JP2019531264A - Composition for promoting melanin containing specific siRNA - Google Patents
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Abstract
本発明は、一側面において、配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNAを有効成分として含む毛髪の黒化用、毛髪の白化防止用、メラニン低下性疾患の予防及び治療用組成物に関し、本発明の一側面により毛髪関連産業の発展を図り且つ関連消費者の福祉を増進させることができる。【選択図】図1In one aspect, the present invention relates to a composition for blackening hair, preventing whitening of hair, preventing or treating melanin-lowering diseases, which contains siRNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient. According to one aspect of the present invention, the hair-related industry can be developed and the welfare of related consumers can be improved. [Selection] Figure 1
Description
本明細書は、特定のsiRNAを含む毛髪の黒化用、メラニン低下性疾患の予防用、又はメラニン低下性疾患の改善用組成物に関するものである。 The present specification relates to a composition for blackening hair, preventing melanin-lowering disease, or improving melanin-lowering disease, which contains a specific siRNA.
メラニン(melanin)は、黒い色素とタンパク質との複合体形態を持つフェノール類の生体高分子物質であって、リンゴ、じゃがいも、バナナの切断された表面が空気中に露出したときに発生する褐変又は動物の外皮毛、皮膚、毛髪、眼部などで観察される。メラニンが過剰生成して皮膚に沈着すると、しみやそばかすなどができ且つ毛髪の黒化などとも直結し、メラニンによって皮膚又は毛髪老化も促進され、皮膚癌を誘発することもある。 Melanin is a phenolic biopolymeric substance with a complex form of black pigment and protein, browning that occurs when the cut surfaces of apples, potatoes, and bananas are exposed to the air or Observed in animal coat hair, skin, hair, eyes, etc. When melanin is excessively produced and deposited on the skin, it can cause stains, freckles, etc., and is directly connected to hair darkening, and melanin also promotes skin or hair aging and may induce skin cancer.
紫外線、炎症、ホルモンなどによってメラニン細胞刺激ホルモン(melanocyte stimulating hormone、MSH)が分泌され、該MSHは受容体と反応してメラニン形成細胞内においてcAMPを向上させてメラニンを合成し、合成されたメラニンは、メラニン形成細胞の外部へ分泌され、紫外線などから皮膚又は毛髪を保護する役割をするようになる。メラニンの合成は、主にα−MSHによって調節され、メラニンの合成に関与するタンパク質としては、MITF、TYR、TRP1、TRP2などが知られている。 Melanocyte stimulating hormone (MSH) is secreted by ultraviolet rays, inflammation, hormones, etc., and the MSH reacts with a receptor to improve cAMP in melanocytes and synthesize melanin. Is secreted to the outside of melanocytes and plays a role of protecting the skin or hair from ultraviolet rays and the like. Melanin synthesis is mainly regulated by α-MSH, and MITF, TYR, TRP1, TRP2, and the like are known as proteins involved in melanin synthesis.
毛髪におけるメラニンは、毛髪の色相を決める重要な因子であって、毛嚢に存在するメラニン形成細胞内で生成されたメラニンは毛髪皮質細胞のケラチノサイトに伝達された後、毛髪の成長とともに上方へ移動する。生理的老化の一現象として認識される毛髪の白化は、毛髪メラニン形成細胞の数的減少及びメラニン形成細胞の機能低下などによるメラニン生成の減少によって誘発される。現在、毛髪の白化の解決方案として染髪施術が用いられているが、染髪は一時的な方法であって白髪の成長に伴い再度染髪を施す必要があり、また、染毛剤中に含まれている成分が刺激成分となって接触性皮膚炎や皮膚アレルギーを起こして問題となっている。 Melanin in the hair is an important factor that determines the hue of the hair. The melanin produced in the melanocytes in the hair follicle is transferred to the keratinocytes of the hair cortical cells and then moves upward with the growth of the hair. To do. Hair whitening, recognized as a phenomenon of physiological aging, is induced by a decrease in melanogenesis, such as by a numerical decrease in hair melanocytes and a decrease in function of melanocytes. Currently, hair dyeing is used as a solution for whitening hair, but it is a temporary method that requires re-dying as the hair grows, and is included in the hair dye. Ingredients become stimulating ingredients, causing contact dermatitis and skin allergies.
また、メラニン生合成に異常が生じると、異常な着色によって皮膚の異常な白化などが現われ、これにより、白化症(白色症、albinism)、白斑などの疾病が発病したりもする。 In addition, when abnormality occurs in melanin biosynthesis, abnormal whitening of the skin appears due to abnormal coloring, thereby causing diseases such as whitening (albinism) and vitiligo.
一方、10〜60個程度の核酸から構成された干渉RNAであるsiRNA(small interfering RNA)は、細胞内でRISC(RNA−induced silencing complex)などと結合して、細胞内の相補的な塩基配列を持つmRNAなどに特異的に作用して標的mRNAなどを抑制するRNA干渉作用をするものとして周知されている。siRNAは、アンチセンスオリゴヌクレオチドに比べて4〜10倍程度少ない量でも遺伝子発現を阻害することができ、細胞毒性が少なく且つ遺伝子の選択的発現阻害に優れ、これを用いて癌や遺伝的疾病を誘導する遺伝子がタンパク質を発現させることを阻害すると、疾病の原因を無くすことができるようになるため、新しい有効な疾病治療剤として多くの関心を集めている。 On the other hand, siRNA (small interfering RNA), which is an interfering RNA composed of about 10 to 60 nucleic acids, binds to RISC (RNA-induced silencing complex) or the like in the cell, and complementary base sequence in the cell. It is well known that it has an RNA interference action that specifically acts on mRNA having a function to suppress target mRNA and the like. siRNA can inhibit gene expression even in an amount about 4 to 10 times less than antisense oligonucleotide, has low cytotoxicity and excellent selective inhibition of gene, and can be used for cancer and genetic diseases. Inhibiting the expression of a protein by a gene that induces the disease can eliminate the cause of the disease, and thus attracts much interest as a new effective disease therapeutic agent.
本発明は、一側面において、配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNAを有効成分として含む毛髪の黒化用、毛髪の白化防止用、メラニン低下性疾患の予防用、メラニン低下性疾患の治療用、又はメラニン低下性疾患の改善用組成物を提供して、白髪ケア分野及びメラニン低下性疾患関連分野の発展を図り、且つ関連消費者及び患者の福祉を増進させることをその目的とする。 In one aspect, the present invention provides hair blackening, hair whitening prevention, melanin-lowering disease prevention, melanin-lowering disease containing siRNA comprising the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient The purpose of the present invention is to provide a composition for the treatment of melanin or to improve melanin lowering disease, to develop the white hair care field and the melanin lowering disease related field, and to promote the welfare of related consumers and patients To do.
前記課題を解決するために本発明は、一側面において、配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNAを有効成分として含む毛髪の黒化用、毛髪の白化防止用、メラニン低下性疾患の予防用、メラニン低下性疾患の治療用、又はメラニン低下性疾患の改善用組成物を提供する。 In order to solve the above-mentioned problems, the present invention provides, in one aspect, for hair blackening, hair whitening prevention, melanin-lowering disease containing siRNA comprising the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient. Provided is a composition for prevention, treatment of melanin-lowering disease, or improvement of melanin-lowering disease.
本発明は、他の側面において、配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNAを含む組成物を個体に投与することを含む毛髪の黒化方法、毛髪の白化防止方法、メラニン低下性疾患の予防方法、メラニン低下性疾患の治療方法、又はメラニン低下性疾患の改善方法を提供する。 In another aspect, the present invention provides a method for blackening hair, a method for preventing whitening of hair, a melanin-lowering disease, comprising administering to a subject a composition comprising siRNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2. The prevention method of this, the treatment method of a melanin lowering disease, or the improvement method of a melanin lowering disease is provided.
本発明は、他の側面において、毛髪の黒化用途、毛髪の白化防止用途、メラニン低下性疾患の予防用途、メラニン低下性疾患の治療用途、又はメラニン低下性疾患の改善用途に用いるための有効成分として配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA及びこれを含む組成物を提供する。 In another aspect, the present invention is effective for use in blackening hair, preventing whitening of hair, preventing melanin-lowering disease, treating melanin-lowering disease, or improving melanin-lowering disease. Provided are siRNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as a component and a composition comprising the same.
本発明は、また他の側面において、毛髪の黒化、毛髪の白化防止、メラニン低下性疾患の予防、メラニン低下性疾患の治療、又はメラニン低下性疾患の改善のための有効成分として配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA及びこれを含む組成物の非治療的美容用途を提供する。本発明は、他の側面において、毛髪の黒化用組成物、毛髪の白化防止用組成物、メラニン低下性疾患の予防用組成物、メラニン低下性疾患の治療用組成物、又はメラニン低下性疾患の改善用組成物の製造に用いるための配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNAの用途を提供する。 In another aspect, the present invention provides SEQ ID NO: 1 as an active ingredient for hair blackening, hair whitening prevention, prevention of melanin lowering disease, treatment of melanin lowering disease, or improvement of melanin lowering disease. Alternatively, the present invention provides a non-therapeutic cosmetic use of siRNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 and a composition comprising the same. In another aspect, the present invention provides a composition for blackening hair, a composition for preventing whitening of hair, a composition for preventing melanin-lowering disease, a composition for treating melanin-lowering disease, or a melanin-lowering disease. The use of siRNA which consists of a base sequence of sequence number 1 or sequence number 2 for using for manufacture of the composition for improvement of this is provided.
本発明の他の側面において、前記組成物は、薬学組成物又は化粧料組成物であってよい。 In another aspect of the present invention, the composition may be a pharmaceutical composition or a cosmetic composition.
本発明の一側面に係る、配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNAを有効成分として含む組成物を用いる場合、毛髪の黒化、毛髪の白化防止、メラニン低下性疾患の予防、又はメラニン低下性疾患の治療及び改善を有効に図ることができる。 When using the composition containing siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient according to one aspect of the present invention, hair blackening, hair whitening prevention, prevention of melanin-lowering diseases, or Treatment and improvement of melanin lowering disease can be effectively achieved.
以下、本明細書について詳しく説明する。 Hereinafter, this specification will be described in detail.
本明細書において「毛髪」とは、角化した上皮細胞からなり皮膚の表面に出る糸状の構造物のことをいい、具体的には身体の毛のことを意味し、髪の毛及び体毛を含む最広義の概念である。 As used herein, “hair” refers to a thread-like structure composed of keratinized epithelial cells and coming out on the surface of the skin, and specifically refers to body hair, including hair and body hair. This is a broad concept.
本明細書において「皮膚」とは、動物の体表を覆う組織のことを意味し、顔またはボディーなどの体表を覆う組織だけではなく、頭皮や毛髪を含む最広義の概念である。 In the present specification, “skin” means a tissue covering the body surface of an animal, and is the broadest concept including not only the tissue covering the body surface such as the face or body but also the scalp and hair.
本明細書において「黒化」とは、皮膚又は毛髪の有色の色素が増加することを意味し、特に、メラニン色素の量が増加して皮膚又は毛髪が濃い色を呈するようになる現象のことを意味し得る。例えば、毛髪の黒化は、髪の毛が黒く変わる現象を含み、毛髪の白化や白髪を予防及び防止することも含む。 In this specification, “blackening” means that the colored pigment of skin or hair increases, and in particular, the phenomenon that the amount of melanin increases and the skin or hair becomes darker. Can mean. For example, the blackening of hair includes a phenomenon in which the hair turns black, and includes prevention and prevention of whitening of the hair and white hair.
本明細書において「白化」とは、皮膚又は毛髪の有色の色素が減少することを意味し、特に、メラニン色素の量が減少して皮膚又は毛髪が薄い色を呈するようになる現象のことを意味し得る。例えば、毛髪の白化又は白髪は髪の毛が白く変わる現象を含む。 In the present specification, “whitening” means that the colored pigments of the skin or hair are reduced, and in particular, the phenomenon that the amount of melanin pigments is reduced and the skin or hair becomes lighter in color. Can mean. For example, whitening or whitening of hair includes a phenomenon that the hair turns white.
本明細書において「毛髪の黒化効能物質」又は「毛髪の白化防止効能物質」は、毛髪の明るさを暗くしたり、毛髪の白化がさらに進行したりしないようにする物質を総称するものであってよい。また、有色の色素、特にメラニンの沈着を誘導、改善及び増進させるなどの作用をする物質を総称するものであってよく、単一の化合物、重合体、DNA、RNA、siRNA、miRNA、ペプチド、タンパク質などを含むものであってよいが、これらに制限されない。 In the present specification, “hair darkening effect substance” or “hair whitening prevention effect substance” is a generic term for substances that darken hair brightness and prevent further whitening of hair. It may be. In addition, it may be a generic term for substances that act to induce, improve and enhance the deposition of colored pigments, particularly melanin, and may be a single compound, polymer, DNA, RNA, siRNA, miRNA, peptide, Although it may contain protein etc., it is not restricted to these.
本明細書において「メラニン低下性疾患」は、メラニン色素の合成又は分解の異常によって異常にメラニンの沈着が抑制されたり、メラニンの生成が低下する疾患、又はメラニンが過度に除去されたりする疾患を含む。例えば、白化症(白色症、Albinism)、白皮症(leukoderma)、部分白皮症、白癜、白斑(vitiligo)、四色白斑(quadrichrome vitiligo)、点状白斑(vitiligo ponctue)、特発性滴状低メラニン症、点状白皮症、白色症症侯群(syndromic Albinism)(例えば、アレサンドリニ症候群(Alezzandrinisyndrome)、ヘルマンスキー・パドラック症侯群(Hermansky−Pudlak syndrome)、チェディアック・ヒガシ症侯群(Chediak−Higashi syndrome)、グリセリ症候群(Griscelli syndrome)(エレジャルデ症侯群(Elejalde syndrome)、グリセリ症候群2型(Griscelli syndrome type 2)及びグリセリ症候群3型(Griscelli syndrome type 3))、ワールデンブルグ症侯群(Waardenburg syndrome)、タイツ症侯群(Tietz syndrome)、Cross−MuKusick−Breen症侯群(Cross−MuKusick−Breen syndrome)、ABCD症侯群(ABCD syndrome)、白色症−難聴症候群(Albinism−deafness syndrome)及びフォークト・小柳・原田症侯群(Vogt−Koyanagi−Harada syndrome))、眼皮膚白皮症(oculocutaneous albinism)、低メラニン症(hypomelanosis)(特発性滴状低メラニン症(idiopathic guttate hypomelanosis)、葉状低メラニン症(phylloid hypomelanosis)、進行性斑状低メラニン症(progressive macular hypomelanosis))、斑状強皮症、まだら症(piebaldism)、脱色素性母斑(nevus depigmentosus)、炎症後色素沈着減少症(炎症後色素脱失症、postinflammatory hypopigmentation)、白色粃糠疹(pityriasis alba)、バガボンド白斑黒皮症(Vagabond’s leukomelanoderma)、イエメン盲ろう色素脱失症候群(Yemenite deaf−blind hypopigmentation syndrome)、ウェンデ・バックス症候群(Wende−Bauckus syndrome)、ウォロノフ環(Woronoff’s ring)、メラニン欠乏症(amelanism)、及び白変種(Leucism)を含む。 In the present specification, “melanin-lowering disease” refers to a disease in which melanin deposition is abnormally suppressed due to abnormal synthesis or degradation of melanin pigment, melanin production is reduced, or melanin is excessively removed. Including. For example, whitening (Albinism), leukoderma, partial albinism, tinea, vitiligo, quadrichrome vitiligo, vitiligo pontue, idiopathic drops Hypomelanosis, punctate albinism, symptomatic albinism (e.g., Alezandrinisindrome, Hermansky-Pudlack syndrome, Chediak group) (Chediak-Higashi syndrome), Griscelli syndrome (Elegende syndrome), Riselli syndrome type 2 (Griscelli syndrome type 2) and Griscelli syndrome type 3 (Wardenburg syndrome), Tightzre-skin group Group (Cross-MuKusick-Brain syndrome), ABCD syndrome group, Albinism-deafness syndrome, and Vogt-Koyanadomi group, Vogt-Koyaradigi group Oculocutaneous albinism, hypomelanosis (hy omelanosis (idiopathic gutate hypomelanosis), phylloid hypomelanosis, progressive macula hypoderma, melanosis Nevus depimentosus, post-inflammation hypopigmentation (post-inflammation hyperpigmentation), whiteness eruption (Vagabond's leuomen) Dementia syndrome (Ymenite deaf) -Blind hypopigmentation syndrome, Wende-Buckus syndrome, Woronoff's ring, melanin deficiency (amelanism), and leucism.
本明細書において「メラニン低下性疾患予防、改善及び治療効能物質」は、メラニン低下性疾患への罹患を事前に防止又は抑制する物質、罹患したメラニン低下性疾患の症状を軽減又は緩和させる物質、メラニン低下性疾患の原因を解消させる物質、メラニン合成を増進させる物質、メラニン合成の抑制を防止する物質、メラニンの分解を抑制させる物質を含むものであって、皮膚全体、毛髪全体、特定の毛髪又は特定の皮膚部位の明るさを暗くしたり、メラニン色素の沈着を誘導、改善及び増進させたりするなどの作用をする物質のことを総称し、単一の化合物、重合体、DNA、RNA、siRNA、miRNA、ペプチド、タンパク質などを含むものであってよいが、これらに制限されない。 In the present specification, the “effective substance for preventing, improving and treating melanin lowering disease” is a substance which prevents or suppresses the morbidity of melanin lowering disease in advance, a substance which reduces or alleviates the symptoms of the affected melanin lowering disease, Contains substances that eliminate the causes of melanin-lowering diseases, substances that promote melanin synthesis, substances that prevent the suppression of melanin synthesis, substances that suppress the degradation of melanin, and include the entire skin, entire hair, and specific hair Or a generic term for substances that act to darken the brightness of specific skin sites, induce, improve and enhance the deposition of melanin pigments, single compounds, polymers, DNA, RNA, It may include, but is not limited to, siRNA, miRNA, peptide, protein and the like.
本発明は、一側面において、配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNAを有効成分として含む毛髪の黒化用、毛髪の白化防止用、メラニン低下性疾患の予防用、メラニン低下性疾患の治療用、又はメラニン低下性疾患の改善用組成物を提供する。 In one aspect, the present invention provides hair blackening, hair whitening prevention, melanin-lowering disease prevention, melanin-lowering disease containing siRNA comprising the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient The present invention provides a composition for the treatment of or a melanin lowering disease.
一具現例によると、前記配列番号1の塩基配列を含むsiRNAは「#1」で表されてよく、前記配列番号2の塩基配列を含むsiRNAは「#2」で表されてよく、それぞれのsiRNAの配列は、下記のような塩基配列を含むものであってよい。
#1の塩基配列(配列番号1):5’−CCAACCAGAACAAGCAGAACA−3’
#2の塩基配列(配列番号2):5’−GAACACGAAGGCUGUAACAAA−3’
According to an exemplary embodiment, the siRNA including the base sequence of SEQ ID NO: 1 may be represented by “# 1”, and the siRNA including the base sequence of SEQ ID NO: 2 may be represented by “# 2”. The sequence of siRNA may include the following base sequence.
Base sequence of # 1 (SEQ ID NO: 1): 5′-CCAACCCAGAACAAGCAGAACA-3 ′
Base sequence of # 2 (SEQ ID NO: 2): 5′-GAACACGAAGGCUGUAACAAAA-3 ′
前記siRNAは、配列番号1又は配列番号2で表される塩基配列と80%、好ましくは、90%、より好ましくは、100%の相同性を持つ塩基配列を含んでいてよい。 The siRNA may include a base sequence having 80%, preferably 90%, and more preferably 100% homology with the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2.
前記siRNAは、前記配列又は前記配列と80〜100%の相同性を持つ配列を含む独立の一本鎖RNAであってもよく、二本鎖RNAであってもよい。前記siRNAは、センス鎖RNA及びこれに相補的なアンチセンス鎖RNAを含むか、前記センス鎖RNA及びアンチセンス鎖RNAがループによって連結されたステムループ(stem−loop)構造の単一鎖RNAであってもよい。なお、前記二本鎖又はステム部位はミスマッチ(対応する塩基が相補的ではない)、バルジ(一方の鎖に対応する塩基がない)などによって対をなしていない部分が含まれていてもよい。前記siRNAの全長は10〜60塩基、好ましくは、15〜40塩基、より好ましくは、18〜30塩基である。また、前記ループ領域は配列に特別な意味がなく、単に配列を適当な間隔で連結するために3〜10程度の塩基を有していて十分である。siRNA末端の構造はブラント(blunt)末端或いは粘着(cohesive)末端のいずれも可能である。粘着末端の構造は3’末端が突出した構造(protruding structure)及び/又は5’末端側が突出した構造のいずれも可能であり、突出する塩基数は限定されない。また、siRNAは、標的遺伝子の発現抑制効果を保ち得る範囲で、例えば、一方の末端の突出部分に低分子RNA(例えば、tRNA、rRNA、ウイルスRNAのような天然のRNA分子又は人工のRNA分子)を含んでいてよい。siRNA末端の構造は、両側とも切断構造を持つ必要はなく、siRNAの一方の末端部位がリンカーRNAによって接続された構造であってもよい。リンカーの長さはステム部分の対をなすうえで差し支えのない長さであれば特に限定されない。 The siRNA may be an independent single-stranded RNA containing the sequence or a sequence having 80 to 100% homology with the sequence, or may be a double-stranded RNA. The siRNA includes a sense strand RNA and an antisense strand RNA complementary thereto, or a single strand RNA having a stem-loop structure in which the sense strand RNA and the antisense strand RNA are connected by a loop. There may be. The double strands or stem sites may contain unpaired parts due to mismatches (corresponding bases are not complementary), bulges (no bases corresponding to one strand), or the like. The total length of the siRNA is 10 to 60 bases, preferably 15 to 40 bases, and more preferably 18 to 30 bases. Further, the loop region has no special meaning in the sequence, and it is sufficient to have about 3 to 10 bases in order to simply link the sequences at appropriate intervals. The structure of the siRNA end can be either a blunt end or a cohesive end. As the structure of the sticky end, either a structure in which the 3 'end protrudes (protruding structure) and / or a structure in which the 5' end protrudes is possible, and the number of protruding bases is not limited. In addition, siRNA can be used as long as the expression suppression effect of the target gene can be maintained. ) May be included. The siRNA terminal structure does not need to have a cleavage structure on both sides, and may be a structure in which one terminal site of siRNA is connected by a linker RNA. The length of the linker is not particularly limited as long as it does not interfere with the pair of stem portions.
さらに、本発明の一側面に係る前記siRNAにおいて、RNA鎖は、その糖部分、ヌクレオベース部分又はインターヌクレオチド構造内に少なくとも1個の化学的変形を含むことが可能である。このような変形は、生体内でヌクレアーゼによってsiRNAの破壊を阻害することを可能にすることができる。本発明の一側面に係るsiRNAの安定性と生体適合性を生体内で向上させることができるあらゆる化学的変形が本発明の範囲に含まれる。糖部分に係る好ましい変形のうち、言及され得るものは、2’−デオキシ、2’−フルオロ、2’−アミノ、2’−チオ、又は2’−O-アルキルといったようなリボースの2’位、そして、好ましくは、リボヌクレオチド上の正常2’−OH基を代替する2’−O−メチル又はLNAの2’位及び4’位との間にあるメチレンブリッジの存在で起きる変形である。ヌクレオベースの場合、5−ブロモ−ウリジン、5−ヨード−ウリジン、N3−メチル−ウリジン、2,6−ジアミノプリン(DAP、5−メチル−2’−デオキシシチジン、5−(1−プロピニル)−2’−デオキシ−ウリジン(pdU)、5−(1−プロピニル)−2’−デオキシシチジン(pdC)のような変形された塩基又はコレステロールと結合した塩基を用いることが可能である。インターヌクレオチド骨格の好ましい変形は、ホスホロチオエート(phosphorothioate)、メチルホスホネート、ホスホロジアミデート基による骨格にあるホスホジエステル基を置換するものを含むか、ペプチド結合によって連結されたN−(2−アミノエチル)−グリシン(PNA、ペプチド核酸)から構成される骨格を用いるものを含む。多様に変形された塩基、糖、骨格は、モルフォリノ(morpholino)タイプの変形された核酸(モルフォリン環に固定され且つホスホロジアミデート基によって連結された塩基)又はPNA(ペプチド結合によって連結されたN−(2−アミノエチル)−グリシン単位に固定された塩基)に結合されていてよい。 Furthermore, in the siRNA according to one aspect of the present invention, the RNA strand can include at least one chemical modification within its sugar moiety, nucleobase moiety or internucleotide structure. Such deformation can make it possible to inhibit the destruction of siRNA by nucleases in vivo. Any chemical modification capable of improving the stability and biocompatibility of siRNA according to one aspect of the present invention in vivo is included in the scope of the present invention. Among the preferred variations on the sugar moiety, mention may be made of the 2 ′ position of ribose such as 2′-deoxy, 2′-fluoro, 2′-amino, 2′-thio, or 2′-O-alkyl. And preferably a variation that occurs in the presence of a 2′-O-methyl or LNA that replaces the normal 2′-OH group on the ribonucleotide and a methylene bridge between the 2 ′ and 4 ′ positions of the LNA. In the case of nucleobase, 5-bromo-uridine, 5-iodo-uridine, N3-methyl-uridine, 2,6-diaminopurine (DAP, 5-methyl-2′-deoxycytidine, 5- (1-propynyl)- A modified base such as 2'-deoxy-uridine (pdU), 5- (1-propynyl) -2'-deoxycytidine (pdC) or a base conjugated with cholesterol can be used. Preferred variants of include phosphorothioate, methylphosphonate, those that replace the phosphodiester group in the backbone by a phosphorodiamidate group, or N- (2-aminoethyl) -glycine linked by a peptide bond ( PNA, peptide nucleic acid) Variously modified bases, sugars, backbones are modified morpholino type modified nucleic acids (bases fixed to the morpholine ring and linked by phosphorodiamidate groups) or PNA (peptide bonds To a N- (2-aminoethyl) -glycine unit linked to the base).
本発明に係るsiRNAは、「分離されたもの」や、他の伝達及び運搬手段などに「結合されたもの」をも含み、これは自然状態のものではないことを意味するが、自然状態で求められるものも含み、ヒトの介入に関連したあらゆる手段によって得られるものであってもよいことを意味する。特に、本発明に係るsiRNAは、化学的合成、酵素的方法、重合酵素連鎖反応(PCR)を用いて製造することができ、特定のヌクレオチド配列の増幅、又は組換え合成によって既に存在する多様な核酸構造やsiRNAを精製することで得られるものであってよい。 The siRNA according to the present invention includes “isolated” and “coupled” to other transmission and transport means and the like, which means that it is not in a natural state, It means that it may be obtained by any means related to human intervention, including what is required. In particular, the siRNA according to the present invention can be produced using chemical synthesis, enzymatic methods, polymerase chain reaction (PCR), and can be produced by the amplification of specific nucleotide sequences or various existing sequences by recombinant synthesis. It may be obtained by purifying a nucleic acid structure or siRNA.
他の具現例によると、前記siRNAは、メラニンの生成又は沈着を増進させるものであってよい。 According to another embodiment, the siRNA may enhance melanin production or deposition.
他の具現例によると、前記siRNAは、チロシナーゼ(tyrosinase)及びTRP1(Tyrosinase−Related Protein 1)の一以上の発現を増進させるものであってよい。 According to another embodiment, the siRNA may enhance the expression of one or more of tyrosinase and TRP1 (Tyrosinase-Related Protein 1).
本発明の一側面に係る前記siRNAは、メラニン形成細胞であるメラン−a細胞及びB16F1細胞においてメラニンの生成又は沈着を促進し、メラニンを生成する酵素であるチロシナーゼとメラニンの形成に関与するTRP1タンパク質の発現を増進させるものと確認された。また、前記siRNAを処理すると、チロシナーゼ又はTRP1が発現される細胞数が増加されたりもする。チロシナーゼはメラニンの形成などに関与する酵素であって、チロシナーゼの発現が増進されると、メラニンの生成又は沈着が増加する。また、TRP1はメラニンの合成に関与するタンパク質であって、チロシナーゼと同様、TRP1の発現が増進されると、メラニンの生成又は沈着が増加する。毛髪におけるメラニンは毛髪の色相を決める重要な因子であって、毛嚢に存在するメラニン形成細胞内で生成されたメラニンは毛髪皮質細胞のケラチノサイトに伝達された後、毛髪の成長とともに上方へ移動するので、毛髪の白化は毛髪メラニン形成細胞の数的減少及びメラニン形成細胞の機能低下などによるメラニンの生成の減少によって誘発される。前記siRNAを介してメラニンの生成促進及びこれに関与する酵素及びタンパク質の発現増進を実現することができるため、これにより、皮膚及び毛髪を黒化させることができ、且つ皮膚及び毛髪の白化を防止することができる。 The siRNA according to one aspect of the present invention is a TRP1 protein that promotes melanin production or deposition in melanocytes that are melanocytes and B16F1 cells, and that is involved in the formation of melanin and an enzyme that produces melanin. It was confirmed that it promotes the expression of. In addition, when the siRNA is treated, the number of cells expressing tyrosinase or TRP1 may be increased. Tyrosinase is an enzyme involved in the formation of melanin and the like, and when tyrosinase expression is enhanced, the production or deposition of melanin increases. TRP1 is a protein involved in the synthesis of melanin, and like tyrosinase, when the expression of TRP1 is increased, the production or deposition of melanin increases. Melanin in hair is an important factor that determines the hue of hair, and melanin produced in melanocytes in hair follicles is transferred to keratinocytes in hair cortical cells and then moves upward with hair growth Therefore, hair whitening is induced by a decrease in the production of melanin, such as by a numerical decrease in hair melanocytes and a decrease in function of melanocytes. Through the siRNA, the production of melanin can be promoted and the expression of enzymes and proteins involved in the melanin can be promoted, so that the skin and hair can be blackened, and the skin and hair can be prevented from whitening. can do.
また、本発明は、一側面において、前記siRNAを介してメラニンの生成促進及びこれに関与する酵素及びタンパク質の発現増進を実現することができるため、メラニン低下性疾患及び症状に対しても予防、治療、及び改善することができることを究明したものでもある。 In addition, the present invention, in one aspect, can promote the production of melanin and increase the expression of enzymes and proteins involved in the siRNA via the siRNA, thus preventing melanin-lowering diseases and symptoms, It has also been clarified that it can be treated and improved.
本発明の他の側面によると、前記組成物は、本発明に係るsiRNAの生体適合性と伝達性の向上を可能にするあらゆる運搬体を更に含んでいてよい。特に、siRNAとともに用いられ得る運搬体は、リポソーム、エクソソーム、ペプチド(例えば、細胞−透過性ペプチド)及び多様なナノ粒子を含む。また、前記siRNAを含む組換えベクター、プラスミドなどを伝達又は運搬手段として用いることもできる。前記伝達又は運搬手段は、当該分野において公知の種々の技術と方法を適用することができ、剤形に応じて変形、改善などを施すこともできる。 According to another aspect of the present invention, the composition may further comprise any carrier that allows for improved biocompatibility and transmissibility of the siRNA according to the present invention. In particular, carriers that can be used with siRNA include liposomes, exosomes, peptides (eg, cell-permeable peptides) and various nanoparticles. In addition, a recombinant vector, a plasmid, or the like containing the siRNA can also be used as a transmission or transport means. Various techniques and methods known in the art can be applied to the transmission or carrying means, and deformation, improvement, etc. can be applied depending on the dosage form.
前記siRNAは、伝達された細胞における適切な転写のため少なくともプロモーターに作動可能に連結されることが好ましいが、これに制限されるものではない。前記プロモーターとしては、細胞で機能し得るプロモーターであればその種類は問わない。本発明の一側面に係る前記siRNAは、効率よい作用のために、必要に応じてリーダー配列、ポリアデニル化配列、プロモーター、エンハンサー、アップストリーム活性化配列、シグナルペプチド配列及び転写終決因子をはじめとした調節配列をさらに含むものであってもよい。 The siRNA is preferably operably linked to at least a promoter for proper transcription in a transferred cell, but is not limited thereto. The promoter is not particularly limited as long as it can function in cells. The siRNA according to one aspect of the present invention includes a leader sequence, a polyadenylation sequence, a promoter, an enhancer, an upstream activation sequence, a signal peptide sequence, and a transcription terminator as necessary for efficient action. It may further contain regulatory sequences.
本発明の他の側面によると、前記組成物中のsiRNAの含量は、前記組成物の総質量に対し、0.000000001質量%〜20質量%の範囲であってよい。また、前記含量は、前記組成物の総質量に対し、0.000000001質量%以上、0.000000005質量%以上、0.00000001質量%以上、0.00000005質量%以上、0.0000001質量%以上、0.0000005質量%以上、0.000001質量%以上、0.000005質量%以上、0.00001質量%以上、0.00005質量%以上、0.0001質量%以上、0.0005質量%以上、0.001質量%以上、0.005質量%以上、0.01質量%以上、0.05質量%以上、0.1質量%以上、0.3質量%以上、0.5質量%以上、0.8質量%以上、1質量%以上、3質量%以上、5質量%以上、8質量%以上、10質量%以上、12質量%以上、15質量%以上、又は18質量%以上であってよい。また、前記含量は、前記組成物の総質量に対し、20質量%以下、18質量%以下、15質量%以下、12質量%以下、10質量%以下、8質量%以下、5質量%以下、3質量%以下、1質量%以下、0.8質量%以下、0.5質量%以下、0.3質量%以下、0.1質量%以下、0.05質量%以下、0.01質量%以下、0.005質量%以下、0.001質量%以下、0.0005質量%以下、0.0001質量%以下、0.00005質量%以下、0.00001質量%以下、0.000005質量%以下、0.000001質量%以下、0.0000005質量%以下、0.0000001質量%以下、0.00000005質量%以下、0.00000001質量%以下、又は0.000000005質量%以下であってよい。 According to another aspect of the present invention, the content of siRNA in the composition may be in the range of 0.000000001% by mass to 20% by mass with respect to the total mass of the composition. The content is 0.000000001 mass% or more, 0.000000005 mass% or more, 0.00000001 mass% or more, 0.00000005 mass% or more, 0.0000001 mass% or more, based on the total mass of the composition. 0.0000005% by mass or more, 0.000001% by mass or more, 0.000005% by mass or more, 0.00001% by mass or more, 0.00005% by mass or more, 0.0001% by mass or more, 0.0005% by mass or more, 0 0.001% or more, 0.005% or more, 0.01% or more, 0.05% or more, 0.1% or more, 0.3% or more, 0.5% or more, 8% by weight or more, 1% by weight or more, 3% by weight or more, 5% by weight or more, 8% by weight or more, 10% by weight or more, 12% by weight or more, 15% by weight or more, or 18% by weight It may be the top. The content is 20% by mass or less, 18% by mass or less, 15% by mass or less, 12% by mass or less, 10% by mass or less, 8% by mass or less, 5% by mass or less, based on the total mass of the composition. 3 mass% or less, 1 mass% or less, 0.8 mass% or less, 0.5 mass% or less, 0.3 mass% or less, 0.1 mass% or less, 0.05 mass% or less, 0.01 mass% 0.005 mass% or less, 0.001 mass% or less, 0.0005 mass% or less, 0.0001 mass% or less, 0.00005 mass% or less, 0.00001 mass% or less, 0.000005 mass% or less 0.000001 mass% or less, 0.0000005 mass% or less, 0.0000001 mass% or less, 0.00000005 mass% or less, 0.00000001 mass% or less, or 0.000000005 mass% or less.
本発明のまた他の側面によると、前記siRNAの投与量は、0.000001mg/kg/日〜20mg/kg/日の範囲であってよい。また、前記投与量は、0.000001mg/kg/日以上、0.000005mg/kg/日以上、0.00001mg/kg/日以上、0.00005mg/kg/日以上、0.00001mg/kg/日以上、0.0005mg/kg/日以上、0.0001mg/kg/日以上、0.0005mg/kg/日以上、0.001mg/kg/日以上、0.005mg/kg/日以上、0.01mg/kg/日以上、0.05mg/kg/日以上、0.1mg/kg/日以上、0.5mg/kg/日以上、0.8mg/kg/日以上、1mg/kg/日以上、2mg/kg/日以上、3mg/kg/日以上、5mg/kg/日以上、8mg/kg/日以上、10mg/kg/日以上、12mg/kg/日以上、15mg/kg/日以上、又は18mg/kg/日以上であってよい。また、前記投与量は、20mg/kg/日以下、18mg/kg/日以下、15mg/kg/日以下、12mg/kg/日以下、10mg/kg/日以下、8mg/kg/日以下、5mg/kg/日以下、3mg/kg/日以下、2mg/kg/日以下、1mg/kg/日以下、0.8mg/kg/日以下、0.5mg/kg/日以下、0.1mg/kg/日以下、0.05mg/kg/日以下、0.01mg/kg/日以下、0.005mg/kg/日以下、0.001mg/kg/日以下、0.0005mg/kg/日以下、0.00001mg/kg/日以下、0.00005mg/kg/日以下、0.00001mg/kg/日以下、又は0.000005mg/kg/日以下であってよい。前記有効成分の投与量の決定は、通常の技術者の水準内にあり、薬物の1日投与用量は、投与しようとする対象の進行程度、発病時期、年齢、健康状態、合併症などの多様な要因に応じて異なり得る。 According to still another aspect of the present invention, the dosage of the siRNA may range from 0.000001 mg / kg / day to 20 mg / kg / day. The dose is 0.000001 mg / kg / day or more, 0.000005 mg / kg / day or more, 0.00001 mg / kg / day or more, 0.00005 mg / kg / day or more, 0.00001 mg / kg / day. Or more, 0.0005 mg / kg / day or more, 0.0001 mg / kg / day or more, 0.0005 mg / kg / day or more, 0.001 mg / kg / day or more, 0.005 mg / kg / day or more, 0.01 mg / Kg / day or more, 0.05 mg / kg / day or more, 0.1 mg / kg / day or more, 0.5 mg / kg / day or more, 0.8 mg / kg / day or more, 1 mg / kg / day or more, 2 mg / Kg / day or more, 3 mg / kg / day or more, 5 mg / kg / day or more, 8 mg / kg / day or more, 10 mg / kg / day or more, 12 mg / kg / day or more, 15 mg / kg / day or more, It may be at 18mg / kg / day or more. The dose is 20 mg / kg / day or less, 18 mg / kg / day or less, 15 mg / kg / day or less, 12 mg / kg / day or less, 10 mg / kg / day or less, 8 mg / kg / day or less, 5 mg / Kg / day or less, 3 mg / kg / day or less, 2 mg / kg / day or less, 1 mg / kg / day or less, 0.8 mg / kg / day or less, 0.5 mg / kg / day or less, 0.1 mg / kg / Day or less, 0.05 mg / kg / day or less, 0.01 mg / kg / day or less, 0.005 mg / kg / day or less, 0.001 mg / kg / day or less, 0.0005 mg / kg / day or less, 0 It may be 0.0001 mg / kg / day or less, 0.00005 mg / kg / day or less, 0.00001 mg / kg / day or less, or 0.000005 mg / kg / day or less. Determination of the dose of the active ingredient is within the level of ordinary technicians, and the daily dose of the drug varies depending on the degree of progression of the subject to be administered, the time of onset, age, health condition, complications, etc. Depending on different factors.
本発明は、他の側面において、配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNAを有効成分として含むメラニン低下性疾患の予防、治療及び改善用組成物であってよい。 In another aspect, the present invention may be a composition for the prevention, treatment and amelioration of a melanin-lowering disease comprising, as an active ingredient, siRNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2.
一具現例によると、前記メラニン低下性疾患は、白斑、脱色素性母斑、白色粃糠疹、白癜、炎症後色素脱失症、斑状強皮症、部分白皮症、特発性滴状低メラニン症及び点状白皮症からなる群より選ばれた一つ以上であってよい。メラニン(melanin)は動物の外皮毛、毛、皮膚、頭部、眼部などから観察され、メラニンの産生が不足したり沈着が抑制され、又は過度な分解が起きると、メラニン低下性疾患が発病することがある。本発明は、一側面において、メラニンの生成又は沈着を増進させたり、チロシナーゼ及びTRP1の発現を増進させたりもするため、前記メラニン低下性疾患の予防、改善、及び治療に用いられ得る。 According to one embodiment, the melanin-lowering disease is vitiligo, depigmented nevus, white urticaria, white shark, post-inflammation depigmentation, maculopathy, partial leukoderma, idiopathic icy low It may be one or more selected from the group consisting of melanosis and punctate albinism. Melanin is observed in the outer coat hair, hair, skin, head, eyes, etc. of animals. When melanin production is insufficient, deposition is suppressed, or excessive degradation occurs, melanin-lowering disease develops. There are things to do. In one aspect, the present invention enhances the production or deposition of melanin and enhances the expression of tyrosinase and TRP1, and thus can be used for the prevention, improvement, and treatment of the melanin lowering disease.
本発明の一側面によると、前記組成物は薬学組成物であってよい。 According to one aspect of the invention, the composition may be a pharmaceutical composition.
前記薬学組成物は、担体、賦形剤、保存剤、防腐剤、安定化剤、水和剤又は乳化促進剤、浸透圧調節のための塩及び/又は緩衝剤などの薬剤学的補助剤、並びにその他治療的に有用な物質をさらに含んでいてよく、通常的な方法によって多様な経口投与剤又は非経口投与剤の形態で剤形化していてよい。 The pharmaceutical composition comprises a pharmaceutical adjuvant such as a carrier, excipient, preservative, preservative, stabilizer, wettable powder or emulsifier, salt and / or buffer for adjusting osmotic pressure, In addition, it may further contain other therapeutically useful substances, and may be formulated in various oral or parenteral dosage forms by conventional methods.
前記経口投与剤は、例えば、錠剤、丸剤、硬質及び軟質カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳化剤、シロップ剤、粉剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、ペレット剤などがあり、これらの剤形は、有効成分の他、界面活性剤、希釈剤(例:ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及びグリシン)、滑沢剤(例:シリカ、タルク、ステアリン酸及びそのマグネシウム又はカルシウム塩、並びにポリエチレングリコール)を含有していてよい。錠剤は、さらに、マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカンス、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びポリビニルピロリジンといった結合剤を含有していてよく、場合によって、澱粉、寒天、アルギン酸又はそのナトリウム塩といった崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤、及び甘味剤などの薬剤学的添加剤を含有していてよい。前記錠剤は、通常の混合、顆粒化又はコーティング方法によって製造されていてよい。 Examples of the oral administration agent include tablets, pills, hard and soft capsules, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, powders, powders, fine granules, granules, pellets, and the like. Forms include active ingredients, surfactants, diluents (eg lactose, dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and glycine), lubricants (eg silica, talc, stearic acid and its magnesium or calcium salts) , As well as polyethylene glycol). The tablets may further contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine, optionally disintegrating agents such as starch, agar, alginic acid or its sodium salt. , And may contain pharmaceutical additives such as absorbents, colorants, flavoring agents, and sweetening agents. The tablets may be manufactured by conventional mixing, granulating or coating methods.
また、前記非経口投与の形態としては、経皮投与型剤形であってよく、例えば、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、ゲル、クリーム、スプレー、懸濁剤、乳剤、坐剤、パッチなどの剤形であってよいが、これらに制限されるものではない。 The parenteral administration form may be a transdermal dosage form, for example, an injection, infusion, ointment, lotion, gel, cream, spray, suspension, emulsion, suppository, patch. The dosage form may be, but is not limited to these.
前記薬学組成物は、経口又は非経口で投与されてよく、非経口投与のとき、皮膚外用、腹腔内、直腸、静脈、筋肉、皮下、皮内、胸部内又は脳血管内注射注入方式を選択していてよい。 The pharmaceutical composition may be administered orally or parenterally, and when parenterally administered, select an external skin injection, intraperitoneal, rectal, vein, muscle, subcutaneous, intradermal, intrathoracic or intracerebral intravascular injection method You can do it.
前記薬学組成物は皮膚外用剤であってよく、前記皮膚外用剤は、外皮に塗布されるものであればいずれも含み得る組成物の総称であって、多様な剤形の医薬品又は医薬外品がこれに含まれ得る。 The pharmaceutical composition may be an external preparation for skin, and the external preparation for skin is a general term for compositions that can be applied to the outer skin, and is a generic term for pharmaceuticals or external pharmaceutical products in various dosage forms. Can be included in this.
本発明の他の側面によると、前記組成物は、毛髪の黒化用、毛髪の白化防止用、メラニン低下性疾患の予防及び改善用化粧料組成物であってよい。 According to another aspect of the present invention, the composition may be a cosmetic composition for blackening hair, preventing whitening of hair, preventing or improving melanin-lowering diseases.
前記化粧料組成物には、機能性添加物及び一般的な化粧料組成物に含まれる成分がさらに含まれていてよい。前記機能性添加物としては、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質及び海草エキスからなる群より選ばれた成分を含んでいてよい。その他含まれる配合成分としては、油脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、pH調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。 The cosmetic composition may further include functional additives and components included in general cosmetic compositions. The functional additive may contain a component selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides, sphingolipids, and seaweed extracts. Other ingredients included are oil and fat ingredients, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, UV absorbers, preservatives, bactericides, antioxidants, plant extracts, pH adjustment. Agents, alcohols, pigments, fragrances, blood circulation promoters, cooling agents, antiperspirants, purified water, and the like.
前記化粧料組成物は、その剤形が特に限定されず、目的とするところに応じて適宜選択すればよい。例えば、スキンローション、スキンソフナー、スキントナー、アストリンゼント、ローション、ミルクローション、モイスチャーローション、栄養ローション、マッサージクリーム、栄養クリーム、モイスチャークリーム、ハンドクリーム、ファウンデーション、エッセンス、栄養エッセンス、パック、石鹸、クレンジングフォーム、クレンジングローション、クレンジングクリーム、ボディーローション、及びボディークレンザーからなる群より選ばれたいずれか一つ以上の剤形で製造されていてよいが、これらに制限されるものではない。 The dosage form of the cosmetic composition is not particularly limited, and may be appropriately selected according to the intended purpose. For example, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, foundation, essence, nutrition essence, pack, soap, cleansing foam, It may be produced in any one or more dosage forms selected from the group consisting of cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, and body cleanser, but is not limited thereto.
本発明の一側面に係る剤形がペースト、クリーム、又はゲルの場合は、担体成分として、動物繊維、植物繊維、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、又は酸化亜鉛などが用いられていてよい。 When the dosage form according to one aspect of the present invention is a paste, cream, or gel, the carrier component is animal fiber, plant fiber, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicon, bentonite, silica, Talc or zinc oxide may be used.
本発明の一側面に係る剤形がパウダー又はスプレーの場合は、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、又はポリアミドパウダーが用いられていてよく、特にスプレーである場合は、さらに、クロロフルオロハイドロカーボン、プロパン/ブタン、又はジメチルエーテルのような推進剤を含んでいてよい。 When the dosage form according to one aspect of the present invention is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, or polyamide powder may be used as a carrier component, particularly when it is a spray. May further contain a propellant such as chlorofluorohydrocarbon, propane / butane, or dimethyl ether.
本発明の一側面に係る剤形が溶液又は乳濁液である場合は、担体成分として、溶媒、溶媒和剤、又は乳濁化剤が用いられ、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、1,3−ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール、又はソルビタンの脂肪酸エステルがある。 When the dosage form according to one aspect of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a solvating agent, or an emulsifying agent is used as a carrier component. For example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, There are ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycols, or fatty acid esters of sorbitan.
本発明の一側面に係る剤形が懸濁液である場合は、担体成分として、水、エタノール、又はプロピレングリコールのような液状希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、又はトラガカントなどが用いられていてよい。 When the dosage form according to one aspect of the present invention is a suspension, the carrier component includes a liquid diluent such as water, ethanol, or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester, and poly Suspending agents such as oxyethylene sorbitan ester, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar, or tragacanth may be used.
本発明の一側面に係る剤形が界面活性剤含有クレンジングである場合は、担体成分として、脂肪族アルコールスルフェート、脂肪族アルコールエーテルスルフェート、スルホサクシネートモノエステル、イセチオン酸、イミダゾリウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルスルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体、又はエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが用いられていてよい。 When the dosage form according to one aspect of the present invention is a surfactant-containing cleansing, as a carrier component, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinate monoester, isethionic acid, imidazolium derivative, Methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide ether sulfate, alkylamide betaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester may be used.
本発明の他の側面によると、前記組成物は、食品又は健康食品組成物であってよい。 According to another aspect of the invention, the composition may be a food or health food composition.
前記食品又は健康食品組成物は、液状又は固体状態の剤形であってよく、例えば、各種の食品類、飲料、ガム、茶、ビタミン複合剤、健康機能食品類、健康補助食品類などがあり、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、又は飲料の形態で用いられていてよい。各剤形の食品組成物は、有効成分の他、当該分野において通常的に用いられる成分を剤形又は使用目的に応じて当業者が困難なく適宜選定して配合していてもよく、他の原料と同時に適用した場合に相乗効果が奏されることがある。 The food or health food composition may be in a liquid or solid dosage form, for example, various foods, beverages, gum, tea, vitamin complex, health functional foods, health supplements, etc. , Powders, granules, tablets, capsules or beverages. The food composition of each dosage form may contain ingredients that are usually used in the field in addition to the active ingredients as appropriate by the person skilled in the art depending on the dosage form or purpose of use. When applied at the same time as the raw material, there may be a synergistic effect.
本明細書に開示された有効成分の他に含有し得る液体成分には特に制限点がなく、通常の飲料と同様に種々の香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含んでいてよい。前記天然炭水化物の例としては、ブドウ糖、果糖などの単糖類、マルトース、スクロースなどの二糖類及びデキストリン、シクロデキストリンなどの通常的な糖及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールがある。前記香味剤としては、天然香味剤(ソーマチン、ステビア抽出物(例えば、レバウディオサイドA、グリチルリチンなど))及び合成香味剤(サッカリン、アスパルテームなど)を有利に使用していてよい。前記天然炭水化物の割合は、本明細書に開示された組成物100ml当たり一般的に約1〜20g、一側面において、約5〜12gであってよい。 The liquid component that can be contained in addition to the active ingredient disclosed in the present specification is not particularly limited, and may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients in the same manner as a normal beverage. Examples of the natural carbohydrate include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and conventional sugars such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As the flavoring agent, natural flavoring agents (thaumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) may be advantageously used. The proportion of the natural carbohydrate may generally be about 1-20 g per 100 ml of the composition disclosed herein, and in one aspect about 5-12 g.
前記食品組成物は、一側面において、多様な栄養剤、ビタミン、鉱物(電解質)、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び増進剤(チーズ、チョコレートなど)、ペクト酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、pH調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などを含んでいてよい。他の側面において、天然果物ジュース及び野菜飲料の製造のための果肉を含んでいてよい。これらの成分は、独立的に又は組み合わせて用いていてよい。前記添加剤の割合は種々であってよいが、本明細書に開示された組成物100質量部当たり0.001〜約20質量部の範囲で選択されるのが一般的である。 In one aspect, the food composition comprises various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, colorants and enhancers (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and its Salts, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonates used in carbonated beverages, and the like may be included. In other aspects, it may include pulp for the production of natural fruit juices and vegetable beverages. These components may be used independently or in combination. The proportion of the additive may vary, but is generally selected in the range of 0.001 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition disclosed herein.
以下、実施例、実験例を通じて、本発明の一側面の構成及び効果をより具体的に説明する。なお、下記の例は本発明に関する理解を助けるための目的から例示したものに過ぎず、本発明の範疇及び範囲がそれらによって制限されるものではない。 Hereinafter, the configuration and effect of one aspect of the present invention will be described more specifically through examples and experimental examples. It should be noted that the following examples are merely illustrative for the purpose of helping understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited thereby.
[実施例1]
細胞及び皮膚モデルの準備
正常ヒト表皮メラニン形成細胞(Normal human epidermal melanocytes、NHEMs、Cascade Biologics、Portland、OR、USA)を入手し、C57BL/6 J(black、a/a)マウス由来のメラニン形成細胞であるメラン−A(Melan−A)細胞株をDorothy C. Bennett博士(St. George’s Hospital Medical School、London、UK)から入手した。B16F1マウス黒色腫(melanoma)細胞株はATCC(Manassas、VA、USA)から入手した。
[Example 1]
Preparation of cells and skin model Normal human epidermal melanocytes, normal human epithelial melanocytes (NHEMs, Cascade Biologicals, Portland, OR, USA) were obtained, and melanocytes from C57BL / 6 J (black, a / a) mice The Melan-A cell line was obtained from Dr. Dorothy C. Bennett (St. George's Hospital Medical School, London, UK). The B16F1 mouse melanoma cell line was obtained from ATCC (Manassas, VA, USA).
正常ヒト表皮メラニン形成細胞は、M−254培地でヒトメラニン形成細胞増殖サプリメント(Human Melanocyte Growth Supplements、HMGS)(Cascade Biologics、Inc.、Mansfield、UK)下で維持させた。Melan−A細胞はRPMI 1640培地で10%(v/v)ウシ胎児血清、1%(v/v)ペニシリン−ストレプトマイシン、及び0.2μM ホルボール12−ミリスタート13−アセタート(phorbol 12−myristate 13−acetate)下で維持させた。B16F1マウス黒色腫細胞株は10%(v/v)ウシ胎児血清及び1%(v/v)ペニシリン−ストレプトマイシンを添加したDMEMで培養した。 Normal human epidermal melanocytes were maintained in M-254 medium under human melanocyte growth supplements (HMGS) (Cascade Biologics, Inc., Mansfield, UK). Melan-A cells were treated with RPMI 1640 medium in 10% (v / v) fetal bovine serum, 1% (v / v) penicillin-streptomycin, and 0.2 μM phorbol 12-myristate 13-acetate (phorbol 12-myristate 13- acetate). The B16F1 mouse melanoma cell line was cultured in DMEM supplemented with 10% (v / v) fetal bovine serum and 1% (v / v) penicillin-streptomycin.
試薬及びsiRNAトランスフェクション(transfection)
α−MSH、アルブチン(arbutin)、及びコウジ酸(kojic acid)はSigma−Aldrich社(St. Louis、MO、USA)から入手した。siRNAである#1(5’−CCAACCAGAACAAGCAGAACA−3’)、#2(5’−GAACACGAAGGCUGUAACAAA−3’)、及び陰性対照群siRNA(scrambled control siRNA、siNC)(5’−CCUACGCCACCAAUUUCGU−3’)はジェノリューション社(Genolution、ソウル、大韓民国)から入手した。Lipofectamine(登録商標) RNAi MAX(Invitrogen、Carlsbad、CA、USA)を用いて60mmディッシュで培養したメラン−a(Melan−a)及びB16F1細胞にsiRNAをトランスフェクションさせた。siRNAとともに24時間培養した後、細胞に対してそれぞれの化合物(試薬)で処理を施し、48時間維持した。
Reagents and siRNA transfection
α-MSH, arbutin, and kojic acid were obtained from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). siRNAs # 1 (5′-CCAACCAGAACAAGCAGAACA-3 ′), # 2 (5′-GAACACGAAGGCUGUAACAAAA-3 ′), and negative control group siRNA (scrambled control siRNA, siNC) (5′-CCUACCGCCACCAAUU) Obtained from Resolution (Seoul, South Korea). SiRNA was transfected into Melan-a and B16F1 cells cultured in 60 mm dishes using Lipofectamine® RNAi MAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). After culturing with siRNA for 24 hours, the cells were treated with each compound (reagent) and maintained for 48 hours.
メラニンアッセイ
細胞をトリプシン/EDTAで処理後、1000xgで5分間遠心分離し、PBSで2回洗浄した。チューブ内の最終細胞ペレットを写真に撮り、細胞ペレットは1N NaOHに溶解させた。均質化させた細胞抽出物を96−ウェル(well)プレートに移載し、ELISAプレートリーダーを利用して吸光度405nmにおける相対的メラニン量を測定した。
Melanin assay cells were treated with trypsin / EDTA, centrifuged at 1000 × g for 5 minutes, and washed twice with PBS. The final cell pellet in the tube was photographed and the cell pellet was dissolved in 1N NaOH. The homogenized cell extract was transferred to a 96-well plate, and the relative amount of melanin at an absorbance of 405 nm was measured using an ELISA plate reader.
ウエスタンブロット分析
すべての溶解物は2×Laemmliサンプルバッファー(2×Laemmli sample buffer、62.5mM Tris−HCl、pH6.8、25%[v/v]glycerol、2%[w/v]SDS、5%[v/v]β−mercaptoethanol、及び0.01%[w/v]bromophenol blue)(Bio−Rad、Hercules社、CA、USA)を用いて準備した。すべての細胞タンパク質はBradford solution(Bio−Rad)を用いて測定した。その後、前記試料はSDS−PAGEで分離し、PVDFメンブレイン(Bio−Rad)に移転した。TBST(25mM Tris、140mM NaCl、及び0.05%[v/v]Tween(登録商標) 20)中の4%(w/v)スキムミルク(skim milk)でブロッキングした後、メンブレインを特定の1次抗体とともにオーバーナイト(overnight)培養させた。
Western Blot Analysis All lysates were prepared using 2 x Laemmli sample buffer (2 x Laemmli sample buffer, 62.5 mM Tris-HCl, pH 6.8, 25% [v / v] glycerol, 2% [w / v] SDS, 5 % [V / v] β-mercaptoethanol and 0.01% [w / v] bromophenol blue) (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). All cellular proteins were measured using Bradford solution (Bio-Rad). Thereafter, the samples were separated by SDS-PAGE and transferred to PVDF membrane (Bio-Rad). After blocking with 4% (w / v) skim milk in TBST (25 mM Tris, 140 mM NaCl, and 0.05% [v / v] Tween® 20), membranes were identified as specific 1 Overnight culture was performed with the next antibody.
抗アクチン抗体(anti−actin antibody、MAB1501、1:10,000)はMillipore社(Temecula、CA、USA)から入手し、抗αPEP7(チロシナーゼ)抗体(anti−αPEP7(tyrosinase)antibody、1:1000)と抗αPEP1(TRP1)抗体(anti−αPEP1(TRP1)antibody、1:1000)は、V. J. Hearing(NIH、Bethesda、MD)から入手した。タンパク質の検出のために、前記メンブレインはHRP−コンジュゲーティッド二次抗体を用いて培養し、シグナルはSuperSignal(登録商標) West Dura HRP Detection Kit(Pierce社、Rockford、IL、USA)を利用して測定した。 Anti-actin antibody (anti-actin antibody, MAB1501, 1: 10,000) was obtained from Millipore (Temecula, CA, USA) and anti-αPEP7 (tyrosinase) antibody (anti-αPEP7 (tyrosinase) antibody, 1: 1000). And anti-αPEP1 (TRP1) antibody (anti-αPEP1 (TRP1) antibody, 1: 1000) were obtained from V. J. Hearing (NIH, Bethesda, MD). For protein detection, the membrane is cultured using an HRP-conjugated secondary antibody, and the signal is obtained using SuperSignal® West Dura HRP Detection Kit (Pierce, Rockford, IL, USA). Measured.
統計分析
各データは少なくとも3回の独立した実験を施して得たものとし、平均±SE(標準誤差)で表した。結果の統計的評価は一元分散分析(1−way ANOVA)を用いて行った(*:p<0.05、**:p<0.01)。
Statistical analysis Each data was obtained by performing at least three independent experiments and expressed as mean ± SE (standard error). Statistical evaluation of the results was performed using a one-way analysis of variance (1-way ANOVA) (*: p <0.05, **: p <0.01).
[実験例1]siRNAによるメラニンの生成、関連酵素及びタンパク質の調節
メラン−a(Melan−a)細胞をsiRNA(#1、#2)、スクランブル対照群siRNA(scrambled control siRNA、siNC)にそれぞれトランスフェクションさせ、48時間後に、メラニンの生成を抑制させる特定の物質D(0.5μM)の処理又は無血清血清条件下で2日間培養した後、メラニンの含量を測定した。図1から分かるように、メラニンの生成を抑制させる特定の物質Dの処理又は無血清条件下におけるメラン−a細胞培養は、対照群(siNC)においてメラニンの生成を抑制したが、刺激(特定の物質D又は血清飢餓)で抑制されたメラニンの生成はsiRNA(#1、#2)によって顕著に増進した(図1)。
[Experimental Example 1] Melan Production by siRNA, Regulation of Related Enzymes and Proteins Melan-a cells were transferred to siRNA (# 1, # 2) and scrambled control siRNA (scrambled control siRNA, siNC), respectively. After 48 hours, the content of melanin was measured after treatment with a specific substance D (0.5 μM) that suppresses the production of melanin or culture under serum-free serum conditions for 2 days. As can be seen from FIG. 1, treatment with a specific substance D that inhibits the production of melanin or melanin-a cell culture under serum-free conditions suppressed the production of melanin in the control group (siNC), but the stimulation (specific The production of melanin suppressed by substance D or serum starvation was significantly enhanced by siRNA (# 1, # 2) (FIG. 1).
また、メラニン形成酵素の発現についても実験を実施した。ウエスタンブロット分析結果、メラン−a細胞siRNA(#1、#2)をトランスフェクションさせた場合、野生型細胞に比べ、チロシナーゼ及びTRP1タンパク質の水準が顕著に増加した(図2)。 Experiments were also conducted on the expression of melaninase. As a result of Western blot analysis, when melan-a cell siRNA (# 1, # 2) was transfected, the levels of tyrosinase and TRP1 protein were markedly increased compared to wild type cells (FIG. 2).
B16F1細胞に対してもsiNC、siRNA(#1、#2)をトランスフェクションさせ、1日後に、メラニン形成を抑制させる特定の物質D(0.5μM)の処理又は無血清培地処理を施し、2日後にメラニンの生成程度を確認し、チロシナーゼ、TRP1に対してウエスタンブロットで分析を行った。 B16F1 cells are also transfected with siNC and siRNA (# 1, # 2), and one day later, treated with a specific substance D (0.5 μM) that suppresses melanogenesis or treated with serum-free medium. After a day, the degree of melanin production was confirmed, and tyrosinase and TRP1 were analyzed by Western blot.
その結果、B16F1細胞において特定の物質D又は血清飢餓で抑制されたメラニンの生成が、メラン−a細胞と同様、siRNA(#1、#2)トランスフェクションによって顕著に増加した(図3)。また、特定の物質D又は血清飢餓で抑制されたチロシナーゼ及びTRP1の発現がsiRNA(#1、#2)トランスフェクションによって顕著に増加した(図4)。 As a result, the production of melanin suppressed by specific substance D or serum starvation in B16F1 cells was remarkably increased by siRNA (# 1, # 2) transfection, similar to melan-a cells (FIG. 3). In addition, expression of tyrosinase and TRP1 suppressed by specific substance D or serum starvation was significantly increased by siRNA (# 1, # 2) transfection (FIG. 4).
このような結果を総合すると、前記siRNA(#1、#2)によってメラニンの合成を増進させることができるとともに、メラニンの生成酵素及びメラニンの生成関与タンパク質の発現を増進させることができ、これにより、毛髪の黒化及び毛髪の白化防止を図ることができることから、本発明は、一側面において、毛髪の黒化及び白髪のケアに用いられ得る。また、本発明の一側面に係るこのような特徴を用いて皮膚の特定の部位や皮膚全体に対してメラニンの生成を増進させることができることから、本発明の一側面を用いてメラニン低下性疾患や症状の予防、治療、及び改善を図ることができる。 Summing up such results, the siRNA (# 1, # 2) can enhance the synthesis of melanin, and can enhance the expression of melanin-producing enzyme and melanin-producing protein. Since the hair can be blackened and the whitening of the hair can be prevented, the present invention can be used for hair blackening and hair care in one aspect. Moreover, since the production | generation of melanin can be accelerated | stimulated with respect to the specific site | part of the skin or the whole skin using such a characteristic concerning one side of the present invention, a melanin-lowering disease using one side of the present invention Can prevent, treat, and improve symptoms and symptoms.
以下、本発明の一側面に係る組成物の剤形例について説明するが、他の様々な剤形への応用も可能であり、且つ、これらは本発明を限定するためのものではない、単に具体的に説明するためのものである。 Hereinafter, examples of the dosage form of the composition according to one aspect of the present invention will be described, but application to various other dosage forms is possible, and these are not intended to limit the present invention. This is for concrete explanation.
[剤形例1]軟質カプセル剤
配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA 2mgを含有するリポソーム10mg、L−カルニチン80〜140mg、大豆油180mg、パーム油2mg、植物性硬化油8mg、黄蝋4mg及びレシチン6mgを混合し、通常の方法に従って1カプセルに充填して軟質カプセル剤を製造した。
[Form example 1] Soft capsule 10 mg of liposome containing 2 mg of siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, L-carnitine 80-140 mg, soybean oil 180 mg, palm oil 2 mg, vegetable hardened oil 8 mg, 4 mg of yellow wax and 6 mg of lecithin were mixed and filled into one capsule according to a usual method to produce a soft capsule.
[剤形例2]錠剤
配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA 2mgを含むリポソーム10mg、ガラクトオリゴ糖200mg、乳糖60mg及び麦芽糖140mgを混合し、流動層乾燥機を利用して顆粒した後、糖エステル(sugar ester)を6mgを添加して、打錠機で打錠して錠剤を製造した。
[Formulation Example 2] Tablet After mixing 10 mg of liposome containing 2 mg of siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, galactooligosaccharide 200 mg, lactose 60 mg and maltose 140 mg and granulating using a fluid bed dryer Then, 6 mg of sugar ester was added and tableted by a tableting machine to produce tablets.
[剤形例3]顆粒剤
配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA 2mgを含むリポソーム10mg、無水結晶ブドウ糖250mg及び澱粉550mgを混合し、流動層造粒機を使用して顆粒に成形した後、包に充填して顆粒剤を製造した。
[Dosage Form Example 3] Granule 10 mg of liposome containing 2 mg of siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, 250 mg of anhydrous crystalline glucose and 550 mg of starch are mixed and formed into granules using a fluid bed granulator. After that, it was filled in a package to produce a granule.
[剤形例4]ドリンク剤
配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA 2mgを含むリポソーム10mg、ブドウ糖10g、クエン酸0.6g、及び液状オリゴ糖25gを混合した後、精製水300mlを加えて各瓶に200mlずつ充填する。瓶に充填した後、130℃で4〜5秒間殺菌してドリンク剤を製造した。
[Formulation Example 4] Drink agent After mixing 10 mg of liposome containing 2 mg of siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, glucose 10 g, citric acid 0.6 g, and liquid oligosaccharide 25 g, 300 ml of purified water was added. In addition, each bottle is filled with 200 ml. After filling the bottle, it was sterilized at 130 ° C. for 4 to 5 seconds to produce a drink.
[剤形例5]注射剤
配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA 5mgを含むリポソーム20mg、適量の注射用滅菌蒸留水、適量のpH調節剤を用いて通常の方法に従い注射剤を製造した。
[Formulation Example 5] Injectable Injectable according to a usual method using 20 mg of liposomes containing 5 mg of siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, an appropriate amount of sterile distilled water for injection, and an appropriate amount of pH regulator. Manufactured.
[剤形例6]柔軟化粧水(スキンローション)
配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA 1.0質量%を含有するリポソーム10質量%、L−アスコルビン酸−2−リン酸マグネシウム塩1.00質量%、水溶性コラーゲン(1%水溶液)1.00質量%、クエン酸ナトリウム0.10質量%、クエン酸0.05質量%、甘草エキス0.20質量%、1,3−ブチレングリコール3.00質量%、残量として精製水を用いて柔軟化粧水(スキンローション)を製造した。
[Form 6] Soft lotion (skin lotion)
10% by mass of liposomes containing 1.0% by mass of siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, 1.00% by mass of L-ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt, water-soluble collagen (1% aqueous solution 1.00% by mass, sodium citrate 0.10% by mass, citric acid 0.05% by mass, licorice extract 0.20% by mass, 1,3-butylene glycol 3.00% by mass, and purified water as the remaining amount A soft lotion (skin lotion) was produced.
[剤形例7]クリーム
配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA 1.00質量%を含有するリポソーム10質量%、ポリエチレングリコールモノステアレート2.00質量%、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン5.00質量%、プロピレングリコール4.00質量%、スクアレン6.00質量%、トリ2−エチルヘキサングリセリル6.00質量%、スフィンゴ糖脂質1.00質量%、1,3−ブチレングリコール7.00質量%、蜜蝋5.00質量%、残量として精製水を用いてクリーム状製剤を製造した。
[Formulation Example 7] Cream 10% by mass of liposomes containing 1.00% by mass of siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, 2.00% by mass of polyethylene glycol monostearate, self-emulsifying monostearic acid Glycerin 5.00% by mass, propylene glycol 4.00% by mass, squalene 6.00% by mass, tri-2-ethylhexaneglyceryl 6.00% by mass, glycosphingolipid 1.00% by mass, 1,3-butylene glycol 7 A cream-form preparation was produced using 0.000% by mass, 5.00% by mass of beeswax, and purified water as the remaining amount.
[剤形例8]パック
配列番号1又は配列番号2の塩基配列からなるsiRNA 1.00質量%を含有するリポソーム10質量%、ポリビニルアルコール13.00質量%、L−アスコルビン酸−2−リン酸マグネシウム塩1.00質量%、ラウロイルヒドロキシプロリン1.00質量%、水溶性コラーゲン(1%水溶液)2.00質量%、1,3−ブチレングリコール3.00質量%、エタノール5.00質量%、残量として精製水を用いてパックを製造した。
[Dosage Form Example 8] Pack 10% by mass of liposomes containing 1.00% by mass of siRNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, 13.00% by mass of polyvinyl alcohol, L-ascorbic acid-2-phosphate Magnesium salt 1.00% by mass, lauroyl hydroxyproline 1.00% by mass, water-soluble collagen (1% aqueous solution) 2.00% by mass, 1,3-butylene glycol 3.00% by mass, ethanol 5.00% by mass, A pack was produced using purified water as the remaining amount.
[剤形例9]健康食品
下記の表に記載された組成にて通常の方法に従い健康食品を製造した。
[Formulation Example 9] Health Food A health food was produced according to the usual method with the composition described in the following table.
前記ビタミン及び無機質混合物の組成比は、比較的に健康食品に適合した成分を例にして混合組成したが、その配合比を任意に変形実施しても構わなく、通常の健康食品の製造方法に従い前記成分を混合した後、通常の方法に従い健康食品の組成物の製造に用いてもよい。 The composition ratio of the vitamin and inorganic mixture is a mixture composition taking as an example a component that is relatively suitable for health foods, but the blending ratio may be arbitrarily changed, and according to a normal method for producing health foods After mixing the above components, they may be used in the production of a health food composition according to a conventional method.
[剤形例10]健康飲料 [Formulation Example 10] Health drink
前記表2のように総体積900mlになるように残量の精製水を添加して通常の健康飲料の製造方法に従い前記成分を混合してから約1時間85℃で撹拌加熱し、これにより調製された溶液をろ過して得られたろ液を滅菌された2リットルの容器に入れて密封滅菌した後に冷蔵保管して健康飲料を製造した。 As shown in Table 2, the remaining amount of purified water was added to a total volume of 900 ml, and the ingredients were mixed according to a normal health drink manufacturing method, followed by stirring and heating at 85 ° C. for about 1 hour. The filtrate obtained by filtering the solution was put into a sterilized 2 liter container, sealed and sterilized, and stored refrigerated to produce a health drink.
以上、本発明内容の特定の部分を詳しく記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとってこのような具体的な記述は単に好適な実施態様であるに過ぎず、これによって本発明の範囲が制限されるものではないことは明白であろう。したがって、本発明の実質的な範囲は添付の請求項とそれらの等価物によって定義されるといえよう。 Although specific portions of the present invention have been described in detail, such specific descriptions are merely preferred embodiments for those having ordinary skill in the art, and thus the scope of the present invention. It will be clear that is not limited. Therefore, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
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