JP2020105151A - 易溶出性アントシアニン組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】 酸性条件下での溶出性が高く、胃腸、特に腸管での吸収に優れる、易溶出性アントシアニン組成物を提供する。【解決手段】 アントシアニン誘導体と、脂肪酸エステル系界面活性剤とを含み、前記脂肪酸エステル系界面活性剤が、ＨＬＢ値が６〜１８であるソルビタン脂肪酸エステル、ＨＬＢ値が６〜１８であるポリグリセリン脂肪酸エステル、及びＨＬＢ値が１１〜１７であるショ糖脂肪酸エステルのうちの少なくともいずれかを含む、易溶出性アントシアニン組成物。【選択図】 なし

Description

本発明は、易溶出性アントシアニン組成物に関する。

アントシアニンは、その化学構造に由来する性質により、酸性条件下では安定であるものの、中性及び塩基性条件下では不安定であり、分解しやすい。このような性質のアントシアニンに対し、安定化化合物を混合することによって、中性及び塩基性条件下での安定化を図る方法が知られている（例えば特許文献１を参照）。

特許文献１には、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、アントシアニン抽出物組成物を用いることによって、中性及び塩基性条件下でもアントシアニン抽出物中のアントシアニンを安定化する方法が開示されている。

特表２０１０−５２１４４９号

しかしながら、引用文献１に開示されるアントシアニン抽出物組成物は、中性及び塩基性条件下で安定化されるものの、酸性条件下での溶出性が低下する。その結果、経口摂取された場合に、胃腸で吸収されにくくなる問題点があった。

本発明では、酸性条件下での溶出性が高く、胃腸、特に腸管での吸収に優れる、易溶出性アントシアニン組成物を提供する。

本発明において、一実施形態によれば、易溶出性アントシアニン組成物は、アントシアニン誘導体と、脂肪酸エステル系界面活性剤とを含み、前記脂肪酸エステル系界面活性剤が、ＨＬＢ値が６〜１８であるソルビタン脂肪酸エステル、ＨＬＢ値が６〜１８であるポリグリセリン脂肪酸エステル、及びＨＬＢ値が１１〜１７であるショ糖脂肪酸エステルのうちの少なくともいずれかを含む。

本発明において、易溶出性アントシアニン組成物における前記アントシアニン誘導体１００重量部に対して、前記脂肪酸エステル系界面活性剤が１重量部以上であることが好ましい。

本発明において、易溶出性アントシアニン組成物における前記アントシアニン誘導体が、ブルーベリー抽出物由来のアントシアニンを含むことが好ましい。

本発明において、易溶出性アントシアニン組成物における前記アントシアニン誘導体が、さらに、アサイー抽出物由来のアントシアニンを含むことが好ましい。

本発明において、易溶出性アントシアニン組成物は、さらに、クロセチンを含むことが好ましい。

本発明によれば、酸性条件化での溶解性が高く、かつ、胃腸、特に腸管での吸収に優れる、易溶出性アントシアニン組成物を提供することができる。

図１は、試料１〜９のゼラチンカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図２は、試料９〜１８のゼラチンカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図３は、試料９、及びＮＩＫＫＯＬ ＤＥＣＡＧＬＹＮ １−Ｌのゼラチンカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図４は、試料９、及びＮＩＫＫＯＬ ＨＥＸＡＧＬＹＮ １−Ｌのゼラチンカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図５は、試料９、及び試料１９〜２２のゼラチンカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図６は、試料９、及び試料２３及び２４のゼラチンカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図７は、試料９、及び試料２５〜２９のゼラチンカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図８は、試料９、及び試料３０のゼラチンカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図９は、試料３１〜３７のハードカプセルからのアントシアニン誘導体の溶出率の経時変化を示す図である。 図１０は、試料３８〜４１のＣａｃｏ−２細胞膜透過性試験におけるアントシアニン誘導体の膜透過量を示す図である。

以下に、本発明の一実施態様に係る易溶出性アントシアニン組成物を説明する。ただし、本発明は、以下に説明する実施の形態によって限定されるものではない。

［易溶出性アントシアニン組成物］
本発明は、一実施態様よれば、易溶出性アントシアニン組成物に関する。本実施形態による易溶出性アントシアニン組成物は、アントシアニン誘導体と、脂肪酸エステル系界面活性剤とを含み、前記脂肪酸エステル系界面活性剤が、ＨＬＢ値が６〜１８であるソルビタン脂肪酸エステル、ＨＬＢ値が６〜１８であるポリグリセリン脂肪酸エステル、及びＨＬＢ値が１１〜１７であるショ糖脂肪酸エステルのうちの少なくともいずれかを含む。

［アントシアニン誘導体］
本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物におけるアントシアニン誘導体としては、特に限定されないが、天然物からの抽出物、又は化学的に合成された化合物を用いることができる。

天然物由来のアントシアニン誘導体としては、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物、及びアサイー抽出物に由来するアントシアニンが挙げられる。これらは、１種単独での使用、又は２種以上の併用ができる。

本実施形態に係るアントシアニン誘導体としては、ブルーベリー抽出物由来のアントシアニンを含むことが好ましい。本実施形態に係るアントシアニン誘導体としてはさらに、アサイー抽出物由来のアントシアニンを含むことが好ましい。

本実施形態に係るアントシアニン誘導体に含まれる具体的な化合物としては、シアニジン−３−Ｏ−グルコシド、シアニジン−３−Ｏ−グルコシルルチノシド、シアニジン−３−Ｏ−ゲンチビオシド、シアニジン−３−Ｏ−ルチノシド、シアニジン−３−Ｏ−サンブニグリン、シアニジン−３−Ｏ−サンブ−５−グルコシド、シアニジン−３−Ｏ−ガラクトシド、シアニジン−３−Ｏ−アラビノシド、ペオニジン−３−Ｏ−ルチノシド、ペオニジン−３−Ｏ−グルコシド、ペオニジン−３−Ｏ−ガラクトシド、ペオニジン、シアニジン、シアニジン−３ソフォロシド、ペラルゴニジン、デルフィニジン、デルフィニジン−３−Ｏ−グルコシド、デルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシド、デルフィニジン−３−Ｏ−アラビノシド、ペチュニジン、ペチュニジン−３−Ｏ−グルコシド、ペチュニジン−３−Ｏ−ガラクトシド、ペチュニジン−３−Ｏ−アラビノシド、マルビジン、マルビジン−３−Ｏ−アラビノシド、マルビジン−３−Ｏ−グルコシド、マルビジン−３−Ｏ−ガラクトシド、ケンフェロール、ヘスペリジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリンなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本実施形態に係るアントシアニン誘導体は、単量体のアントシアニンだけでなく、二量体および重合体（すなわち、３〜２０個のアントシアニジン単量体残基を含む）型のアントシアニンおよびロイコアントシアニジン（フラバン−３，４−ジオールとしても知られる）を含んでいてもよい。アントシアニンは、置換基（例えば、アルキル基、アルコキシ基など）を含み、あるいはＯ−グリコシル化され得る。

［脂肪酸エステル系界面活性剤］
本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物における脂肪酸エステル系界面活性剤は、アントシアニン組成物について、アントシアニン誘導体の溶出性を向上する添加剤として好適に用いられる。

本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物における脂肪酸エステル系界面活性剤としては、ＨＬＢ値が６〜１８であるソルビタン脂肪酸エステル、ＨＬＢ値が６〜１８であるポリグリセリン脂肪酸エステル、及びＨＬＢ値が１１〜１７であるショ糖脂肪酸エステルのうちの少なくともいずれかを含む。

本実施形態に係るＨＬＢ値が６〜１８であるソルビタン脂肪酸エステルとしては、特に限定されない。具体例としては、ヤシ脂肪酸ソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、及びオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等が挙げられる。

本実施形態に係るＨＬＢ値が６〜１８であるポリグリセリン脂肪酸エステルとしては、特に限定されない。具体例としては、モノミリスチン酸ヘキサグリセリル、モノステアリン酸デカグリセリル、モノオレイン酸デカグリセリル、モノラウリン酸デカグリセリル、モノラウリン酸ヘキサグリセリル、及びモノステアリン酸ヘキサグリセリル等が挙げられる。モノステアリン酸ヘキサグリセリルにおいて、特に、ＨＬＢ値が１０〜１５であることが好ましい。

本実施形態に係るＨＬＢ値が１１〜１７であるショ糖脂肪酸エステルとしては、特に限定されない。具体例としては、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルチミン酸エステル、ショ糖ミリスチン酸エステル、及びショ糖オレイン酸エステル等が挙げられる。

上記の必須成分である脂肪酸エステル系界面活性剤の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。特には、脂肪酸エステル系界面活性剤の含有量は、アントシアニン誘導体１００重量部に対して、１重量部以上とすることができる。より好ましい含有量は、アントシアニン誘導体１００重量部に対して、脂肪酸エステル系界面活性剤が１重量部以上であり、さらに好ましくは、脂肪酸エステル系界面活性剤が２重量部以上５０重量部以下であり、さらにより好ましくは、５重量部以上３０重量部以下である。

本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物は、上記必須の脂肪酸エステル系界面活性剤以外に、任意成分としての脂肪酸エステル系界面活性剤を含んでもよい。任意成分としての脂肪酸エステル系界面活性剤としては、特に限定されないが、例えば、上記の必須成分の要件を満たさない、多価アルコールの脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、（ポリ）アルキレングリコール脂肪酸エステル等が挙げられる。

［その他の成分］
本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物が含有するその他の成分としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、カロテノイド類、ビタミン類、ＳＨ基を有するアントシアニン安定化剤、賦形剤、流動化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、矯味剤、香料などが挙げられる。これらは、１種単独での使用、又は２種以上の併用ができる。

本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物におけるその他の成分としては、アントシアニン誘導体を含有する前述の天然物からの抽出物に含まれ得るアントシアニン以外の成分も含まれる。

本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物において、その他の成分として、アサイー抽出物、メグスリノキ抽出物、及びアイブライト抽出物を含むことできる。特に、アサイー抽出物は活性酸素吸収能力の高いため、本発明の組成物を、例えばサプリメントとして用いる場合に、好ましく添加することができる。なお、アサイー抽出物にはアントシアニン誘導体が含まれるため、アサイー抽出物は、アントシアニン誘導体を含む成分として添加することもできる。あるいは、アントシアニン誘導体を含む成分として、ブルーベリー抽出物を含む場合には、ブルーベリー抽出物に加えて、別途、任意成分としてアサイー抽出物を含むことができる。

−カロテノイド類−
カロテノイド類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、動植物から抽出、精製して得られたもの、発酵法あるいは合成法で得られたものなどが挙げられ、いずれも好ましく用いることができる。カロテノイド類の具体例としては、例えば、クロセチン、β−カロテン、α−カロテン、γ−カロテン、β−アポ−８’−カロテナール、β−アポ−１０’−カロテナール、β−アポ−８’−カロテン酸、シトラナキサンチン、リコピン、ゼアキサンチン、クリプトキサンチン、エキネノン、３−ヒドロキシ−β−カロテン、フコキサンチン、ルテイン、アスタキサンチン、カンタキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、ビキシンなどが挙げられる。また天然カロテノイドとしては、例えばアナトー色素、イモカロテン、クチナシ黄色素、エビ色素、オキアミ色素、オレンジ色素、カニ色素、デュナリエラカロテン、トウガラシ色素（別名：パプリカ色素）、トウモロコシ色素、トマト色素、ニンジンカロテン、パーム油カロテン、ファフィア色素、ベニノキ末色素、ヘマトコッカス藻色素、マリーゴールド色素などが挙げられる。これらは、１種単独での使用、又は２種以上の併用ができる。カロテノイド類は、公知の方法により製造したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物におけるカロテノイド類の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

カロテノイド類としては、クロセチンを含むことが好ましい。クロセチンは血流改善作用が高いため、本発明の組成物を、例えばサプリメントとして用いる場合に、好ましく添加することができる。

−ビタミン類−
ビタミン類としては、例えば動植物から抽出、精製して得られたもの、発酵法あるいは合成法で得られたものなどが挙げられ、いずれも好ましく用いることができる。本発明で用いられるビタミン類の具体例としては、例えばビタミンＡ、ビタミンＢ１（塩酸チアミン、硝酸チアミン、硝酸ビスチアミン、塩酸ジセチアミン、塩酸フルスルチアミン、ベンフォチアミンなど）、ビタミンＢ２（リボフラビン、リン酸リボフラビンナトリウム、酪酸リボフラビンなど）、ビタミンＢ６（塩酸ピリドキシン、リン酸ピリドキサールなど）、ビタミンＢ１２（シアノコバラミンなど）、ナイアシン、パントテン酸（パンテノール、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウムなど）、ビオチン、葉酸、ニコチン酸アミド、ビタミンＣ類（Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウムなど）、ビタミンＥ（トコフェロール、コハク酸トコフェロール、コハク酸トコフェロールカルシウムなど）などが挙げられる。これらは、１種単独での使用、又は２種以上の併用ができる。ビタミン類は、公知の方法により製造したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物におけるビタミン類の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

−ＳＨ基を有するアントシアニン安定化剤−
ＳＨ基を有するアントシアニン安定化剤としては、酵母抽出物（例えば、ビール酵母）、ジヒドロリポ酸、アミノ酸塩などのジヒドロリポ酸の塩、システイン、Ｎ−アセチルシステインなどのシステインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの塩、パパインなどのＳＨ−プロテイナーゼ、ブロメライン、フィチン、エヒモパパイン（ｅｈｙｍｏｐａｐａｉｎ）およびそれらの混合物、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システイン含有ペプチド類、グルタチオン含有ペプチド類、発酵カキ抽出物、発酵マメ凝乳、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンなどが挙げられる。これらは、１種単独での使用、又は２種以上の併用ができる。ＳＨ基を有するアントシアニン安定化剤は、公知の方法により製造したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物におけるＳＨ基を有するアントシアニン安定化剤の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物におけるその他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。本実施形態に係る易溶出性アントシアニン組成物におけるその他の成分の含有量としては、アントシアニン誘導体１００重量部に対して、その他の成分のそれぞれについて、０．０１重量部以上２００重量部以下であることが好ましい。

本実施形態に係る組成物は、アントシアニン誘導体及び特定の脂肪酸エステル系界面活性剤と、場合に応じて任意成分とを混合することにより製造することができる。混合方法は特には限定されず、一般的に用いられる、分散といった方法であってよい。

本実施形態に係る組成物は、通常用いられるセルロース等の賦形剤と組み合わせて錠剤の形態とすることもできる。あるいは、本実施形態に係る組成物はＭＣＴ（中鎖脂肪酸）等の希釈油と混合して、ゼラチンカプセル、ハードカプセル等に封入してカプセルの形態とすることもできる。しかし、組成物の製品形態は特には限定されない。

本実施形態による易溶出性アントシアニン組成物は、酸性条件下での高い溶出性と胃腸、特に腸管での高い吸収性を両立することができる。

以下に、本発明の実施例を挙げて、本発明をより詳細に説明する。しかし、本発明は、以下の実施例の範囲に限定されるものではない。

［１．アントシアニン組成物の溶出性の評価］
＜実験例１＞
第十六改正日本薬局方解説書溶出試験法に準拠し、溶出試験用溶液（ＮａＣｌを２ｇと濃塩酸７ｍＬとを純水に溶解して１０００ｍＬとした溶液（日局１液））９００ｍＬを用意した。この溶出試験用溶液に、以下の方法で作製された試料１〜９をそれぞれ入れ、３７℃、５０ｒｐｍの攪拌条件において、溶出試験を行い、アントシアニン組成物の溶出率（％）を得た。

具体的には、上記の通り、溶出試験用溶液に各試料を添加して撹拌することで、ビルベリー濃度が０．１ｍｇ／ｍＬの溶液とした。この溶出試験用溶液を経時的に６ｍＬずつ取り出し、０．４５μｍの孔径の濾過膜を用いてＭＦ濾過を行った。その後、得られた各溶液について、極大吸収波長（５１６ｎｍ）において吸光度を測定した。さらに、０．１ｍｇ／ｍＬのビルベリー抽出物の吸光度（１．９６２）に対する前記各溶液の吸光度の割合を算出し、溶出試験用溶液に対する各試料のゼラチンカプセルからのアントシアニン組成物の溶出率（％）とした。

各試料を含む溶出試験用溶液の溶出率の経時変化の結果は、図１に示される。

（試料１〜９の作製）
市販のカプセル１の内容物（アントシアニン誘導体を３６質量％含有するアントシアニン含有物質）２１３ｍｇに対し、添加剤を加えることによって、アントシアニン組成物を調製した。さらに、このアントシアニン組成物をゼラチンカプセルに充填することによって、試料１〜９を作製した。試料１〜９の添加剤の種類、添加量及び添加剤のＨＬＢ値は、以下の表１にまとめて記載した。表１において、試料３〜８の添加剤は粉末であり、ＨＬＢ値を有さないため、「−」で記載している。また、試料９には添加剤を加えていない。また、市販のカプセル１の内容物は、以下の配合成分を混合することによって、調製されている。

（市販のカプセル１の内容物の配合成分）
ブルーベリー(ビルベリー)抽出物：９０．０ｍｇ
アサイー抽出物：５．０ｍｇ
クロセチン：２．５ｍｇ
ルテイン（フリー体として）：０．５ｍｇ
β−カロテン：０．４５ｍｇ
リコピン：０．０５ｍｇ
ビタミンＢ１：１．０ｍｇ
ビタミンＢ２：０．２ｍｇ
ビタミンＢ６：１．０ｍｇ
ビタミンＢ１２：２０．０μｇ

図１の結果から、添加物を含有しない試料９よりも、アントシアニン組成物の溶出性が向上したと考えられるカプセルは、試料１、試料２（添加剤はいずれも脂肪酸エステル系界面活性剤）及び試料４（添加剤は酵素処理ヘスペリジン）であることが示された。特に試料１及び試料２で高い溶出性が認められた。そこで、上記の結果を踏まえ、アントシアニン誘導体の溶出性の向上に好適な添加物としての脂肪酸エステル系界面活性剤の検討を行った。

［２．アントシアニン組成物における添加剤としての脂肪酸エステル系界面活性剤についての検討］
＜実験例２＞
アントシアニン組成物における脂肪酸エステル系界面活性剤として、ポリグリセリン脂肪酸エステルを含むゼラチンカプセルである試料１０〜１８を前述の試料１〜９の作製方法と同様の方法で作製し、前述の実験例１と同様の方法を用いて、溶出試験を行った。試料１０〜１８の添加剤の種類、添加量及び添加剤のＨＬＢ値は、以下の表２にまとめて記載した。各試料を含む溶出試験用溶液の溶出率の経時変化の結果は、図２に示される。なお、比較のために、図２には、試料９の結果も記載している。

図２の結果から、添加物を含有しない試料９よりも、アントシアニン組成物の溶出性が向上したと考えられるカプセルは、試料１１〜１８であることが示された。ここで、試料１８の溶出率が１００％を超えている理由としては、アントシアニン組成物のカプセルに詰めた際の充填量や、アントシアニン誘導体に添加物を配合した際の混合均一性が、吸光度に影響するためであると考えられる。一方、試料１０のアントシアニン組成物の溶出率は、試料９の溶出率よりも低下している。アントシアニン組成物において、添加物として、ＨＬＢ値の高いポリグリセリン脂肪酸エステル系界面活性剤を選択することによって、アントシアニン組成物の溶出性を向上する効果が得られることが明らかになった。

＜実験例３＞
前述の実験例２の結果において、試料１６のＮＩＫＫＯＬ ＤＥＣＡＧＬＹＮ １−Ｌと試料１８のＮＩＫＫＯＬ ＨＥＸＡＧＬＹＮ １−Ｌがアントシアニン組成物の溶出を向上させる効果が特に高い添加剤であることが示された。前述の試料１６に含有されるＮＩＫＫＯＬ ＤＥＣＡＧＬＹＮ １−Ｌを添加剤として、添加量がそれぞれ５ｍｇ、１０ｍｇ、及び２０ｍｇであるアントシアニン組成物を充填したゼラチンカプセルについて、実験例１と同様の方法でアントシアニン組成物の溶出試験を行った。上記のゼラチンカプセルを含む溶出試験用溶液の溶出率の経時変化の結果は、図３に示される。なお、比較のために、図３には、試料９の結果も記載している。

同様に、前述の試料１８に含有されるＮＩＫＫＯＬ ＨＥＸＡＧＬＹＮ １−Ｌを添加剤として、添加量がそれぞれ５ｍｇ、１０ｍｇ、及び２０ｍｇであるアントシアニン組成物を充填したゼラチンカプセルについて、実験例１と同様の方法でアントシアニン組成物の溶出試験を行った。上記のゼラチンカプセルを含む溶出試験用溶液の溶出率の経時変化の結果は、図４に示される。なお、比較のために、図４には、試料９の結果も記載している。

図３におけるＮＩＫＫＯＬ ＤＥＣＡＧＬＹＮ １−Ｌを用いた溶出試験の結果、及び図４におけるＮＩＫＫＯＬ ＨＥＸＡＧＬＹＮ １−Ｌを用いた溶出試験の結果からはいずれも、アントシアニン誘導体に対するポリグリセリン脂肪酸エステルの添加量が多いほど、アントシアニン組成物の溶出性が向上する効果が得られることが示された。

＜実験例４＞
アントシアニン組成物における脂肪酸エステル系界面活性剤として、ショ糖脂肪酸エステルを含むゼラチンカプセルである試料１９〜２２を前述の試料１〜９の作製方法と同様の方法で作製し、前述の実験例１と同様の方法を用いて、溶出試験を行った。試料１９〜２２の添加剤の種類、添加量及び添加剤のＨＬＢ値は、以下の表３にまとめて記載した。各試料を含む溶出試験用溶液の溶出率の経時変化の結果は、図５に示される。なお、比較のために、図５には、試料９の結果も記載している。

図５の結果から、脂肪酸エステル系界面活性剤として、ショ糖脂肪酸エステルを含む試料１９〜２２のゼラチンカプセルにおけるアントシアニン組成物の溶出性がいずれも、添加物を含有しない試料９のアントシアニン組成物の溶出性よりも高かった。

＜実験例５＞
アントシアニン組成物における脂肪酸エステル系界面活性剤として、ソルビタン脂肪酸エステルを含むゼラチンカプセルである試料２３及び２４を前述の試料１〜９の作製方法と同様の方法で作製し、前述の実験例１と同様の方法を用いて、溶出試験を行った。試料２３及び２４の添加剤の種類、添加量及び添加剤のＨＬＢ値は、以下の表４にまとめて記載した。各試料を含む溶出試験用溶液のモル濃度及び溶出率の経時変化の結果は、図６に示される。なお、比較のために、図６には、試料９の結果も記載している。

図６の結果から、脂肪酸エステル系界面活性剤として、ソルビタン脂肪酸エステルを含む試料２３及び２４のゼラチンカプセルにおけるアントシアニン組成物の溶出率はいずれも、添加物を含有しない試料９のアントシアニン組成物の溶出率よりも高くなった。したがって、ソルビタン脂肪酸エステルを、アントシアニン誘導体の添加剤として用いることによって、アントシアニン組成物の溶出性が向上する効果が得られることが示された。また、試料２３のソルビタン脂肪酸エステルの２０ｍｇの添加量よりも少ない、１０ｍｇの添加量の試料２４によっても、アントシアニン組成物の溶出率を向上させることができることも示されている。上記の結果からは、アントシアニン組成物の溶出率が、よりＨＬＢ値の低いソルビタン脂肪酸エステルの添加剤としての含有によっても向上することが示された。

＜実験例６＞
アントシアニン組成物における脂肪酸エステル系界面活性剤として、グリセリン脂肪酸エステルを含むゼラチンカプセルである試料２５を前述の試料１〜９の作製方法と同様の方法で作製し、前述の実験例１と同様の方法を用いて、溶出試験を行った。試料２５の添加剤の種類、添加量及び添加剤のＨＬＢ値は、以下の表５に記載した。また、アントシアニン組成物における脂肪酸エステル系界面活性剤として、グリセリン脂肪酸エステル及びポリグリセリン脂肪酸エステルの混合物を含むゼラチンカプセルである試料２６〜２９を前述の試料１〜９の作製方法と同様の方法で作製し、前述の実験例１と同様の方法を用いて、溶出試験を行った。試料２６〜２９の添加剤の種類及び添加量は、以下の表５に記載した。各試料を含む溶出試験用溶液の溶出率の経時変化の結果はそれぞれ、図７に示される。なお、比較のために、図７には、試料９の結果も記載している。

図７の結果から、脂肪酸エステル系界面活性剤として、グリセリン脂肪酸エステルのみを含む試料２５のゼラチンカプセルにおけるアントシアニン組成物の溶出率は、添加物を含有しない試料９のアントシアニン組成物の溶出率よりも低いことがわかった。一方、脂肪酸エステル系界面活性剤として、グリセリン脂肪酸エステル及びポリグリセリン脂肪酸エステルの混合物を含む試料２６〜２９のゼラチンカプセルにおけるアントシアニン組成物の溶出性はいずれも、添加物を含有しない試料９のアントシアニン組成物のものよりも向上することが示された。特に、試料２６〜２９を比較すると、混合物において、ポリグリセリン脂肪酸エステルの割合がより高いアントシアニン組成物の溶出性が、向上することが明らかになった。上記の結果から、単独では溶出率を向上させることができなかった脂肪酸エステル系界面活性剤と、溶出率を向上させる効果のある脂肪酸エステル系界面活性剤との混合物を添加剤として用いることによっても、アントシアニン組成物の溶出性が向上することが示された。

＜実験例７＞
アントシアニン組成物における脂肪酸エステル系界面活性剤として、モノステアリン酸ヘキサグリセリルを含むゼラチンカプセルである試料３０を前述の試料１〜９の作製方法と同様の方法で作製し、前述の実験例１と同様の方法を用いて、溶出試験を行った。試料３０の添加剤の種類、添加量及び添加剤のＨＬＢ値は、以下の表６に記載した。試料３０を含む溶出試験用溶液の溶出率の経時変化の結果は、図８に示される。なお、比較のために、図８には、試料９の結果も記載している。

図８の結果から、脂肪酸エステル系界面活性剤として、モノステアリン酸ヘキサグリセリルを含む試料３０のゼラチンカプセルにおけるアントシアニン組成物の溶出率は、添加物を含有しない試料９のアントシアニン組成物の溶出率よりも高くなった。したがって、モノステアリン酸ヘキサグリセリルを、アントシアニン誘導体の添加剤として用いることによって、アントシアニン組成物の溶出性が向上する効果が得られることが示された。

［３．易溶出性アントシアニン組成物を充填したハードカプセルの溶出性についての評価］
＜実験例８＞
前述の実験例１〜７の結果を踏まえ、市販品として用いられているハードカプセルにアントシアニン組成物を充填した試料を作製し、アントシアニン組成物の溶出性を検討した。なお、ゼラチンカプセルと比較するとハードカプセルを用いたときには、崩壊後にベッセル中での内容物のマウントが認められたため、攪拌条件を５０ｒｐｍから１００ｒｐｍへと変更し、溶出試験を行った。

溶出試験用溶液（ＮａＣｌを２ｇと濃塩酸７ｍＬとを純水に溶解して１０００ｍＬとした溶液（日局１液））９００ｍＬを用意した。この溶出試験用溶液に、以下の方法で作製された試料３１〜３７をそれぞれ入れ、３７℃、１００ｒｐｍの攪拌条件において、溶出試験を行い、アントシアニン組成物の溶出率（％）を得た。

具体的には、上記の通り、溶出試験用溶液に各試料を添加して撹拌することで、ビルベリー濃度が０．１１ｍｇ／ｍＬの溶液とした。この溶出試験用溶液を経時的に６ｍＬずつ取り出し、０．４５μｍの孔径の濾過膜を用いてＭＦ濾過を行った。その後、得られた各溶液について、極大吸収波長（５１６ｎｍ）において吸光度を測定した。さらに、０．１１ｍｇ／ｍＬのビルベリー抽出物の吸光度（１．９６２）を基準とした割合を、溶出試験用溶液に対する、各試料のゼラチンカプセルからのアントシアニン組成物の溶出率（％）として算出した。各試料を含む溶出試験用溶液の溶出率の経時変化の結果は、図９に示される。

（試料３１〜３７の作製）
市販のカプセル１もしくはカプセル２の内容物、またはブルーベリーエキス末に対し、添加剤を加えることによって、アントシアニン組成物を調製した。さらに、このアントシアニン組成物をハードカプセル（クオリカプス社製、ゼラチンハードカプセル３号）に充填することによって、試料３１〜３７を作製した。試料３１〜３７のアントシアニン誘導体の種類と配合量、添加剤の種類、添加量及び添加剤のＨＬＢ値は、以下の表７に記載した。試料３１、３２及び３５には、下記の市販のカプセル２の内容物を用いた。試料３４及び３６には、実験例１において詳述した市販のカプセル１の内容物を用いた。試料３７のアントシアニン組成物には、アントシアニン誘導体としてブルーベリー抽出物を含むブルーベリーエキス末を用いた。市販のカプセル２の内容物は、以下の配合成分を混合することによって、調製された。

（市販のカプセル２の内容物の配合成分）
ブルーベリー（ビルベリー）抽出物：１００．０ｍｇ
メグスリノキ抽出物：５．０ｍｇ
アイブライト抽出物：５．０ｍｇ
ルテイン（フリー体として）：５．０ｍｇ
アスタキサンチン（フリー体として）：３．０ｍｇ
ビタミンＢ１：２．０ｍｇ
ビタミンＢ２：０．５ｍｇ
ビタミンＢ６：２．０ｍｇ
ビタミンＢ１２：２０．０μｇ
ビタミンＥ：９．０ｍｇ

図９の結果から、脂肪酸エステル系界面活性剤として、ソルビタン脂肪酸エステルを含む試料３１及び３２のハードカプセルにおけるアントシアニン組成物の溶出率は、添加物を含有しない試料３５のアントシアニン誘導体の溶出率よりも高くなった。したがって、ソルビタン脂肪酸エステルを、市販のハードカプセルに充填されたアントシアニン誘導体の添加剤として用いることによっても、アントシアニン組成物の溶出性が向上する効果が得られることが示された。

［４．アントシアニン組成物におけるアントシアニン誘導体の膜透過性についての検討］
＜実験例９＞
次に、アントシアニン組成物におけるアントシアニン誘導体の腸管吸収性を評価した。具体的には、薬物の膜透過性測定試験に一般に使用されているＣａｃｏ−２細胞（ヒト結腸癌由来上皮細胞）を用いて、アントシアニン誘導体の膜透過性の検討を行った。

まず、Ｃａｃｏ−２細胞を、１２穴トランズウェル（直径;１２ｍｍ、細孔径;３．０μｍ、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏａｓｔａｒ社製）のインサートのメンブレン上に３．２５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ^２となるように播種し、２１日間培養した。細胞間にタイトジャンクションが形成されていることを確認するために、Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ ＥＲＳ−２（Ｍｅｒｃｋ ＭｉＬＬＩＰＯＲＥ社製）を用いて膜抵抗値を測定し、４００Ω以上であることを確認した。

培養液を除去した後、インサートを０．５ｍＬの５ｍＭ ＭＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ６．５）で２回洗浄した。また、マルチウェルプレートは１．５ｍＬの１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．４）で２回洗浄した。ＭＥＳは、２−（Ｎ−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＳＩＧＭＡ社製）の略称、ＨＢＳＳは、Ｈａｎｋ’ｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｇｉｂｃｏ社製）の略称、ＨＥＰＥＳは、４−（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＳＩＧＭＡ社製）の略称である。ＭＥＳをＨＢＳＳに溶解することにより、ＭＥＳ濃度が５ｍＭのＭＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒを、ＨＥＰＥＳをＨＢＳＳに溶解することにより、ＨＥＰＥＳ濃度が１０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒを、それぞれ作製した。

続けてインサートには５ｍＭのＭＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ６．５）を０．５ｍＬ添加し、マルチウェルプレートには１０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．４）を１．５ｍＬ添加し、３０分間静置して平衡化した。

また、下記試料３８〜４１について、溶出試験で１２０分間に溶解した溶出量に基づき、本膜透過性試験に最適なアントシアニン濃度を算出し、試験用サンプルを調整した。各試験用サンプルは、各試料を５ｍＭのＭＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒで希釈することで調整し、アントシアニン濃度はそれぞれ、試料３８（ブルーベリーエキス末）では６．３μｇ／ｍＬ、試料３９（市販のカプセル１）では２２．３μｇ／ｍＬ、試料４０（市販のカプセル２）では８７．８μｇ／ｍＬ、試料４１（市販のカプセル２に添加剤を添加した試料）では１０４．０４μｇ／ｍＬとした。

その後、インサートからＭＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒを０．２５ｍＬ取り出し、代わりに上記試験用サンプル（試料３８〜４１）をそれぞれ０．２５ｍＬ添加し、３７℃で３０分間培養した。培養開始から３０分経過後に、マルチウェルプレートからＨＥＰＥＳ−ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒを１ｍｌずつ採取し、ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ社製）を用いてアントシアニン濃度を定量した。これにより、Ｃａｃｏ−２細胞を透過したアントシアニン量を測定することができる。測定結果は、図１０に示される。

図１０の結果から、アントシアニン誘導体のみを含む試料３８〜４０よりも、アントシアニン誘導体とともに添加剤を含む試料４１の方が、Ｃａｃｏ−２細胞の透過性に優れることが示された。上記の結果は、アントシアニン誘導体と添加剤とを含む組成物が、腸管吸収性に優れる効果を奏することを示した。

Claims (5)

1. アントシアニン誘導体と、脂肪酸エステル系界面活性剤とを含み、
   前記脂肪酸エステル系界面活性剤が、ＨＬＢ値が６〜１８であるソルビタン脂肪酸エステル、ＨＬＢ値が６〜１８であるポリグリセリン脂肪酸エステル、及びＨＬＢ値が１１〜１７であるショ糖脂肪酸エステルのうちの少なくともいずれかを含む、易溶出性アントシアニン組成物。
2. 前記アントシアニン誘導体１００重量部に対して、前記脂肪酸エステル系界面活性剤が１重量部以上である、請求項１に記載の易溶出性アントシアニン組成物。
3. 前記アントシアニン誘導体が、ブルーベリー抽出物由来のアントシアニンを含む、請求項１又は２に記載の易溶出性アントシアニン組成物。
4. 前記アントシアニン誘導体が、さらに、アサイー抽出物由来のアントシアニンを含む、請求項３に記載の易溶出性アントシアニン組成物。
5. さらに、クロセチンを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の易溶出性アントシアニン組成物。