JP2020183377A - Svct発現促進剤 - Google Patents
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Abstract
Description
表皮においては、ビタミンCにより、表皮角化細胞(ケラチノサイト)の分化促進、ケラチノサイトでのフィラグリン産生促進、メラノサイトでのメラニン生成抑制などの効果が報告されており、また、真皮においては、真皮線維芽細胞(ファイブロブラスト)でのコラーゲン産生促進効果が報告されている(例えば、非特許文献1参照)。
このように、多くの効果を有するビタミンCであるが、モルモットやヒトを含む霊長類は、ビタミンC生合成系の最終段階に必要な、L−グロノーγ―ラクトンオキシダーゼを持たないため、ビタミンCを体内で合成することはできない。そのため、体外からビタミンCを取り込む必要がある。さらに、ビタミンCは水溶性であり、他のビタミンに比べて不安定であるため、体内で安定に保持することが難しい。
そのため、体外から取り込んだビタミンCを、効率的に細胞に供給することが重要である。
SVCTのビタミンC取り込み機構に関してはまだ未解明な部分が多いが、SVCTを欠損させたマウスで腎臓のビタミンC吸収率が低下することから、その重要性が示唆されている(例えば、非特許文献2参照)。さらに、細胞におけるSVCT1の発現量を増加させることで、細胞中のビタミンC量が増加したという報告からも、ビタミンCの取り込みにはSVCTが重要であると考えられている(例えば、特許文献1参照)。
また、加齢やUVの影響によってSVCT1の発現が減少することが知られており、自然老化や光老化によって皮膚細胞中におけるビタミンC量が減少すると考えられている。
これらの知見から、加齢に伴う皮膚細胞内へのビタミンCの取り込み改善には、SVCTの発現を増加させることが有効であると考えられる。
これまで、ビタミンCトランスポーターの発現を高める薬剤に関して、ポリフェノールや各種植物抽出物など、様々な検討がされてきている(例えば、特許文献1,2参照)。
一方ニコチン酸アミドは、ニコチンアミド、ナイアシンアミドともよばれる、ニコチン酸の誘導体であり、ニコチン酸欠乏症の予防及び治療等に利用されている。また、肌あれ改善、美白効果、抗老化効果などが知られているが、ビタミンCトランスポーターの発現に関わる効果は知られていなかった。
本発明のニコチン酸アミドは、ニコチン酸(ビタミンB3/ナイアシン)のアミド化合物である。ニコチン酸アミドは水溶性ビタミンで、ビタミンB群の一つである公知の物質であり、天然物(米ぬかなど)から抽出されたり、あるいは公知の方法によって合成することができる。具体的には、第15改正日本薬局方2008に収載されているものを用いることが出来る。
本発明に係るSVCT発現促進剤へのニコチン酸アミドの含有量は、特に限定されないが、最終製品中にニコチン酸アミド量(固形分)換算で、好ましくは0.00001質量%以上、より好ましくは0.0001質量%以上、特に好ましくは0.01質量%以上、最も好ましくは0.02質量%以上の濃度を採用することができる。また、含有量の上限は特に限定されないが、好ましくは20質量%以下、より好ましくは10質量%以下の濃度を採用することができる。この範囲であれば、SVCT発現促進効果をより高めることができる。
なお、本明細書において「最終製品」とは、ユーザが使用するときの製品であり、例えば、化粧品、皮膚外用品、医薬品等が挙げられる。
本明細書における「SVCT1」はナトリウム依存性ビタミンCトランスポーター1型、または、SLC23A1として表される遺伝子によりコードされるタンパク質であり、「SVCT2」とはナトリウム依存性ビタミンCトランスポーター2型、または、SLC23A2として表される遺伝子によりコードされるタンパク質のことを指す。
本発明に係るSVCT発現促進剤は、化粧料、医薬部外品、医薬品、飲食品等幅広い分野での利用が可能であり、その剤形は特に限定されない。具体的には、例えば、クリーム状、ゲル状、液状、懸濁状、粉末状、フォーム状、シート状、固形のもの等が挙げられる。
本発明に係るSVCT発現促進剤を化粧料・薬用化粧料に適用する場合、特に限定されないが、例えば、皮膚化粧料、口唇化粧料に配合されることが好ましい。具体的には、ハンドクリーム、化粧水、乳液、美容液、フェイスクリーム、クレンジングクリーム、洗顔石鹸、パック、日焼けクリーム、日焼けローション、日焼け止めクリーム、化粧下地、ファンデーション、おしろい、パウダー、口紅、リップグロス、リップクリーム、アイクリーム、アイシャドウ、シャンプー、リンス、コンディショナー、ボディシャンプー、ボディローション、育毛剤等の製品にすることができる。
本発明に係るSVCT発現促進剤を皮膚外用剤(医薬品・医薬部外品)に適用する場合、例えば、外用液剤、外用ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、スプレー剤、点鼻液剤、リニメント剤、ローション剤、パップ剤、硬膏剤、噴霧剤、エアゾール剤等の剤形にすることができる。
本発明に係るSVCT発現促進剤を飲食品に適用する場合、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食、飼料(ペット用を含む)等の他、例えば、小麦粉製品、即席食品、農産加工品、水産加工品、畜産加工品、乳・乳製品、油脂類、基礎調味料、複合調味料・食品類、冷凍食品、菓子類、飲料、これら以外の市販食品等にすることができる。また、上述した効果(SVCT発現促進等)から想定される用途が表示された飲食品とすることも可能であり、これを機能性食品(例えば、特定保健用食品、機能性表示食品、サプリメント等)として提供することもできる。
ヒトケラチノサイトをニコチン酸アミド含有培地で72時間培養し、細胞中のSVCT1タンパク量を測定した。具体的には、新生児表皮角化細胞NHEK(クラボウ社製)を、6穴プレートに2×105cells/wellとなるよう播種し、正常ヒト角化細胞増殖用無血清培地(Humedia−Kg2、クラボウ社製)2mLを用いて1日培養後、ニコチン酸アミド1mM存在下で、37℃、5%CO2存在下で3日間培養した。また、対照としては精製水のみを添加して同様に培養した。
72時間培養後に、細胞からタンパク質を回収し、ウエスタンブロット法を用いてタンパク質量の解析を行った。一次抗体として、SVCT1抗体(sc−376090、Santa Cruz社より購入)を、二次抗体としてはAnti−Mouse secondary Antibody((protein simple社製キット)を使用した。得られたSVCT1タンパク質量を定量した。
ヒトメラノサイトをニコチン酸アミド含有培地で4日間培養後、免疫染色による蛍光強度を測定した。具体的には、24穴プレートにHMGS増殖添加剤(Thermofisher社製)入りのヒト表皮メラノサイト用培地(Medium 254培地、Thermofisher社製)を適量添加し、正常ヒト表皮メラノサイト(Human Epidermal Melanocytes、シグマ社製)を1×104個播種し、37℃、5%CO2存在下で2日間培養した。2日後にα−MSH(シグマ社製)の最終濃度が10−8mol/Lになるように添加培養し、その1日後に培地中のニコチン酸アミド濃度が1mMとなるよう添加し、さらに4日培養した後、細胞を免疫染色した。対照としては、精製水のみを添加して同様に培養した。
4日間培養後、一次抗体として、SVCT1抗体(sc-376090、Santa Cruz社より購入)、二次抗体としては、Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody (A-11029、サーモフィッシャー社より購入)を用いて免疫染色を行い、蛍光顕微鏡IX83(オリンパス社製)により撮影した像を、CellSensDimensionにより解析した。
ヒト線維芽細胞をニコチン酸アミド含有培地で24時間培養し、細胞中のSVCT2遺伝子のmRNA発現量を測定した。具体的には、ヒト新生児由来線維芽細胞NB1RGBを、6穴プレートに4×105cells/wellとなるよう播種し、培地(10%FBS含有)2mLを用いて1日培養後、ニコチン酸アミド1、2mM存在下で、37℃、5%CO2存在下で24時間培養した。また、対照としては精製水のみ、ヒドロキシプロリン1mM、2mMを各添加して同様に培養した。
24時間培養後に細胞を回収し、RNeasy Plus Mini Kit(QIAGEN社製)を用いてmRNAを抽出した。その後、iScrip Advanced cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR(BioRad社製)を用いて作製したcDNAを用いて、定量的リアルタイムPCRによりヒトSVCT2のmRNA発現量を測定した。定量的リアルタイムPCRにはSVCT2Forwardプライマー;cagacaacgtttggatgcag、SVCT2Reverse プライマー;ttccattggcaactgaaacaを使用した。SVCT2のmRNA測定量はβアクチンのmRNA量に対して標準化し、対照のmRNA量に対する比として示した。
〔処方例1:美容液(水中油乳化型)〕
(成分) (質量%)
1.精製水 残量
2.1,3ブチレングリコール 10
3.グリセリン 10
4.グリコシルトレハロース・水添デンプン分解物混合溶液 3
5.ニコチン酸アミド 3
6.トリ−2エチルヘキサン酸グリセリル 3
7.水素添加大豆リン脂質 3
8.N−ステアロイル−N−メチルタウリンナトリウム(注1) 2
9.オレイン酸オレイル 3
10.スクワラン 3
11.メドウフォーム油 3
12.セトステアリルアルコール 3
13.水添ポリイソブテン(注2) 3
14.N−ラウロイル−L−グルタミン酸ジ
(コレステリル・ベヘニル・オクチルドデシル)(注3) 2
15.メチルパラベン 0.3
16.天然ビタミンE 0.01
17.コメ発酵液 0.01
18.精製水 10
19.アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体(注4) 0.2
20.水酸化ナトリウム 0.1
21.エタノール 3
22.香料 0.3
(注1):NIKKOL SMT(日光ケミカルズ株式会社製)
(注2):パールリーム18(日油株式会社製)
(注3):エルデュウCL−301(味の素株式会社製)
(注4):CARBOPOL 1382(LUBRIZOL ADVANCED MATERIALS社製)
(A):成分1〜5を80℃で均一溶解する
(B):成分6〜16を80℃で均一溶解した。
(C):80℃にて撹拌しながら(A)に(B)を添加して乳化した。
(D):(C)を40℃まで冷却し、成分17〜22を添加して美容液を得た。
〔処方例2:可溶化型化粧水〕
(成分) (質量%)
1.ポリオキシエチレン(40モル)硬化ヒマシ油(注5) 0.8
2.香料 0.2
3.エタノール 10
4.1,3−ブチレングリコール 2
5.グリセリン 2
6.ニコチン酸アミド 10
7.水溶性コラーゲン 0.001
8.ヒアルロン酸ナトリウム 0.002
9.乳酸ナトリウム 0.2
10.フェノキシエタノール 0.5
11.精製水 残量
(注5)NIKKOL HCO40(日光ケミカルズ株式会社製)
(A):成分1〜3を混合溶解する。
(B):成分4〜11を混合溶解する。
(C):撹拌しながらBにAを加え、化粧水を得た。
(成分) (質量%)
1.大豆由来水素添加リン脂質 0.5
2.セトステアリルアルコール 0.1
3.ポリオキシエチレン(10モル)コレステロールエーテル 0.2
4.酢酸−dl−α−トコフェロール 0.1
5.スクワラン 0.1
6.ヒドロキシエチルセルロース 0.03
7.精製水 残量
8.グリチルレチン酸ステアリル 0.25
9.ニコチン酸アミド 0.001
10.ダイズ種子エキス 0.0005
11.リン酸一水素二ナトリウム 0.1
12.リン酸二水素一ナトリウム 0.1
13.グリセリン 3.0
14.ジプロピレングリコール 2.0
15.エタノール 7.0
16.香料 0.1
(製造方法)
A.成分1〜5を75℃に加熱し、均一に混合溶解する。
B.成分6、7を75℃に加熱し、均一に混合溶解する
C.AにBを添加し、75℃で乳化する。
D.Cを室温に冷却し、成分8〜16を添加し、乳化型化粧水を得た。
(成分) (質量%)
1.モノオレイン酸ポリオキシエチレン(20)ソルビタン 1.0
2.セスキオレイン酸ソルビタン 0.5
3.トリオクタン酸グリセリル 0.5
4.ホホバ油 0.5
5.スクワラン 0.5
6.精製水 残量
7.エデト酸二ナトリウム 0.1
8.メチルパラベン 0.2
9.フェノキシエタノール 0.5
10.グリセリン 5.0
11.プロパンジオール 1.0
12.プロピレングリコール 2.0
13.乳酸ナトリウム 0.5
14.2−O−α−D−グルコシル
−L−アスコルビン酸 1.0
15.ニコチン酸アミド 0.1
16.キサンタンガム 0.05
17.精製水 10.0
18.エタノール 3.0
19.香料 0.1
(製造方法)
A:成分16を70℃に加熱した成分17で膨潤する。
B:成分1〜5を70℃で加熱混合する。
C:成分6〜13を70℃で加熱溶解後、Bに添加し、70℃で乳化する。
D:Cを室温まで冷却後、成分14、15、18、19とAを添加し、乳液を得た。
(成分) (質量%)
1.ステアリン酸 1.0
2.モノオレイン酸ポリオキシエチレン(20モル)ソルビタン 0.5
3.セスキオレイン酸ソルビタン 0.5
4.ベヘニルアルコール 0.5
5.2−エチルヘキサン酸グリセリル 2.0
6.パラメトキシケイ皮酸2−エチルヘキシル 10.0
7.スクワラン 2.0
8.酢酸トコフェロール 1.0
9.マカデミアンナッツ油 1.0
10.ジプロピレングリコール 10.0
11.トリエタノールアミン 1.0
12.精製水 残 量
13.グリセリン 5.0
14.1,2−ペンタンジオール 5.0
15.アクリル酸/メタクリル酸アルキル共重合体(注4) 0.2
16.クエン酸 0.1
17.コハク酸二ナトリウム 0.1
18.エタノール 10.0
19.ニコチン酸アミド 0.1
20.香料 0.02
A:成分1〜9を80℃にて均一に溶解する。
B:成分10〜14を80℃にて均一に溶解する。
C:BにAを添加し、乳化する。
D:Cを攪拌冷却し、成分15〜20を添加し、水中油乳化型日焼け止めを得た。
(成分) (質量%)
1.ポリオキシエチレンメチルシロキサン・ポリオキプロピレンオレイル
メチルシロキサン・ジメチルシロキサン共重合体(注6) 2.0
2.PEG−9ポリジメチルシロキシエチルジメチコン(注7)1.0
3.ジメチルポリシロキサン 5.0
4.ジメチルポリシロキサン処理赤色酸化鉄 1.0
5.ジメチルポリシロキサン処理黄色酸化鉄 1.5
6.ジメチルポリシロキサン処理黒色酸化鉄 0.5
7.ジメチルポリシロキサン処理二酸化チタン
(平均粒子径400nm) 10.0
8.ジメチルポリシロキサン処理タルク
(板状、平均粒子径12μm) 5.0
9.パラメトキシケイ皮酸2−エチルヘキシル 5.0
10.グリチルレチン酸ステアリル 0.5
11.セスキオレイン酸ソルビタン 0.5
12.精製水 残量
13.1,3−ブチレングリコール 15.0
14.ニコチン酸アミド 0.0005
15.クエン酸ナトリウム 0.1
16.リン酸二水素一ナトリウム 0.1
17.フェニルベンズイミダゾールスルホン酸 0.3
18.トリエタノールアミン 1.7
19.カプリリルグリコール 0.1
20.香料 0.1
(注6) KF−6026(信越化学工業社製)
(注7) KF−6028(信越化学工業社製)
(製造方法)
A:成分1〜3を均一に混合する。
B:成分4〜11をローラーにて均一に分散する。
C:AにBを添加し、均一混合する。
D:成分12〜20を混合溶解する。
E:CにDを添加して、乳化し、ファンデーションを得た。
(成分) (質量%)
1.ポリオキシエチレン(10モル)フィトステロール 1.0
2.ステアリルアルコール 0.2
3.セタノール 0.2
4.水添大豆リン脂質 1.0
5.プロピレングリコール 10.0
6.ジグリセリン 8.0
7.流動パラフィン 1.0
8.メドウフォーム油 0.5
9.精製水 1.0
10.エタノール 3.0
11.精製水 残 量
12.ニコチン酸アミド 6.0
A:成分1〜6を80℃で溶解混合する。
B:成分7〜8を80℃に加熱し、Aに添加したのち、75℃に加熱した成分9を加えて乳化した。
C:これを撹拌冷却し、成分10〜12を加えて混合して水中油型乳液を得た。これを不織布に含浸させ、不織布含浸タイプパック料を得た。
Claims (5)
- ニコチン酸アミドを有効成分とする、SVCT発現促進剤。
- ニコチン酸アミドを有効成分とする、SVCT1発現促進剤。
- ニコチン酸アミドを有効成分とする、SVCT2発現促進剤。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載のSVCT発現促進剤を含む化粧料。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載のSVCT発現促進剤を含む皮膚外用剤。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP2019086156 | 2019-04-26 | ||
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JP2020075403A Pending JP2020183377A (ja) | 2019-04-26 | 2020-04-21 | Svct発現促進剤 |
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Country | Link |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023063118A1 (ja) * | 2021-10-14 | 2023-04-20 | 株式会社 資生堂 | M2又はm2様マクロファージの誘導又は活性化剤、m2又はm2様マクロファージの誘導又は活性化方法、真皮の色素沈着を予防及び/又は改善するための組成物、並びに真皮の色素沈着を予防及び/又は改善する方法 |
-
2020
- 2020-04-21 JP JP2020075403A patent/JP2020183377A/ja active Pending
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WO2023063118A1 (ja) * | 2021-10-14 | 2023-04-20 | 株式会社 資生堂 | M2又はm2様マクロファージの誘導又は活性化剤、m2又はm2様マクロファージの誘導又は活性化方法、真皮の色素沈着を予防及び/又は改善するための組成物、並びに真皮の色素沈着を予防及び/又は改善する方法 |
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