JP2020505053A - 安定な3次元血管およびそれを形成するための方法 - Google Patents
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Abstract
Description
この出願は、2017年2月3日に出願された米国仮出願第62/454,161号の優先権の恩恵を主張し、その米国仮出願の全内容は参照によって本明細書に組み入れられている。
2018年2月1日に作成され、EFS−Webにより米国特許商標局に提出された、8KBの34633_7600_02_PC_PCTSequenceListing.txtという名前のASCIIテキストファイルにおける配列表は、参照によって本明細書に組み入れられている。
本開示の第1の態様は、人工血管のような安定な3次元脈管構造を形成するための方法を対象とする。いかなる特定の理論にも縛られるつもりはないが、インビトロ、加えてインビボで、適切な時間の間での内皮細胞におけるETV2発現が、培養中の内皮細胞をリプログラミングして、長持ちする機能的3次元血管を形成し得ると考えられる。定義済みのマトリックス上で培養した場合、分化型内皮細胞における外因性ETV2転写因子の発現が、機能的で安定な3次元血管の自律的形成を生じる。本方法は3次元スキャフォールドを利用しないため、本明細書に提供された方法は、有利なことには、3次元血管を形成するために現在、必要とされる費用と時間のかかる要素を排除する。
本明細書に開示された培養方法は、安定な3次元血管の再現可能な産生を可能にし、その3次元血管は、オルガノイドの脈管導入および傷害組織の治療的脈管導入(組織再生)のようないくつかの目的にとって有用である。本開示はまた、分化型内皮細胞におけるETV2タンパク質の外因性発現が、周皮細胞、灌流、およびスキャフォールドの非存在下で、インビトロおよびインビボで、機能的血管ネットワークを形成する能力を有する安定な機能的3次元血管の自律的自己集合をもたらすことを明らかにしている。
本開示の図3Lおよび3Mは、外因性ETV2を含む内皮細胞を培養することにより形成された安定な3次元血管が、植え込み後、内因性組織に脈管導入する能力がある、パターニングされた長持ちする血管ネットワークへ自律的に組織化することを示しているため、本開示の安定な3次元血管はまた、対象における傷害組織の脈管導入を促進するために用いられる。
本開示の別の態様において、オルガノイドに脈管導入するための方法が提供される。この場合、方法は、ETV2転写因子をコードする外因性核酸を含む内皮細胞と共にオルガノイドをマトリックス上で、内皮細胞において外因性ETV2タンパク質を発現する条件下で培養して、オルガノイド上に安定な3次元血管ネットワークを形成することを含む。
細胞培養。ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)およびヒト脂肪組織内皮細胞を、実験室において、Ginsberg,M.ら Cell(2012)151、559〜575頁(その全内容は参照により本明細書に組み入れられている)に示されているようなコラゲナーゼに基づいた消化アプローチを用いて単離した。その後、単離された内皮細胞を、0.2%ゼラチンでコーティングされた組織培養ディッシュにおいて、完全培地(M199 400ml、熱失活FBS 100ml、Hepes 7.5ml、抗生物質 5ml、glutamax 5ml、脂質混合物 5ml、および内皮細胞増殖サプリメント 1/2ボトル(Alpha Aesar))中、増殖させた。継代後、その細胞に、lenti pgk−ETV2または空のレンチベクターを形質導入した。必要に応じて、細胞をまた、pgk−mCherryまたはpgk−GFPレンチウイルスを用いることにより標識した。その細胞を、accutaseを用いて1:2で分割し、ゼラチン化プレート上で継代した。必要に応じて、細胞を、将来的実験に用いるために凍結させた。全体として、異なるHUVECの10個より多いバッチが実験に用いられた。管形成アッセイについて用いられた内皮細胞は、継代5〜10であった。
本研究は、分化型内皮細胞におけるETV2の一過性誘導が、内皮細胞を、非血管細胞に対する細胞親和性の増強を獲得し、加えて、インビトロおよびインビボで安定な3次元人工脈管を形成するように耐久性およびパターニング可塑性を生じるように、リプログラミングするだろうことを示す。ETV2転写因子発現が脈管形成を変化させるかどうかを決定するために、ETV2を形質導入された内皮細胞を、単一細胞FACSソーティングし、クローン的に増殖させた。内皮細胞における外因性ETV2発現は、一貫して、細胞外マトリックスの表面に局在する場合が多い、人工血管の組織化された耐久性のある幾何学的パターンを有する分岐型出芽血管ネットワークの形成を生じた。
外因性ETV2を発現する内皮細胞の、機能的なパターニング化脈管を持続させる潜在能力を、インビボのマウスモデルを用いて評価した。この場合、SCID−beigeマウスに、ラミニン、エンタクチン、およびコラーゲンIV(L.E.C.)と混合された、mCherryまたはGFP標識の、対照ヒト内皮細胞、または外因性ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞を含有するプラグを皮下に植え込んだ。植え込みから1〜5ヶ月後、脈管導入の程度(脈管存続および既存のマウス脈管構造への吻合)を、図3A〜Mに示されているように、生体内染色により評価した。図3Aは、外因性ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞(R−VEC)を有するプラグを投与されたマウスが、対照の非ETV2形質導入内皮細胞を投与されたマウスより、見かけ上はより多く脈管導入されたことを示している。全載共焦点写真と後のプラグの切片化の両方により、外因性ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞を投与されたマウスにおいて、対照のETV2を発現しない内皮細胞プラグと比較して、はるかに高い脈管密度、組織化、およびパターニングが明らかにされた。
ETV2の一過性発現が、安定な3D血管形成を持続させるのに十分であるかどうかを決定するために、リバースtetトランス活性化因子(rtTA)−ドキシサイクリン誘導性発現系を用いた。定量的PCR分析により、ドキシサイクリン除去でのETV2の急速な下方制御が確認された。図4H。上記のインビトロの脈管形成アッセイおよびインビボのプラグアッセイにより、ETV2発現が、4週間目(すなわち、1ヶ月目)において脈管が適切に生じるまで必要とされるだけで、その後は必須でなかったことが示されている。図4A〜B。実際、図4C〜Dに示されているように、培養の最初の4週間の間にETV2を発現する内皮細胞により形成された人工脈管が、それらのETV2が賦与した脈管適応性を持続させた。
ETV2を発現する内皮細胞についての、マウス、ヒト、または悪性上皮のオルガノイド培養物において、分枝する、すなわち、分岐3次元血管ネットワークを形成する潜在能力を、解明した。GFP標識ヒトまたはマウス小腸オルガノイドを、ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞(R−VEC)またはナイーブ内皮細胞(CTRL−EC)のいずれかと混合した。図5Aに示されているように、R−VECは、24時間以内に、高度に組織化された3D脈管を形成し、かつ陰窩蕾を含有する幹細胞と分化型絨毛様中央ドメインの両方を付随することができた。ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞による腸オルガノイドの脈管導入は、より組織化されて、4日目および7日目までに、事実上あらゆるオルガノイドユニットに広がって分枝する、パターニング化脈管を形成した。対照的に、ナイーブの非ETV2形質導入内皮細胞(CTRL−EC)は、オルガノイドの存在下で脈管を形成することができず、それにより、オルガノイドに脈管導入する能力を欠損した。図5A。
再生医学において、毛細血管および細動脈を含む長持ちする機能的脈管構造の生成は、まだ達成されていない。具体的には、大口径脈管は、内皮細胞でコロニー形成することができるが、器官またはモデル器官へ、長期に渡って分配される血液供給を提供することができるより小さい毛細血管サイズの脈管を形成することは困難である。ここで、外因性ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞を、脱細胞化腸器官モデルへ導入し、そのモデルにおいて、それらは、バイオリアクターの内部でのインビトロで、脈管化構造を確立することができた。図6A〜B参照。結果は、外因性ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞(R−VEC)が、脱細胞化腸の毛細血管に豊富に配置され、腸壁の全領域に渡る均等な分布を達成したことを示す。図6C参照。図6D〜6Eに示されているように、CD31抗体での生体内染色およびアセチル化LDL取り込みにより、対照の非ETV2形質導入内皮細胞(CTRL−EC)を用いた場合と比較して、R−VECを用いた場合、ずっと高い脈管被覆が明らかにされた。図6Fおよび6Gに示されているように、再内皮化領域の定量化および血管ネットワークパラメータが、外因性ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞のより高い脈管導入潜在能力を裏付けている。インビトロでの1週間の培養後、脈管再導入された腸を、免疫不全NOD−SCID−γマウスの網に植え込んだ。1週間目および4週間目の両方において、生体内イソレクチンおよびヒトVEcad注射により示されているように、外因性ETV2を発現するリプログラミング化内皮細胞は、脱細胞化腸に脈管導入し、大口径脈管(動脈および静脈)および小口径脈管(毛細血管)の連続性を保持して、マウス脈管構造へ吻合した。図6H〜6J参照。
Claims (34)
- 安定な3次元血管を産生するための方法であって、
a)マトリックス上でETV2転写因子をコードする外因性核酸を含む内皮細胞を、該内皮細胞が該ETV2転写因子を少なくとも3〜4週間、発現する条件下で培養して、脈管形成を誘導する工程;および
b)前記安定な3次元血管を単離する工程
を含む前記方法。 - 工程a)の細胞を追加の期間培養する工程をさらに含み、前記さらに培養する工程は、該細胞がETV2転写因子を発現しない条件下で行われる、請求項1に記載の方法。
- 前記さらに培養する工程は少なくとも1週間、行われる、請求項2に記載の方法。
- 前記マトリックスは、ラミニン、エンタクチン、コラーゲン、またはそれらの組合せを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記マトリックスは
5.25mg/mLの合わせた濃度でのラミニンおよびエンタクチン;ならびに
0.2mg/mL コラーゲンIV
を含む、請求項4に記載の方法。 - 前記マトリックスはMatrigel(商標)である、請求項1に記載の方法。
- 前記内皮細胞は、ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)、脂肪由来内皮細胞、または器官特異的内皮細胞を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記器官特異的内皮細胞は、心臓、筋肉、腎臓、精巣、卵巣、リンパ系、肝臓、膵臓、脳、肺、骨髄、脾臓、大腸、および小腸からなる群から選択される、請求項7に記載の方法。
- 前記3〜4週間培養する工程は、前記内皮細胞を無血清培地において少なくとも7日間培養することを含む、請求項1に記載の方法。
- 無血清培地における前記培養は、大気中(20%)酸素圧未満で実行される、請求項9に記載の方法。
- 前記酸素圧は5%である、請求項10に記載の方法。
- 前記培養する工程a)は、スキャフォールドまたは血管周囲サポートの非存在下で行われる、請求項1に記載の方法。
- 請求項1に記載の方法により産生された安定な3次元血管。
- 3次元血管ネットワークを自律的に形成する能力がある安定な3次元血管。
- リプログラミング化内皮細胞の少なくとも1つの連続層を有する管状構造を含む、請求項14に記載の安定な3次元血管。
- 前記リプログラミング化内皮細胞は、ETV2をコードする外因性核酸配列を含む、請求項15に記載の安定な3次元血管。
- 少なくとも2ヶ月間、機能的である、請求項14に記載の安定な3次元血管。
- 対象において脈管導入を促進するための方法であって、請求項13に記載の安定な3次元血管を該対象に投与することを含む前記方法。
- 前記投与が、前記対象において機能的3次元血管ネットワークを形成するように、前記対象において前記安定な3次元血管を植え込むことを含む、請求項18に記載の方法。
- 前記機能的3次元血管ネットワークは、毛細血管、細動脈、細静脈、またはリンパ管を含む、請求項19に記載の方法。
- オルガノイドに脈管導入するための方法であって、マトリックス上でETV2転写因子をコードする外因性核酸を含む内皮細胞と共に、該内皮細胞が該ETV2転写因子を発現する条件下で、前記オルガノイドを培養する工程を含む前記方法。
- マトリックスはラミニン、エンタクチン、コラーゲン、またはそれらの組合せを含む、請求項21に記載の方法。
- オルガノイドは、小腸オルガノイド、結腸オルガノイド、腎臓オルガノイド、心臓オルガノイド、および腫瘍オルガノイドからなる群から選択される、請求項21に記載の方法。
- 前記培養する工程は、塩基性FGF(FGF−2)およびヘパリンを含む培地において少なくとも7日間培養することを含む、請求項21に記載の方法。
- 前記脈管導入オルガノイドを単離する工程をさらに含む、請求項21に記載の方法。
- 前記単離された脈管導入オルガノイドは対象に投与される、請求項25に記載の方法。
- 前記単離された脈管導入オルガノイドは外科的植え込みにより対象に投与される、請求項25に記載の方法。
- 前記単離された脈管導入オルガノイドを治療剤と接触させ、前記治療剤の効能を決定する、請求項25に記載の方法。
- 脱細胞化器官に脈管再導入するための方法であって、ETV2転写因子をコードする外因性核酸を含む内皮細胞と共に、該内皮細胞がETV2転写因子を発現する条件下で、前記脱細胞化器官を培養する工程を含み、前記培養する工程は、前記脱細胞化器官に脈管導入する、前記方法。
- 前記脱細胞化器官は、心臓、腎臓、精巣、卵巣、骨、リンパ、肝臓、膵臓、脳、肺、骨髄、脾臓、大腸、および小腸からなる群から選択される、請求項29に記載の方法。
- 前記脈管導入は、動脈、静脈、毛細血管、細動脈、細静脈、またはそれらの組合せの形成を含む、請求項29に記載の方法。
- 前記培養する工程はバイオリアクター内で行われる、請求項29に記載の方法。
- 前記脈管導入脱細胞化器官を単離する工程をさらに含む、請求項29に記載の方法。
- 前記脈管導入脱細胞化器官を対象に投与する工程をさらに含む、請求項33に記載の方法。
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US20220370507A1 (en) * | 2019-09-20 | 2022-11-24 | Emory University | Endothelial and smooth muscle like tissue produced from urine cells and uses related thereto |
CN114632188A (zh) * | 2022-01-26 | 2022-06-17 | 北京大学第三医院(北京大学第三临床医学院) | 带血管蒂脂肪组织块脱细胞支架及其制备方法和应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015109833A (ja) * | 2013-11-08 | 2015-06-18 | 学校法人慶應義塾 | 線維芽細胞から血管内皮細胞を製造する方法 |
JP2015192681A (ja) * | 2009-02-27 | 2015-11-05 | セルラー ダイナミクス インターナショナル, インコーポレイテッド | 多能性細胞の分化 |
JP2016513465A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-05-16 | ミロマトリックス メディカル インコーポレイティド | 膵島細胞の再細胞化のための灌流型脱細胞化肝臓の使用 |
WO2016100869A1 (en) * | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Angiocrine Bioscience, Inc. | Biocompatible implants comprising engineered endothelial cells |
WO2016141137A1 (en) * | 2015-03-03 | 2016-09-09 | President And Fellows Of Harvard College | Methods of generating functional human tissue |
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US20160168538A1 (en) | 2014-12-15 | 2016-06-16 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Flk1+ and VE-Cadherin+ Endothelial Cells Derived from iPS or ES Cells, and Methods of Preparing and Using the Same |
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---|---|---|---|---|
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JP2016513465A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-05-16 | ミロマトリックス メディカル インコーポレイティド | 膵島細胞の再細胞化のための灌流型脱細胞化肝臓の使用 |
JP2015109833A (ja) * | 2013-11-08 | 2015-06-18 | 学校法人慶應義塾 | 線維芽細胞から血管内皮細胞を製造する方法 |
WO2016100869A1 (en) * | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Angiocrine Bioscience, Inc. | Biocompatible implants comprising engineered endothelial cells |
WO2016141137A1 (en) * | 2015-03-03 | 2016-09-09 | President And Fellows Of Harvard College | Methods of generating functional human tissue |
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