JP2018202352A - 試験用基材、及び試験用基材の製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ポリジメチルシロキサンの基材5の表面1Aに、水または水溶液を保持する溶液保持部2が形成された試験用基材1であって、溶液保持部2は、親水性の表層を有する凹状部であり、前記表層の最大厚みが1μm以上である試験用基材1。基材5に、電子線を照射し、水又は水溶液を保持する溶液保持部2を形成する電子線照射工程を備え、前記電子線照射工程では、溶液保持部2を形成する箇所に、親水性に改質された表層を有する凹状部が基材5の表面に形成される加速電圧で前記電子線を照射する。
【選択図】図2
Description
PDMSは、自家蛍光を持たない透明な材料であり、細胞に対して不活性な特質を有するため、培養用器具の基材に好適に用いられる。加えて、PDMSは、安価、かつ加工が容易であることから、医薬・バイオの分野では、実験や研究の現場において、目的に応じた形状に加工して使用されたりもする。
この改質処理の方法には、プラズマ表面処理や、薬品等を用いた化学的処理が知られている(例えば、特許文献1及び特許文献2参照)。
また、PDMSに電子線照射処理を照射することで、基材表面の親水性を改善する技術も知られている(例えば、非特許文献1参照)。
すなわち、本開示には、ポリジメチルシロキサンの基材の表面に、水または水溶液を保持する溶液保持部が形成された試験用基材であって、前記溶液保持部は、親水性の表層を有する凹状部であり、前記表層の最大厚みが1μm以上であるので、培養等の試験に用いて好適な試験用基材が得られる。
本開示には、前記凹状部の最大深さが0.5μm以上であることで、実用的な溶液保持部を有した試験用基材が得られる、ことが示されている。
本開示には、前記溶液保持部は、水接触角が90度以下のぬれ性を有することで、十分な親水性を有した溶液保持部が得られる、ことが示されている。
本開示には、ポリジメチルシロキサンの基材に、電子線を照射し、水または水溶液を保持する溶液保持部を形成する電子線照射工程では、前記溶液保持部を形成する箇所に、親水性に改質された表層を有する凹状部が前記基材の表面に形成される加速電圧で前記電子線を照射することで、水または水溶液が溶液保持部から流れることなく、強固に保持できる試験用基材を電子線照射により得ること、が示されている。
本開示には、加速電圧を1MV以下にすることで、基材が硬化し弾力性が失われることなく、黄変や湾曲、割れが生じることもないため、加工性を良好に維持できる、ことが示されている。
本開示には、前記電子線の線量を2MGy以上とすることで、水接触角を90度以下にできる、ことが示されている。
本開示には、前記基材の表面に大気雰囲気以上の酸素濃度下で前記電子線を照射することで、電子線照射箇所での酸化反応が促進され、高い親水性が効率良く得られる、ことが示されている。
細胞培養用器具1は、図1に示すとおり、基材5の表面であるウェル形成面1Aに、当該ウェル形成面1Aに対して凹状の複数のウェル2を備える。即ち、基材5のウェル形成面1Aは、ウェル2と非ウェル部分とを有する。
本実施形態において、基材5の平均厚み、すなわちウェル形成面1Aから反対側の表面(裏面)1Bまでの距離は50μm以上(好ましくは1mm以上)程度であるが、他の厚みであってもよい。
本実施形態では、基材5におけるPDMSの含有量は大きいほど好ましく、75質量%以上、90質量%以上、99質量%以上が好ましい。
また、基材5は、PDMS以外の物質として、従来公知の添加剤(例えば可塑剤等)を適宜含むことが可能である。
PDMSを主成分とする基材5は、通常、100度程度の水接触角を有する。なお、本明細書中の水接触角は、いわゆる、ぬれ性の程度を示すパラメータであり、静的液適法により測定することができる。
PDMSの含有量、及び添加剤には、細胞培養用器具1の用途等に応じて、好ましい値、及び物質が適宜に選択される。
例えば、本実施形態では、図1(A)に示すように、細胞培養用器具1のウェル形成面1Aを平面視におけるウェル2の開口形状は、円形であるが、例えば楕円形や、矩形、多角形、ライン状、これらを組み合わせた形状などの任意の形状でもよい。
また、本実施形態では、ウェル2の底面形状は、断面U字状であるが、例えば断面V字状や、平面状でもよい。断面U字状の底面形状のウェル2は比較的製造が容易である。
例えば、これらのパラメータを適宜調整することで、目的に応じた容量の液体(培地)をウェル2中に保持することができる。
また例えば、細胞培養用器具1を1細胞培養(1ウェルに1細胞での培養)に用いる場合であれば、開口径φが凡そ5μm〜100μmの円形であり、最大深さがおよそ1μm〜50μmのウェル2を有する細胞培養用器具1を好適に使用し得る。
また、本実施形態において、ウェル2は、図1(A)に示すように、格子状に配置されている。しかしながら、隣り合うウェルの中心(重心)間の距離がいずれも略等しくなる配置態様であれば格子状でなくともよい。係る配置態様によれば、細胞培養用器具1の基材5のウェル形成面1Aにより多くのウェル2を配置できる。
なお、ウェル2の配置態様は、これに限定されるものではなく、細胞培養用器具1の用途などに応じて任意に設定できる。
一般的に流通している96穴マイクロタイタ―プレート(平底)の底面の直径がおよそ7mmであることから、上記の態様によると、当該マイクロタイタ―プレートの1穴あたりおよそ400個のウェル2の配置を実現することができる。即ち、合計およそ40000個のウェル2を備えた細胞培養用器具1を容易に作成可能である。かかる細胞培養用器具1は、一般に流通している汎用の実験器具を容易に適用可能であることから、取り扱い性に優れる。
詳述すると、本発明者らは、表層6の厚みを増大させることで、当該表層6の親水性(ぬれ性)が維持される期間を延長し得ることを見出した。かかる表層6の厚みとしては、最大厚みfが、少なくとも1μm以上であれば十分に実用性を有し、また10μm以上であれば、より好ましい。
なお、表層6の最大厚みfの上限は特に限定されないが、当該表層6が厚すぎると、基材5の硬化、弾力性の低下、黄変や湾曲、割れ等が生じる虞がある。例えば、表層6の最大厚みfは凹部の最深部から基材の裏面1Bまでの厚みの半分以下、或いは100μmのいずれか小さい値とすることが好ましい。
上記表層6の厚みは、断面を顕微FT−IRやXPS等で化学組成分析することで測定することができる。
さらに、電子線照射箇所では、電子線と、その照射により生じる熱による架橋や、分解、それらに伴うガスの放出や、分子の再配列などで収縮し、これにより、電子線照射箇所が凹状部に変形する。
したがって、電子線照射工程において、ウェル2の形成箇所に電子線が照射されることで、親水性を有した表層6を有した凹部状の上記ウェル2が得られることとなる。
すなわち加速電圧が高いほど、電子線がウェル形成面1Aから深くまで到達し、その深い範囲まで親水性に改質される。発明者らは、後に詳述するが、この表層6が厚いほど、親水性の維持期間が長くなり、例えば、親水性の表層6の最大厚みfが約40μmであると、親水性は細胞培養環境下において少なくとも50日以上に亘り維持されるとの知見を見い出している。
再生医療等に用いる生体組織の培養では、約2週間から1か月の培養期間が想定される。親水性の表層6の最大厚みfを約20μmとすることで、非常に長期期間の培養を安定的に行うことができる細胞培養用器具1が得られることとなる。一方で、電子線の加速電圧が大きすぎると、電子線が基材5の裏面1B(図2)まで通過してしまい、基材5の硬化、黄変や湾曲、割れ等が生じる虞がある。
かかる電子線の加速電圧は、1MV以下が好ましく、0.5MV以下とすることがより好ましいが、各種の条件によっては、これらの範囲以外の値も用いられ得る。かかる加速電圧とすることで、好適な最大厚みf(例えば1μm以上100μm以下)の表層6を比較的容易に形成することができる。なお、かかる電子線の加速電圧の下限は0.03MV以上とすることが好ましいが、各種の条件によっては、これらの範囲以外の値も用いられ得る。
かかる照射条件とすることで、基材5の弾力性、及び品質を損なわずに、上述のウェル2を形成した細胞培養用器具1が得られるのである。即ち、水接触角、親水性の長期維持、ウェル2の最大深さについて、好適なバランスで実現することができる。
なお、上記好適な照射条件における加速電圧、及び電子線の線量は、各種の条件によっては、他の値になり得る。
従来の手法(例えばインプリントとプラズマ照射との組み合わせや、化学処理など)では、ウェル2の凹状部分と、親水化処理によって親水化される箇所にズレが生じ易いため、表層6が親水化した超マイクロサイズのウェル2を形成することは困難である。
これに対し、本実施形態の製造方法においては、上述の通り、電子線照射工程における加速電圧、及び/又は、電子線の線量を制御することで、ウェル2の深さや、親水化する表層6の厚みを所望の範囲に制御できる。
係る制御により、例えば、細胞培養用器具1の工場生産や出荷流通の期間を考慮し、少なくとも当該期間を超える長期に亘り、ウェル2の表層6が親水性を維持するようにすることも可能である。
同図のグラフは実験によって得られたものであり、この実験では、厚さが1mmから2mm程度のシート状に加工されたPDMSを試料とした。そして、数百kV程度の加速電圧で電子線を放射可能な固定照射形式の電子線照射装置を用いて、試料に55kVの加速電圧で電子線を照射した。
すなわち、電子線の線量を10MGy以上とすることで、電子線照によりウェル2を形成する場合において、ウェル2の表層6の親水性を最大にできることが分かる。
この測定では、図3の実験において、線量を10MGyとして作製した試料の水接触角を50日間に亘って計測した。また、一般的な細胞培養環境について測定するために、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)中に浸漬し、温度を37℃に保った状態で一定期間保管後、水接触角の測定を行った。また、プラズマ表面処理(処理時間:120秒)によって作製した試料についても、同様に、水接触角の経時変化を測定した。
一方、電子線照射によって作製した試料では、50日が経過した時点でも水接触角は約80度以下に抑えられており、非常に長期間に亘ってウェル2の親水性が維持されていることが分かる。
またプラズマ表面処理によって作製した試料では、ウェル2の表層6の最大厚みfが数百nm以下であるのに対し、55kVの電子線照射によって作製した試料では、最大厚みfが40μm程度となっていた。このような表層6の最大厚みfの違いが親水性の持続時間に大きく寄与していると考えられる。
発明者らは、図3に示した実験と同じPDMSに、電子線照射装置を用いてスキャン方式で電子線を照射し、90kV、及び70kVの加速電圧ごとに、サンプル1、2、3の3つの試料を作製した。スキャン方式の電子線照射において、1回あたりの電子線照射時間を30秒程度とし、合計10回照射した。
また、比較のために、図3に示した実験と同じ固定照射方式の電子線照射装置を用いて、50kVの加速電圧でサンプル1、2、3の3つの試料も作製した。
なお、いずれのサンプルも線量は10MGyである。
そして、作製から一定期間後に水接触角を測定した結果が図5である。
これにより、水または水溶液が溶液保持部から流れることなく、強固に保持できる細胞培養用器具1を電子線照射により得ることができる。
また、PDMSの基材5のウェル形成面1Aをビーム状の電子線で走査することで、任意形状のウェル2を形成してもよい。
また、細胞培養用器具1としてプレート状の細胞培養用のディッシュを例示したが、本発明が適用される培養用器具の形状や用途は任意である。例えば、いわゆる細胞培養皿、マイクロタイタ―プレート等が適用対象として例示される。
すなわち、本発明に係る試験用基材は、ウェル2の表面にトラップを固定しておくことで、特定の生体物質を検出する用途に広く用いることができ、例えばプローブDNAや抗体などのトラップをウェル2の表面に固定するDNAチップやタンパクチップ等のバイオチップに用いることができる。
図6は、マイクロ流路チップ100の一例を示す図である。マイクロ流路チップ100にあっては、複数の流路115がウェル2に代えて基材5の表面に溶液保持部として形成される。これらの流路幅jは10μm〜100μmが好適である。
マイクロ流路チップ100、及び上記バイオチップにおいて、流路115、及びウェル2の凹部の最大深さdや表層6の厚みfなどの値については、実施形態で説明した細胞培養用器具1と同様である。
1A ウェル形成面(表面)
2 ウェル(溶液保持部)
4 培地
6 表層
5 基材
100 マイクロ流路チップ(試験用基材)
115 流路(溶液保持部)
d 最大深さ
f 表層の最大厚み
φ 開口径
Claims (7)
- ポリジメチルシロキサンの基材の表面に、水または水溶液を保持する溶液保持部が形成された試験用基材であって、
前記溶液保持部は、親水性の表層を有する凹状部であり、
前記表層の最大厚みが1μm以上である、ことを特徴とする試験用基材。 - 前記凹状部の最大深さが0.5μm以上であることを特徴とする、請求項1に記載の試験用基材。
- 前記溶液保持部は、水接触角が90度以下のぬれ性を有する、ことを特徴とする請求項1または2に記載の試験用基材。
- ポリジメチルシロキサンの基材に、電子線を照射し、水または水溶液を保持する溶液保持部を形成する電子線照射工程を備え、
前記電子線照射工程では、前記溶液保持部を形成する箇所に、親水性に改質された表層を有する凹状部が前記基材の表面に形成される加速電圧で前記電子線を照射することを特徴とする試験用基材の製造方法。 - 前記加速電圧は、1MV以下である、ことを特徴とする請求項4に記載の試験用基材の製造方法。
- 前記電子線の線量は、2MGy以上である、ことを特徴とする請求項4または5に記載の試験用基材の製造方法。
- 前記電子線照射工程では、前記基材の表面に大気雰囲気以上の酸素濃度の雰囲気下で前記電子線を照射する、ことを特徴とする請求項4〜6のいずれかに記載の試験用基材の製造方法。
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