JP2020115781A - 細胞培養チップ - Google Patents

Abstract

【課題】ポートの内径が細い細胞培養チップにおいて、ピペットによる溶液の投入を容易にする。【解決手段】細胞培養チップは、第一面を有する板材と、板材の内部に形成され、一方の端部が第一面上に露出してなる第一開口部と、板材の内部であって第一開口部とは異なる位置に形成され、一方の端部が第一面上に露出してなる第二開口部と、第一開口部の他方の端部と第二開口部の他方の端部とを連絡する中空状の連絡部とを備える。第一開口部と第二開口部の少なくとも一方は、第一面と連絡部との間の位置において、第一面から連絡部に向かう深さ方向に進むに連れて開口面積が小さくなる第一開口領域を有する。【選択図】 図１

Description

本発明は、細胞培養チップに関する。

従来、細胞及び組織培養は、寒天又は培地とした培養ディッシュやプレートを使用して行われてきた。これら培養ディッシュやプレートを用いた細胞及び組織の培養は、２次元（平面）の環境で行われるものであるため、細胞外微小環境を再現することができない。そこで、近年、従来法では困難であった、３次元（立体）の細胞培養・実験環境を作製することができるマイクロ流路を有する細胞培養チップ（「バイオチップ」、「マイクロチップ」とも称される）が提案されている（例えば、下記特許文献１参照）。

図１８は、特許文献１に開示されているマイクロ流路チップの構造を模式的に示す斜視図である。マイクロ流路チップ１００は、基材１１２と樹脂フィルム１１４とを備える。基材１１２の一方の面には、流入口１２３及び流出口１２５が設けられており、流入口１２３及び流出口１２５は、基材１１２から樹脂フィルム１１４に達する開口溝を構成する。また、基材１１２には、流入口１２３と流出口１２５とを連絡する流路１２２が形成されている。流路１２２の一部は、検出部１２７を兼ねている。

検査対象とする液体試料は流入口１２３から導入される。この液体試料は、流出口１２５に向けて流路１２２内を流れる。流路１２２の途中に設けられた検出部１２７には、検出対象物質（例えば特定のタンパク質）に反応して蛍光を発する物質が固定されている。かかる構成とすることで、検出部１２７を蛍光顕微鏡で観察することにより、液体試料に検出対象物質が含まれているか否かが判定される。

特開２０１８−４７６１４号公報

培養条件を種々変えながら細胞を培養して、細胞の状況を検証することが行われる場合がある。従来は、培養条件毎に異なる細胞培養チップが用いられていたが、マイクロ流路の高密度化に伴い、１枚の細胞培養チップに複数のマイクロ流路を実装することが可能となった。この場合、複数の流路が近接して配置されるため、ポート（以下では、「開口部」とも称される。）同士の間隔も小さくなる。また消費する試薬量を抑えるため、ポートの開口の径も小径となる。

マイクロ流路への溶液供給方法としては、ポンプとチューブを用いて連続的に溶液を供給する方式と、マイクロピペット等を用いて定容量の溶液を供給するバッチ式の方式がある。しかし、ポンプ及びチューブを用いる方式においては、チップの周囲にポンプ及びチューブを配置する必要があるため、全体としてサイズが大型化してしまう上、電源の取り回しなどが複雑化するという課題がある。そこで、簡易な方法でマイクロ流路に溶液を供給する観点からは、マイクロピペット等を用いて溶液をマイクロ流路内に供給する方式が好ましい。

培養液などの溶液をピペットでポートに投入するに際しては、溶液がポートの外に溢れるのを防止するため、一般的には、ピペットの先端をポートの内壁に沿わせた状態で溶液を投入する。しかし、上述したように、高密度に流路が実装された細胞培養チップにおいては、ポートの径がピペットの径に対して細すぎるため、ピペットの先端をポートの内壁に容易に接触させることができない。また、このような作業を自動化する場合には、ピペットの先端の位置決めの精度の要求が高くなりすぎ、溶液の投入に時間を要するおそれもある。

一方で、ピペットの先端をポートの内壁に接触させることなく溶液を投入した場合、高密度に実装された細胞培養チップにおいては、近接する別の流路の導入口が近いため、溶液が隣の流路に混入するおそれもある。

本発明は、上記の課題に鑑み、ポートの内径が細い細胞培養チップにおいて、ピペットによる溶液の投入を容易にすると共に、近接する別のポートに溶液が混入するおそれを低減することのできる、細胞培養チップを提供することを目的とする。

本発明に係る細胞培養チップは、
第一面を有する板材と、
前記板材の内部に形成され、一方の端部が前記第一面上に露出してなる第一開口部と、
前記板材の内部であって前記第一開口部とは異なる位置に形成され、一方の端部が前記第一面上に露出してなる第二開口部と、
前記第一開口部の他方の端部と前記第二開口部の他方の端部とを連絡する中空状の連絡部とを備え、
前記第一開口部と前記第二開口部の少なくとも一方は、前記第一面と前記連絡部との間の位置において、前記第一面から前記連絡部に向かう深さ方向に進むに連れて開口面積が小さくなる第一開口領域を有することを特徴とする。

上記の構成によれば、第一開口部又は第二開口部の少なくとも一方には、第一面と連絡部との間の位置において、内壁が傾斜面（テーパ面）を有する領域が形成されるため、この内壁の面にピペットの先端を接触させやすい。この結果、第一開口部又は第二開口部の少なくとも一方において、連絡部に近い深さ位置では開口径を小さいままとしながらも、溶液の投入時に系外にあふれるおそれを低減できる。また、溶液を投入する工程を自動化した場合であっても、ピペットの先端の位置決めの要求精度を低下させることができ、作業時間の短縮化が図られる。

また、深さ方向に関して、連絡部に近づくに連れて開口面積が低下する領域を有するため、溶液投入時において、液面の面積を測定することで、既に投入した溶液の量を間接的に把握することが可能である。これにより、溶液の投入作業を自動化した場合において、溶液の投入作業を停止させるタイミングが自動的に検出できるため、溶液の投入量が過多となることによって溶液が溢れるおそれが低減される。

前記第一開口部と前記第二開口部の少なくとも一方は、前記第一開口領域と前記連絡部とを前記深さ方向に連絡する、開口面積が実質的に一定である第二開口領域を有するものとしても構わない。

この場合、溶液投入時において、液面の面積を測定し、液面の面積が急に変化したことを検知して、溶液の投入を停止するタイミングを自動的に検出することができる。

前記第一開口部と前記第二開口部の少なくとも一方は、前記深さ方向に関して、前記第一面から、前記連絡部よりは前記第一面側の所定の深さ位置までの領域全体に前記第一開口領域を有するものとしても構わない。

前記第一開口領域は、当該第一開口領域側を凸とする曲面を呈する内壁で囲まれた領域で構成されているものとしても構わない。

前記第一開口部と前記第二開口部の少なくとも一方は、前記深さ方向に関して、前記第一面から前記連絡部に達するまでの領域全体に前記第一開口領域を有するものとしても構わない。

前記細胞培養チップは、前記第一開口領域を取り囲むように形成された内壁の一部と前記連絡部とを、前記第一開口領域の外側の位置において前記深さ方向に連絡する孔部を備えるものとしても構わない。

連絡部内で細胞を培養するに際しては、厳密な細胞培養環境を実現する観点から、投入する培養液以外の要素ができるだけ入りこまないことが好ましい。上記の構成によれば、孔部を通じた毛細管現象により、孔部が存在しない場合と比較して、溶液の投入時に液面が上昇する傾向にある。これにより、溶液を投入する際に気泡が入りにくくなるため、好ましい細胞培養環境を構築しやすくなる。

なお、ウェルドラインを上記孔部として利用するものとしても構わない。

前記細胞培養チップは、前記第一開口部、前記連絡部、及び前記第二開口部が連絡されて形成された流路を、離散して複数備えるものとしても構わない。

上記の構成によれば、近接した他の流路内に投入する培養液などの溶液が混入するおそれを大幅に低減できる。

本発明の細胞培養チップによれば、ポートの内径が細くても、ピペットによる溶液の投入が容易化される。

細胞培養チップの一実施形態の構造を模式的に示す斜視図である。 第一基板２ａ側から細胞培養チップを見たときの模式的な平面図である。 図２に示す細胞培養チップを、Ｘ１−Ｘ１線で切断したときの模式的な断面図である。 図３の一部拡大図である。 細胞培養チップの寸法を説明するための、模式的な断面図である。 培養液が注入された状態の細胞培養チップを、図３にならって図示した模式的な断面図である。 ピペットを用いて細胞培養チップに培養液を注入する様子を模式的に示す図面である。 ピペットを用いて従来の細胞培養チップに培養液を注入する様子を模式的に示す図面である。 培養液を注入している途中の状態を示す図面である。 図９Ａの状態から更に培養液を注入したときの状態を示す図面である。 別実施形態の細胞培養チップの構造を、図４にならって図示した模式的な断面図である。 別実施形態の細胞培養チップの構造を、図４にならって図示した模式的な断面図である。 別実施形態の細胞培養チップの構造を、図２にならって図示した模式的な平面図である。 図１２に示す細胞培養チップの構造を、Ｘ１−Ｘ１線で切断したときの模式的な断面図である。 図１３の一部拡大図である。 別実施形態の細胞培養チップの構造を模式的に示す平面図である。 別実施形態の細胞培養チップの構造を模式的に示す平面図である。 別実施形態の細胞培養チップの構造を模式的に示す平面図である。 従来のマイクロ流路チップの構造を模式的に示す斜視図である。

本発明に係る細胞培養チップにつき、図面を参照して説明する。なお、以下の各図面はあくまで模式的に図示されたものである。すなわち、図面上の寸法比と実際の寸法比とは必ずしも一致しておらず、また、各図面間においても寸法比は必ずしも一致していない。

図１は、細胞培養チップの一実施形態の構造を模式的に示す斜視図である。図１に示すように、細胞培養チップ１は、第一基板２ａと第二基板２ｂからなる板材２を備える。図２は、第一基板２ａ側から細胞培養チップ１を見たときの模式的な平面図である。図３は、細胞培養チップ１を、図２内のＸ１−Ｘ１線で切断したときの模式的な断面図である。

図１〜図３に示すように、細胞培養チップ１が備える板材２のうち、第一基板２ａには、離間した位置に２つの貫通孔が形成されている。そして、これらの貫通孔の一方の面が第二基板２ｂと接触することで、第一開口部１０及び第二開口部２０が形成されている。つまり、細胞培養チップ１を第一基板２ａ側から見たとき、図２に示すように、第一開口部１０の一方の端部１０ａ、及び第二開口部２０の一方の端部２０ａが露出されている。図２に示すように、第一基板２ａの面のうち、各開口部（１０，２０）の端部（１０ａ，２０ａ）が露出されている側の面３が「第一面」に対応する。以下、この面を適宜「第一面３」と称する。

第一基板２ａは、第二基板２ｂ側の面に、細管状の凹部を有しており、この凹部と第二基板２ｂとの間の領域によって連絡部５が形成されている。連絡部５は、第一開口部１０の端部１０ａとは反対側の端部１０ｂ、及び第二開口部２０の端部２０ａとは反対側の端部２０ｂとを連絡する中空流路を構成する（図３参照）。本実施形態では、連絡部５が、細胞を培養する空間（培養チャンバ）を構成する。

言い換えれば、培養チャンバを構成する連絡部５は、板材２からなる壁部によって周囲が覆われ、第一開口部１０から第二開口部２０に向かう方向ｄ１を長手方向とする細管状空間で構成される。例えば、図３において、第一開口部１０の端部１０ａ側から細胞４１を含む培養液４０が投入されることで、培養チャンバを構成する連絡部５内で細胞４１が培養される（後述する図６も参照）。なお、連絡部５の、方向ｄ１に直交する平面で切断したときの断面形状について、円形状、半円形状、又は矩形状など、種々の形状とすることが可能である。

図４は、図３の第一開口部１０付近を拡大した図面である。図４に示すように、第一開口部１０は、第一開口領域１１と第二開口領域１２とを有する。第一開口領域１１は、第一面３から深さ方向ｄ２に連絡部５側に進むに連れて開口面積Ａ１が小さくなる領域である。第二開口領域１２は、第一開口領域１１と連絡部５とを深さ方向ｄ２に連絡しており、深さ方向ｄ２の位置によらず開口面積Ａ２が実質的に一定である領域である。ここで、開口面積Ａ２が実質的に一定であるとは、加工による寸法誤差を含む概念であり、より詳細には、開口面積Ａ２のズレ量が１５％以内であるものを指す。

寸法の一例は以下の通りである（図５参照）。第二基板２ｂの高さ（厚み）ｗ３は約１ｍｍであり、好ましくは１００μｍ以上、２ｍｍ以下である。第一開口部１０の高さｈ１０、及び第二開口部２０の高さｈ２０は、いずれも約３ｍｍである。連絡部５（培養チャンバ）の高さｈ５は、約３００μｍであり、好ましくは２００μｍ以上８００μｍ以下である。また、連絡部５（培養チャンバ）の長手方向に係る長さｔ５は、約９ｍｍである。

第一開口部１０の端部１０ａから、連絡部５を介して、第二開口部２０の端部２０ａに達する空間の容積は、１００ｍｍ³（１００μＬ）以下であり、より好ましくは、１０ｍｍ³（１０μＬ）である。

本実施形態の細胞培養チップ１は、図７に示すように、第一開口領域１１内において、第一開口部１０の内壁１０ｃが傾斜面（テーパ面）を構成する。このため、ピペット４５の先端４５ａを第一開口部１０の内壁１０ｃに接触させやすい。

これに対し、図１８を参照して上述した従来のマイクロ流路チップ１００の場合、図８に示すように、流入口１２３は、基材１１２の面に対して直交する細い溝で構成されるため、ピペット４５の先端４５ａを、流入口１２３の内壁１２３ｃに接触させるのが難しい。この結果、培養液４０の投入作業中に、培養液４０の一部が流入口１２３から外側に溢れるおそれがある。また、ピペット４５の先端４５ａの位置決めについて、高い精度が要求される。

本実施形態の細胞培養チップ１によれば、ピペット４５の先端４５ａを第一開口部１０の内壁１０ｃに容易に接触できるため、培養液４０の投入作業中に、培養液４０の一部が第一開口部１０の外側に溢れにくくなり、また、ピペット４５の先端４５ａの位置決めも容易に行える。なお、第一開口領域１１内における内壁１０ｃの、第一面３に対する傾斜角は、限定されないが、好ましくは、４５°以上８７°以下であり、より好ましくは、４０°以上５５°以下である。

なお、第一開口領域１１と第二開口領域１２との境界の深さ位置は、任意である。また、第二開口領域１２内における第一開口部１０の開口径は、外接円（円形状である場合には当該円）の直径（内径）が、５ｍｍ以下であるのが好ましく、３ｍｍ以下であるのがより好ましい。また、第一開口領域１１内における第一開口部１０の開口径の最大値は、第二開口領域１２内における前記開口径よりは大きい範囲内において、１５ｍｍ以下であるのが好ましく、５ｍｍ以下であるのがより好ましい。

また、板材２を構成する第一基板２ａ及び第二基板２ｂは、好ましくは実質的に非多孔質体の材料からなる。ここで、「実質的に非多孔質体」であるとは、媒体の見かけ状の表面積が、実際の表面積に近似している状態を指す。上記のような非多孔質体を形成する材料の例としては、ガラスやシリコンなどの無機材料、又はポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、シクロオレフィンコポリマー（ＣＯＣ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、ポリスチレン（ＰＳ）などの樹脂材料が挙げられる。なお、これらの樹脂材料が２種以上組み合わせられていても構わない。かかる材料で板材２を構成することで、連絡部５内で培養されている細胞４１から放出された生理活性物質が、連絡部５の壁を構成する板材２内に吸収されるのを抑制しながら、再び細胞４１側へと戻すことができる。

板材２を構成する第一基板２ａ及び第二基板２ｂは、好ましくは、光透過性を有する材料で構成される。板材２が上記の樹脂材料で構成された場合、細胞４１を細胞培養チップ１の外側から視認することができる。

なお、本実施形態の細胞培養チップ１によれば、培養液４０の注入作業中に、培養液４０の液面の面積Ａ４０を確認することで、現時点で培養液４０の投入量を検出できるという効果も奏される（図９Ａ、図９Ｂ参照）。すなわち、培養液４０が第二開口領域１２内に留まっているときは、液面の面積Ａ４０はほぼ一定の値を示す（図９Ａ参照）。一方、培養液４０が第一開口領域１１内にも貯留され始めると、液面の面積Ａ４０は徐々に大きくなる（図９Ｂ参照）。

よって、培養液４０を自動で投入する場合において、例えば第一面３よりも上方に撮像センサ（不図示）を設置しておくのが好ましい。撮像センサは、第一開口部１０を撮像することで、液面の面積Ａ４０を検出する。そして、液面の面積Ａ４０が所定の値又は所定の範囲内に達した時点で、撮像センサからの信号に基づいて、ピペット４５から培養液４０を投入するのを停止させる制御が行われる。これにより、培養液４０の投入作業を自動化した場合であっても、培養液４０を過不足なく投入することができる。

上記においては、図４〜図９を参照して第一開口部１０の構造を例に挙げて説明したが、第二開口部２０についても同様の形状を有しているものとしても構わない。以下においても共通である。

第一開口部１０は、図１０に示すように、第一開口領域１１内において内壁１０ｃが曲面で構成されていても構わない。より詳細には、図１０に示す例では、内壁１０ｃは、第一開口領域１１側（第一開口部の端部１０ａ側）を凸とする曲面を呈している。

また、第一開口部１０は、図１１に示すように、第二開口領域１２を備えず、第一開口領域１１のみを備えるものとしても構わない。すなわち、第一開口部１０は、深さ方向ｄ２に関して、第一面３から連絡部５に達するまでの領域全体にわたって、深さ方向ｄ２に進むに連れて開口面積Ａ１が減少するように構成されても構わない。第一面３から連絡部５までの深さ方向の全体にわたって、第一開口部１０の内壁１０ｃは傾斜面を構成する。

更に、図１２〜図１４に示すように、細胞培養チップ１は、第一開口部１０に連絡された孔部１３を備えるものとしても構わない。図１２は、この別実施形態の細胞培養チップ１を、図２にならって図示した平面図である。図１３は、図１２内のＸ１−Ｘ１線における模式的な断面図である。図１４は、図１３の一部拡大図である。なお、図１３及び図１４では、図面の煩雑化を避ける目的で、孔部１３を構成する箇所が破線にて表記されている。

図１２〜図１４に示すように、第一開口領域１１内に位置する内壁１０ｃの一部箇所から、深さ方向ｄ２に延伸する孔部１３が形成されている。図１２〜図１４に示す例では、孔部１３は、第一開口領域１１の外側の位置において、第一開口部１０に連絡された状態で相互に離間した４箇所に設けられている。ただし、孔部１３の配置数は４には限定されない。

この構成によれば、培養液４０を注入する際に、毛細管現象によって孔部１３を通じて培養液４０の液面が上昇しやすくなる。これにより、ピペット４５によって培養液４０を投入する際に、ピペット４５の先端４５ａが培養液４０の液面又は液中に接触した状態となりやすく、気泡が培養液４０の液中に入り込むのを抑制できる。これにより、細胞４１に対する好ましい培養環境を構築しやすくなる。

また、細胞４１を培養する際には、雰囲気の相対湿度Ｒｈは、９５％〜１００％とされるのが一般的である。このため、培養の最中に、培養液４０の液面を通じて雰囲気に含まれる水分が吸収され、培養液４０が膨張する場合がある。孔部１３は、第一開口部１０に連絡されてはいるものの、径が極めて細い（例えば１〜１００μｍ）ため、完全には培養液４０が充填されにくい。この結果、孔部１３が、膨張した培養液４０の退避空間を構成し、第一開口部１０の外側に溢れるおそれを低減できる。

なお、各基板（２ａ，２ｂ）は、例えば、所定の金型に樹脂材料を流し込んで射出成形を行うことで製造される。このとき、樹脂の流れが集中する箇所にウェルドラインと呼ばれる溝が形成されることがある。第一開口領域１１の外側の位置において、第一開口部１０に連絡されたウェルドラインが形成されている場合には、当該ウェルドラインを孔部１３として利用しても構わない。

なお、図１２〜図１４では、孔部１３が第一開口部１０側にのみ形成されている場合が図示されているが、第二開口部２０側にも孔部１３が形成されているものとしても構わない。

［別実施形態］
以下、別実施形態につき説明する。

〈１〉上記実施形態では、第一開口部１０及び第二開口部２０の双方において、第一面３から深さ方向ｄ２に進行するに連れて開口面積Ａ１が小さくなる第一開口領域１１を有するものとして説明した。しかし、第一開口部１０と第二開口部２０のいずれか一方については、深さ位置によらず開口面積が共通であるものとしても構わない。

〈２〉図１５に図示されるように、細胞培養チップ１において、複数の流路が互いに独立した状態で同一の板材２内に形成されていても構わない。ここでいう流路とは、第一開口部１０、連絡部５、及び第二開口部２０が相互に連絡されることで形成された、中空状の空間を指す。

かかる構成によれば、並行して複数の細胞４１を培養することができるため、実験・評価の効率が向上する。なお、図１５に図示されている各培養空間の配置数や配置の態様はあくまで一例である。例えば、図１５では、行方向及び列方向に複数個の培養空間が形成されている場合が例示的に示されているが、例えば、一方の方向には１個の培養空間が形成されていても構わない。

〈３〉上記実施形態では、一対の開口部（１０，２０）が培養チャンバを構成する連絡部５に連絡されてなる細胞培養チップ１について説明した。しかし、本発明の細胞培養チップ１において、連絡部５に対して連絡される開口部（１０，２０）の数は限定されない。

図１６及び図１７は、別実施形態の細胞培養チップ１を、図２にならって第一基板２ａ側から見たときの模式的な平面図である。図１６に示す細胞培養チップ１は、２つの第一開口部１０と、１つの第二開口部２０とを備え、各開口部（１０，２０）が連絡部５によって連絡されている。また、図１７に示す細胞培養チップ１は、１つの第一開口部１０と、３つの第二開口部２０とを備え、第一開口部１０とそれぞれの第二開口部２０とを連絡するように３つの連絡部５が設けられている。第一開口部１０の構造は、上述した実施形態と共通であるため、説明を割愛する。

〈４〉本発明は、第一面３の近傍の高さ位置において、開口面積が深さ方向ｄ２によらず実質的に一定である構造を排除しない。言い換えれば、第一開口領域１１は、第一面３から深さ方向ｄ２に所定の長さだけ連絡部５側に位置している箇所から、深さ方向ｄ２に向かって進行するに連れて開口面積Ａ１が減少するように形成されていても構わない。

１ ： 細胞培養チップ
２ ： 板材
２ａ ： 第一基板
２ｂ ： 第二基板
３ ： 第一面
５ ： 連絡部
１０ ： 第一開口部
１０ａ ： 第一開口部の露出面側の端部
１０ｂ ： 第一開口部の連絡部側の端部
１０ｃ ： 第一開口部の内壁
１１ ： 第一開口領域
１２ ： 第二開口領域
１３ ： 孔部
２０ ： 第二開口部
２０ａ ： 第二開口部の露出面側の端部
２０ｂ ： 第二開口部の連絡部側の端部
４０ ： 培養液
４１ ： 細胞
４５ ： ピペット
４５ａ ： ピペットの先端
１００ ： 従来のマイクロ流路チップ
１１２ ： 基材
１１４ ： 樹脂フィルム
１２２ ： 流路
１２３ ： 流入口
１２３ｃ ： 流入口の内壁
１２５ ： 流出口
１２７ ： 検出部
Ａ１ ： 第一開口領域の開口面積
Ａ２ ： 第二開口領域の開口面積
Ａ４０ ： 培養液４０の液面の面積
ｄ１ ： 連絡部の長手方向
ｄ２ ： 細胞培養チップの深さ方向

Claims (7)

1. 第一面を有する板材と、
   前記板材の内部に形成され、一方の端部が前記第一面上に露出してなる第一開口部と、
   前記板材の内部であって前記第一開口部とは異なる位置に形成され、一方の端部が前記第一面上に露出してなる第二開口部と、
   前記第一開口部の他方の端部と前記第二開口部の他方の端部とを連絡する中空状の連絡部とを備え、
   前記第一開口部と前記第二開口部の少なくとも一方は、前記第一面と前記連絡部との間の位置において、前記第一面から前記連絡部に向かう深さ方向に進むに連れて開口面積が小さくなる第一開口領域を有することを特徴とする、細胞培養チップ。
2. 前記第一開口部と前記第二開口部の少なくとも一方は、前記第一開口領域と前記連絡部とを前記深さ方向に連絡する、開口面積が実質的に一定である第二開口領域を有することを特徴とする、請求項１に記載の細胞培養チップ。
3. 前記第一開口部と前記第二開口部の少なくとも一方は、前記深さ方向に関して、前記第一面から、前記連絡部よりは前記第一面側の所定の深さ位置までの領域全体に前記第一開口領域を有することを特徴とする、請求項２に記載の細胞培養チップ。
4. 前記第一開口領域は、当該第一開口領域側を凸とする曲面を呈する内壁で囲まれた領域で構成されていることを特徴とする、請求項３に記載の細胞培養チップ。
5. 前記第一開口部と前記第二開口部の少なくとも一方は、前記深さ方向に関して、前記第一面から前記連絡部に達するまでの領域全体に前記第一開口領域を有することを特徴とする、請求項１に記載の細胞培養チップ。
6. 前記第一開口領域を取り囲むように形成された内壁の一部と前記連絡部とを、前記第一開口領域の外側の位置において前記深さ方向に連絡する孔部を備えたことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の細胞培養チップ。
7. 前記第一開口部、前記連絡部、及び前記第二開口部が連絡されて形成された流路を、離散して複数備えたことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞培養チップ。

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