JP2020146052A - 定量的pcrによってヒトの糞便試料から大腸癌を診断する方法、プライマー及びキット - Google Patents
定量的pcrによってヒトの糞便試料から大腸癌を診断する方法、プライマー及びキット Download PDFInfo
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Abstract
Description
(http://www.cancer.org/cancer/colonandrectumcancer/moreinformation/colonandrectumcancerearlydetection/colorectal-cancer-early-detection-screening-tests-usedを
参照されたい)。
FOBT及びFITはいずれも糞便試料中の血液の量を検出することによってCRCをスクリーニングする。該検査は、新生物の組織、特に悪性の組織は典型的な粘膜よりも出血し、出血量はポリープの大きさ及び癌のステージと共に増加するという前提に基づく。間欠性出血のため複数の検査が推奨される。糞便の血液検査が下部結腸における幾つかの初期のステージの腫瘍を検出し得るのに対し、(i)血液はいずれも代謝されるため上部結腸におけるCRC、及び/又は(ii)より小さい腺腫性ポリープを検出することができず、偽陰性をもたらす。痔、裂溝、炎症性障害(潰瘍性大腸炎、クローン病)、感染性疾患、さらには長距離ランニングによるあらゆる胃腸の出血が疑陽性をもたらす(非特許文献3)。現在のACSガイドライン(非特許文献2)は、年齢50歳以上の平均的なリスクの成人に対してグアヤックによる便潜血検査(Guaiac-based fecal occult blood test:gFOBT)を使用する年に一度のスクリーニングを推奨している。FOBTは、欧州連合で唯一推奨される検査である(非特許文献4)。いずれのガイドラインもいかなる陽性FOBT検査も大腸内視鏡検査によりフォローアップすべきことを推奨している。
sDNA検査は、糞便試料に由来する多様なDNAマーカーを測定する。Exact Sciences Corp.(ワイオミング州マディソン)製の現在入手可能なCologuar(商標)のsDNA検査は、K−ras、APC、及びP53の遺伝子における別々の点突然変異を含む複数のマーカーパネル、BAT−26に対するプローブ、DNA完全性(DIA)に対するマーカー、及びビメンチン遺伝子のメチル化を測定する(非特許文献2)。sDNA検査を推奨するガイドラインもあるが、より保守的であり、sDNA検査を推奨しないガイドラインもある。或る研究ではあるバージョンのsDNA検査はFOBTよりも優れていたが、依然として進行した腺腫の15%を検出したに過ぎなかった(非特許文献5)。
ラインは、リソース(resorces)が利用可能であり、患者が侵襲的な検査を経ることを望む場合に早期の癌及び腺腫性ポリープの両方を検出するように設計された検査の使用を勧める。
ある。大腸内視鏡検査は、大腸癌の進行を改善するのみならず、該疾患を予防する。しかしながら、この技術に関連する主な不利益は、訓練された人物を必要とすることから費用が高いこと、麻酔関連死のリスク、及び腸管穿孔のリスクである(非特許文献6)。
5%未満のCRCが遺伝性であって大半は散発性、すなわち結腸新生物の個人歴又は家族歴のない患者において診断されると考えられている。この疾患の病因はいまだに不明であるが、内因性及び外因性の因子が腫瘍の発生に積極的に関与する多因子の起源が疑われる。これらの因子は、年齢、煙草、炎症性腸疾患の個人歴、食事、生活様式、及び細菌叢である。
おいて、粘膜関連細菌叢と糞便細菌叢とで優占種が異なることを示す。同様に、Eckburg et al.(非特許文献14)は、粘膜及び糞便の試料に見られる系統発生学上の系統間の統計学的有意差を報告し、糞便細菌叢は脱落した(shed)粘膜細菌及び別々の非接着性管腔集団の組合せを表すと主張している。
ィイ(Faecalibacterium prausnitzii))、又は毒性若しくは発癌性であること(すなわち、デスルホビブリオ(Desulfovibrio(硫酸還元細菌)及びエンテロコッカス・フェカ
リス(細胞外スーパーオキシドを産生する))が知られている代謝産物を伴う特定の細菌のリアルタイム定量的PCRによる定量が記載されている。しかしながら、いずれの文献もCRCに対するバイオマーカーとしてのかかる細菌配列の診断値又は予測値の特定に対しては、何ら記載していない。
ってF.ヌクレアタム(F.nucleatum:FNN)のnusG遺伝子の定量を含み、感度5
7%及び特異度89.5%でCRCを検出する、CRC検出の方法を記載する。
i.前記被験体に由来する糞便試料から、配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列、又はそれらの相補的な16S rRNA配列を定量することと、
ii.ヒト被験体においてCRC及び/又はポリープを診断、早期検出、再発の判定、発症リスクの判定若しくは予測をすること、又は前記ヒト被験体において大腸内視鏡検査を行うべきかどうかを判定すること、又は前記ヒト被験体がCRC及び/又はポリープを有すると診断される患者である場合の予後を判定すること、又は少なくとも1つの前記配列の定量レベルからCRC及び/又はポリープを有する患者における治療をガイドすることと、
を含む、方法に関する。
RNA配列の使用であって、前記細菌配列が前記ヒト被験体の糞便試料から定量される、使用に関する。
a.
i.配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA配列、若しくはそれらの相補的な16S rRNA配列と特異的にハイブリダイズすることができる核酸プローブ、又は、
ii.配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA配列を特異的に増幅することができる一対の核酸プライマー、
からなる群より選択される試薬と、
b.本発明の方法に従ってヒト糞便試料から1種又は複数種の前記配列のレベルを定量するための指示書と、
を備える、キットに関する。
−*は、統計学的有意性がp=0.05であることを意味する。
−**は、統計学的有意性がp=0.01であることを意味する。
−***は、統計学的有意製がp=0.005であることを意味する。
−図8〜図26の統計学的有意性は*によって表され、p値は対応する表に見られる。
i.前記被験体の糞便試料から、配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列、又はそれらの相補的なrRNA配列を定量することと、
ii.ヒト被験体においてCRC及び/又はポリープを診断、早期検出、再発の判定、発症リスクの判定若しくは予測をすること、又は前記ヒト被験体において大腸内視鏡検査を行うべきかどうかを判定すること、又は前記ヒト被験体がCRC及び/又はポリープを有すると診断される患者である場合の予後を判定すること、又は少なくとも1つの前記配列の定量レベルからCRC及び/又はポリープを有する患者における治療をガイドすることと、
を含む、方法に関する。
B10 16S rDNAに対するベストマッチBLAST:フィーカリバクテリウム・プラウスニッツィイ(Faecalibacterium prausnitzii)、
B46 16S rDNAに対するベストマッチBLAST:フィーカリバクテリウム・プラウスニッツィイ、サブドリグラヌルム・バリアビレ、
B48 16S rDNAに対するベストマッチBLAST:ルミノコッカス(Ruminococcus)、ロゼブリア(Roseburia)、コプロコッカス(Coprococcus)。
般的に絶対的ではない前癌病変(nonobligate precursor lesion)とされる腺腫性ポリープの検出及び除去によってこの目標を達成することができる。
−先の大腸内視鏡検査でポリープの病歴のある被験体
−大腸癌の被験体、及び、
−大腸癌又は腺腫性ポリープの家族歴のある被験体。
−遺伝子検査によって家族性腺腫性ポリポーシス(FAP)と診断された、又は遺伝子検査によらずFAPと疑われる被験体、
−遺伝性非ポリポーシス直腸癌(hereditary non-polyposis colon cancer)(HNPC
C又はリンチ症候群)の、又は遺伝子検査によらず家族歴に基づいてHNPCCのリスクが増した被験体、及び、
−慢性潰瘍性大腸炎及びクローン病等の炎症性腸疾患の被験体。
/又は腺腫性ポリープの発症リスクを判定する方法であって、
i.上記被験体の糞便試料から配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列、又はそれらの相補的な16S rRNA配列を定量することと、
ii.少なくとも1つの上記配列の定量レベルからCRC及び/又は腺腫性ポリープの発症リスクを判定することと、
を含む、方法である。
i.上記被験体の糞便試料から配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列、又はそれらの相補的な16S rRNA配列を定量することと、
ii.少なくとも1つの前記配列の定量レベルからCRC及び/又は腺腫性ポリープの再発を判定することと、
を含む、方法である。
の増した又は高リスクの患者においてポリープの存在をスクリーニング/モニタリングする本発明の方法における使用に好ましいバイオマーカーである。
i.上記被験体の糞便試料から配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列、又はそれらの相補的な16S rRNA配列を定量することと、
ii.少なくとも1つの上記配列の定量レベルから上記ヒト被験体において大腸内視鏡検査を行うべきかどうかを判定することと、
を含む、方法である。
の複合バージョン(例えば、Andoh et al., Current Pharmaceutical Design, 2009;15, 2066-2073を参照されたい)が挙げられる。好ましいプライマー及び/又はプローブは、
典型的には、細菌核酸配列の量の増加に対して直接的な線形応答を提供することによって、予測可能に反応する。適切な標準を作製すること及びそれに対して比較することによって、試料中の所与の核酸配列の量を容易に定量することができる。
1991;8: 67-74、Trask et al., Trends Genet., 1991;7 (5): 149-154、及びWeier et al., Expert Rev. Mol. Diagn., 2002, 2(2):109-119、並びに米国特許第6,174,6
81号を参照されたい。
ばhttp://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/sybr-green-qpcr.html、又はhttp://www.sigmaaldrich.com/life-science/molecular-biology/pcr/quantitative-pcr/qpcr-technical-guide.htmlを参照されたい。細菌遺伝子マーカーの存在
量及び発現を定量するためのqPCR法の総説については、例えばSmith CJ and Osborn AM., FEMS Microbiol Ecol., 2009;67(1):6-20を参照されたい。
施形態では、上記細菌配列の定量はqPCRによって行われる。より好ましい実施形態では、上記細菌配列の定量はqPCRによって行われ、定量レベルはCt値である。Ct(サイクル閾値)値は蛍光シグナルがその閾値を超えるのに必要なqPCRサイクルの数として定義される。Ctレベルは、試料中の標的核酸の量に反比例する(すなわち、Ctレベルが低くなると試料中の標的核酸の量が増大する)。
よって同定された配列のCt値を配列番号4によって同定された配列のCt値で除することによっても得ることができる。
60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は好ましくは100%の感度及び/又は特異度で、ヒト被験体においてCRC及び/又はポリープを診断、早期検出、再発の判定、発症リスクの判定、若しくは予測をするか、又は上記ヒト被験体において大腸内視鏡検査を行うべきかどうかを判定するか、又は上記ヒト被験体がCRC及び/又はポリープを有すると診断された場合の予後を判定するか、又はCRC及び/又はポリープを有する患者における治療をガイドする。
でよく知られている割合に関する標準的な方法を使用して計算することができる。割合について2種類の95%信頼区間が一般的に定義される。正確な信頼区間は、正確な推定を達成するように二項分布を使用して定義される。試料分布を正規近似と仮定して漸近信頼区間を計算する。当業者は、どのようにして適切な信頼区間を定義するかを知っているであろう。1又は別の種類の信頼区間の選択は、典型的には、試料の割合が正規分布に対してよく近似するかどうかに依存する。
菌DNAの抽出方法は、例えば、M Corist et al., Journal of Microbiological Methods, 2002; 50(2):131-139、Whitney D et al., Journal of Molecular Diagnostics, American Society for Investigative Pathology, 2004;6(4):386-395、及び国際公開第20
03/068788号により知られている。
Kit(MP biomedicals)及びNucleoSpin(商標) Soil(Macherey-Nagel Gmbh& Co. KG)に含まれるもの等のシリカ膜カラムを使用する最終精製工程の組合せ
を使用することが好ましい。ビリルビン、胆汁酸塩及び複合多糖等の糞便試料に由来するDNA抽出物中のPCR阻害物質の存在は、糞便からのDNA抽出物中のDNAバイオマーカーの特定で直面する困難の1つである(Fleckna et al., Mol Cell Probes, 2007;21(4):282-7)。好ましいDNA抽出方法は、少量、例えば5%未満、好ましくは2%未満
、より好ましくは1%未満、更に好ましくは0.5%未満、例えば0.25%未満、0.1%未満、0.05%未満又は0.01%未満のPCR阻害物質を含む糞便抽出物を提供するものである。
(a)配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる群より選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列のレベルを前記ヒト糞便試料から定量的PCRによって特定することであって、配列番号1のレベルが配列番号2−配列番号13に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号4のレベルが配列番号5−配列番号6に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号7のレベルが配列番号8−配列番号9に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号10のレベルが配列番号11−配列番号12に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定されること、及び/又は、
(b)工程a)に記載される配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる群より選択される少なくとも2つの16S rDNA細菌配列のレベルを前記ヒト糞便試料から定量的PCRによって特定し、配列番号10/配列番号4、配列番号7/配列番号4、配列番号4/配列番号1、配列番号7/配列番号1、配列番号7/配列番号10、及び配列番号10/配列番号1からなる群より選択される少なくとも1つの比を特定すること、
を含む。
(a)配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる群より選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列の濃度を上記ヒト糞便試料から定量的PCRによって特定することであって、配列番号1の濃度が配列番号2−配列番号13に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号4の濃度が配列番号5−配列番号6に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号7の濃度が配列番号8−配列番号9に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号10の濃度が配列番号11−配列番号12に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定されることと、
(b)任意に、工程a)に記載される配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる群より選択される少なくとも2つの16S rDNA細菌配列のレベルを前記ヒト糞便試料から定量的PCRによって特定するとともに、配列番号10/配列番号4、配列番号7/配列番号4、配列番号4/配列番号1、配列番号7/配列番号1、配列番号7/配列番号10、及び配列番号10/配列番号1からなる群より選択される少なくとも1つの濃度の比を特定することと、
(c)工程(a)の少なくとも1つの配列の濃度及び/又は工程(b)で得られた少なくとも1つの比の値からCRC及び/又は腺腫性ポリープの診断、リスクの判定又は再発の判定をすることと、
を含む。
号1の比の値がカットオフ値0.52を上回る場合、又は配列番号10/配列番号7の比の値がカットオフ値1.2を上回る場合に診断される。
a.
i.配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA配列、若しくはそれらの相補的なrRNA配列と特異的にハイブリダイズすることができる核酸プローブ、又は、
ii.配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA配列を特異的に増幅することができる一対の核酸プライマー、
からなる群より選択される試薬と、
b.本発明の方法に従ってヒト糞便試料から1種又は複数種の前記配列のレベルを定量するための指示書と、
を備える、キットに関する。
1275:31-56)を参照されたい。
1.生体試料
大腸癌(CRC)(0相〜I相)と最近診断された患者27名、リンチ症候群キャリア(L)の患者24名、及び健康な個体(C)19名から糞便試料を得た。全ての患者は試料収集の少なくとも15日前に大腸内視鏡検査を行った。
B3、B10、B41、B46、B48及びB50の配列は、無培養の細菌単離物から予め単離された変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法(DGGE)のゲルバンドに対応する。
−GQ411111.1でEMBL−EBI European Nucleotide
Archive(ENA)データベースにおいて公開された16S rDNA細菌配列
配列番号1(B3)、
−GQ411118.1でEMBL−EBI European Nucleotide
Archive(ENA)データベースにおいて公開された16S rDNA細菌配列
配列番号4(B10)、
−GQ411150.1でEMBL−EBI European Nucleotide
Archive(ENA)データベースにおいて公開された16S rDNA細菌配列
配列番号7(B46)、
−GQ411152.1でEMBL−EBI European Nucleotide
Archive(ENA)データベースにおいて公開された16S rDNA細菌配列
配列番号10(B48)、
−GQ411145.1でEMBL−EBI European Nucleotide
Archive(ENA)データベースにおいて公開された16S rDNA細菌配列B41、及び、
−GQ411154.1でEMBL−EBI European Nucleotide
Archive(ENA)データベースにおいて公開された16S rDNA細菌配列B50。
24時間からの糞便試料を糞便容器に収集し、ISO 9001の条件下にて−20℃で1カ月保存し、−80℃の冷凍庫に移した。
糞便16s−DNA抽出NucleoSpin(商標)Soil(Macherey-Nagel)を使用した。バイオクラスII安全条件のもと、200mg〜500mgの糞便試料をNucleospinビーズチューブに入れた。700μlのSL1及び150μlのEnhancer SXをビーズチューブに添加した。
Quant−IT dsDNA Broad−Range Assay Kitを使用して、キュービット(Qubit)(登録商標) 2.0 Fluorometerカタログ番号Q32866による蛍光定量的分析によって上記抽出物のDNA濃度を特定した。この方法は、RNAに関してdsDNAに高選択性であり、2ng〜1000ngの範囲内で正確な定量を与える。この範囲内で蛍光はDNA濃度と線形に関連する。上記抽出物5ulに対してDNA測定を行った。
糞便試料に由来するDNAを定量的リアルタイムPCRによって分析した。特に、本発明者らは、1つの試料当たり4つの細菌集団、すなわちB3、B10、B48及びB46の量を判断した。蛍光dsDNA染色により定量的リアルタイムPCRを使用して細菌配列を定量した。この作業において、本発明者らはPromega(米国マディソン)製のpre
−mix BRYT(商標)使用した。Furet.et al.(FEMS Microbiol Ecol., 2009;68(3):351-62)によって記載される手順に従って真正細菌を増幅した。
データの統計学的な正規分布をコルモゴロフ−スミノルフの検定により分析した。データの統計学的正規分布が存在するか否かに応じて、以下の群を比較するための適切な統計的検定を使用した。
これらの群について、分析した変数は、
−Ctで表される4つの細菌配列の定量、
−4つの細菌の定量の比、
−重量、及び、
−DNA濃度、
であった。
量の相関、並びに検査の感度及び特異度を判定した。
)の変化を暗示することから、これは正常とされた。このことは総細菌の減少を暗示するものではない(例えば、Sobhani et al., PLoS One, 2011,27;6(1):e16393を参照された
い)。この理由で、Eub定量を正規化目的の内部参照として使用しなかった。
生検における細菌マーカーB3、B10、B46、B48、B41及びB50の定量に対するプライマーを、バイオインフォマティックツールであるEuropean Bioinformatics Institute (www.ebi.ac.uk)製のClustalX、Netprimer(Premier Biosoft)及びPrimerExpress(Life Tecnologies-Thermo Fischer)を使用し
て系統発生学的な群から予め得られた配列との比較分析より設計した。
対照7名及び大腸癌患者9名の合計16の糞便試料を分析した。分析した糞便試料中の実施例1で引用される各細菌マーカー定量をCt値で表す。Ct(サイクル閾値)を、蛍光シグナルが閾値を超えるのに必要なq−PCRサイクルの数として定義する。Ctレベルは、試料中の標的核酸濃度の対数に反比例する(すなわち、Ctレベルが低くなるほど、試料中の標的核酸の量が増大する)。リアルタイムアッセイは、40サイクルの増幅を経る。得られた結果を下記表1及び表2に示す。表1はCt絶対値を表し、表2はCt比を表す。2標本t検定を適用した。
この分析の目的は、臨床兆候の前に大腸癌のリスクを検出するためのバイオマーカー予測値を決定することである。
大腸癌(CRC)(0相〜I相)と最近診断された患者27名、及び健康な個体(C)から糞便試料を得た。全ての患者は試料収集の少なくとも15日前に大腸内視鏡検査を受けた。
カ月以内の抗生物質による治療、及び年齢18歳未満を含んだ。
この分析の目的は、臨床兆候の前に大腸癌リスクを検出するためのバイオマーカーの予測値を決定することである。
実施例6の分析によれば、リンチ症候群キャリアは、糞便中にCRC患者に類似する微生物学的プロファイルを有する。したがって、本実験では、本発明者らは、大腸内視鏡検査による調査の前に、健康な個体及び大腸癌リスクの個体(CRC+L)における大腸癌リスク個体をスクリーニングするため上記4つの細菌配列の定量検出を使用することの潜在的な可能性を試験することを目的とする。
本実施例において、本発明者らは、リンチ症候群キャリアにおける細菌配列の定量を使用して種々のグレードの大腸癌のリスクを定義することを目的とする。
低リスクとの間で有意差を呈する。B3/B48比は、C対L−高リスクを比較すると有意差を示す。B3/B10比及びB48/B10比はCRC対L−高リスクで有意差があった。
Claims (15)
- ヒト被験体において大腸癌(CRC)及び/又は腺腫性ポリープをスクリーニングする方法であって、
i.前記被験体に由来する糞便試料から、配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列、又はそれらの相補的なrRNA配列を定量することと、
ii.ヒト被験体においてCRC及び/又はポリープを診断、早期検出、再発の判定、発症リスクの判定若しくは予測をすること、前記ヒト被験体において大腸内視鏡検査を行うべきかどうかを判定すること、前記ヒト被験体がCRC及び/又はポリープを有すると診断される患者である場合の予後を判定すること、又は少なくとも1つの前記配列の定量レベルからCRC及び/又はポリープを有する患者における治療をガイドすることと、
を含む、方法。 - 2つ、3つ、又は4つの前記細菌配列、好ましくは4つ全ての細菌配列を定量することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が、工程i)の後に、被験体試料のレベルを対照試料におけるレベルと比較することを更に含み、ここで前記対照試料におけるレベルからの偏差がCRC及び/又は腺腫性ポリープの指標である、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記方法が、工程i)において前記細菌配列の少なくとも2つを定量し、前記配列の定量レベルの少なくとも1つの比を決定し、前記被験体における少なくとも1つの前記比を対照試料における前記比と比較することを更に含み、前記対照試料に由来する比の偏差がCRC及び/又は腺腫性ポリープの指標である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌配列の定量に先立って、任意の手段による前記試料の物理的破壊及びシリカ膜カラム上でのDNA精製を含む糞便試料からのDNAの抽出を行う、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌配列の定量が定量的PCRによって行われる、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- (a)配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる群より選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列のレベルを前記ヒト糞便試料から定量的PCRによって特定することであって、配列番号1のレベルが配列番号2−配列番号13に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号4のレベルが配列番号5−配列番号6に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号7のレベルが配列番号8−配列番号9に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定され、配列番号10のレベルが配列番号11−配列番号12に関して少なくとも90%の同一性を有するプライマーを使用して特定されること、及び/又は、
(b)工程a)に記載される配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる群より選択される少なくとも2つの16S rDNA細菌配列のレベルを前記ヒト糞便試料から定量的PCRによって特定するとともに、配列番号10/配列番号4、配列番号7/配列番号4、配列番号4/配列番号1、配列番号7/配列番号1、配列番号7/配列番号10、及び配列番号10/配列番号1からなる群より選択される少なくとも1つの比を特定すること、
を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。 - 配列番号1の濃度が配列番号2−配列番号13の配列を有するプライマーを使用して特定され、配列番号4の濃度が配列番号5−配列番号6の配列を有するプライマーを使用して特定され、配列番号7の濃度が配列番号8−配列番号9の配列を有するプライマーを使用して特定され、配列番号10の濃度が配列番号11−配列番号12の配列を有するプライマーを使用して特定される、請求項7に記載の方法。
- CRCをスクリーニングする方法であり、配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10の定量を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 腺腫性ポリープをスクリーニングする方法であり、配列番号1、配列番号4/配列番号1、配列番号7/配列番号4、配列番号7/配列番号1、配列番号10/配列番号4、及び配列番号10/配列番号1の定量を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- CRCの指標として知られている1種又は複数種の分子バイオマーカーを検出すること及び/定量することを更に含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- コンピュータ可読媒体に前記方法の結果を保存することを更に含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- ヒト被験体においてCRC及び/又はポリープを診断、早期検出、再発の判定、発症リスクの判定若しくは予測をすること、又は前記ヒト被験体において大腸内視鏡検査を行うべきかどうかを判定すること、又は前記ヒト被験体がCRC及び/又はポリープを有すると診断される患者である場合に予後を判定すること、又はCRC及び/又はポリープを有する患者における治療をガイドすることのためのバイオマーカーとしての、配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA細菌配列、又はそれらの相補的なrRNA配列の使用であって、前記細菌配列が前記ヒト被験体の糞便試料から定量される、使用。
- キットであって、
a.
i.配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA配列、若しくはそれらの相補的なrRNA配列と特異的にハイブリダイズすることができる核酸プローブ、又は、
ii.配列番号1、配列番号4、配列番号7、及び配列番号10からなる一覧から選択される少なくとも1つの16S rDNA配列を特異的に増幅することができる一対の核酸プライマー、
からなる群より選択される試薬と、
b.請求項1〜12のいずれかの方法に従ってヒト糞便試料から1種又は複数種の前記配列のレベルを定量するための指示書と、
を備える、キット。 - 配列番号2、配列番号13、配列番号5、配列番号6、配列番号8、配列番号9、配列番号11、及び配列番号12からなる群より選択されるか、又はそれらと少なくとも90%の同一性を有する核酸配列。
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CA3132912A1 (en) | 2019-03-13 | 2020-09-17 | Goodgut S.L. | Improved method for the screening, diagnosis and/or monitoring of colorectal advanced neoplasia, advanced adenoma and/or colorectal cancer |
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CN112048564A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-12-08 | 康美华大基因技术有限公司 | 一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量pcr引物组、试剂盒及其应用 |
CN114107527A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-01 | 中国药科大学 | 用于检测丁酰辅酶a脱氢酶基因的引物对及试剂盒 |
CN115261271B (zh) * | 2022-08-01 | 2023-12-12 | 厦门承葛生物科技有限公司 | 一种肠道菌群的高通量分离培养与筛选方法 |
CN115963268B (zh) * | 2023-02-14 | 2023-09-19 | 浙江大学 | 一种用于结直肠癌早期诊断的血浆分泌蛋白组合及应用 |
CN117051113B (zh) * | 2023-10-12 | 2023-12-29 | 上海爱谱蒂康生物科技有限公司 | 生物标志物组合在制备预测结直肠癌的试剂盒中的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009057695A1 (ja) * | 2007-10-30 | 2009-05-07 | Olympus Corporation | 遺伝子解析による腺腫又はがんの検出方法 |
JP2009165401A (ja) * | 2008-01-16 | 2009-07-30 | Olympus Corp | 標的物質の定量方法 |
WO2010010914A1 (ja) * | 2008-07-23 | 2010-01-28 | オリンパス株式会社 | 糞便試料からの核酸回収方法、核酸解析方法及び糞便試料処理装置 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US6054278A (en) | 1997-05-05 | 2000-04-25 | The Perkin-Elmer Corporation | Ribosomal RNA gene polymorphism based microorganism identification |
WO2001023608A2 (en) * | 1999-09-27 | 2001-04-05 | Merck Sharp & Dohme De Espana, S.A.E. | Hybridization probes which specifically detect strains of the genera microbispora, microtetraspora, nonomuria and planobispora |
US20140171339A1 (en) * | 2011-06-06 | 2014-06-19 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and kits for detecting adenomas, colorectal cancer, and uses thereof |
BR112015020819A2 (pt) * | 2013-03-05 | 2017-07-18 | Academisch Ziekenhuis Groningen | uso de faecalibacterium prausnitzii htf-f (dsm 26943) para supressão de inflamação |
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WO2009057695A1 (ja) * | 2007-10-30 | 2009-05-07 | Olympus Corporation | 遺伝子解析による腺腫又はがんの検出方法 |
JP2009165401A (ja) * | 2008-01-16 | 2009-07-30 | Olympus Corp | 標的物質の定量方法 |
WO2010010914A1 (ja) * | 2008-07-23 | 2010-01-28 | オリンパス株式会社 | 糞便試料からの核酸回収方法、核酸解析方法及び糞便試料処理装置 |
Non-Patent Citations (5)
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DATABASE GENBANK [ONLINE], ACCESSION NO. GQ411111, インターネット <URL: HTTPS://WWW.NCBI.NLM.NIH.GOV, JPN7019000122, ISSN: 0004550743 * |
DATABASE GENBANK [ONLINE], ACCESSION NO. GQ411118, インターネット <URL: HTTPS://WWW.NCBI.NLM.NIH.GOV, JPN7019000123, ISSN: 0004550744 * |
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DATABASE GENBANK [ONLINE], ACCESSION NO. GQ411152, インターネット <URL: HTTPS://WWW.NCBI.NLM.NIH.GOV, JPN7019000125, ISSN: 0004550746 * |
TERESA MAS DE XAXARS RIVERO, "DESCRIPCIO I QUANTIFICACIO DE LA MICROBIOTA INTESTINAL ASSOCIADA AL CA, JPN7019000126, ISSN: 0004550742 * |
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