JP2020518256A5 - - Google Patents

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1つの態様において、対象はヒトである。
[本発明1001]
ステムループCRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）RNA（st-crRNA）を含む外来性核酸およびCpf1酵素をコードする外来性核酸を細胞に投与する段階を含む、遺伝子編集の方法。
[本発明1002]
細胞がT細胞である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
T細胞が初代T細胞である、本発明1002の方法。
[本発明1004]
投与する段階が、前記外来性核酸を細胞内にエレクトロポレーションすることを含む、本発明1001の方法。
[本発明1005]
エレクトロポレーションが複数回行われる、本発明1004の方法。
[本発明1006]
Cpf1酵素がアシダミノコッカス属（Acidaminococcus）Cpf1（AsCpf1）を含む、本発明1001の方法。
[本発明1007]
Cpf1酵素がラクノスピラ科（Lachnospiraceae）Cpf1（LbCpf1）を含む、本発明1001の方法。
[本発明1008]
st-crRNAが、crRNAの3'末端にステムループ構造を含む、本発明1001の方法。
[本発明1009]
st-crRNAが、crRNAの5'末端にステムループ構造を含む、本発明1001の方法。
[本発明1010]
ステムループ構造が、ステムループの5'末端に付加された3つのグリシン残基をさらに含む、本発明1009の方法。
[本発明1011]
st-crRNAのプロトスペーサー領域が、部分的ホスホロチオエート化（PMS）修飾をさらに含む、本発明1010の方法。
[本発明1012]
遺伝子編集が、
TCR α鎖定常領域（TRAC）、TCR β定常領域（TRBC）、およびβ-2ミクログロブリン（B2m）
からなる群より選択される遺伝子を突然変異させることを含む、本発明1001の方法。
[本発明1013]
改変T細胞を遺伝子編集によって作製する方法であって、st-crRNAを含む外来性核酸およびCpf1酵素をコードする外来性核酸をT細胞に投与する段階を含む、方法。
[本発明1014]
T細胞が初代T細胞である、本発明1013の方法。
[本発明1015]
投与する段階が前記核酸をT細胞内にエレクトロポレーションすることを含む、本発明1013の方法。
[本発明1016]
エレクトロポレーションが複数回行われる、本発明1015の方法。
[本発明1017]
Cpf1酵素がアシダミノコッカス属Cpf1（AsCpf1）を含む、本発明1013の方法。
[本発明1018]
Cpf1酵素がラクノスピラ科Cpf1（LbCpf1）を含む、本発明1013の方法。
[本発明1019]
st-crRNAが、crRNAの3'末端にステムループ構造を含む、本発明1013の方法。
[本発明1020]
st-crRNAが、crRNAの5'末端にステムループ構造を含む、本発明1013の方法。
[本発明1021]
ステムループ構造が、ステムループの5'末端に付加された3つのグリシン残基をさらに含む、本発明1020の方法。
[本発明1022]
ステムループ構造が、部分的ホスホロチオエート化（PMS）修飾をさらに含む、本発明1021の方法。
[本発明1023]
遺伝子編集が、
TCR α鎖定常領域（TRAC）、TCR β定常領域（TRBC）、およびβ-2ミクログロブリン（B2m）
からなる群より選択される遺伝子を突然変異させることを含む、本発明1013の方法。
[本発明1024]
st-crRNAをコードする外来性核酸およびCpf1酵素をコードする外来性核酸を含む、遺伝子改変細胞。
[本発明1025]
T細胞である、本発明1024の遺伝子改変細胞。
[本発明1026]
T細胞が初代T細胞である、本発明1025の遺伝子改変細胞。
[本発明1027]
Cpf1酵素がアシダミノコッカス属Cpf1（AsCpf1）を含む、本発明1024の遺伝子改変細胞。
[本発明1028]
Cpf1酵素がラクノスピラ科Cpf1（LbCpf1）を含む、本発明1024の遺伝子改変細胞。
[本発明1029]
st-crRNAが、crRNAの5'末端にステムループ構造を含む、本発明1024の遺伝子改変細胞。
[本発明1030]
st-crRNAが、crRNAの3'末端にステムループ構造を含む、本発明1024の遺伝子改変細胞。
[本発明1031]
ステムループ構造が、ステムループの5'末端に付加された3つのグリシン残基をさらに含む、本発明1030の遺伝子改変細胞。
[本発明1032]
st-crRNAのプロトスペーサー領域が、部分的ホスホロチオエート化（PMS）修飾をさらに含む、本発明1031の遺伝子改変細胞。
[本発明1033]
養子細胞移入療法の方法であって、それを必要とする対象に、本発明1024〜1032のいずれかの改変細胞を含む改変細胞の集団を投与する段階を含む、前記方法。
[本発明1034]
対象における疾患または状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、本発明1024〜1032のいずれかの改変細胞を含む改変細胞の集団を投与する段階を含む、前記方法。
[本発明1035]
疾患または状態が、感染症、自己免疫疾患および癌からなる群より選択される、本発明1034の方法。
[本発明1036]
対象がヒトである、本発明1033〜1034のいずれかの方法。
[本発明1037]
疾患または状態に対する二次治療を施す段階をさらに含む、本発明1033〜1034のいずれかの方法。

Claims (31)

  1. (a)ステムループCRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）RNA（st-crRNA）を含む外来性核酸であって、該crRNAが、細胞中の標的核酸配列にハイブリダイズする、外来性核酸、および
    (b)Cpf1酵素をコードする外来性核酸
    を細胞に導入する段階を含む、エクスビボの遺伝子編集の方法。
  2. 細胞がT細胞である、請求項1記載の方法。
  3. T細胞が初代T細胞である、請求項2記載の方法。
  4. 導入する段階が、前記外来性核酸を細胞内にエレクトロポレーションすることを含む、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
  5. エレクトロポレーションが複数回行われる、請求項4記載の方法。
  6. Cpf1酵素がアシダミノコッカス属（Acidaminococcus）Cpf1（AsCpf1）を含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
  7. Cpf1酵素がラクノスピラ科（Lachnospiraceae）Cpf1（LbCpf1）を含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
  8. st-crRNAが、crRNAの5'末端にステムループ構造を含む、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
  9. st-crRNAが、crRNAの3'末端にステムループ構造を含まない、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
  10. ステムループ構造が、ステムループの5'末端に付加された3つのグアノシン残基をさらに含む、請求項8または9記載の方法。
  11. 3つのグアノシン残基がホスホロチオエート化によって修飾されている、請求項10記載の方法。
  12. st-crRNAのプロトスペーサー領域が、部分的ホスホロチオエート化（PMS）修飾をさらに含む、請求項10または11記載の方法。
  13. st-crRNAのハンドル構造が修飾されていない、請求項1〜12のいずれか一項記載の方法。
  14. st-crRNAのcrRNA部分が少なくとも17bp長である、請求項1〜13のいずれか一項記載の方法。
  15. 標的核酸が、
    TCR α鎖定常領域（TRAC）、TCR β定常領域（TRBC）、およびβ-2ミクログロブリン（B2m）
    からなる群より選択される細胞中の遺伝子座位にハイブリダイズする、請求項1〜14のいずれか一項記載の方法。
  16. st-crRNAをコードする外来性核酸およびCpf1酵素をコードする外来性核酸を含む、遺伝子改変細胞。
  17. T細胞である、請求項16記載の遺伝子改変細胞。
  18. T細胞が初代T細胞である、請求項17記載の遺伝子改変細胞。
  19. Cpf1酵素がアシダミノコッカス属Cpf1（AsCpf1）を含む、請求項16〜18のいずれか一項記載の遺伝子改変細胞。
  20. Cpf1酵素がラクノスピラ科Cpf1（LbCpf1）を含む、請求項16〜19のいずれか一項記載の遺伝子改変細胞。
  21. st-crRNAが、crRNAの5'末端にステムループ構造を含む、請求項16〜20のいずれか一項記載の遺伝子改変細胞。
  22. st-crRNAが、crRNAの3'末端にステムループ構造を含まない、請求項16〜21のいずれか一項記載の遺伝子改変細胞。
  23. ステムループ構造が、ステムループの5'末端に付加された3つのグアノシン残基をさらに含む、請求項22記載の遺伝子改変細胞。
  24. 3つのグアノシン残基がホスホロチオエート化によって修飾されている、請求項23記載の遺伝子改変細胞。
  25. st-crRNAのプロトスペーサー領域が、部分的ホスホロチオエート化（PMS）修飾をさらに含む、請求項23または24記載の遺伝子改変細胞。
  26. st-crRNAのハンドル構造が修飾されていない、請求項16〜25のいずれか一項記載の遺伝子改変細胞。
  27. st-crRNAのcrRNA部分が少なくとも17bp長である、請求項16〜26のいずれか一項記載の遺伝子改変細胞。
  28. 請求項16〜27のいずれか一項記載の改変細胞を含む改変細胞の集団を含む、養子細胞移入療法のための医薬。
  29. 請求項16〜27のいずれか一項記載の改変細胞を含む改変細胞の集団を含む、疾患または状態を治療するための医薬。
  30. 疾患または状態が、感染症、自己免疫疾患および癌からなる群より選択される、請求項29記載の医薬。
  31. 疾患または状態に対する二次治療と組み合わせて用いられることを特徴とする、請求項29または30記載の医薬。
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