JP2020507328A - Bcma、nkg2d及びcd16と結合するタンパク質 - Google Patents
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Abstract
Description
この出願は、2017年2月10日に出願された米国仮出願第62/457,780号の恩典及び優先権を主張するものであり、その内容の全体が、あらゆる目的のために本明細書中に参照により組み込まれる。
この出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出されている、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる配列表を含有する。該ASCIIコピーは、2018年2月8日に作成され、DFY-003PC_SL.txtと名付けられ、かつ91,310バイトのサイズである。
本発明は、B細胞成熟抗原(BCMA)、NKG2D受容体、及びCD16に結合する多重特異性結合性タンパク質に関する。
がんは、この疾患を治療するための文献に報告された多大な研究努力及び科学の前進にもかかわらず、重要な健康問題であり続けている。血液及び骨髄がんは、頻繁に診断されるがんタイプであり、多発性骨髄腫、白血病、及びリンパ腫を含む。これらのがんのための現在の治療選択肢は、全ての患者について有効ではなく、かつ/又は実質的な不利な副作用を有し得る。他のタイプのがんもまた、既存の治療選択肢を使用して治療するのが困難なままである。
本発明は、がん細胞上のBCMA、及びナチュラルキラー細胞上のNKG2D受容体及びCD16受容体に結合する多重特異性結合性タンパク質を提供する。このようなタンパク質は、2種類以上のNK活性化受容体をエンゲージすることができ、NKG2Dへの天然リガンドの結合を遮断し得る。ある実施態様において、このタンパク質は、ヒトにおいて、及びげっ歯類及びカニクイザルのような他の種において、NK細胞を刺激することができる。本発明の種々の態様及び実施態様は、以下においてさらに詳細に記載される。
本発明は、がん細胞上のBCMAとナチュラルキラー細胞上のNKG2D受容体及びCD16受容体とに結合してナチュラルキラー細胞を活性化する多重特異性結合性タンパク質、そのような多重特異性結合性タンパク質を含む医薬組成物、及び、がんの治療のためのものを含む、そのような多重特異性タンパク質及び医薬組成物を使用する治療方法を提供する。本発明の種々の態様は、以下において節に分けて説明される;しかし、一つの特定の節において記載される本発明の態様は、いかなる特定の節にも限定されるべきではない。
本発明は、がん細胞上のBCMAと、ナチュラルキラー細胞上のNKG2D受容体及びCD16受容体とに結合して、ナチュラルキラー細胞を活性化する多重特異性結合性タンパク質を提供する。この多重特異性結合性タンパク質は、本明細書において記載される医薬組成物及び治療方法において有用である。ナチュラルキラー細胞上のNKG2D受容体及びCD16受容体に対する多重特異性結合性タンパク質の結合は、がん細胞の破壊に向けてナチュラルキラー細胞の活性を増強する。がん細胞上のBCMAに対する多重特異性結合性タンパク質の結合は、がん細胞をナチュラルキラー細胞の近傍に運び、それがナチュラルキラー細胞によるがん細胞の直接又は間接の破壊を促進する。さらに、例示的な多重特異性結合性タンパク質の説明を以下に提供する。
ある実施態様において、NKG2D結合ドメイン及び腫瘍関連抗原のための結合ドメインを含む、本明細書において記載されるTriNKETは、ヒトNKG2Dを発現する細胞に結合する。ある実施態様において、NKG2D結合ドメイン及び腫瘍関連抗原のための結合ドメインを含むTriNKETは、同じ腫瘍関連抗原結合ドメインを有するモノクローナル抗体のレベルと匹敵するレベルで腫瘍関連抗原に結合する。
本発明は、本明細書に記載される多重特異性結合性タンパク質及び/又は本明細書に記載される医薬組成物を使用してがんを治療する方法を提供する。この方法は、治療的有効量の本明細書に記載される多重特異性結合性タンパク質を、それを必要とする患者に投与することにより、BCMAを発現する多種多様ながんを治療するために使用し得る。
本発明の別の態様は、組み合わせ療法を提供する。本明細書において記載される多重特異性結合性タンパク質は、がんを治療するために付加的な治療剤と組み合わせて使用することができる。
本開示は、治療的有効量の本明細書において記載されるタンパク質を含有する医薬組成物をも特徴とする。この組成物は、多様な薬物送達系における使用のために製剤化することができる。一つ以上の生理学的に許容し得る賦形剤又は担体もまた、適正な製剤化のために組成物に含ませることができる。本開示における使用のために好適な製剤は、「レミントンの製剤科学」(Remington's Pharmaceutical Sciences)、Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 第17版, 1985に見い出される。薬物送達の方法の手短な総説については、たとえば Langerの文献(Science 249:1527-1533, 1990)を参照されたい。
ここで一般的に記載されている本発明は、以下の実施例を参照することによりさらに容易に理解されるであろう。以下の実施例は、本発明のある態様及び実施態様の実例の目的のみのために含まれており、本発明を限定することを意図していない。
NKG2D結合ドメインは精製された組換えNKG2Dに結合する
ヒト、マウス又はカニクイザルNKG2D外部ドメインの核酸配列を、ヒトIgG1 Fcドメインをコードする核酸配列と融合させ、発現されるべき哺乳類細胞中に導入した。精製後、NKG2D-Fc融合タンパク質を、マイクロプレートのウェルに吸着させた。非特異的結合を防ぐためにウシ血清アルブミンを用いてウェルをブロッキングした後、NKG2D結合ドメインを滴定し、NKG2D-Fc 融合タンパク質を予め吸着させたウェルに添加した。一次抗体結合は、ホースラディッシュペルオキシダーゼとコンジュゲート化されヒトカッパ軽鎖を特異的に認識してFc交差反応性を回避する二次抗体を使用して検出した。ホースラディッシュペルオキシダーゼの基質である3,3',5,5'-テトラメチルベンジジン(TMB)をウェルに添加して、結合シグナルを可視化し、その吸光度を、450 nMで測定し、540 nMで修正した。NKG2D結合ドメインクローン、アイソタイプコントロール又は陽性コントロール(配列番号45〜48、又はeBioscienceで入手可能な抗マウスNKG2DクローンMI-6及びCX-5から選択される)を各ウェルに添加した。
EL4マウスリンパ腫細胞株を、ヒト又はマウスNKG2D-CD3ゼータシグナリングドメインキメラ抗原受容体を発現するように改造した。NKG2D結合クローン、アイソタイプコントロール又は陽性コントロールを100 nM濃度で使用して、EL4細胞上で発現された細胞外NKG2Dを染色した。抗体結合は、フルオロフォアをコンジュゲート化した抗ヒトIgG二次抗体を使用して検出した。細胞は、フローサイトメトリーで解析し、バックグラウンドに対する倍数(FOB)を、親EL4細胞と比較してのNKG2D発現細胞の平均蛍光強度(MFI)を使用して算出した。
ULBP-6との競合
組換えヒトNKG2D-Fcタンパク質を、マイクロプレートのウェルに吸着させ、これらのウェルを、ウシ血清アルブミンを用いてブロッキングして、非特異的結合を低減させた。飽和濃度のULBP-6-His-ビオチンをウェルに添加し、続いて、NKG2D結合ドメインクローンを添加した。2時間のインキュベーションの後、ウェルを洗浄し、NKG2D-Fcでコーティングしたウェルに結合した残存するULBP-6-His-ビオチンを、ストレプトアビジンをコンジュゲート化したホースラディッシュペルオキシダーゼ及びTMB基質によって検出した。吸光度を、450 nMで測定し、540 nMで修正した。バックグラウンドを差し引いた後、NKG2D-Fcタンパク質に対するNKG2D結合ドメインの特異的結合を、ウェル中のNKG2D-Fcタンパク質への結合から遮断されたULBP-6-His-ビオチンのパーセンテージから算出した。陽性コントロール抗体(配列番号45〜48から選択される)及び種々のNKG2D結合ドメインは、NKG2DへのULBP-6結合を遮断したが、一方、アイソタイプコントロールは、ULBP-6との競合をほとんど示さなかった(図19)。
組換えヒトMICA-Fcタンパク質を、マイクロプレートのウェルに吸着させ、これらのウェルを、ウシ血清アルブミンを用いてブロッキングして、非特異的結合を低減させた。NKG2D-Fc-ビオチンをウェルに添加し、続いて、NKG2D結合ドメインを添加した。インキュベーション及び洗浄後、MICA-Fcでコーティングしたウェルに結合した残存するNKG2D-Fc-ビオチンを、ストレプトアビジン-HRP及びTMB基質を使用して検出した。吸光度は、450 nMで測定し、540 nMで修正した。バックグラウンドを差し引いた後、NKG2D-Fcタンパク質へのNKG2D結合ドメインの特異的結合を、MICA-Fcでコーティングされたウェルへの結合から遮断されたNKG2D-Fc-ビオチンのパーセンテージから算出した。陽性コントロール抗体(配列番号45〜48から選択される)及び種々のNKG2D結合ドメインは、NKG2DへのMICA結合を遮断したが、一方、アイソタイプコントロールは、MICAとの競合をほとんど示さなかった(図20)。
組換えマウスRae-1デルタ-Fc(R&D Systemsから購入した)を、マイクロプレートのウェルに吸着させ、これらのウェルを、ウシ血清アルブミンを用いてブロッキングして、非特異的結合を低減させた。マウスNKG2D-Fc-ビオチンをウェルに添加し、続いて、NKG2D結合ドメインを添加した。インキュベーション及び洗浄後、Rae-1デルタ-Fcでコーティングしたウェルに結合した残存するNKG2D-Fc-ビオチンを、ストレプトアビジン-HRP及びTMB基質を使用して検出した。吸光度は、450 nM で測定し、540 nMで修正した。バックグラウンドを差し引いた後、NKG2D-Fcタンパク質へのNKG2D結合ドメインの特異的結合を、Rae-1デルタ-Fcでコーティングしたウェルへの結合から遮断されたNKG2D-Fc-ビオチンのパーセンテージから算出した。陽性コントロール(配列番号45〜48、又はeBioscienceで入手可能な抗マウスNKG2DクローンMI-6及びCX-5から選択される)及び種々のNKG2D結合ドメインクローンは、マウスNKG2DへのRae-1デルタ結合を遮断したが、一方、アイソタイプコントロール抗体は、Rae-1デルタとの競合をほとんど示さなかった(図21)。
ヒト及びマウスNKG2Dの核酸配列を、CD3ゼータシグナリングドメインをコードする核酸配列に融合して、キメラ抗原受容体(CAR)構築物を得た。NKG2D-CAR構築物を、次に、Gibsonアセンブリーを使用してレトロウイルスベクター中にクローニングし、レトロウイルス産生のためにexpi293細胞にトランスフェクトした。EL4細胞は、8μg/mLポリブレンと一緒にNKG2D-CARを含有するウイルスで感染させた。感染24時間後、EL4細胞中のNKG2D-CARの発現レベルをフローサイトメトリーで解析し、細胞表面上に高レベルのNKG2D-CARを発現するクローンを選択した。
初代ヒトNK細胞
末梢血単核細胞(PBMC)は、密度勾配遠心分離を使用してヒト末梢血バフィーコートから単離した。NK細胞(CD3- CD56+)は、磁性ビーズを用いる陰性選択を使用してPBMCから単離し、単離されたNK細胞の純度は、典型的には>95%であった。単離されたNK細胞を、次に、100 ng/mL IL-2を含有する培地中で24〜48時間培養し、その後、NKG2D結合ドメインを吸着させたマイクロプレートのウェルに移して、フルオロフォアをコンジュゲート化した抗CD107a抗体、ブレフェルジン-A、及びモネンシンを含有する培地中で培養した。培養に続いて、NK細胞を、フルオロフォアをコンジュゲート化したCD3、CD56及びIFN-γに対する抗体を使用して、フローサイトメトリーによってアッセイした。CD107a及びIFN-γ染色を、CD3- CD56+細胞において解析し、NK細胞活性化を評価した。CD107a/IFN-γ二重陽性細胞の増大は、一つの受容体よりも二つの活性化受容体のエンゲージメントを通じた、より良いNK細胞活性化の指標である。NKG2D結合ドメイン及び陽性コントロール(配列番号45〜48から選択される)は、アイソタイプコントロールよりも、より高いパーセンテージのNK細胞がCD107a+及びIFN-γ+になることを示した(図24及び図25は、それぞれがNK細胞調製のために異なるドナーのPBMCを使用した、2回の独立した実験からのデータを表す)。
脾臓は、C57Bl/6マウスから入手し、70μm細胞ストレーナーを通して壊して、単一細胞懸濁液を得た。細胞は、ペレット化し、ACK溶解緩衝液(Thermo Fisher Scientific #A1049201から購入した;155mM塩化アンモニウム、10mM炭酸水素カリウム、0.01mM EDTA)中に再懸濁して、赤血球を除去した。残りの細胞は、100 ng/mL hIL-2と共に72時間培養してから回収し、NK細胞単離のために調製した。NK細胞(CD3-NK1.1+)は、次に、磁性ビーズを用いる陰性除去技術を使用して脾臓細胞から単離し、典型的には>90%の純度であった。精製されたNK細胞を、100 ng/mL mIL-15を含有する培地中で48時間培養してから、NKG2D結合ドメインを吸着させたマイクロプレートのウェルに移して、フルオロフォアをコンジュゲート化した抗CD107a抗体、ブレフェルジン-A、及びモネンシンを含有する培地中で培養した。NKG2D結合ドメインでコーティングしたウェル中での培養の後、NK細胞を、フルオロフォアをコンジュゲート化したCD3、NK1.1及びIFN-γに対する抗体を使用して、フローサイトメトリーによりアッセイした。CD107a及びIFN-γ染色を、CD3- NK1.1+細胞において解析し、NK細胞活性化を評価した。CD107a/IFN-γ二重陽性細胞の増大は、一つの受容体よりも二つの活性化受容体のエンゲージメントを通じた、より良いNK細胞活性化の指標である。NKG2D結合ドメイン及び陽性コントロール(eBioscienceで入手可能な抗マウスNKG2DクローンMI-6及びCX-5から選択される)は、アイソタイプコントロールよりも、より高いパーセンテージのNK細胞がCD107a+及びIFN-γ+になることを示した(図26及び図27は、それぞれがNK細胞調製のために異なるマウスを使用した、2回の独立した実験からのデータを表す)。
ヒト及びマウス初代NK細胞活性化アッセイは、NKG2D結合ドメインとのインキュベーション後のNK細胞上の増大した細胞傷害性マーカーを実証する。このことが、増大した腫瘍細胞溶解につながる(translates into)か否かを調べるために、各NKG2D結合ドメインが単一特異性抗体に開発された細胞ベースのアッセイを利用した。Fc領域は、一つの標的化アームとして使用され、一方、Fab領域(NKG2D結合ドメイン)は、NK細胞を活性化するための別の標的化アームとして作用した。ヒト起源であり、高レベルのFc受容体を発現するTHP-1細胞を腫瘍標的として使用し、Perkin Elmer DELFIA Cytotoxicity Kitを使用した。THP-1細胞は、BATDA試薬で標識し、培地中に105/mLで再懸濁した。標識されたTHP-1細胞を、次に、マイクロタイタープレートのウェル中で、37℃で3時間、NKG2D抗体及び単離されたマウスNK細胞と一緒にした。インキュベーション後、20μlの培養上清を採取し、200μlのユウロピウム溶液と混合し、振とうしながら15分間、遮光してインキュベートした。蛍光を、時間分解蛍光モジュールを備えたPheraStarプレートリーダーリーダー(励起337nm、発光620nm)によって経時的に測定し、キットの指示書に従って特異的溶解を算出した。
NKG2D結合ドメインの融解温度を、示差走査型蛍光定量法を使用してアッセイした。外挿された見かけの融解温度は、典型的なIgG1抗体に関して相対的に高い(図29)。
EL4マウスリンパ腫細胞株を、ヒトNKG2Dを発現するように改造した。各々がNKG2D結合ドメイン、腫瘍関連抗原結合ドメイン(BCMA結合ドメイン)、及び図1に示すようにCD16に結合するFcドメインを含有する三重特異性結合性タンパク質(TriNKET)を、EL4細胞上に発現された細胞外NKG2Dに対するそれらの親和性について試験した。NKG2Dへの多重特異性結合性タンパク質の結合は、フルオロフォアをコンジュゲート化した抗ヒトIgG二次抗体を使用して検出した。細胞をフローサイトメトリーによって解析し、バックグラウンドに対する倍数(FOB)を、親EL4細胞と比較したNKG2D発現細胞の平均蛍光強度(MFI)を使用して算出した。
三重特異性結合性タンパク質はBCMAに結合する
BCMAを発現するMM.1Sヒト骨髄腫細胞を使用して、腫瘍関連抗原BCMAに対するTriNKETの結合をアッセイした。TriNKETは、希釈し、それぞれの細胞と共にインキュベートした。TriNKET、及び場合によってはその親の抗BCMAモノクローナル抗体(EM-801)を、細胞と共にインキュベートし、結合を、フルオロフォアをコンジュゲート化した抗ヒトIgG二次抗体を使用して検出した。細胞を、フローサイトメトリーによって解析し、バックグラウンドに対する倍数(FOB)を、二次抗体コントロールに対して正規化したTriNKET及びEM-801からの平均蛍光強度(MFI)を使用して算出した。C26-TriNKET-BCMA、F04-TriNKET-BCMA、F43-TriNKET-BCMA、及びF47-TriNKET-BCMAは、EM-801と比較して匹敵するレベルの、MM.1S細胞上に発現されたBCMAへの結合を示す(図31)。
初代ヒトNK細胞は、標的を発現するヒトがん細胞株との共培養においてTriNKETによって活性化される
初代ヒトNK細胞をBCMA陽性MM.1S骨髄腫細胞と共培養することにより、初代ヒトNK細胞のTriNKET媒介性活性化がもたらされた。BCMAを標的とするTriNKET(たとえばC26-TriNKET-BMCA及びF04-TriNKET-BMCA)は、CD107a脱顆粒及びIFNγサイトカイン産生の増大によって示されるように、MM.1S骨髄腫細胞と共培養されたヒトNK細胞の活性化を媒介した(図32)。アイソタイプTriNKETと比較して、BCMAを標的とするTriNKET(たとえばA44-TriNKET-BMCA、A49-TriNKET-BMCA、C26-TriNKET-BMCA、F04-TriNKET-BMCA、F43-TriNKET-BMCA、F43-TriNKET-BMCA、F47-TriNKET-BMCA、及びF63-TriNKET-BMCA)は、増大したNK細胞活性を示した(図32)。
末梢血単核細胞(PBMC)は、密度勾配遠心分離を使用してヒト末梢血バフィーコートから単離した。NK細胞(CD3- CD56+)は、磁性ビーズを用いる陰性選択を使用してPBMCから単離し、単離されたNK細胞の純度は、典型的には>90%であった。単離されたNK細胞を、活性化のために100ng/mL IL-2を含有する培地中で培養するか、又はサイトカインなしで一晩休止させた。IL-2活性化された又は休止させたNK細胞を、次の日に細胞傷害性アッセイにおいて使用した。
目的の標的を発現するヒトがん細胞株は、培養から収穫し、細胞をPBSで洗浄し、BATDA試薬(Perkin Elmer AD0116)で標識するために106/mLで成長培地に再懸濁した。標的細胞の標識については、製造業者の指示に従った。標識した後、細胞をPBSで3回洗浄し、0.5〜1.0x105/mLで培地中に再懸濁した。バックグラウンドウェルを調製するために、標識細胞のアリコートを取り分け、細胞を培地から遠心分離した。100 μlの培地を、ペレット化した細胞を崩さないように注意深く3連のウェルに添加した。100 μlのBATDA標識細胞を、96ウェルプレートの各ウェルに添加した。ウェルは、標的細胞からの自発的放出のために保存し、ウェルは、1% Triton-Xの添加により、標的細胞の最大溶解のために調製した。目的の腫瘍標的に対するモノクローナル抗体又はTriNKETを培地で希釈して、50 μlの希釈されたmAb又はTriNKETを各ウェルに添加した。休止させた及び/又は活性化したNK細胞を、培養から収穫し、細胞を洗浄し、所望のE:T比に応じて培地中に105〜2.0×106/mLで再懸濁した。50 μlのNK細胞をプレートの各ウェルに添加し、培地容量を合計で200 μlとした。プレートは、37℃で5%CO2と共に2〜3時間インキュベートしてから、アッセイを発色させた。
NKG2D及びCD16を架橋することによるヒトNK細胞の相乗的活性化を調べた。
末梢血単核細胞(PBMC)は、密度勾配遠心分離を使用してヒト末梢血バフィーコートから単離した。NK細胞は、陰性磁性ビーズ(StemCell # 17955)を使用してPBMCから精製した。NK細胞は、フローサイトメトリーにより決定したところ、>90% CD3-CD56+であった。細胞を、次に100 ng/mL hIL-2(Peprotech #200-02)を含有する培地中で48時間拡大させた後、活性化アッセイに使用した。抗体を、100 μl滅菌PBS中、2 μg/ml(抗CD16、Biolegend # 302013)及び5 μg/mL(抗NKG2D、R&D #MAB139)の濃度で、4℃で一晩、96ウェル平底プレート上にコーティングし、続いて、過剰な抗体を除去するためにウェルを十分に洗浄した。脱顆粒の評価のために、IL-2活性化されたNK細胞を、5×105細胞/mlで、100 ng/mL hIL2及び1 μg/mL APCコンジュゲート化抗CD107a mAb(Biolegend # 328619)を補充した培地中に再懸濁した。1×105細胞/ウェルを、次に、抗体でコーティングしたプレートに添加した。タンパク質輸送阻害剤であるブレフェルジンA(BFA, Biolegend # 420601)及びモネンシン(Biolegend # 420701)を、それぞれ最終希釈1:1000及び1:270で添加した。プレーティングした細胞は、5% CO2中、37℃で4時間、インキュベートした。IFN-γの細胞内染色のために、NK細胞を、抗CD3(Biolegend #300452)及び抗CD56 mAb(Biolegend # 318328)で標識し、その後、固定し、透過性にし、抗IFN-γ mAb(Biolegend # 506507)で標識した。NK細胞を、生CD56+CD3-細胞上でゲーティングした後、フローサイトメトリーによって、CD107a及びIFN-γの発現について解析した。
本明細書において引用される特許書類及び科学的記事の各々の開示全体は、あらゆる目的のために参照により組み込まれる。
本発明は、その精神又は本質的な特徴から逸脱することなしに、他の具体的な形態に具体化されてもよい。前述の実施態様は、それゆえ全ての観点において本明細書において記載される本発明を限定するものではなく実例となるものとして考慮されるべきである。したがって、本発明の範囲は、前述の記載によってよりもむしろ添付の請求項によって示されるのであり、請求項の等価物の意味及び範囲内にある全ての変更は、その中に含まれることが意図されている。
Claims (36)
- 以下のもの:
(a) NKG2Dに結合する第一の抗原結合部位;
(b) BCMAに結合する第二の抗原結合部位;及び
(c) CD16に結合するのに十分な抗体Fcドメインもしくはその部分、又はCD16に結合する第三の抗原結合部位
を含むタンパク質。 - 前記第一の抗原結合部位が、ヒト、非ヒト霊長類、及びげっ歯類のNKG2Dに結合する、請求項1記載のタンパク質。
- 前記第一の抗原結合部位が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む、請求項1又は2記載のタンパク質。
- 前記重鎖可変ドメイン及び前記軽鎖可変ドメインが、同じポリペプチドに存在する、請求項3記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む、請求項3〜4のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインが、同じポリペプチドに存在する、請求項5記載のタンパク質。
- 前記第一の抗原結合部位の軽鎖可変ドメインが、前記第二の抗原結合部位の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有する、請求項5又は6記載のタンパク質。
- 前記第一の抗原結合部位が、配列番号1と少なくとも90%同一の重鎖可変ドメインを含む、請求項1〜7のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第一の抗原結合部位が、配列番号41と少なくとも90%同一の重鎖可変ドメイン及び配列番号42と少なくとも90%同一の軽鎖可変ドメインを含む、請求項1〜7のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第一の抗原結合部位が、配列番号43と少なくとも90%同一の重鎖可変ドメイン及び配列番号44と少なくとも90%同一の軽鎖可変ドメインを含む、請求項1〜7のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第一の抗原結合部位が、配列番号45と少なくとも90%同一の重鎖可変ドメイン及び配列番号46と少なくとも90%同一の軽鎖可変ドメインを含む、請求項1〜7のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第一の抗原結合部位が、配列番号47と少なくとも90%同一の重鎖可変ドメイン及び配列番号48と少なくとも90%同一の軽鎖可変ドメインを含む、請求項1〜7のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第一の抗原結合部位が、単一ドメイン抗体である、請求項1又は2記載のタンパク質。
- 前記単一ドメイン抗体が、VHHフラグメント又はVNARフラグメントである、請求項13記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む、請求項1〜2又は13〜14のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインが、同じポリペプチドに存在する、請求項15記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位の重鎖可変ドメインが、配列番号49と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含み、前記第二の抗原結合部位の軽鎖可変ドメインが、配列番号53又は配列番号54と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、請求項1〜16のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位の重鎖可変ドメインが、
配列番号50のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR1配列;
配列番号51のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR2配列;及び
配列番号52のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR3配列
を含むアミノ酸配列を含む、請求項1〜17のいずれか1項記載のタンパク質。 - 前記第二の抗原結合部位の軽鎖可変ドメインが、
配列番号55のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR1配列;
配列番号56のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR2配列;及び
配列番号57又は配列番号57のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR3配列
を含むアミノ酸配列を含む、請求項18記載のタンパク質。 - 前記第二の抗原結合部位の重鎖可変ドメインが、配列番号59と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含み、前記第二の抗原結合部位の軽鎖可変ドメインが、配列番号60と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、請求項1〜16のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位の重鎖可変ドメインが、
配列番号79のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR1配列;
配列番号80のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR2配列;及び
配列番号81のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR3配列
を含むアミノ酸配列を含む、請求項1〜16又は20のいずれか1項記載のタンパク質。 - 前記第二の抗原結合部位の軽鎖可変ドメインが、
配列番号82のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR1配列;
配列番号83のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR2配列;及び
配列番号84のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR3配列
を含むアミノ酸配列を含む、請求項21記載のタンパク質。 - 前記第二の抗原結合部位の重鎖可変ドメインが、配列番号61と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含み、前記第二の抗原結合部位の軽鎖可変ドメインが、配列番号62と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、請求項1〜16のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位の重鎖可変ドメインが、
配列番号85のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR1配列;
配列番号86のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR2配列;及び
配列番号87のアミノ酸配列と同一の重鎖CDR3配列
を含むアミノ酸配列を含む、請求項1〜16又は23のいずれか1項記載のタンパク質。 - 前記第二の抗原結合部位の軽鎖可変ドメインが、
配列番号88のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR1配列;
配列番号89のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR2配列;及び
配列番号90のアミノ酸配列と同一の軽鎖CDR3配列
を含むアミノ酸配列を含む、請求項24のいずれか1項記載のタンパク質。 - 前記第二の抗原結合部位が、単一ドメイン抗体である、請求項1〜4又は8〜14のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記第二の抗原結合部位が、VHHフラグメント又はVNARフラグメントである、請求項26記載のタンパク質。
- 前記タンパク質が、CD16に結合するのに十分な抗体Fcドメインの部分を含み、前記抗体Fcドメインが、ヒンジ及びCH2ドメインを含む、請求項1〜27のいずれか1項記載のタンパク質。
- 前記抗体Fcドメインが、ヒトIgG1抗体のヒンジ及びCH2ドメインを含む、請求項28記載のタンパク質。
- 前記Fcドメインが、ヒトIgG1抗体のアミノ酸234〜332と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、請求項28又は29記載のタンパク質。
- 前記Fcドメインが、ヒトIgG1のFcドメインと少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含み、Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411、K439からなる群から選択される1以上の位置で相違する、請求項28〜30のいずれか1項記載のタンパク質。
- 請求項1〜31のいずれか1項記載のタンパク質及び医薬として許容し得る担体を含む、製剤。
- 請求項1〜31のいずれか1項記載のタンパク質を発現する1以上の核酸を含む、細胞。
- 直接的に及び/又は間接的に腫瘍細胞死を増強する方法であって、腫瘍及びナチュラルキラー細胞を、請求項1〜31のいずれか1項記載のタンパク質に曝露することを含む、方法。
- がんを治療する方法であって、請求項1〜31のいずれか1項記載のタンパク質又は請求項32記載の製剤を患者に投与することを含む、方法。
- 前記がんが、多発性骨髄腫、急性骨髄単球性白血病、T細胞リンパ腫、急性単球性白血病、及び濾胞性リンパ腫からなる群から選択される、請求項35記載の方法。
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