JP2020505316A - 血漿２’−デオキシウリジン（ｄＵｒｄ）の増加およびチミジル酸合成酵素阻害のための方法 - Google Patents

Abstract

【課題】本発明は、６Ｒ−ＭＴＨＦの投与を含む血漿ｄＵｒｄレベルを増加させるための方法を提供する。【解決手段】この血漿ｄＵｒｄを増加させる方法は、等モル濃度のＬＶと比較してｄＵｒｄレベルを増加させる。本発明はまた、６Ｒ−ＭＴＨＦの投与を含むＴＳ阻害を増加させるための方法を提供する。本発明はまた、６Ｒ−ＭＴＨＦの投与を含むＴＳ阻害を増加させるための方法を提供する。【選択図】図１

Description

本出願は、参考として全体が本明細書に組み込まれる２０１７年２月１４日出願の米国特許仮出願番号第６２／４５８８６８号への優先権を主張する。

本発明は、ヒトにおけるがんなどの固形腫瘍の治療に関し、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）をベースにした化学療法における［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（６Ｒ−ＭＴＨＦ）の投与を含む。

５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、１９５７年に最初に導入され、未だに結腸直腸がん（ＣＲＣ）を含む固形腫瘍の主力となる治療である。５−ＦＵは、主にチミジル酸合成酵素（ＴＳ）の阻害によって、ある程度はまた代謝物のＲＮＡへの組み込みによって細胞傷害活性を発揮する（Ford et al. （2002） Clinical Cancer Research 2002; 8（1）: 103-109）。５−ＦＵ単独の奏効率は非常に限定的で（１０〜１５％）、５−ＦＵの抗がん活性を増加させるために調節戦略が開発された（Johnston et al. Anticancer Drugs 2001, 12: 639-646）。最も広く使用された戦略の１つは、葉酸塩である５−ホルミルテトラヒドロ葉酸（フォリン酸またはロイコボリンまたはＬＶ）と５−ＦＵとの同時投与を含む（Romanini et al. （1991） Cancer Res., 51: 789-793; Keyomarsi et al. （1988） J. Biol. Chem., 263: 14402-14409）。ＬＶは、ＤＮＡ合成に必要な酵素であるチミジル酸合成酵素（TS）を阻害する３元複合体を安定化する（Longley et al. （2003） Nat. Rev. Cancer, 3（5）:330-8）。ＬＶを５−ＦＵに添加することによって、奏効率は２０％超まで増加した（同文献）。

還元型葉酸塩である、フォトレキソリン（fotrexorin）カルシウム（ＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標））（（ｄｌ）−５，１０−メチレンプテロイル−モノグルタミン酸カルシウム塩または［６Ｒ，Ｓ］−５，１０−メチレン−ＴＨＦＣａ塩）は、ラセミ体メチレンＴＨＦとしても知られ、ＬＶの代わりに還元型葉酸メチレンＴＨＦを直接投与することが臨床的活性に関して著しい利点をもたらすであろうという仮説に基づいて、ＬＶの代替物として提案されたことがある。ＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）は、２つのジアステレオ異性体の１：１混合物である（Odin, E., Carlsson, G., Frosing, R., Gustavsson, B., Spears, C.P., Larsson, P.A., 1998. Chemical stability and human plasma pharmacokinetics of reduced folates. Cancer Invest. 16, 447-455）。［６Ｒ］異性体は直接活性のあるＴＳの補助基質であることから、ロイコボリンの代わりにＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）を投与することは、臨床上の安全性および有効性の両方について患者間および患者内の変動が少ないため有利であると期待される。

実際に、過去に治療を受けていない転移性結腸直腸がんにおける第ＩＩ相臨床試験では、ＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）の奏効率は３５％であることが見いだされ（Saif, M.W, Merritt, J, Robbins J, Stewart J., Schupp, J, 2006. Phase III Multicenter Randomized Clinical Trial to Evaluate the Safety and Efficacy of CoFactor(R)/5-Fluorouracil/Bevacizumab Versus Leucovorin/5-Fluoro-uracil/ Bevacizumab as Initial Treatment for Metastatic Colorectal Carcinoma Clinical Colorectal Cancer, Vol. 6, No. 3, 229-234, 2006）、別の第Ｉ／ＩＩ相臨床試験では、５−ＦＵと併用したＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）は、膵臓がんでは患者の４０％において、安定した疾患または腫瘍応答として定義された臨床的有用性を示すことが示された（Saif, M.W., Makrilia N., Syrigos K., 2010. CoFactor: Folate Requirement for Optimization of 5-Fluouracil Activity in Anticancer Chemotherapy. Journal of Oncology Vol. 1-5）。しかし、肝臓で不必要な解毒の負担が表れることは別として、非天然（６Ｓ）異性体は、ＴＳの補助基質としての効果に関して、天然［６Ｒ］異性体の部分的な競合的阻害剤である（Leary, R.P., Gaumont, Y., Kisliuk, R.L., 1974. Effects of the diastereoisomers of methylenetetra-hydro--folate on the reaction catalyzed by thymidylate synthetase. Biochem. Biophys. Res. Commun. 56, 484-488）。さらに、第ＩＩｂ相臨床試験では、結腸直腸がんにおけるＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）は、有効性および安全性のいずれに関しても試験群間に有意差を見いだすことはできなかったので、ロイコボリンよりも有効であることは示されず、結腸直腸がんでの第ＩＩＩ相臨床試験計画は、完了前に中止された（報道発表:ADVENTRX Provides Update on Cofactor Program. Nov 2, 2007）。

３元複合体を安定化し、ＴＳの阻害を増強する組成物および方法の必要性は依然として非常に大きい。本発明者らは、驚くべきことに、６Ｒ−ＭＴＨＦの投与が等モル濃度のＬＶの投与と比較して２’−デオキシウリジン（dUrd）の血漿レベルを増加させることを発見した。驚くべきことに、本発明者らは、６Ｒ−ＭＴＨＦの投与が等モル濃度のＬＶの投与と比較してＴＳの阻害を増加させることを発見した。

本発明者らは、５−ＦＵと同時投与したとき、驚くべきことに６Ｒ−ＭＴＨＦの等モル用量がＬＶと比較して有意に高い血漿中のｄＵｒｄレベルを生じることを発見した。血漿２’−デオキシウリジン（ｄＵｒｄ）の上昇はＴＳ阻害のマーカーである（Ford et al （2002）Clinical Cancer Research, 8（1）: 103-109）。本発明は、驚くべきことに、６Ｒ−ＭＴＨＦの投与を含む血漿ｄＵｒｄレベルを増加させるための方法を提供する。この血漿ｄＵｒｄを増加させる方法は、等モル濃度のＬＶと比較してそのレベルを増加させる。本発明はまた、６Ｒ−ＭＴＨＦの投与を含むＴＳ阻害を増加させるための方法を提供する。

ＴＳ−阻害の代替マーカーとしての血漿ｄＵｒｄ上昇は、次第に一般に好まれるバイオマーカーになった。その分析はまた、血液採取およびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により、実施が比較的容易である。５−ＦＵのようなＴＳ阻害剤による治療は、ＴＳ基質ｄＵＭＰの細胞内プールの上昇を引き起こし、これは対応するヌクレオシドのｄＵｒｄレベル上昇に反映され、これは主として細胞外であり、血漿中で測定することができる。さらに、血漿ｄＵｒｄの上昇はＴＳ阻害剤の投与の後に示されたため、ＴＳ阻害の代替マーカーである（Ford et al （2002））。

血漿ｄＵｒｄレベルの上昇は、５−ＦＵ治療中における現在の体内の総合的な腫瘍ＴＳ阻害状態を直接表しており、転移を含む存在する腫瘍部位全てを反映していると発明者らは理解している。

上記は、腫瘍中ではＴＳの基本的な活性が粘膜におけるよりもずっと高いという発見および代謝物である５−フルオロデオキシウリジン１リン酸（ＦｄＵＭＰ）のＴＳへの結合および５−ＦＵ治療中のＴＳ阻害効果の両方が腫瘍においては粘膜および体のその他の細胞におけるよりもはるかに高いという発見によって強く裏付けられる。外来性の葉酸（ＭＴＨＦ）の添加がない場合、腫瘍ではＦｄＵＭＰの結合がほとんど認められないことにも注目すべきである（Peters et al. （1991）Eur J Cancer, 27（3）: 263-267）.

したがって、例えば、腫瘍もしくは粘膜の生検または単離されたＴＳ酵素のインビトロにおける研究にのみ限定される、^３Ｈ−ＦｄＵＭＰのＴＳ結合をベースにした古い測定法よりも、ＴＳ阻害の代替マーカーとしての血漿ｄＵｒｄレベルは、明らかにはっきりしている。これらの放射標識ベースの結合測定法は今日では使用されたとしても稀で、非常に大きな変動幅と強く関連しており（Peters et al. （1991）Eur J Cancer, 27（3）: 263-267）、測定のために必要な材料を入手することも困難である。

腫瘍が、腫瘍壊死を起こすのに必要なアポトーシス状態に入るのには、９０％を上回る程度のＴＳ阻害が必要であると本発明者らは考えている。さらに、６Ｒ−ＭＴＨＦは、９０％およびそれ以上のレベルのＴＳ阻害を得るために必要なレベルまで上記阻害性３元複合体を安定化する能力を有すると考えられる。

５−ＦＵを、６Ｒ−ＭＴＨＦ（「６Ｒ」として示す）３０および６０ｍｇ／ｍ^２と共に投与した後のＴＳ阻害の増加を、ラセミ体（ｄ，ｌ−ＬＶまたはＬＶ）６０ｍｇ／ｍ^２に匹敵するｌ−ＬＶ（「ＬＬＶ」）３０ｍｇ／ｍ^２（「ＬＬＶ３０」として示す）と比較した図である。 ５−ＦＵを６Ｒ−ＭＴＨＦ（「６Ｒ」として示す）３０および６０ｍｇ／ｍ^２と共に投与した後、血漿ｄＵｒｄレベルをＬＬＶ３０ｍｇ／ｍ^２（ｄ，ｌ−ＬＶもしくはＬＶ６０ｍｇ／ｍ^２またはＬＶ６０）と比較した図である。 ｌ−ＬＶ３０ｍｇ／ｍ^２（「ＬＬＶ３０」として示す）（ｄ，ｌ−ＬＶもしくはＬＶの６０ｍｇ／ｍ^２）または６Ｒ−ＭＴＨＦ３０ｍｇ／ｍ^２（「Ｍ３０」として示す）のボーラス注射と一緒に投与した５−ＦＵ５００ｍｇ／ｍ^２のボーラス注射の２４時間後の血漿ｄＵｒｄレベル増分として示した、ＬＶおよび６Ｒ−ＭＴＨＦの等モル比較を示した図である。増分は、ＬＬＶサイクル（ｎ＝４８）および６Ｒ−ＭＴＨＦサイクル（ｎ＝１８）での２４時間（ｔ_２４）のｄＵｒｄ血漿濃度マイナス注射直前（ｔ_０）の血漿ｄＵｒｄ濃度の間の個々の差として計算した。ＬＬＶは、ＬＬＶと、非天然の（あまり）活性型ではないｄ−ＬＶとの５０：５０混合物であるＬＶの活性型天然異性体である。６Ｒ−ＭＴＨＦおよびＬＬＶの分子量は、等モル比較をベースにすると十分類似している。群間の差は、マンホイットニーのＵ検定で検定した（ｐ＜０．０５）。 ＬＬＶ３０ｍｇ／ｍ^２（「ＬＬＶ３０」として示す）（ｄ，ｌ−ＬＶもしくはＬＶの６０ｍｇ／ｍ^２）または６Ｒ−ＭＴＨＦ３０ｍｇ／ｍ^２（「Ｍ３０」として示す）もしくは６０ｍｇ／ｍ^２（「Ｍ６０」として示す）のボーラス注射と一緒に投与した５−ＦＵ５００ｍｇ／ｍ^２のボーラス注射の２４時間後の血漿ｄＵｒｄレベル増分の６Ｒ−ＭＴＨＦ用量依存性の増加を示した図である。増分は、ＬＬＶサイクル（３０ｍｇ／ｍ^２ ｎ＝４８）および６Ｒ−ＭＴＨＦサイクル（３０ｍｇ／ｍ^２ ｎ＝１８；６０ｍｇ／ｍ^２ ｎ＝１６）での２４時間（ｔ_２４）のｄＵｒｄ血漿濃度マイナス注射直前（ｔ_０）の血漿ｄＵｒｄ濃度の個々の差として計算した。群間の差は有意で、フリードマン２元配置分散分析で検定した（ｐ＜０．０５）。

一実施形態では、任意選択により１つまたは複数の適切な賦形剤および／またはクエン酸もしくはアスコルビン酸もしくはそれらの塩形態などの抗酸化剤によって安定化した、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（６Ｒ−ＭＴＨＦ）またはその薬学的に許容される塩を、水中で溶解する固形物または凍結乾燥物として使用する。一実施形態では、６Ｒ−ＭＴＨＦは１回または複数回のＩＶボーラスとして投与し、各ボーラスは、５〜１０００ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ（体表面積）、例えば、５ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、７ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、１０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、１５ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、３０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、６０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、１２０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、２４０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、４８０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡ、例えば、７２０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡまたは例えば、９６０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡを含有する。本明細書では、「ボーラス」とは、単回投与がある期間に亘って一定の濃度で投与される静脈内注入とは違って、医薬組成物の単回投与が一度に投与される静脈内投与の方法を意味する。

投薬量は、療法の形態、調製物の適用形態ならびに患者の年齢、体重、栄養状態および症状によって変化する。治療は、最適量を下回る、より少ない量で開始することができ、最適な効果を実現するために増加させることできる。療法で使用した好ましい用量の範囲は、１日当たり１０ｍｇと３０００ｍｇの間、特に１日当たり５０ｍｇと５００ｍｇの間である。投与は、単回投与として、または反復投与として達成することができる。

一実施形態では、６Ｒ−ＭＴＨＦは遊離酸の形態、薬学的に許容される塩の形態、特に酸性塩、およびアルカリもしくはアルカリ土類金属塩であってもよい。

別の実施形態では、ＭＴＨＦは両ジアステレオ異性体、特にジアステレオ異性体として純粋な、天然の６Ｒ−ＭＴＨＦを含む。本明細書では、用語「ジアステレオ異性体として純粋な」とは、その他の異性体よりも約８０％を上回って、好ましくは約９０％を上回って、好ましくは約９５％を上回って、より好ましくは約９７％を上回って、さらにより好ましくは約９９％を上回って、より好ましくは約９９．５％以上を上回って、最も好ましくは１００％までの異性体としての６Ｒ−ＭＴＨＦまたはその塩を意味し、残部はその他の異性体である６Ｓ−ＭＴＨＦである。

別の実施形態では、６Ｒ−ＭＴＨＦは化学的に純粋である。本明細書では、用語「化学的に純粋」とは、ＨＰＬＣによって判定して、化学的純度が約８０％、好ましくは約９０％、より好ましくは約９５％、より好ましくは約９７％、より好ましくは化学的純度が約９８％、最も好ましくは化学的純度が９９％または９９％より高い、例えば、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９または１００％までの化合物を意味する。化学的な不純物は、未処理の開始材料（溶媒を含む）、６Ｒ−ＭＴＨＦの分解生成物（テトラヒドロ葉酸およびその分解生成物など）などを含み得る。

任意選択により、６Ｒ−ＭＴＨＦを含む医薬組成物は、例えば、少なくとも１つの抗がん化合物をさらに含んでいてもよい。抗がん化合物は、限定されないが、１つまたは複数の化学療法剤、例えば、限定されないが、核酸、特にフッ素化した核酸（例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）またはその類似体もしくはプロドラッグ）、葉酸代謝拮抗剤（例えば、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、ロメトレキソール）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン）、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキセート、ゲムシタビン、テザシタビン）、５−ＦＵモジュレーター、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、カルムスチン）、核酸生合成阻害剤（例えば、マイトマイシン、アントラサイクリン（例えば、エピルビシン、ドキソルビシン）、白金誘導体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）、微小管破壊薬（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン、ビンクリスチン）、ホルモン遮断薬（例えば、タモキシフェン）、限定されないが、受容体および非受容体チロシンキナーゼを含むキナーゼの阻害剤（例えば、イレッサ、タルセバ、ＳＵ５４１６、ＰＴＫ７８７、グリベック）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、免疫モジュレーター（例えば、レバミソール）、抗炎症薬、血管新生阻害剤、サイトカイン（例えば、インターロイキン、腫瘍壊死因子）ならびにサイトカイン、ホルモンまたはサイトカインもしくはホルモンの受容体の活性を阻害する薬（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体ベバシズマブもしくは「アバスチン」）を含むことができる。抗がん化合物はまた、モノクローナル抗体、例えば、限定されないが、サイトカイン、ホルモンまたはホルモン受容体に結合するモノクローナル抗体（例えば、ＥＧＦもしくはＶＥＧＦ成長因子の活性を遮断する抗体、例えば、アバスチン、アービタックス、ハーセプチン）などを含むことができる。一実施形態では、６Ｒ−ＭＴＨＦは、少なくとも１つの抗がん化合物の治療有効量と組み合わせて投与される。６Ｒ−ＭＴＨＦを少なくとも１つの抗がん化合物の治療有効量と組み合わせて投与するとき、当業者であれば、少なくとも１つの抗がん化合物は６Ｒ−ＭＴＨＦの前、後または同時に投与することができることを理解するであろう。

以下の実施例は、本発明の性質を単に示すものであって、いかなる様式によっても本発明の範囲も添付の特許請求の範囲も限定しないものとする。

実施例１
５−ＦＵおよび葉酸塩による治療
１．試験デザイン
６Ｒ−ＭＴＨＦの安全性および有効性を、ステージＩＶの結腸直腸がん（ｍＣＲＣ）の患者における非盲検多施設共同第Ｉ／ＩＩ相用量コホート試験（ＩＳＯ−ＣＣ−００５）で分析し、ステージＩＶの結腸直腸がんの患者における、５−ＦＵ（５００ｍｇ／ｍ^２）単独の標準的用量と組み合わせた、またはベバシズマブ、オキサリプラチンもしくはイリノテカンの固定用量と組み合わせた、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（［６Ｒ］−ＭＴＨＦ）の安全で許容できるｉ．ｖ．ボーラス用量を決定した。。患者（ｎ＞３）の群の中で、６Ｒ−ＭＴＨＦを３０〜２４０ｍｇ／ｍ^２ＢＳＡの漸増用量を、細胞傷害性の５−ＦＵ単独または５−ＦＵと標準的投与レベルで投与したオキサリプラチン、ベバシズマブもしくはイリノテカンとの様々な組み合わせの存在下で評価した。この試験は、２０１７年末までに完了する予定である。試験デザインおよび各試験群の概要を以下の表１に示す。

ヨーテボリでは、ほぼ２０年に亘って、ＣＲＣの全患者の臨床治療および臨床成績データを収集してきた。血漿および組織試料は、長期保存のための適切な物理的条件下でバイオバンクに保存されてきた。データベースおよびバイオバンクは、適当な倫理学的規制認可の下で稼働する。標準的５−ＦＵ用量、５００ｍｇ／ｍ^２およびｉ．ｖ．ボーラスＬＶ、６０ｍｇ／ｍ^２（ＬＬＶの３０ｍｇ／ｍ^２と同等）で治療された患者をデータバンクから無作為に抽出した。

全患者について、保存した血漿試料をｄＵｒｄの判定のために使用した。

本試験は、歴史的な群比較試験である。患者は全て、ボーラス注射として投与された５−ＦＵ５００ｍｇの標準的用量と、やはりボーラス注射として投与された葉酸塩である６Ｒ−ＭＴＨＦまたはＬＶのそれぞれで治療された。

２．６Ｒ−ＭＴＨＦで治療した患者
全ての患者を、５−ＦＵによる２つの連続的治療サイクルの間、測定した。ｄＵｒｄの値は５−ＦＵの注射直前（ｔ_０）および２４時間後（ｔ_２４）に測定した。患者のｔ_２４とｔ_０の間の差の平均値および標準偏差を、６Ｒ−ＭＴＨＦ３０および６０ｍｇ／ｍ^２の各用量レベルでそれぞれ計算した。６Ｒ−ＭＴＨＦ２４０ｍｇ／ｍ^２についても、いくつかの値を測定して計算した。

３．ＬＶで治療した患者
５−ＦＵおよびＬＶ６０ｍｇ／ｍ^２で治療した転移性結腸直腸がん（ｍＣＲＣ）の２４人の患者を、データベースから無作為に抽出し、各患者についてｄＵｒｄのレベルを２つの治療サイクルのｔ_０およびｔ_２４で測定し、６Ｒ−ＭＴＨＦ患者と同じ方法でｔ_２４とｔ_０の間の差について平均値および標準偏差を計算した。ＬＶは天然（ｌ−ホルミル−テトラヒドロ葉酸）と非天然（ｄ−ホルミル−テトラヒドロ葉酸）異性体との５０：５０混合物であるため、活性型異性体は投与したＬＶ用量の半分となる。ＬＶおよび６Ｒ−ＭＴＨＦの分子量は非常に類似しているので、ＬＶ６０ｍｇは６Ｒ−ＭＴＨＦ３０ｍｇと等モルと考えることができる。

４．統計学的方法
全４群の間の差は、フリードマン２元配置分散分析によって検定し、その後、２つの等モル群ＬＶ６０ｍｇ／ｍ^２と６Ｒ−ＭＴＨＦ３０ｍｇ／ｍ^２の間の差を、マンホイットニーのＵ検定によって検定した。０．０５未満のＰ値は有意と見なした。

３．血漿ｄＵｒｄの判定

血漿ｄＵｒｄは、液体クロマトグラフィーの後に以下に大まかに概要を示したタンデム質量分析を含む方法によって判定した。血漿試料は、−８０℃冷凍庫から取り出し、トリクロロ酢酸を血漿に添加し、試料を混合して遠心分離した。上清を分子量１０ｋＤａカットオフの膜フィルターで濾過し、再度３０分間遠心分離した。次に、試験管の底の溶液をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析のために準備した。ブランク血漿試料および異なる内部標準濃度を使用して、検定試料を同じ方法で調製した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳへの注入体積は４０μｌであった。デオキシウリジンおよびクロロデオキシウリジンは、エレクトロスプレーネガティブモードによってイオン化した。ＭＳパラメータは、全葉酸塩の最大応答のために最適化した。ＭＳ／ＭＳ取得法（多重反応モニタリング）を利用した。

実施例２
ＴＳ阻害
最初の３群間の差は有意であり（ｐ＝０．０４）、２つの等モル群ＬＶ６０ｍｇ／ｍ^２および［６Ｒ］−ＭＴＨＦ３０ｍｇ／ｍ^２（ｐ＝０．０３）の間の差も有意であった。５−ＦＵと［６Ｒ］−ＭＴＨＦの等モル用量は、ＬＶよりも有意に高いレベルのｄＵｒｄをもたらす。また、血漿ｄＵｒｄレベルの増加によって反映されるように、［６Ｒ］−ＭＴＨＦ用量の増加とＴＳ阻害レベルの増加の間に用量反応関係があるようである（表２および図１を参照のこと）。

この試験は、ＬＶよりも５−ＦＵと６Ｒ−ＭＴＨＦとのバイオモジュレーションの方が高い血漿ｄＵｒｄおよびＴＳ阻害の増加を引き起こすことを示している。この所見はさらに、６Ｒ−ＭＴＨＦ用量を増加させた後のＴＳの用量依存阻害によって支持される。

ＬＶボーラス用量６０ｍｇ／ｍ^２は、スカンジナビアで広く使用されるいわゆる北欧治療計画で使用される標準的用量である。臨床結果は、ＬＶを注入によって、しばしば４００ｍｇを２時間に亘って投与する他の治療計画で得られた結果と同様である（Gustavsson et al., （2015） Clinical Colorectal cancer, 14: 1-10）。６Ｒ−ＭＴＨＦ後にずっと高いＴＳ阻害が認められることは興味深い（図２）。

Claims (15)

1. ヒト対象におけるｄＵｒｄの血漿濃度を増加させる方法であって、
   ａ．前記ヒト対象に、少なくとも１つの抗がん剤の治療有効量と組み合わせて、６Ｒ−ＭＴＨＦを５〜１０００ｍｇ／ｍ^２の用量で含む医薬組成物を静脈内投与する工程
   を含み、
   前記投与がｄＵｒｄの血漿濃度の増加をもたらす、方法。
2. 前記ヒト対象におけるｄＵｒｄの血漿濃度が、ＬＶの等モル投与後のヒト対象におけるｄＵｒｄ血漿レベルと比較して増加している、請求項１に記載の方法。
3. 前記ヒト対象におけるｄＵｒｄの平均血漿レベルが、ＬＶの等モル投与後のヒト対象において生じる平均血漿レベルよりも高い、請求項１に記載の方法。
4. 医薬組成物がボーラスとして投与される、請求項１に記載の方法。
5. 前記ヒト対象ががんに罹患している、請求項１に記載の方法。
6. 前記癌が結腸直腸癌である、請求項５に記載の方法。
7. 少なくとも１つの追加の抗がん化合物の投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
8. １つの追加の抗がん化合物が、オキサリプラチン、イリノテカンおよびベバシズマブからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
9. ヒト対象においてチミジル酸合成酵素（TS）を阻害する方法であって、
   ａ．前記ヒト対象に、少なくとも１つの抗がん剤の治療有効量と組み合わせて、６Ｒ−ＭＴＨＦを５〜１０００ｍｇ／ｍ^２の用量で含む医薬組成物を静脈内投与する工程
   を含み、
   前記投与が、ＬＶの等モル用量を受けたヒト対象と比較してＴＳ阻害の増加をもたらす、方法。
10. 医薬組成物がボーラスとして投与される、請求項９に記載の方法。
11. 前記ヒト対象ががんに罹患している、請求項９に記載の方法。
12. 前記癌が結腸直腸癌である、請求項１１に記載の方法。
13. 少なくとも１つの抗がん剤が５−フルオロウラシル（5-FU）である、請求項９に記載の方法。
14. 少なくとも１つの追加の抗がん化合物の投与をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
15. １つの追加の抗がん化合物が、オキサリプラチン、イリノテカンおよびベバシズマブからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。