JP2020007326A - 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント - Google Patents
変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020007326A JP2020007326A JP2019150876A JP2019150876A JP2020007326A JP 2020007326 A JP2020007326 A JP 2020007326A JP 2019150876 A JP2019150876 A JP 2019150876A JP 2019150876 A JP2019150876 A JP 2019150876A JP 2020007326 A JP2020007326 A JP 2020007326A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fragment
- factor
- igg4
- mutated
- pro
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Ser−Cys−Pro(配列番号1)
Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Pro−Ser−Cys−Pro,Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Ser−Pro,Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Ser,Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Pro,Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Ser,Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys,Glu−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys,Glu−Ser−Pro−Ser−Cys−Pro,Glu−Pro−Ser−Cys−Pro,Pro−Ser−Cys−Pro,Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Ser−Cys−Pro,Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Pro−Ser−Cys−Pro,Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Ser−Cys−Pro,Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys,Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro,Glu−Ser−Lys−Pro−Ser−Cys−Pro,Glu−Ser−Pro−Ser−Cys−Pro,Glu−Pro−Ser−Cys
であってもよく、大腸菌などの原核細胞や、酵母細胞、昆虫細胞、動物細胞などの真核細胞から遺伝子組換えにより生産されたものであってもよく、また天然のものと同等の活性を有し、1つ以上のアミノ酸位置で突然変異が起こった誘導体であってもよい。
<1−1>IgG4 Fc領域発現ベクターの作製
IgG4のヒンジ領域を含む重鎖Fc領域をクローニングするために、ヒトの血液から得られた血球細胞のRNAを鋳型とし、次のようにRT−PCRを行った。まず、Qiamp RNA血液キット(Qiagen社)を用いて約6の血液から全RNAを分離し、その後このRNAを鋳型とし、One−Step RT−PCRキット(Qiagen社)を用いて遺伝子を増幅した。ここで、プライマーとしては、配列番号4(gggcatatgc catcatgccc agcacctgag ttcctgggg)と5(gggggatccc tatttaccca gagacaggga ga)の対を用いた。その後のクローニング過程を容易にするために、プライマーにはNdeI制限酵素認識部位とタンパク質発現のために必要な開始コドンであるATGを挿入し、配列番号5の3−プライマーには終止コドンを含むBamHI制限酵素認識部位を挿入した。こうして増幅されたFc領域産物をそれぞれNdeIとBamHIで切断し、その後同じ制限酵素で処理したプラスミドpET22b(Novagen社)に挿入してプラスミドを作製した。プラスミドは、IgG4 FcフラグメントがIgG4 Fcヒンジの全アミノ酸配列であるGlu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Ser−Cys−Proのうち1〜8番目のアミノ酸残基が欠失したヒンジ配列を含むように設計されている。
実施例<1−1>で得られた微生物形質転換体を発酵槽(Marubishi社)に接種して発酵させ、その後のIgG4 Fcフラグメントの発現の有無を確認した。
1)顆粒球コロニー刺激因子とPEG連結体の作製
両末端に官能基であるアルデヒド基を有する分子量3.4kDaのポリ(エチレングリコール)であるALD−PEG−ALD(Shearwater Inc. 米国)を、顆粒球コロニー刺激因子が5mg/mlの濃度で溶解した100mMリン酸塩緩衝液に、顆粒球コロニー刺激因子:PEGのモル比が1:5となるように添加した。還元剤であるナトリウムシアノボロハイドライド(NaCNBH3)を最終濃度20mMとなるように添加し、4にてゆっくり攪拌しながら3時間反応させた。顆粒球コロニー刺激因子のN末端部位に選択的にPEGが連結され、PEGと顆粒球コロニー刺激因子が1:1で結合された連結体を得るために、反応混合物に対してスーパーデックス(Superdex R, Pharmacia, 米国)サイズ排除(size exclusion)クロマトグラフィーを行った。溶出液として10mMカリウム−ホスフェート緩衝液(pH6.0)を用いて顆粒球コロニー刺激因子−PEG連結体を精製し、PEGに結合しない顆粒球コロニー刺激因子、未反応PEG、及び2つの顆粒球コロニー刺激因子がPEGに連結した二量体副産物を除去した。精製した顆粒球コロニー刺激因子−PEG連結体を5mg/mlに濃縮した。
本発明のIgG4 Fcフラグメントを100mMリン酸塩緩衝液に溶解した。前述したように精製した顆粒球コロニー刺激因子−PEG連結体の官能基であるアルデヒド基にIgG4 Fcフラグメントを結合させるために、顆粒球コロニー刺激因子−PEG連結体:IgG4 Fcフラグメントのモル比が1:5となるように顆粒球コロニー刺激因子−PEG連結体をIgG4 Fcフラグメント含有緩衝液に加えた。還元剤としてナトリウムシアノボロハイドライド(NaCNBH3)を最終濃度が20mMとなるように添加した。反応混合物を4にて20時間ゆっくり攪拌しながら反応させた。結合反応後、未反応物質及び副産物を除去し、生成された顆粒球コロニー刺激因子−PEG−免疫グロブリンタンパク質結合体を精製するために、陰イオン交換クロマトグラフィーを行った。20mMトリス緩衝液(pH7.5)で平衡化したDEAEカラム(Pharmacia, 米国)に前記反応物を加え、1M塩化ナトリウム(NaCl)を含む同じ緩衝液を直線濃度勾配(塩化ナトリウム濃度0M→0.5M)法で溶出させて顆粒球コロニー刺激因子−PEG−IgG4 Fcフラグメント結合体を精製した。得られた顆粒球コロニー刺激因子−PEG−IgG4 Fcフラグメント分画に不純物として混入している少量の未反応免疫グロブリン及びヒト成長ホルモンを除去するために、さらに陽イオン交換樹脂クロマトグラフィーを行った。顆粒球コロニー刺激因子−PEG−IgG4 Fcフラグメント分画を10mM酢酸ナトリウム(pH4.5)で平衡化したpolyCATカラム(PolyLC, 米国)に加え、1M塩化ナトリウム(NaCl)を含む10mM酢酸ナトリウム(pH4.5)緩衝液を直線濃度勾配(塩化ナトリウム濃度0M→0.5M)法で溶出させて追加精製を行い、顆粒球コロニー刺激因子−PEG−IgG4 Fcフラグメント結合体(HM10460A)を純粋に得た。
ヒトIgG42mgを20mg/mLのビオチン−7−NHL溶液と1:10の分子比で混合してビオチン標識し、その後ビオチンタンパク質ラベリングキット(Biotin Protein Labelling Kit)(Roche)で精製した。正常ラットから採血した血液をヘパリンで凝固防止処理し、その後ペニシリン−ストレプトマイシン1%v/vを添加した。ビオチン標識したIgG4 1.5mgとHM10460A 1.32mgを3mLの血液に添加して混合し、その後0.5mLずつ6つのチューブに分注し、37の培養器で培養した。0、4、10、24、48時間後にチューブを1つずつ取り、血漿を分離して−20にて保管した。各血漿試料と標準物質を非還元タンパク質サンプルバッファ(protein sample buffer)と混合し、4〜15%濃度勾配ポリアクリルアミドゲルを用いてSDS−PAGEを行った。標準物質としては、ビオチン標識したIgG4とHM10460Aを用いた。電気泳動が終了したゲルは、PVDFメンブレン(Immobilon-P, MILLIPORE)でブロッティングし、抗ヒトGCSF抗体とストレプトアビジン−HRPを用いて分析した。これらの抗体結合条件は、抗ヒトIgG Fc抗体(Anti-human IgG, Fc specific, Sigma)を5% スキムミルクのブロッキング条件で1:150000の割合で希釈して用い、抗ヒトGCSF抗体(Human G-CSF Assay Kit. IBL)を1% スキムミルクのブロッキング条件で1:2000の割合で希釈して用い、ストレプトアビジン−HRPを5% スキムミルクのブロッキング条件で1:5000の割合で希釈して用いた。HM10460Aは、HM10460A自体の鎖交換機序により、IgG4 Fcフラグメント1分子に2つのG−CSFを有する二量体(94kDa)とIgG4 Fcフラグメント(50kDa)を形成することが確認された。
ドナーから採血したヒト血液にペニシリン−ストレプトマイシン1%v/vを添加した。実施例1で作製した1.32mgのHM10460Aを血液3mLと混合し、その後0.5mLずつ6つのチューブに分注し、37の培養器で培養した。0、4、10、24、48時間後にチューブを1つずつ取り、血漿を分離して分析時まで−20にて保管した。各血漿試料と対照物質として様々な濃度のHM10460A、IgG4 Fcフラグメントを非還元タンパク質サンプルバッファと混合し、4〜15%濃度勾配ポリアクリルアミドゲルにてSDS−PAGEを行った。電気泳動が終了したゲルは、PVDFメンブレン(Immobilon-P, MILLIPORE)でブロッティングし、抗ヒトGCSF抗体を用いて分析した。抗ヒトG−CSF抗体(Human G-CSF Assay Kit. IBL)を1% スキムミルクのブロッキング条件で1:2000の割合で希釈して用いた。ラット血液と同様に、ヒトIgG4との鎖交換により生成される100kDa、122kDaの分子は生成されなかった(図2)。
ポリペプチドは、天然のものであってもよく、大腸菌などの原核細胞や、酵母細胞、昆虫細胞、動物細胞などの真核細胞から遺伝子組換えにより生産されたものであってもよく、また天然のものと同等の活性を有し、1つ以上のアミノ酸位置で突然変異が起こった誘導体であってもよい。
<1−1>IgG4 Fc領域発現ベクターの作製
IgG4のヒンジ領域を含む重鎖Fc領域をクローニングするために、ヒトの血液から得られた血球細胞のRNAを鋳型とし、次のようにRT−PCRを行った。まず、Qiamp RNA血液キット(Qiagen社)を用いて約6mLの血液から全RNAを分離し、その後このRNAを鋳型とし、One−Step RT−PCRキット(Qiagen社)を用いて遺伝子を増幅した。ここで、プライマーとしては、配列番号4(gggcatatgc catcatgccc agcacctgag ttcctgggg)と5(gggggatccc tatttaccca gagacaggga ga)の対を用いた。その後のクローニング過程を容易にするために、プライマーにはNdeI制限酵素認識部位とタンパク質発現のために必要な開始コドンであるATGを挿入し、配列番号5の3−プライマーには終止コドンを含むBamHI制限酵素認識部位を挿入した。こうして増幅されたFc領域産物をそれぞれNdeIとBamHIで切断し、その後同じ制限酵素で処理したプラスミドpET22b(Novagen社)に挿入してプラスミドを作製した。プラスミドは、IgG4 FcフラグメントがIgG4 Fcヒンジの全アミノ酸配列であるGlu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Ser−Cys−Proのうち1〜8番目のアミノ酸残基が欠失したヒンジ配列を含むように設計されている。
Claims (21)
- 下記のアミノ酸配列を有するヒンジ配列中の一部が欠失して1つのシステイン残基のみを有するように変異したヒンジ領域を含む、変異したIgG4 Fcフラグメント。
Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Ser−Cys−Pro - 生体内鎖交換及び単量体形成が起こらないものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 前記ヒンジ領域が、8番目の位置のCys残基を含む1〜8つの連続的又は不連続的なアミノ酸が欠失して変異したものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 前記ヒンジ領域が、11番目の位置のCys残基を含む1〜8つの連続的又は不連続的なアミノ酸が欠失して変異したものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 前記ヒンジ領域が、8番目の位置のCys残基を含む1〜5つの連続的又は不連続的なアミノ酸が欠失して変異したものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 前記ヒンジ領域が、11番目の位置のCys残基を含む1〜5つの連続的又は不連続的なアミノ酸が欠失して変異したものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 前記ヒンジ領域が、8番目の位置のCys残基を含む1〜3つの連続的又は不連続的なアミノ酸が欠失して変異したものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 前記ヒンジ領域が、11番目の位置のCys残基を含む1〜3つの連続的又は不連続的なアミノ酸が欠失して変異したものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 非グリコシル化されたものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 非ペプチド性重合体により改質されたものである、請求項1に記載の変異したIgG4 Fcフラグメント。
- 請求項1のIgG4 Fcフラグメントをコードする核酸。
- 請求項11の核酸を含むベクター。
- 請求項12のベクターが導入された微生物。
- 請求項13の微生物を培養する段階を含む、請求項1〜10のいずれかのIgG4 Fcフラグメントを製造する方法。
- 薬物及び請求項1〜10のいずれかの変異したIgG4 Fcフラグメントがリンカーを介して結合された薬物結合体。
- 薬物は、ヒト成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ペプチド、インターフェロン類とインターフェロン受容体類、コロニー刺激因子、インターロイキン類とインターロイキン受容体類、酵素類、インターロイキン結合タンパク質及びサイトカイン結合タンパク質類、マクロファージ活性化因子、マクロファージペプチド、B細胞因子、T細胞因子、タンパク質A、アレルギー抑制因子、細胞壊死糖タンパク質、免疫毒素、リンホトキシン、腫瘍壊死因子、腫瘍抑制因子、転移成長因子、α1−アンチトリプシン、アルブミン、α−ラクトアルブミン(alpha-lactalbumin)、アポリポタンパク質E、赤血球生成因子、高糖鎖化赤血球生成因子、アンジオポエチン類(angiopoietin)、ヘモグロビン、トロンビン(thrombin)、トロンビン受容体活性ペプチド、トロンボモジュリン(thrombomodulin)、血液凝固因子、血液凝固a因子 、血液凝固因子、血液凝固因子、血液凝固第XIII因子、プラスミノーゲン活性化因子、フィブリン結合ペプチド、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ヒルジン(hirudin)、タンパク質C、C反応性タンパク質、レニン阻害剤、コラゲナーゼ阻害剤、スーパーオキシドディスムターゼ、レプチン、血小板由来成長因子、上皮細胞成長因子、表皮細胞成長因子、アンジオスタチン(angiostatin)、アンジオテンシン(angiotensin)、骨形成成長因子、骨形成促進タンパク質、カルシトニン、インスリン及びインスリン誘導体、アトリオペプチン、軟骨誘導因子、エルカトニン(elcatonin)、結合組織活性化因子、組織因子経路阻害剤(tissue factor pathway inhibitor)、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、神経成長因子類(例えば、神経成長因子、毛様体神経栄養因子(cilliary neurotrophic factor)、アキソジェネシス因子−1(axogenesis factor-1)、脳性ナトリウム利尿ペプチド(brain-natriuretic peptide)、グリア細胞由来神経栄養因子(glial derived neurotrophic factor)、ネトリン(netrin)、好中球抑制因子(neurophil inhibitor factor)、神経栄養因子、ニュールツリン(neuturin)など)、副甲状腺ホルモン、リラキシン、セクレチン、ソマトメジン、インスリン様成長因子、副腎皮質ホルモン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド-1(Glucagon−like Peptide−1)又はエキセンジン−4(Exendin-4)などのインスリン分泌ペプチド、腸から分泌されるインクレチン(incretin)類、メタボリックシンドローム(metabolic syndrome)に効果があることが知られているレプチンなどの脂肪細胞(adipocyte)類及びニューロ−サイトカイン類、コレシストキニン、膵臓ポリペプチド、ガストリン放出ペプチド、コルチコトロピン放出因子、甲状腺刺激ホルモン、オートタキシン(autotaxin)、ラクトフェリン(lactoferrin)、ミオスタチン(myostatin)、受容体類、受容体拮抗物質、細胞表面抗原、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント類、ウイルス由来ワクチン抗原からなる群から選択されるものである、請求項15に記載の結合体。
- 薬物が顆粒球コロニー刺激因子である、請求項15に記載の結合体。
- リンカーが非ペプチド性重合体である、請求項15に記載の結合体。
- 非ペプチド性重合体が両末端又は三末端を有する、請求項18に記載の結合体。
- 請求項15の結合体を含む薬学組成物。
- 下記のアミノ酸配列を有するヒンジ配列中の一部が欠失して1つのシステイン残基のみを有するように変異したヒンジ領域を含む、変異したIgG4 Fcフラグメントを含み、生体内鎖交換及び単量体形成が起こらないことを特徴とする薬物キャリア。
Glu−Ser−Lys−Tyr−Gly−Pro−Pro−Cys−Pro−Ser−Cys−Pro
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020130063029A KR101895634B1 (ko) | 2013-05-31 | 2013-05-31 | 변이된 힌지 영역을 포함하는 IgG4 Fc 단편 |
KR10-2013-0063029 | 2013-05-31 | ||
JP2016516448A JP6649877B2 (ja) | 2013-05-31 | 2014-05-29 | 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016516448A Division JP6649877B2 (ja) | 2013-05-31 | 2014-05-29 | 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020007326A true JP2020007326A (ja) | 2020-01-16 |
JP6983202B2 JP6983202B2 (ja) | 2021-12-17 |
Family
ID=51989123
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016516448A Active JP6649877B2 (ja) | 2013-05-31 | 2014-05-29 | 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント |
JP2019150876A Active JP6983202B2 (ja) | 2013-05-31 | 2019-08-21 | 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016516448A Active JP6649877B2 (ja) | 2013-05-31 | 2014-05-29 | 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10973881B2 (ja) |
EP (2) | EP3006455B1 (ja) |
JP (2) | JP6649877B2 (ja) |
KR (1) | KR101895634B1 (ja) |
CN (2) | CN105377877A (ja) |
AU (5) | AU2014271504A1 (ja) |
CA (1) | CA2913886C (ja) |
DK (1) | DK3006455T3 (ja) |
ES (2) | ES2869581T3 (ja) |
HK (1) | HK1220464A1 (ja) |
HR (1) | HRP20181394T1 (ja) |
HU (1) | HUE040540T2 (ja) |
LT (1) | LT3006455T (ja) |
MX (1) | MX365520B (ja) |
MY (1) | MY178831A (ja) |
PH (1) | PH12015502645B1 (ja) |
PL (1) | PL3006455T3 (ja) |
PT (1) | PT3006455T (ja) |
RU (1) | RU2696973C2 (ja) |
UA (1) | UA115906C2 (ja) |
WO (1) | WO2014193173A1 (ja) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101895634B1 (ko) * | 2013-05-31 | 2018-09-05 | 한미약품 주식회사 | 변이된 힌지 영역을 포함하는 IgG4 Fc 단편 |
AR107483A1 (es) | 2016-01-29 | 2018-05-02 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugado de enzimas terapéuticas |
CN110291103A (zh) * | 2016-12-05 | 2019-09-27 | 韩美药品株式会社 | 具有弱化的免疫应答的缀合物 |
EP3556399A1 (en) * | 2016-12-19 | 2019-10-23 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Brain targeting long-acting protein conjugate |
EP3578204A4 (en) * | 2017-02-03 | 2021-01-06 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | BIOACTIVE SUBSTANCE CONJUGATE WITH ENHANCED DURABILITY AND ITS USE |
IL271837B2 (en) * | 2017-07-07 | 2024-01-01 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | A new medical fusion protein with an enzyme and its uses |
KR20190013615A (ko) * | 2017-07-28 | 2019-02-11 | 한미약품 주식회사 | 이두로네이트 2-설파타제 결합체 |
KR20190038456A (ko) * | 2017-09-29 | 2019-04-08 | 한미약품 주식회사 | 효력이 향상된 지속성 단백질 결합체 |
RU2689522C1 (ru) * | 2018-09-11 | 2019-05-28 | Общество с ограниченной ответственностью "Пальмира Биофарма" | Нуклеотидная последовательность, кодирующая слитый белок, состоящий из растворимого внеклеточного домена человеческого tnfr1 и константной части тяжёлой цепи человеческого igg4 |
CN109336981A (zh) * | 2018-09-19 | 2019-02-15 | 北京伟杰信生物科技有限公司 | 一种重组马绒毛膜促性腺激素融合蛋白及其制备方法和其应用 |
US11684655B2 (en) | 2019-05-31 | 2023-06-27 | Spectrum Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating neutorpenia using G-CSF protein complex |
US11267858B2 (en) * | 2019-05-31 | 2022-03-08 | Spectrum Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment using G-CSF protein complex |
WO2021010532A1 (ko) * | 2019-07-18 | 2021-01-21 | 한미약품 주식회사 | 신규 중간체 제조를 통한 지속형 약물 결합체의 제조 방법 |
CA3147690A1 (en) * | 2019-07-19 | 2021-01-28 | WuXi Biologics Ireland Limited | Polypeptide complex for conjugation and use thereof |
KR20220052300A (ko) * | 2020-10-20 | 2022-04-27 | 전남대학교산학협력단 | 플라젤린 융합 단백질 및 이의 용도 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009513110A (ja) * | 2005-08-16 | 2009-04-02 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 開始メチオニン残基が除去された免疫グロブリンFc領域の大量生産方法 |
WO2012083370A1 (en) * | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Cephalon Australia Pty Ltd | Modified antibody with improved half-life |
JP2012224635A (ja) * | 2003-11-13 | 2012-11-15 | Hanmi Science Co Ltd | 免疫グロブリンFc領域をキャリアとして含む薬剤学的組成物 |
JP6649877B2 (ja) * | 2013-05-31 | 2020-02-19 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5349053A (en) | 1990-06-01 | 1994-09-20 | Protein Design Labs, Inc. | Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses |
GB9012995D0 (en) * | 1990-06-11 | 1990-08-01 | Celltech Ltd | Multivalent antigen-binding proteins |
GB9206422D0 (en) | 1992-03-24 | 1992-05-06 | Bolt Sarah L | Antibody preparation |
US6096871A (en) | 1995-04-14 | 2000-08-01 | Genentech, Inc. | Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life |
CA2249195A1 (en) | 1996-03-18 | 1997-09-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobin-like domains with increased half lives |
AU2003287345A1 (en) * | 2002-10-31 | 2004-06-07 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for increasing antibody production |
AU2005289594B2 (en) * | 2004-09-27 | 2012-02-02 | Centocor, Inc. | Srage mimetibody, compositions, methods and uses |
KR100754667B1 (ko) * | 2005-04-08 | 2007-09-03 | 한미약품 주식회사 | 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Fc 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물 |
EP1868650B1 (en) * | 2005-04-15 | 2018-10-03 | MacroGenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
KR100824505B1 (ko) * | 2005-08-16 | 2008-04-22 | 한미약품 주식회사 | 개시 메티오닌 잔기가 제거된 면역글로불린 Fc 영역의대량 생산방법 |
EP1999149A4 (en) * | 2006-03-28 | 2010-01-20 | Biogen Idec Inc | ANTI-IGF-1R ANTIBODIES AND USES THEREOF |
JP2008169195A (ja) * | 2007-01-05 | 2008-07-24 | Hanmi Pharmaceutical Co Ltd | キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体 |
US7867491B2 (en) * | 2007-05-30 | 2011-01-11 | Genexine Co., Ltd. | Immunoglobulin fusion proteins |
US20100226925A1 (en) * | 2007-09-14 | 2010-09-09 | Amgen Inc. | Homogeneous Antibody Populations |
US20120100140A1 (en) | 2009-01-23 | 2012-04-26 | Biogen Idec Ma Inc. | Stabilized fc polypeptides with reduced effector function and methods of use |
EP2233500A1 (en) * | 2009-03-20 | 2010-09-29 | LFB Biotechnologies | Optimized Fc variants |
US8802091B2 (en) * | 2010-03-04 | 2014-08-12 | Macrogenics, Inc. | Antibodies reactive with B7-H3 and uses thereof |
GB201014033D0 (en) | 2010-08-20 | 2010-10-06 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
WO2013012733A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Biogen Idec Ma Inc. | Heterodimeric fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto |
KR102041412B1 (ko) * | 2011-12-30 | 2019-11-11 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 Fc 단편 유도체 |
GB201203071D0 (en) | 2012-02-22 | 2012-04-04 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
GB201203051D0 (en) | 2012-02-22 | 2012-04-04 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
US9834597B2 (en) * | 2012-09-21 | 2017-12-05 | The Regents Of The University Of California | Modified FC polypeptides, FC conjugates, and methods of use thereof |
KR102073748B1 (ko) * | 2013-01-31 | 2020-02-05 | 한미약품 주식회사 | 재조합 효모 형질전환체 및 이를 이용하여 면역글로불린 단편을 생산하는 방법 |
-
2013
- 2013-05-31 KR KR1020130063029A patent/KR101895634B1/ko active Protection Beyond IP Right Term
-
2014
- 2014-05-29 MX MX2015016469A patent/MX365520B/es active IP Right Grant
- 2014-05-29 ES ES18168489T patent/ES2869581T3/es active Active
- 2014-05-29 LT LTEP14804503.2T patent/LT3006455T/lt unknown
- 2014-05-29 CN CN201480031130.XA patent/CN105377877A/zh active Pending
- 2014-05-29 JP JP2016516448A patent/JP6649877B2/ja active Active
- 2014-05-29 US US14/894,222 patent/US10973881B2/en active Active
- 2014-05-29 ES ES14804503.2T patent/ES2685617T3/es active Active
- 2014-05-29 EP EP14804503.2A patent/EP3006455B1/en active Active
- 2014-05-29 MY MYPI2015002828A patent/MY178831A/en unknown
- 2014-05-29 CA CA2913886A patent/CA2913886C/en active Active
- 2014-05-29 PT PT14804503T patent/PT3006455T/pt unknown
- 2014-05-29 RU RU2015153162A patent/RU2696973C2/ru active
- 2014-05-29 EP EP18168489.5A patent/EP3406627B1/en active Active
- 2014-05-29 AU AU2014271504A patent/AU2014271504A1/en not_active Abandoned
- 2014-05-29 CN CN202211237140.1A patent/CN116059393A/zh active Pending
- 2014-05-29 HU HUE14804503A patent/HUE040540T2/hu unknown
- 2014-05-29 UA UAA201512492A patent/UA115906C2/uk unknown
- 2014-05-29 WO PCT/KR2014/004799 patent/WO2014193173A1/ko active Application Filing
- 2014-05-29 PL PL14804503T patent/PL3006455T3/pl unknown
- 2014-05-29 DK DK14804503.2T patent/DK3006455T3/en active
-
2015
- 2015-11-26 PH PH12015502645A patent/PH12015502645B1/en unknown
-
2016
- 2016-07-11 HK HK16108059.3A patent/HK1220464A1/zh unknown
-
2018
- 2018-08-24 AU AU2018220146A patent/AU2018220146B2/en active Active
- 2018-08-29 HR HRP20181394TT patent/HRP20181394T1/hr unknown
-
2019
- 2019-08-21 JP JP2019150876A patent/JP6983202B2/ja active Active
-
2020
- 2020-04-16 AU AU2020202581A patent/AU2020202581B2/en active Active
- 2020-11-13 US US17/098,040 patent/US11147857B2/en active Active
-
2021
- 2021-09-03 AU AU2021225249A patent/AU2021225249B2/en active Active
-
2023
- 2023-07-24 AU AU2023208081A patent/AU2023208081A1/en active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012224635A (ja) * | 2003-11-13 | 2012-11-15 | Hanmi Science Co Ltd | 免疫グロブリンFc領域をキャリアとして含む薬剤学的組成物 |
JP2009513110A (ja) * | 2005-08-16 | 2009-04-02 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 開始メチオニン残基が除去された免疫グロブリンFc領域の大量生産方法 |
WO2012083370A1 (en) * | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Cephalon Australia Pty Ltd | Modified antibody with improved half-life |
JP6649877B2 (ja) * | 2013-05-31 | 2020-02-19 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
DRUG METABOLISM AND DISPOSITION, 2010年, vol. 38, no. 1, JPN6018015326, pages 84 - 91, ISSN: 0004324184 * |
PROREIN SCIENCE, 1997年, vol. 6, JPN6018015324, pages 407 - 415, ISSN: 0004324185 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6983202B2 (ja) | 変異したヒンジ領域を含むIgG4 Fcフラグメント | |
JP6976400B2 (ja) | 受容体媒介クリアランスが減少した、生理活性ポリペプチド単量体と免疫グロブリンFc断片との結合体及びその製造方法 | |
US8029789B2 (en) | Method for the mass production of immunoglobulin constant region | |
JP2020501611A (ja) | 脳標的持続性タンパク質結合体 | |
US20080293106A1 (en) | Method For the Mass Production of Immunoglobulin Fc Region Deleted Initial Methionine Residues | |
KR20100010919A (ko) | 세 말단 반응기를 갖는 비펩타이드성 중합체를 이용한 생리활성 폴리펩타이드 약물 결합체 | |
RU2800558C1 (ru) | FC-фрагмент IgG4, содержащий модифицированную шарнирную область |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190913 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190913 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200817 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201113 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20210510 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210910 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20210910 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20210921 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20210922 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20211027 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20211122 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6983202 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |