中枢神経系の再発は、ヒドロコルチゾン、メトトレキサート、およびシタラビンの髄腔内投与によって治療される。
維持段階中、目標は、寛解誘導および増強レジメンによって死滅しなかった任意の残りの細胞を死滅させることである。そのような細胞はほとんどないが、それらは根絶されないと再発を引き起こす。この目的のために、毎日の経口メルカプトプリン、１週間に１回の経口メトトレキサート、１ヶ月に１回の５日コースの静脈内ビンクリスチンおよび経口コルチコステロイドが通常用いられる。維持療法の長さは２〜３年である。
したがって、本発明は、ＡＬＬの治療のためのＬＲＲＣ３３阻害剤の使用を含む。一部の実施態様では、治療方法は、ＬＲＲＣ３３に関する結合ドメインおよびＦｃＲに結合するＦｃドメインを含み、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現する標的細胞のＡＤＣＣをトリガーすることが可能な、抗体またはそのフラグメントを含む有効量の医薬組成物を、ＡＬＬを有する患者に投与するステップを含む。そのような治療は、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞、例えば、循環中および骨髄内の両方のＡＬＬ細胞を選択的に標的化して死滅化することを目的とする。そのような治療は、チロシンキナーゼ阻害剤および／または移植（例えば、骨髄移植、幹細胞移植など）のようなさらなる治療とともに施されてよい。
一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＡＬＬを治療するためのＡＤＣ剤として用いられる。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、新たに診断された、再発または難治性Ｂ細胞前駆体急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を有する患者の治療のために用いられる。成熟Ｂリンパ球を標的化する抗−ＣＤ２２療法のような現行の治療と比較して、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、正常Ｂ細胞を攻撃しない。このことは、ＦＡＣＳによって測定されるように、健康な個体から単離された正常Ｂ細胞が、上昇した細胞表面ＬＲＲＣ３３タンパク質を示さないことを示すデータによって支持される。このことは、ＬＲＲＣ３３が、疾患関連細胞に関してより選択的な標的であり、抗−ＣＤ２２療法と比較して改善された安全性および耐容性（減少された毒性）を提供し得ることを示す。
細胞遺伝学（癌細胞の染色体における特徴的で大きな変化の研究）は、成果の重要な予測である。一部の実施態様では、適切な患者集団は、以下の細胞遺伝学的サブタイプの１つまたは複数に入る：
・染色体９および２２（フィラデルフィア染色体として知られる）の間の転座は、ＡＬＬの小児事例の５％および成人の約２０％で生じる。
・染色体４および１１の間の転座は、事例の約４％で生じ、１２ヶ月未満の幼児において最も一般的である。
・染色体の全ての転座が、不十分な予後をもたらすわけではない。一部の転座は相対的に好適である。例えば、高二倍性（＞５０染色体）は、良好な予後因子である。
・ゲノムワイドのコピー数変化は、従来の細胞遺伝学的または仮想核型分析によって評価され得る。ＳＮＰアレイ仮想核型分析は、コピー数変化およびＬＯＨ状態を検出することができ、一方で、アレイＣＧＨは、コピー数変化のみを検出することができる。コピーニュートラルＬＯＨ（後天的片親性二倍体）は、ＡＬＬ内の重要な遺伝子座、例えばＣＤＫＮ２Ａ遺伝子において報告されていて、予後的意義を有する。ＳＮＰアレイ仮想核型分析は、コピーニュートラルＬＯＨを容易に検出することができる。アレイＣＧＨ、ＦＩＳＨ、および従来の細胞遺伝学は、コピーニュートラルＬＯＨを検出することができない。
本発明によって提供される治療方法は、ＡＬＬを治療するためのさらなる療法、例えば化学療法、ステロイド、放射線療法、強力な併用治療（骨髄または幹細胞移植を含む）、増殖因子および免疫療法と組み合わせてよい。
ＣＬＬ
一部の実施態様では、本発明に従って治療され得る血液学的増殖性障害は、慢性リンパ球白血病（ＣＬＬ）としても知られるＢ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）である。ＣＬＬは、成人における白血病の一般的なタイプである。ＣＬＬは、Ｂ細胞リンパ球に影響を及ぼし、それは、骨髄内で生じ、リンパ節内で発達して、通常、抗体を産生することによって感染と戦う。
ＣＬＬでは、Ｂ細胞は無制御な様式で増殖して、骨髄および血液内に蓄積して、そこで健康な血液細胞を押し出す。ＣＬＬは、Ｂ細胞リンパ腫の一種である小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）の段階であり、主にリンパ節内に存在し得る。ＣＬＬおよびＳＬＬは、同一の基礎疾患と考えられる。
併用化学療法レジメンは、新たに診断されたＣＬＬおよび再発ＣＬＬの両方において効果的である。アルキル化剤（シクロホスファミド）とフルダラビンの併用は、単剤よりも高い応答速度および長い進行フリーの生存を生じ、以下を含む：ＦＣ（フルダラビンとシクロホスファミド）、ＦＲ（フルダラビンとリツキシマブ）、ＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミド、およびリツキシマブ）、およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロン）。
ＦＣＲによる化学免疫療法は、良好な体力に関して選択されたＣＬＬ患者での大きなランダム化試験において、応答速度、進行フリーの生存、および全生存を改善することが示されている。ＣＬＬに関して承認されたアルキル化剤は、ベンダムスチンおよびシクロホスファミドを含む。
本発明は、ＣＬＬの治療のためのＬＲＲＣ３３阻害剤の使用を含む。一部の実施態様では、治療方法は、ＬＲＲＣ３３に関する結合ドメインおよびＦｃＲに結合するＦｃドメインを含み、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現する標的細胞のＬＲＲＣ３３をトリガーすることが可能な、抗体またはそのフラグメントを含む有効量の医薬組成物を、ＣＬＬを有する患者に投与するステップを含む。そのような治療は、ＬＲＲＣ３３を発現している細胞、例えば、循環中および骨髄内の両方のＣＬＬ細胞を選択的に標的化して死滅化することを目的とする。そのような治療は、上記に挙げられたもののようなさらなる療法とともに施されてよい。
一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＣＬＬを治療するためのＡＤＣ剤として用いられる。一部の実施態様では、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、新たに診断された、再発または難治性ＣＬＬを有する患者の治療のために用いられる。成熟Ｂリンパ球を標的化する治療と比較して、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、正常Ｂ細胞を攻撃しない。このことは、ＦＡＣＳによって測定されるように、健康な個体から単離された正常Ｂ細胞が、上昇した細胞表面ＬＲＲＣ３３タンパク質を示さないことを示すデータによって支持される。このことは、ＬＲＲＣ３３が、疾患関連細胞に関するより選択的な標的であり、他の治療と比較して、改善された安全性および耐容性（減少された毒性）を提供し得ることを示す。
多発性骨髄腫
一部の実施態様では、本発明に従って治療され得る血液学的増殖性障害は、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。ＭＭは、形質細胞骨髄腫としても知られ、形質細胞（通常は抗体の産生を担う白血球の一種）の癌である。進行段階では、骨の痛み、出血、頻繁な感染、および貧血が生じ得る。合併症は、アミロイドーシスを含んでよい。多発性骨髄腫は治療可能であるが一般に不治であると考えられる。寛解は、ステロイド、化学療法、サリドマイドまたはレナリドマイド、および幹細胞移植によってもたらされ得る。骨病変による痛みを減少させるために、ビスホスホネートおよび放射線療法が用いられることがある。
疑わしい多発性骨髄腫の精密検査は、骨格検査を含む。これは、頭蓋骨、中軸骨格および近位長骨の一連のＸ線である。骨髄腫活性は、「溶解病変」として現れることがあり（再吸収に起因して正常な骨の局所的消失を有する）、頭蓋骨Ｘ線では「パンチアウト病変」として現れる（ごましお頭蓋Ｘ線像）。磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）は、溶解病変の検出において、単純なＸ線よりも感度が高く、特に脊椎疾患が疑わしい場合に、骨格検査に取って代わってよい。時折、軟組織形質細胞腫のサイズを測定するためにＣＴスキャンが行なわれる。骨スキャンは典型的に、骨髄腫患者の精密検査においていかなる追加の価値もない（新たな骨形成はなく；骨スキャン上にあまりよく見えない溶解病変）。
骨髄バイオプシーは通常、形質細胞が占める骨髄のパーセンテージを見積もるために行なわれる。このパーセンテージは、骨髄腫に関する診断基準において用いられる。免疫組織化学（表面タンパク質に対する抗体を用いて特定の細胞型を染色する）は、細胞質内に、および時折、細胞表面上に、免疫グロブリンを発現する形質細胞を検出することができて；骨髄腫細胞は典型的に、ＣＤ５６、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＣＤ３１９陽性およびＣＤ１９およびＣＤ４５陰性である。骨髄腫特異的ＦＩＳＨおよび仮想核型を含む細胞遺伝学的が、予後目的のために骨髄腫において行なわれてもよい。
一部の実施態様では、患者は、骨髄腫細胞に関するマーカーとして、表面抗原ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）および／またはＣＤ１３８を用いて診断される。他の有用な実験試験は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ（免疫グロブリン）の定量的測定（免疫不全麻痺を探すため）、およびβ２ミクログロブリン（予後情報を提供する）を含む。末梢血塗抹上に、赤血球の連銭形成が一般に見られるが、これは特異的でない。
フリー軽鎖の測定のための市販免疫測定法の最近の導入は、特に、パラプロテインを電気泳動によって正確に測定することが困難である場合（例えば軽鎖骨髄腫において、またはパラプロテインレベルが非常に低い場合）、疾患進行および治療に対する応答の監視における改善を潜在的に提供する。初期の研究は、フリー軽鎖の測定は、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）から多発性骨髄腫への進行のリスクの評価のために、他のマーカーとともに用いてもよいことも示唆する。
このアッセイ（血清フリー軽鎖アッセイ）は、最近になって、スクリーニング、診断、予後、および形質細胞悪液質の監視のために、国際的な骨髄腫研究グループ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｙｅｌｏｍａ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ）によって推奨されている。
骨髄腫の予後は、様々な危険因子に応じて広く変化する。メイヨー・クリニックは、骨髄腫およびリスク適合療法のためのメイヨー階層化（Ｍａｙｏ Ｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｙｅｌｏｍａ ａｎｄ Ｒｉｓｋ−ａｄａｐｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ）（ｍＳＭＡＲＴ）と呼ばれるリスク階層化モデルを開発していて、患者をハイリスクおよび標準リスクのカテゴリーに分ける。染色体１３の欠失または低二倍性（従来の細胞遺伝学的による）、ｔ（４；１４）、ｔ（１４；１６）または１７ｐ−（分子遺伝学研究による）を有する患者、または、高い形質細胞ラベリングインデックス（３％以上）を有する患者は、ハイリスク骨髄腫を有すると考えられる。
リンパ腫
一部の実施態様では、本発明に従って治療され得る血液学的増殖性障害は、リンパ腫である。リンパ腫は、リンパ球から発生する血液細胞腫瘍のグループである。リンパ腫の多くのサブタイプが存在するが、リンパ腫の２つの主なカテゴリーは、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。世界保健機関（ＷＨＯ）は、リンパ腫のタイプとして２つのさらなるカテゴリー：多発性骨髄腫および免疫増生性疾患を含む。リンパ腫の約９０％が非ホジキンリンパ腫である。
ホジキンリンパ腫に関する危険因子は、エプスタイン・バーウイルスによる感染および家族における疾患歴を含む。一般的なタイプの非ホジキンリンパ腫に関する危険因子は、自己免疫疾患、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ヒトＴリンパ球向性ウイルスによる感染、免疫抑制薬、および一部の農薬を含む。それから、癌が広がっているかどうか、そして、どこに広がっているか、決定するために医用撮像が行なわれてよい。リンパ腫は、肺、肝臓、および／または脳へ広がることが最も多い。
治療は、以下：化学療法、放射線療法、標的療法、および外科的処置の１つまたは複数を含んでよい。一部の実施態様では、対象は、少なくとも１つのさらなるそのような療法を受けている。
分類、治療および予後は、以下に従って異なってよく：ホジキンリンパ腫であるか否か；複製している細胞がＴ細胞またはＢ細胞であるかどうか；細胞が生じる部位；リンパ腫は、中枢神経系、しばしば、髄膜内の脳の周りにも広がってよい（リンパ腫性髄膜炎（ＬＭ）として知られる）。
ホジキンリンパ腫は、最も一般に知られるタイプのリンパ腫の１つであり、他の形態のリンパ腫とは、その予後およびいくつかの病理学的特徴が異なる。ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫への分割は、より古い分類システムのいくつかにおいて用いられる。ホジキンリンパ腫は、リード−スタンバーグ細胞と呼ばれる細胞の一種の存在によって明白である。
非ホジキンリンパ腫は、ホジキンリンパ腫を除く全てのリンパ腫と定義されて、ホジキンリンパ腫よりも一般的である。多種多様のリンパ腫がこのクラスであり、由来、関与する細胞のタイプ、および予後は、タイプによって異なる。非ホジキンリンパ腫の発生率は、年齢とともに増大する。それはさらに、いくつかのサブタイプに分けられる。
２００１年に公表されて２００８年にアップデートされたＷＨＯ分類は、「改定欧州−米国リンパ腫分類（ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｕｒｏｐｅａｎ−Ａｍｅｒｉｃａｎ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」（ＲＥＡＬ）内にある基礎に基づく。このシステムは、細胞型（すなわち腫瘍に最も似ている正常な細胞型）および決定的な表現型、分子、または細胞遺伝学的特徴によってリンパ腫をグループ化する。５グループが表に示される。ホジキンリンパ腫は、著しく異常ではあるが成熟Ｂ細胞系統のリンパ球の腫瘍であると認識されるが、ＷＨＯおよび以前の分類内で別個に検討される。
リンパ腫の多くの形態のうち、一部はインドレントとカテゴリー化されて（例えば小リンパ球性リンパ腫）、治療がなくても長寿に適合し、一方で他の形態はアグレッシブであり（例えばバーキットリンパ腫）、急速な悪化および死をもたらす。しかしながら、アグレッシブのリンパ腫の大部分は、治療に良好に応答して治癒可能である。したがって予後は、疾患の正しい診断および分類に依存し、病理学者（通常、血液病理学者）によるバイオプシーの検査後に実証される。
ＷＨＯ分類に従ったリンパ腫のサブタイプは：成熟Ｂ細胞新生物；成熟Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞新生物；前駆体リンパ球新生物；ホジキンリンパ腫；免疫不全関連のリンパ増殖性障害を含む。
骨髄線維症
一部の実施態様では、本発明に従って治療され得る血液学的増殖性障害は、骨髄線維症のような骨髄増殖性障害を含む。ＢＣＲ−ＡＢＬ（Ｐｈ）陰性慢性骨髄増殖性障害のいわゆる「古典的な」グループは、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）および原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）を含む。
骨髄線維症は、慢性白血病、例えば、体内の血液形成組織に影響を及ぼす癌の一種であり、造血（血液細胞の構成要素の形成）のクローン腫瘍性障害であり、体の正常な血液細胞の生産を破壊する。結果は骨髄内の広範囲の瘢痕であり、重度の貧血、虚弱、疲労、および、しばしば脾臓肥大をもたらす。それは骨髄増殖性障害（一部の段階において過剰な細胞が生産される骨髄の疾患）の１つである。異常な造血細胞クローンによる（特に巨核球による）、線維芽細胞増殖因子のようなサイトカインの生産は、コラーゲン線維症を介して、結合組織による骨髄の造血性組織の置換を導く。造血性組織の低減は、新しい血液細胞を産生する患者の能力を損なわせて、進行性汎血球減少症、全ての血液細胞タイプの不足をもたらす。しかしながら、線維芽細胞の激増およびコラーゲンの沈着は二次的現象であり、線維芽細胞自体は異常な細胞クローンの部分ではない。
骨髄線維症は骨髄内の異常な血液幹細胞によって引き起こされ得る。異常な幹細胞は、急速に増殖して骨髄に取って代わる（ｔａｋｅ ｏｖｅｒ）成熟および低分化の細胞を産生して、線維症（瘢痕組織形成）および慢性炎症の両方を引き起こす。
原発性骨髄線維症は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、トロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）およびカルレチクリン（ＣＡＬＲ）における突然変異と関連し、ＪＡＫ−ＳＴＡＴパスウェイの構成的活性化を導き得て、骨髄の進行性の瘢痕、すなわち線維症が生じる。造血性細胞は、他の領域、特に肝臓および脾臓への移行が強いられるので、患者は、髄外造血、すなわち、骨髄以外の部位において生じる血液細胞形成を発生し得る。これは、これらの臓器の肥大をもたらす。肝臓では、異常なサイズは肝腫大と呼ばれる。脾臓の肥大は、脾腫大と呼ばれ、汎血球減少症、特に血小板減少症および貧血を引き起こすのにも寄与する。髄外造血の別の合併症は、変形赤血球症、すなわち異常な形をした赤血球の存在である。
骨髄線維症における髄外造血の主な部位は脾臓であり、骨髄線維症を患っている患者において、通常著しく肥大している。脾臓の大規模な肥大の結果として、多数の被膜下梗塞が脾臓においてしばしば生じて、脾臓への酸素供給が遮られることに起因して、部分的または完全な組織死が起きることを意味する。細胞レベルでは、脾臓は、赤血球前駆体、顆粒球前駆体および巨核球を含み、巨核球が、その数および異常な形で顕著である。巨核球は、この状態において見られる二次的線維症の発生に関与し得る。
ＴＧＦβは、骨髄線維症の病因の線維性態様に関与し得ることが示唆されている（例えば、Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｍｙｅｌｏｆｉｂｒｏｓｉｓ：ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＴＧＦβ」（２０１６）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ ３：５を参照）。原発性骨髄線維症における骨髄病理学は、線維症、血管新生（ｎｅｏａｎｇｅｏｇｅｎｅｓｉｓ）および骨硬化症によって特徴付けられて、線維症は、ＥＣＭ内に沈着されるコラーゲンの産生の増大と関連する。
ＴＧＦβが、白血病性骨髄ニッチの構成要素であるという知見に基づき、ＴＧＦβ阻害剤による骨髄微小環境の標的化が、影響を受けた組織における局所的ＴＧＦβ利用率を調節する提示分子を発現している白血病細胞を減少させるための有望な手法であり得ると考えられる。
したがって、本発明の一態様は、原発性骨髄線維症を治療する方法に関する。当該方法は、原発性骨髄線維症を患っている患者に、ＴＧＦβ利用率の減少を引き起こすＴＧＦβ阻害剤を含む治療的有効量の組成物を投与するステップを含む。
一部の実施態様では、ＴＧＦβ阻害剤は、不活性型（例えば、潜在型）ｐｒｏＴＧＦβ複合体に結合する抗体またはその抗原結合部分であり、それにより、複合体からの活性型または成熟ＴＧＦβの放出を妨げ、活性化ステップを効果的に阻害する。一部の実施態様では、そのような抗体または抗原結合部分は、ＬＲＲＣ３３、ＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３または任意のそれらの組み合わせと関連するｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する。一部の実施態様では、抗体またはその部分は、ＬＲＲＣ３３またはＧＡＲＰのいずれかと関連する（ＬＴＢＰ１またはＬＴＢＰ３とは関連しない）ｐｒｏＴＧＦβ複合体に選択的に結合する。一部の実施態様では、抗体またはその部分は、ＬＲＲＣ３３と関連するｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する。一部の実施態様では、抗体またはその部分は、ＧＡＲＰと関連するｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合する。
上述した実施態様に代え又は加えて、ＴＧＦβ阻害剤は、ＬＲＲＣ３３またはＧＡＲＰに結合する抗体またはその抗原結合部分であり、さらなるエフェクター機能に関するドメインを含む。一部の実施態様では、さらなるエフェクター機能に関するドメインは、標的細胞においてＡＤＣＣを仲介するＦｃまたはＦｃ様ドメインであってよい。
上述した実施態様に代え又は加えて、抗体またはその抗原結合部分は、目的の「ペイロード」を保有するためのさらなる部分を含んでよい。適切なペイロードの例は、限定されないが：治療薬／薬物、毒素、マーカーおよび検出／イメージングラベルなどを含む。そのようなペイロードは、化学的物質、小分子、ポリペプチド、核酸、放射性同位体などであってよい。
骨髄線維症は、多数の影響を受けた組織または臓器において病理の多くの局面を示す進行性疾患であるので、治療的手法は疾患進行に応じて異なってよい。例えば、疾患の一次部位（骨髄）では、適切な治療は、本明細書に記載のＬＲＲＣ３３阻害剤（ＬＲＲＣ３３を発現している造血細胞を特異的に標的化する）を含むと考えられる。これは、ＬＲＲＣ３３によって提示されたｐｒｏＴＧＦβ複合体に特異的に結合して患者におけるＴＧＦβの活性化を阻害する抗体を含む組成物の投与によって達成され得る。それはまた、ＬＲＲＣ３３に特異的に結合して患者における標的細胞の死滅を誘導する抗体を含む組成物の投与によっても達成され得る。あるいは、これらの手法を組み合わせて、ＴＧＦβ活性化阻害剤であって細胞の細胞毒性を仲介する追加の部分も含む抗体を使用してよい。例えば、追加の部分は、ＡＤＣＣを誘導するＦｃまたはＦｃ様ドメインまたはペイロードとして抗体にコンジュゲートされた毒素（例えば、ＡＤＣ）であってよい。
骨髄線維症は白血病の一種と考えられ得るが、二次的線維症の臨床兆候（ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ）によって特徴付けられる。ＴＧＦβは、ＥＣＭ恒常性の局面を調節することが知られているので、その調節不全は組織線維症をもたらし得て、一部の実施態様では、ＥＣＭと関連するＴＧＦβ活性を阻害することが望ましいと考えられる。したがって、ＬＴＢＰ（例えばＬＴＢＰ１およびＬＴＢＰ３）によって提示されるｐｒｏＴＧＦβに結合して阻害する抗体またはそのフラグメントが、本発明によって包含される。一部の実施態様では、骨髄線維症の治療に適切な抗体またはそのフラグメントは、多数のコンテクストのｐｒｏＴＧＦβ複合体（例えば、ＬＲＲＣ３３、ＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ３、またはそれらの任意の組み合わせと関連するもの）に結合することができるという点で、「コンテクスト寛容」である。
本明細書に記載の組成物および方法によって治療され得る骨髄増殖性新生物の適切な患者集団は：ａ）フィラデルフィア（＋）である患者集団；ｂ）フィラデルフィア（−）である患者集団；ｃ）「古典的」（ＰＶ、ＥＴおよびＰＭＦ）にカテゴリー化される患者集団；ｄ）突然変異ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ（＋）を保有する患者集団；ｅ）ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ（−）を保有する患者集団；ｆ）ＪＡＫ２エクソン１２（＋）を有する患者集団；ｇ）ＭＰＬ（＋）を有する患者集団；およびｈ）ＣＡＬＲ（＋）を有する患者集団を含む。一部の実施態様では、患者は髄外造血を有する。一部の実施態様では、髄外造血は、肝臓、肺、脾臓、および／またはリンパ節内である。一部の実施態様では、本発明の医薬組成物は、疾患の臨床兆候の局所化された部位の１つまたは複数に局所的に投与される。
線維症
本明細書に記載のＬＲＲＣ３３阻害剤および関連する組成物は、線維性状態、例えば、肺、腎臓、肝臓、心臓、子宮、および／または皮膚の臓器線維症、および／または骨髄線維症を治療するための方法における治療として用いられる。文献における証拠は、負傷／線維化組織へ動員される活性化マクロファージ（例えば単球由来マクロファージ）が、分化して、持続的な組織線維症に寄与することを示唆する（例えば、Ｍｉｓｈａｒｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）「Ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｄｒｉｖｅ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｅｒｓｉｓｔ ｉｎ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｌｉｆｅ ｓｐａｎ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１４（８）：２３８７−２４０４を参照）。これらのシナリオにおいて、Ｍ２極性化マクロファージ亜集団を選択的に標的化することは、正常な循環している単球を枯渇させずに、線維症の改善に関する有益な効果を提供し得る。ＬＲＲＣ３３発現が疾患関連マクロファージ亜集団に非常に制限されるという認識に基づき、本明細書において検討されるＬＲＲＣ３３阻害剤の使用は、オフターゲット効果を最小限にしながら（例えば、毒性を減少させる）、治療的利益を有利に提供する。対照的に、単球のような骨髄性細胞の全身性枯渇、または、組織損傷部位への単球遊走の広範な阻害は、不要な副作用（例えば、毒性）を引き起こし得る。
心筋症
長年の高血圧症、心臓弁膜疾患、および／または遺伝子突然変異から生じる非虚血性心筋症（ＮＩＣＭ）のような心筋症は、心不全の主な原因である。最近の観察は、単球由来マクロファージ（例えば、損傷部位に動員される在外の浸潤マクロファージ）は、特に、心機能に対して有害な影響を有し得ることを示唆する（参照：Ｌｉａｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）「Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｒｅｓｉｄｅｎｔ ａｎｄ ｎｏｎｒｅｓｉｄｅｎｔ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｎ ｎｏｎｉｓｃｈｅｍｉｃ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ」Ｐｒｏｃ Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０７３／ｐｎａｓ．１７２００６５１１５）。証拠は、後期の圧力が負荷された肥大内に動員される血液由来の単球由来マクロファージは有害であること、および、それらの浸潤のブロックは、代償性の心筋適合を提供し得る心臓の常在性のマクロファージとは異なり、心筋血管新生を改善して心機能を保つことを示唆する。
したがって、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、心臓組織へ動員される活性化マクロファージを標的化するのに有用であり得ると考えられる。ＬＲＲＣ３３阻害剤は、疾患関連マクロファージをブロックすることができ、それにより、心筋血管新生を改善して心機能を保ち、または他の方法で心不全を防ぎ、または心疾患の症候を改善する。したがって、本発明は、患者における心筋症の治療のための方法でのＬＲＲＣ３３阻害剤の使用を含み、心疾患を治療するために、対象に有効量のＬＲＲＣ３３阻害剤を投与するステップを含む。
ＬＲＲＣ３３阻害剤の使用によって治療される心筋症は、限定されないが、以下を含む：原発性／内因性心筋症は遺伝であってよい（例えば、肥大性心筋症；不整脈原性右心室心筋症（ＡＲＶＣ）；ＬＶ非圧縮；イオンチャネロパチー；拡張型心筋症（ＤＣＭ）；拘束型心筋症（ＲＣＭ））；後天性（例えば、ストレス心筋症；心筋炎、リンパ球および単球によるその浸潤に部分的に起因する心臓組織の炎症および損傷；好酸性心筋炎、好酸球によるその浸潤に部分的に起因する心臓組織の炎症および損傷；虚血性心筋症（形式上、別の心臓の問題の直接的な結果としての分類に含まれない））。二次的／外因性心筋症は、以下を含んでよい：代謝／蓄積（ｓｔｏｒａｇｅ）（例えば、ファブリー病；ヘマクロマトーシス）；心内膜心筋（例えば、心内膜心筋線維症；過好酸性症候群）；内分泌（例えば、糖尿病；甲状腺機能亢進症；先端巨大症）；心顔症（Ｃａｒｄｉｏｆａｃｉａｌ）（例えば、ヌーナン症候群）；神経筋（例えば、筋ジストロフィー；フリートライヒ運動失調症）；ならびに、肥満関連心筋症。
一部の実施態様では、標的細胞は、Ｌｙ６Ｃｈｉ、ＣＸ３ＣＲ１陽性、および／またはＣＣＲ２／ＣＤ１９２陽性である。有利に、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、保護的な役割を果たす心臓の常在性マクロファージよりも、負傷組織へ動員される疾患関連の単球由来の活性化マクロファージを優先的に枯渇させることができる。
併用療法
本開示は、インビボでＴＧＦβ阻害によって利益を受け得る対象を治療するための併用療法として用いられる、医薬組成物および関連方法をさらに包含する。任意のこれらの実施態様では、そのような対象は、本明細書に記載の少なくとも１つのＴＧＦβ阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合部分）を含む第一の組成物を、同一または重複する疾患または臨床状態を治療することが意図される少なくとも１つのさらなる治療を含む第二の組成物とともに含む、併用療法を受け得る。第一および第二の組成物は両方とも、同一の細胞標的、または別個の細胞標的に対して作用し得る。一部の実施態様では、第一および第二の組成物は、疾患または臨床状態の症候または態様の同一または重複するセットを治療または緩和し得る。一部の実施態様では、第一および第二の組成物は、疾患または臨床状態の症候または態様の別個のセットを治療または緩和し得る。一例であるが提供すると、第一の組成物は、ＴＧＦβシグナル伝達と関連する疾患または状態を治療し得て、一方で、第二の組成物は、同一の疾患と関連する炎症または線維症などを治療し得る。そのような併用療法は、互いとともに施されてよい。併用療法の文脈における語句「とともに」は、第一の治療の治療的効果が、併用療法を受ける対象において、第二の治療の治療的効果と時間的および／または空間的に重複することを意味する。したがって、併用療法は、治療の同時的な投与のための単一製剤または連続的投与のための別個の製剤として、処方され得る。
単剤療法に加えられるさらなる薬剤は、単剤療法と比較して補充的な臨床利益を提供する。一部の実施態様では、補充的な臨床利益は、相加的効果である。好ましい実施態様では、併用療法は、疾患の治療において相乗効果を生じる。用語「相乗」は、凝集体でのそれぞれの単剤療法の相加的効果よりも大きな効果（例えば、より大きな有効性）を指す。
一部の実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物を含む併用療法は、別の治療（例えば、第二の薬剤の単剤療法）によって生じるものと全体的に同等であるが、第二の薬剤の単剤療法と比較して、第二の薬剤と関連するより少ない不要な副作用またはより低い重度の毒性と関連する有効性を生じる。一部の実施態様では、そのような併用療法は、より少ない用量の第二の薬剤を可能にするが、全体的な有効性を維持する。そのような併用療法は、長期の治療が是認される、および／または、小児科の患者を含む患者集団に、特に適切であり得る。
したがって、本発明は、本明細書に記載の、ＴＧＦβ１タンパク質活性化の減少のための併用療法での使用のための医薬組成物および方法、および、ＴＧＦβ１シグナル伝達と関連する疾患または状態の治療または予防を提供する。
したがって、当該方法または医薬組成物は、第二の治療をさらに含む。一部の実施態様では、第二の治療は、ＴＧＦβ１シグナル伝達と関連する疾患または状態を治療または予防するのに有用であり得る。第二の治療は、標的の疾患と関連する少なくとも１つの症候（単数または複数）を低下または治療し得る。第一および第二の治療は、同様または関係のない作用機序によってそれらの生物学的効果を及ぼし得て；または、第一および第二の治療の一方または両方は、多様な作用機序によってそれらの生物学的効果を及ぼし得る。
本明細書に記載の医薬組成物は、それぞれの記載される実施態様に関して、同一の薬学的に許容できる担体または異なる薬学的に許容できる担体中に、第一および第二の治療を有してよいことが理解されるべきである。第一および第二の治療は、記載される実施態様において、同時に、または連続して投与されてよいことが、さらに理解されるべきである。
１つまたは複数の抗−ＬＲＲＣ３３抗体、またはその抗原結合部分、または本発明のＬＲＲＣ３３阻害剤は、１つまたは複数のさらなる治療的薬剤と組み合わせて用いられてよい。抗−ＬＲＲＣ３３抗体、または本発明のＬＲＲＣ３３阻害剤とともに用いることのできるさらなる治療的薬剤の例は、限定されないが、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、Ｓｅｒ／Ｔｈｒキナーゼ阻害剤、二重特異的キナーゼ阻害剤を含む。一部の実施態様では、そのような薬剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、ＭＡＰＫ阻害剤、ｐ３８キナーゼ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤であってよい。一部の実施態様では、そのような薬剤は、ミオスタチン阻害剤、ＶＥＧＦアゴニスト、ＩＧＦｌアゴニスト、ＦＸＲアゴニスト、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＣＲ５阻害剤、二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５阻害剤、リシルオキシダーゼ−様−２阻害剤、ＡＳＫ１阻害剤、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ＧＤＦ１１阻害剤などであってよい。
一部の実施態様では、さらなる薬剤は、チェックポイント阻害剤である。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、Ｔ細胞同時刺激分子、例えば、阻害同時刺激分子および活性化同時刺激分子に結合する。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、ＰＤ−１拮抗薬、ＰＤ−Ｌ１拮抗薬、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２融合タンパク質、ＣＴＬＡ４拮抗薬、ＧＩＴＲアゴニスト、抗−ＩＣＯＳ抗体、抗−ＩＣＯＳＬ抗体、抗−Ｂ７Ｈ３抗体、抗−Ｂ７Ｈ４抗体、抗−ＴＩＭ３抗体、抗−ＬＡＧ３抗体、抗−ＯＸ４０抗体、抗−ＣＤ２７抗体、抗−ＣＤ７０抗体、抗−ＣＤ４７抗体、抗−４１ＢＢ抗体、抗−ＰＤ−１抗体、抗−ＣＤ４０抗体、抗−ＣＤ３８抗体、抗−ＫＩＲ抗体、抗−ＣＤ３３抗体、抗−ＣＤ１３７抗体、抗−ＣＤ７４抗体、抗−ＣＤ６８抗体、抗−ＣＤ２０抗体、腫瘍溶解性ウイルス、およびＰＡＲＰ阻害剤からなる群より選択される。一部の好ましい実施態様では、さらなる薬剤は、ＰＤ−１シグナル伝達の拮抗薬であり、例えば、ＰＤ−１拮抗薬、ＰＤ−Ｌ１拮抗薬、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２融合タンパク質からなる群より選択される。一部の好ましい実施態様では、さらなる薬剤は、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、Ｂｃｒ／Ａｂｌ阻害剤である。一部の実施態様では、さらなる療法は放射線である。一部の実施態様では、さらなる薬剤は化学療法剤である。一部の実施態様では、化学療法剤はタキソールである。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、抗炎症剤である。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、単球／マクロファージ動員および／または組織浸潤のプロセスを阻害する。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、肝星細胞活性化の阻害剤である。一部の実施態様では、さらなる薬剤は、ケモカイン受容体拮抗薬、例えば、ＣＣＲ２拮抗薬およびＣＣＲ５拮抗薬である。一部の実施態様では、そのようなケモカイン受容体拮抗薬は、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５拮抗薬のような二重特異的拮抗薬である。一部の実施態様では、併用療法として投与されるさらなる薬剤は、増殖因子のＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーまたはそのレギュレーターであり、または含む。一部の実施態様では、そのような薬剤は、ＧＤＦ８／ミオスタチンおよびＧＤＦ１１のモジュレーター（例えば、阻害剤およびアクチベーター）より選択される。一部の実施態様では、そのような薬剤は、ＧＤＦＳ／ミオスタチンシグナル伝達の阻害剤である。一部の実施態様では、そのような薬剤は、前駆体／潜在型ミオスタチン複合体に特異的に結合してミオスタチンの活性化をブロックするモノクローナル抗体である。一部の実施態様では、前駆体／潜在型ミオスタチン複合体に特異的に結合してミオスタチンの活性化をブロックするモノクローナル抗体は、フリーの成熟ミオスタチンに結合しない。一部の実施態様では、さらなる療法は、ＣＡＲ−Ｔ療法を含む。
一部の実施態様では、そのような併用療法は、癌ワクチン（すなわち、腫瘍抗原を含む免疫原性組成物）を含んでよい。そのような併用療法は、免疫チェックポイント阻害剤をさらに含んでよい。本開示に係るＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＴＭＥ内のエフェクター細胞のアクセスを助長しながら、抗腫瘍免疫をブーストすることによって抗癌効果を高め得ると考えられる。
そのような併用療法は、より低い用量の投与される治療的薬剤を有利に利用し得て、したがって、様々な単剤療法または本発明によって達成される選択性／特異性の程度を欠く従来の併用療法と関連する、可能性のある毒性または合併症を回避する。
本発明は、限定と解釈されるべきでない以下の実施例によってさらに説明される。
実施例１：特定の細胞型および癌細胞におけるＬＲＲＣ３３発現。
ＬＲＲＣ３３は、最近になって説明されたＴＧＦβに関する提示分子であり、ＴＧＦβ増殖因子を、細胞表面につながれてインテグリンまたは他の細胞外シグナルによる活性化まで潜在型形態で維持されたままにする。我々は、ＨＰＡ、ＧＴｅｘ、およびＦＡＮＴＯＭ５を含むいくつかの公に利用可能なデータベースを調査した。ＬＲＲＣ３３は、ほとんどの組織において低レベルで発現されるが、骨髄性およびリンパ系細胞の産生と関連する組織（リンパ節、脾臓、骨髄）において富化されることは注目に値する。図１〜４を参照。
我々はまた、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａにおける公に利用可能なデータを調査して、癌関連細胞株におけるＬＲＲＣ３３の発現を探した。我々は、骨髄性およびリンパ球起源のいくつかの細胞株において、ＬＲＲＣ３３の有意な（ｑ＜０．０５）過剰発現を見出す（試験された全ての癌細胞株における平均発現レベルに対して４〜１６倍）。これらは、急性骨髄性白血病、形質細胞骨髄腫、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、および慢性骨髄性白血病と関連する株を含む。Ｌｏｇ２（比）は、上方調節が試験された全ての株の平均に対して統計的に有意である株について太字で示される）。我々はさらに、ＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、およびＬＴＢＰ３の発現が全て、試験された全ての株の平均よりも下であるので、骨髄性およびリンパ系統におけるこの富化は、ＬＲＲＣ３３に固有であることに注意する。
これらのデータは、ＬＲＲＣ３３の標的化が、骨髄性およびリンパ球癌におけるＴＧＦβシグナル伝達を標的化する手段となり得ることを示唆する。これらの癌は非常に免疫抑制であるので、標的化の１つの手段は、これらの細胞上にＬＲＲＣ３３によって提示されるＴＧＦβを阻害することによるものであってよく、それにより、ＴＧＦβの全体的な効果：ＴＧＦβによって仲介されるエフェクターＴ細胞の抑制、Ｔｒｅｇの誘導およびこれらの細胞による免疫抑制、およびＭ２マクロファージによる免疫抑制の永久化を妨げる。あるいは、ＬＲＲＣ３３は、Ｆｃ介在または他のメカニズムを通してＡＤＣＣ介在の細胞死滅化をリンパ球または骨髄性腫瘍にホーミングするための標的としての役割を果たし得る。
チェックポイント阻害剤は、固形腫瘍においてだけでなく、免疫系の腫瘍においても、それらの使用に関して、ますます研究されている。Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａにおける発現データは、骨髄性およびリンパ球性白血病細胞の両方とも、非常に低レベルのＰＤ−Ｌ１（ＣＤ２７４）（Ｔ細胞上のＰＤ−１に結合して抗腫瘍応答を抑制するために、腫瘍細胞によって用いられる）を発現することを示す。このことは、白血病が、抗−ＰＤ−１または抗−ＰＤ−Ｌ１療法に対して不十分に応答し得ることを示唆し、ＴＧＦβの標的化を魅力的な手法にさせ得る。
白血病のいくつかの同系マウスモデルが利用可能である。多くの同系モデルが市販されていて、対応する発現データがデータベースを通して公に利用可能である。公表された研究は、それらのウェブサイト上のいくつかのモデルに関するチェックポイント阻害に対する腫瘍増殖応答を示した。公表された研究および様々なデータベースの我々の分析は、データベース内のいくつかの白血病モデルにおける、抗−ＰＤ−１および抗−ＣＴＬＡ４処置に対する非常に不十分な反応速度を明らかにしている。ＴＧＦｂ提示分子の発現に関してプロファイルされた１つの白血病モデル（Ｌ１２１０）からのＲＮＡｓｅｑデータの分析は、ヒト細胞株および疾患データベースにおける我々の知見を確証する。プロファイルされた腫瘍モデルの全ての中で、Ｌ１２１０細胞は、最も高いレベルのＬＲＲＣ３３および明白に低いレベルのＧＡＲＰ、ＬＴＢＰ１、およびＬＴＢＰ３を発現する。ヒト細胞株と同様に、Ｌ１２１０細胞は、ＴＧＦｂ１アイソフォームを主に発現する。これらのデータは、Ｌ１２１０マウスモデルが、ヒト細胞株およびＡＭＬ患者サンプルにおいて見られる発現プロファイルによく対応していることを示唆する。
実施例２：極性化マクロファージのサブセットは、ＬＲＲＣ３３を選択的に発現する。
ＴＧＦβシグナル伝達が、マクロファージの成熟および分化および最終的な表現型に関与することが以前に説明された（図６を参照）。単球由来マクロファージ（例えば、肺実質組織内の間質マクロファージ）は、ＬＲＲＣ３３を発現することが示唆されている。極性化マクロファージのさらなる研究は、全ての極性化マクロファージがＬＲＲＣ３３を発現するわけではないことを明らかにしている。我々は、いわゆる古典的Ｍ１型マクロファージが、ＬＲＲＣ３３の低発現を示し、一方で、Ｍ２マクロファージは、上昇したＬＲＲＣ３３発現を示すことを見いだした。予期せずに、Ｍ２マクロファージのサブタイプの中で、Ｍ２ｃおよびＭ２ｄ、ＴＡＭ様マクロファージにおいてのみ、ＬＲＲＣ３３発現を観察した。前者はいわゆる「線維促進性」マクロファージであり、後者は「ＴＡＭ様」であり、または腫瘍関連表現型を模倣する。これらの結果は、ＬＲＲＣ３３発現が、極性化マクロファージの選択的サブセットに制限されることを示す。
証拠は、腫瘍細胞および／または周囲腫瘍間質細胞が、多くのサイトカイン、増殖因子およびケモカインを分泌し、ＴＭＥにおける様々な細胞の表現型（例えば、活性化、分化）に影響し得ることを示唆する。例えば、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦまたはＣＳＦ−１）は、公知の腫瘍由来因子であり、ＴＡＭ活性化のような疾患表現型を調節し得る。
蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析を行なって、マクロファージにおけるＬＲＲＣ３３発現に対するＭ−ＣＳＦ曝露の効果を試験した。手短に言うと、ヒトＰＢＭＣを健康なドナーから集めた。１０％ヒト血清、プラスＧＭ−ＣＳＦまたはＭ−ＣＳＦを含む培地中で、初代細胞を１週間培養した。様々なＭ２マクロファージ表現型を誘導するために、細胞を、Ｍ２ｃサブタイプに関してＩＬ−１０およびＴＧＦβ、およびＭ２ｄサブタイプに関してＩＬ−６の存在下で、さらに２〜３日培養した。図に示した細胞表面マーカーに対する抗体を、ＦＡＣＳ分析において用いた。ＣＤ１４＋免疫磁気選択は、単球を示す。
驚くべきことに、結果は、マクロファージ上の細胞表面ＬＲＲＣ３３の上方調節が、Ｍ−ＣＳＦ（ＣＳＦ−１としても知られる）に対する曝露の際に有意に上昇することを示した。図１１Ａは、Ｍ−ＣＳＦによって処理されたマクロファージが、均一に、Ｍ２極性化マクロファージであることを示す。さらに、Ｍ−ＣＳＦ曝露は、マクロファージが細胞表面上にＬＲＲＣ３３を均一に発現するようにさせる（図１１Ｂを参照）。図１１Ｃに要約されるように、Ｍ−ＣＳＦによって活性化されたマクロファージの細胞表面上の力強いＬＲＲＣ３３発現が観察された。
これらのデータに基づき、ＬＲＲＣ３３の細胞表面密度を計算した。図１２に示されるように、ＬＲＲＣ３３は、Ｍ−ＣＳＦ−成熟ヒト単球由来マクロファージの特異的なマーカーである。平均して、これらのマクロファージの表面上に、細胞あたり１６３，７３１表面分子のＬＲＲＣ３３が存在する。現行の治療的標的である他の骨髄性マーカーは、同様の細胞表面密度を示すが、腫瘍促進マクロファージ亜集団を、他のマクロファージ亜集団よりも特異的にラベルはしないことを我々は見いだした。ＧＭ−ＣＳＦ＋ＩＦＮγによって歪められた「Ｍ１」マクロファージ（赤）およびＭＣＳＦによって歪められたマクロファージ（緑）は、アイソタイプコントロール（灰色、中央）に対して、ＣＤ３３に関して同様の表面発現を示し、一方で、Ｍ１およびＭ−ＣＳＦマクロファージは、ＣＤ１１５またはＣＳＦ１Ｒの同様のレベルを示す（右）。これらの結果は、ＬＲＲＣ３３を標的化することによって、他の細胞を温存（ｓｐａｒｉｎｇ）しながら、疾患関連細胞をより選択的に標的化することが可能であるという理解を支持する。
細胞型のサブセット内のＬＲＲＣ３３の選択的な細胞表面発現をさらに確認するために、５人のドナー由来の全血をフローサイトメトリーのために処理して、ＣＤ１４（単球を示す）およびＣＤ１０（好中球を示す）を用いてＣＤ３３およびＬＲＲＣ３３に関して染色した。ＣＤ１９を用いてＢ細胞も分析した。図１３に示されるように、ヒト単球および好中球は、ＣＤ３３と対照的に、エクスビボで、直接的にＬＲＲＣ３３の表面発現をほとんどまたは全く示さない．
ＡＭＬに関して現在のところ利用可能な治療（例えば、抗−ＣＤ３３）は、潜在的に危険な毒性と関連する。ＬＲＲＣ３３阻害剤が、細胞型（細胞の亜集団）の間でより高いレベルの選択性を可能にするという有利な手法を提供するという理解を確認するために、ＲＮＡ分析を行なった。Ｂｌｏｏｄｓｐｏｔデータは、ＬＲＲＣ３３ ＲＮＡが、様々なＡＭＬ型にわたって高く均一に発現されて、より低いレベルで造血性前駆体集団にわたって発現されることを示す。様々なＡＭＬサブタイプにわたる平均的なＣＤ３３発現はＬＲＲＣ３３に似ているが、発現はより変動性である（図１４）。
実施例３：Ｔｒｅｇは、Ｔエフェクター激増を抑制する。
我々は、ＴＧＦβ依存性Ｔｒｅｇ機能をインビトロで評価するために、ヒトＴｒｅｇ抑制アッセイを行なった。アッセイ条件は、ＴＧＦβ依存性Ｔｒｅｇ活性を信頼度高く評価するように確立された。図７に示されるように、Ｔエフェクター細胞激増は、ＴＧＦβまたはＧＡＲＰを発現しているＴｒｅｇの添加によって抑制された。この効果は、ＧＡＲＰ関連ＴＧＦβの活性化を阻害する我々の阻害抗体の添加によって反転され得る。全体的なアッセイプロトコルを図８に提供する。
実施例４：活性化されたＴｒｅｇにおけるＧＡＲＰ／ＬＡＰの上方調節。
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）由来のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化して細胞表面マーカーＣＤ２５＋／Ｆｏｘｐ３＋／ＣＤ４＋によって特徴付けられるＴｒｅｇ表現型を誘導して、フローサイトメトリー分析に供した。図９に示されるように、Ｔ細胞の活性化の際に、ＧＡＲＰおよびＬＡＰの発現は上方調節される。
実施例５：４Ｔ１転移モデル。
４Ｔ１細胞転移モデルを用いて、ＴＧＦβ１阻害をインビボで調べた。このモデルは、よく特徴付けられたＴＧＦβおよびＴｒｅｇ依存性の生物学を提供する。マウスへの２５，０００ ４Ｔ１細胞のＩＶ注入の１週間後、我々は、転移肺負荷を測定した。我々は、４Ｔ１転移モデル由来のマウス肺における有意なレベルのＴｒｅｇおよびマクロファージを観察した。
実施例６：内在化アッセイ。
図１５は、内在化試験による結果を提供する。ＴＨＰ１細胞をＰＭＡで一晩刺激して、ＬＲＲＣ３３表面発現および組織培養プラスチックに対する付着を誘導した。翌日、抗体を用いて１０ｕｇ／ｍＬで細胞を１時間染色した。細胞のサブセットを洗浄して、細胞培養培地に移動させて、１時間または２時間、３７℃にして、一方で、他のサブセット（時間０）は、直ちに固定された。細胞の別のサブセットを洗浄して４℃で維持した。一次抗体アイソタイプに対する、フルオロフォアがコンジュゲートした二次抗体を用いることによって内在化を検出した。ゲムツズマブおよびＳＲＬ１（ＬＲＲＣ３３に対するヒト特異的マウス抗体）は、同様に内在化する。
別個の実験において、第二のＬＲＲＣ３３抗体、ＣＬ１を、本質的に上述のとおりに内在化アッセイで試験して、同様の結果が得られた（データ示さず）。
実施例７：ＬＲＲＣ３３バインダーの生成。
ＬＲＲＣ３３バインダーを、以下の方法を用いて生産した。
ハイブリドーマクローンの生成
以下に提供される組み換えタンパク質および／またはタンパク質複合体を、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏから入手可能）において発現して、抗原として用いられるように精製した。提示分子（例えば、ＬＲＲＣ３３）およびｐｒｏＴＧＦβ（プロドメインおよび増殖因子ドメインを含む）の両方を、最適な発現のためにトランスフェクトした。場合によっては、タンパク質構築物は、精製目的のためにＨｉｓを含んだ。
以下の表は、組み換えで発現されたタンパク質またはタンパク質複合体を列挙し、それらを免疫化および／またはその後のスクリーニング（例えば、ポジティブ選択またはネガティブ選択）に使用した。
５匹の８週齢ＢＡＬＢ／ｃＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）のコホートに、ＴＧＦβ１およびそのプロドメインと共有的に複合体化されたＬＲＲＣ３３を皮下投与した。マウスは、ヒトＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ１を用いて８回およびマウスＬＲＲＣ３３−ｐｒｏＴＧＦβ１を用いて２回、６週間にわたって免疫化された（投与量あたり１０μｇ）。説明された免疫原は、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（最初の免疫化のため）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ；Ｓｉｇｍａ）（継続的なブーストのため）内で乳化された。マウスは、１５日目および３３日目に出血して、血清力価を、ＬＲＲＣ３３に対する特異的結合に関して分析した。最後のブーストの４日後、２匹のマウスは安楽死されて、脾細胞を融合のために調製した。
プールされた脾細胞は、標準的な融合プロトコルを用いて、１：１比でＳｐ２／０−Ａｇ１４（ＡＴＣＣ（登録商標））（骨髄腫細胞株）に融合された。新たに融合された細胞を、１０％ウシ胎児血清、１０，０００ユニット／ｍｌペニシリン、１０，０００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、３．５％ハイブリドーマクローニングサプリメント（Ｓｉｇｍａ）、１００μＭヒポキサンチン、０．４μＭアミノプテリン、および１６μＭチミジンを有するＲｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ培地（ＲＰＭＩ−１６４０）を含む１０２ ９６ウェルプレートに蒔いた。培地は、アミノプテリンを含まずに上述の同一の培地処方を用いて７日目に取り換えられた。
ＥＬＩＳＡによるハイブリドーマクローンのスクリーニング
１３日目および１４日目に、ハイブリドーマ上清を集めて、ＥＬＩＳＡによってＬＲＲＣ３３特異性に関してスクリーニングした。手短には、３８４ウェルプレートを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中、２０μｌの組み換え抗原を用いて、１μｇ／ｍｌで一晩４℃にてコーティングした。洗浄バッファー（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）を用いてプレートを３回洗浄して、８０μｌのブロッキングバッファー（１％ウシ血清アルブミンおよび０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）を用いてブロッキングした。室温での１時間のインキュベーション後、プレートを３回洗浄して、２０μｌのハイブリドーマ上清をそれぞれのウェルに移した。プレートを室温で１時間インキュベートして、バッファーで３回洗浄して、および２０μｌのホースラディッシュペルオキシダーゼがコンジュゲートしたヤギ抗−マウスＩｇＧ（１：５、０００に希釈）を添加した。この最後の１時間の室温インキュベーション後、プレートを３回洗浄して、２０μｌのＴＭＢ Ｏｎｅ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ基質（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ）をウェルごとに添加した。１０分の室温インキュベーション後、２０μｌの０．１８Ｍ硫酸をそれぞれのウェルにピペッティングすることによって反応を止めた。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて４５０ｎｍで吸光度を分析した。
フローサイトメトリーによるハイブリドーマクローンのスクリーニング
選択されたハイブリドーマ上清を、細胞表面に発現されたＬＲＲＣ３３に対する結合に関して、フローサイトメトリースクリーニングを用いて分析した。手短には、ＲＰＭＩ−１６４０中のＴＨＰ１細胞および１０％ウシ胎児血清、およびペニシリン／ストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ中のＰ３８８Ｄ１細胞を、１００ｎＭの酢酸ミリスチン酸ホルボール（ｐｈｏｒｂａｌ ｍｙｒｉｓｔａｔｅ ａｃｅｔａｔｅ）（ＰＭＡ）によって、５％ＣＯ２中、３７℃で一晩刺激した。細胞を、９６ウェルプレートに、１００，０００細胞／ウェルの密度で蒔いた。一晩のインキュベーション後、ＦＡＣＳバッファー（１％ＢＳＡおよび０．１％アジ化ナトリウムを含むＰＢＳ）で細胞を３回洗浄して、５０μｌのＦｃ受容体ブロッキングバッファー（ＴｒｕｅＳｔａｉｎ ＦｃＸ；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）中に１０μｇ／ｍｌで１０分間、氷上で再懸濁させた。ブロッキングバッファーを除去せずに、およそ３５μｌのハイブリドーマ上清をそれぞれのウェルに移して、氷上で１時間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳバッファーで３回洗浄して、冷却したＰＢＳ中の１．５％パラホルムアルデヒドを用いた固定ステップを３０分間続けた。サンプルをＦＡＣＳバッファーで３回洗浄して、３回目の洗浄後、ＦＡＣＳバッファー中の１ｕｇ／ｍＬヤギ−抗−マウスＩｇＧ ＦＣ−Ａｌｅｘａ６４７を、氷上で１時間、それぞれのウェル内に置いた。最終セットの洗浄ステップ後、２００μｌのＦＡＣＳバッファーをそれぞれのウェルに添加して、細胞を手作業でウェルの底から外した。サンプルをＵ底９６ウェルプレートに移して、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴフローサイトメーター（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）上に捕えて、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＢＤ）で分析した。
上記の個々のセクションにおいて言及される本発明の様々な特徴および実施態様は、必要な変更を加えて、必要に応じて他のセクションに適用する。その結果として、あるセクションにおいて規定される特徴は、必要に応じて、他のセクションにおいて規定される特徴と組み合わせられ得る。
当業者は、本明細書に記載される本発明の特定の実施態様に対する多くの等価物を認識し、または、ほんのルーチン実験を用いて確認することができる。そのような等価物は、以下の実施態様および特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
［実施態様］
１．以下の使用のための、ＬＲＲＣ３３阻害剤：
（ａ）対象における、血液学的増殖性障害、固形腫瘍、および／または線維症の治療；および／または
（ｂ）対象における、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させる方法（当該方法は、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞の数を減少させるのに効果的な量で、ＬＲＲＣ３３阻害剤を対象に投与するステップを含み、ここで対象は、ＬＲＲＣ３３過剰発現および／または異常なマクロファージ活性化と関連する疾患を患っている）；および／または
（ｃ）治療的方法（当該方法は、対象における免疫をブーストするように免疫抑制疾患環境を反転させるステップを含む）。
２．実施態様１に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、対象は、白血病、リンパ腫、骨髄線維症および多発性骨髄腫から選択される血液学的増殖性障害を有する。
３．実施態様１〜２のいずれか１つに係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させて、任意選択でＬＲＲＣ３３阻害剤は：
対象において、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞の数を減少させるために、
ａ）任意選択で細胞傷害性効果を誘導することによって、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞を死滅させる；および／または、
ｂ）細胞表面ＬＲＲＣ３３の内在化を誘導する。
４．先行する実施態様のいずれか１つに係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させて、任意選択で、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞は：ＴＡＭ、ＴＡＮ、ＣＡＦ、白血病細胞、造血幹細胞、骨髄性前駆細胞、リンパ球前駆細胞、巨核球赤血球前駆細胞、巨核球、単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、好酸球、好塩基球、および／またはマクロファージであってよい。
５．先行する実施態様のいずれか１つに係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、ＬＲＲＣ３３は、潜在型ＴＧＦβ複合体と関連して、任意選択で潜在型ＴＧＦβ複合体は、潜在型ＴＧＦβ１複合体であってよい。
６．患者において疾患関連マクロファージを枯渇させるための治療的方法での使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、患者は、固形腫瘍、筋障害、線維症から選択される状態を患っていて、当該方法は、治療的有効量のＬＲＲＣ３３阻害剤を患者に投与するステップを含む。
７．対象における疾患または負傷組織を治療するための治療的方法での使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、疾患または負傷組織は、固形腫瘍、筋障害、および／または線維症を含み、当該方法は、治療的有効量のＬＲＲＣ３３阻害剤を対象に投与するステップを含む。
８．造血細胞上に発現されたＴＧＦβ１を選択的に阻害するための治療的方法での使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、当該方法は、
ＴＧＦβ１を発現している造血細胞およびＴＧＦβ１を発現している非造血細胞を含む複数の細胞を、ＬＲＲＣ３３阻害剤と接触させるステップを含み、（それにより、ＴＧＦβ１を発現している造血細胞においてはＴＧＦβ１を阻害するが、ＴＧＦβ１を発現している非造血細胞においては阻害しない）、
ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＬＲＲＣ３３と関連したＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体に結合する単離された抗体またはそのフラグメントであり（それにより、複合体からの活性型ＴＧＦβ１の放出を阻害する）；および、
単離された抗体またはそのフラグメントは、ＧＡＲＰまたはＬＴＢＰと関連したＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体に結合しない。
９．実施態様８に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、造血細胞は、骨髄性および／またはリンパ系細胞である。
１０．実施態様８に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、造血細胞は、骨髄腫細胞である。
１１．実施態様８に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、造血細胞は、リンパ腫細胞である。
１２．実施態様８〜１１のいずれか１つに係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、抗体は、ｐｒｏＴＧＦβ１、ＬＲＲＣ３３、またはそれらの組み合わせに結合するが、フリーの成熟ＴＧＦβ１には結合しない。
１３．実施態様１、２、３、４または５のいずれか１つにおいて定義される使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、血液学的増殖性障害は血液癌であり、治療は、血液癌を患っている対象に、有効量のＬＲＲＣ３３阻害剤を投与して、対象における血液癌を阻害するステップを含む。
１４．先行する実施態様のいずれかに係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＬＲＲＣ３３の阻害抗体である。
１５．実施態様１４に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、阻害抗体は、
ａ）ＴＧＦβ１の大きな潜在型複合体に結合する単離された抗体またはそのフラグメント（それにより、複合体からの活性型ＴＧＦβ１の放出を阻害する）；または、
ｂ）細胞上に発現されたＬＲＲＣ３３に結合する単離された抗体（抗体は、細胞のＡＤＣＣを誘導するようにＦｃドメインを含む）である。
１６．実施態様１４または１５に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、阻害抗体は、完全なヒト抗体またはヒト化抗体である。
１７．実施態様１４〜１６のいずれか１つに係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、阻害抗体は、モノクローナル抗体または多量体抗体である。
１８．実施態様１７に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、多量体抗体は、二重特異性抗体である。
１９．実施態様１３〜１８のいずれか１つに係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、対象は血液癌を患っていて、骨髄移植を受けている。
２０．実施態様１３〜１９のいずれか１つに係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、対象は血液癌を患っていて、血液癌のためのさらなる治療によって治療される。
２１．実施態様２０に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、対象は、さらなる治療に対して非応答性であり、または、応答性が低い。
２２．実施態様２１に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、さらなる治療は、ＰＤ−１拮抗薬またはチロシンキナーゼ阻害剤である。
２３．実施態様２２に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、チロシンキナーゼ阻害剤は、Ｂｃｒ／Ａｂｌ阻害剤である。
２４．実施態様２０に係る使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、ＬＲＲＣ３３阻害剤は、併用療法として投与される。

Claims (18)

  1. ＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    （ａ）対象における、血液学的増殖性障害、固形腫瘍、および／または線維症の治療；および／または
    （ｂ）対象における、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させる方法、前記方法は、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞の数を減少させるのに効果的な量で、前記ＬＲＲＣ３３阻害剤を前記対象に投与するステップを含み、ここで前記対象は、ＬＲＲＣ３３過剰発現および／または異常なマクロファージ活性化と関連する疾患を患っている；および／または
    （ｃ）治療的方法、前記方法は、対象における免疫をブーストするように免疫抑制疾患環境を反転させるステップを含む、
    における使用のための、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  2. 請求項１に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記対象は、白血病、リンパ腫、骨髄線維症および多発性骨髄腫から選択される血液学的増殖性障害を有する、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  3. 請求項２に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記の血液学的増殖性障害は白血病であり、任意選択で前記白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、または、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）であってよい、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  4. 請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させて、任意選択で前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は：
    前記対象において、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞の数を減少させるために、
    ａ）任意選択で細胞傷害性効果を誘導することによって、細胞表面上にＬＲＲＣ３３を発現している細胞を死滅させる；および／または、
    ｂ）前記の細胞表面ＬＲＲＣ３３の内在化を誘導する、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  5. 請求項１または４に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は、固形腫瘍の治療での使用のためのものであり、前記固形腫瘍は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）によって富化される、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  6. 請求項１または４に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は、線維症の治療での使用のためのものであり、前記線維症は、単球由来マクロファージによって富化された線維化組織を含み、任意選択で前記線維症は、肺線維症、腎臓線維症、肝臓線維症、心臓線維症、骨髄線維症、子宮線維症および／または皮膚線維症であってよい、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  7. 請求項１から６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞を枯渇させて、任意選択で、細胞表面ＬＲＲＣ３３を発現している細胞は：ＴＡＭ、ＴＡＮ、ＣＡＦ、白血病細胞、造血幹細胞、骨髄性前駆細胞、リンパ球前駆細胞、巨核球赤血球前駆細胞、巨核球、単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、好酸球、好塩基球、および／またはマクロファージであってよい、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  8. 請求項１または４に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記治療は、前記対象における免疫抑制疾患環境を反転させて、任意選択で前記疾患環境は、ＴＭＥまたは線維化組織であってよい、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  9. 請求項１から８のいずれか一項に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は、ＡＤＣＣを誘導する、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  10. 請求項１から８のいずれか一項に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞表面ＬＲＲＣ３３の内在化を誘導する、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  11. 請求項１０に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は、細胞傷害剤をさらに含む、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  12. 請求項１から４、７、９または１０のいずれか一項に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記阻害剤は、対象における白血病を治療するための方法での使用のためのものであり、効果的な投与量での前記ＬＲＲＣ３３阻害剤の投与は、ＣＤ３３療法と比較してより低い毒性を引き起こし、任意選択で前記毒性は：肝毒性、インフュージョン関連の反応、出血、ＱＴ間隔延長、感染、貧血、胚胎児毒性、および／または死を含んでよい、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  13. 請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤は、前記対象における癌に対する宿主免疫をブーストして、前記対象は、癌療法によって治療されて、任意選択で前記癌療法は、ＣＡＲ−Ｔ療法、チェックポイント阻害剤療法、化学療法、または放射線療法であってよい、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  14. 請求項１３に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記宿主免疫は、免疫抑制を減少させることによってブーストされる、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  15. 請求項１３または１４に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３阻害剤の使用は、前記癌療法に、前記癌をより応答性にさせる、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  16. 請求項１３から１５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記対象は、単剤療法と比較して減少した量の前記癌療法を受けて、同一または同等の治療的利益／有効性を達成する、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  17. 請求項１から１６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＲＲＣ３３阻害剤であって、
    前記ＬＲＲＣ３３は、潜在型ＴＧＦβ複合体と関連して、任意選択で前記潜在型ＴＧＦβ複合体は、潜在型ＴＧＦβ１複合体であってよい、
    ＬＲＲＣ３３阻害剤。
  18. 細胞表面上のヒトＬＲＲＣ３３またはヒトＬＲＲＣ３３を含む複合体に結合する抗体を含む医薬組成物であって、
    前記抗体は任意選択で、Ｆｃドメインまたは細胞傷害剤を含んでよく、前記抗体は、ヒトＧＡＲＰに結合しない、
    医薬組成物。
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