JP2019528837A

JP2019528837A - アルブミンを用いたコンビネーション、特に軟骨欠損治療用のコンビネーション

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Publication number: JP2019528837A
Application number: JP2019511747A
Authority: JP
Inventors: ヴルストヘルムート; クラウゼンニルス; バルダッシニーナ
Original assignee: テテックティシューエンジニアリングテクノロジーズアクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 2016-08-29
Filing date: 2017-08-28
Publication date: 2019-10-17
Anticipated expiration: 2037-08-28
Also published as: US11065364B2; EP3504232A1; US20190192733A1; JP7245152B2; CA3035288A1; DE102016216182A1; CN109890840A; WO2018041784A1

Abstract

本発明は、コンビネーションに関する。当該コンビネーションは、互いに空間的に離間している第１の要素及び第２の要素を含み、第１の要素は架橋性アルブミンを含み、第２の要素はポリマーを含んでおり、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基を含む。本発明は、さらに、当該コンビネーションによって得られる反応生成物と、医療装置と、先進治療用の医薬品と、キットと、吐出装置と、官能基化されたヒアルロン酸に関する。

Description

本発明は、コンビネーションと、好ましくはハイドロゲルの形態の反応生成物と、医療装置と、先進治療用の医薬品と、キットと、吐出装置と、コンビネーションの製造方法と、反応生成物の製造方法と、アルブミン架橋用ポリマーの使用と、アルブミン架橋基によって官能基化されたヒアルロン酸とに関する。

架橋性血清アルブミンと架橋剤ジチオポリエチレングリコール（ジチオＰＥＧ）との注入可能で、生体適合性のあるコンビネーションは、独国特許出願公開第１０２００８００８０７１号明細書から知られている。

しかしながら、ジチオＰＥＧは、その製造が複雑で、費用が高いという根本的な不利点を有する。もう一つの要因は、単官能基化されたＰＥＧはアルブミンの架橋を妨げる働きをするため、ＰＥＧが鎖の両末端においてチオール基で官能基化されていることを確実にする必要があることである。

従って、製造、特に架橋剤の精製に伴う費用と複雑さとが増してしまう。更なる不利点は、ジチオＰＥＧが体内においてゆっくりとしか分解されず、腎臓から排泄されなければならない点である。

従って、本発明の課題は、先行技術から知られている欠点を回避できる代替のコンビネーションプロダクト、特に従来のコンビネーションプロダクトよりも、製造がより簡単であり、より生体適合性が高い代替のコンビネーションプロダクトを提供することである。

本発明の基礎を形成するさらなる課題は、特に前段落で言及したコンビネーションプロダクトの構成要素であり得る官能基化されたヒアルロン酸を提供することである。

これらの課題は、独立請求項１によるコンビネーションと、請求項１７による反応生成物と、請求項１８による医療装置又は先進治療用の医薬品と、請求項１９によるキット又は吐出装置と、請求項２０による使用と、請求項２１による官能基化されたヒアルロン酸とによって解決される。好ましい実施形態は、従属請求項において明示される。全ての請求項の文言は、明示的な参照により本明細書に組み込まれる。本発明のさらなる態様は本明細書に開示される。

第１の態様によれば、本発明は、空間的に互いに離間した第１の要素及び第２の要素を含むコンビネーションに関する。

第１の要素は、架橋性アルブミンを含む。

第２の要素は、ポリマーを含み、そのポリマーの非末端モノマー単位が、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみアルブミン架橋基を含む。

本発明の文脈では、コンビネーションは、コンビネーションプロダクトとも呼ばれる。

発明者らは、アルブミン架橋基を用いた非末端モノマー単位の官能基化（内部官能基化（ｉｎｔｅｒｎｅＦｕｎｋｔｉｏｎａｌｉｓｉｅｒｕｎｇ）を通して、アルブミンのためのポリマー架橋剤を製造することが可能であり、その架橋剤にアルブミン架橋基を付加することが、例えば、先行技術から公知であるジチオＰＥＧの場合よりも、効果的に制御可能であることを認識した。一般的に、様々な非末端モノマー単位が官能基化に利用可能であるため、アルブミンの架橋を阻害する可能性がある単官能基化されたポリマーを形成する危険性はない。

また、先行技術から公知であるジチオＰＥＧの場合のように、全ての末端モノマー単位を厳密に官能基化する必要がないので、ポリマー架橋剤の製造は、単純である。よって、製造時間と製造費用の低減につながる。

コンビネーションは、軟骨欠損、より具体的には関節軟骨欠損又は椎間板欠損の治療用、好ましくは再建用に特に適している。

本発明の意味において、「架橋性アルブミン」という表現は、その化学的性質に基いて、より具体的には官能基化及び／又は誘導体化に基づいて、架橋剤によって、より具体的には本発明により提供されるポリマーによって、架橋され得るアルブミンを指すことを意図している。架橋は、特に、アルブミンと架橋剤、より具体的には、アルブミンと本発明により提供されるポリマーとの間の水素結合、イオン結合及び／又は共有結合に基づいていてもよい。アルブミンの架橋は、好ましくは、アルブミンと架橋剤、より具体的には、アルブミンと本発明により提供されるポリマーとの間の共有結合の形成に基づいている。

本発明の意味において、「非末端モノマー単位」という表現は、ポリマーの末端モノマー単位の間に位置するモノマー単位を指すことを意図している。

本発明の意味において、「アルブミン架橋基」又は「複数のアルブミン架橋基」という表現は、アルブミンの官能基との反応、好ましくは共有結合又は結合の形成を伴う反応を通して、アルブミンの架橋をもたらす、一つ又は複数の官能基を指すことを意図している。

本発明の意味において、「官能基化された」又は「官能基化する」という表現は、例えば、ポリマー又はアルブミンに官能基を付加することによって、ポリマー又はアルブミンが通常は有していない機能を付与するあらゆるプロセスを指すことを意味している。

好ましい一実施形態では、非末端モノマー単位は、ポリマーの主鎖の構成要素である。

他の一実施形態では、非末端モノマー単位は、ポリマーの側鎖の一部である。

さらなる一実施形態では、また、ポリマーの末端モノマー単位は、アルブミン架橋基を含む。この場合において、末端モノマー単位のアルブミン架橋基は、非末端モノマー単位のものと同じアルブミン架橋基であってもよい。さらに、全ての末端モノマー単位又はそれらの一部のみが、アルブミン架橋基を含んでいてもよい。

他の一実施形態では、ポリマーの末端モノマー単位は、アルブミン架橋基を含まない。

他の一実施形態では、非末端モノマー単位の２０％未満、より具体的には１０％未満、好ましくは５％未満が、アルブミン架橋基を含む。

好ましくは平均して、即ちポリマー分子当たり、２又は３個を超える、より具体的には４、５、６、７又は８個を超える非末端モノマー単位が、アルブミン架橋基を含む。

他の一実施形態では、１０００個目のモノマー単位まで３個ごと、より具体的には５００個目のモノマー単位まで１０個ごと、好ましくは１００個目のモノマー単位まで２０個ごとにアルブミン架橋基が含まれている。この段落で言及されるモノマー単位は、好ましくは、ポリマーの非末端物モノマー単位である。

他の一実施形態では、ポリマーは、モノマー単位１００個当たり、例えばグルクロン酸単位、無水グルコース単位又は非糖類モノマー単位１００個当たり、３３から０．１、より具体的には１０から０．２、好ましくは５から１のチオール基置換度を有する。言い換えると、モノマー単位１００個当たり、例えばグルクロン酸単位、無水グルコース単位又は非糖類モノマー単位１００個当たり、３３から０．１個、より具体的には１０から０．２個、好ましくは５から１個の元から存在する官能基、例えばＯＨ基（ヒドロキシ基）は、チオール基（ＳＨ基）又はチオール基を有する置換基によって置換されていてもよい。

他の一実施形態では、ポリマーは、直鎖状ポリマー、即ち非分岐ポリマーである。

一代替実施形態では、ポリマーは、分岐ポリマー又はマルチアームポリマー、より具体的には３又は４本のアームを有するポリマーである。

他の一実施形態では、ポリマーは、親水性ポリマーである。適切な親水性ポリマーについては、以下の所見を参照することができる。

一つの有用な実施形態では、ポリマーは、生体適合性ポリマー、即ち、医学上問題がないポリマーである。

他の一実施形態では、ポリマーは、３ｋＤａから１００００ｋＤａ、より具体的には５ｋＤａから１０００ｋＤａ、好ましくは１０ｋＤａから１００ｋＤａの平均分子量を有する。

一つの特に好ましい実施形態によると、ポリマーは、アルブミン架橋基によって官能基化されたポリマーである。

ポリマーは、好ましくは、アルブミン架橋基によって官能基化された多糖類と、アルブミン架橋基によって官能基化されたムコ多糖類と、アルブミン架橋基によって官能基化されたタンパク質と、アルブミン架橋基によって官能基化された合成ポリマーと、上記の官能基化されたポリマーのうち少なくとも二つの組み合わせとから成る群から選択されるポリマーである。

さらに好ましくは、ポリマーは、アルブミン架橋基によって官能基化されたヒアルロン酸と、アルブミン架橋基によって官能基化されたカルボキシメチルセルロースと、アルブミン架橋基によって官能基化されたデキシトランと、アルブミン架橋基によって官能基化されたポリビニルアルコールと、アルブミン架橋基によって官能基化されたポリビニルピロリドンと、上記の官能基化されたポリマーのうち少なくとも二つの組み合わせとから成る群から選択されるポリマーである。

これ以前の段落で言及したポリマーは、特に、ジチオＰＥＧと比較してより優れた生物学的適合性があり、また少なくとも部分的に、より急速な体内（ｉｎｖｉｖｏ）分解又は体内吸収が顕著であるという利点を有する。

他の一実施形態では、コンビネーション、より具体的には第２の要素は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び／又はジチオポリエチレングリコール（ジチオＰＥＧ）のような官能基化されたポリエチレングリコールを含んでいない。

一つの特に好ましい実施形態では、ポリマーは、アルブミン架橋基によって官能基化されたヒアルロン酸である。ポリマーの骨格（Ｇｒｕｎｄｇｅｒuｓｔ）としてヒアルロン酸を使用することは、特定の物体親和性（ｋoｒｐｅｒａｆｆｉｎｅｎ）を持つ物質であるという利点を有する。

好ましくは、官能基化されたヒアルロン酸の繰り返し二糖単位が、１０００個目の繰り返し二糖単位まで３個ごとに、より具体的には５００個目の繰り返し二糖単位まで１０個ごとに、好ましくは１００個目の繰り返し二糖単位まで２０個ごとに、アルブミン架橋基によって官能基化される。

特に好ましくは、ヒアルロン酸のグルクルン酸単位及び／又は二糖単位のグルクルン酸単位が、アルブミン架橋基によって官能基化される。

他の一実施形態では、アルブミン架橋基又はアルブミン反応基は、リンカー単位を介して、グルクルン酸単位のカルボキシ炭素原子に、それぞれ共有結合されている。

リンカー単位は、好ましくは、下記の化学式Ｉを有する。
−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_n− （化学式Ｉ）
ここで、ｎは１から１２の任意の整数、より具体的には２から４の任意の整数、好ましくは２である。

あるいは、リンカー単位は、好ましくは、下記の化学式ＩＩを有する。
−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n− （化学式ＩＩ）
ここで、ｎは１から１２の任意の整数、より具体的には２から４の任意の整数、好ましくは２である。

一つの好ましい実施形態では、一つ及び／又は複数のアルブミン架橋基は、一つ及び／又は複数の求核基であり、より具体的には一つ／又は複数のマイケルドナー基であり、好ましくは一つ及び／又は複数のチオール基（１つ及び／又は複数のＳＨ基）、並びに／又は、一つ及び／又は複数のチオレート基である。一つ及び／又は複数のアルブミン架橋基は、好ましくは一つ及び／又は複数のチオール基である。

一つの特に好ましい実施形態では、ポリマーは、チオール基及び／又はチオレート基によって官能基化されたヒアルロン酸、即ちチオール官能基化されたヒアルロン酸及び／又はチオレート官能基化されたヒアルロン酸である。より特に好ましくは、ポリマーは、複数のチオール基によって官能基化されたヒアルロン酸である。

他の一実施形態では、ポリマーは、乾燥重量で、第１の要素の、より具体的には架橋性アルブミン及びそこに任意に存在する官能基化されていないヒアルロン酸の５ｗｔ％から３０００ｗｔ％、より具体的には１０ｗｔ％から１０００ｗｔ％、好ましくは５０ｗｔ％から２００ｗｔ％を有する。

他の一実施形態では、第２の要素は、塩、より具体的にはリン酸二水素−リン酸水素（Ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔ−Ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔ）緩衝剤及び／又は炭酸−炭酸水素（Ｋｏｈｌｅｎｓaｕｒｅ−Ｈｙｄｒｏｇｅｎｃａｒｂｏｎａｔ）緩衝剤などの緩衝剤をさらに含む。

他の一実施形態では、第２の要素は、水性液体の形態、より具体的には水性懸濁液又は水溶液の形態、好ましくは水溶液の形態である。

他の一実施形態では、架橋性アルブミンは、架橋性血清アルブミン、即ち血清から得られる架橋性アルブミンである。

あるいは、架橋性アルブミンは、合成アルブミン、即ち化学研究所又はそれと同等の施設で製造されたアルブミンであってよく、あるいは組換え製造したアルブミンであってもよい。

また、アルブミンは、ヒト又は異種由来のものであってよく、より具体的にはブタ、ウシ、ウマ由来のものであってもよい。

本発明によれば、架橋性アルブミンは、人間由来のアルブミンであることが好ましい。

他の一実施形態では、架橋性アルブミンは、官能基化されたアルブミンであり、より具体的には電子求核基、より具体的にはマイケルアクセプタ基、好ましくはチオール反応基によって官能基化されたアルブミンである。本発明の意味において、「チオール反応基」という表現は、チオール基と反応可能な官能基、好ましくは共有結合又は結合の形成を伴う反応が可能な官能基を指すことを意図している。

これ以前の段落で述べた官能基は、好ましくは、マレイミド基と、ビニルスルホン基と、アクリレート基と、アルキルハロゲン基と、アジリン基と、ピリジン基と、チオニトロ安息香酸基と、アリール化（ａｒｙｌｉｅｒｅｎｄｅ）基と、上記した官能基のうち少なくとも二つの組み合わせと、からなる群から選択される。

言い換えると、アルブミンは、好ましくは、マレイミド基と、ビニルスルホン基と、アクリレート基と、アルキルハロゲン基と、アジリン基と、ピリジン基と、チオニトロ安息香酸基と、アリール化基と、上記した官能基のうち少なくとも二つの組み合わせと、からなる群から選択された官能基によって官能基化される。

一つの特に好ましい実施形態によると、架橋性アルブミンは、マレイミド基によって官能基化されたアルブミン、即ちマレイミド官能基化されたアルブミンであり、好ましくはマレイミド基によって官能基化された血清アルブミン、即ちマレイミド官能基化された血清アルブミンである。

他の一実施形態では、コンビネーションは、生体適合性があり、より具体的には医学的に有効であり、好ましくは治療上有効である。

他の一実施形態では、コンビネーション、より具体的には第１の要素及び／又は第２の要素、好ましくは第１の要素が、細胞、より具体的には哺乳動物細胞、好ましくは筋骨系細胞と、代謝調節腺細胞（ｓｔｏｆｆｗｅｃｈｓｅｌｒｅｇｕｌｉｅｒｅｎｄｅＤｒuｓｅｎｚｅｌｌｅｎ）と、膵島細胞と、メラトニン生産細胞と、前駆細胞と、幹細胞、より具体的には間葉系幹細胞と、上記した細胞種のうち少なくとも二つの組み合わせと、からなる群から選択される細胞をさらに含む。

筋骨系細胞は、好ましくは幹細胞、軟骨細胞、骨細胞、線維軟骨細胞、又は上記した細胞種の少なくとも二つの組み合わせである。

自家細胞は、好ましくは、自家軟骨細胞、自家椎間板軟骨細胞、自家幹細胞、自家間葉系幹細胞、又は上記した細胞種の少なくとも二つの組み合わせである。

他の一実施形態では、コンビネーション、より具体的には第１の要素及び／又は第２の要素、好ましくは第１の要素は、少なくとも一つの有効要素、より具体的には医薬品有効要素又は生物学的有効要素を含む。

有効要素は、好ましくは、抗生物質と、抗炎症薬と、代謝ホルモンと、ヒアルロン酸などの軟骨保護剤と、ＢＭＰ−２などの骨形成タンパク質と、遺伝子治療剤と、成長ホルモンと、分化因子又は変調因子と、免疫抑制剤と、免疫賦活物質と、ＤＮＡと、ＲＮＡと、核酸と、活性アポトーシス促進剤と、活性癒着促進剤（ａｄｈaｓｉｏｎｓｖｅｒｍｉｔｔｅｌｎｄｅｒＷｉｒｋｓｔｏｆｆ）と、受容体拮抗薬と、上記した有効要素の少なくとも二つの組み合わせと、からなる群から選択される。

他の一実施形態では、コンビネーション、より具体的には第１の要素及び／又は第２の要素、好ましくは第１の要素は、ヒアルロン酸、即ち官能基化されていないヒアルロン酸を含む。

コンビネーション、より具体的には第１の要素及び／又は第２の要素、好ましくは第１の要素は、水に溶けた二つの要素の総重量に基づいて、好ましくは０．１ｗｔ％から５ｗｔ％、より具体的には０．２ｗｔ％から３ｗｔ％、好ましくは０．５ｗｔ％から２ｗｔ％のヒアルロン酸を含む。

他の一実施形態では、コンビネーション、より具体的には第１の要素及び／又は第２の要素、好ましくは第１の要素は、ヒアルロン酸を含んでいない。

他の一実施形態では、第１の要素は、水性液体の形態、より具体的には水溶液又は水性懸濁液の形態、好ましくは水性懸濁液の形態である。特に好ましくは、第１の要素は、細胞の水性懸濁液の形態、即ち細胞を含む水性懸濁液の形態である。利用可能な細胞については、これまでの明細書内容を参照されたい。

他の一実施形態では、コンビネーションは、医療装置又は医療工学製品の形態、好ましくはインプラントの形態である。

コンビネーションは、より具体的には無細胞インプラントの形態であってもよい。

一つの代替実施形態では、コンビネーションは、先進治療用の医薬品の形態、より具体的には組織工学製品（バイオテクノロジーによって操作された組織標本）又は細胞を接種された又は細胞を有するインプラントの形態である。

他の一実施形態では、コンビネーションは、病的組織の癒着の予防、より具体的には腹腔内又は他の領域内の組織癒着の予防に利用するコンビネーションである。

他の一実施形態では、軟骨欠損、より具体的には関節軟骨欠損、好ましくは膝関節軟骨欠損、あるいは椎間板欠損、好ましくは腰椎椎間板欠損、より好ましくは腰仙椎間板欠損の治療、より具体的には再建に利用するコンビネーションである。

他の一実施形態では、コンビネーションは、線維輪及び／又は髄核、好ましくは髄核の治療、より具体的には再建に利用するコンビネーションである。

他の一実施形態では、コンビネーションは、外科的投与、より具体的には低侵襲的投与に適応される。つまり、更なる一実施形態によると、コンビネーションは、外科的投与、より具体的には低侵襲な投与に利用される。

他の一実施形態では、コンビネーションは、椎間関節浸潤、より具体的には関節周囲及び／又は関節内の椎間関節浸潤、好ましくは関節内椎間関節浸潤に適応される。つまり、更なる一実施形態によると、コンビネーションは、椎間関節浸潤、より具体的には関節周囲及び／又は関節内の椎間関節浸潤、好ましくは関節内椎間関節浸潤に利用される。

他の一実施形態では、コンビネーションは、キットの形態、より具体的には医療キットの形態、好ましくは手術キットの形態である。

第２の態様によれば、本発明は反応生成物に関する。

反応生成物は、架橋性アルブミンを含む第１の要素と、ポリマーを含む第２の要素とを混合することによって取得可能又は製造可能である。ここで、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基を含む。反応生成物は、具体的には、本発明の第１の態様によるコンビネーションの第１の要素と第２の要素を混合することによって、取得可能又は製造可能である。

反応生成物の形成は、架橋性アルブミンとポリマーとの間で進行する架橋反応に基づいている。架橋反応の結果、ポリマーの高分子を介してアルブミン分子が互いに架橋し、好ましくはハイドロゲルの形成をもたらす。

従って、本発明によると、反応生成物がハイドロゲルであることが特に好ましい。

反応生成物のさらなる特徴と利点については、繰り返しを避けるために、本発明の第１の態様に関連してなされた所見を全体的に参照されたい。特に架橋性アルブミンとポリマーに関してなされた所見は、反応生成物についても（必要により修正を加えて）同様に有効である。

第３の態様によれば、本発明は医療装置に関する。

医療装置は、架橋性アルブミンを含む第１の要素と、ポリマーを含む第２の要素を含んでおり、第１の要素と第２の要素は互いに空間的に離間している。ここで、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基、より具体的には本発明の第１の態様によるコンビネーションを含む。

医療装置は、好ましくはインプラントであり、より具体的には無細胞インプラントである。

医療装置のさらなる特徴と利点については、繰り返しを避けるために、本発明の第１の態様に関連してなされた所見を全体的に参照されたい。特に架橋性アルブミンとポリマーに関してなされた所見は、医療装置についても（必要により修正を加えて）同様に有効である。

第４の態様によれば、本発明は先進治療用の医薬品に関する。

先進治療用の医薬品は、架橋性アルブミンを含む第１の要素と、ポリマーを含む第２の要素を含んでおり、第１の要素と第２の要素は互いに空間的に離間している。ここで、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基、より具体的には本発明の第１の態様によるコンビネーションを含む。

先進治療用の医薬品は、好ましくは組織工学製品（バイオテクノロジーにより操作された組織標本）、あるいは細胞を接種された又は細胞を有するインプラントである。

先進治療用の医薬品のさらなる特徴と利点については、繰り返しを避けるために、本発明の第１の態様に関連してなされた所見を全体的に参照されたい。特に架橋性アルブミンとポリマーに関してなされた所見は、先進治療用の医薬品についても（必要により修正を加えて）同様に有効である。

第５の態様によれば、本発明はキットに関する。

キットは、架橋性アルブミンを含む第１の要素と、ポリマーを含む第２の要素を含んでおり、第１の要素と第２の要素は互いに空間的に離間している。ここで、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基、より具体的には本発明の第１の態様によるコンビネーションを含む。

キットのさらなる特徴と利点については、繰り返しを避けるために、本発明の第１の態様に関連してなされた所見を全体的に参照されたい。特に架橋性アルブミンとポリマーに関してなされた所見は、キットについても（必要により修正を加えて）同様に有効である。

第６の態様によれば、本発明は吐出装置に関する。

吐出装置は、架橋性アルブミンを含む第１の要素と、ポリマーを含む第２の要素を含んでおり、第１の要素と第２の要素は互いに空間的に離間している。ここで、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基、より具体的には本発明の第１の態様によるコンビネーションを含む。

吐出装置は、好ましくはマルチチャンバ吐出装置であり、より具体的には２個のチャンバを備える吐出装置である。吐出装置は、より具体的にはダブルバレルシリンジの形態をとっていてもよい。

吐出装置のさらなる特徴と利点については、繰り返しを避けるために、本発明の第１の態様に関連してなされた所見を全体的に参照されたい。特に架橋性アルブミンとポリマーに関してなされた所見は、吐出装置についても（必要により修正を加えて）同様に有効である。

第７の態様によれば、本発明はコンビネーションの製造方法、より具体的には本発明の第１の態様によるコンビネーションの製造方法に関する。

方法は、架橋性アルブミンを含み、空間的に離間している第１の要素を提供することと、ポリマーを含む第２の要素を提供することと、を備えている。ここで、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基を含む。

方法のさらなる特徴と利点については、繰り返しを避けるために、本発明の第１の態様に関連してなされた所見を全体的に参照されたい。特に架橋性アルブミンとポリマーに関してなされた所見は、方法についても（必要により修正を加えて）同様に有効である。

第８の態様によれば、本発明は反応生成物、好ましくはハイドロゲルの製造方法、より具体的には本発明の第２の態様による反応生成物の製造方法に関する。

方法は、ａ）架橋性アルブミンを含む第１の要素を提供することと、ｂ）任意に、細胞、より具体的には自家細胞、及び／又は有効要素を添加することと、ｃ）架橋ポリマーを添加することと、を備えている。ここで、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基を含む。

第９の態様によれば、本発明は架橋性ポリマーを架橋するためのポリマーの使用に関する。ここで、ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみアルブミン架橋基を含む。

ポリマーのさらなる特徴と利点については、繰り返しを避けるために、本発明の第１の態様に関連してなされた所見を全体的に参照されたい。特にポリマーと架橋性アルブミンに関してなされた所見は、ポリマーの使用についても（必要により修正を加えて）同様に有効である。

第１０の態様によれば、本発明は官能基化されたヒアルロン酸に関する。

官能基化されたヒアルロン酸の具体的な特徴は、官能基化されたヒアルロン酸の繰り返し二糖単位が、１０００個目の繰り返し二糖単位まで３個ごと、より具体的には５００個目の繰り返し二糖単位まで１０個ごと、好ましくは１００個目の繰り返し二糖単位まで２０個ごとにアルブミン架橋基によって官能基化されていることである。

特に好ましくは、ヒアルロン酸のグルクルン酸単位及び／又は二糖単位のグルクルン酸単位は、アルブミン架橋基によって官能基化される。

他の一実施形態では、アルブミン反応基は、リンカー単位を介して、グルクルン酸単位のカルボキシ炭素原子とそれぞれ共有結合する。

リンカー単位は、好ましくは以下の化学式Ｉを有する。
−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_n− （化学式Ｉ）
ここで、ｎは１から１２の任意の整数、より具体的には２から４の任意の整数、好ましくは２である。

あるいは、リンカー単位は、好ましくは、以下の化学式ＩＩを有する。
−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n− （化学式ＩＩ）
ここで、ｎは１から１２の任意の整数、より具体的には２から４の任意の整数、好ましくは２である。

一つの好ましい実施形態では、一つ及び／又は複数のアルブミン架橋基は、一つ及び／又は複数の求核基、より具体的には一つ及び／又は複数のマイケルドナー基、好ましくは一つ及び／又は複数のチオール基（１つ及び／又は複数のＳＨ基）、並びに／又は、一つ及び／又は複数チオレート基である。一つ及び／又は複数のアルブミン架橋基は、好ましくは一つ及び／又は複数のチオール基である。

官能基化されたヒアルロン酸のさらなる特徴と利点については、繰り返しを避けるために、本発明の第１の態様に関連してなされた所見を全体的に参照されたい。当該所見は、このヒアルロン酸についても（必要により修正を加えて）同様に有効である。

本発明のさらなる特徴及び利点は、従属請求項と併せて、以下に例として記載される好ましい実施形態の説明から明らかになるであろう。ここで、個々の特徴はそれぞれ単独で実現されても、複数の他の特徴と組み合わせて実現されてもよい。以下に説明する実施形態は、単に本発明をさらに説明するためのものであり、本発明をこれらの実施形態に限定するものではない。

１．チオール官能基化されたヒアルロン酸の調製
少量付加のチオール官能基化されたヒアルロン酸を合成した。

この目的のために、ヒアルロン酸（平均分子量５７ｋＤａ）をｐＨ４．７５で、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）を用いて活性化した後、過剰の３，３´−ジチオビス（プロパン酸ヒドラジド）で修飾した。過剰の３，３´−ジチオビス（プロパン酸ヒドラジド）を透析によって除去した後、ヒアルロン酸に結合したヒドラジドのジスルフィドをトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンで還元した。その後、透析によって低分子量要素は除去され、得られた官能基化されたヒアルロン酸を限外ろ過によって濃縮した。最終的に得られたヒアルロン酸では、繰り返し二糖単位がほぼ３５個ごとにチオール基を有していた。

２．ウシ由来のマレイミド官能基化された血清アルブミンの調製
ヒト、野ウサギ、ウシ又はヒツジの血清アルブミン２５０ｍｇを、５ｍｌの１Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．２）に溶解した。

さらに、１０６ｍｇの３−マレイミドプロピオン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＳＭＰ、ＯｂｉｔｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｕｒｂａｎａ，ＩＬ，ＵＳＡ）を、９５０μｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解した。不溶性材料は、遠心分離によって分離させた。その後、上澄み５００μｌをアルブミン溶液に添加した。これに続いて、さらに６０分間、室温でインキュベートした。その後、５００μｌの３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．７）を添加し、氷上で１ｌのＰＢＳに対して３回の透析を実施した。透析物は、その後、体積３．５ｍｌまで限外ろ過（ＹＭ−３膜、ミリポア）で濃縮し、滅菌ろ過をした。

３．ハイドロゲルの調製
実施例１に従って調製されたチオール官能基化されたヒアルロン酸を、実施例２に従って調製されたマレイミド官能基化されたアルブミンに添加した。数分以内に、ハイドロゲルが得られ、分離傾向は全く見られなかった。

４．チオール官能基化されたカルボキシメチルセルロースの調製
少量付加のチオール官能基化されたカルボキシメチルセルロースを合成した。

この目的のために、カルボキシメチルセルロース（平均分子量９０ｋＤａ、官能基化度（Ｆｕｎｋｔｉｏｎａｌｉｓｉｅｒｕｎｇｓ− ｇｒａｄ）０．７５、即ち無水グルコース単位あたり０．７５個のカルボキシル基）を水に溶解し、様々なバッチにおいて、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウム塩化物（ＤＭＴＭＭ，ＣＡＳ３９４５−６９−５）の０．３０、０．１５、又は０．０７５のモル等量（カルボキシ基に基づく）それぞれで活性化させた後、ｐＨ６．５から７で過剰のシスタミン二塩酸塩と反応させた。透析による過剰のシスタミン二塩酸塩の除去に続き、カルボキシメチルセルロースに結合したシスタミンのジスルフィドをＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）を用いてチオールに還元した。その後、低分子量要素を透析で除去し、精製したチオール官能基化されたカルボキシセルロースを限外ろ過で濃縮した。最終的に得られたチオール官能基化されたカルボキシセルロースは、１００個の無水グルコース単位当たり３．６、２．８及び２．１のチオール基の置換度を有していた。

５．チオール官能基化されたカルボキシメチルセルロースからのハイドロゲルの調製
実施例４に従って調製した、３．６の置換度を有するチオール官能基化されたカルボキシメチルセルロースを、実施例２に従って調製したマレイミド官能基化されたアルブミンとＰＢＳに添加した。反応基（チオール基とマレイミド基のそれぞれ）は、混合物において２ｍｍｏｌ／Ｌの濃度をそれぞれ計算した。数分以内に、ハイドロゲルが得られ、分離傾向は全く見られなかった。

同様の方法において、実施例４に従って調製した、２．１の置換度を有するチオール官能基化されたカルボキシセルロースを使用した場合においても、分離傾向が全く見られない、ハイドロゲルを作製することが同様に可能であった。

同様の方法において、実施例４に従って調製した、２．１の置換度を有するチオール官能基化されたカルボキシセルロースを使用した場合においても、分離傾向が全く見られない、ハイドロゲルを作製することが同様に可能であった。
以下の項目は、国際出願時の特許請求の範囲に記載の要素である。
（項目１）
互いに空間的に離間している第１の要素及び第２要素を含むコンビネーションであって、前記第１の要素は架橋性アルブミンを含み、前記第２の要素はポリマーを含んでおり、
前記ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基を含む、コンビネーション。
（項目２）
前記非末端モノマーの２０％未満、より具体的には１０％未満、好ましくは５％未満が、アルブミン架橋基を含む、項目１に記載のコンビネーション。
（項目３）
１０００個目の非末端モノマー単位まで３個ごと、より具体的には５００個目の非末端モノマー単位まで１０個ごと、好ましくは１００個目の非末端モノマー単位のまで２０個ごとに、アルブミン架橋基を含む、項目１又は２に記載のコンビネーション。
（項目４）
前記ポリマーは、前記アルブミン架橋基によって官能基化されたポリマーである、項目１から３のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目５）
前記ポリマーは、
アルブミン架橋基によって官能基化された多糖類と、
アルブミン架橋基によって官能基化されたムコ多糖類と、
アルブミン架橋基によって官能基化されたタンパク質と、
アルブミン架橋基によって官能基化された合成ポリマーと、
上記の官能基化されたポリマーのうち少なくとも二つの組み合わせと、
から成る群から選択されるポリマーである、項目１から４のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目６）
前記ポリマーは、
アルブミン架橋基によって官能基化されたヒアルロン酸と、
アルブミン架橋基によって官能基化されたカルボキシメチルセルロースと、
アルブミン架橋基によって官能基化されたデキシトランと、
アルブミン架橋基によって官能基化されたポリビニルアルコールと、
アルブミン架橋基によって官能基化されたポリビニルピロリドンと、
上記の官能基化されたポリマーのうち少なくとも二つの組み合わせと、
から成る群から選択されるポリマーである、項目１から５のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目７）
前記ポリマーは、アルブミン架橋基によって官能基化されたヒアルロン酸である、項目１から６のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目８）
前記ヒアルロン酸のグルクルン酸単位は、アルブミン架橋基によって官能基化される、項目６又は７に記載のコンビネーション。
（項目９）
前記アルブミン架橋基は、リンカー単位を介して、前記グルクルン酸単位のカルボキシ炭素原子に、それぞれ共有結合されている、項目８に記載のコンビネーション。
（項目１０）
前記リンカー単位は、以下の化学式Ｉ又は化学式ＩＩを有しており、
−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ ₂ ） _n − （化学式Ｉ）
−ＮＨ−（ＣＨ ₂ ） _n − （化学式ＩＩ）
ｎは１から１２の整数、より具体的には２から４の整数、好ましくは２である、項目９に記載のコンビネーション。
（項目１１）
一つ及び／又は複数の前記アルブミン架橋基は、一つ及び／又は複数の求核基であり、より具体的には一つ及び／又は複数のマイケルドナー基であり、好ましくは一つ及び／又は複数のチオール基である、項目１から１０のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目１２）
前記架橋性アルブミンは、官能基化されたアルブミンであり、より具体的には、電子求核基、より具体的にはマイケルアクセプタ基、好ましくはチオール反応基によって官能基化されたアルブミンである、項目１から１１のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目１３）
前記架橋性アルブミンは、官能基によって官能基化されており、
前記官能基は、マレイミド基と、ビニルスルホン基と、アクリレート基と、アルキルハロゲン基と、アジリン基と、ピリジン基と、チオニトロ安息香酸基と、アリール化基と、上記の官能基のうち少なくとも二つの組み合わせと、からなる群から選択される、項目１から１２のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目１４）
前記架橋性アルブミンは、マレイミド官能基化されたアルブミンである、項目１から１３のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目１５）
前記第１の要素は、細胞、より具体的には哺乳動物細胞をさらに含み、前記哺乳動物細胞は、好ましくは、筋骨系細胞と、代謝調節腺細胞と、膵島細胞と、メラトニン生産細胞と、前駆細胞と、幹細胞、より具体的には間葉系幹細胞と、上記の細胞のうち少なくとも二つの組み合わせと、からなる群から選択される、項目１から１４のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目１６）
前記第１の要素は、ヒアルロン酸を含んでいない、項目１から１５のいずれか一項に記載のコンビネーション。
（項目１７）
反応生成物であって、より具体的には、ハイドロゲルの形態であって、項目１から１６のいずれか一項に記載の前記コンビネーションの前記要素を混合することによって得られる、反応生成物。
（項目１８）
項目１から１６のいずれか一項に記載のコンビネーションを含む、医療装置又は先進治療用の医薬品。
（項目１９）
項目１から１６のいずれか一項に記載のコンビネーションの互いに空間的に離間している第１の要素及び第２の要素を含む、キット又は吐出装置。
（項目２０）
架橋アルブミン用の架橋剤としてのポリマーの使用であって、架橋ポリマーの非末端モノマー単位は、部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン反応基を用いて官能基化される、ポリマーの使用。
（項目２１）
官能基化されたヒアルロン酸であって、ヒアルロン酸の非末端モノマー単位のうち、１０００個目の非末端モノマー単位まで３個ごと、より具体的には５００個目の非末端モノマー単位まで１０個ごと、好ましくは１００個目の非末端モノマー単位まで２０個ごとに、アルブミン架橋基を含む、官能基化されたヒアルロン酸。

Claims

互いに空間的に離間している第１の要素及び第２要素を含むコンビネーションであって、前記第１の要素は架橋性アルブミンを含み、前記第２の要素はポリマーを含んでおり、
前記ポリマーの非末端モノマー単位は、少なくとも部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン架橋基を含む、コンビネーション。
前記非末端モノマーの２０％未満、より具体的には１０％未満、好ましくは５％未満が、アルブミン架橋基を含む、請求項１に記載のコンビネーション。
１０００個目の非末端モノマー単位まで３個ごと、より具体的には５００個目の非末端モノマー単位まで１０個ごと、好ましくは１００個目の非末端モノマー単位のまで２０個ごとに、アルブミン架橋基を含む、請求項１又は２に記載のコンビネーション。
前記ポリマーは、前記アルブミン架橋基によって官能基化されたポリマーである、請求項１から３のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記ポリマーは、
アルブミン架橋基によって官能基化された多糖類と、
アルブミン架橋基によって官能基化されたムコ多糖類と、
アルブミン架橋基によって官能基化されたタンパク質と、
アルブミン架橋基によって官能基化された合成ポリマーと、
上記の官能基化されたポリマーのうち少なくとも二つの組み合わせと、
から成る群から選択されるポリマーである、請求項１から４のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記ポリマーは、
アルブミン架橋基によって官能基化されたヒアルロン酸と、
アルブミン架橋基によって官能基化されたカルボキシメチルセルロースと、
アルブミン架橋基によって官能基化されたデキシトランと、
アルブミン架橋基によって官能基化されたポリビニルアルコールと、
アルブミン架橋基によって官能基化されたポリビニルピロリドンと、
上記の官能基化されたポリマーのうち少なくとも二つの組み合わせと、
から成る群から選択されるポリマーである、請求項１から５のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記ポリマーは、アルブミン架橋基によって官能基化されたヒアルロン酸である、請求項１から６のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記ヒアルロン酸のグルクルン酸単位は、アルブミン架橋基によって官能基化される、請求項６又は７に記載のコンビネーション。
前記アルブミン架橋基は、リンカー単位を介して、前記グルクルン酸単位のカルボキシ炭素原子に、それぞれ共有結合されている、請求項８に記載のコンビネーション。
前記リンカー単位は、以下の化学式Ｉ又は化学式ＩＩを有しており、
−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）_n− （化学式Ｉ）
−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n− （化学式ＩＩ）
ｎは１から１２の整数、より具体的には２から４の整数、好ましくは２である、請求項９に記載のコンビネーション。
一つ及び／又は複数の前記アルブミン架橋基は、一つ及び／又は複数の求核基であり、より具体的には一つ及び／又は複数のマイケルドナー基であり、好ましくは一つ及び／又は複数のチオール基である、請求項１から１０のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記架橋性アルブミンは、官能基化されたアルブミンであり、より具体的には、電子求核基、より具体的にはマイケルアクセプタ基、好ましくはチオール反応基によって官能基化されたアルブミンである、請求項１から１１のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記架橋性アルブミンは、官能基によって官能基化されており、
前記官能基は、マレイミド基と、ビニルスルホン基と、アクリレート基と、アルキルハロゲン基と、アジリン基と、ピリジン基と、チオニトロ安息香酸基と、アリール化基と、上記の官能基のうち少なくとも二つの組み合わせと、からなる群から選択される、請求項１から１２のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記架橋性アルブミンは、マレイミド官能基化されたアルブミンである、請求項１から１３のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記第１の要素は、細胞、より具体的には哺乳動物細胞をさらに含み、前記哺乳動物細胞は、好ましくは、筋骨系細胞と、代謝調節腺細胞と、膵島細胞と、メラトニン生産細胞と、前駆細胞と、幹細胞、より具体的には間葉系幹細胞と、上記の細胞のうち少なくとも二つの組み合わせと、からなる群から選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載のコンビネーション。
前記第１の要素は、ヒアルロン酸を含んでいない、請求項１から１５のいずれか一項に記載のコンビネーション。
反応生成物であって、より具体的には、ハイドロゲルの形態であって、請求項１から１６のいずれか一項に記載の前記コンビネーションの前記要素を混合することによって得られる、反応生成物。
請求項１から１６のいずれか一項に記載のコンビネーションを含む、医療装置又は先進治療用の医薬品。
請求項１から１６のいずれか一項に記載のコンビネーションの互いに空間的に離間している第１の要素及び第２の要素を含む、キット又は吐出装置。
架橋アルブミン用の架橋剤としてのポリマーの使用であって、架橋ポリマーの非末端モノマー単位は、部分的に、より具体的には部分的にのみ、アルブミン反応基を用いて官能基化される、ポリマーの使用。
官能基化されたヒアルロン酸であって、ヒアルロン酸の非末端モノマー単位のうち、１０００個目の非末端モノマー単位まで３個ごと、より具体的には５００個目の非末端モノマー単位まで１０個ごと、好ましくは１００個目の非末端モノマー単位まで２０個ごとに、アルブミン架橋基を含む、官能基化されたヒアルロン酸。