JP2020505037A - 複数の重鎖免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニックげっ歯類由来のヒト抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
免疫グロブリンは、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる1つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。認識されているヒト免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ(IgA1及びIgA2)、ガンマ(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、デルタ、イプシロン、及びミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。完全長の免疫グロブリン「軽鎖」(約25Kd、または214アミノ酸)は、一般的に、NH2末端に1つ以上の可変領域遺伝子(複数可)及び1つ以上の連結領域遺伝子(複数可)を含むエクソンによってコードされた可変ドメイン(約110アミノ酸)、ならびにCOOH末端でカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされた定常ドメインを含む。完全長の免疫グロブリン「重鎖」(約50Kd、または446アミノ酸)は、同様に、(1)1つ以上の可変領域遺伝子、1つ以上の多様性領域遺伝子、及び1つ以上の連結領域遺伝子を含むエクソンによってコードされた可変ドメイン(約116アミノ酸)、ならびに(2)例えば、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、またはミューなどの1つ以上の定常領域遺伝子を含む前述の定常ドメインのうちの1つ(約330アミノ酸をコードする)を含む。免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子は、抗体クラス、すなわちアイソタイプ(例えばIgMまたはIgG1)をコードする。
本発明はさらに、人工Ig遺伝子座、及びヒトイディオタイプを有する免疫グロブリンを産生することができるトランスジェニック動物作製におけるそれらの使用に関する。各人工Ig遺伝子座は、少なくとも1つのV領域遺伝子セグメント、1つ以上のJ遺伝子セグメント、重鎖遺伝子座の場合に1つ以上のD遺伝子セグメント、及び1つ以上の定常領域遺伝子を含む、複数の免疫グロブリン遺伝子セグメントを含む。本発明では、V遺伝子セグメントのうちの少なくとも1つは、生殖細胞系列または超変異ヒトV領域アミノ酸配列をコードする。したがって、そのようなトランスジェニック動物は、ヒトイディオタイプを有する抗体を含む、免疫グロブリン分子の多様化されたレパートリーを産生する能力を有する。重鎖遺伝子座では、ヒトまたは非ヒト由来D遺伝子セグメントが人工Ig遺伝子座に含まれ得る。そのような遺伝子座における遺伝子セグメントは、非再編成の構成(または「生殖細胞系列構成」)において、または部分的にもしくは完全に再編成された構成において、互いに対して並置される。人工Ig遺伝子座は、対象動物において遺伝子再編成を受ける能力を有し(遺伝子セグメントが完全に再編成されていない場合)、これによりヒトイディオタイプを有する免疫グロブリンの多様化されたレパートリーを産生する。
一態様では、本発明は、ヒトイディオタイプを有する免疫グロブリンを産生することができるトランスジェニック動物、及びそれを作製する方法を提供する。使用されるトランスジェニック動物は、げっ歯類(例えば、ラット、ハムスター、マウス、及びモルモット)から選択される。
ヒトイディオタイプを有する免疫グロブリンを産生することができるトランスジェニック動物が作製されると、抗原に対する免疫グロブリン及び抗体製剤を、その抗原で動物を免疫化することによって、容易に得ることができる。「ポリクローナル抗血清組成物」は、本明細書で使用される場合、親和性精製ポリクローナル抗体製剤を含む。
一実施形態では、機能性Ig軽鎖遺伝子座を欠き、少なくとも2つの人工重鎖遺伝子座を含むトランスジェニック動物を、抗原で免疫化し、抗原に特異的に結合する重鎖のみの抗体を産生する。
本発明のさらなる実施形態では、精製モノクローナルまたはポリクローナル抗体は、薬学的組成物を提供するために、患者への投与に好適な適切な医薬担体と混合される。
本発明のさらなる態様では、脊椎動物、好ましくは哺乳類、好ましくは霊長類(ヒト対象が特に好適な実施形態である)における疾患を、そのような疾患の治療に望ましい本発明の精製抗体組成物を投与することによって治療するための方法が提供される。
YAC及びBAC上での改変ヒトIg遺伝子座の構築
a)IgH遺伝子座
ヒトIgH V遺伝子は2つのBAC:VH4−39からVH3−23に続いてVH3−11まで広がる真正領域を含むBAC6−VH3−11(商業的に入手可能なBACクローン3054M17 CITBから改変)及びVH3−11からVH6−1まで広がる真正領域を含むBAC3(811L16 RPCI−11)によって網羅された。Annabelと呼ばれるBACを、ヒトVH6−1−D−JH領域の直下流にラットCH領域遺伝子を連結することによって構築した(図1)。ヒトまたはラットIgH遺伝子座の部分を含む全てのBACクローンは、Invitrogenから購入した。
約410kbのYAC上のヒトIgλ遺伝子座を、コスミドを含む3CλとVλ YACの組換えアセンブリによって得た(Popov et al.Gene 177,195−201(1996))。再編成及び発現を、完全ヒトIgλ YACの1つのコピーを含むES細胞由来のトランスジェニックマウスにおいて検証した(Popov et al.The Journal of experimental medicine 189,1611−1620(1999))。このIgλ YACを、Vλ3−27の領域5’のうちの約100kbを除去する環状YACの生成によって短縮した。ベクターpYAC−RCを、ClaI及びBspEIで消化して、URA3を除去し、HYGを含むpAP599からのClaI/NgoMIVフラグメントとライゲーションした。新たなベクター(pYAC−RC−HYG)からの酵母セントロメア及びハイグロマイシンマーカー遺伝子を含む領域のPCRを、Vλ3−27の領域5’に相同な5’末端を有するプライマー(プライマー276)及びYACアーム内のADE2マーカー遺伝子内のプライマー(プライマー275)で実施した。PCRフラグメント(3.8kb)を、高効率酢酸リチウム形質転換法(Gietz&Woods Methods in Microbiology 26,53−66(1998))及びYPDプレートを含むハイグロマイシンの選択を使用して、Igλ YAC内に組み込んだ。DNAを、クローンから調製し(Epicentre MasterPure酵母DNA精製キット)、以下のオリゴ:243+278及びHyg末端R+238を使用して、PCRにより正確な接合について分析した。プラグを作製し(Peterson Nature protocols 2,3009−3015(2007))、酵母染色体をPFGE(0.8%アガロース(PFC)(Biorad)ゲル[6V/cm、10時間に60秒及び10時間に10秒のパルス時間、8℃)によって除去し、環状酵母人工染色体をアガロースブロック内に捕捉させた(Beverly,Nucleic acids research 16,925−939(1988))。ブロックを除去し、NruIで消化した。簡潔には、ブロックを、1×の最終濃度で過剰の制限酵素バッファーと共に、1時間氷上でプレインキュベートした。過剰なバッファーを、プラグを覆うのに十分なだけ残して除去し、制限酵素を100U/mlの最終濃度まで添加し、チューブを37℃で4〜5時間インキュベートした。線状化YACがPFGEによってブロックから溶出し、ゲルから細片として切り取られ、以下に記載するように精製した。
精製YAC及びBAC DNAを、従来の0.7%アガロースゲル上で制限消化及び分離によって分析した(Sambrook&Russell Molecular Cloning.A laboratory Manual..Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY(2001))。50〜200kbのより大きいフラグメントを、PFGE(Biorad Chef Mapper(商標))によって80℃で、0.5%のTBE中の0.8%のPFCアガロースを使用して、16時間に2〜20秒のスイッチ時間で、6V/cm、10mAで分離した。精製により、得られるフラグメントの、配列分析から得られた予期されるサイズとの直接比較が可能となった。改変をPCR及びシーケンシングによって分析した。
組換え免疫グロブリン遺伝子座をコードする精製DNAを、マイクロインジェクションバッファー内で10mMのスペルミン及び10mMのスペミジンと共に再懸濁した。DNAを、0.5〜3ng/μlの様々な濃度で受精卵母細胞に注入した。
トランスジェニックラットを、Genomic DNA Mini Kid(Bioline)を使用して、尾または耳クリップDNAからのPCRによって同定した。IgH PCRについて、1kb未満のGoTaq Green Master mix(Promega)を以下の条件下で使用した:94℃で2分間、32×(94℃で30秒間、54〜67℃(プライマー及び特定のアニーリング温度については表1を参照されたい)で30秒間、72℃で1分間)、72℃で2分間。IgH PCRについて、1kb超のKODポリメラーゼ(Novagen)を以下の条件下で使用した:95℃で2分間、32×(95℃で20秒間、56〜62℃、表1)で20秒間、70℃で90秒間)、70℃で2分間。Igκ及びIgλ PCRについては、全て1kb未満で、72℃で50秒間の延長を除いては、上記の条件を使用した。
合計6匹のOmniRat2動物をβ−galで免疫化し、B細胞を流入領域リンパ節から単離した。B細胞をペレット化し、上清を除去した後、全RNAがリンパ節由来のB細胞から調製された。RNAを逆転写し、得られたcDNAを鋳型として用いて、Ig重鎖再編成遺伝子座の全可変領域(VH領域)を増幅した。次いで、この増幅産物を次世代シーケンシング(NGS)のために調製し、各動物の完全VHレパートリーをNGSによって決定した。
IgMを、プロトコルに記載される通り、抗IgM親和性マトリックス(BAC B.V.,Netherlands,CaptureSelect#2890.05)上で精製した。同様に、ヒトIgκ及びIgλを、プロトコルにしたがって抗L鎖親和性マトリックス(CaptureSelect抗Igκ#0833及び抗Igλ#0849)上で精製した。
細胞懸濁液を洗浄し、PBS−1% BSA−0.1%アジド中5×105細胞/100μlに調整した。抗B細胞CD45R(ラットB220)−PE−コンジュゲートmAb(His24,BD biosciences)または抗IgD−PE−コンジュゲートmAb(MARD−3,Abd Serotec)と共に、マウス抗ラットIgM FITC標識mAb(MARM4,Jackson Immunoresearch Laboratories)を使用して、異なるB細胞サブセットを同定した。FACS CantoIIフローサイトメーター及びFlowJoソフトウェア(Becton Dickinson,Pont de Claix,France)を分析のために使用した。
免疫化を、CFA中125μgのPG、CFA中150μgのhGHR、CFA中200μgのTau/KLH、CFA中150μgのHEL、CFA中150μgのOVAで尾根部で実施し、記載されるように、22日後に内側腸骨リンパ節細胞をマウスP3X63Ag8.653ミエローマ細胞と融合した(Kishiro et al.Cell structure and function 20,151−156(1995))。複数の免疫化のために、タンパク質、125μgのPGもしくはHEL、またはGERBUアジュバント(www.Gerbu.com)中100μgのhGHRもしくはCD14を、以下のように腹腔内に投与した:アジュバントなしで0日目、14日目、28日目、及び41日目、続いて4日後にP3X63Ag8.653細胞との脾臓細胞融合(Meisner&Johnson Methods 45,133−141(2008))。
ラット血清試料を、抗原コート、抗IgGまたはIgMレポーターELISAを使用してB−Gal IgG及びIgM抗体及び抗原力価について分析した。96ウェルプレートを2〜6℃で一晩B−Galでコーティングし、PBSカゼインブロッカー/希釈剤1×でブロッキングし、ELISA洗浄バッファーで洗浄し、血清とインキュベートし、ELISA洗浄バッファーで洗浄し、ヤギ抗ラットIgG1−HRP、ヤギ抗ラットIgG2a−HRP、及びヤギ抗ラットIgG2b−HRPの混合物(それぞれ1/5,000希釈)またはヤギ抗ラットIgM(1/5,000希釈)のいずれかとインキュベートし、ELISA洗浄バッファーで洗浄し、TMB基質溶液と30分間インキュベートし、ELISA停止液をウェルに加えた。プレートウェル中の吸光度を450nmで測定した。上記以外の場合、インキュベーションは周囲温度で1.5〜2時間であった。
二重抗体ELISAサンドイッチアッセイフォーマットを用いてラット血清試料を、総ラットIgG1、ラットIgG2b、及びラットIgM濃度についても分析した。総ラットIgG1、ラットIgG2b、及びラットIgM濃度を、各アイソタイプについて個別に作成した標準曲線を使用して算出した。96ウェルプレートを、それぞれのアイソタイプ特異的捕捉抗体(マウス抗ラットIgG1、マウス抗ラットIgG2b、またはヤギ抗ラットIgMのいずれか)で2〜6℃で一晩コーティングし、PBSカゼインブロッカー/希釈剤1×でブロッキングし、ELISA洗浄バッファーで洗浄し、血清とインキュベートし、ELISA洗浄バッファーで洗浄し、それぞれの検出抗体(マウス抗ラットIgGまたはヤギ抗ラットIgMのいずれか)とインキュベートし、ELISA洗浄バッファーで洗浄し、TMB基質溶液と30分間インキュベートし、ELISA停止液をウェルに加えた。プレートウェル中の吸光度を450nmで測定した。上記以外の場合、インキュベーションは周囲温度で1.5〜2時間であった。
ヒトIgH及びIgL遺伝子座
ヒトIg遺伝子座の構築は、YAC及びBACを使用して大きいDNAセグメントをアセンブリするための確立した技術を用いた(Davies et al.Nucleic acids research 20,2693−2698(1992);Davies et al.Biotechnology(N Y)11,911−914(1993);Wagner et al.Genomics 35,405−414(1996);Popov et al.Gene 177,195−201(1996);Mundt et al.J Immunol 166,3315−3323(2001))。E.coliにおける複数のBAC改変は、スイッチ配列及びエンハンサーなどの反復領域を高頻度で欠失させたため、S.cerevisiae内に環状YAC(cYAC)として重複する末端を有する配列をアセンブリし、その後そのようなcYACをBACに変換するための方法を開発した。YACの利点には、それらの大きなサイズ、酵母宿主における相同改変の容易さ、及び配列安定性が挙げられると同時にE.coli内で増殖するBACは、容易な調製及び高い収率という利点を提供する。加えて、詳細な制限マッピング及び配列分析は、YACにおいてよりもBACにおいてより良好に達成され得る。
卵母細胞内へのDNAマイクロインジェクションによるトランスジェニックラットの誘導、それらの交配、及び免疫化は、マウスと同等である。しかしながら、遺伝子ノックアウトをもたらすZFN技術は、近年ようやく報告されてきた(Geurts et al.Science 325,433(2009);Flisikowska et al.PloS one 6,e21045(2011))。ZFN KO技術を使用したJH欠失によるラットIgH遺伝子座のサイレンシングは、説明されており(Menoret et al.European journal of immunology 40,2932−2941(2010))、ラットIgL遺伝子座のサイレンシング、Cκの標的化、及びJ−Cλ遺伝子の欠失を説明する文書は準備中である。本発明者らは、ヒトIg遺伝子座が組み込まれ、及び内在性Igの産生がサイレンシングされた複数のファウンダーを導出し、選択及び異種交配された完全なトランス遺伝子座を組み込んでPCR及びFISHによって全てを分析した(表4)。いくつかのファウンダーラットは低トランス遺伝子座コピー数を保持し、OmniRat(商標)におけるラットC遺伝子BACが、Cμ及びCα産物のqPCRによって決定されるように、5つのコピー内に完全に組み込まれると考えられる(図示せず)。多くの系列における単一位置挿入のFISHによる同定により、BAC混合物の拡散または複数の組み込みは稀であり、ホモ接合にする交配の利点が達成されたことを確認した。
導入されたヒトIg遺伝子座が、正常なB細胞発達を再構成することができるかどうかを評価するために、フローサイトメトリー分析を実施した。脾臓及び骨髄リンパ球において特定の分化段階を分析したが(Osborn et al.J Immunol 2013;190:1481−1490)、既にJKO/JKOラットにおけるB細胞発達の欠如(Menoret et al.European journal of immunology 40,2932−2941(2010))、ならびにκKO/κKO及びλKO/λKO動物において対応するIgL発現がないことは示された(データ図示せず)。最も顕著であったのは、骨髄及び脾臓において類似した数のB220(CD45R)+リンパ球を有する、野生型動物と比較してOmniRatにおいてB細胞発達が完全に回復したことであった。CD45R+B細胞の大部分におけるIgM発現は、完全に再構成された免疫系を示した。脾臓細胞のサイズ及び形状分離は、OmniRat(商標)と野生型動物との間で区別不可能であったため、ヒトイディオタイプとラットC領域を発現するトランスジェニックラットにおいて、復元が成功した。さらに、小さなsIgG+リンパ球集団がOmniRat内に存在した(Osborn et al.J Immunol 2013;190:1481−1490)。
抗体産生についての明確な情報を獲得するために、本発明者らは、HC30及びHC14/HC30動物からの血清Igの質及び量を比較した(図4)。結果は、2つの重鎖遺伝子座(HC14及びHC30)を有する動物と比較して1つのIg遺伝子座(HC30)を有する動物が血清中で同量のIgM及びIgGを発現することを実証した。
機能性内在性Ig遺伝子座を有するトランスジェニックラットの血液リンパ球または脾臓細胞を使用して、広範な転写分析を実施した。CμまたはCγリバースプライマーに対して前にある特異的ヒトVH群からのRT−PCRは、ヒトVHDJH使用頻度を示した。L鎖分析群には、特異的ヒトVκまたはVλフォワードプライマーをCκまたはCγリバースプライマーと共に使用した。
新規なIgH遺伝子座を組み立てるためのヒト及びラット遺伝子の組み合わせは、ヒトイディオタイプを有する抗体の、非常に効率的な正常に近い発現をもたらした。さらに、ヒトIgκ及びIgγ遺伝子座の組み込みは、完全ヒト特異性を有するキメラIgが容易に産生されること、ならびにヒトL鎖とラットC領域の会合が有害ではないことを明らかにした。ラットIgH遺伝子座の一部を使用することの利点は、本質的には多様なヒトVHDJH領域のみが移植されて、種特異的C領域及びエンハンサー制御エレメントがそれらの天然の構成で保持されることである。さらに、ラットFc領域を有する抗体の発現は、正常B細胞受容体のアセンブリ、及び非常に効率的な免疫応答の開始のために必須である下流シグナル伝達経路の最適な活性化を可能にする。特に、抗原投与に対する免疫応答の質は、多くの受容体関連シグナル伝達及び改変構成成分の結合作用に依存する(www.biocarta.com/pathfiles/h bcrpathway.aspを参照されたい)。
Claims (35)
- 動物のゲノムの異なる染色体部位に組み込まれた、少なくとも1つの不活性化内在性Ig遺伝子座及び複数の人工トランスジェニックIg重鎖遺伝子座を含むトランスジェニック動物。
- 前記複数の人工Ig重鎖遺伝子座が、(i)生殖細胞系列または超変異ヒトV領域アミノ酸配列をコードする少なくとも1つのヒトV遺伝子セグメントを有するV領域と、(ii)1つ以上のJ遺伝子セグメントと、(iii)1つ以上の定常領域遺伝子セグメントと、を含み、前記人工Ig重鎖遺伝子座が機能的であり、遺伝子再編成を受けることができ、人工免疫グロブリンのレパートリーを産生するために協調的に作用する、請求項1に記載のトランスジェニック動物。
- 前記少なくとも2つの人工Ig重鎖遺伝子座が、それらの間にヒト可変重鎖領域の完全相補体を含む、請求項2に記載のトランスジェニック動物。
- 前記人工重鎖遺伝子座が、重複重鎖遺伝子セグメントを含む、請求項1に記載のトランスジェニック動物。
- 前記トランスジェニック動物が、機能的内在性Ig軽鎖遺伝子座を欠く、請求項1に記載のトランスジェニック動物。
- 前記トランスジェニック動物が、機能的内在性Ig重鎖遺伝子座を欠く、請求項1に記載のトランスジェニック動物。
- 前記トランスジェニック動物が、異なる染色体部位に位置するトランスジェニック免疫グロブリン遺伝子座のV遺伝子によってコードされる抗体の多様なレパートリーを発現する、請求項1に記載のトランスジェニック動物。
- 前記トランスジェニック動物が、機能的Ig軽鎖遺伝子座を欠き、重鎖のみの抗体を産生することができる、請求項7に記載のトランスジェニック動物。
- 前記人工Ig重鎖遺伝子座の少なくとも1つが、少なくとも1つのヒト免疫グロブリン(Ig)連結(J)領域遺伝子、Ig定常領域遺伝子、及びラット3’エンハンサーを含む、請求項2に記載のトランスジェニック動物。
- 前記ラット3’エンハンサーが、配列番号1として記載される配列を含む、請求項9に記載のトランスジェニック動物。
- 少なくとも1つのヒトIg可変(V)領域遺伝子及び/またはヒトIg多様性(D)領域遺伝子をさらに含む、先行請求項のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。
- 前記定常領域遺伝子が、ヒト定常領域遺伝子及びラット定常領域遺伝子からなる群より選択される、請求項2または9に記載のトランスジェニック動物。
- 前記定常領域遺伝子が、ラット定常領域遺伝子を含む、請求項12に記載のトランスジェニック動物。
- 前記定常領域遺伝子が、Cμ及びCγからなる群より選択される定常領域遺伝子を含む、請求項2または9に記載のトランスジェニック動物。
- 細菌人工染色体(BAC)Annabelと実質的に相同な核酸配列、またはその一部を含む、先行請求項のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。
- 前記ヒトIg V領域が、BAC6−VH3−11及び/またはBAC3から単離可能な少なくとも1つのヒトV領域遺伝子を含む、請求項11〜15のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。
- 5’から3’の順序で核酸配列(a)及び(b):
(a)BAC6−VH3−11及び/またはBAC3から単離可能な天然の構成にヒトV領域遺伝子を含むヒトIg可変領域と、
(b)前記細菌人工染色体(BAC)Annabelから単離可能な天然の構成にヒトJ領域遺伝子を含むヒトIg連結領域と、
を含む、先行請求項のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。 - 前記ヒト免疫グロブリン可変領域、前記ヒト免疫グロブリン多様性領域、前記ヒト免疫グロブリン連結領域、前記免疫グロブリン定常領域、及び前記ラット3’エンハンサーのそれぞれが、図1aに示す相対位置にある、請求項11〜17のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。
- 配列番号2として記載される核酸配列と実質的に相同な核酸配列を含む、請求項18に記載のトランスジェニック動物。
- 配列番号11として記載される核酸配列と実質的に相同な核酸配列を含む、請求項18に記載のトランスジェニック動物。
- 前記V−D−J領域が再編成され、重鎖可変ドメインをコードする完全なエクソンを形成する、請求項11〜18のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。
- 前記ヒトIg V領域が、BAC9−VH3−53及び/またはBAC14/5から単離可能な少なくとも1つのヒトV領域遺伝子を含む、請求項11〜15のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。
- 5’から3’の順序で核酸配列(a)及び(b):
(a)BAC9−VH3−53及び/またはBAC14/5から単離可能な天然の構成にヒトV領域遺伝子を含むヒトIg可変領域と、
(b)前記細菌人工染色体(BAC)Annabelから単離可能な天然の構成にヒトJ領域遺伝子を含むヒトIg連結領域と、
を含む、先行請求項のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物。 - 前記ヒト免疫グロブリン可変領域、前記ヒト免疫グロブリン多様性領域、前記ヒト免疫グロブリン連結領域、前記免疫グロブリン定常領域、及び前記ラット3’エンハンサーのそれぞれが、図1bに示す相対位置にある、請求項22または23に記載のトランスジェニック動物。
- 図6に記載の核酸配列と実質的に相同な核酸配列を含む、請求項24に記載のトランスジェニック動物。
- 図7に記載の核酸配列と実質的に相同な核酸配列を含む、請求項24に記載のトランスジェニック動物。
- 先行請求項のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物を免疫原で免疫化することを含む、抗体産生方法。
- 請求項27に記載の方法によって産生されたポリクローナル抗血清組成物であって、前記抗血清が、異なる染色体部位に位置するトランスジェニック免疫グロブリン遺伝子座によってコードされるV遺伝子によってコードされる抗原特異的抗体を含む、前記ポリクローナル抗血清組成物。
- (i)請求項1〜26のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物を免疫原で免疫化することと、(ii)前記トランスジェニック動物から、前記免疫原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するモノクローナル抗体産生細胞を単離することと、(iii)前記モノクローナル抗体産生細胞を用いて前記免疫原に特異的に結合する前記モノクローナル抗体を産生するか、または前記モノクローナル抗体産生細胞を用いて前記モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を産生し、そして前記ハイブリドーマ細胞を用いて前記モノクローナル抗体を産生することと、を含む、モノクローナル抗体の産生方法。
- (i)請求項1〜26のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物を免疫原で免疫化することと、(ii)前記トランスジェニック動物から、前記免疫原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するモノクローナル抗体産生細胞を単離することと、(iii)前記モノクローナル抗体産生細胞から、前記免疫原に特異的に結合する前記モノクローナル抗体をコードするモノクローナル抗体核酸を単離することと、(iv)前記モノクローナル抗体核酸を用いて前記免疫原に特異的に結合する前記モノクローナル抗体を産生することと、を含む、モノクローナル抗体の産生方法。
- 前記モノクローナル抗体が、ヒトイディオタイプを有する、請求項29または30に記載の方法。
- (i)請求項1〜26のいずれか1項に記載のトランスジェニック動物を免疫原で免疫化することと、(ii)前記トランスジェニック動物から、前記免疫原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するモノクローナル抗体産生細胞を単離することと、(iii)前記モノクローナル抗体産生細胞から、前記免疫原に特異的に結合する前記モノクローナル抗体をコードするモノクローナル抗体核酸を単離することと、(iv)前記モノクローナル抗体核酸を改変して、完全ヒトモノクローナル抗体をコードする組換え核酸を産生することと、(v)完全ヒトモノクローナル抗体をコードする前記組換え核酸を用いて前記コードされた完全ヒトモノクローナル抗体を産生することと、を含む、完全ヒトモノクローナル抗体の産生方法。
- 請求項29〜32のいずれか1項に記載の方法によって産生されるモノクローナル抗体。
- ヒト身体成分中の抗原性要素を中和するための方法であって、前記方法が、前記身体成分を、前記抗原性要素に特異的に結合する、かつそれを中和する免疫グロブリン分子を含む請求項28に記載のポリクローナル抗血清組成物と接触させることを含む、前記方法。
- ヒト身体成分中の抗原性要素を中和するための方法であって、前記方法が、前記身体成分を、前記抗原性要素に特異的に結合する、かつそれを中和する請求項33に記載のモノクローナル抗体と接触させることを含む、前記方法。
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