JP2013256448A - Whitening agent - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、美白剤、メラニン生成抑制剤又はドーパオキシダーゼ活性抑制剤に関する。 The present invention relates to a whitening agent, a melanin production inhibitor or a dopa oxidase activity inhibitor.
美容上、色素沈着や、シミ、ソバカスの少ない白い肌が好まれる傾向にあることから、長期間使用しても安全性の高い皮膚美白作用を有する物質が望まれている。
この色素沈着やシミ、ソバカス等は、一般に皮膚の紫外線暴露による刺激やホルモンの異常又は遺伝的要素等によって皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化されメラニン生成が亢進した結果生じるものと考えられている。このメラニン生成亢進のメカニズムは複雑であるが、メラニンは酵素チロシナーゼの作用により生合成され、チロシナーゼ活性の一つであるドーパオキシダーゼ活性はメラニン生成のメカニズムに深く関与していることが知られている（非特許文献１）。
このメラニン生成のメカニズムを標的とした皮膚美白剤が開発されている。例えば、酵素チロシナーゼの活性を抑制してメラニン産生を抑制する作用を有する皮膚美白剤として、アスコルビン酸、アルブチン、コウジ酸等が報告されている（非特許文献２）。
From the viewpoint of beauty, white skin with less pigmentation, spots and freckles tends to be preferred, and therefore a substance having a skin whitening effect that is highly safe even after long-term use is desired.
This pigmentation, stains, buckwheat, etc. are generally caused as a result of activation of pigment cells (melanocytes) in the skin due to stimulation by ultraviolet exposure of the skin, hormonal abnormalities or genetic factors, etc., and increased melanin production. It is considered. Although the mechanism of this melanin enhancement is complex, melanin is biosynthesized by the action of the enzyme tyrosinase, and it is known that dopa oxidase activity, one of the tyrosinase activities, is deeply involved in the mechanism of melanin production (Non-Patent Document 1).
Skin whitening agents targeting the mechanism of melanin production have been developed. For example, ascorbic acid, arbutin, kojic acid, and the like have been reported as skin whitening agents that have the action of suppressing the activity of the enzyme tyrosinase to suppress melanin production (Non-patent Document 2).
ドーパオキシダーゼ活性を抑制し、皮膚美白作用を有する植物エキスが報告されている。例えば、トウセンダン（Melia toosendan Sieb. et Zucc.）、ソウカ（Amomum tsao-ka Crevost et Lemaire）、セネシオ・グラシリス（Senecio gracilis）及びコクリロ（Veratrum nigrum L.）（特許文献１）、セイヨウトウキ（Angelica archangelica）、ハナミズキ（Benthamidia florida）、カンスイ（Euphorbia kansui Liou）、ヌルデ（Rhus chinensis Mill.）、オカゼリ（Cnidium monnieri（L.）Cuss.）、キンミズヒキ（Agrimonia pilosa Ledeb.）、ロウロ（Diuranthera minor（C.H.Wright）Hemsl.）及びセイヨウメギ（Berberis aristata）（特許文献２）、イヌカラマツ、タイワンコマツナギ及びチョウセンアサガオ（特許文献３）、ならびにザクロ（Punica granatum）花（特許文献４）が知られている。 Plant extracts that suppress dopa oxidase activity and have a skin whitening effect have been reported. For example, Melia toosendan Sieb. Et Zucc., Soka (Amomum tsao-ka Crevost et Lemaire), Senecio gracilis and Veratrum nigrum L (Patent Document 1), Angelica archangelica ), Dogwood (Benthamidia florida), Kansui (Euphorbia kansui Liou), Nurde (Rhus chinensis Mill.), Okazeri (Cnidium monnieri (L.) Cuss.), Kimizuki (Agrimonia pilosa Ledeb.), Louro (Diuranthera minor (CHWright) ) Hemsl.) And Berberis aristata (patent document 2), dog larch, scallop and datura (patent document 3), and pomegranate (Punica granatum) flowers (patent document 4) are known.
ゴマノハグサ科ウンラン属の植物Linaria buriatica Turcz.は、多枝柳穿魚とも称され、東洋医学で清熱、解毒等のために使用されている。またマツ科モミ属のシベリアモミは、精油として使用され、抗菌、抗炎症等の効能が知られている。しかし、これらの植物が皮膚美白作用、メラニン生成抑制作用又はドーパオキシダーゼ活性抑制作用を有していることは知られていない。 Linaria buriatica Turcz. Is a plant belonging to the genus Unran, which is also called multi-branched willow fish, and is used for oriental medicine for cleansing, detoxification, and the like. In addition, Siberian fir belonging to the genus Firaceae is used as an essential oil and has known antibacterial and anti-inflammatory effects. However, it is not known that these plants have skin whitening action, melanin production inhibitory action, or dopa oxidase activity inhibitory action.
本発明は、安全性が高く、ドーパオキシダーゼ活性を抑制することができ、化粧料や医薬等として有用な美白剤、メラニン生成抑制剤及びドーパオキシダーゼ活性抑制剤を提供することに関する。 The present invention relates to providing a whitening agent, a melanin production inhibitor, and a dopa oxidase activity inhibitor that are highly safe, can inhibit dopa oxidase activity, and are useful as cosmetics and medicines.
本発明者は、皮膚美白作用やメラニン生成抑制作用等を有する天然由来の物質を探索したところ、多枝柳穿魚及びシベリアモミが、ドーパオキシダーゼ活性抑制作用を有し、メラニン過剰生成に伴う皮膚の褐色化やシミ・ソバカス等の予防、改善、治療等に有用であることを見出し、本発明を完成させた。 The present inventor searched for a naturally-derived substance having a skin whitening action, a melanin production inhibitory action, and the like. Was found to be useful for the prevention, improvement, treatment, etc. of browning of skin, spots and freckles, and the present invention was completed.
すなわち、本発明は以下を提供する。
１）多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とするドーパオキシダーゼ活性抑制剤。
２）多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とするメラニン生成抑制剤。
３）多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とする皮膚美白剤。
４）多枝柳穿魚又はその抽出物を有効成分とする皮膚外用剤。
That is, the present invention provides the following.
1) A dopa oxidase activity inhibitor comprising at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof as an active ingredient.
2) A melanin production inhibitor containing as an active ingredient at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
3) A skin lightening agent comprising as an active ingredient at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
4) A topical skin preparation comprising a multi-branched willow fish or an extract thereof as an active ingredient.
本発明のドーパオキシダーゼ活性抑制剤、メラニン生成抑制剤、皮膚美白剤、又は皮膚外用剤を用いれば、皮膚におけるメラニンの過剰産生を抑制し、日焼け等の色素沈着、シミ、ソバカスの予防、改善又は治療が可能となる。 If the dopa oxidase activity inhibitor, melanin production inhibitor, skin lightening agent, or external preparation for skin of the present invention is used, the excessive production of melanin in the skin is suppressed, and pigmentation such as tanning, spots, freckles can be prevented, improved, or Treatment becomes possible.
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処置行為を含まない概念である。 In the present specification, “non-therapeutic” is a concept that does not include a medical act, that is, a treatment act on the human body by therapy.
本明細書において、「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転、疾患、症状又は状態の悪化の防止又は遅延、あるいは疾患、症状又は状態の進行の逆転、防止又は遅延をいう。 In the present specification, “improvement” refers to improvement of a disease, symptom or condition, prevention or delay of deterioration of the disease, symptom or condition, or reversal, prevention or delay of progression of the disease, symptom or condition.
本明細書において、「予防」とは、個体における疾患若しくは症状の発症の防止又は遅延、あるいは個体の疾患若しくは症状の発症の危険性を低下させることをいう。 As used herein, “prevention” refers to preventing or delaying the onset of a disease or symptom in an individual, or reducing the risk of developing an individual's disease or symptom.
本発明における多枝柳穿魚とは、ゴマノハグサ科ウンラン属植物のLinaria buriatica Turcz.を意味する。また本発明におけるシベリアモミとは、マツ科モミ属植物のAbies sibirica Ldb.を意味する。本発明において、これらの植物は、その任意の部位、例えば全草、全木、葉（葉身、葉柄等）、果実（成熟、未熟等）、種子、花（花弁、子房等）、茎、幹、枝、樹皮、根等が使用され得る。多枝柳穿魚は全草、シベリアモミは枝葉を使用するのが好ましい。当該植物は、そのまま、又は切断、破砕、粉砕、搾取等の処理をして用いるか、又はそれらをさらに乾燥若しくは粉末化して用いることができる。
上記植物の抽出物としては、特に限定されない限り、上記部位のいずれかからの抽出物であればよいが、多枝柳穿魚は全草、シベリアモミは枝葉からの抽出物が好ましい。抽出物は、上記植物の部位から直接抽出されたものでもよいが、当該植物の部位を切断、破砕、粉砕若しくは搾取、及び／又は乾燥若しくは粉末化してから抽出されたものでもよい。
The multi-branch willow fish in the present invention means Linaria buriatica Turcz. The term “Siberian fir” in the present invention means Abies sibirica Ldb. In the present invention, these plants are arbitrary parts thereof, for example, whole plants, whole trees, leaves (leaf blades, petiole, etc.), fruits (mature, immature, etc.), seeds, flowers (petals, ovary, etc.), stems. , Trunks, branches, bark, roots and the like may be used. It is preferable to use whole plants for multi-branch willows and branches and leaves for Siberian fir. The said plant can be used as it is or after being processed by cutting, crushing, crushing, exploitation, etc., or by further drying or pulverizing them.
The plant extract is not particularly limited as long as it is an extract from any one of the above-mentioned sites, but the multi-branch willow fish is preferably the whole plant and the Siberian fir is preferably the branch leaf extract. The extract may be extracted directly from the plant part, or may be extracted after cutting, crushing, crushing or exploiting the plant part and / or drying or powdering the plant part.
上記抽出物としては、市販されているものを利用してもよく、又は常法により得られる各種溶媒抽出物、又はその希釈液、その濃縮液、その乾燥末、ペースト若しくはその活性炭処理したものであってもよい。一例として、本発明における抽出物は、上記植物を室温若しくは加温下にて抽出するか、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得ることができる。 As the extract, commercially available products may be used, or various solvent extracts obtained by a conventional method, or diluted solutions thereof, concentrated solutions thereof, dried powders thereof, pastes or activated carbon treatments thereof. There may be. As an example, the extract in the present invention can be obtained by extracting the plant at room temperature or under heating, or by extracting it using an extraction device such as a Soxhlet extractor.
抽出のための溶媒には、極性溶媒、非極性溶媒のいずれをも使用することができる。溶媒の具体例としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アミルアルコール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール等の１価アルコール類；１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，４−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール、１，６−ヘキサンジオール、グリセリン等の２価若しくは多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ならびにこれらの混合物が挙げられる。上記アルコール類としては、炭素数１以上１０以下のものが好ましく、炭素数１以上４以下のものがより好ましい。 As the solvent for extraction, either a polar solvent or a nonpolar solvent can be used. Specific examples of the solvent include, for example, water; monohydric alcohols such as methanol, ethanol, propanol, butanol, amyl alcohol, hexanol, heptanol, octanol; 1,3-butylene glycol, ethylene glycol, propylene glycol, 1,4 -Divalent or polyhydric alcohols such as butanediol, 1,5-pentanediol, 1,6-hexanediol, glycerin; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; esters such as methyl acetate and ethyl acetate; tetrahydrofuran, diethyl Examples include linear and cyclic ethers such as ethers; polyethers such as polyethylene glycol; and mixtures thereof. As said alcohol, a C1-C10 thing is preferable and a C1-C4 thing is more preferable.
上記に挙げた溶媒のうち、水、１価アルコール類、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水−アルコール混合液が好ましく、エタノール水溶液がより好ましい。抽出溶媒が水−アルコール混合液である場合、液中のアルコール濃度は、９５質量％未満の範囲であればよく、好ましくは９０質量％またはそれ未満であり、より好ましくは８０質量％またはそれ未満であり、さらに好ましくは７０質量％またはそれ未満である。 Of the solvents listed above, water, monohydric alcohols, propylene glycol, butylene glycol, and a water-alcohol mixed solution are preferable, and an aqueous ethanol solution is more preferable. When the extraction solvent is a water-alcohol mixture, the alcohol concentration in the liquid may be in the range of less than 95% by mass, preferably 90% by mass or less, more preferably 80% by mass or less. More preferably, it is 70% by mass or less.
本発明で用いられる抽出物を得るための抽出条件については、使用する溶媒によって異なり特に制限はない。
抽出物を得る抽出手段は、具体的には、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、煎出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌、遠心抽出等の手段が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。このとき、バッチ式抽出器やソックスレー抽出器等を用いてもよい。また、抽出は、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、非酸化的雰囲気下で行ってもよい。
抽出条件としては、特に限定されないが、抽出温度は、好ましくは０℃以上１００℃以下、より好ましくは５℃以上８０℃以下、さらに好ましくは１０℃以上４０℃以下であり、抽出期間は、好ましくは１時間以上４０日間以下、より好ましくは１０時間以上３０日間以下、さらに好ましくは１日間以上２０日間以下である。
また、上記溶媒の使用量は、植物１質量部（乾燥物換算）に対して、好ましくは１質量部以上１００質量部以下、より好ましくは１質量部以上５０質量部以下、さらに好ましくは５質量部以上４０質量部以下である。
The extraction conditions for obtaining the extract used in the present invention are not particularly limited, depending on the solvent used.
The extraction means for obtaining the extract is specifically solid-liquid extraction, liquid-liquid extraction, immersion, decoction, leaching, decoction, reflux extraction, ultrasonic extraction, microwave extraction, stirring, centrifugal extraction, etc. These may be used alone or in combination of two or more. At this time, a batch type extractor or a Soxhlet extractor may be used. The extraction may be performed in a non-oxidative atmosphere while removing dissolved oxygen by bubbling degassing or inert gas such as nitrogen gas.
Extraction conditions are not particularly limited, but the extraction temperature is preferably 0 ° C. or higher and 100 ° C. or lower, more preferably 5 ° C. or higher and 80 ° C. or lower, more preferably 10 ° C. or higher and 40 ° C. or lower. The extraction period is preferably Is from 1 hour to 40 days, more preferably from 10 hours to 30 days, and even more preferably from 1 day to 20 days.
The amount of the solvent used is preferably 1 part by mass or more and 100 parts by mass or less, more preferably 1 part by mass or more and 50 parts by mass or less, and still more preferably 5 parts by mass with respect to 1 part by mass of the plant (in terms of dry matter) Part to 40 parts by weight.
抽出手順の一例として、植物１質量部（乾燥物換算）に対して、４０容量％以上６０容量％以下のアルコール水溶液（好ましくは炭素数１以上３以下の１価アルコール類又は炭素数３以上５以下の２価アルコール類含有）５質量部以上４０質量部以下を用いて、１０℃以上４０℃以下で、１日間以上２０日間以下の期間抽出するのが好ましい。 As an example of the extraction procedure, 40% by volume to 60% by volume of an alcohol aqueous solution (preferably a monohydric alcohol having 1 to 3 carbon atoms or 3 to 5 carbon atoms with respect to 1 part by mass of the plant (in terms of dry matter). The following dihydric alcohols are contained), preferably 5 to 40 parts by mass and extracted at 10 to 40 ° C. for 1 to 20 days.
上述のようにして得られた植物抽出物は、そのまま用いることもできるが、さらに希釈、濃縮又は凍結乾燥等し、及び／又は液状、粉末状又はペースト状に調製して用いることもできる。 The plant extract obtained as described above can be used as it is, but can be further diluted, concentrated or freeze-dried, and / or prepared in a liquid, powder or paste form.
後記実施例に示すように、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物は、ドーパオキシダーゼ活性を強く抑制すると云う優れたドーパ−オキシダーゼ活性抑制作用を有し、細胞毒性も低いことから、長期間使用しても安全性の高い皮膚美白作用を有している。
ドーパオキシダーゼ活性はメラニン生成のメカニズムに深く関与すること（非特許文献１）から、ドーパオキシダーゼ活性を抑制すれば、メラニン生成抑制効果、及び皮膚美白作用や紫外線被爆等による皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状を予防、改善又は治療する効果を得ることができる。多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物によるメラニン生成抑制作用もまた、後記実施例に示されている。
すなわち、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物は、ドーパ−オキシダーゼ活性抑制のため、メラニン生成抑制のため、皮膚美白のため、又は皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状を予防、改善、若しくは治療するために使用することができ、あるいはこれらの効果のいずれかを発揮する皮膚外用剤として使用することができる。
これらの使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する組織、器官、細胞における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物は、各々単独で使用されてもよいが、任意に組み合わせて使用されてもよい。
As shown in the examples below, multi-branch willow fish, siberian fir or extracts thereof have an excellent dopa-oxidase activity inhibitory action of strongly suppressing dopa oxidase activity, and have low cytotoxicity. It has a skin whitening effect that is highly safe even after long-term use.
Since dopa oxidase activity is deeply involved in the mechanism of melanin production (Non-Patent Document 1), if dopa oxidase activity is suppressed, melanin production inhibition effect, skin pigmentation due to skin whitening or UV exposure, stains, An effect of preventing, improving or treating symptoms such as buckwheat can be obtained. Melanin production-inhibiting action by multi-branch willow fish, Siberian fir or extracts thereof is also shown in the examples below.
That is, multi-branch willow fish, siberian fir or their extracts prevent symptoms such as skin pigmentation, stains, buckwheat, etc. for inhibiting dopa-oxidase activity, for inhibiting melanin production, for skin whitening It can be used to improve, treat, or can be used as a skin external preparation that exhibits any of these effects.
These uses can be in humans or non-human animals, or tissues, organs, cells derived therefrom, and can be either therapeutic or non-therapeutic.
The multi-branched willow fish, siberian fir or extracts thereof may be used alone or in any combination.
従って、本発明は、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とするドーパオキシダーゼ活性抑制剤を提供する。
また本発明は、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とするメラニン生成抑制剤を提供する。
また本発明は、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とする皮膚美白剤を提供する。
また本発明は、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とする皮膚外用剤を提供する。
あるいは、本発明は、ドーパオキシダーゼ活性抑制剤、メラニン生成抑制剤、皮膚美白剤、又は皮膚外用剤の製造のための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用に関する。
さらに本発明は、ドーパオキシダーゼ活性抑制のための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用を提供する。
さらに本発明は、メラニン生成抑制のための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用を提供する。
さらに本発明は、皮膚美白のための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用を提供する。
さらに本発明は、皮膚外用剤としての多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用を提供する。
さらに本発明は、皮膚外用剤として使用するための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを提供する。
さらに本発明は、皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の予防、改善、若しくは治療において使用するための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを提供する。
上記剤は、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つから本質的に構成されていてもよい。
一態様において、上記皮膚外用剤は、皮膚美白のため、または皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等を予防、改善、若しくは治療するために使用され得る。別の態様において、上記皮膚外用剤は、皮膚美白のため、または皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等を非治療的に予防若しくは改善するために使用され得る。
Therefore, this invention provides the dopa oxidase activity inhibitor which uses as an active ingredient at least 1 selected from the group which consists of multi-branch willow fish, Siberian fir, and those extracts.
The present invention also provides a melanin production inhibitor comprising as an active ingredient at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
The present invention also provides a skin lightening agent comprising as an active ingredient at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
Moreover, this invention provides the skin external preparation which uses as an active ingredient at least 1 selected from the group which consists of multi-branch willow fish, Siberian fir, and those extracts.
Alternatively, the present invention is selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof for the manufacture of dopa oxidase activity inhibitor, melanin production inhibitor, skin whitening agent, or skin external preparation. At least one use.
Furthermore, the present invention provides at least one use selected from the group consisting of multi-branched willow fish, siberian fir, and extracts thereof for inhibiting dopa oxidase activity.
Furthermore, the present invention provides at least one use selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof for inhibiting melanin production.
Furthermore, the present invention provides at least one use selected from the group consisting of multi-branched willow fish, Siberian fir, and extracts thereof for skin whitening.
Further, the present invention provides at least one use selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof as a skin external preparation.
Furthermore, the present invention provides at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, Siberian fir, and extracts thereof for use as a skin external preparation.
Further, the present invention provides at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof for use in the prevention, amelioration, or treatment of skin pigmentation, spots, buckwheat, etc. I will provide a.
The agent may be composed essentially of at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, siberian fir, and extracts thereof.
In one embodiment, the above-mentioned external preparation for skin can be used for skin whitening or for preventing, improving, or treating skin pigmentation, spots, freckles and the like. In another embodiment, the above-mentioned external preparation for skin can be used for skin whitening or for non-therapeutically preventing or improving skin pigmentation, spots, freckles and the like.
多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物は、ドーパオキシダーゼ活性抑制のため、メラニン生成抑制のため、皮膚美白のため、皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状を予防、改善、若しくは治療するための組成物、医薬、医薬部外品、外用剤、化粧料、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料等に素材として配合することができ、あるいはそれらの製造のために使用することができる。当該組成物、医薬、医薬部外品、外用剤、化粧料、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料等もまた、本発明の範囲内である。 The multi-branch willow fish, siberian fir or their extracts are used to prevent or improve symptoms such as skin pigmentation, spots, freckles, etc. It can be blended as a raw material for a composition, a medicine, a quasi-drug, an external preparation, a cosmetic, a food or drink, a feed, a food or drink or a feed for treatment, or used for their production can do. The composition, medicine, quasi drug, external preparation, cosmetics, food and drink, feed, food and drink or feed raw material are also within the scope of the present invention.
上記組成物、医薬、医薬部外品、外用剤、化粧料、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料等は、ヒト又は非ヒト動物用として製造され、又は使用され得る。多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物は、当該組成物、医薬、医薬部外品、外用剤、化粧料、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料等に配合され、ドーパオキシダーゼ活性抑制のため、メラニン生成抑制のため、皮膚美白のため、あるいは皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状を予防、改善、若しくは治療するための有効成分であり得る。 The composition, medicine, quasi-drug, external preparation, cosmetic, food and drink, feed, food or drink or feed raw material, etc. can be produced or used for human or non-human animals. The multi-branched willow fish, siberian fir or extract thereof is blended in the composition, medicine, quasi-drug, external preparation, cosmetics, food and drink, feed, food or drink or feed raw material, etc. It may be an active ingredient for inhibiting oxidase activity, for inhibiting melanin production, for skin whitening, or for preventing, ameliorating, or treating symptoms such as skin pigmentation, spots, freckles.
上記医薬又は医薬部外品は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物を、ドーパオキシダーゼ活性抑制のため、メラニン生成抑制のため、皮膚美白のため、あるいは皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状を予防、改善、若しくは治療するための有効成分として含有する。
当該医薬又は医薬部外品は、任意の投与形態で投与され得る。投与は経口でも非経口でもよい。経口投与のための剤型としては、例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤のような固形投薬形態、ならびにエリキシル、シロップおよび懸濁液のような液体投薬形態が挙げられ、非経口投与のための剤型としては、注射、輸液、局所、外用剤、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、吸入、坐剤、ボーラス、貼布剤等が挙げられる。好ましくは、当該医薬又は医薬部外品は、皮膚外用剤の形態であり得る。より好ましくは、当該医薬又は医薬部外品は、ドーパオキシダーゼ活性抑制、メラニン生成抑制、皮膚の色素沈着予防改善等のための皮膚外用剤であり得る。
The above-mentioned medicine or quasi-drug is a multi-branch willow fish, siberian fir or an extract thereof for suppressing dopa oxidase activity, for suppressing melanin production, for skin whitening, or for skin pigmentation, spots, Contains as an active ingredient for preventing, ameliorating or treating symptoms such as buckwheat.
The pharmaceutical or quasi drug can be administered in any dosage form. Administration may be oral or parenteral. Dosage forms for oral administration include, for example, solid dosage forms such as tablets, coated tablets, granules, powders, capsules, and liquid dosage forms such as elixirs, syrups and suspensions. Examples of the dosage form for oral administration include injection, infusion, topical, external preparation, transdermal, transmucosal, nasal, enteral, inhalation, suppository, bolus, patch and the like. Preferably, the medicine or quasi drug may be in the form of a skin external preparation. More preferably, the medicament or quasi-drug may be an external preparation for skin for inhibiting dopa oxidase activity, inhibiting melanin production, preventing and improving pigmentation of the skin.
上記化粧料は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物を、ドーパオキシダーゼ活性抑制のため、メラニン生成抑制のため、皮膚美白のため、あるいは皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状を予防、改善するための有効成分として含有する。
化粧料の形態としては、クリーム、乳液、ローション、懸濁液、ジェル、パウダー、パック、シート、パッチ、スティック、ケーキ等、化粧料に使用され得る任意の形態が挙げられ、特に限定されない。好ましくは、上記化粧料は皮膚美白用化粧料であり、また好ましくは、皮膚外用化粧料であり得る。より好ましくは、上記化粧料は皮膚美白用の皮膚外用化粧料であり得る。
The above cosmetics include multi-branched willow fish, siberian fir or extracts thereof, for inhibiting dopa oxidase activity, for inhibiting melanin production, for skin whitening, or for skin pigmentation, spots, freckles, etc. Is contained as an active ingredient for preventing and improving.
Examples of cosmetics include, but are not limited to, any form that can be used for cosmetics, such as creams, emulsions, lotions, suspensions, gels, powders, packs, sheets, patches, sticks, cakes, and the like. Preferably, the cosmetic is a skin whitening cosmetic, and may preferably be a skin external cosmetic. More preferably, the cosmetic may be a skin external cosmetic for whitening the skin.
上記医薬、医薬部外品又は化粧料は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物を単独若しくは組み合わせて含有していてもよく、又は薬学的に又は化粧料として許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、香料、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。
さらに、上記医薬、医薬部外品又は化粧料は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物のドーパオキシダーゼ活性抑制作用が失われない限り、他の有効成分、薬理成分又は化粧成分を含有していてもよい。例えば、上記化粧料は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物以外に、保湿剤、他の美白剤、紫外線保護剤、細胞賦活剤、洗浄剤、角質溶解剤、メークアップ成分（例えば、化粧下地、ファンデーション、おしろい、パウダー、チーク、口紅、アイメーク、アイブロウ、マスカラ、その他）等を含有し得る。
The pharmaceutical, quasi-drug or cosmetic may contain a multi-branch willow fish, siberian fir or an extract thereof alone or in combination, or a pharmaceutically or cosmetically acceptable carrier. You may contain in combination. Examples of such carriers include excipients, coating agents, binders, extenders, disintegrating agents, lubricants, diluents, osmotic pressure adjusting agents, pH adjusting agents, dispersing agents, emulsifiers, preservatives, and stabilizers. , Antioxidants, colorants, ultraviolet absorbers, humectants, thickeners, activity enhancers, anti-inflammatory agents, bactericides, flavoring agents, flavoring agents, flavoring agents and the like.
In addition, the above-mentioned medicine, quasi-drug, or cosmetic contains other active ingredients, pharmacological ingredients, or cosmetic ingredients as long as the dopa oxidase activity-suppressing action of multi-branch willow fish, siberian fir or extracts thereof is not lost. You may contain. For example, the cosmetics include moisturizers, other whitening agents, UV protection agents, cell activators, cleaning agents, keratolytic agents, makeup ingredients (in addition to multi-branch willow fish, siberian fir or extracts thereof) For example, it may contain makeup base, foundation, funny, powder, teak, lipstick, eye makeup, eyebrow, mascara, etc.).
上記医薬、医薬部外品又は化粧料は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物から、あるいは必要に応じて上記担体及び／又は他の有効成分や、薬理成分、化粧成分等を組みあわせて、常法により製造することができる。
例えば、上述した皮膚外用剤である医薬若しくは医薬部外品又は皮膚外用化粧料は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物を、単独で、又は外用剤、外用医薬品、医薬部外品若しくは皮膚化粧料に通常配合される、油又は油状物質（油脂類、ロウ類、高級脂肪酸類、精油類、シリコーン油類等）、保湿剤（グリセロール、ソルビトール、ゼラチン、ポリエチレングリコール等）、粉体（チョーク、タルク、フラー土、カオリン、デンプン、ゴム等）、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬効成分、香料、樹脂、防菌防黴剤、他の植物抽出物（生薬、漢方薬、ハーブ類）、アルコール類、多価アルコール類、無機酸（重炭酸塩、炭酸塩、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム等）、有機酸（コハク酸、グルタル酸、フマル酸、グルタミン酸、リンゴ酸、クエン酸、アスコルビン酸等）、ビタミン類（ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、ビタミンＢ類、ビタミンＣ、葉酸等）、水溶性高分子、アニオン性界面活性剤（アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩等）、カチオン性界面活性剤（アルキル四級アンモニウム塩、アルキルジメチルベンジルアンモニウム塩等）、非イオン性界面活性剤（ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル等）、両性界面活性剤（アルキル基を有するイミダゾリン系、カルボベタイン系等）等と組み合わせることにより調製することができる。
The medicine, quasi-drug or cosmetic is obtained from multi-branch willow fish, Siberian fir or extracts thereof, or, if necessary, the carrier and / or other active ingredients, pharmacological ingredients, cosmetic ingredients, etc. In combination, it can be produced by a conventional method.
For example, the above-described pharmaceutical preparation for external use for skin or quasi-drug or cosmetic preparation for external skin use is a multi-branch willow fish, siberian fir or an extract thereof alone or as an external preparation, topical medicine, quasi-drug. Oils or oily substances (oils and fats, waxes, higher fatty acids, essential oils, silicone oils, etc.), moisturizers (glycerol, sorbitol, gelatin, polyethylene glycol, etc.), powder Body (chalk, talc, fuller's earth, kaolin, starch, rubber, etc.), pigments, emulsifiers, solubilizers, cleaning agents, UV absorbers, thickeners, medicinal ingredients, fragrances, resins, antibacterial and antifungal agents, etc. Plant extracts (herbal medicine, herbal medicine, herbs), alcohols, polyhydric alcohols, inorganic acids (bicarbonate, carbonate, sodium chloride, potassium chloride, sodium sulfate, etc.), organic acids (succinic acid) Glutaric acid, fumaric acid, glutamic acid, malic acid, citric acid, ascorbic acid, etc.), vitamins (vitamin A, vitamin E, vitamin B, vitamin C, folic acid, etc.), water-soluble polymers, anionic surface activity Agents (alkyl benzene sulfonates, alkyl sulfates, etc.), cationic surfactants (alkyl quaternary ammonium salts, alkyl dimethyl benzyl ammonium salts, etc.), nonionic surfactants (polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene alkyl) Phenyl ether, etc.), amphoteric surfactants (imidazoline type having an alkyl group, carbobetaine type, etc.) and the like.
上記医薬、医薬部外品又は化粧料における多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物の含有量は、例えば、皮膚外用剤として調製する場合、抽出物の乾燥質量として、医薬又は医薬部外品では０．００００１質量％以上２０質量％以下が好ましく、０．０００１質量％以上１０質量％がより好ましく、また化粧料では０．０００１質量％以上２０質量％が好ましく、０．０００１質量％以上１０質量％がより好ましい。 The content of the multi-branch willow fish, siberian fir or extract thereof in the medicine, quasi-drug or cosmetic is, for example, when preparing as a skin external preparation, as the dry mass of the extract, the medicine or pharmacy In an external product, 0.00001% by mass to 20% by mass is preferable, 0.0001% by mass to 10% by mass is more preferable, and in cosmetics, 0.0001% by mass to 20% by mass is preferable, and 0.0001% by mass. 10 mass% or more is more preferable.
上記飲食品や飼料は、ドーパオキシダーゼ活性抑制、メラニン生成抑制、皮膚美白、又は皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状の予防、改善若しくは治療等の機能を得ることを企図し、当該機能を必要に応じて表示した飲食品、機能性飲食品、病者用飲食品、特定保健用飲食品、ペットフード等であり得る。 The above food and drink and feed are intended to obtain functions such as suppression of dopa oxidase activity, suppression of melanin production, skin whitening, or prevention, improvement or treatment of symptoms such as skin pigmentation, spots and freckles. It may be a food / beverage product, a functional food / beverage product, a sick / beverage food / beverage product, a specific health food / beverage product, a pet food or the like displayed as necessary.
上記飲食品の種類は特に限定されない。飲料としては、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、コーヒー飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等、あらゆる飲料が挙げられる。食品の形態は、固形、半固形、液状等の任意の形態であってもよく、また錠剤形態、丸剤形態、タブレット、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等であってもよい。例えば、食品としては、パン類、麺類、パスタ、ゼリー状食品、各種スナック類、ケーキ類、菓子類、アイスクリーム類、スープ類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、その他加工食品、調味料、サプリメント等が挙げられる。上記飼料の種類も特に限定されず、任意の動物のための飼料であってよく、その形態も上記食品の場合と同様に任意の形態であり得る。 The kind of said food / beverage products is not specifically limited. Examples of the beverage include all beverages such as fruit juice beverages, carbonated beverages, tea beverages, coffee beverages, milk beverages, alcoholic beverages, and soft drinks. The form of the food may be any form such as solid, semi-solid, liquid, etc., and may be tablet form, pill form, tablet, capsule form, liquid form, syrup form, powder form, granule form, etc. Also good. For example, as food, breads, noodles, pasta, jelly-like foods, various snacks, cakes, confectionery, ice creams, soups, dairy products, frozen foods, instant foods, other processed foods, seasonings, And supplements. The kind of the feed is not particularly limited and may be a feed for any animal, and the form thereof may be any form as in the case of the food.
上記飲食品、飼料、又はそれらの原料は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物を単独で含有していてもよく、又は他の食材や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等の添加剤を組み合わせて含有していてもよい。当該飲食品若しくは飼料中の多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物の含有量は、抽出物の乾燥質量として、０．０００１質量％以上１０質量％以下が好ましく、０．０００１質量％以上５質量％以下がより好ましく、０．００１質量％以上１質量％以下がさらに好ましい。 The above-mentioned food and drink, feed, or raw materials thereof may contain a multi-branch willow fish, Siberian fir or an extract thereof alone, or other foods, solvents, softeners, oils, emulsifiers, You may contain combining additives, such as antiseptic | preservative, a fragrance | flavor, a stabilizer, a coloring agent, antioxidant, a moisturizer, and a thickener. The content of the multi-branch willow fish, siberian fir or extracts thereof in the food or drink is preferably 0.0001% by mass or more and 10% by mass or less, and 0.0001% by mass as the dry mass of the extract. The content is more preferably 5% by mass or less and further preferably 0.001% by mass or more and 1% by mass or less.
また本発明は、細胞のドーパオキシダーゼ活性を抑制する方法を提供する。当該方法は、チロシナーゼ発現能を有し且つドーパオキシダーゼ活性を抑制したい細胞に、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを添加する工程を含む。
また本発明は、細胞のメラニン生成を抑制する方法を提供する。当該方法は、メラニン生成能を有し且つメラニン生成を抑制したい細胞に、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを添加する工程を含む。
The present invention also provides a method for suppressing cellular dopa oxidase activity. The method includes a step of adding at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof to a cell having the ability to express tyrosinase and suppressing dopa oxidase activity. .
The present invention also provides a method for suppressing cellular melanin production. The method includes the step of adding at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, siberian fir, and extracts thereof to cells that have melanin-producing ability and that want to suppress melanin production.
本発明においてドーパオキシダーゼ活性又はメラニン生成を抑制する「細胞」は、天然又は遺伝子工学的に改変されたチロシナーゼ発現能又はメラニン生成能を有する細胞であれば特に限定されない。細胞としては、好ましくは色素細胞（メラノサイト、網膜色素上皮細胞等）が挙げられ、より好ましくはメラノサイトが挙げられる。
あるいは、当該「細胞」は、上記で挙げた細胞の細胞片または細胞分画物であってもよく、あるいは上記で挙げた細胞を含む組織又は上記で挙げた細胞に由来する培養物であってもよい。細胞が細胞培養物の場合、好ましくは、当該細胞は、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物の存在下で培養される。
添加される多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物の濃度は、細胞が細胞培養物の場合、培養物中での最終濃度として、抽出物の乾燥質量換算で、０．００００１％（ｗ/ｖ）以上２％（ｗ/ｖ）以下であり、好ましくは０．００００５％（ｗ/ｖ）以上０．５％（ｗ/ｖ）以下であり、より好ましくは０．０００１％（ｗ/ｖ）以上０．１％（ｗ/ｖ）以下である。
The “cell” that suppresses dopa oxidase activity or melanin production in the present invention is not particularly limited as long as it is a cell having a tyrosinase expression ability or melanin production ability modified by natural or genetic engineering. Preferred examples of the cells include pigment cells (melanocytes, retinal pigment epithelial cells, etc.), and more preferred are melanocytes.
Alternatively, the “cell” may be a cell fragment or cell fraction of the cells listed above, or a tissue containing the cells listed above or a culture derived from the cells listed above. Also good. When the cells are cell cultures, the cells are preferably cultured in the presence of multi-branched willow fish, siberian fir or extracts thereof.
When the cell is a cell culture, the concentration of the multi-branch willow fish, the Siberian fir or the extract thereof added is 0.00001% in terms of the dry mass of the extract as the final concentration in the culture ( w / v) or more and 2% (w / v) or less, preferably 0.00005% (w / v) or more and 0.5% (w / v) or less, more preferably 0.0001% (w / v) to 0.1% (w / v).
また本発明において、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つは、ドーパオキシダーゼ活性抑制のため、メラニン生成抑制のため、皮膚美白のため、あるいは皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状を予防、改善、若しくは治療するために、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取され得る。当該投与又は摂取は、健康増進又は美容目的により非治療的に行われてもよい。
投与又は摂取の対象としては、ドーパオキシダーゼ活性の抑制を必要とする動物が挙げられる。あるいは、投与又は摂取の対象としては、メラニン生成抑制や皮膚美白を所望する動物、又は皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状の予防、改善、若しくは治療することを所望する動物が挙げられる。動物は、好ましくはヒト又は非ヒト哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
In the present invention, at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, siberian fir, and extracts thereof is for suppressing dopa oxidase activity, for suppressing melanin production, for skin whitening, or In order to prevent, ameliorate, or treat symptoms such as skin pigmentation, spots, freckles, etc., they can be administered or ingested in an effective amount to a subject in need thereof. Such administration or ingestion may be performed non-therapeutically for health promotion or cosmetic purposes.
Subjects for administration or ingestion include animals that require inhibition of dopa oxidase activity. Alternatively, the subject of administration or ingestion includes animals that desire suppression of melanin production and skin whitening, or animals that desire prevention, amelioration, or treatment of symptoms such as skin pigmentation, spots, and freckles. The animal is preferably a human or non-human mammal, more preferably a human.
上記多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物は、好ましくは、上記対象の皮膚に局所投与される。好ましい投与又は摂取量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与又は摂取の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、多枝柳穿魚、シベリアモミ又はそれらの抽出物の投与量は、抽出物の乾燥質量換算で、成人（６０ｋｇ）１人当たり、０．００１ｍｇ／日以上１ｍｇ／日以下とすることが好ましく、０．０１ｍｇ／日以上０．１ｍｇ／日以下がより好ましい。 The multi-branched willow fish, siberian fir or extract thereof is preferably administered topically to the skin of the subject. The preferred dosage or intake may vary according to the subject's species, weight, sex, age, condition or other factors. The dose or route of administration or ingestion, the interval, and the amount or interval of ingestion can be appropriately determined by those skilled in the art. For example, it is preferable that the dose of multi-branch willow fish, siberian fir or extracts thereof is 0.001 mg / day or more and 1 mg / day or less per adult (60 kg) in terms of dry mass of the extract. 0.01 mg / day to 0.1 mg / day is more preferable.
上述した実施形態に関し、本発明はさらに以下の用途を開示する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。 In relation to the above-described embodiment, the present invention further discloses the following applications. However, the present invention is not limited to these embodiments.
＜１＞多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とするドーパオキシダーゼ活性抑制剤。 <1> A dopa oxidase activity inhibitor comprising as an active ingredient at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
＜２＞多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とするメラニン生成抑制剤。 <2> A melanin production inhibitor comprising as an active ingredient at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
＜３＞多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とする皮膚美白剤。 <3> A skin lightening agent comprising as an active ingredient at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof.
＜４＞多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効成分とする皮膚外用剤。 <4> A skin external preparation containing as an active ingredient at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
＜５＞ドーパオキシダーゼ活性抑制のための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用。 <5> Use of at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof for suppressing dopa oxidase activity.
＜６＞メラニン生成抑制のための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用。 <6> Use of at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof for inhibiting melanin production.
＜７＞皮膚美白のための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用。 <7> At least one use selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof for skin whitening.
＜８＞皮膚外用剤としての多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用。 <8> Use of at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof as an external preparation for skin.
＜９＞非治療的使用である上記＜５＞〜＜８＞のいずれか１に記載の使用。 <9> The use according to any one of the above <5> to <8>, which is a non-therapeutic use.
＜１０＞ドーパオキシダーゼ活性抑制に使用するための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <10> At least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof for use in inhibiting dopa oxidase activity.
＜１１＞メラニン生成抑制に使用するための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <11> At least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, siberian fir, and extracts thereof for use in suppressing melanin production.
＜１２＞皮膚の色素沈着、シミまたはソバカスの予防または改善に使用するための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <12> At least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof for use in preventing or improving skin pigmentation, spots or buckwheat.
＜１３＞皮膚外用剤として使用するための多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <13> At least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof for use as a skin external preparation.
＜１４＞ドーパオキシダーゼ活性抑制方法であって、それを必要とする対象に、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効量で投与又は摂取させることを含む、方法。 <14> A method for inhibiting dopa oxidase activity, comprising administering to a subject in need thereof at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof in an effective amount or A method comprising ingesting.
＜１５＞メラニン生成抑制方法であって、それを必要とする対象に、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効量で投与又は摂取させることを含む、方法。 <15> A method for inhibiting melanin production, in which at least one selected from the group consisting of multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof is administered or ingested in an effective amount to a subject in need thereof Including a method.
＜１６＞皮膚美白方法であって、それを必要とする対象に、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効量で投与又は摂取させることを含む、方法。 <16> A skin whitening method, in which a subject in need thereof is administered or ingested in an effective amount of at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, siberian fir, and extracts thereof Including the method.
＜１７＞皮膚の色素沈着、シミ、ソバカス等の症状を予防、改善、若しくは治療する方法であって、それらを必要とする対象に、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つを有効量で投与又は摂取させることを含む、方法。 <17> A method for preventing, ameliorating, or treating symptoms such as skin pigmentation, stains, buckwheat, etc., from a multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof Administering or ingesting at least one selected from the group consisting of an effective amount.
＜１８＞非治療的方法である上記＜１４＞〜＜１７＞のいずれか１に記載の方法。 <18> The method according to any one of the above <14> to <17>, which is a non-therapeutic method.
＜１９＞ドーパオキシダーゼ活性抑制剤、メラニン生成抑制剤、皮膚美白剤、又は皮膚外用剤の製造のための、多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つの使用。 <19> At least selected from the group consisting of multi-branch willow fish, siberian fir, and extracts thereof for the production of a dopa oxidase activity inhibitor, a melanin production inhibitor, a skin lightening agent, or a skin external preparation. One use.
＜２０＞上記多枝柳穿魚が多枝柳穿魚の全草であり、上記シベリアモミがシベリアモミの枝葉である、上記＜１＞〜＜１９＞のいずれか１に記載の剤、方法、使用、または多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <20> The agent or method according to any one of the above <1> to <19>, wherein the multi-branch willow is the whole plant of a multi-branch willow, and the Siberian fir is a branch of Siberian fir Use or at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
＜２１＞上記抽出物を抽出するための溶媒が、水、１価アルコール類、プロピレングリコール、ブチレングリコール、および水−アルコール混合液からなる群より選択され、好ましくはエタノール水溶液である、上記＜１＞〜＜２０＞のいずれか１に記載の剤、方法、使用、または多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <21> The solvent for extracting the extract is selected from the group consisting of water, monohydric alcohols, propylene glycol, butylene glycol, and a water-alcohol mixed solution, and preferably an ethanol aqueous solution. > At least one selected from the group consisting of the agent, method, use, or multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
＜２２＞上記水−アルコール混合液中のアルコール濃度が、９５質量％未満、好ましくは９０質量％またはそれ未満、より好ましくは８０質量％またはそれ未満、さらに好ましくは７０質量％またはそれ未満である、上記＜２１＞に記載の剤、方法、使用、または多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <22> The alcohol concentration in the water-alcohol mixture is less than 95% by mass, preferably 90% by mass or less, more preferably 80% by mass or less, and further preferably 70% by mass or less. , At least one selected from the group consisting of the agent, method, use, or multi-branch willow fish, Siberian fir, and extracts thereof described in <21> above.
＜２３＞上記抽出物を抽出するための抽出温度が、０℃以上１００℃以下、好ましくは５℃以上８０℃以下、より好ましくは１０℃以上４０℃以下であり、且つ抽出期間が、１時間以上４０日間以下、好ましくは１０時間以上３０日間以下、より好ましくは１日間以上２０日間以下である、上記＜１＞〜＜２２＞のいずれか１に記載の剤、方法、使用、または多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <23> The extraction temperature for extracting the extract is from 0 ° C. to 100 ° C., preferably from 5 ° C. to 80 ° C., more preferably from 10 ° C. to 40 ° C., and the extraction period is 1 hour. Or more, 40 days or less, preferably 10 hours or more and 30 days or less, more preferably 1 day or more and 20 days or less, the agent, method, use, or multiple branch according to any one of the above <1> to <22> At least one selected from the group consisting of willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
＜２４＞上記抽出物を抽出するための溶媒の使用量が、上記多枝柳穿魚又はシベリアモミ１質量部（乾燥物換算）に対して、１質量部以上１００質量部以下、好ましくは１質量部以上５０質量部以下、より好ましくは５質量部以上４０質量部以下である、上記＜１＞〜＜２３＞のいずれか１に記載の剤、方法、使用、または多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <24> The amount of the solvent used for extracting the extract is 1 part by mass or more and 100 parts by mass or less, preferably 1 with respect to 1 part by mass of the multi-branched willow fish or Siberian fir (in terms of dry matter). The agent, method, use or multi-branch willow fish according to any one of the above <1> to <23>, which is not less than 50 parts by mass and more preferably not more than 5 parts by mass and not more than 40 parts by mass. At least one selected from the group consisting of Siberian fir and extracts thereof.
＜２５＞上記抽出物を抽出するための溶媒が、４０容量％以上６０容量％以下のアルコール水溶液であり、ここで、該アルコールは炭素数１以上３以下の１価アルコール類又は炭素数３以上５以下の２価アルコール類を含み；当該溶媒の使用量が、上記多枝柳穿魚又はシベリアモミ１質量部（乾燥物換算）に対して５質量部以上４０質量部以下であり；且つ、当該抽出物を抽出するための抽出温度が１０℃以上４０℃以下で、抽出期間が１日間以上２０日間以下である、上記＜１＞〜＜２４＞のいずれか１に記載の剤、方法、使用、または多枝柳穿魚、シベリアモミ、及びそれらの抽出物からなる群より選択される少なくとも１つ。 <25> The solvent for extracting the extract is an aqueous alcohol solution having a volume of 40% to 60% by volume, wherein the alcohol is a monohydric alcohol having 1 to 3 carbon atoms or 3 or more carbon atoms. 5 or less dihydric alcohols; the amount of the solvent used is 5 parts by weight or more and 40 parts by weight or less based on 1 part by weight of the multi-branch willow fish or Siberian fir; The agent, the method according to any one of the above <1> to <24>, wherein an extraction temperature for extracting the extract is 10 ° C. or more and 40 ° C. or less, and an extraction period is 1 day or more and 20 days or less, Use or at least one selected from the group consisting of multi-branched willow fish, Siberian fir, and extracts thereof.
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated further in detail based on an Example, this invention is not limited to this.
製造例１ 多枝柳穿魚抽出物の調製
多枝柳穿魚の全草１４ｇに、５０％エタノール１４０ｍＬを加え、室温１５日間抽出後、濾過して粗抽出液を得た後、濃縮乾固して抽出固形分１．５３ｇを得た。この抽出固形分を蒸発残分１．０ｗ／ｖ％となるよう５０％エタノールに溶解し、多枝柳穿魚５０％エタノール抽出物を調製した。
Production Example 1 Preparation of multi-branched willow fish extract To 14 g of whole-branch willow fish, 140 mL of 50% ethanol was added, extracted at room temperature for 15 days, filtered to obtain a crude extract, and then concentrated to dryness. As a result, 1.53 g of an extracted solid content was obtained. This extracted solid was dissolved in 50% ethanol so that the evaporation residue was 1.0 w / v%, and a multi-branched willow fish 50% ethanol extract was prepared.
製造例２ シベリアモミ５０％エタノール抽出物の調製
シベリアモミ枝葉１４ｇに、５０％エタノール１４０ｍＬを加え、室温１７日間抽出後、濾過して粗抽出液を得た後、濃縮乾固して抽出固形分１．３７ｇを得た。この抽出固形分を蒸発残分１．０ｗ／ｖ％となるよう５０％エタノールに溶解し、シベリアモミ５０％エタノール抽出物を調製した。
Production Example 2 Preparation of Siberian Fir 50% Ethanol Extract To 14 g of Siberian fir branches and leaves, 140 mL of 50% ethanol was added, extracted at room temperature for 17 days, filtered to obtain a crude extract, concentrated to dryness, and extracted solids. 1.37 g was obtained. This extracted solid was dissolved in 50% ethanol so as to have an evaporation residue of 1.0 w / v% to prepare a Siberian fir 50% ethanol extract.
製造例３ シベリアモミ９５％エタノール抽出物の調製
シベリアモミ枝葉１４ｇに、９５％エタノール１４０ｍＬを加え、室温１７日間抽出後、濾過して粗抽出液を得た後、濃縮乾固して抽出固形分１．３４ｇを得た。この抽出固形分を蒸発残分１．０ｗ／ｖ％となるよう９５％エタノールに溶解し、シベリアモミ９５％エタノール抽出物を調製した。
Production Example 3 Preparation of Siberian Fir 95% Ethanol Extract 140 g of 95% ethanol was added to 14 g of Siberian fir branches and leaves, extracted at room temperature for 17 days, filtered to obtain a crude extract, concentrated to dryness, and extracted solids. 1.34 g was obtained. This extracted solid was dissolved in 95% ethanol so as to have an evaporation residue of 1.0 w / v% to prepare a 95% ethanol extract of Siberian fir.
実施例１ 多枝柳穿魚及びシベリアモミ抽出物によるドーパオキシダーゼ活性抑制 Example 1 Suppression of dopa oxidase activity by multi-branched willow fish and Siberian fir extract
（１）細胞培養
正常ヒト新生児表皮由来メラノサイト（ＮＨＥＭｓ；クラボウ社）を９６ウェルプレートに１×１０4細胞／ウェル（１００μＬ／ウェル）の細胞密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ2下にて培養した。培地には、ＰＭＡ（−）の増殖用添加剤（ＨＭＧＳ）を含むＭｅｄｉｕｍ ２５４を用いた。
３日間培養した後、それぞれ培地中終濃度で１ｎＭになるように調整したＥｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１（ＥＴ−１）、ＳＣＦ、α−ＭＳＨ、Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ、ＰＧＥ2とともに、上記製造例１〜３に従って調製した蒸発残分１．０ｗ／ｖ％の多枝柳穿魚抽出物およびシベリアモミ抽出物を終濃度が０．１ｖ／ｖ％（エキス分終濃度０．００１ｗ／ｖ％）になるように添加し、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で３日間培養を行った。コントロールとしては、同量の５０％エタノール水溶液を添加した。
（２）ドーパオキシダーゼ活性の測定
培養終了後、アラマーブルー（インビトロジェン社）試薬を２０μＬ／ウェルで添加し、２〜３時間インキュベートした後、培地の蛍光強度を測定して細胞呼吸活性を測定した。その後、細胞をＰＢＳで洗浄し、抽出バッファー（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ７．２）、１％ ＮＰ−４０、０．０１％ＳＤＳ、１００μＭ ＰＭＳＦ、１μｇ／ｍアプロチニン）を２０μＬ／ウェル、Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ（４％ジメチルホルムアミド、１００ｍＭ Ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ（ｐＨ７．１））を２０μＬ／ウェル添加し、４℃、３時間で細胞を可溶化し、ドーパオキシダーゼ活性の測定を行った。ドーパオキシダーゼ活性測定は、ＭＢＴＨ法（Winder A. et al., 1991, Eur.J. Biochem. 198:317-326）を参考に、以下の方法で行った。
可溶化した細胞溶液の各ウェルに、上記Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒを８０μＬ、２０．７ｍＭ ＭＢＴＨ（３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン）溶液を６０μＬ、基質として５ｍＭ Ｌ−ドーパ（Ｌ−ジヒドロキシフェニルアラニン）溶液を４０μＬ、それぞれ加え、３７℃で３０〜６０分反応させた後、その呈色反応を４９０ｎｍの吸光度で測定した（Ｎ＝３）。測定値をコントロールの結果に対する相対値として表した。
(1) Cell culture Normal human neonatal epidermis-derived melanocytes (NHEMs; Kurabo Industries, Inc.) are seeded in a 96-well plate at a cell density of 1 × 10 4 cells / well (100 μL / well) at 37 ° C. under 5% CO 2 . And cultured. Medium 254 containing PMA (-) growth additive (HMGS) was used as the medium.
After culturing for 3 days, evaporation prepared according to the above Production Examples 1 to 3 together with Endothelin-1 (ET-1), SCF, α-MSH, Histamine, and PGE 2 adjusted to a final concentration of 1 nM in the medium. Add the remaining 1.0 w / v% multi-branch willow fish extract and Siberian fir extract so that the final concentration is 0.1 v / v% (extract content final concentration 0.001 w / v%), Cultivation was performed for 3 days under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 . As a control, the same amount of 50% ethanol aqueous solution was added.
(2) Measurement of dopa oxidase activity After completion of the culture, Alamar Blue (Invitrogen) reagent was added at 20 μL / well, incubated for 2 to 3 hours, and then the fluorescence intensity of the medium was measured to measure cell respiration activity. . Thereafter, the cells were washed with PBS, and extraction buffer (0.1 M Tris-HCL (pH 7.2), 1% NP-40, 0.01% SDS, 100 μM PMSF, 1 μg / m aprotinin) was added at 20 μL / well, Assay. Buffer (4% dimethylformamide, 100 mM sodium phosphate-buffered (pH 7.1)) was added at 20 μL / well, the cells were solubilized at 4 ° C. for 3 hours, and the dopa oxidase activity was measured. The dopa oxidase activity was measured by the following method with reference to the MBTH method (Winder A. et al., 1991, Eur. J. Biochem. 198: 317-326).
In each well of the solubilized cell solution, 80 μL of the above Assay Buffer, 60 μL of 20.7 mM MBTH (3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazone) solution, and 5 mM L-dopa (L-dihydroxyphenylalanine) solution as a substrate 40 μL of each was added and reacted at 37 ° C. for 30 to 60 minutes, and then the color reaction was measured by absorbance at 490 nm (N = 3). The measured value was expressed as a relative value to the control result.
（３）結果
結果を表１及び図１に示す。多枝柳穿魚の５０％エタノール抽出物ならびにシベリアモミの５０％及び９５％エタノール抽出物によって、ドーパオキシダーゼ活性が抑制された。アラマーブルー法による細胞呼吸活性の測定から、この濃度の抽出物が細胞増殖に影響を及ぼさないことを確認した。
(3) Results The results are shown in Table 1 and FIG. The dopa oxidase activity was inhibited by 50% ethanol extract of multi-branch willow fish and 50% and 95% ethanol extract of Siberian fir. From the measurement of cell respiratory activity by the Alamar Blue method, it was confirmed that this concentration of extract did not affect cell growth.
実施例２ 多枝柳穿魚及びシベリアモミ抽出物によるメラニン産生抑制
ＥＴ−１とＳＣＦを終濃度１０ｎＭで添加したＥＰＩ−１００−ＮＭＭ１１３培地を用いて、三次元培養皮膚モデル（ＭＥＬ３００Ａ）を３７℃、５％ＣＯ2条件下にて培養した。培養初日より、上記製造例１〜２に従って調製した蒸発残分１．０ｗ／ｖ％の多枝柳穿魚抽出物およびシベリアモミ抽出物（５０％エタノール抽出物）を、終濃度が０．１ｖ／ｖ％（エキス分終濃度０．００１ｗ／ｖ％）になるように添加した。コントロールとしては、同量の５０％エタノールを添加した。培地交換は３日に一度行った。１４日後に、アラマーブルー試薬を用いて実施例１と同様に細胞呼吸活性を測定した。続いて三次元培養皮膚を培養支持体であるカップごとＰＢＳで洗浄し、ピンセットで皮膚シートを剥離してチューブに移し、さらにＰＢＳで３回洗浄した。５０％エタノールで３回、１００％エタノールで２回洗浄した後、室温で一晩放置して完全に乾燥させた。最終的に２Ｍ ＮａＯＨを２００μＬ加えた後で１００℃にて溶解させ、遠心分離によって得られた上清について４０５ｎｍの測定波長で吸光度を測定し、メラニン量を算出した。測定値をコントロールの結果に対する相対値として表した。
Example 2 Inhibition of melanin production by multi-branch willow fish and Siberian fir extract Using EPI-100-NMM113 medium supplemented with ET-1 and SCF at a final concentration of 10 nM, a three-dimensional cultured skin model (MEL300A) was cultured at 37 ° C. The cells were cultured under 5% CO 2 conditions. From the first day of culture, the extract of multi-branch willow fish extract and siberian fir extract (50% ethanol extract) having an evaporation residue of 1.0 w / v% prepared according to the above Production Examples 1 and 2 was prepared at a final concentration of 0.1 v. / V% (extract extract final concentration 0.001 w / v%) was added. As a control, the same amount of 50% ethanol was added. The medium was changed once every 3 days. After 14 days, cell respiration activity was measured in the same manner as in Example 1 using Alamar Blue reagent. Subsequently, the three-dimensional cultured skin was washed with PBS as a culture support with PBS, the skin sheet was peeled off with tweezers, transferred to a tube, and further washed with PBS three times. After washing 3 times with 50% ethanol and 2 times with 100% ethanol, it was left at room temperature overnight to dry completely. Finally, 200 μL of 2M NaOH was added and then dissolved at 100 ° C., and the supernatant obtained by centrifugation was measured for absorbance at a measurement wavelength of 405 nm to calculate the amount of melanin. The measured value was expressed as a relative value to the control result.
１４日培養後の三次元培養皮膚モデルの写真及びメラニン量測定結果を図２に示す。多枝柳穿魚エキス添加により、細胞のメラニン量が８０％以上減少し、またシベリアモミエキス添加により、細胞のメラニン量が２０％減少した（図２）。アラマーブルー法による細胞呼吸活性測定の結果、これらの抽出物が細胞毒性を示さないことが確認された。 FIG. 2 shows a photograph of a three-dimensional cultured skin model after 14 days of culture and the results of melanin measurement. The addition of the multi-branch willow fish extract decreased the melanin content of the cells by 80% or more, and the addition of the Siberian fir extract reduced the melanin content of the cells by 20% (FIG. 2). As a result of measuring the cellular respiratory activity by the Alamar Blue method, it was confirmed that these extracts did not show cytotoxicity.
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