JP2020505048A - ビーズ破砕用チューブ並びに微生物からデオキシリボ核酸及び/又はリボ核酸を抽出する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
感染性疾患の遺伝子検査及び診断は、臨床微生物学の分野において重要な役割を担っている。培養ベースの方法論に固有の偏り及び制限を克服するために、試料に含まれる微生物を検出するために遺伝子検査がますます使用されるようになっている。そのような遺伝子検査を実施し得るためには、微生物からDNA及び/又はRNAをできる限り高い濃度で抽出することを可能にするために細胞を溶解する必要がある。
本開示は、改善されたビーズ破砕用チューブ、並びにビーズ破砕用システム及びビーズ破砕方法に関する。用語「ビーズ破砕用チューブ」及び用語「試料チューブ」は、本明細書において区別なく使用される。理論により縛られるものではないが、本発明者等は、ビーズ破砕が、核酸を溶液へと溶解することを可能にするものと考えている。本開示は、部分的に、核酸抽出法におけるビーズ破砕の使用が、ビーズへの吸収のため核酸の損失をもたらすとともに、そのような損失が、該ビーズ上の結合部位をブロッキングする適切な量のブロッキング剤により妨げられ得るという知見に基づくものである。また本開示は、ビーズ破砕において今までに使用されてきた幾つかの溶解バッファーがブロッキング剤として作用する試薬を含有し得るものの、そのような試薬は一般的に使用されるよりも大幅に少ない量で使用され得るという認識に基づいている。本明細書において使用される場合に、用語「溶解バッファー」は、開放細胞を破壊するために使用されるバッファー溶液を言う。溶解バッファーは、例えば、バッファー(例えばトリス−HCl)及び1つ以上の塩(例えばNaCl、KCl)及び/又は洗浄剤(例えばドデシル硫酸ナトリウム)を含み得る。
ビーズ破砕は、細胞を溶解して、その核酸(DNA及びRNA)を含む内容物を放出させるために使用される均質化過程である。試料は、適切な粉砕用ビーズと一緒にチューブに入れられ、高エネルギー混合に供される。次いでその試料は、一般的に遠心分離され、溶解物は該ビーズの上部に回収される。一般的に、ビーズ破砕に供された試料は、細胞からのDNAの放出を容易にするために溶解バッファーで処理される。
本開示は、細胞溶解、並びに液体試料中に含まれる細胞(例えば微生物)からのデオキシリボ核酸(DNA)及びリボ核酸(RNA)の抽出のために有用なビーズ破砕用システムを提供する。本開示のビーズ破砕用システムは、試料チューブ、並びに該試料チューブ内に位置するビーズ及び乾燥したブロッキング剤を含む。本開示のビーズ破砕用システムにおいて使用することができるブロッキング剤には、尿素、グアニジン塩、界面活性剤、ヌクレオチド類、ポリビニルピロリドン(PVP)及びオリゴヌクレオチド類が含まれる。ブロッキング剤は、セクション4.1.2に詳細に記載されている。本開示のビーズ破砕用システムにおいて使用することができるビーズには、鉱物及び/又は金属を含むビーズが含まれる。本開示のビーズ破砕用システムで使用するのに適したビーズは、セクション4.1.3に記載されている。
本開示のビーズ破砕用システムは、開口部により到達可能な内部空洞を有するとともに、ビーズ、ブロッキング剤、及び液体試料を収容することができる試料チューブを含む。該試料チューブは、任意の生物学的に不活性な材料(例えば、プラスチック又はホウケイ酸塩)で作られていてよく、好ましくはプラスチック(例えば、ポリプロピレン、ポリプロピレンコポリマー、又はポリカーボネート)で作られている。本明細書で使用される場合に、用語「チューブ」は、バイアル(例えば粉砕バイアル)及びチューブ(例えばコニカルチューブ)を含む。
本開示のビーズ破砕用システムは、乾燥したブロッキング剤を含む。本明細書で使用される場合に、「乾燥した」又は「乾燥された」ブロッキング剤は、20%未満の水分を含むブロッキング剤である。幾つかの実施形態においては、該乾燥したブロッキング剤は、15%未満の、10%未満の、5%未満の、4%未満の、3%未満の、2%未満の、又は1%未満の水分を含有する。
カオトロピック剤は、タンパク質及び核酸等の巨大分子の構造を破壊し、該巨大分子を変性する。カオトロピック溶質は、タンパク質に近接した水分子の無秩序化のため、疎水性領域の正味の疎水性効果を低下させる。これは、溶液における疎水性領域を可溶化し、それによりタンパク質が変性される。これはまた脂質二重層における疎水性領域にもまさに当てはまる。カオトロピック溶質の臨界濃度に達すると(該二重層の疎水性領域において)膜完全性が損なわれることとなり、細胞は溶解することとなる。
前記ブロッキング剤がクレアチニンを含む場合には、試料チューブの内部空洞におけるクレアチニンの存在は、ビーズ破砕用システムを使用して処理される試料に含まれるDNA及び/又はRNAの分解を妨げ得る。さらに、クレアチニンは、DNA及び/又はRNAが、ビーズ及び/又は試料チューブの内壁に非特異的に結合することを防ぐ。これは、ビーズ破砕用チューブシステムを使用して処理された細胞(例えば微生物)からDNA及び/又はRNAを抽出する場合に、より高い収率を可能にする。
本開示のビーズ破砕用システムにおいてブロッキング剤として使用することができる界面活性剤には、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウロイル硫酸サルコシン酸ナトリウム(sodium lauroylsulfate sarcosinate)、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート、及びそれらの組み合わせが含まれる。ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレートは、ポリソルベート20としても知られている。
本開示のビーズ破砕用システムにおいて使用することができるヌクレオチド類には、リボヌクレオチド類、デオキシリボヌクレオチド類、及びそれらの組み合わせが含まれる。
ブロッキング剤として有用なオリゴヌクレオチド類は、合成することができるか、又は天然に存在する起源から生成され得る。
本開示のビーズ破砕用システムは、試料流体中に配置されたときに互いに相対的に移動可能なビーズを含む。本明細書で使用される場合に、用語「ビーズ」は、球状粒子及び非球状粒子の両方を含む。前記ビーズは、鉱物ビーズ、例えば結晶性粒子(例えばジルコニウム、ジルコン(ケイ酸ジルコニウム)及びジルコニア(二酸化ジルコニウム))、石英、酸化アルミニウム、炭化ケイ素(カーボランダムとしても知られる)、ガーネット、セラミック粒子、ガラス(例えば二酸化ケイ素ガラス又はシリカ)、又は上述の1種以上を含む組み合わせ(例えばジルコニア/シリカビーズ又はジルコニア/イットリウムビーズ)で作られるビーズであってよい。該ビーズは、金属ビーズ、例えばステンレス鋼ビーズ又はクロム鋼ビーズであってもよい。
本開示のビーズ破砕方法を使用して核酸が抽出され得る試料の例には、様々な流体試料が含まれる。幾つかの事例においては、試料は、被験体からの体液試料であってよい。試料には、被験体から採取された組織が含まれ得る。試料には、被験体の体液、分泌物、及び/又は組織が含まれ得る。試料は生物学的試料であってよい。該生物学的試料は、体液試料、分泌物試料、及び/又は組織試料であってよい。生物学的試料の例には、限定されるものではないが、血液、血清、唾液、尿、胃液及び消化液、涙液、糞便、精液、膣液、腫瘍組織由来の間質液、眼液、汗、粘液、耳垢、油、腺分泌物、息、髄液、毛髪、爪、皮膚細胞、血漿、鼻腔スワブ又は鼻咽喉洗浄液、髄液、脳脊髄液、組織、咽喉スワブ、創傷スワブ、生検、胎盤液、羊水、臍帯血、リンパ液、体腔液、喀痰、膿又はその他の創傷滲出液、創面切除又は切除により試料採取された感染組織、脳脊髄液、洗浄液、白血球生成標本、腹膜透析液、乳汁及び/又はその他の排泄物、並びに植物及びそれらの一部が含まれ得る。
幾つかの事例においては、本開示のビーズ破砕用システムにおける処理の前に試料を前処理することが有利である場合がある。ビーズ破砕用チューブ中に試料を入れる前に使用され得る前処理工程の例には、本明細書で述べられるような、又はその他に当該技術分野で公知のような濾過、蒸留、抽出、濃縮、遠心分離、妨害成分の不活性化、試薬の添加等が含まれる。
核酸調製の初期工程として、試料は、ビーズ破砕のためにビーズ破砕用チューブ中に入れられる。該ビーズ破砕工程は、本開示のビーズ破砕用システム又は標準的なビーズ破砕用システムを利用することができる。幾つかの事例においては、標準的なビーズ破砕用システムを使用する場合には1種以上の外因性のブロッキング剤が添加され得るが、内因性のブロッキング剤を含む生物学的試料の場合には、外因性のブロッキング剤の添加は必要とされない。1種以上のブロッキング剤が添加される場合に、試料の添加前に、試料の添加後にビーズ破砕用チューブに添加され得るか、又は試料及び1種以上のブロッキング剤の両方は、同時に添加され得る(例えば、試料及び1種以上のブロッキング剤が混合された後に、ビーズ破砕用チューブに移送され得る)。
細胞溶解後に、流体試料はビーズから、例えば液体試料を試料チューブから試料チューブの底に沈殿しているビーズを残してピペット等で除去することにより分離される。
対象の核酸(例えば細菌性又は真菌性DNA)の存在に関する試料の分析は、任意の核酸分析法、例えば、増幅技術に限定されるものではないが、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、等温増幅、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT−PCR)、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(Q−PCR)、ディジタルPCR、ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動、質量分析法、蛍光検出、紫外分光測定、ハイブリダイゼーションアッセイ、DNA又はRNAシーケンシング、制限分析、逆転写、NASBA、アレル特異的ポリメラーゼ連鎖反応、ポリメラーゼサイクリングアセンブリ(PCA)、非対称ポリメラーゼ連鎖反応、指数後線形的ポリメラーゼ連鎖反応(LATE−PCR)、ヘリカーゼ依存性増幅(HDA)、ホットスタート型ポリメラーゼ連鎖反応、配列間特異的ポリメラーゼ連鎖反応(ISSR)、逆ポリメラーゼ連鎖反応、ライゲーション媒介ポリメラーゼ連鎖反応、メチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応(MSP)、多重ポリメラーゼ連鎖反応、ネステッドポリメラーゼ連鎖反応、固相ポリメラーゼ連鎖反応又はそれらの任意の組み合わせを使用して実施することができる。そのような技術は、当業者によく知られている。標的核酸の配列を知ることで、科学者は、標的の増幅及び/又は検出を可能にするプライマー及び/又はプローブを構築することが可能となる。PCRアンプリコンは、その同一性の確認のためにもシーケンシングされ得る。
本開示はさらに、本開示のビーズ破砕用システムを含む(又は該システムを得るために適した)キットを提供する。該キットは、試料チューブ、例えばセクション4.1.1に記載される試料チューブ、1種以上のブロッキング剤、例えばセクション4.1.2に記載されるブロッキング剤、及び/又は1種以上のビーズ、例えばセクション4.1.3に記載されるビーズを含み得る。上記1種以上のブロッキング剤のそれぞれは、事前に凍結乾燥され、該チューブ内に又は該チューブとは別に含まれていてよい。同様に、前記ビーズは、該チューブ内に又は該チューブとは別に含まれていてよい。
例示的なビーズ破砕用システムは、図面に示されている。図1〜3における参照符号(1)で示されるビーズ破砕用システムは、内部空洞(3)及び閉鎖可能な開口部(4)を有する試料チューブ(2)を含む。試料チューブは、好ましくはプラスチックで作られているが、それ以外の生物学的に不活性な材料で作られてもよい。
6.1 喀痰から病原体DNAを回収するためのビーズ破砕の使用
マイコバクテリウム・ツベルクロシス(「MTB」)は、マイコバクテリウム科における偏性病原性細菌種であり、結核のほとんどの事例の原因因子である。主として哺乳動物の呼吸器系の病原体であり、それは肺に感染する。マイコバクテリアが栄養欠乏又は低酸素のようなストレスのさなかに非複製又は休眠(胞子形成)の状態に移行し得ることを示す証拠がある。胞子の形成は、細菌細胞を溶解して、細菌性DNAを抽出することを困難にする。
マイコバクテリウム・アビウム亜種パラツベルクロシス(MAP)は、パラ結核又はヨーネ病(JD)、家畜及び野生の反芻動物における慢性肉芽腫性胃腸炎の原因となる獣医学的病原体である。MAPは、群れにおいて精液、乳汁、初乳経由及び子宮内で直接的に伝播するとともに、汚染した餌、飼料、牧草、水等を通じた経口経路(糞口経路)により間接的に伝播する。JDは、家畜の生産性に甚大な影響を及ぼし(早期淘汰及び乳生産の低下)、家畜産業は多大な経済的損失を受ける。JD防除の努力は、土壌及び水内のMAPの残存並びに不顕性及び臨床的なウシによる落ち毛により妨害されている。
創傷感染の検出のために、創傷スワブは、生理食塩溶液、細胞培養培地、又は市販のキットからの試料調製溶液中でインキュベートされ得る。該スワブは、一般的に約5分間〜1時間の期間にわたり、より好ましくは0.25時間〜1時間(例えば、0.25時間、0.5時間又は0.75時間)にわたりインキュベートされる。溶液の適切な容量は、200μL〜10mLであり、特定の実施形態においては、500μL、1mL、2mL、5mL、8mLであり、又は上記実施形態のいずれか2つを境界とする範囲、例えば1mL〜5mL、500μl〜10mL、200μl〜8mL等々から選択される。該溶液を、定期的に振り混ぜ又は撹拌することで、スワブからの病原体細胞の放出を促進することができる。インキュベート期間が終わったら、該スワブを絞り、破棄してよい。
腹膜透析は、重症の慢性腎臓病を伴う患者のための治療である。この種の透析は、患者の腹部の腹膜を、流体及び溶解された物質を血液から交換させるための膜として使用する。流体は、腹部に常設されたチューブを通して導入され、その後に流し出すことで、過剰の塩、尿酸及びその他の老廃物が浄化される。腹膜を介した浸透により、溶質は血液及び透析液の間で交換される。適切な時間後に、透析液は腹膜から除去され、破棄される。このようにして血液は平衡状態になり、終端代謝産物、例えば尿酸は、血液中での無期限の蓄積が妨げられる。
生物学的廃水処理法における問題となる泡だって嵩が増す細菌種の検出に関する米国特許第9,290,796号明細書の実施例1は、廃水処理プラントから回収された廃水からビーズ破砕プロトコールを使用してDNAを抽出することを記載している。該ビーズ破砕プロトコールは、本開示のビーズ破砕用システムを導入するように適合され得る。
液状食品試料は、ビーズ破砕の前にセクション4.3で先に記載されたように濾過及び/又は遠心分離により前処理され得る。例えば、飲料は、好ましくは濾過により前処理することで、存在し得る微生物を回収することができる。濾過により回収された微生物は、ビーズ破砕の前に任意に洗浄され、そして遠心分離に供され得る。固形食品、例えば肉又は魚から病原体を検出するためには、食品の試料をスワブで拭うことで、その食品の表面から微生物を回収することができる。その後に該微生物をスワブから洗い出し、その後にビーズ破砕に供することができる。
ヒト感染症のための迅速分子診断試験の開発は、世界人口の健康改善のために世界保健機構の最も高い優先順位にあることである(Daarら,2002,Nat.Genet.32:229−232)。重症の血液感染症は、世界的に入院患者における罹患率及び死亡の重大な原因であり、集中治療における最も重要な課題の1つである。例えば、敗血症発生率の最近の概算は、米国内で100000事例につき240事例である。敗血症の人的負担及び経済的負担は相当のものである(Grossiら,2006,Surg.Infect.(Larchmt)7:S87−S91)。感染性疾患及び集中治療管理における進歩並びに新たな治療を開発するための多くの試みにもかかわらず、敗血症の罹患率は、20%から50%までの範囲という許容できない高さに留まっている。重症の血液感染症及び/又は重症の敗血症の徴候の確認並びに早期かつ正確な診断を行うことは、治療の改善と生存率の増加に重要である。実際に、迅速診断により、血液試料の採取と抗微生物療法の適用との間の時間間隔を減らすことにより患者の生存は高められ得た。
7.1 実施例1: ビーズ破砕用システムは、DNA損失をもたらす。
この研究で使用される材料は以下の通りである:
ビーズ破砕用チューブ:品番:ARY0007 OPS Diagnostics、2.0グラムの100μmSiO2ビーズを有する4.5mLのクライオバイアル
PD流体:グルコースと残部のNa+、Ca2+、Mg2+とを含有する腹膜透析液
BEバッファー:Taigen Bioscience社、1μl当たりに1μgのRNAを含有する
尿素:ACSグレード。
2mLのPD流体にEDTAを10mMの濃度でスパイクし、C.アルビカンスを5000CFU/mLでスパイクしたものが標準マトリックスであった。尿素及びBEバッファーの12種の異なる組み合わせを、以下の第1表に示されるように試料に添加した:
ブロッキング剤を含まない試料1においては、C.アルビカンスのDNAの回収は、たった5.5ng/mLであった。ブロッキング剤として尿素を含むと、回収が3〜4倍増加し、ブロッキング剤としてRNAを含むと、回収が約10〜20倍増加し、収率は、理論上の最大に達した。この回収の増加は、C.アルビカンスのPCR遺伝子増幅に改善をもたらす。
7.2.1 本開示のビーズ破砕用システムの製造
250mg/mLの尿素、25mg/mLのエチレンジアミン四酢酸(EDTA)の四ナトリウム塩、125mg/mLのアデノシン一リン酸、125mg/mLのグアノシン一リン酸、125mg/mLのシトシン一リン酸、125mg/mLのチミジン一リン酸、及び75mg/mLのラウロイルサルコシン酸ナトリウムを含むブロッキング剤のストック溶液は、TE(トリス/EDTA)バッファー中で調製した。
6mLの尿及び6mLの腹膜透析液を0.4マイクロメートルの滅菌フィルターを通して濾過し、次いで培養室において増殖された1ミリリットル当たり10000コロニー形成単位のスタフィロコッカス・アウレウスを、その尿及び腹膜透析液の濾液に添加した。
7.3.1 概略
この研究は、血液試料のために最適なビーズ破砕条件を特定するために行った。培養陰性の血液試料に、病原性S.アウレウス、E.コリ及びC.アルビカンスをスパイクした。陽性PCRコントロールを実行した。このコントロールの濃度(ゲノムコピー)を、導入された病原体の理論上100%の回収として定めた。この研究は、バッファー、界面活性剤等の添加剤の不存在下でビーズ破砕を使用して血中病原体からDNAを抽出することが可能であることを裏付けた。
該研究で具体的に使用される材料は以下の通りである:
ビーズ破砕用チューブ:品番:ARY0007 OPS Diagnostics、2.0グラムの100μmSiO2ビーズを有する4.5mLのクライオバイアル
血液:健康なドナーからの培養陰性の血液
S.アウレウス、E.コリ、及びC.アルビカンスの培養:すべてATCC起源。
3.0mLの血液及び培養された病原体を含む15μLの生理食塩水培養物からなる一連の38種のスパイクされた血液試料を調製した。それぞれの血液試料には、培養された病原体を含む生理食塩水培養物以外は何も添加しなかった。破砕用チューブを、FastPrep(登録商標)24ホモジナイザー(MP Biomedicals社)を使用して6.5m/sの速度で処理した。次いで、DNAを、試料からLabTurbo(登録商標)48核酸抽出システム(Taigen Bioscience Corporation社)を使用して製造業者の試薬及びプロトコールを使用して単離した。DNAを55サイクルのPCRで増幅させ、アレイにハイブリダイズさせた後に、洗浄し、イメージングした。病原体の量及びビーズ破砕回数を以下の第3表に示す:
結果は図8〜10に図示されており、それらは、PCR増幅及びハイブリダイゼーション後のアレイからのシグナルのイメージングにより得られたシグナルの強度により表されるDNAの収率を示している。図8は、C.アルビカンスの時系列と一緒に前記の100%目標を表している。図9は、S.アウレウスの時系列と一緒に前記の100%目標を表している。図10は、E.コリの時系列と一緒に前記の100%目標を表している。
3種の異なる病原体に関して、病原体DNAがビーズに結合することによるシグナル損失の証拠はなかった。すべての事例において、理論値の少なくとも100%が裏付けられた。2つの事例においては、恐らくスパイク中に死んだ細菌からのDNAが存在したため、100%より多くの回収がなされた。
本開示を、以下で具体的な実施形態により例示する。
本出願で引用されるすべての刊行物、特許、特許出願、及びその他の文献は、それぞれの個々の刊行物、特許、特許出願、又はその他の文献が、すべての目的のために参照により援用されると個々に示されているのと同じ程度で、参照によりその全体がすべての目的のために援用される。援用された参考文献の1つ以上の教示と本開示との間に不一致がある場合においては、本明細書の教示が意図される。
Claims (33)
- 血液中に含まれる細胞を溶解する方法であって、溶解バッファーの不存在下で、(i)試料チューブ又は血液採集チューブと(ii)ビーズとを含むビーズ破砕用システム内で、血液又はそれらから処理、抽出もしくは分別した試料を撹拌することを含む、方法。
- 前記ビーズは、細菌、酵母、糸状菌、胞子、植物細胞、又は動物細胞を溶解するように適合されている、請求項1に記載の方法。
- 前記ビーズは、鉱物ビーズ、セラミックビーズ、ガラスビーズ、金属ビーズ、もしくはそれらの組み合わせを含む、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記ビーズは、ジルコニウムビーズ、ジルコンビーズ、ジルコニアビーズ、石英ビーズ、酸化アルミニウムビーズ、炭化ケイ素ビーズ、セラミックビーズ、二酸化ケイ素ガラスビーズ、ステンレス鋼ビーズ、クロム鋼ビーズ、又はそれらの組み合わせを含む、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記ビーズは、50μm〜3mmの範囲の直径を有する、請求項1から4までのいずれか1項に記載の方法。
- 血液を血液採集チューブ中に採集する工程をさらに含む、請求項1から5までのいずれか1項に記載の方法。
- 撹拌する前に、試料チューブ内に血液又はそれらから処理、抽出もしくは分別した試料を入れることをさらに含む、請求項1から6までのいずれか1項に記載の方法。
- 前記撹拌は、前記ビーズ破砕用システムを振動動作に供することを含む、請求項1から7までのいずれか1項に記載の方法。
- 前記血液は、抗凝血薬を含む、請求項1から8までのいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗凝血薬は、EDTAである、請求項9に記載の方法。
- 前記抗凝血薬は、クエン酸塩(例えばクエン酸ナトリウム)である、請求項9に記載の方法。
- 前記抗凝血薬は、シュウ酸塩(例えばシュウ酸カリウム)である、請求項9に記載の方法。
- 前記抗凝血薬は、ヘパリンである、請求項9に記載の方法。
- 血液を撹拌する、請求項1から13までのいずれか1項に記載の方法。
- 血液から処理、抽出又は分別された試料を撹拌する、請求項1から13までのいずれか1項に記載の方法。
- 前記ビーズ破砕用システムは、試料チューブ及びビーズを含む、請求項1から15までのいずれか1項に記載の方法。
- 前記ビーズ破砕用システムは、血液採集チューブ及びビーズを含む、請求項1から15までのいずれか1項に記載の方法。
- 前記細胞は、1種以上の病原体を含む、請求項1から17までのいずれか1項に記載の方法。
- 前記血液は、多数の種からの細胞を含む、請求項1から18までのいずれか1項に記載の方法。
- 細胞溶解の後に試料チューブから溶解物を回収することをさらに含む、請求項1から19までのいずれか1項に記載の方法。
- 前記溶解物から核酸を精製することをさらに含む、請求項20に記載の方法。
- 前記核酸を分析することをさらに含み、任意に、
a)前記分析を、マイクロアレイを使用して、又は前記1種以上の核酸をシーケンシングすることにより行い、
b)前記分析を行う前に、任意にPCRにより標的配列を増幅させる、請求項21に記載の方法。 - 前記核酸は、DNA及び/又はRNAを含む、請求項21又は22に記載の方法。
- 血液試料中に存在する細胞を溶解するためのキットであって、血液採集チューブ及びビーズ破砕に適したビーズを含む、キット。
- 血液採集チューブは、抗凝血薬を含む、請求項24に記載のキット。
- 前記抗凝血薬は、EDTAである、請求項25に記載のキット。
- 前記抗凝血薬は、クエン酸塩である、請求項25に記載のキット。
- 前記抗凝血薬は、シュウ酸塩である、請求項25に記載のキット。
- 前記抗凝血薬は、ヘパリンである、請求項25に記載のキット。
- 前記ビーズは、血液採集チューブとは別々に包装されている、請求項24から29までのいずれか1項に記載のキット。
- 血液中に含まれる細胞を溶解する方法であって、請求項30に記載のキット中で血液とビーズ及び血液採集チューブとを合し、そして血液中に含まれる細胞が溶解されるまで、該チューブを撹拌することを含む、方法。
- 前記ビーズは、血液採集チューブ中に包装されている、請求項24から29までのいずれか1項に記載のキット。
- 血液中に含まれる細胞を溶解する方法であって、請求項32に記載のキット中で血液とビーズ及び血液採集チューブとを合し、そして血液中に含まれる細胞が溶解されるまで、該チューブを撹拌することを含む、方法。
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