JP2020504625A - 細胞療法および創薬のための3d血管化ヒト眼組織 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、National Institutes of Health, the National Eye Instituteにより授与されたプロジェクト番号Z01#:EY000532-04の下で政府の支援を受けてなされた。政府は本発明に関して一定の権利を有している。
本願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる2016年11月9日に出願された米国特許仮出願第62/419,835号の恩典を主張する。
本開示は、人工器官の分野に関し、特に、脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む三次元工学的(three-dimensional engineered)外側血液網膜関門(BRB)を製造するための三次元(3D)バイオプリントの使用に関する。
網膜は、脊椎動物の眼の内表面に位置する分化した光感受性の神経組織の層である。角膜、水晶体、および硝子体液を通過した後に網膜に達した光は、化学的および電気的イベントに変換され、それが神経インパルスを誘起する。光をこれらの神経インパルスに変換するプロセスであるトランスダクションを担う細胞は、光受容体細胞と呼ばれる分化した神経細胞である。
いくつかの態様において、脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む三次元工学的血液網膜関門(BRB)を製造するための方法が開示される。この方法は、
a. 内皮細胞を含むヒドロゲルが生体適合性スキャホールドの第1の表面に付着するように、内皮細胞とヒドロゲルと第1の培地とを含む第1のバイオインクを、第1の表面および第2の表面を有する生体適合性スキャホールド上に堆積させる工程;
b. 内皮細胞が血管を形成することができるように、第1の表面上に堆積した第1のバイオインクを、第2の培地中で少なくとも4日間成熟させる工程;
c. 生体適合性スキャホールドが内皮細胞と網膜色素上皮細胞の間に存在するように、生体適合性スキャホールドの第2の表面上に単一細胞層を形成するために第3の培地中に網膜色素上皮細胞を堆積させる工程;ならびに
d. 堆積した網膜色素上皮細胞が増殖および成熟するように、この網膜色素上皮細胞を第3の培地中で培養する工程
を含む。
a. コラーゲンヒドロゲル中またはフィブリノゲンヒドロゲル中の内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞と、トロンビン、血管内皮成長因子、上皮成長因子(EGF)、線維芽細胞成長因子(FGF)、インスリン様成長因子(IGF)、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、アンギオポエチン-1、およびアプロチニンを含む第1の培地とを含む第1のバイオインクを提供し、かつ、内皮細胞と線維芽細胞と周皮細胞とを含むヒドロゲルが生体適合性スキャホールドの第1の表面に付着するように、第1のバイオインクを、生体適合性の酸素プラズマ処理されたポリラクチド/グリコリドポリマー上に、例えばポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)PDGLAスキャホールド上に堆積させる工程;
b. 内皮細胞が血管を形成することができるように、堆積させた第1のバイオインクを、血管内皮成長因子、EGF、FGF、IGF、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、ならびにアンギオポエチン-1およびアプロチニンの有効量を含む第2の培地中で少なくとも4日間、第1の表面においてトロンビンの非存在下で成熟させる工程;
c. 生体適合性スキャホールドが内皮細胞と網膜色素上皮細胞の間に存在するように、生体適合性スキャホールドの第2の表面上に層を形成するために第3の培地中に網膜色素上皮細胞を堆積させる工程であって、生体適合性スキャホールドの第1の表面および第2の表面が互いに反対側にある表面であり、第2の表面がビトロネクチンでコーティングされ、かつ第3の培地が、タウリン-ヒドロコルチゾン-トリヨード-サイロニン、ヒドロコルチゾン、トリヨード-サイロニン、ウシ胎仔血清の有効量を含む、工程;
d. 堆積した網膜色素上皮細胞が増殖および成熟するように、第2の表面上において、堆積した網膜色素上皮細胞を、タウリン-ヒドロコルチゾン-トリヨード-サイロニン、ヒドロコルチゾン、トリヨード-サイロニン、ウシ胎仔血清の有効量を含む第3の培地中で培養する工程;
e. 血管内皮成長因子ならびに任意で上皮成長因子(EGF)、線維芽細胞成長因子(FGF)、インスリン様成長因子(IGF)、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、およびアプロチニンの1つ、複数、またはすべての有効量を含む第4の培地中で、内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞を培養する工程であって、第4の培地がトロンビンおよびアンギオポエチン-1を含まない、工程;
f. 血管内皮細胞ならびに任意でEGF、FGF、IGF、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、およびヘパリン硫酸の1つ、複数、またはすべての有効量を含む第5の培地中で、内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞を培養する工程であって、第5の培地がトロンビン、アンギオポエチン-1、およびアプロチニンを含まない、工程;ならびに
g. 第3の培地に添加された有効量のプロスタグランジンE2を含む第6の培地中で、網膜色素上皮細胞を培養する工程
を含み、培養された内皮細胞が工学的BRBの人工脈絡膜を形成し、培養された網膜色素上皮細胞が人工網膜色素上皮を形成する。
複数の細胞型を含む複雑な三次元構造物を構築するためにバイオプリント技術を使用することができる。それは、2つの開示される特徴を使用する:(1)分解性生体材料と混合された数百から数千個の細胞を含む「バイオインク」として大粒の滴の形態で播種される細胞;(2)細胞が、空間的および時間的に制御され使用者により定義された様式で正確に移動させることができるニードルを用いて播種されること。バイオプリントされた組織の三次元構造は、すべての異なる細胞型が同時に成熟することを可能にし、それによってそれらが天然組織と同様に協働する可能性を高める。極性RPE単層および微小血管を形成する内皮細胞を含む三次元工学的BRBが、本明細書に開示されており;この三次元工学的BRBは、生体適合性スキャホールド上に細胞をバイオプリントすることによって製造される。この三次元工学的BRBは、野生型細胞または1つもしくは複数の変異細胞から製造され得る。この三次元工学的BRBは、疾患のモデルとして製造され得る。いくつかの態様において、疾患をモデル化するために、この三次元工学的BRBは、化学剤で処理され得、および/または三次元工学的BRBは、遺伝的変異を含む1つまたは複数の細胞型を含み得る。この工学的BRBにおいて、内皮細胞から生成された三次元微小血管は、網膜色素上皮(RPE)細胞下に位置する脈絡膜線維芽細胞と周皮細胞とを含む組織内に並んでいる。この工学的BRBは、BRBの疾患における分子経路を解明するため、BRBに影響する薬物を発見および試験するためのモデルとして、ならびに細胞ベースの療法として使用され得る。いくつかの態様において、RPE、内皮細胞、線維芽細胞、および/または周皮細胞は、同じ誘導多能性幹細胞(iPSC)、例えばヒトiPSC細胞由来であり得る。
それ以外のことが示されていない限り、技術用語は、従来的用法にしたがい使用される。分子生物学分野の一般用語の定義は、Benjamin Lewin, Genes V, Oxford University Press出版, 1994(ISBN 0-19-854287-9);Kendrewら(編), The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltd.出版, 1994(ISBN 0-632-02182-9);およびRobert A. Meyers(編), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers.出版, 1995(ISBN 1-56081-569-8)において見いだされ得る。本開示の様々な態様のレビューを容易にするために以下の特定の用語の説明が提供される。
生体適合性スキャホールドが、本明細書に開示される方法において使用される。生体適合性スキャホールドは、合成性生体適合性スキャホールドまたは天然生体適合性スキャホールド、例えば脱細胞化器官スキャホールドを含む。生体適合性スキャホールドは、ポリマー、例えば合成ポリマーを含み得る。
本明細書に開示される方法は、網膜色素上皮(RPE)細胞および内皮細胞、ならびに任意で線維芽細胞および周皮細胞を用いる。細胞は、任意の哺乳動物由来であり得る。細胞は、ヒト、非ヒト霊長類または任意の他の哺乳動物対象、例えばイヌ、ブタ、ネコ、ウシ、ウマ、またはげっ歯類対象由来であり得る。通常、同じ種由来の細胞が用いられる。具体的で非限定的な例において、RPE細胞、内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞を含む、本明細書に開示される方法において使用される細胞は、ヒトである。
ヒドロゲルと、細胞、例えば内皮細胞、線維芽細胞、周皮細胞、およびRPE細胞とを含む、バイオインクが、本明細書に開示される。いくつかの態様において、バイオインクは、ヒドロゲルおよび内皮細胞を含む。他の態様において、バイオインクは、ヒドロゲルおよび内皮細胞、ならびに周皮細胞および/または線維芽細胞を含む。さらなる態様において、バイオインクは、ヒドロゲルおよびRPE細胞を含む。
本明細書に記載される組織、アレイ、および方法は、三次元工学的BRB構造体を生成するためにバイオインク配合物およびバイオプリント法を用いる。特定の態様において、バイオプリントは、生体適合性スキャホールドの表面への1つまたは複数のバイオインクの適用を含む。バイオインクは、培地およびヒドロゲルを含み得る。いくつかの態様において、バイオインクはまた、フィブリノゲンを含む。いくつかの態様において、バイオインクは、内皮細胞、ならびに任意で周皮細胞および/または線維芽細胞を含む。いくつかの態様において、バイオインクは、網膜色素上皮細胞を含み得る。
脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む三次元工学的血液網膜関門(BRB)を製造するための方法が、本明細書に開示される。一般に、この方法は、生体適合性マトリクスの1つの表面上に、内皮細胞を含むバイオインクを堆積させる工程、およびそのマトリクスが内皮細胞とRPE細胞の間に存在するように、生体適合性マトリクスのシートの第2の(例えば、反対側の)表面上に、任意でバイオインク中の、RPE細胞を堆積させる工程を含む。例えば生体適合性スキャホールドの表面上において、バイオプリントされたまたはそうでなければ堆積された細胞に対してさらなる培養用培地を提供するように、非細胞性バイオインクが任意で、該表面に堆積され得る。
a. 内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞のバイオインクが生体適合性の酸素プラズマ処理されたポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)PDGLAスキャホールドの第1の表面に付着するように、コラーゲンヒドロゲル中およびフィブリノゲンヒドロゲル中の内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞とトロンビン、血管内皮成長因子、上皮成長因子(EGF)、線維芽細胞成長因子(FGF)、インスリン様成長因子(IGF)、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、アンギオポエチン-1、およびアプロチニンを含む第1の培地とを含む第1のバイオインクを、この生体適合性スキャホールド上に堆積させる工程;
b. 内皮細胞が血管を形成することができるように、第1の表面上に堆積させた第1のバイオインクを、血管内皮成長因子、EGF、FGF、IGF、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、ならびにアンギオポエチン-1およびアプロチニンの有効量を含む第2の培地中で少なくとも4日間、トロンビンの非存在下で成熟させる工程;
c. 生体適合性スキャホールドが内皮細胞と網膜色素上皮細胞の間に存在するように、生体適合性スキャホールドの第2の表面上に層を形成するために第3の培地中に網膜色素上皮細胞を堆積させる工程であって、生体適合性スキャホールの第1の表面および第2の表面が互いに反対側にある表面であり、かつ第2の表面がビトロネクチンでコーティングされ、かつ第3の培地がタウリン-ヒドロコルチゾン-トリヨード-サイロニン、ヒドロコルチゾン、トリヨード-サイロニン、ウシ胎仔血清の有効量を含む、工程;ならびに
d. 堆積した網膜色素上皮細胞が増殖および成熟するように、タウリン-ヒドロコルチゾン-トリヨード-サイロニン、ヒドロコルチゾン、トリヨード-サイロニン、ウシ胎仔血清の有効量を含む第3の培地中で、堆積した網膜色素上皮細胞を培養する工程;
e. 有効量の血管内皮成長因子を含む第4の培地中で、内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞を培養する工程であって、第4の培地がトロンビンおよびアンギオポエチン-1を含まない、工程;
f. 任意で有効量の血管内皮成長因子を含む第5の培地中で、内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞を培養する工程であって、第5の培地がトロンビン、アンギオポエチン-1、およびアプロチニンを含まない、工程;ならびに
g. 第3の培地に添加された有効量のプロスタグランジンE2を含む第6の培地中で、網膜色素上皮細胞を培養する工程
を含み、それによって、培養された内皮細胞が人工脈絡膜を形成し、かつ培養された網膜色素上皮細胞が人工網膜色素上皮を形成する三次元工学的BRBが形成される。
本明細書に開示される方法は、三次元工学的眼組織モデルを製造するために使用され得る、例えば、図1Aおよび図14を参照のこと。上記の任意の材料および方法が、三次元工学的眼組織を製造するために用いられ得る。
脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む開示される三次元工学的BRBは、黄斑変性、例えば加齢性黄斑変性、黄斑ジストロフィー、例えばスタルガルドおよびスタルガルド様病、ソースビー眼底ジストロフィー、RPE裂傷、脈絡膜新血管新生、ベスト病(卵黄状黄斑ジストロフィー)および成人卵黄状ジストロフィーまたは網膜色素変性の亜型、網膜自体の変性もしくは劣化、または網膜、脈絡膜もしくはRPE細胞に対する物理的損傷もしくは外傷を処置するために使用され得る。加齢性黄斑変性(AMD)は、55歳以上の人々における失明の一番の原因であり;この疾患は、遺伝的および環境的要因によって引き起こされる。AMDは、網膜色素上皮(RPE)細胞の機能障害および死から光受容体の喪失および鮮明な視界の欠如に進行する。網膜色素上皮単層を置き換えるために、機能的なRPE細胞の移植が使用され得る。しかし、細胞懸濁物の注入は、移植された細胞が2週間以内に死滅し、RPE機能に必須の単層構造が形成されないという理由で成功しなかったことが、研究により示されている。したがって、RPEの単一細胞懸濁物の注入は効果的でない。本明細書に開示される方法は、眼に移植され、内在構造を復元することができる脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む工学的BRBを提供する。
試験作用物質の効果を判定する方法が、本明細書に提供される。この方法は、本明細書に開示される方法により製造される脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む三次元工学的BRBを試験作用物質と接触させる工程を含む。その後、脈絡膜内での細胞の表現型が評価される。例えば、RPE細胞または内皮細胞によって形成される毛細管の表現型が評価され得る。さらなる態様において、網膜色素上皮細胞を有する脈絡膜の三次元構造が評価される。細胞の表現型の変化および/または三次元構造の変化によって、その作用物質が効果を有することが示される。正の効果は、例えば、RPE細胞の障壁機能の維持、または1つもしくは複数の細胞型の生存率の向上であり得る。試験作用物質の負の効果は、RPE細胞の死、障壁機能の低下、毛細管の断絶、毛細管の過剰成長またはRPE層への毛細管の侵入であり得る。脈絡膜はまた、例えばそれが断絶されているかどうかを判定するように、評価され得る。加えて、周皮細胞は、それらが血管を覆っているかどうかを判定するように評価され得る。
スキャホールドのバイオプリントを容易にする3Dプリント用インサートもまた、いくつかの態様において提供される。この特注のインサートは、改良版TRANSWELL(登録商標)透過性支持体に代えて使用され得る、実施例2を参照のこと。インサートは、インサート内に収容される基材を枠組みする露出しているプリント用フレーム(例えば、直線的なフレーム開放部、例えば正方形または長方形のフレーム開放部)を提供しつつ、培養ウェル(例えば、円柱状培養ウェル)にちょうど収まるように適合される。インサートは、インサートが培養ウェル内にちょうど収まってしっかりと保持されることができるように、培養ウェルの内径と実質的に同じ長さを有する。インサートの外壁は、それを入れるウェルの壁に対して形状および/またはサイズにおいて相補的であるように湾曲している。インサートボディ部はまた、プリント用基材を着座させる中央カラーを有し、支持構造体(例えば、ホルダの円柱状端部)は、フレーム支持構造体に対して基材を適所でしっかりと保持するように、基材に向かって押し込まれ得る。インサートボディ部の壁を通って液体培地を導入するために、複数のポートが、円形の凹部とインサートボディ部の外部の間の流体連通を構築にするようにインサートのボディ部を通って延びている。
概要
バイオプリントされた脈絡膜組織の設計は、その(1)構造の設計(組織のタイプ、形状、厚み)の決定;(2)バイオインクの決定;(3)細胞濃度の決定;(4)バイオインクの細胞組成の決定;(5)プリント用基材の決定;(6)培地組成の決定;(7)培地量の決定;(8)培地交換頻度の決定;(9)総培養時間の決定;(10)プリント工程の決定;(11)視覚的、組織学的、および生化学的分析の決定に関して説明する。これらの要素は、図1〜14に例示されている。
例示的なプロトコール
例示的な方法の工程を示すフローチャートが、図12に提供される。この方法の個々の工程は、図1B〜1Hに図示されている。このプロトコールのこの態様は、以下の工程を含む。
漏斗18を、図1Hに示されるように再度向きを変え、漏斗18がウェル20の上側になるようにマルチウェルプレートの壁20から吊り下げ、基材16を、そのすでにプリントされている表面が下になり、プリントされた表面がウェル20の底表面に隣接するまたは接するように配置する。すでにプリントされた脈絡膜は、基材16のバイオプリント(底)面にある。
MEM-α改変培地(Sigma-Aldrich)を基本培地として使用し、RPE細胞培養用の5%血清含有培地を調製する(RPE培地:以下の表1)。
*THTは、培地を作製する前に1 PBS 1.5 mL中にタウリン-ヒドロコルチゾン-トリヨード-サイロニンを溶解させることによって作製する。培養用培地の培養調製を簡単にするために、複数のアリコートを作製して-80℃で保管する。培地の調製で使用するウシ胎仔血清は、Atlanta Biologicals(Norcross, GA)から入手する。使用前に、血清の各ボトルを熱不活性化する(56℃で1時間)。
*組織培養のフェーズに依存するが、濃度は時間と共に減少する。
**組織培養のフェーズに依存するが、濃度は時間と共に減少する。
***組織培養のフェーズに依存するが、濃度は時間と共に減少する。
眼組織モデルの結果
図13A〜13Bに示される結果は、XY面におけるバイオプリントの再定義された幾何学形状が、血管新生優性(ギャップ部)および血管発生優性(プリントされた領域)領域への血管発生の分離を実現することを示している。ギャップ部における血管新生の定量は、血管新生が血管内皮成長因子(VEGF)の濃度に有意に依存したことを示すことによって、プリントされた微小血管網を検証した。一週間のVEGF処理は、微小血管網の成長および生存を有意に向上させた。この組織の断面の組織学的切断は、インビボと類似する、周皮細胞によって取り囲まれた内皮細胞の中空管形成(2つのマーカーの共局在化)を示している。このシステムは、疾患モデルとして使用することができる、図17、18を参照のこと。1つの例において、細胞はiPSC由来である。
Claims (89)
- a. 内皮細胞を含むヒドロゲルが生体適合性スキャホールドの第1の表面に付着するように、該ヒドロゲルと第1の培地とを含む第1のバイオインクを、互いに反対側にある第1の表面および第2の表面を含む該生体適合性スキャホールド上に堆積させる工程;
b. 該内皮細胞が血管を形成することができるように、該生体適合性スキャホールドの該第1の表面上に堆積した該第1のバイオインクを、第2の培地中で少なくとも4日間成熟させる工程;
c. 該生体適合性スキャホールドが該内皮細胞と網膜色素上皮細胞の間に存在するように、該生体適合性スキャホールドの該第2の表面上に単一細胞層を形成するために第3の培地中に該網膜色素上皮細胞を堆積させる工程;ならびに
d. 堆積した該網膜色素上皮細胞が増殖および成熟するように、該生体適合性スキャホールド上において該網膜色素上皮細胞を該第3の培地中で培養する工程
を含み、
それによって、該第1の表面上に人工脈絡膜を有しかつ該第2の表面上に人工網膜色素上皮を有する三次元工学的(three-dimensional engineered)血液網膜関門(BRB)を形成する、
脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む該三次元工学的BRBを製造する方法。 - 前記生体適合性スキャホールドが、ポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)、ポリ(乳酸-コ-グリコール酸)(PLGA)、ポリ(乳酸)(PLA)、ポリ(-L-乳酸)(PLLA)、ポリ(グリコール)酸(PGA)、ポリカプロラクトン(PCL)、ポリエチレングリコール(PEG)、シルク、フィブロイン、コラーゲン(ガラス化もしくは組換え)、またはそれらの組み合わせを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記生体適合性スキャホールドがポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記生体適合性スキャホールドが、架橋されたポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)からなる、請求項1に記載の方法。
- 前記ポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)が、前記第1のバイオインクを堆積させる工程の前に酸素プラズマで処理される、請求項3または4に記載の方法。
- 前記ポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)が、前記第1のバイオインクを堆積させる工程の前に1日未満の間、前記酸素プラズマで処理される、請求項5に記載の方法。
- 前記第1のバイオインクが線維芽細胞および/または周皮細胞をさらに含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のバイオインクが、1ミリリットルあたり約500万〜約3000万個の内皮細胞、1ミリリットルあたり約1000万〜約5000万個の線維芽細胞、および1ミリリットルあたり約50万〜約300万個の周皮細胞を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記内皮細胞、前記線維芽細胞、および前記周皮細胞が、それぞれ1:0.3:0.1〜1:10:1の比で前記第1のバイオインク中に存在する、請求項7に記載の方法。
- 前記内皮細胞、前記線維芽細胞、および前記周皮細胞が、それぞれ1:2:0.5の比で前記第1のバイオインク中に存在する、請求項9に記載の方法。
- 前記第1のバイオインクがバイオプリントにより堆積され、該バイオプリントが、前記生体適合性スキャホールド上への該バイオインクの押し出しを含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のバイオインク中の前記ヒドロゲルが、コラーゲンベースのヒドロゲルを含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のバイオインク中の前記ヒドロゲルが、ゼラチンヒドロゲル、コラーゲンヒドロゲル、フィブリンヒドロゲル、多糖ヒドロゲル、アルギネートヒドロゲル、ラミニンヒドロゲル、フィブロネクチンヒドロゲル、ラミニンヒドロゲル、ビトロネクチンヒドロゲル、ポリエチレングリコールヒドロゲル、ゼラチンメタクリロイルヒドロゲル、またはそれらの組み合わせを含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1の培地および前記第2の培地が、血管内皮細胞成長因子(VEGF)、アンギオポエチン1、IGF、EGF、FGF、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、アンギオポエチン、およびアプロチニンを含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1の培地が、1〜1,000 ng/mlの内皮細胞成長因子(VEGF)、50〜1000 ng/mlのアンギオポエチン1、および0.075〜0.5 U/mlのアプロチニンを含む、請求項14に記載の方法。
- 前記生体適合性マトリクスの前記第2の表面上に前記網膜色素上皮細胞を堆積させる前に、該生体適合性マトリクスの該第2の表面を細胞外マトリクスでコーティングする工程をさらに含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞外マトリクスが、コラーゲン、ラミニン、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、プロテオグリカン、エラスチン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、および/もしくはフィブロネクチン、またはそれらの組み合わせを含む、請求項16に記載の方法。
- 前記網膜色素上皮細胞を堆積させる工程が、網膜色素上皮細胞の懸濁物を前記生体適合性マトリクスの前記第2の表面に添加することを含む、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記網膜色素上皮細胞、前記内皮細胞、前記線維芽細胞、および/または前記周皮細胞が、誘導多能性幹細胞から生成されている、請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 単層が形成されるまで前記網膜色素細胞が前記第3の培地中で培養される、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のバイオインクを前記生体適合性スキャホールドの前記第1の表面上にバイオプリントしてから5日後またはそれ以降に、前記網膜色素上皮細胞が該生体適合性マトリクスの前記第2の表面上に堆積される、請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生体適合性マトリクスの表面1センチメートルあたり100,000〜400,000個の網膜色素上皮細胞を堆積させる工程を含む、請求項1〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記網膜色素上皮細胞を堆積させる工程が、網膜色素上皮細胞と前記第3の培地とを含む第2のバイオインクを堆積させることを含む、請求項1〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2のバイオインクがヒドロゲルを含み、かつ該第2のバイオインク中の該ヒドロゲルが、ゼラチンヒドロゲル、コラーゲンヒドロゲル、フィブリンヒドロゲル、多糖ヒドロゲル、アルギネートヒドロゲル、ラミニンヒドロゲル、フィブロネクチンヒドロゲル、ラミニンヒドロゲル、ビトロネクチンヒドロゲル、ポリエチレングリコールヒドロゲル、またはゼラチンメタクリロイルヒドロゲルを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記内皮細胞および前記網膜色素上皮細胞がヒト細胞である、請求項1〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記内皮細胞、前記線維芽細胞、前記周皮細胞、および前記網膜色素上皮細胞がヒト細胞である、請求項7〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脈絡膜を網膜色素上皮細胞と共に対象の眼に移植する工程をさらに含む、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が急性黄斑変性を有する、請求項27に記載の方法。
- 請求項1〜26のいずれか一項に記載の方法によって製造された、脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む三次元工学的BRBを、試験作用物質と接触させる工程、ならびに
網膜色素上皮細胞を伴う該脈絡膜内の細胞の表現型を評価し、かつ/または網膜色素上皮細胞を伴う該脈絡膜の三次元構造を評価する工程
を含む、試験作用物質の効果を判定する方法であって、
該細胞の表現型の変化または三次元構造の変化によって、該作用物質が効果を有することが示される、方法。 - a. 内皮細胞、線維芽細胞、および周皮細胞が生体適合性の酸素プラズマ処理されたポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)PDGLAスキャホールドの第1の表面に付着するように、コラーゲンヒドロゲル中およびフィブリノゲンヒドロゲル中の該内皮細胞、該線維芽細胞、および該周皮細胞と、トロンビン、血管内皮成長因子、上皮成長因子(EGF)、線維芽細胞成長因子(FGF)、インスリン様成長因子(IGF)、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、アンギオポエチン-1、およびアプロチニンを含む第1の培地とを含む第1のバイオインクを、該生体適合性スキャホールド上に堆積させる工程;
b. 該内皮細胞が血管を形成することができるように、堆積させた該第1のバイオインクを、血管内皮成長因子、EGF、FGF、IGF、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、ならびにアンギオポエチン-1およびアプロチニンの有効量を含む第2の培地中で少なくとも4日間、トロンビンの非存在下で成熟させる工程;
c. 該生体適合性スキャホールドが該内皮細胞と該網膜色素上皮細胞の間に存在するように、該生体適合性スキャホールドの第2の表面上に層を形成するために第3の培地中に網膜色素上皮細胞を堆積させる工程であって、該生体適合性スキャホールドの該第1の表面および該第2の表面が互いに反対側にある表面であり、かつ該第2の表面がビトロネクチンでコーティングされ、かつ該第3の培地がタウリン-ヒドロコルチゾン-トリヨード-サイロニン、ヒドロコルチゾン、トリヨード-サイロニン、ウシ胎仔血清の有効量を含む、工程;
d. 堆積した該網膜色素上皮細胞が増殖および成熟するように、タウリン-ヒドロコルチゾン-トリヨード-サイロニン、ヒドロコルチゾン、トリヨード-サイロニン、ウシ胎仔血清の有効量を含む該第3の培地中で、堆積した該網膜色素上皮細胞を培養する工程;ならびに
e. 有効量の血管内皮成長因子を含む第4の培地中で、該内皮細胞、該線維芽細胞、および該周皮細胞を培養する工程であって、該第4の培地がトロンビンおよびアンギオポエチン-1を含まない、工程;
f. 有効量の血管内皮細胞を任意で含む第5の培地中で、該内皮細胞、該線維芽細胞、および該周皮細胞を培養する工程であって、該第5の培地がトロンビン、アンギオポエチン-1、およびアプロチニンを含まない、工程;ならびに
g. 該第3の培地に添加された有効量のプロスタグランジンE2を含む第6の培地中で、該網膜色素上皮細胞を培養する工程
を含み、
それによって三次元工学的血液網膜関門(BRB)を形成する、
脈絡膜と網膜色素上皮細胞とを含む該三次元工学的BRBを製造する方法。 - 三次元工学的外側血液網膜関門
を含み、
該三次元工学的外側血液網膜関門が、
第1のバイオインクを含む脈絡膜を含み、該第1のバイオインクが複数の内皮細胞を含む、第1の層;ならびに
複数の網膜色素上皮細胞を含み、該第1の層および第2の層が該三次元工学的外側血液網膜関門を形成する、該第2の層
を含む、
三次元工学的眼組織モデル。 - 生体適合性スキャホールドをさらに含み、該生体適合性スキャホールドが前記第1の層と前記第2の層の間に存在する、請求項31に記載の眼組織モデル。
- 前記生体適合性スキャホールドが、ポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)、ポリ(乳酸-コ-グリコール酸)(PLGA)、ポリ(乳酸)(PLA)、ポリ(-L-乳酸)(PLLA)、ポリ(グリコール)酸(PGA)、ポリカプロラクトン(PCL)、ポリエチレングリコール(PEG)、シルク、フィブロイン、コラーゲン(ガラス化もしくは組換え)、またはそれらの組み合わせを含む、請求項32に記載の眼組織モデル。
- 前記生体適合性スキャホールドがポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)を含む、請求項32に記載の眼組織モデル。
- 前記ポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)が、架橋されたポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)である、請求項34に記載の眼組織モデル。
- 前記ポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)が、酸素プラズマ処理されたポリ(D,L-ラクチド コ-グリコリド)(PDGLA)である、請求項44または45に記載の眼組織モデル。
- 前記第1のバイオインクが複数の線維芽細胞をさらに含む、請求項31〜36のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第1のバイオインクが複数の周皮細胞をさらに含む、請求項31〜37のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第1のバイオインクが、1ミリリットルあたり約500万〜約3000万個の内皮細胞を含む、請求項31、37、または38のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第1のバイオインクが、1ミリリットルあたり約1000万〜約5000万個の線維芽細胞を含む、請求項37〜39のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第1のバイオインクが、1ミリリットルあたり約50万〜約300万個の周皮細胞を含む、請求項38〜40のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記内皮細胞、前記線維芽細胞、および前記周皮細胞が、それぞれ1:0.3:0.1〜1:10:1の比で前記第1のバイオインク中に存在する、請求項38〜41のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記内皮細胞、前記線維芽細胞、および前記周皮細胞が、それぞれ1:2:0.5の比で前記第1のバイオインク中に存在する、請求項38〜41のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第1のバイオインクがヒドロゲルをさらに含む、請求項31〜43のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記ヒドロゲルが、コラーゲンベースのヒドロゲルを含む、請求項44に記載の眼組織モデル。
- 前記ヒドロゲルが、ゼラチンヒドロゲル、コラーゲンヒドロゲル、フィブリンヒドロゲル、多糖ヒドロゲル、アルギネートヒドロゲル、ラミニンヒドロゲル、フィブロネクチンヒドロゲル、ラミニンヒドロゲル、ビトロネクチンヒドロゲル、ポリエチレングリコールヒドロゲル、ゼラチンメタクリロイルヒドロゲル、またはそれらの組み合わせを含む、請求項44に記載の眼組織モデル。
- 前記バイオインクが第1の培地をさらに含む、請求項31〜46のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第1の層および/または前記第2の層が前記第1の培地中で培養される、請求項31〜46のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第1の培地が、トロンビン、血管内皮成長因子、上皮成長因子(EGF)、線維芽細胞成長因子(FGF)、インスリン様成長因子(IGF)、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、アンギオポエチン-1、アプロチニン、またはそれらの組み合わせを含む、請求項47または48に記載の眼組織モデル。
- 前記第1の培地が、1〜1,000 ng/mlの内皮細胞成長因子(VEGF)、50〜1000 ng/mlのアンギオポエチン1、および0.075〜0.5 U/mlのアプロチニンを含む、請求項49に記載の眼組織モデル。
- 前記第1の層および/または前記第2の層が第2の培地中で培養される、請求項31〜50のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第2の培地が、血管内皮成長因子、EGF、FGF、IGF、アスコルビン酸、ヒドロコルチゾン、ヘパリン硫酸、およびアンギオポエチン-1、アプロチニン、またはそれらの組み合わせを含む、請求項51に記載の眼組織モデル。
- 前記第1の層および/または前記第2の層が第3の培地中で培養される、請求項31〜51のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第3の培地が、タウリン-ヒドロコルチゾン-トリヨード-サイロニン、ヒドロコルチゾン、トリヨード-サイロニン、ウシ胎仔血清、またはそれらの組み合わせを含む、請求項53に記載の眼組織モデル。
- 前記生体適合性スキャホールドが、該生体適合性スキャホールドの表面をコーティングしている細胞外マトリクスをさらに含む、請求項32〜54のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記細胞外マトリクスが、コラーゲン、ラミニン、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、プロテオグリカン、エラスチン、ヒアルロン酸、ビトロネクチン、フィブロネクチン、またはそれらの組み合わせを含む、請求項55に記載の眼組織モデル。
- 前記網膜色素上皮細胞、前記内皮細胞、前記線維芽細胞、および前記周皮細胞の1つまたは複数が、誘導多能性幹細胞から生成されている、請求項31〜56のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記網膜色素上皮細胞、前記内皮細胞、前記線維芽細胞、および前記周皮細胞の1つまたは複数が有病細胞である、請求項31〜57のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記生体適合性スキャホールドの表面1センチメートルあたり約100,000〜400,000個の網膜色素上皮細胞を含む、請求項32〜58のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記第1の層がバイオプリントによって堆積される、請求項31〜59のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記バイオプリントが、前記生体適合性スキャホールドの第1の表面上への前記第1のバイオインクの押し出しを含む、請求項60に記載の眼組織モデル。
- 前記内皮細胞および前記網膜色素上皮細胞がヒト細胞である、請求項31〜61のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記内皮細胞、前記線維芽細胞、前記周皮細胞、および/または前記網膜色素上皮細胞がヒト細胞である、請求項37〜62のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 前記網膜色素上皮細胞、前記内皮細胞、前記線維芽細胞、および前記周皮細胞の1つまたは複数が、有病ヒトドナー由来の有病細胞である、請求項31〜63のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 神経支配されていない、請求項31〜64のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- ヒト対象の眼への移植に使用するための、請求項31〜65のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 創薬、薬物試験、前臨床研究、毒性試験、吸収、分布、代謝、および排出試験(ADME)、薬物代謝および薬理試験(DMPK)、疾患モデリング、感染病モデリング、宿主疾患モデル、三次元生物学研究、細胞ベースのスクリーニング、遺伝子療法試験、ならびに/またはバイオマーカー発見の1つまたは複数に使用するための、請求項31〜66のいずれか一項に記載の眼組織モデル。
- 使用時に前記生体適合性スキャホールドを実質的に含まない、請求項66または67に記載の眼組織モデル。
- 培養チャンバーにちょうど収まるよう、かつ露出しているプリント用フレーム内でプリント用基材を提示するための該プリント用フレームを形成するように適合されたインサート
を含む、
スキャホールドにバイオプリントするためおよび既定の幅を有する該培養チャンバーの壁に対して該スキャホールドを挿入するためのバイオプリント用インサート。 - 前記インサートが、前記培養チャンバーと実質的に同じ外側寸法を有し、該インサートが該培養チャンバー内にちょうど収まってしっかりと保持され、かつ該インサートの外壁が、該インサートがちょうど収まる該チャンバーの壁に対して形状に関して相補的であり、
該インサートが、前記プリント用フレームを取り囲む中央開放部を有し、かつ該インサートが、該中央開放部に対して該スキャホールドを把持するようかつ該プリント用フレーム内で該スキャホールドを露出させるように、該中央開放部内に保持可能なホルダと係合可能である、
請求項69に記載のインサート。 - 前記インサートが、前記プリント用フレームを含むより小さい開口部を取り囲むカラー、および前記チャンバーの壁に対して配置するのに十分な距離だけ該カラーから半径方向に延びている複数のスペーサーアームを含み、かつ該アームが、該壁の形状に合致する表面で終結する、請求項69または70に記載のインサート。
- 前記チャンバーの壁が湾曲しており、かつ前記アームが、該壁の湾曲に対して相補的な湾曲した表面で終結する、請求項71に記載のインサート。
- 前記チャンバーが培養皿であり、かつ前記アームが、ウェルを該培養皿内の中心に配置するのに十分な距離だけ前記カラーから実質的に対称的に延びている、請求項71または72に記載のインサート。
- 前記培養皿が、マルチウェルプレート内の培養ウェルである、請求項69〜73のいずれか一項に記載のインサート。
- 前記開口部が、多角形であり、かつ前記カラーによって取り囲まれるのに十分なサイズであり、かつ、該カラーが、該開口部よりも大きい前記スキャホールドを保持するのに十分なサイズである、請求項71〜74のいずれか一項に記載のインサート。
- 前記カラーが円柱状であり、かつ前記プリント用フレームが、長方形であり、かつ該カラーによって取り囲まれている、請求項71〜75のいずれか一項に記載のインサート。
- 入口ポートおよび出口ポートをさらに含み、該入口ポートおよび出口ポートが、前記インサートを通ってフレーム開口部を通りそしてインサートボディ部の外側へと培養用培地を流し込むために該インサートを通って延びている、請求項69〜76のいずれか一項に記載のインサート。
- 前記カラーの内壁に対してちょうど収まるような形状にされたシートである前記スキャホールドをさらに含む、請求項71〜77のいずれか一項に記載のインサート。
- 前記プリント用フレームの前記開口部に対して前記スキャホールドをしっかりと保持するように前記カラー内に挿入された前記ホルダをさらに含む、請求項71〜78のいずれか一項に記載のインサート。
- 前記ホルダが、漏斗形状であり、かつ円錐台状ボディ部および円柱状ステム部を含み、該円柱状ステム部が、前記開口部に対して前記基材を保持するように前記カラー内にちょうど収まる、請求項79に記載のインサート。
- 前記スキャホールドを、前記カラー内に配置し、かつ前記プリント用フレームの開口部を通じて露出させ、かつ、プリント用スキャホールドを該フレームに対してしっかりと保持するように前記ホルダを前記インサートボディ部に挿入する、請求項71〜80のいずれか一項に記載のインサートを使用する方法。
- 前記インサートボディ部の前記カラーに合致して該カラー内にちょうど収まるようなサイズにされた前記スキャホールドが、前記プリント用フレームの前記開口部に向かって該カラー内に設置され、かつ、前記ホルダの円柱状係合部分が、該プリント用フレーム内で露出している該スキャホールドを保持するように該スキャホールドの上部において該カラー内に挿入される、請求項81に記載の方法。
- 前記プリント用フレームを通じて前記スキャホールド上にバイオプリントする工程をさらに含む、請求項82に記載の方法。
- 前記フレームを通じて露出していない前記スキャホールドの反対側の面に播種またはバイオプリントする工程をさらに含む、請求項83に記載の方法。
- 前記反対側の面に播種またはバイオプリントする工程が、前記ホルダを通じて播種またはバイオプリントすることを含む、請求項84に記載の方法。
- 前記プリント用フレームを通じて前記培養チャンバーの底側に前記スキャホールドが露出している状態で、前記インサートを該培養チャンバーに挿入する工程をさらに含む、請求項81〜85のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ポートを通じて前記プリント用フレーム内に培養用培地を流し込む工程をさらに含む、請求項80〜86のいずれか一項に記載の方法。
- 前記基材上にバイオプリントする工程が、前記プリント用フレームをバイオプリンタに露出させた状態で前記ホルダを支持表面上に設置し、かつ該プリント用フレームの前記開口部を通じて該基材上にバイオプリントすることを含む、請求項81〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 前記培養チャンバーが培養ウェルであり、該培養ウェルに対して前記インサートが円周方向に合致する、請求項86に記載の方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102224115B1 (ko) * | 2020-01-10 | 2021-03-09 | 경북대학교병원 | 3차원 바이오프린팅 기술을 이용한 망막 세포 배양용 구조체 및 이의 활용 |
WO2022039209A1 (ja) * | 2020-08-21 | 2022-02-24 | 凸版印刷株式会社 | 立体的細胞組織の製造方法及び立体的細胞組織 |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20210236644A1 (en) | 2017-11-10 | 2021-08-05 | Cocoon Biotech Inc. | Ocular applications of silk-based products |
WO2020006096A1 (en) * | 2018-06-28 | 2020-01-02 | Cedars-Sinai Medical Center | Compact mechanical syringe extruder for 3d bioprinting of cell laden gels |
AU2019385332A1 (en) * | 2018-11-19 | 2021-05-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Biodegradable tissue replacement implant and its use |
CN109701083A (zh) * | 2019-01-25 | 2019-05-03 | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 | 一种利用生物三维打印和静电纺丝技术制备人工肌腱方法 |
CA3137528A1 (en) * | 2019-04-26 | 2020-10-29 | Riken | Composite including neural retina, retinal pigment epithelial cells, and hydrogel, and method for producing same |
JP2020188723A (ja) * | 2019-05-22 | 2020-11-26 | 国立大学法人東北大学 | 3次元培養モデル |
CA3140395A1 (en) * | 2019-06-03 | 2020-12-10 | Advanced Solutions Life Sciences, Llc | System and method for fabricating a cornea |
US20220275342A1 (en) * | 2019-07-09 | 2022-09-01 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Dissolvable and degradable artificial circulation systems for large volume tissues |
CN110408539B (zh) * | 2019-07-30 | 2022-07-12 | 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 | 大体积组织工程组织器官内部仿生血管网的构筑方法 |
CN110859994B (zh) * | 2019-08-21 | 2020-10-30 | 东华大学 | 一种改性柞蚕丝素蛋白3d打印支架及其制备方法 |
WO2021041372A1 (en) * | 2019-08-26 | 2021-03-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Universal orthogonal network bioinks for three-dimensional bioprinting |
US20210071018A1 (en) * | 2019-09-11 | 2021-03-11 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Compositions and methods for extrusion-based 3d printing of soft materials |
US12018279B2 (en) | 2019-10-18 | 2024-06-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Micro-engineered models of the human eye and methods of use |
CN110917401A (zh) * | 2019-11-01 | 2020-03-27 | 海口市人民医院 | 一种用于胆管修复的3d打印支架及其制备方法 |
BR102020007764A2 (pt) * | 2020-04-17 | 2021-10-26 | Tissuelabs Pesquisa E Desenvolvimento Ltda | Inserto de cultura de células contendo hidrogel e método de uso |
CN111534489B (zh) * | 2020-04-29 | 2022-07-12 | 清华大学 | 一种基于3d打印的t淋巴细胞扩增方法 |
CN112175907B (zh) * | 2020-10-12 | 2022-11-29 | 爱尔眼科医院集团股份有限公司 | 血视网膜外屏障模型及其构建方法,构建该模型采用的培养基组合 |
EP4074820A1 (en) * | 2021-04-16 | 2022-10-19 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Micro-engineered models of the human eye and methods of use |
WO2022251499A1 (en) | 2021-05-28 | 2022-12-01 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods to generate macular, central and peripheral retinal pigment epithelial cells |
CA3220433A1 (en) | 2021-05-28 | 2022-12-01 | Arvydas Maminishkis | Biodegradable tissue scaffold with secondary matrix to host weakly adherent cells |
CN113456891B (zh) * | 2021-06-16 | 2022-05-17 | 成都微沃科技有限公司 | 一种从细胞层中提取细胞外基质层的方法 |
CN113604421B (zh) * | 2021-08-06 | 2023-09-19 | 苏州瑞华骨科医院有限公司 | 基于3d打印的血管化双层工程皮肤及其制备方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110004304A1 (en) * | 2009-03-20 | 2011-01-06 | Tao Sarah L | Culturing retinal cells and tissues |
WO2014030749A1 (ja) * | 2012-08-24 | 2014-02-27 | 独立行政法人理化学研究所 | 網膜色素上皮細胞シートの製造方法 |
Family Cites Families (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5206347A (en) | 1985-08-06 | 1993-04-27 | La Jolla Cancer Research Foundation | Isolation and use of receptors binding to a peptide column |
US5750342A (en) | 1990-06-11 | 1998-05-12 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid ligands of tissue target |
US5264563A (en) | 1990-08-24 | 1993-11-23 | Ixsys Inc. | Process for synthesizing oligonucleotides with random codons |
US6416998B1 (en) | 1992-09-02 | 2002-07-09 | Baylor College Of Medicine | Plasmid encoding a modified steroid hormone |
US5763270A (en) | 1995-06-07 | 1998-06-09 | Genemedicine, Inc. | Plasmid for delivery of nucleic acids to cells and methods of use |
US5622699A (en) | 1995-09-11 | 1997-04-22 | La Jolla Cancer Research Foundation | Method of identifying molecules that home to a selected organ in vivo |
US8673333B2 (en) | 2002-09-25 | 2014-03-18 | The Johns Hopkins University | Cross-linked polymer matrices, and methods of making and using same |
US7989425B2 (en) | 2002-09-27 | 2011-08-02 | Genexine Inc. | Vaccine enhancing the protective immunity to hepatitis c virus using plasmid DNA and recombinant adenovirus |
US7682828B2 (en) | 2003-11-26 | 2010-03-23 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods for reprogramming somatic cells |
US20070187857A1 (en) | 2004-09-30 | 2007-08-16 | Riley Susan L | Methods for making and using composites, polymer scaffolds, and composite scaffolds |
EP2186823A1 (en) | 2005-11-14 | 2010-05-19 | Merial Limited | Gene therapy for renal failure |
US8278104B2 (en) | 2005-12-13 | 2012-10-02 | Kyoto University | Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2 |
US8129187B2 (en) | 2005-12-13 | 2012-03-06 | Kyoto University | Somatic cell reprogramming by retroviral vectors encoding Oct3/4. Klf4, c-Myc and Sox2 |
EP2208786B1 (en) | 2005-12-13 | 2018-08-01 | Kyoto University | Nuclear reprogramming factor |
US20100179659A1 (en) | 2006-09-27 | 2010-07-15 | Wan-Ju Li | Cell-nanofiber composite and cell-nanofiber-hydrogel composite amalgam based engineered intervertebral disc |
US9683232B2 (en) | 2007-12-10 | 2017-06-20 | Kyoto University | Efficient method for nuclear reprogramming |
EP3447128A1 (en) | 2008-06-04 | 2019-02-27 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Methods for the production of ips cells using non-viral approach |
DK3450545T3 (da) | 2008-10-24 | 2023-10-02 | Wisconsin Alumni Res Found | Pluripotente stamceller opnået ved ikke-viral omprogrammering |
CA2952805C (en) | 2009-06-05 | 2021-06-01 | Cellular Dynamics International, Inc. | Reprogramming t cells and hematopoietic cells |
JP4782219B2 (ja) | 2009-07-02 | 2011-09-28 | 三菱重工業株式会社 | 真空蒸着装置 |
KR101774206B1 (ko) | 2009-08-07 | 2017-09-04 | 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 | 유도된 다능성 줄기 세포의 효율적인 확립 방법 |
US9005967B2 (en) | 2010-01-22 | 2015-04-14 | Kyoto University | Myc variants improve induced pluripotent stem cell generation efficiency |
US9267099B2 (en) | 2010-03-15 | 2016-02-23 | Indiana University Research And Technology Corporation | Engineered lumenized vascular networks and support matrix |
US8278620B2 (en) | 2010-05-03 | 2012-10-02 | Thermo Finnigan Llc | Methods for calibration of usable fragmentation energy in mass spectrometry |
WO2012177968A1 (en) | 2011-06-22 | 2012-12-27 | The Schepens Eye Research Institute, Inc. | A scaffold for subretinal cell transplantation and drug delivery |
US10052350B2 (en) | 2011-09-16 | 2018-08-21 | Wake Forest University Health Sciences | Fabrication of gelatin hydrogel sheet for the transplantation of corneal endothelium |
JP6426110B2 (ja) | 2013-02-01 | 2018-11-21 | ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ, アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー, デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ | 人口多能性幹細胞(ipsc)由来の網膜色素上皮(rpe)細胞を生成するための方法 |
US20160022873A1 (en) | 2013-03-14 | 2016-01-28 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital, Inc. | Tissue engineered intestine |
US20140341965A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-11-20 | Georgetown University | Compositions and Methods Comprising Biodegradable Scaffolds and Retinal Pigment Epithelial Cells |
AU2015287692A1 (en) | 2014-07-11 | 2017-02-02 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Surgical tool and method for ocular tissue transplantation |
CN107106734A (zh) | 2014-09-24 | 2017-08-29 | 加利福尼亚大学董事会 | 三维生物打印的人工角膜 |
WO2016073782A1 (en) | 2014-11-05 | 2016-05-12 | Organovo, Inc. | Engineered three-dimensional skin tissues, arrays thereof, and methods of making the same |
ES2970537T3 (es) | 2015-09-08 | 2024-05-29 | Us Health | Método para la diferenciación reproducible de células epiteliales del pigmento retiniano de calidad clínica |
CA3048523A1 (en) | 2017-02-01 | 2018-08-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Devices for tissue cryopreservation and recovery |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110004304A1 (en) * | 2009-03-20 | 2011-01-06 | Tao Sarah L | Culturing retinal cells and tissues |
WO2014030749A1 (ja) * | 2012-08-24 | 2014-02-27 | 独立行政法人理化学研究所 | 網膜色素上皮細胞シートの製造方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102224115B1 (ko) * | 2020-01-10 | 2021-03-09 | 경북대학교병원 | 3차원 바이오프린팅 기술을 이용한 망막 세포 배양용 구조체 및 이의 활용 |
WO2022039209A1 (ja) * | 2020-08-21 | 2022-02-24 | 凸版印刷株式会社 | 立体的細胞組織の製造方法及び立体的細胞組織 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3043194A1 (en) | 2018-05-17 |
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JP7222900B2 (ja) | 2023-02-15 |
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