JP2020090465A - リンゴ幼果抽出物を用いた方法、組成物、剤 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、リンゴ幼果抽出物の新たな用途を提供することを目的とする。
本発明の方法は、リンゴ幼果抽出物を配合した組成物を使用する、表皮及び/又は角層ケラチンの結合水及び/又は自由水を回復する方法、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化を抑制する方法、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化を回復する方法である。
本発明の組成物は、本発明の方法で使用されるリンゴ幼果抽出物が配合された皮膚用組成物である。
本発明の剤は、リンゴ幼果抽出物を有効成分とする、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化抑制剤、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化回復剤、表皮及び/又は角層の水分保持能改善剤である。
本実施形態の方法は、リンゴ幼果抽出物を配合した組成物を使用する方法であり、より具体的には、表皮及び/又は角層ケラチンの結合水及び/又は自由水を回復する方法、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化を抑制する方法、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化を回復する方法としてよい。本実施形態の方法は、医療行為以外において使用される。
本実施形態の方法に用いられる組成物は、後述の本実施形態の組成物としてよい。
このとき、「幼果」には、未成熟の果実の全部又は一部を含めてよく、具体的には、果皮、果肉、ピュレ、果汁、種子を含めてよい。
抽出に供するリンゴ幼果としては、生のものであってもよく、加工物であってもよい。摘果直後のものを用いてもよく、また、腐敗が進んでいない限り、摘果してしばらく経ったものを用いてもよい。また、リンゴ幼果は、抽出に供する前に、抽出が効率的に行われるように、裁断・粉砕等の前処理を行ってもよい。前処理は、特に限定されないが、低温粉砕や凍結粉砕が好ましい。
抽出溶媒としては、特に限定されないが、例えば、水、低級アルコール類(メタノール、エタノール、1−プロパノール、2−プロパノール、1−ブタノール、2−ブタノール等)、多価アルコール類(グリセリン、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール(BG)等)、ケトン類(アセトン、メチルケトン等)、エーテル類(ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等)、酢酸エチル等のエステル類;ヘキサン等が挙げられ、中でも、使用性、安全性の点で水、低級アルコール類、多価アルコール類が好ましい。これらは、1種単独で用いてもよく、2種以上を組み合せて用いてもよい。
抽出のための条件は、当業者であれば適宜設計することができるが、例えば、リンゴ幼果を室温条件(1〜30℃)又は加温条件(50〜80℃)下で、抽出溶媒中に1時間〜数か月の期間浸漬する条件としてよく、低温条件(1〜15℃)下で、1〜10日間が特に好ましい。
抽出に供するリンゴ幼果と抽出溶媒との質量比は、適宜設計してよく、例えば、抽出溶媒の量の下限は、リンゴ幼果100質量部に対して、原料が十分に浸漬できる量であれば特に限定されず、50質量部以上であることが好ましく、100質量部以上であることがより好ましく、200質量部以上であることがより好ましい。抽出溶媒の量の上限は、経済的な観点から定めることもでき、原料100質量部に対して、例えば、10000質量部以下とすることができ、5000質量部以下とすることが好ましく、1000質量部以下とすることがより好ましい。
また、抽出溶媒として水を用いる場合の抽出は、水蒸気蒸留の方法によってもよい。固形物の除去は常法によってよい。
得られるリンゴ幼果抽出物の溶媒を除去した固形分濃度は、0.1〜10質量%であってよい。
果汁は、洗浄した原料たるリンゴ幼果をpH3.2〜4.6、好ましくはpH3.4〜4.3で破砕し(pH測定温度:20℃)、得られた破砕物をペクチナーゼ処理して清澄化を行い、固形物を除くことによって得てよい。
上記の結合水及び/又は自由水に関する効果を奏する機序は、次のとおりと考えられる。
ヒト及び非ヒトを含む動物において、皮膚の表皮及び角層には細胞骨格を構成するタンパク質であるケラチンが含まれている。ケラチンの二次元構造は主としてα−ヘリックス構造であり、α−ヘリックス構造の量を保つことが、表皮及び/又は角層の細胞骨格を好適に保つうえで肝要である。発明者らは、リンゴ幼果抽出物が、ケラチンに対して水和構造の安定化といった作用をして、α−ヘリックス構造が保たれやすくする効果を備えることを示唆する結果を得た。より具体的には、リンゴ幼果抽出物は、後述の実施例においても記載されるとおり、ヒト表皮由来ケラチンのα−へリックス構造の変化を抑制する効果、また、α−へリックス構造の変化を回復する効果を奏する。
発明者らの上記知見は今回の発明により新たに見出されたものといえる。
本実施形態の組成物は、リンゴ幼果抽出物を配合したものである。
本実施形態の組成物に用いられるリンゴ幼果抽出物については、本実施形態の方法に用いられるリンゴ幼果抽出物と同様としてよい。
また、組成物は、油性系、油中水型乳化系、水中油型乳化系等、種々の剤形で調製してよい。
具体的には、組成物は、化粧水、乳液、クリーム、美容液、化粧油、リップクリーム、ハンドクリーム、洗顔料、クレンジング料等のスキンケア化粧料;ファンデーション、メイクアップ下地、ほほ紅、アイシャドウ、マスカラ、アイライナー、アイブロウ、オーバーコート剤、口紅、リップグロス等のメイクアップ化粧料;ヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、リンス、コンディショナー、整髪料等の頭皮又は毛髪用の化粧料;マッサージ化粧料等、種々の化粧料とすることができる。
本実施形態の組成物は、本実施形態の方法において好適に使用される。
本実施形態の剤は、リンゴ幼果抽出物を有効成分とするものであり、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化抑制剤、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化回復剤、表皮及び/又は角層の水分保持能改善剤、表皮及び/又は角層のダメージ回復剤、表皮及び/又は角層のダメージ抑制剤等が挙げられる。
なお、前述のとおり、リンゴ幼果抽出物は、後述の実施例においても記載されるとおり、ヒト表皮由来ケラチンのα−ヘリックス構造の変化を回復、抑制する効果を備えることから、表皮及び/又は角層ケラチンにおけるα−へリックス構造の変化抑制、変化回復による、熱、酸化、紫外線等の刺激やダメージからの回復及び/又はこれらの抑制の効果を期待できる。
[リンゴ幼果抽出物]
果径20mm以内の北海道産ハックナイン種の落花後1月以内の幼果(未熟果)に対し、13倍量の20%(w/w)1,3−ブチレングリコール(1,3−Butylene Glycol)水溶液を加え、低温(1〜15℃)にて2日間抽出した。溶媒を除去した固形分濃度は0.3質量%であった。
<測定方法>
測定装置:円二色分散計J−720(日本分光株式会社)及びペルチェ式恒温キュベットホルダーPTC−423L(日本分光株式会社)を用い、分光光度計用の石英セルで光路長1mmのものを使用した。測定条件は以下のとおりとした。
測定セル:石英1mmセル
測定波長:190〜250nm
感度:スタンダード
温度範囲:20.0〜98.0℃
昇温速度:1.0℃/min
測定サンプル:ヒト表皮由来ケラチン(SIGMA−ALDRICH社製)を5mM Na2PO4/NaHPO4 buffer,50mM NaCl,pH 7.4の緩衝液にて十分に透析した後、測定可能な濃度まで同緩衝液で希釈したもの。コントロールAサンプルは、緩衝液で希釈したのみであるのに対し、リンゴ幼果抽出物添加の実施例Aサンプルは、溶液中に1容量%となるよう成分を添加した。
測定・解析条件:下記の手順に従って各サンプルの測定を行い、(1)と(4)との比較によって、加熱・冷却後のα−ヘリックス構造の再生率を算出し、(2)によって、熱変性温度を得た。
(1)20.0℃にて波長190〜250nmでのCDスペクトル測定を行う。
(2)波長を222nmに固定し、同一サンプルを20.0〜98.0℃まで1.0℃/minで昇温測定する
(3)98.0℃での測定終了時から10分間静置した後、ペルチェ温調により20.0℃まで冷却した。
(4)20.0℃で10分間静置した後、再び20.0℃にて波長190〜250nmのCDスペクトル測定を行う。
図1は、CDスペクトル測定の実験において、コントロールAサンプル(リンゴ幼果抽出物無添加)についてCDスペクトル測定を行ったときの波長(nm)に対するθobs(mdeg)のチャートである。バツ印及びこれらを結ぶ曲線は、昇温前のチャートを示し、黒丸印及びこれらを結ぶ曲線は、加熱・冷却後のチャートを示す図である。
この結果から、リンゴ幼果抽出物存在下での加熱により、ヒト表皮由来ケラチンの構造変化が抑制される効果、及び/又はリンゴ幼果抽出物存在下での冷却により、ヒト表皮由来ケラチンの構造が回復する効果が得られることがわかった。
図4は、測定波長を222nmに固定して20.0〜98.0℃までサンプルを昇温しながら測定して得られた熱変性曲線である。コントロールAとリンゴ幼果抽出物添加の実施例Aサンプルとの熱変性曲線の変曲点から熱変性温度(℃)を算出したところ、コントロールAでは39.28℃であったのに対しリンゴ幼果抽出物添加の実施例Aサンプルでは48.92℃であった。すなわちリンゴ幼果抽出物の添加によりケラチンタンパク質のα−ヘリックス構造の熱力学的安定性が向上することが示された。
<測定方法>
測定装置:SPring−8 BL43IRにて湿度RH30%環境下とする調湿装置を用いた。
測定サンプル:市販ヒト皮膚から角層を剥離し10mm×10mm角のヒト皮膚由来角層シートを以下に示す各条件で処理したもの。
(1)未処理サンプル:特に処理をしなかったもの。
(2)(コントロールBサンプル):3%H2O2水溶液(pH 10.4)に20分間浸漬してダメージ処理を行い、その後水洗する処理を7回繰り返した後、25℃環境下で24時間乾燥させたもの。
(3)(実施例Bサンプル):上記のダメージ処理の後にリンゴ幼果抽出物水溶液(原液1質量%含有)に3時間浸漬し、その後25℃環境下で24時間乾燥させたもの。
測定・解析条件:アパーチャーサイズ約10μm×10μmとし、10μmステップ(各アパーチャー箇所の縦間隔及び横間隔がいずれも10μm)、積算回数512回で、X=5、Y=4の20箇所を測定した。測定結果はベースライン補正を行い、タンパク質のアミド結合に由来するアミドIモードのピーク面積(波数1806〜1600cm-1)で規格化した水の総量(波数3620〜3100cm-1)、結合水(波数3420〜3245cm-1)、自由水(波数3620〜3420cm-1)のピーク面積を算出した。
図5は、顕微IR測定の実験において、未処理サンプル、コントロールBサンプル(リンゴ幼果抽出物無添加)、実施例Bサンプル(リンゴ幼果抽出物添加)について顕微IR測定を行ったときのピーク面積(任意単位)を示すグラフである。
今回酸化によるダメージ処理を行ったコントロールBサンプルでは、結合水、自由水ともに未処理サンプルに比べて減少したが、その後、リンゴ幼果抽出物を添加した実施例Bサンプルでは、結合水、自由水ともに未処理サンプルに近い水準にまで回復することが示された。また、実施例Bサンプルでは、コントロールBサンプルの場合と比較して、水の総量についても回復が見られた。すなわち、リンゴ幼果抽出物は、酸化ダメージにより低下する角層内の水分量を本質的に改善することが示された。
Claims (7)
- リンゴ幼果抽出物を配合した組成物を使用する、表皮及び/又は角層ケラチンの結合水及び/又は自由水を回復する方法。
- リンゴ幼果抽出物を配合した組成物を使用する、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化を抑制する方法。
- リンゴ幼果抽出物を配合した組成物を使用する、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化を回復する方法。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法で使用されるリンゴ幼果抽出物が配合された皮膚用組成物。
- リンゴ幼果抽出物を有効成分とする、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化抑制剤。
- リンゴ幼果抽出物を有効成分とする、表皮及び/又は角層ケラチンのα−へリックス構造の変化回復剤。
- リンゴ幼果抽出物を有効成分とする、表皮及び/又は角層の水分保持能改善剤。
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