JP2020503873A - 多重特異的抗体を調製するためのポリペプチドリンカー - Google Patents
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Abstract
Description
治療用融合タンパク質は、薬品開発において重要な手法となっている。異なる機能的タンパク質モジュールから多重ドメインタンパク質を構築するために、ペプチドリンカーが頻繁に使用されている。結果として得られた多重ドメインタンパク質を、個々のモジュールに同族である標的に結合する(又は、個々のモジュールの生物学的機能を同時に発揮する)ように設計することで、孤立した単一ドメインに伴う生物学的効果を増強するか、又は、孤立した単一ドメインによって到達不可能な新規な生物学的活性をもたらすかのいずれかである。ペプチドリンカーを使用する数多くの分子の例が存在する:抗体の一本鎖可変ドメイン(scFv)、免疫サイトカイン(サイトカイン−抗体の融合物)、二重特異的抗体(BsAb)など。特定の融合タンパク質に対するリンカー(群)の選択は、1)様々なドメインが特定の3次構造(例えばscFvに基づいた抗体)へと折り畳まれるためにリンカー(群)が可動性を必要とするかどうか、2)タンパク質ドメイン間に必要な隔離をもたらすためにリンカー(群)が強剛性を必要とするかどうか、又は3)インビボにおいて所望の活性を生じるためのドメインの隔離を可能とするためにリンカー(群)は切断可能でなければならないかどうか、などの考慮によって指示される(Xiaoying Chen, et al, Adv Drug Deliv Rev. 2013. 65(10): 1357-1369)。不適切なリンカーは、融合タンパク質の所望の活性を減少又は消失させる可能性があるからリンカーの選択は重大であり得る。(Yumi Maeda, et al, Anal. Biochem. 1997. 249(2): 147-152)。
その後、本発明者らは、これは、リンカーを再設計することによって、特にリンカーからグルコシル化部位を排除することによって改善され得ると気付いた。
−各々が本明細書に定義されているような多重特異的抗原結合断片からなる、2つの同一な抗原結合アーム;
−免疫グロブリンの二量体化したCH2ドメイン及びCH3ドメイン;
−抗原結合アームのCH1ドメインのC末端をCH2ドメインのN末端に連結している、IgA、IgG、又はIgDのヒンジ領域
を含む、免疫グロブリン様構造を有する多重特異的抗体が提供される。
ここでの各々の重鎖は、
a.ヒンジ−CH2−CH3ドメインを含む、免疫グロブリンのFc領域
を含み、
b.該Fc領域は、該ヒンジドメインによって抗体1(Ab1)のFabの重鎖CH1−VHに連結され、
c.これは次いで、ポリペプチドリンカー配列によって抗体2(Ab2)のFabの重鎖CH1−VHに連結され、ここでのポリペプチドリンカー配列は、Ab1の該Fabの重鎖VHドメインのN末端を、Ab2の該CH1ドメインのC末端に連結し、
ここでの4本の軽鎖は、その同族重鎖ドメインと会合したAb1の軽鎖とAb2の軽鎖を含み;
該ポリペプチドリンカー配列は、アミノ酸配列EPKX1CDKX2HX3X4PPX5PAPELLGGPX6X7PPX8PX9PX10GG(配列番号1)を含むか又はそれからなることを特徴とし、
ここで、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10は、同一又は異なり、任意のアミノ酸であり;ただし、該リンカー配列は、EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号5)又はEPKSCDKTHTSPPSPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号6)の配列を含むこともそれからなることもない。
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPGGPPGPGPGGG(配列番号2);
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPAAPPAPAPAGG(配列番号3);及び
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPAAPPGPAPGGG(配列番号4)
からなる群より選択される配列を含むか又はそれからなる。
定義
天然に存在する抗体分子の基本構造は、非共有結合による相互作用によって及び鎖間ジスルフィド結合によって互いに保持された、2本の同一な重鎖と2本の同一な軽鎖からなる、Y字形の四量体四次構造である。
本明細書において、多重特異的抗原結合断片(群)、及び該断片を含む多重特異的抗体構築物が提供され、各々の多重特異的抗原結合断片は、本発明のリンカーによって隔てられた直列に整列したFab断片から本質的になる。
−Fab断片を隔離するポリペプチドリンカー(群)によってもたらされる鎖間ジスルフィド結合を通した抗原結合アームのホモ二量体化によって;及び/又は
−鎖間ジスルフィド結合の形成を可能とする、システイン残基を含有しているポリペプチド伸長物を、各抗原結合アームのC末端に付加すること、及び該ポリペプチド伸長物のホモ二量体化によりヒンジ様構造をもたらすことを通して;非限定的な例として、該ポリペプチド伸長物は、例えば、IgG1、IgG2、又はIgG3のヒンジ配列であり得る;
−2つの抗原結合アームの重鎖のC末端を接続して、単一ポリペプチド鎖を形成し、該抗原結合アームを互いに十分な距離で維持している、半剛性リンカーを通して、
互いに連結させることができる。
−上記に定義されているような2つの同一な多重特異的抗原結合アーム;
−二量体化した免疫グロブリンのCH2ドメイン及びCH3ドメイン;
−抗原結合アームのCH1ドメインのC末端をCH2ドメインのN末端に連結している、IgA、IgG、又はIgDのいずれかのヒンジ領域、あるいは、代替的には、CH3ドメインの後にあるCH4ドメインがIgM又はIgEに由来する場合、抗原結合アームのCH1ドメインのC末端はこの場合、CH2ドメインのN末端に直接連結されていてもよい。
−Fcの構築された連続重鎖(ヒンジ−CH2−CH3)、
−続いて、抗体1のFabの重鎖(CH1−VH)、及び連続した抗体2のFabの重鎖(CH1−VH)(後者は、本発明のポリペプチドリンカー配列によって接続されている)
を含み、
−タンパク質の発現中に、結果として得られた重鎖は会合して二量体となり、一方、同時発現された抗体1及び抗体2の軽鎖(VL−CL)はその同族重鎖と会合して、最終的な直列型F(ab)’2−Fc分子を形成し、
抗体1(Ab1)及び抗体2(Ab2)は異なる。
a)ヒトIgG1/κ由来のCH1ドメイン及びC−κドメインと、Ab1のVHドメイン及びVLドメインとを有する、Fab断片、
b)ヒトIgG1/κ由来のCH1ドメイン及びC−κドメインと、Ab2のVHドメイン及びVLドメインとを有する、Fab断片、
c)ヒトκ定常ドメインに由来する突然変異した軽鎖CL定常ドメイン、
d)突然変異した重鎖CH1定常ドメイン
からなる、異なるCH1ドメインとCLドメインとを有する2つのFab断片
を含む、二重特異的抗体が記載され、該Fab断片は、以下の順で直列に並んでいる:
−ポリペプチドリンカーを通して、Ab2のFab断片のVHドメインのN末端に連結されている、Ab1のFab断片のCH1ドメインのC末端、
−Ab2の断片のCH1ドメインのC末端をCH2ドメインのN末端に連結している、ヒトIgG1のヒンジ領域、
−ヒトIgG1の二量体化したCH2ドメイン及びCH3ドメイン。
本発明によるポリペプチドリンカー配列は、アミノ酸配列EPKX1CDKX2HX3X4PPX5PAPELLGGPX6X7PPX8PX9PX10GG(配列番号1)を含むか又はそれからなり、ここで、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10は、同一又は異なり、任意のアミノ酸であり;ただし、該リンカー配列は、EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号5)又はEPKSCDKTHTSPPSPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号6)の配列を含むこともそれからなることもない。
X1、X2、及びX3は、同一又は異なり、トレオニン(T)、セリン(S)であり;
X4は、セリン(S)又はシステイン(C)であり;
X5は、アラニン(A)又はシステイン(C)であり;
X6、X7、X8、X9、X10は、同一又は異なり、Ala(A)及びGly(G)からなる群より選択される。
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPGGPPGPGPGGG(配列番号2);
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPAAPPAPAPAGG(配列番号3);及び
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPAAPPGPAPGGG(配列番号4)
からなる群より選択される配列を含むか又はそれからなる。
X1、X2、及びX3は、同一又は異なり、Ala(A)又はGly(G)であり:
X4は、セリン(S)又はシステイン(C)であり;
X5は、アラニン(A)又はシステイン(C)であり;
X6、X7、X8、X9、X10は、同一又は異なり、Ala(A)及びGly(G)からなる群より選択される。
本発明の抗体の重鎖及び軽鎖をコードしている核酸を発現ベクターに挿入する。軽鎖及び重鎖を同じ又は異なる発現ベクターにクローニングすることができる。免疫グロブリン鎖をコードしているDNAセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクター(群)内の制御配列に作動可能に連結されている。このような制御配列は、シグナル配列、プロモーター、エンハンサー、及び転写終結配列を含む。発現ベクターは典型的には、エピソームとして、又は宿主染色体DNAの組込み部分としてのいずれかとして宿主生物において複製可能である。一般的には、発現ベクターは、所望のDNA配列を用いて形質転換された細胞の検出を可能とするための、選択マーカー、例えばテトラサイクリン又はネオマイシンを含有しているだろう。
本発明のさらなる態様は、本発明に記載の抗体を含む医薬組成物である。本発明の別の態様は、医薬組成物の製造のための本発明に記載の抗体の使用である。本発明のさらなる態様は、本発明に記載の抗体を含む医薬組成物の製造法である。
設計
本発明の第一の二重特異的抗体は、以下の構造を有するBiXAb2aと称される抗体である:
i)以下を含む連続的な重鎖:
・配列番号7に対応するトラスツズマブの重鎖可変領域(VH)、
・配列番号8に対応するヒトIgG1に由来する野生型CH1定常ドメイン(Kabatの192位の残基はトレオニンである)
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPGGPPGPGPGGG(配列番号2)からなる2つのFab重鎖を接続しているポリペプチドリンカー;
・配列番号9に対応するセツキシマブの重鎖可変領域(VH)、
・配列番号10に対応するヒトIgG1に由来する突然変異したCH1定常ドメイン(Kabatの192位の残基は、トレオニンからグルタミン酸へと突然変異している)、
・配列番号11に対応するヒトIgG1に由来する野生型ヒンジ領域、
・配列番号12に対応するヒトIgG1の野生型CH2ドメイン、
・配列番号13に対応するヒトIgG1の野生型CH3ドメイン。
よって、本発明の二重特異的抗体は、配列番号14の連続的な重鎖(701残基)を有する。
ii)配列番号15からなる野生型トラスツズマブ軽鎖、
iii)配列番号16に対応するヒトκに由来する突然変異した定常ドメイン(KabatのSer114位及びAsn137位の残基は、それぞれAla及びLysに突然変異している)を有するセツキシマブ軽鎖。
i)以下を含む連続的な重鎖
・配列番号23(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS)に対応するアテゾリズマブの重鎖可変領域(VH)、
・配列番号10に対応するヒトIgG1に由来する突然変異したCH1定常ドメイン(Kabatの192位の残基は、トレオニンからグルタミン酸へと突然変異している)、
配列番号3からなる、2つのFab重鎖を接続しているポリペプチドリンカー;
配列番号17(EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFNSFAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKDKILWFGEPVFDYWGQGTLVTVSS)に対応するダラツムマブの重鎖可変領域(VH)、
・配列番号8に対応するヒトIgG1に由来する野生型CH1定常ドメイン(Kabatの192位の残基は、トレオニンである)、
・配列番号11に対応するヒトIgG1に由来する野生型ヒンジ領域、
・配列番号12に対応するヒトIgG1の野生型CH2ドメイン、
・配列番号13に対応するヒトIgG1の野生型CH3ドメイン、
[よって、本発明の重鎖は、配列番号18
の連続的な重鎖を有する]
ii)配列番号19
に対応するヒトκに由来する突然変異した定常ドメイン(KabatのSer114位及びAsn137位の残基は、それぞれAla及びLysへと突然変異している)を有するアテゾリズマブ軽鎖、
iii)配列番号20
からなる野生型ダラツムマブ軽鎖。
の連続的な重鎖を有する。
抗HER2抗体(トラスツズマブ、クローンhumAb4D5−8)及び抗EGFR抗体(セツキシマブ)のアミノ酸配列を使用して、GeneScriptプログラムを使用した哺乳動物における発現のためのコドン最適化後に、DNA配列を設計した。重鎖については、Fab1のシグナルペプチド、可変領域、及びCH1定常ドメインに続いて偽ヒンジリンカー、並びにFab2の可変領域及びCH1定常ドメインをコードしている制限酵素による消化のためのフランキング配列を有するDNAは、GeneScriptによって合成された。軽鎖については、シグナルペプチド並びに可変領域及び定常κ領域をコードしているDNAは、GeneScriptによって合成された。
本発明の二重特異的抗体は、2:3:3=HC:LC1:LC2のモル比(1本の連続的な重鎖(HC)及び2本の軽鎖(LC))で別々のベクター上にコードされた3つの遺伝子を、無血清懸濁培地(ライフテクノロジーズ社製のCHO SFM−II培地(商標))に適応させたCHO−S細胞中で同時トランスフェクションすることよる、一過性遺伝子発現を用いて作製された。典型的には、50mLの培地の規模の発現試験では、合計で50μgのプラスミドDNA(25μgの重鎖1、12.5μgのトラツズマブ軽鎖、及び12.5μgのセツキシマブ軽鎖)を1.5mLのエッペンドルフチューブ中で混合し、25μLの3mg/mLのPEIトランスフェクション試薬(ポリプラス社)pH7.0を含有している1mLのCHO SFM培地を加え、室温で20分間インキュベートした。DNA−PEIの混合物を、125mLの振盪フラスコ中の、49mLのライフテクノロジーズ社のインビトロジェンフリースタイル(商標)CHO−S細胞に1〜2×106/mLでローディングした。細胞をさらに6日間振盪した。細胞を3,000rpmで15分間遠心分離にかけることによって上清を収集した。上清中のBiXAbの発現力価は、フォルテバイオ社のプロテインAバイオセンサー(オクテット(登録商標)システム)を使用して決定された。次いで、二重特異的モノクローナル抗体(BiXAb)をプロテインAアフィニティ培地でMabSelect SuRe(GEヘルスケアライフサイエンシーズ社)を使用して精製した。抗体は、プロテインAから0.1MグリシンpH3.5を使用して溶出した。ダルベッコPBS(Lonza BE17−512Q)中の精製された抗体を滅菌ろ過し(テクノプラスチックプロダクツAG社製の0.2μMの滅菌フィルター)、最終濃度を、エッペンドルフバイオスペクトロメーター(登録商標)を使用して280nmでの吸光度の解読によって決定した。
電気泳動を、還元条件下及び非還元条件下で、バイオラッド社のゲルのステインフリー4〜15%ゲル及び対応する泳動緩衝液を使用して実施した。精製されたBiXAb又はFab−Fab抗体を2×SDS試料緩衝液と合わせ、95℃で5分間加熱することによって試料を調製した。還元試料の調製は、加熱前のNuPAGE還元剤の添加を含んでいた。見かけの分子量は、ラダープレシジョンPlusプロテイン未着色スタンダード(バイオラッド社)を使用して決定された。
タンパク質の凝集は、工学操作されたタンパク質分子において頻繁に観察されている。本発明者らは、本発明者らの抗体の高分子量種の含量をアッセイするために分析用サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)を実施した。本発明者らは、SEC−s3000(300×7.8mm)カラム(バイオセップ社)及びAktapurifier 10システム(GEヘルスケア社)を使用し;アッセイは、pH7.4のPBS緩衝液を使用して1mL/分の流速で実施された。
示差走査熱量測定(DSC)を使用して、BiXAb2bの熱的安定性を試験した。Microcal(商標)VP-Capillary DSCシステム(Malvern Instruments)を使用して、示差走査熱量測定実験を実施した。
LC−MS/MSデータを、Q-Exactive質量分析計(サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ブレーメン、ドイツ)及びProswift RP-4H逆相カラム(250mm×1mm;サーモフィッシャー社)に連結させたDionex Ultimate 3000システムを使用して取得した。カラムオーブン温度を65℃に設定した。10μlを、LCによる分離のために注入した。0.1%ギ酸を含むLC−MS等級の水(移動相A)及び0.1%ギ酸を含むアセトニトリル(移動相B)からなる移動相の勾配を、0.2mL/分の流速で送達した(全操作時間は20分間)。溶出された抗体種は、エレクトロスプレーイオン化(ESI)によってQ-Exactive機器に導入され、これはフルスキャン15,000分解能を使用したポジティブイオンモードで作動した。Xcalibur 2.2ソフトウェア(サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ブレーメン、ドイツ)を、機器の制御及びデータファイルの処理のために使用した。
Claims (27)
- 異なるCH1ドメイン及びCLドメインを有する少なくとも2つのFab断片を含む多重特異的抗原結合断片であって、各Fab断片は、関心対象の異なるエピトープを認識し、該Fab断片は任意の順序で直列に整列し、第一のFab断片のCH1ドメインのC末端は、ポリペプチドリンカーを通して後続のFab断片のVHドメインのN末端に連結され、該ポリペプチドリンカー配列は、アミノ酸配列EPKX1CDKX2HX3X4PPX5PAPELLGGPX6X7PPX8PX9PX10GG(配列番号1)を含むか又はそれからなることを特徴とし、ここで、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10は、同一又は異なり、任意のアミノ酸であり;ただし、該リンカー配列は、EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号5)又はEPKSCDKTHTSPPSPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号6)の配列を含むこともそれからなることもない、該多重特異的抗原結合断片。
- 各々が請求項1の多重特異的抗原結合断片からなる、2つの同一な抗原結合アームを有する多重特異的抗体。
- −各々が請求項1に定義されているような多重特異的抗原結合断片からなる、2つの同一な抗原結合アーム;
−免疫グロブリンの二量体化したCH2ドメイン及びCH3ドメイン;
−抗原結合アームのCH1ドメインのC末端をCH2ドメインのN末端に連結している、IgA、IgG、又はIgDのヒンジ領域
を含む、免疫グロブリン様構造を有する、請求項2の多重特異的抗体。 - 2本の重鎖と4本の軽鎖とを含む、多重特異的抗体、好ましくは二重特異的抗体であって、ここでの各々の重鎖は、
a.ヒンジ−CH2−CH3ドメインを含む、免疫グロブリンのFc領域
を含み、
b.該Fc領域は、該ヒンジドメインによって抗体1(Ab1)のFabの重鎖CH1−VHに連結され、
c.これは次いで、ポリペプチドリンカー配列によって抗体2(Ab2)のFabの重鎖CH1−VHに連結され、ここでのポリペプチドリンカー配列は、Ab1の該Fabの重鎖VHドメインのN末端を、Ab2の該CH1ドメインのC末端に連結し、
ここでの4本の軽鎖は、その同族重鎖ドメインと会合したAb1の軽鎖とAb2の軽鎖を含み;
該ポリペプチドリンカー配列は、アミノ酸配列EPKX1CDKX2HX3X4PPX5PAPELLGGPX6X7PPX8PX9PX10GG(配列番号1)を含むか又はそれからなり、
ここで、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10は、同一又は異なり、任意のアミノ酸であり;ただし、該リンカー配列は、EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号5)又はEPKSCDKTHTSPPSPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号6)の配列を含むこともそれからなることもない、該多重特異的抗体。 - X1、X2、及びX3が、同一又は異なり、トレオニン(T)又はセリン(S)である、請求項1〜4のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- X1、X2、及びX3が、同一又は異なり、トレオニン(T)又はセリン(S)以外の任意のアミノ酸であり、好ましくはX1、X2、及びX3が、同一又は異なり、Ala(A)、Gly(G)、Val(V)、Asn(N)、Asp(D)、及びIle(I)からなる群より選択される、請求項1〜4のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- X4及びX5が、同一又は異なり、セリン(S)、システイン(C)、アラニン(A)、及びグリシン(G)からなる群より選択される任意のアミノ酸である、請求項1〜6のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- X6、X7、X8、X9、X10が、同一又は異なり、トレオニン(T)又はセリン(S)以外の任意のアミノ酸である、請求項1〜7のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- X4が、セリン(S)又はシステイン(C)である、請求項1〜8のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- X5が、アラニン(A)又はシステイン(C)である、請求項1〜9のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- X6、X7、X8、X9、X10が、同一又は異なり、Ala(A)、Gly(G)、Val(V)、Asn(N)、Asp(D)、及びIle(I)からなる群より選択される、請求項1〜9のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- X6、X7、X8、X9、X10が、同一又は異なり、Ala(A)及びGly(G)からなる群より選択される、請求項11の多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- X6及びX7が同一であり、好ましくはAla(A)及びGly(G)からなる群より選択される、請求項12の多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- ポリペプチドリンカー配列が、
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPAAPPAPAPAGG(配列番号3);
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPGGPPGPGPGGG(配列番号2);及び
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPAAPPGPAPGGG(配列番号4)からなる群より選択される配列を含むか又はそれからなる、請求項12の多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。 - EGFR及びHER2/neuの両方を認識する、請求項1〜14のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- Ab1及びAb2が異なり、一方ではセツキシマブ又はその突然変異誘導体、他方ではトラスツズマブ又はその突然変異誘導体からなる群より独立して選択される、請求項4の多重特異的抗体。
- CD38及びPD−L1の両方を認識する、請求項1〜14のいずれかの多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- 請求項1〜17のいずれかに定義されているような抗原結合断片の重鎖又は多重特異的抗体の重鎖を含む、好ましくはそれからなる、ポリペプチド。
- 請求項18のポリペプチドをコードしている配列を含むポリヌクレオチド。
- 請求項19のポリヌクレオチドを含む発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞。
- 2本の異なる軽鎖(第一の軽鎖は、該重鎖の第一のVH/CH1領域と特異的に対を形成している;第二の軽鎖は、該重鎖の第二のVH/CH1領域と特異的に対を形成している)をコードしている少なくとも2つのポリヌクレオチドでさらに形質転換されている、請求項20の宿主細胞。
- 第一の軽鎖及び第二の軽鎖とは異なり、該重鎖の第三のVH/CH1領域と特異的に対を形成している、第三の軽鎖をコードしている第三のポリヌクレオチドでさらに形質転換されている、請求項21の宿主細胞。
- 請求項1〜17のいずれかに定義されているような抗原結合断片又は多重特異的抗体を調製するための方法であって、請求項20〜22のいずれかの宿主細胞を培養し、該培養液から該抗原結合断片又は抗体を回収する工程を含む、該方法。
- 医薬品として使用するための、請求項1〜17のいずれかに定義されているような多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- がんの処置に使用するための、請求項15〜17のいずれかに定義されているような多重特異的抗原結合断片又は多重特異的抗体。
- アミノ酸配列EPKX1CDKX2HX3X4PPX5PAPELLGGPX6X7PPX8PX9PX10GG(配列番号1)を含むか又はからなるポリペプチドであって、ここで、X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10は、同一又は異なり、請求項1〜10のいずれかに定義されているような任意のアミノ酸であり;ただし、EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号5)又はEPKSCDKTHTSPPSPAPELLGGPSTPPTPSPSGG(配列番号6)の配列を含むこともそれからなることもない、該ポリペプチド。
- 配列が、EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPAAPPAPAPAGG(配列番号3);
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPGGPPGPGPGGG(配列番号2);及び
EPKSCDKTHTSPPAPAPELLGGPAAPPGPAPGGG(配列番号4)からなる群より選択される配列を含むか又はそれからなる、請求項26のポリペプチド。
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