JP2020195349A - 脳幹オルガノイドの作製方法 - Google Patents
脳幹オルガノイドの作製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020195349A JP2020195349A JP2019105186A JP2019105186A JP2020195349A JP 2020195349 A JP2020195349 A JP 2020195349A JP 2019105186 A JP2019105186 A JP 2019105186A JP 2019105186 A JP2019105186 A JP 2019105186A JP 2020195349 A JP2020195349 A JP 2020195349A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- producing
- stem
- organoid
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002220 organoid Anatomy 0.000 title claims abstract description 108
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 title claims abstract description 88
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 13
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical class C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 claims abstract description 56
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 37
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 35
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims abstract description 18
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 125
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 52
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 34
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 claims description 26
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 claims description 26
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 20
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 20
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 20
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 20
- 229940082569 selenite Drugs 0.000 claims description 20
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L selenite(2-) Chemical compound [O-][Se]([O-])=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 20
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 20
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 claims description 18
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 10
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 claims description 9
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 claims description 9
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 claims description 9
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 claims description 9
- 102100029268 Neurotrophin-3 Human genes 0.000 claims description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 102100037680 Fibroblast growth factor 8 Human genes 0.000 claims description 5
- 101001027382 Homo sapiens Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 claims description 5
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 5
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 claims description 4
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 claims description 4
- CDOVNWNANFFLFJ-UHFFFAOYSA-N 4-[6-[4-(1-piperazinyl)phenyl]-3-pyrazolo[1,5-a]pyrimidinyl]quinoline Chemical compound C1CNCCN1C1=CC=C(C2=CN3N=CC(=C3N=C2)C=2C3=CC=CC=C3N=CC=2)C=C1 CDOVNWNANFFLFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ATXHVCQZZJYMCF-XUDSTZEESA-N Allylestrenol Chemical compound C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)CC=C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 ATXHVCQZZJYMCF-XUDSTZEESA-N 0.000 claims description 3
- 229960002692 allylestrenol Drugs 0.000 claims description 3
- HIJMSZGHKQPPJS-UHFFFAOYSA-N 3-(6-methylpyridin-2-yl)-n-phenyl-4-quinolin-4-ylpyrazole-1-carbothioamide Chemical compound CC1=CC=CC(C=2C(=CN(N=2)C(=S)NC=2C=CC=CC=2)C=2C3=CC=CC=C3N=CC=2)=N1 HIJMSZGHKQPPJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LVHOURKCKUYIGK-RGUJTQARSA-N Dimethisterone Chemical compound C1([C@@H](C)C2)=CC(=O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@](C#CC)(O)[C@@]2(C)CC1 LVHOURKCKUYIGK-RGUJTQARSA-N 0.000 claims description 2
- IMONTRJLAWHYGT-ZCPXKWAGSA-N Norethindrone Acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@@H]2[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@](C#C)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 IMONTRJLAWHYGT-ZCPXKWAGSA-N 0.000 claims description 2
- APTGJECXMIKIET-WOSSHHRXSA-N Norethindrone enanthate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@@H]2[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@](C#C)(OC(=O)CCCCCC)[C@@]1(C)CC2 APTGJECXMIKIET-WOSSHHRXSA-N 0.000 claims description 2
- 229950006690 dimethisterone Drugs 0.000 claims description 2
- -1 dolsomorphin Chemical compound 0.000 claims description 2
- 229960004913 dydrogesterone Drugs 0.000 claims description 2
- JGMOKGBVKVMRFX-HQZYFCCVSA-N dydrogesterone Chemical compound C1=CC2=CC(=O)CC[C@@]2(C)[C@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 JGMOKGBVKVMRFX-HQZYFCCVSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000445 ethisterone Drugs 0.000 claims description 2
- CHNXZKVNWQUJIB-CEGNMAFCSA-N ethisterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 CHNXZKVNWQUJIB-CEGNMAFCSA-N 0.000 claims description 2
- ONKUMRGIYFNPJW-KIEAKMPYSA-N ethynodiol diacetate Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@](C#C)(OC(C)=O)CC[C@H]2[C@@H]2CCC3=C[C@@H](OC(=O)C)CC[C@@H]3[C@H]21 ONKUMRGIYFNPJW-KIEAKMPYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000218 etynodiol Drugs 0.000 claims description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M hexanoate Chemical compound CCCCCC([O-])=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229960002985 medroxyprogesterone acetate Drugs 0.000 claims description 2
- PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N medroxyprogesterone acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@](OC(C)=O)(C(C)=O)CC[C@H]21 PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N 0.000 claims description 2
- RQZAXGRLVPAYTJ-GQFGMJRRSA-N megestrol acetate Chemical compound C1=C(C)C2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RQZAXGRLVPAYTJ-GQFGMJRRSA-N 0.000 claims description 2
- 229940053934 norethindrone Drugs 0.000 claims description 2
- 229960001652 norethindrone acetate Drugs 0.000 claims description 2
- 229960002082 norethindrone enanthate Drugs 0.000 claims description 2
- VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N norethisterone Chemical compound O=C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims 1
- 229960004296 megestrol acetate Drugs 0.000 claims 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 abstract 4
- 108091007369 NEUR proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 34
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 210000001767 medulla oblongata Anatomy 0.000 description 12
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 11
- 210000005064 dopaminergic neuron Anatomy 0.000 description 11
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 10
- 210000002975 pon Anatomy 0.000 description 10
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 8
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 8
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 8
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 8
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 7
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 7
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 7
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 6
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 6
- 108010058699 Choline O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 5
- 102100023460 Choline O-acetyltransferase Human genes 0.000 description 5
- 102100033156 Dopamine beta-hydroxylase Human genes 0.000 description 5
- FHYUGAJXYORMHI-UHFFFAOYSA-N SB 431542 Chemical compound C1=CC(C(=O)N)=CC=C1C1=NC(C=2C=C3OCOC3=CC=2)=C(C=2N=CC=CC=2)N1 FHYUGAJXYORMHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002164 acetylcholinergic effect Effects 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 4
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 4
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000687905 Homo sapiens Transcription factor SOX-2 Proteins 0.000 description 3
- 102100024270 Transcription factor SOX-2 Human genes 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 3
- XHBVYDAKJHETMP-UHFFFAOYSA-N dorsomorphin Chemical compound C=1C=C(C2=CN3N=CC(=C3N=C2)C=2C=CN=CC=2)C=CC=1OCCN1CCCCC1 XHBVYDAKJHETMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 3
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035388 Beta-enolase Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010015720 Dopamine beta-Hydroxylase Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101710182389 Fibroblast growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100023600 Fibroblast growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100029284 Hepatocyte nuclear factor 3-beta Human genes 0.000 description 2
- 102100030634 Homeobox protein OTX2 Human genes 0.000 description 2
- 101000877537 Homo sapiens Beta-enolase Proteins 0.000 description 2
- 101001062347 Homo sapiens Hepatocyte nuclear factor 3-beta Proteins 0.000 description 2
- 101000584400 Homo sapiens Homeobox protein OTX2 Proteins 0.000 description 2
- 101001038339 Homo sapiens LIM homeobox transcription factor 1-alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000620359 Homo sapiens Melanocyte protein PMEL Proteins 0.000 description 2
- 101001109698 Homo sapiens Nuclear receptor subfamily 4 group A member 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100040290 LIM homeobox transcription factor 1-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102100022430 Melanocyte protein PMEL Human genes 0.000 description 2
- 102100022676 Nuclear receptor subfamily 4 group A member 2 Human genes 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- NGOGFTYYXHNFQH-UHFFFAOYSA-N fasudil Chemical compound C=1C=CC2=CN=CC=C2C=1S(=O)(=O)N1CCCNCC1 NGOGFTYYXHNFQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002435 fasudil Drugs 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000627 locus coeruleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000000513 principal component analysis Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 210000003523 substantia nigra Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 101100257372 Caenorhabditis elegans sox-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 101150059079 EBNA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150099612 Esrrb gene Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100028072 Fibroblast growth factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000380 Fibroblast growth factor 5 Proteins 0.000 description 1
- 102100028073 Fibroblast growth factor 5 Human genes 0.000 description 1
- 101150014889 Gad1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100035902 Glutamate decarboxylase 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000866286 Homo sapiens Excitatory amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001060274 Homo sapiens Fibroblast growth factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000898034 Homo sapiens Hepatocyte growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000979001 Homo sapiens Methionine aminopeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000969087 Homo sapiens Microtubule-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000868152 Homo sapiens Son of sevenless homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- 101150088952 IGF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150002416 Igf2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 101150072501 Klf2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032352 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100023174 Methionine aminopeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 description 1
- 101100163882 Mus musculus Ascl1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100310657 Mus musculus Sox1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100310648 Mus musculus Sox17 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100257376 Mus musculus Sox3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 108700026495 N-Myc Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102100030124 N-myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 101150026563 NR4A2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150072008 NR5A2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000029726 Neurodevelopmental disease Diseases 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 102000003683 Neurotrophin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000099 Neurotrophin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101150092239 OTX2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010062519 Poor quality sleep Diseases 0.000 description 1
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000012977 SLC1A3 Human genes 0.000 description 1
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- 101150001847 Sox15 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150111019 Tbx3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 102000011117 Transforming Growth Factor beta2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000304 Transforming growth factor beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000097 Transforming growth factor beta-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000056172 Transforming growth factor beta-3 Human genes 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076089 accutase Proteins 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940052760 dopamine agonists Drugs 0.000 description 1
- 239000003136 dopamine receptor stimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 1
- 230000006397 emotional response Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001222 gaba-ergic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000285 glutaminergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002102 hyperpolarization Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000002197 limbic effect Effects 0.000 description 1
- 101150111214 lin-28 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960001786 megestrol Drugs 0.000 description 1
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000022256 midbrain development Effects 0.000 description 1
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229940028444 muse Drugs 0.000 description 1
- 235000003170 nutritional factors Nutrition 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000005037 parasympathetic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 102000000568 rho-Associated Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010041788 rho-Associated Kinases Proteins 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
(1-1)第1工程
ヒトES細胞を50%Accutase(PBSにより希釈)によって剥離し、400万個の細胞を5mlの mTeSR(登録商標)1(modified Tenneille Serum Replacer 1:エムテイザー1)培地にて培養した。mTeSR培地には、中脳ドパミン作動性神経細胞前駆細胞への分化を促すため10μM SB431542及び1μM Dorsomorphinを添加した。また、mTeSR培地には細胞の生存率をあげるためROCK inhibitorとして10μM Y-27632を加えた。培養は、細胞の接着を妨げ、胚様体形成を促すため、オービタルシェーカー上で行った。具体的には分化培地を含む培養皿を37℃/5%インキュベータ内で80rpmで回転するオービタルシェーカー上に置き72時間培養した(図1)。なお本発明にかかる脳幹オルガノイドの作製工程の全てにおいて、実験ごとの再現性を担保するため、複数タンパクの混合物であるMatrigelは使用されていない。
第1工程の後、培地をmTESRTM1から神経幹細胞の培養に最適化された5mlのNeurobasal培地に変更した。Neurobasal培地には、10μM SB431542及び1μM Dorsomorphinが添加された。またNeurobasal培地には、神経前駆細胞の増殖促進のために2μMプロゲステロン及び10mMプトレシンが添加された。更にNeurobasal培地には、神経前駆細胞のアポトーシス抑制のために3μMセレナイト、86μMインスリン及び1.0mMトランスフェリンが添加された。分化培地を含む培養皿が37℃/5%インキュベータ内で80rpmで回転するオービタルシェーカー上に置かれ、144時間培養した(図1)。
第3工程でも、培地は5mlのNeurobasal培地であった。Neurobasal培地には、神経前駆細胞の増殖促進のため20ng/mL bFGFが添加された。またNeurobasal培地には、2μMプロゲステロン及び10mMプトレシンが添加された。更にNeurobasal培地には、3μMセレナイト、86μMインスリン及び1.0mMトランスフェリンが添加された。分化培地を含む培養皿が37℃/5%インキュベータ内で80rpmで回転するオービタルシェーカー上に置かれ、168時間培養した(図1)。なおドパミン作動性神経細胞以外の神経細胞も分化させるため、神経幹細胞をドパミン作動性神経細胞への分化を強力に誘導するFGF8は使用しなかった。本発明にかかる脳幹オルガノイドの作製工程の全てにおいてFGF8は使用されていない。
第4工程でも、培地は5mlのNeurobasal培地であった。Neurobasal培地には、神経前駆細胞の増殖促進のため20ng/mL bFGF及び20ng/mL EGFが添加された。またNeurobasal培地には、2μMプロゲステロン及び10mMプトレシンが添加された。更にNeurobasal培地には、3μMセレナイト、86μMインスリン及び1.0mMトランスフェリンが添加された。分化培地を含む培養皿が37℃/5%インキュベータ内で80rpmで回転するオービタルシェーカー上に置かれ、144時間培養した(図1)。
第5工程でも、培地は5mlのNeurobasal培地であった。Neurobasal培地には2μMプロゲステロンが添加された。またNeurobasal培地には、神経細胞の分化を促すため10ng/mL NT-3、10ng/mL GDNF及び10ng/mL BDNFが添加された。またNeurobasal培地には、200μM Ascorbic acid、1mM cAMP、3μMセレナイト、86μMインスリン及び1.0mMトランスフェリンが添加された。分化培地を含む培養皿が37℃/5%インキュベータ内で80rpmで回転するオービタルシェーカー上に置かれ、144時間培養した(図1)。これにより脳幹オルガノイドが作製された。
定量的PCRにより、ドパミン作動性神経細胞マーカーであるTyrosine hydroxylase (TH)の発現が確認できた。これにより作製された脳幹オルガノイド中に、ドパミン作動性神経細胞が包含されることが確認された(図2)。また免疫染色でも、THの発現が確認できた(図2)。これにより作製されたオルガノイドに中脳辺縁系路と中脳皮質路があることが示される。
定量的PCRにより、延髄に存在するアセチルコリン作動性神経細胞のマーカーであるCholine acetyltransferase (ChAT)の発現が確認できた。これにより作製された脳幹オルガノイド中に、延髄に存在するアセチルコリン作動性神経細胞が包含されることが確認された(図3)。また免疫染色でも、ChATの発現が確認できた(図3)。これにより作製されたオルガノイドに延髄があることが示される。
定量的PCRにより、橋にあるノルアドレナリン作動性神経細胞のマーカーであるドパミン-β-ヒドロキシラーゼ(DBH)の発現が確認できた。これにより作製された脳幹オルガノイド中に、橋にあるノルアドレナリン作動性神経細胞が包含されることが確認された(図4)。また免疫染色でも、DBHの発現が確認できた(図4)。これにより作製されたオルガノイドに橋があることが示される。
作製した脳幹オルガノイドについて定量的PCR法による遺伝子発現解析を行った。定量的PCRによって、神経幹細胞マーカーであるSOX2、MASH1やSLC1A3の発現が確認された(図5)。また中脳への分化に必須であるOtx2の発現が確認された(図5)。また、ドパミン作動性神経細胞の前駆細胞に発現するFOXAやNurr1の発現も確認された(図5)。さらに、グルタミン作動性神経細胞やGABA作動性神経細胞のマーカーであるvGlut1(図5)、GAD67の発現も確認された(図5)。また、神経細胞の成熟を示すMAP2、オリゴデンドロサイトの成熟を示すMBP、OLIG2の発現も確認され、作製したオルガノイドが未熟なままではなく、成熟、分化していることが示された(図5)。
作製した脳幹オルガノイドについて免疫染色法による発現解析を行った。SOX2, FOXA2及びTHの発現が確認できた(図6A,6B,6C)。また、TUJ1及びS100βを発現する細胞の存在も確認できた(図6B,6D)。
トランスクリプトームは、特定の状況下において細胞中に存在する全ての一時転写産物の総体を指す呼称である。原則として、細胞に存在するゲノム(DNAの全塩基配列)は同一個体内の全ての細胞で同一であり、特定の個体から採取された細胞であれば、環境に変化が生じてもゲノムは一定である。一方、トランスクリプトームは、各遺伝子の発現状況(頻度)が反映された結果であるため、同一個体の細胞であっても各細胞の存在環境に呼応した固有の構成を取るため、例えば異なる組織の細胞間では全く異なる態様を示す。
Claims (20)
- 多能性幹細胞から脳幹オルガノイドを作製する方法であって、
TGFβ阻害剤及びBMP阻害剤を含む第1の培地中で、ヒト多能性肝細胞を培養して神経誘導を行う第1工程と、
TGFβ阻害剤、BMP阻害剤及び黄体ホルモンを含む第2の培地中で、神経誘導を継続する第2工程と、
FGFシグナル伝達経路作用物質及び黄体ホルモンを含む第3の培地中で、神経誘導された多能性幹細胞から神経幹前駆細胞を形成する第3工程と、
FGFシグナル伝達経路作用物質、EGF及び黄体ホルモンを含む第4の培地中で、神経幹前駆細胞の形成を継続する第4工程と、
神経栄養因子及び黄体ホルモンを含む第5の培地中で、神経幹前駆細胞から神経細胞を形成して脳幹オルガノイドを作製する第5工程と、
を有することを特徴とする脳幹オルガノイドの作製方法。 - 前記TGFβ阻害剤はSB43152又はA83-01である、ことを特徴とする請求項1に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記BMP阻害剤は、ドルソモルフィン又はLDN193189である、ことを特徴とする請求項1又は2に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記黄体ホルモンは、プロゲステロン、カプロン酸ピドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ジドロゲステロン、酢酸クロルマジノン、エチステロン、ジメチステロン、ノルエチステロン、酢酸ノルエチステロン、エナント酸ノルエチステロン、酢酸エチノジオール、酢酸メゲストロール、アリルエストレノールまたはそれらの誘導体からなる、ことを特徴とする請求項1乃至3の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記FGFシグナル伝達経路作用物質にはFGF8を含まない、ことを特徴とする請求項1乃至4の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記FGFシグナル伝達経路作用物質はbFGFである、ことを特徴とする請求項1乃至5の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記神経栄養因子はNT-3、BDNF及びGDNFである、ことを特徴とする請求項1乃至6の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記第1の培地、前記第2の培地、前記第3の培地、前記第4の培地及び前記第5の培地には、いずれも、マトリゲルが含まれない、ことを特徴とする請求項1乃至7の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記第1の培地は、フィーダー非依存的基本培地である、ことを特徴とする請求項1乃至8の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記フィーダー非依存的基本培地は、mTeSR1、hESF9又はSTEMPRO(登録商標)である、ことを特徴とする請求項9に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記第2の培地、前記第3の培地、前記第4の培地及び前記第5の培地は、神経幹細胞増殖用培地である、ことを特徴とする請求項1乃至10の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記神経幹細胞増殖用培地は、Neurobasal(登録商標)培地である、ことを特徴とする請求項11に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記第2の培地には、更に、トランスフェリン、インスリン、プトレシン及びセレナイトを包含する、ことを特徴とする請求項1乃至12の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記第3の培地には、更に、トランスフェリン、インスリン、プトレシン及びセレナイトを包含する、ことを特徴とする請求項1乃至13の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記第4の培地には、更に、トランスフェリン、インスリン、プトレシン及びセレナイトを包含する、ことを特徴とする請求項1乃至14の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記第5の培地には、更に、トランスフェリン、インスリン、プトレシン、セレナイト、アスコルビン酸及びcAMPを包含する、ことを特徴とする請求項1乃至15の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記多能性幹細胞は、iPS細胞又はES細胞である、ことを特徴とする請求項1乃至16の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 前記第1工程の培養時間は54〜90時間であり、前記第2工程の培養時間は126〜162時間であり、前記第3工程の培養時間は150〜186時間であり、前記第4工程の培養時間は126〜162時間であり、前記第5工程の培養時間は126〜162時間である、ことを特徴とする請求項1乃至17に記載の何れか1項に記載の脳幹オルガノイドの作製方法。
- 多能性幹細胞から脳幹オルガノイドを作製する脳幹オルガノイドの作製方法であって、
SB43152及びドルソモルフィンを含む第1の培地中で、ヒト多能性肝細胞を培養して神経誘導を行う第1工程と、
SB43152、ドルソモルフィン及びプロゲステロンを含む第2の培地中で、神経誘導を継続する第2工程と、
bFGF及びプロゲステロンを含む第3の培地中で、神経誘導された多能性幹細胞から神経幹前駆細胞を形成する第3工程と、
bFGF、EGF及びプロゲステロンを含む第4の培地中で、神経幹前駆細胞の形成を継続する第4工程と、
NT-3、GDNF、BDNF及びプロゲステロンを含む第5の培地中で、神経幹前駆細胞から神経細胞を形成して脳幹オルガノイドを作製する第5工程と、
を有することを特徴とする脳幹オルガノイドの作製方法。 - 多能性幹細胞から脳幹オルガノイドを作製する脳幹オルガノイドの作製方法であって、
SB43152及びドルソモルフィンを含む第1の培地中で、ヒト多能性肝細胞を54〜90時間培養して神経誘導を行う第1工程と、
SB43152、ドルソモルフィン、プロゲステロン、トランスフェリン、インスリン、プトレシン及びセレナイトを含む第2の培地中で126〜162時間培養して、神経誘導を継続する第2工程と、
bFGF、プロゲステロン、トランスフェリン、インスリン、プトレシン及びセレナイトを含む第3の培地中で150〜186時間培養して、神経誘導された多能性幹細胞から神経幹前駆細胞を形成する第3工程と、
bFGF、EGF、プロゲステロン、トランスフェリン、インスリン、プトレシン及びセレナイトを含む第4の培地中で126〜162時間培養して、神経幹前駆細胞の形成を継続する第4工程と、
NT-3、GDNF、BDNF、プロゲステロン、トランスフェリン、インスリン、プトレシン、セレナイト、アスコルビン酸及びcAMPを含む第5の培地中で126〜162時間培養して、神経幹前駆細胞から神経細胞を形成して脳幹オルガノイドを作製する第5工程と、
を有することを特徴とする脳幹オルガノイドの作製方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019105186A JP7366332B2 (ja) | 2019-06-05 | 2019-06-05 | 脳幹オルガノイドの作製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019105186A JP7366332B2 (ja) | 2019-06-05 | 2019-06-05 | 脳幹オルガノイドの作製方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020195349A true JP2020195349A (ja) | 2020-12-10 |
JP7366332B2 JP7366332B2 (ja) | 2023-10-23 |
Family
ID=73649703
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019105186A Active JP7366332B2 (ja) | 2019-06-05 | 2019-06-05 | 脳幹オルガノイドの作製方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7366332B2 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113025569A (zh) * | 2021-03-26 | 2021-06-25 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 人多能干细胞来源的间充质干细胞及其制备方法和应用 |
CN113046309A (zh) * | 2021-03-26 | 2021-06-29 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 悬浮培养脑类器官的培养基及其应用 |
CN117778313A (zh) * | 2024-02-23 | 2024-03-29 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 脑类器官获得间充质干细胞分化方法和应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110002897A1 (en) * | 2009-06-11 | 2011-01-06 | Burnham Institute For Medical Research | Directed differentiation of stem cells |
WO2017060884A1 (en) * | 2015-10-08 | 2017-04-13 | Université Du Luxembourg | Means and methods for generating midbrain organoids |
WO2017160234A1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-09-21 | Agency For Science, Technology And Research | Generation of midbrain-specific organoids from human pluripotent stem cells |
JP2019502407A (ja) * | 2016-01-14 | 2019-01-31 | オハイオ ステイト イノベイション ファウンデーション | 神経オルガノイド組成物および使用方法 |
-
2019
- 2019-06-05 JP JP2019105186A patent/JP7366332B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110002897A1 (en) * | 2009-06-11 | 2011-01-06 | Burnham Institute For Medical Research | Directed differentiation of stem cells |
WO2017060884A1 (en) * | 2015-10-08 | 2017-04-13 | Université Du Luxembourg | Means and methods for generating midbrain organoids |
JP2019502407A (ja) * | 2016-01-14 | 2019-01-31 | オハイオ ステイト イノベイション ファウンデーション | 神経オルガノイド組成物および使用方法 |
WO2017160234A1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-09-21 | Agency For Science, Technology And Research | Generation of midbrain-specific organoids from human pluripotent stem cells |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
ENGEL ET AL., CELLULAR AND MOLECULAR LIFE SCIENCES, vol. 73, no. 19, JPN6023008404, 2016, pages 3693 - 3709, ISSN: 0005051305 * |
HAGINO ET AL., NEUROPSYCHOPHARMACOLOGY, vol. 40, no. 5, JPN6023008405, 2015, pages 1141 - 1150, ISSN: 0005051304 * |
SMITS ET AL., CELL AND TISSUE RESEARCH, vol. 382, no. 3, JPN6023008407, 2020, pages 463 - 476, ISSN: 0005051303 * |
WACHS ET AL., LABORATORY INVESTIGATION, vol. 83, no. 7, JPN6023008408, 2003, pages 949 - 962, ISSN: 0005051302 * |
ZHOU ET AL., DIFFERENTIATION, vol. 92, no. 4, JPN6023008409, 2016, pages 183 - 194, ISSN: 0005051301 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113025569A (zh) * | 2021-03-26 | 2021-06-25 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 人多能干细胞来源的间充质干细胞及其制备方法和应用 |
CN113046309A (zh) * | 2021-03-26 | 2021-06-29 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 悬浮培养脑类器官的培养基及其应用 |
CN113025569B (zh) * | 2021-03-26 | 2023-05-05 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 人多能干细胞来源的间充质干细胞及其制备方法和应用 |
CN113046309B (zh) * | 2021-03-26 | 2023-05-05 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 悬浮培养脑类器官的培养基及其应用 |
CN117778313A (zh) * | 2024-02-23 | 2024-03-29 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 脑类器官获得间充质干细胞分化方法和应用 |
CN117778313B (zh) * | 2024-02-23 | 2024-05-24 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 脑类器官获得间充质干细胞分化方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7366332B2 (ja) | 2023-10-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Koehler et al. | Generation of inner ear organoids containing functional hair cells from human pluripotent stem cells | |
CN104379732B (zh) | 由人多能干细胞衍生神经干细胞和多巴胺能神经元 | |
Wilson et al. | Development and differentiation of neural rosettes derived from human embryonic stem cells | |
Qu et al. | High-efficiency motor neuron differentiation from human pluripotent stem cells and the function of Islet-1 | |
Shi et al. | Directed differentiation of human pluripotent stem cells to cerebral cortex neurons and neural networks | |
Cheng et al. | Generation of neural progenitor cells by chemical cocktails and hypoxia | |
Carpenter et al. | Enrichment of neurons and neural precursors from human embryonic stem cells | |
Najm et al. | Rapid and robust generation of functional oligodendrocyte progenitor cells from epiblast stem cells | |
EP3072960B1 (en) | Method for manufacturing telencephalon or progenitor tissue thereof | |
JP2018531011A6 (ja) | 中脳オルガノイドを作製するための手段及び方法 | |
JP2018531011A (ja) | 中脳オルガノイドを作製するための手段及び方法 | |
CN109996870A (zh) | 从人多能干细胞产生中脑特异性类器官 | |
JP7366332B2 (ja) | 脳幹オルガノイドの作製方法 | |
CN105940101A (zh) | 由人多能干细胞特化功能性颅基板衍生物 | |
JP2008099662A (ja) | 幹細胞の培養方法 | |
Xu et al. | Induced dopaminergic neurons: A new promise for Parkinson’s disease | |
WO2016039317A1 (ja) | 小脳前駆組織の製造方法 | |
WO2018157769A1 (zh) | 一种将非神经元细胞转化为神经元细胞的方法 | |
CN105392881A (zh) | 体细胞基于小分子转化为神经嵴细胞 | |
KR20170116921A (ko) | 지방줄기세포에서 신경줄기세포, 신경세포 및 가바성 신경세포로의 분화 유도 방법 | |
CA3182115A1 (en) | Methods for differentiating stem cells into dopaminergic progenitor cells | |
Hermann et al. | Neurorestoration in Parkinson’s disease by cell replacement and endogenous regeneration | |
US10472607B2 (en) | Culture medium and method for inducing differentiation of pluripotent stem cells into neuroepithelial cells | |
Aguilera-Castrejon et al. | Improved proliferative capacity of NP-like cells derived from human mesenchymal stromal cells and neuronal transdifferentiation by small molecules | |
EP4011449A1 (en) | Method for producing cell aggregate including glial progenitor cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220426 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230307 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230324 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230509 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230519 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230704 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230802 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7366332 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |