JP2019524721A - キメラ抗原受容体および使用方法 - Google Patents
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
Description
この出願は、2016年7月15日に出願された仮出願USSN62/362,746、2016年10月6日に出願された仮出願USSN62/405,180、および2017年5月8日に出願された仮出願USSN62/503,127(これら各々の内容は、それらの全体が参考として本明細書に援用される)の利益を特許請求される。
2017年7月13日に作成した、サイズが55KBである「POTH−008_001WO_SeqList」という名のテキストファイルの内容は、それら全体が参照により本明細書に援用される。
LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAEFTT(配列番号1)またはMLPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAEFTT(配列番号13)を含んでもよい。コンセンサス配列は、
atgctgcctgcaccaaagaacctggtggtgtctcatgtgacagaggatagtgccagactgtcatggactgctcccgacgcagccttcgatagttttatcatcgtgtaccgggagaacatcgaaaccggcgaggccattgtcctgacagtgccagggtccgaacgctcttatgacctgacagatctgaagcccggaactgagtactatgtgcagatcgccggcgtcaaaggaggcaatatcagcttccctctgtccgcaatcttcaccaca(配列番号14)を含む核酸配列によってコードされうる。コンセンサス配列は、(a)コンセンサス配列の13〜16位におけるアミノ酸残基TEDS(配列番号15)を含む、もしくはそれからなるA−Bループ、(b)コンセンサス配列の22〜28位におけるアミノ酸残基TAPDAAF(配列番号16)を含む、もしくはそれからなるB−Cループ、(c)コンセンサス配列の38〜43位におけるアミノ酸残基SEKVGE(配列番号17)を含む、もしくはそれからなるC−Dループ、(d)コンセンサス配列の51〜54位におけるアミノ酸残基GSER(配列番号18)を含む、もしくはそれからなるD−Eループ、(e)コンセンサス配列の60〜64位におけるアミノ酸残基GLKPG(配列番号19)を含む、もしくはそれからなるE−Fループ、(f)コンセンサス配列の75〜81位におけるアミノ酸残基KGGHRSN(配列番号20)を含む、もしくはそれからなるF−Gループ、または(g)(a)〜(f)の任意の組み合わせの中の1つまたは複数の位置が修飾されていることがある。本開示のCentyrinは、少なくとも5個のフィブロネクチンIII型(FN3)ドメイン、少なくとも10個のフィブロネクチンIII型(FN3)ドメインまたは少なくとも15個のフィブロネクチンIII型(FN3)ドメインのコンセンサス配列を含んでもよい。足場は、10−9Mまたはそれ未満の、10−10Mまたはそれ未満の、10−11Mまたはそれ未満の、10−12Mまたはそれ未満の、10−13Mまたはそれ未満の、10−14Mまたはそれ未満の、および10−15Mまたはそれ未満のKDから選択される少なくとも1つのアフィニティーで、抗原に結合することができる。KDは、表面プラズモン共鳴によって決定してもよい。
atgggggtccaggtcgagactatttcaccaggggatgggcgaacatttccaaaaaggggccagacttgcgtcgtgcattacaccgggatgctggaggacgggaagaaagtggacagctccagggatcgcaacaagcccttcaagttcatgctgggaaagcaggaagtgatccgaggatgggaggaaggcgtggcacagatgtcagtcggccagcgggccaaactgaccattagccctgactacgcttatggagcaacaggccacccagggatcattccccctcatgccaccctggtcttcgatgtggaactgctgaagctggagggaggaggaggatccggatttggggacgtgggggccctggagtctctgcgaggaaatgccgatctggcttacatcctgagcatggaaccctgcggccactgtctgatcattaacaatgtgaacttctgcagagaaagcggactgcgaacacggactggctccaatattgactgtgagaagctgcggagaaggttctctagtctgcactttatggtcgaagtgaaaggggatctgaccgccaagaaaatggtgctggccctgctggagctggctcagcaggaccatggagctctggattgctgcgtggtcgtgatcctgtcccacgggtgccaggcttctcatctgcagttccccggagcagtgtacggaacagacggctgtcctgtcagcgtggagaagatcgtcaacatcttcaacggcacttcttgccctagtctggggggaaagccaaaactgttctttatccaggcctgtggcggggaacagaaagatcacggcttcgaggtggccagcaccagccctgaggacgaatcaccagggagcaaccctgaaccagatgcaactccattccaggagggactgaggacctttgaccagctggatgctatctcaagcctgcccactcctagtgacattttcgtgtcttacagtaccttcccaggctttgtctcatggcgcgatcccaagtcagggagctggtacgtggagacactggacgacatctttgaacagtgggcccattcagaggacctgcagagcctgctgctgcgagtggcaaacgctgtctctgtgaagggcatctacaaacagatgcccgggtgcttcaattttctgagaaagaaactgttctttaagacttccggatctggagagggaaggggaagcctgctgacctgtggagacgtggaggaaaacccaggaccaatggcactgccagtcaccgccctgctgctgcctctggctctgctgctgcacgcagctagaccaatgctgcctgcaccaaagaacctggtggtgagccggatcacagaggactccgccagactgtcttggaccgcccctgacgccgccttcgattcctttccaatccggtacatcgagacactgatctggggcgaggccatctggctggacgtgcccggctctgagaggagctacgatctgacaggcctgaagcctggcaccgagtatgcagtggtcatcacaggagtgaagggcggcaggttcagctcccctctggtggcctcttttaccacaaccacaacccctgcccccagacctcccacacccgcccctaccatcgcgagtcagcccctgagtctgagacctgaggcctgcaggccagctgcaggaggagctgtgcacaccaggggcctggacttcgcctgcgacatctacatttgggcaccactggccgggacctgtggagtgctgctgctgagcctggtcatcacactgtactgcaagagaggcaggaagaaactgctgtatattttcaaacagcccttcatgcgccccgtgcagactacccaggaggaagacgggtgctcctgtcgattccctgaggaagaggaaggcgggtgtgagctgcgcgtgaagtttagtcgatcagcagatgccccagcttacaaacagggacagaaccagctgtataacgagctgaatctgggccgccgagaggaatatgacgtgctggataagcggagaggacgcgaccccgaaatgggaggcaagcccaggcgcaaaaaccctcaggaaggcctgtataacgagctgcagaaggacaaaatggcagaagcctattctgagatcggcatgaagggggagcgacggagaggcaaagggcacgatgggctgtaccagggactgagcaccgccacaaaggacacctatgatgctctgcatatgcaggcactgcctccaaggggaagtggagaaggacgaggatcactgctgacatgcggcgacgtggaggaaaaccctggcccaatggtcgggtctctgaattgtatcgtcgccgtgagtcagaacatgggcattgggaagaatggcgatttcccatggccacctctgcgcaacgagtcccgatactttcagcggatgacaactacctcctctgtggaagggaaacagaatctggtcatcatgggaaagaaaacttggttcagcattccagagaagaaccggcccctgaaaggcagaatcaatctggtgctgtcccgagaactgaaggagccaccacagggagctcactttctgagccggtccctggacgatgcactgaagctgacagaacagcctgagctggccaacaaagtcgatatggtgtggatcgtcgggggaagttcagtgtataaggaggccatgaatcaccccggccatctgaaactgttcgtcacacggatcatgcaggactttgagagcgatactttctttcctgaaattgacctggagaagtacaaactgctgcccgaatatcctggcgtgctgtccgatgtccaggaagagaaaggcatcaaatacaagttcgaggtctatgagaagaatgac(配列番号22、この配列は本明細書においてP−BMCA−101のオープンリーディングフレーム(ORF)とも呼ばれる)を含む核酸配列によってコードされていてもよい。
本開示のタンパク質足場は、フィブロネクチンIII型(FN3)リピートタンパク質、コード核酸または相補的核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、組み合わせ、製剤、デバイス、ならびにそれらの作製および使用方法に由来し得る。好ましい実施形態では、タンパク質足場は、ヒトテネイシン−C(本明細書では以降「テネイシン」)からの複数のFN3ドメインのコンセンサス配列からなる。さらなる好ましい実施形態では、本発明のタンパク質足場は、15個のFN3ドメインのコンセンサス配列である。本開示のタンパク質足場は、様々な分子、例えば、細胞の標的タンパク質に結合するように設計することができる。好ましい実施形態では、本開示のタンパク質足場は、野生型および/もしくは改変体形態の抗原に結合するように設計することができる。
本開示の少なくとも1つの足場タンパク質を、当技術分野において周知であるような、細胞株、混合細胞株、不死化細胞、または不死化細胞のクローン集団によって、任意選択で産生させることができる。例えば、Ausubelら編、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons, Inc.、NY、N.Y.(1987〜2001年);Sambrookら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、第2版、Cold Spring Harbor、N.Y.(1989年);HarlowおよびLane、Antibodies、a Laboratory Manual、Cold Spring Harbor、N.Y.(1989年);Colliganら編、Current Protocols in Immunology、John Wiley & Sons, Inc.、NY(1994〜2001年);Colliganら、Current Protocols in Protein Science、John Wiley & Sons、NY、N.Y.、(1997〜2001年)を参照されたい。
類似のタンパク質または断片への特異的結合についてのタンパク質足場のスクリーニングは、ヌクレオチド(DNAもしくはRNAディスプレイ)またはペプチドディスプレイライブラリー、例えばin vitroディスプレイを使用して、便利に達成することができる。この方法は、所望の機能または構造を有する個々のメンバーについてペプチドの大きなコレクションをスクリーニングすることを含む。提示されるヌクレオチドまたはペプチド配列は、長さが3〜5000ヌクレオチドもしくはアミノ酸またはそれより長いこともあり、高頻度に5〜100アミノ酸長でありえ、多くの場合、約8〜25アミノ酸長でありうる。ペプチドライブラリーを生成するための直接化学合成法に加えて、いくつかの組換えDNA法が記載されている。1つのタイプは、バクテリオファージまたは細胞の表面でのペプチド配列の提示を含む。各バクテリオファージまたは細胞は、提示される特定のペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含有する。そのような方法は、PCT特許公開第91/17271号、同第91/18980号、同第91/19818号および同第93/08278号に記載されている。
タンパク質足場をコードする本開示の核酸分子は、mRNA、hnRNA、tRNAもしくは任意の他の形態などの、RNAの形態であってもよく、またはクローニングにより得られるかもしくは合成により産生されるcDNAおよびゲノムDNAをこれらに限定されないが含む、DNA形態であってもよく、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。DNAは、三本鎖、二本鎖もしくは一本鎖であってもよく、または任意のこれらの組み合わせであってもよい。DNAまたはRNAの少なくとも1本の鎖の任意の部分が、センス鎖としても公知のコード鎖であってもよく、またはアンチセンス鎖とも称される非コード鎖であってもよい。
本開示は、選択的ハイブリダイゼーション条件下で本明細書に開示されるポリヌクレオチドとハイブリダイズする、単離された核酸を提供する。したがって、この実施形態のポリヌクレオチドは、そのようなポリヌクレオチドを含む核酸の単離、検出および/または定量に使用することができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドを使用して、寄託ライブラリー内の部分的または完全長クローンを同定すること、単離すること、または増幅させることができる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヒトまたは哺乳動物核酸ライブラリーからのcDNAから単離された、さもなければそれと相補的な、ゲノムまたはcDNA配列である。
本開示の単離された核酸は、当技術分野において周知であるような、(a)組換え法、(b)合成技術、(c)精製技術、および/または(d)これらの組み合わせを使用して作製することができる。
本開示の単離された核酸組成物、例えば、RNA、cDNA、ゲノムDNAまたはこれらの任意の組み合わせは、当業者に公知の任意の数のクローニング法を使用して生物学的供給源から得ることができる。一部の実施形態では、ストリンジェントな条件下で本発明のポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブが、cDNAまたはゲノムDNAライブラリー内の所望の配列を同定するために使用される。RNAの単離、ならびにcDNAおよびゲノムライブラリーの構築は、当業者に周知である。(例えば、Ausubel、上掲;またはSambrook、上掲を参照されたい)。
本開示のポリヌクレオチドの配列に基づくプローブを使用して、cDNAまたはゲノムライブラリーをスクリーニングすることができる。プローブを使用してゲノムDNAまたはcDNA配列とハイブリダイズさせて、同じまたは異なる生物における相同遺伝子を単離することができる。様々な程度のハイブリダイゼーションのストリンジェンシーをアッセイで用いることができること、およびハイブリダイゼーションまたは洗浄媒体がストリンジェントでありうることは、当業者には理解される。ハイブリダイゼーションの条件が、よりストリンジェントになると、二重鎖形成が起こるためのプローブと標的との間に、より大きな程度の相補性が存在するはずである。ストリンジェンシーの程度は、温度、イオン強度、pH、およびホルムアミドなどの部分的に変性させる溶媒の存在のうちの1つまたは複数により、制御することができる。例えば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、例えば0%〜50%の範囲内のホルムアミドの濃度の操作によって、反応物溶液の極性を変化させることにより、便利に変えられる。検出可能な結合に求められる相補性(配列同一性)度は、ハイブリダイゼーション媒体および/または洗浄媒体のストリンジェンシーに従って変わることになる。相補性の程度は、最適には100%、または70〜100%、またはこれらの中の任意の範囲もしくは値である。しかし、プローブおよびプライマーの小さい配列差異を、ハイブリダイゼーションおよび/または洗浄媒体のストリンジェンシーを低下させることにより、補償することができることは理解されるべきである。
本開示の単離された核酸を、公知の方法による直接化学合成により調製することもできる(例えば、Ausubelら、上掲を参照されたい)。化学合成は、一般に、一本鎖オリゴヌクレオチドを産生し、その一本鎖オリゴヌクレオチドを、相補配列とのハイブリダイゼーションにより、または鋳型として一本鎖を使用するDNAポリメラーゼを用いる重合により、二本鎖DNAに変換することができる。DNAの化学合成を約100塩基またはそれより多い塩基の配列に限定することができるが、より長い配列を、より短い配列のライゲーションにより得ることができることは、当業者には認識される。
本開示は、本開示の核酸を含む組換え発現カセットをさらに提供する。本開示の核酸配列、例えば、本開示のタンパク質足場をコードするcDNAまたはゲノム配列を使用して、少なくとも1つの所望の宿主細胞に導入することができる組換え発現カセットを構築することができる。組換え発現カセットは、所期の宿主細胞におけるポリヌクレオチドの転写を指示する転写開始調節配列に作動可能に連結された本開示のポリヌクレオチドを通常は含むことになる。異種プロモーターと非異種(すなわち、内在性)プロモーターの両方を、本開示の核酸の発現を指示するために用いることができる。
本開示は、本開示の単離された核酸分子を含むベクター、組換えベクターを用いて遺伝子操作される宿主細胞、および当技術分野において周知であるような組換え技術による少なくとも1つのタンパク質足場の産生にも関する。例えば、各々全体が参照により本明細書に援用される、Sambrookら、上掲、Ausubelら、上掲を参照されたい。
タンパク質足場は、これらに限定されないが、プロテインA精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む、周知の方法により、組換え細胞培養物から回収することおよび精製することができる。高速液体クロマトグラフィー(「HPLC」)も精製に用いることができる。例えば、各々全体が参照により本明細書に援用される、Colligan、Current Protocols in Immunology、またはCurrent Protocols in Protein Science、John Wiley & Sons、NY、N.Y.、(1997〜2001年)、例えば、1、4、6、8、9、10章を参照されたい。
本開示のタンパク質足場を構成するアミノ酸は、略記されることが多い。アミノ酸名は、当技術分野において十分承知されているように、その1文字コード、その3文字コード、名称、または3つのヌクレオチドコドンによりアミノ酸を指定することにより示すことができる(Alberts, B.ら、Molecular Biology of The Cell、第3版、Garland Publishing, Inc.、New York、1994年を参照されたい)。本開示のタンパク質足場は、本明細書に明記されるような、自然変異またはヒトによる操作のどちらかからの1つまたは複数のアミノ酸置換、欠失または付加を含むことができる。機能に不可欠である、本開示のタンパク質足場中のアミノ酸は、当技術分野において公知の方法、例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発により、同定することができる(例えば、Ausubel、上掲、8章、15頁;CunninghamおよびWells、Science 244巻:1081〜1085頁(1989年))。後述の手順は、分子の残基ごとに単一のアラニン変異を導入する。次いで、結果として得られた変異体分子は、これらに限定されないが少なくとも1つの中和活性などの、生物活性について試験される。タンパク質足場結合にとって重要な部位も、結晶化、核磁気共鳴または光アフィニティー標識(photoaffinity labeling)などの、構造解析により同定することができる(Smithら、J. Mol. Biol. 224巻:899〜904頁(1992年)およびde Vosら、Science 255巻:306〜312頁(1992年))。
本開示のタンパク質足場化合物、組成物または組み合わせは、任意の好適な助剤(auxiliary)、例えば、これらに限定されないが、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、保存薬、アジュバントなどのうちの少なくとも1つをさらに含んでもよい。薬学的に許容される助剤が好ましい。そのような滅菌溶液の非限定的な例およびそれらを調製する方法は、当技術分野において周知であり、例えば、Gennaro編、Remington’s Pharmaceutical Sciences、第18版、Mack Publishing Co.(Easton、Pa.)1990年があるが、これに限定される。当技術分野において周知である、または本明細書に記載される、タンパク質足場、断片または改変体組成物の投与方式、溶解度および/または安定性にとって好適である、薬学的に許容される担体は、慣用的に選択することができる。
白血球搬出産物または血液は、閉鎖系および標準的な方法を使用して臨床現場で被験体から採取することができる(例えば、COBE Spectra Apheresis System)。好ましくは、産物は、標準的な白血球搬出採取バッグにおいて標準的な病院または機関の白血球搬出手順に従って採取される。例えば、本開示の方法の好ましい実施形態では、白血球搬出中に通常使用されるものに加えてさらなる抗凝固剤または血液添加剤(ヘパリンなど)は含まれない。
T細胞組成物、T細胞産物組成物、未刺激のT細胞組成物、休止T細胞組成物またはこれらの任意の部分は、例えば、エレクトロポレーションなどのヌクレオフェクション戦略を使用して遺伝子修飾することができる。ヌクレオフェクトされる細胞の総数、ヌクレオフェクション反応の総容積、および試料の調製の正確なタイミングを最適化して、より優れた生存度を有し、より高い効率でヌクレオフェクトされ、ヌクレオフェクション後により優れた生存度を示し、より望ましい細胞表現型、および/または増殖技術の追加の際に、より優れた/速い増殖を示す細胞を産生することができる。
本開示の遺伝子修飾細胞(遺伝子修飾T細胞を含む)は、エキスパンダー技術を使用して増殖させることができる。本開示のエキスパンダー技術は、市販のエキスパンダー技術を含んでもよい。本開示の例示的なエキスパンダー技術は、TCRを介する本開示の遺伝子修飾T細胞の刺激を含む。本開示の遺伝子修飾T細胞の刺激のための全ての手段が企図されているが、TCRを介する本開示の遺伝子修飾T細胞の刺激が好ましい方法であり、優れたレベルの殺滅能力を有する産物を産生する。
遺伝子修飾細胞の百分率は本開示の増殖プロセスの間または後に評価することができる。本開示の遺伝子修飾細胞によるトランスポゾンの細胞における発現は、蛍光標示細胞ソーティング(FACS)によって測定することができる。例えば、FACSは、本開示のCARを発現している細胞またはT細胞の百分率を決定するために使用することができる。あるいは、または加えて、遺伝子修飾細胞またはT細胞の純度、本開示の遺伝子修飾細胞またはT細胞によって発現されたCARの平均蛍光強度(MFI)、CARリガンドを発現する標的細胞の脱顆粒および/または殺滅を媒介するCARの能力、および/またはCAR+T細胞の表現型を評価することができる。
本開示の医薬製剤は、注入、凍結保存、および/または保管のためにバッグに分配されてもよい。
上述のように、本開示は、薬学的に許容される製剤中に少なくとも1つのタンパク質足場を含む、リン酸緩衝液と食塩水または選択された塩を好ましくは含む安定した製剤、ならびに保存薬を含有する保存溶液および製剤、ならびに薬学的または獣医学的使用に好適な複数回使用用保存製剤を提供する。保存製剤は、少なくとも1つの公知保存薬、または任意選択で、水性希釈剤中の少なくとも1つのフェノール、m−クレゾール、p−クレゾール、o−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム(例えば、六水和物)、アルキルパラベン(メチル、エチル、プロピル、ブチルなど)、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、ポリマーまたはこれらの混合物からなる群より選択されるものを含有する。約0.0015%、または任意の範囲、値もしくはその中の部分などの、当技術分野において公知であるような任意の好適な濃度または混合物を使用することができる。非限定的な例は、保存薬なし、約0.1〜2%m−クレゾール(例えば、0.2、0.3、0.4、0.5、0.9、1.0%)、約0.1〜3%ベンジルアルコール(例えば、0.5、0.9、1.1、1.5、1.9、2.0、2.5%)、約0.001〜0.5%チメロサール(例えば、0.005、0.01)、約0.001〜2.0%フェノール(例えば、0.05、0.25、0.28、0.5、0.9、1.0%)、0.0005〜1.0%アルキルパラベン(例えば、0.00075、0.0009、0.001、0.002、0.005、0.0075、0.009、0.01、0.02、0.05、0.075、0.09、0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、0.9、1.0%)などを含む。
本発明は、当技術分野において公知であるような、または本明細書に記載されるような、細胞、組織、器官、動物または患者における疾患をモジュレートまたは処置する方法であって、本発明の少なくとも1つのタンパク質足場を使用して、例えば、細胞、組織、器官、動物もしくは患者に治療有効量のタンパク質足場を投与して、または細胞、組織、器官、動物もしくは患者を治療有効量のタンパク質足場と接触させて、モジュレートまたは処置する方法も提供する。本発明は、細胞、組織、器官、動物または患者における、これに限定されないが悪性疾患を含む、疾患をモジュレートまたは処置する方法も提供する。
本発明による少なくとも1つのタンパク質足場の薬学的有効量を投与するために、多くの公知のおよび開発された方式を、本発明に従って使用することができる。経肺投与が下記の説明の中で使用されるが、他の投与方式を本発明に従って好適な結果で使用することができる。ここで説明されるまたは当技術分野において公知の吸入または他の方式による投与に好適な様々なデバイスおよび方法のいずれかを使用して、担体の中の、溶液、エマルジョン、コロイドもしくは懸濁物としての、または乾燥粉末としての、本発明のタンパク質足場を送達することができる。
非経口投与用の製剤は、一般的な賦形剤として、滅菌水または食塩水、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、植物由来の油、水素化ナフタレンなどを含有することができる。注射用の水性または油性懸濁物は、公知の方法に従って、適切な乳化剤または湿潤剤(humidifier)および懸濁化剤を使用することにより、調製することができる。注射用の薬剤は、水溶液、溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁物などの、非毒性で非経口投与可能な希釈剤でありうる。使用可能なビヒクルまたは溶媒として、水、リンゲル液、等張食塩水などが許容される。通常の溶媒または懸濁溶媒として、滅菌不揮発性油を使用することができる。これらのために、天然または合成または半合成脂肪油または脂肪酸、天然または合成または半合成モノまたはジまたはトリグリセリドを含む、任意の種類の不揮発性油および脂肪酸を使用することができる。非経口投与は当技術分野において公知であり、非経口投与は、これらに限定されないが、従来の注射手段、米国特許第5,851,198号に記載されているようなガス加圧式無針注射デバイス、および米国特許第5,839,446号に記載されているようなレーザー穿孔デバイス(laser perforator device)を含み、特許文献は、全体が参照により本明細書に援用される。
本発明は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内(intrarticular)、気管支内、腹部内、嚢内、軟骨内、腔内(intracavitary)、腔内(intracelial)、小脳内、脳室内、結腸内、頸部内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、脊髄内、滑液包内、胸腔内、子宮内、膀胱内、病巣内、ボーラス、経膣、直腸、頬側、舌下、鼻腔内または経皮手段による、少なくとも1つのタンパク質足場の投与に、さらに関する。少なくとも1つのタンパク質足場組成物は、非経口(皮下、筋肉内もしくは静脈内)または任意の他の投与に使用するために、特に、溶液または懸濁物の形態で調製することができ;経膣または直腸投与の際に使用するために、特に、これらに限定されないがクリームおよび坐剤などの、半固体形態で調製することができ;頬側または舌下投与のために、例えば、これらに限定されないが、錠剤またはカプセルの形態で調製することができ;または鼻腔内使用のために、例えば、これらに限定されないが、粉末、点鼻薬(nasal drop)またはエアロゾルまたはある特定薬剤の形態で調製することができ;または経皮使用のために、例えば、これらに限定されないが、皮膚構造を修飾するためのもしくは経皮パッチ中の薬物濃度を増加させるためのジメチルスルホキシドなどの化学的促進剤(全体が参照により本明細書に援用される、Jungingerら、「Drug Permeation Enhancement」、Hsieh, D. S.編、59〜90頁(Marcel Dekker, Inc.、New York 1994年))を伴う、あるいはタンパク質およびペプチドを含有する製剤の皮膚への塗布(WO98/53847)を可能にする、またはエレクトロポレーションなどの、一過性輸送経路を生じさせるための、もしくはイオントフォレーシスなどの、皮膚を通しての荷電薬物の移動を増加させるための電場の印加、またはソノフォレーシスなどの、超音波の適用(米国特許第4,309,989号および同第4,767,402号)を可能にする、酸化剤を伴う、ゲル、軟膏、ローション、懸濁物またはパッチ送達システムの形態で調製することができる(上記刊行物および特許は、全体が参照により本明細書に援用される)。
経肺投与のために、好ましくは、少なくとも1つのタンパク質足場組成物は、肺の下気道または洞への到達に有効な粒径で送達される。本発明によれば、少なくとも1つのタンパク質足場を、吸入による治療剤の投与のための当技術分野において公知の様々な吸入または鼻用デバイスのいずれによっても送達することができる。患者の洞または肺胞内にエアロゾル化した製剤を堆積させることができるこれらのデバイスは、定量吸入器、ネブライザー、乾燥粉末発生器、噴霧器などを含む。タンパク質足場の経肺または経鼻投与を導くのに好適な他のデバイスも、当技術分野において公知である。すべてのそのようなデバイスは、エアロゾルでタンパク質足場を調剤するための投与に好適な製剤を使用することができる。そのようなエアロゾルは、溶液(水性および非水性両方)からなってもよく、または固体粒子からなってもよく。
タンパク質足場組成物を含む噴霧剤は、圧力下で、少なくとも1つのタンパク質足場の懸濁物または溶液を強制的にノズルに通すことにより生じさせることができる。所望のアウトプットおよび粒径を獲得するために、ノズルのサイズおよび構成、印加圧力ならびに液体供給速度を選択することができる。例えば、毛管またはノズルフィードと接続している電場により、エレクトロスプレーを生じさせることができる。有利なことに、噴霧器により送達される少なくとも1つのタンパク質足場組成物の粒子は、約10μm未満の粒径、好ましくは約1μm〜約5μmおよび最も好ましくは約2μm〜約3μmの範囲の粒径を有する。
本発明のタンパク質足場組成物を、ジェットネブライザーまたは超音波ネブライザーなどの、ネブライザーにより投与することができる。通常は、ジェットネブライザーの場合、圧縮空気源を使用して、開口部を通して高速空気ジェットを生じさせる。ガスがノズルを越えて膨張すると、低圧領域が作られ、それにより、液体レザバに接続された毛管を通してタンパク質足場組成物の溶液が引っ張られる。毛管からの液体流は、毛管から出ると剪断されて不安定なフィラメントおよび液滴になり、その結果、エアロゾルが生じる。所与のジェットネブライザーから所望の性能特性を獲得するために、様々な構成、流速、およびバッフルのタイプを用いることができる。超音波ネブライザーの場合、高周波電気エネルギーを使用して、通常は圧電変換器を用いて、振動、機械エネルギーを生じさせる。このエネルギーが、タンパク質足場組成物の製剤に、直接、またはカップリング流体を介して伝達され、その結果、タンパク質足場組成物を含むエアロゾルが生じる。有利には、ネブライザーにより送達されるタンパク質足場組成物の粒子は、約10μm未満の粒径、好ましくは約1μm〜約5μmおよび最も好ましくは約2μm〜約3μmの範囲の粒径を有する。
定量吸入器(MDI)では、噴霧体、少なくとも1つのタンパク質足場、および任意の賦形剤または他の添加剤が、液化圧縮ガスを含む混合物として、キャニスターの中に収容されている。計量弁(metering valve)の作動により、混合物が、約10μm未満、好ましくは約1μm〜約5μm、および最も好ましくは約2μm〜約3μmのサイズ範囲の粒子を好ましくは含有するエアロゾルとして、放出される。ジェットミリング、噴霧乾燥、臨界点凝結などを含む、当業者に公知の様々な方法により産生されたタンパク質足場組成物の製剤を用いることによって、所望のエアロゾル粒径を得ることができる。好ましい定量吸入器は、3MまたはGlaxoにより製造されたおよびヒドロフルオロカーボン噴霧体を用いるものを含む。定量吸入器デバイスで使用するための少なくとも1つのタンパク質足場の製剤は、非水性媒体中の懸濁物、例えば、界面活性剤の補助の下、噴霧体に懸濁された懸濁物として少なくとも1つのタンパク質足場を含有する微細に分割された粉末を、通常は含む。噴霧体は、この目的で用いられる任意の従来の材料、例えば、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、または炭化水素(トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよび1,1,1,2−テトラフルオロエタンを含む)、HFA−134a(ヒドロフルオロアルカン−134a)、HFA−227(ヒドロフルオロアルカン−227)などでありうる。好ましくは、噴霧体は、ヒドロフルオロカーボンである。例えば、噴霧体中の懸濁物として少なくとも1つのタンパク質足場を安定化するために、または活性薬剤を化学的分解から保護するなどのために、界面活性剤を選択することができる。好適な界面活性剤は、トリオレイン酸ソルビタン、大豆レシチン、オレイン酸などを含む。一部の事例では、エタノールなどの溶媒を使用する溶液エアロゾルが好ましい。タンパク質の製剤のための当技術分野において公知のさらなる薬剤も、製剤に含めることができる。本明細書に記載されないデバイスによる少なくとも1つのタンパク質足場組成物の経肺投与により本発明の方法を達成することができることは、当業者には認識される。
経口投与用の製剤は、腸壁の透過性を人工的に上昇させるためのアジュバント(例えば、レゾルシノールならびに非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびn−ヘキサデシルポリエチレンエーテル)の共投与、ならびに酵素的分解を阻害するための酵素阻害剤(例えば、膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロリン酸(DFF)およびトラジロール)の共投与に依拠する。経口、頬側、粘膜、経鼻、経肺、経膣、膜貫通または直腸投与が意図された、タンパク質とタンパク質足場と少なくとも2つの界面活性剤の組み合わせとを含む親水性薬剤の送達のための製剤は、米国特許第6,309,663号で教示されている。経口投与のための固体型の剤形の活性成分化合物を、スクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成または半合成ポリマー、およびグリセリドを含む、少なくとも1つの添加剤と混合することができる。これらの剤形は、他のタイプの添加剤、例えば、不活性希釈剤、滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、パラベン、保存剤、例えばソルビン酸、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロール、抗酸化剤、例えばシステイン、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝化剤、甘味剤、矯味矯臭剤、芳香剤なども含有することができる。
生物活性薬剤を経口投与するための製剤であって、マイクロカプセルを生じさせるように1つまたは複数の生体適合性ポリマーまたはコポリマー賦形剤に、好ましくは、1つの生体分解性ポリマーまたはコポリマーにカプセル化されており、活性薬剤が、結果として生じるマイクロカプセルの適正なサイズのため、動物の、他に「パイエル板」または「GALT」としても公知の集合リンパ小節に到達し吸収され、胃腸管を通過した薬剤に起因する有効性の損失のない、製剤。同様の集合リンパ小節を、気管支(bronchei tube)(BALT)および大腸において見いだすことができる。上記組織は、一般に粘膜関連リンパ組織(mucosally associated lymphoreticular tissue)(MALT)と称される。粘膜表面による吸収のために、少なくとも1つのタンパク質足場を投与する組成物および方法は、複数のサブミクロン粒子を含むエマルジョンと、粘膜付着性高分子と、生理活性ペプチドと、水性連続相とを含み、エマルジョン粒子の粘膜付着を達成することにより粘膜表面による吸収を促進する(米国特許第5,514,670号)。本発明のエマルジョンの適用に好適な粘膜表面は、角膜、結膜、頬側、舌下、経鼻、経膣、経肺、胃、腸および直腸投与経路を含むことができる。経膣または直腸投与用の製剤、例えば坐剤は、賦形剤として、例えば、ポリアルキレングリコール、ワセリン、カカオ脂などを含有することができる。鼻腔内投与用の製剤は、固体であってもよく、賦形剤として例えばラクトースを含有することができ、または点鼻薬の水性もしくは油性溶液であってもよい。頬側投与のための賦形剤は、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、アルファ化デンプン(pregelinatined starch)などを含む(米国特許第5,849,695号)。
経皮投与のために、少なくとも1つのタンパク質足場は、リポソームもしくはポリマーナノ粒子、マイクロ粒子、マイクロカプセルまたはマイクロスフェア(別段の記述がない限り、まとめてマイクロ粒子と称される)などの、送達デバイスにカプセル化される。合成ポリマー、例えば、ポリヒドロキシ酸、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびこれらのコポリマー、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリホスファゼン、ならびに天然ポリマー、例えば、コラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよび他のタンパク質、アルギネートおよび他の多糖類、ならびにこれらの組み合わせで作製されたマイクロ粒子を含む、多数の好適なデバイスが公知である(米国特許第5,814,599号)。
長期間にわたって、例えば、単回投与から1週間〜1年の期間、本発明の化合物を被験体に送達することが、望ましいこともある。様々な緩徐放出、デポーまたはインプラント剤形を利用することができる。例えば、剤形は、体液への低い溶解度を有する化合物の薬学的に許容される非毒性塩、例えば、(a)リン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノもしくはジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などの多塩基酸との、酸付加塩(acid addition salt);(b)亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなどの多価金属陽イオンとの塩、または例えばN,N’−ジベンジル−エチレンジアミンもしくはエチレンジアミンから形成された、有機陽イオンとの塩;または(c)(a)と(b)の組み合わせ、例えば、亜鉛タンニン酸塩を含有することができる。加えて、本発明の化合物または、好ましくは、今述べたものなどの比較的不溶性の塩を、注射に好適なゲル、例えば、モノステアリン酸アルミニウムの、例えばゴマ油とのゲルに、製剤化することができる。特に好ましい塩は、亜鉛塩、亜鉛タンニン酸塩、パモ酸塩などである。注射用の別のタイプの緩徐放出デポー製剤は、例えば米国特許第3,773,919号に記載されているようなポリ乳酸/ポリグリコール酸ポリマーなどの、緩徐分解性、非毒性、非抗原性ポリマーへのカプセル化のために分散される化合物または塩を含有する。化合物または、好ましくは、上記のものなどの比較的不溶性の塩を、特に動物での使用のために、コレステロールマトリクスシラスティックペレットに製剤化することもできる。さらなる緩徐放出、デポーまたはインプラント製剤、例えば、気体または液体リポソームが、文献で公知である(米国特許第5,770,222号および「Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems」、J. R. Robinson編、Marcel Dekker, Inc.、N.Y.、1978年)。
本開示は、本開示の1つまたは複数のCARおよび/またはCARTyrinを発現する修飾細胞であって、それを必要とする被験体に投与するために選択および/または増殖された修飾細胞を提供する。本開示の修飾細胞は、室温および体温を含む任意の温度で保管するために製剤化することができる。本開示の修飾細胞は、凍結保存およびその後の解凍のために製剤化することができる。本開示の修飾細胞は、滅菌包装からの被験体への直接投与のために薬学的に許容される担体中で製剤化することができる。本開示の修飾細胞は、最低レベルの細胞機能およびCAR/CARTyrin発現を保証するための細胞生存度および/またはCAR/CARTyrin発現レベルの指示薬とともに薬学的に許容される担体中で製剤化することができる。本開示の修飾細胞は、さらなる増殖を阻害するためのおよび/または細胞死を防止するための1つまたは複数の試薬とともに処方された密度で薬学的に許容される担体中で製剤化することができる。
本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、既存の誘導性ポリペプチドより優れている。なぜなら、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのほうが、はるかに免疫原性が低いからである。本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、組換えポリペプチドであり、したがって、天然に存在しないが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを産生するように組み換えられる配列は、宿主ヒト免疫系が「非自己」と認識し、その結果、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを含む細胞、または誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドもしくは誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを含む細胞を含む組成物を受容する被験体において、免疫応答を誘導する可能性がある、非ヒト配列を含まない。
本開示のリガンド結合をコードするアミノ酸および/または核酸配列は、野生型アミノ酸または核酸配列と比較して配列の1つまたは複数の修飾を含有しうる。例えば、本開示のリガンド結合領域をコードするアミノ酸および/または核酸配列は、コドン最適化配列であってもよい。1つまたは複数の修飾は、野生型ポリペプチドと比較して本開示のリガンド結合領域に対するリガンド(例えば、誘導剤)の結合アフィニティーを増加させることができる。あるいは、または加えて、1つまたは複数の修飾は、野生型ポリペプチドと比較して本開示のリガンド結合領域の免疫原性を低下させることができる。本開示のリガンド結合領域および/または本開示の誘導剤は、天然に存在しないものでありうる。
本開示のCARTyrinの発現は、CARTyrinをコードする配列のT細胞へのmRNAエレクトロポレーション後に評価された。CARTyrin発現T細胞の機能性は、腫瘍株に対する脱顆粒によって測定された。特徴付けは、機能性との関連をさらにアッセイする。
Amaxa 4Dヌクレオフェクターを使用して、4つのpiggyBacトランスポゾンのうちの1つをヒト汎T細胞にヌクレオフェクトした。「模擬」条件を受ける修飾T細胞には、空のpiggyBacトランスポゾンをヌクレオフェクトした。修飾T細胞は、治療剤(CARTyrinをコードする配列)のみを含有するpiggyBacトランスポゾン、または組み込まれているiC9配列と治療剤(CARTyrinをコードする配列)とを含有するpiggyBacトランスポゾンのいずれかを受けた。
あらゆる相互参照または関連特許または出願を含む、本明細書に引用したすべての文献は、明確な除外または別段の限定がない限り、その全体がここに参照により本明細書に援用される。いずれの文献の引用も、それが、本明細書で開示または特許請求するいずれかの発明に対する先行技術であることを認めるものではなく、それが、単独でまたはいずれかの他の参照文献(単数もしくは複数)との組み合わせで、いずれかのそのような発明を教示、提案または開示していることを認めるものでもない。さらに、本書における用語のいずれかの意味または定義が、参照により援用される文献における同じ用語のいずれかの意味または定義と矛盾する場合には、本書における用語に割り当てられた意味または定義が優先するものとする。
本開示の特定の実施形態を例証し、説明してきたが、本開示の趣旨および範囲を逸脱することなく、様々な他の変更および修飾を行うことができる。添付の特許請求の範囲の範囲は、本開示の範囲内であるすべてのそのような変更および修飾を含む。
Claims (233)
- (a)抗原認識領域を含むエクトドメインであって、前記抗原認識領域が、少なくとも1つのCentyrinを含む、エクトドメイン、
(b)膜貫通ドメイン、および
(c)少なくとも1つの共刺激ドメインを含むエンドドメイン
を含むキメラ抗原受容体(CAR)。 - (a)の前記エクトドメインがシグナルペプチドをさらに含む、請求項1に記載のCAR。
- (a)の前記エクトドメインが前記抗原認識領域と前記膜貫通ドメインの間にヒンジをさらに含む、請求項1または2に記載のCAR。
- 前記シグナルペプチドが、ヒトCD2、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、CD4、CD8α、CD19、CD28、4−1BBまたはGM−CSFRシグナルペプチドをコードする配列を含む、請求項2または3に記載のCAR。
- 前記シグナルペプチドが、ヒトCD8αシグナルペプチドをコードする配列を含む、請求項2または3に記載のCAR。
- 前記シグナルペプチドが、MALPVTALLLPLALLLHAARP(配列番号3)を含むアミノ酸配列を含む、請求項5に記載のCAR。
- 前記シグナルペプチドが、atggcactgccagtcaccgccctgctgctgcctctggctctgctgctgcacgcagctagacca(配列番号45)を含む核酸配列によりコードされている、請求項5または6に記載のCAR。
- 前記膜貫通ドメインが、ヒトCD2、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、CD4、CD8α、CD19、CD28、4−1BBまたはGM−CSFR膜貫通ドメインをコードする配列を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記膜貫通ドメインが、ヒトCD8α膜貫通ドメインをコードする配列を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記膜貫通ドメインが、IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC(配列番号4)を含むアミノ酸配列を含む、請求項9に記載のCAR。
- 前記膜貫通ドメインが、atctacatttgggcaccactggccgggacctgtggagtgctgctgctgagcctggtcatcacactgtactgc(配列番号5)を含む核酸配列によりコードされている、請求項9または10に記載のCAR。
- 前記エンドドメインが、ヒトCD3ζエンドドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記少なくとも1つの共刺激ドメインが、ヒト4−1BB、CD28、CD40、ICOS、MyD88、OX−40細胞内セグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含む、前記請求項のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記少なくとも1つの共刺激ドメインが、ヒトCD28および/または4−1BB共刺激ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記CD28共刺激ドメインが、
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号6)
を含むアミノ酸配列を含む、請求項13または14に記載のCAR。 - 前記CD28共刺激ドメインが、
cgcgtgaagtttagtcgatcagcagatgccccagcttacaaacagggacagaaccagctgtataacgagctgaatctgggccgccgagaggaatatgacgtgctggataagcggagaggacgcgaccccgaaatgggaggcaagcccaggcgcaaaaaccctcaggaaggcctgtataacgagctgcagaaggacaaaatggcagaagcctattctgagatcggcatgaagggggagcgacggagaggcaaagggcacgatgggctgtaccagggactgagcaccgccacaaaggacacctatgatgctctgcatatgcaggcactgcctccaagg(配列番号7)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項15に記載のCAR。 - 前記4−1BB共刺激ドメインが、KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(配列番号8)を含むアミノ酸配列を含む、請求項13または14に記載のCAR。
- 前記4−1BB共刺激ドメインが、
aagagaggcaggaagaaactgctgtatattttcaaacagcccttcatgcgccccgtgcagactacccaggaggaagacgggtgctcctgtcgattccctgaggaagaggaaggcgggtgtgagctg(配列番号9)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項17に記載のCAR。 - 前記4−1BB共刺激ドメインが、前記膜貫通ドメインと前記CD28共刺激ドメインの間に位置する、請求項14〜18のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記ヒンジが、ヒトCD8α、IgG4、および/またはCD4配列に由来する配列を含む、請求項2〜19のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記ヒンジが、ヒトCD8α配列に由来する配列を含む、請求項2〜19のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記ヒンジが、TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(配列番号10)を含むアミノ酸配列を含む、請求項20または21に記載のCAR。
- 前記ヒンジが、
actaccacaccagcacctagaccaccaactccagctccaaccatcgcgagtcagcccctgagtctgagacctgaggcctgcaggccagctgcaggaggagctgtgcacaccaggggcctggacttcgcctgcgac(配列番号11)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項22に記載のCAR。 - 前記少なくとも1つのCentyrinが、タンパク質足場を含み、前記足場が、抗原に特異的に結合することができる、前記請求項のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記少なくとも1つのCentyrinが、少なくとも1つのフィブロネクチンIII型(FN3)ドメインのコンセンサス配列を含むタンパク質足場を含み、前記足場が、抗原に特異的に結合することができる、前記請求項のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記少なくとも1つのフィブロネクチンIII型(FN3)ドメインが、ヒトタンパク質に由来する、請求項25に記載のCAR。
- 前記ヒトタンパク質が、テネイシンCである、請求項26に記載のCAR。
- 前記コンセンサス配列が、
LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAEFTT(配列番号1)
を含む、請求項25〜27のいずれか一項に記載のCAR。 - 前記コンセンサス配列が、
MLPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAEFTT(配列番号13)
を含む、請求項25〜27のいずれか一項に記載のCAR。 - 前記コンセンサス配列が、
atgctgcctgcaccaaagaacctggtggtgtctcatgtgacagaggatagtgccagactgtcatggactgctcccgacgcagccttcgatagttttatcatcgtgtaccgggagaacatcgaaaccggcgaggccattgtcctgacagtgccagggtccgaacgctcttatgacctgacagatctgaagcccggaactgagtactatgtgcagatcgccggcgtcaaaggaggcaatatcagcttccctctgtccgcaatcttcaccaca(配列番号14)
を含む核酸配列によってコードされる、請求項29に記載のCAR。 - 前記コンセンサス配列が、
(a)前記コンセンサス配列の13〜16位におけるアミノ酸残基TEDS(配列番号15)を含む、もしくはそれからなるA−Bループ、
(b)前記コンセンサス配列の22〜28位におけるアミノ酸残基TAPDAAF(配列番号16)を含む、もしくはそれからなるB−Cループ、
(c)前記コンセンサス配列の38〜43位におけるアミノ酸残基SEKVGE(配列番号17)を含む、もしくはそれからなるC−Dループ、
(d)前記コンセンサス配列の51〜54位におけるアミノ酸残基GSER(配列番号18)を含む、もしくはそれからなるD−Eループ、
(e)前記コンセンサス配列の60〜64位におけるアミノ酸残基GLKPG(配列番号19)を含む、もしくはそれからなるE−Fループ、
(f)前記コンセンサス配列の75〜81位におけるアミノ酸残基KGGHRSN(配列番号20)を含む、もしくはそれからなるF−Gループ、または
(g)(a)〜(f)の任意の組み合わせ
の中の1つまたは複数の位置において修飾されている、請求項25〜30のいずれか一項に記載のCAR。 - 少なくとも5個のフィブロネクチンIII型(FN3)ドメインのコンセンサス配列を含む、請求項25〜31のいずれか一項に記載のCAR。
- 少なくとも10個のフィブロネクチンIII型(FN3)ドメインのコンセンサス配列を含む、請求項25〜31のいずれか一項に記載のCAR。
- 少なくとも15個のフィブロネクチンIII型(FN3)ドメインのコンセンサス配列を含む、請求項25〜31のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記足場が、10−9Mまたはそれ未満の、10−10Mまたはそれ未満の、10−11Mまたはそれ未満の、10−12Mまたはそれ未満の、10−13Mまたはそれ未満の、10−14Mまたはそれ未満の、および10−15Mまたはそれ未満のKDから選択される少なくとも1つのアフィニティーで抗原に結合する、請求項24〜34のいずれか一項に記載のCAR。
- 前記KDが表面プラズモン共鳴によって決定される、請求項35に記載のCAR。
- 前記請求項のいずれか一項に記載のCARおよび少なくとも1つの薬学的に許容される担体を含む組成物。
- 前記請求項のいずれか一項に記載のCARを含むトランスポゾン。
- 前記トランスポゾンが、選択遺伝子をさらに含む、請求項38に記載のトランスポゾン。
- 前記選択遺伝子が、細胞生存度および生存に不可欠な遺伝子産物をコードする、請求項39に記載のトランスポゾン。
- 前記選択遺伝子が、選択的細胞培養条件によってチャレンジされたときの細胞生存度および生存に不可欠な遺伝子産物をコードする、請求項39に記載のトランスポゾン。
- 前記選択的細胞培養条件が、細胞生存度または生存に有害な化合物を含み、前記遺伝子産物が前記化合物に対する耐性を付与する、請求項41に記載のトランスポゾン。
- 前記選択遺伝子が、neo、DHFR(ジヒドロ葉酸レダクターゼ)、TYMS(チミジル酸シンテターゼ)、MGMT(O(6)−メチルグアニン−DNAメチルトランスフェラーゼ)、多剤耐性遺伝子(MDR1)、ALDH1(アルデヒドデヒドロゲナーゼ1ファミリー、メンバーA1)、FRANCF、RAD51C(RAD51 パラログC)、GCS(グルコシルセラミドシンターゼ)、NKX2.2(NK2 ホメオボックス2)またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項39に記載のトランスポゾン。
- 前記トランスポゾンが、
(a)リガンド結合領域と、
(b)リンカーと、
(c)切断型カスパーゼ9ポリペプチドと
を含む誘導性カスパーゼポリペプチドであって、非ヒト配列を含まない誘導性カスパーゼポリペプチドを含む、請求項38〜43のいずれか一項に記載のトランスポゾン。 - 前記非ヒト配列が、制限部位である、請求項44に記載のトランスポゾン。
- 前記誘導性カスパーゼポリペプチドの前記リガンド結合領域が、FK506結合タンパク質12(FKBP12)ポリペプチドを含む、請求項44または45に記載のトランスポゾン。
- 前記FK506結合タンパク質12(FKBP12)ポリペプチドのアミノ酸配列が、前記配列の36位に修飾を含む、請求項46に記載のトランスポゾン。
- 前記修飾が、36位におけるフェニルアラニン(F)からバリン(V)への置換(F36V)である、請求項47に記載のトランスポゾン。
- 前記FKBP12ポリペプチドが、
GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLE(配列番号23)
を含むアミノ酸配列によりコードされている、請求項46〜48のいずれか一項に記載のトランスポゾン。 - 前記FKBP12ポリペプチドが、
GGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGATGTGGAACTGCTGAAGCTGGAG(配列番号24)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項49に記載のトランスポゾン。 - 誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリンカー領域が、GGGGS(配列番号25)を含むアミノ酸によりコードされている、請求項44〜50のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記リンカー領域が、GGAGGAGGAGGATCC(配列番号26)を含む核酸配列によりコードされている、請求項51に記載のトランスポゾン。
- 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記切断型カスパーゼ9ポリペプチドが、配列の87位にアルギニン(R)を含まないアミノ酸配列によりコードされている、請求項44〜52のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記切断型カスパーゼ9ポリペプチドが、配列の282位にアラニン(A)を含まないアミノ酸配列によりコードされている、請求項44〜53のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記切断型カスパーゼ9ポリペプチドが、
GFGDVGALESLRGNADLAYISLMEPCGHCLIINNVNFCRESGLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCNFLRKKLFFKTS(配列番号27)
を含むアミノ酸によりコードされている、請求項44〜54のいずれか一項に記載のトランスポゾン。 - 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記切断型カスパーゼ9ポリペプチドが、
TTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC(配列番号28)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項55に記載のトランスポゾン。 - 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが、
GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLEGGGGGSGFGDVGALESLRGNADLAYISLMEPCGHCLIINNVNFCRESGLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCNFLRKKLFFKTS(配列番号29)
を含むアミノ酸配列によりコードされている、請求項44〜56のいずれか一項に記載のトランスポゾン。 - 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが、
GGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGATGTGGAACTGCTGAAGCTGGAGGGAGGAGGAGGATCCGAATTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC(配列番号30)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項57に記載のトランスポゾン。 - 前記トランスポゾンが少なくとも1つの自己切断ペプチドを含む、請求項38〜58のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記トランスポゾンが少なくとも1つの自己切断ペプチドを含み、自己切断ペプチドが前記CARと前記選択遺伝子の間に位置する、請求項39〜58のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記トランスポゾンが少なくとも1つの自己切断ペプチドを含み、自己切断ペプチドが前記CARと前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの間に位置する、請求項44〜60のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記トランスポゾンが少なくとも2つの自己切断ペプチドを含み、第1の自己切断ペプチドが前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの上流に位置し、第2の自己切断ペプチドが前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの下流に位置する、請求項44〜61のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記トランスポゾンが少なくとも1つの自己切断ペプチドを含み、第1の自己切断ペプチドが前記CARの上流に位置し、第2の自己切断ペプチドが前記CARの下流に位置する、請求項38〜62のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記少なくとも1つの自己切断ペプチドが、T2Aペプチド、GSG−T2Aペプチド、E2Aペプチド、GSG−E2Aペプチド、F2Aペプチド、GSG−F2Aペプチド、P2Aペプチド、またはGSG−P2Aペプチドを含む、請求項59〜63のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 前記T2Aペプチドが、EGRGSLLTCGDVEENPGP(配列番号31)を含むアミノ酸配列を含む、請求項64に記載のトランスポゾン。
- 前記GSG−T2Aペプチドが、GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP(配列番号32)を含むアミノ酸配列を含む、請求項64に記載のトランスポゾン。
- 前記E2Aペプチドが、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(配列番号34)を含むアミノ酸配列を含む、請求項64に記載のトランスポゾン。
- 前記GSG−E2Aペプチドが、GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP(配列番号35)を含むアミノ酸配列を含む、請求項64に記載のトランスポゾン。
- 前記F2Aペプチドが、VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(配列番号36)を含むアミノ酸配列を含む、請求項64に記載のトランスポゾン。
- 前記GSG−F2Aペプチドが、GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(配列番号37)を含むアミノ酸配列を含む、請求項64に記載のトランスポゾン。
- 前記P2Aペプチドが、ATNFSLLKQAGDVEENPGP(配列番号38)を含むアミノ酸配列を含む、請求項64に記載のトランスポゾン。
- 前記GSG−P2Aペプチドが、GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP(配列番号39)を含むアミノ酸配列を含む、請求項64に記載のトランスポゾン。
- 前記トランスポゾンがpiggyBacトランスポゾンである、請求項38〜72のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
- 請求項38〜73のいずれか一項に記載のトランスポゾンを含む組成物。
- トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含む、請求項74に記載の組成物。
- トランスポザーゼ酵素をコードする前記配列がmRNA配列である、請求項75に記載の組成物。
- 前記トランスポザーゼがpiggyBacトランスポザーゼである、請求項74〜76のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記piggyBacトランスポザーゼが、配列番号12を含むアミノ酸配列を含む、請求項77に記載の組成物。
- 前記piggyBacトランスポザーゼが、高活性改変体であり、前記高活性改変体が、配列番号12の30、165、282、および538位の1つまたは複数にアミノ酸置換を含む、請求項77または78に記載の組成物。
- 配列番号12の30位における前記アミノ酸置換が、イソロイシン(I)からバリン(V)への置換(I30V)である、請求項79に記載の組成物。
- 配列番号12の165位における前記アミノ酸置換が、グリシン(G)からセリン(S)への置換(G165S)である、請求項79に記載の組成物。
- 配列番号12の282位における前記アミノ酸置換が、メチオニン(M)からバリン(V)への置換(M282V)である、請求項79に記載の組成物。
- 配列番号12の538位における前記アミノ酸置換が、アスパラギン(N)からリシン(K)への置換(N538K)である、請求項79に記載の組成物。
- 前記トランスポザーゼがSuper piggyBac(sPBo)トランスポザーゼである、請求項77〜83のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記Super piggyBac(sPBo)トランスポザーゼが、配列番号2を含むアミノ酸配列を含む、請求項84に記載の組成物。
- 請求項1〜36のいずれか一項に記載のCARを含むベクター。
- ウイルスベクターである、請求項86に記載のベクター。
- 前記ウイルスベクターがレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスもしくはそれらの任意の組み合わせから単離されたか、またはそれらに由来する配列を含む、請求項87に記載のベクター。
- 前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルスから単離されたか、またはそれに由来する配列を含む、請求項87または88に記載のベクター。
- 前記ウイルスベクターが組換えベクターである、請求項87〜89のいずれか一項に記載のベクター。
- ナノ粒子ベクターである、請求項86に記載のベクター。
- 前記ナノ粒子ベクターが、核酸、アミノ酸、ポリマー、ミセル、脂質、有機分子、無機分子またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項91に記載のベクター。
- 選択遺伝子をさらに含む、請求項86〜92のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記選択遺伝子が、細胞生存度および生存に不可欠な遺伝子産物をコードする、請求項93に記載のベクター。
- 前記選択遺伝子が、選択的細胞培養条件によってチャレンジされたときの細胞生存度および生存に不可欠な遺伝子産物をコードする、請求項93に記載のベクター。
- 前記選択的細胞培養条件が、細胞生存度または生存に有害な化合物を含み、前記遺伝子産物が前記化合物に対する耐性を付与する、請求項95に記載のベクター。
- 前記選択遺伝子が、neo、DHFR(ジヒドロ葉酸レダクターゼ)、TYMS(チミジル酸シンテターゼ)、MGMT(O(6)−メチルグアニン−DNAメチルトランスフェラーゼ)、多剤耐性遺伝子(MDR1)、ALDH1(アルデヒドデヒドロゲナーゼ1ファミリー、メンバーA1)、FRANCF、RAD51C(RAD51 パラログC)、GCS(グルコシルセラミドシンターゼ)、NKX2.2(NK2 ホメオボックス2)またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項93〜96のいずれか一項に記載のベクター。
- (a)リガンド結合領域と、
(b)リンカーと、
(c)切断型カスパーゼ9ポリペプチドと
を含む誘導性カスパーゼポリペプチドであって、非ヒト配列を含まない誘導性カスパーゼポリペプチドを含む、請求項86〜97のいずれか一項に記載のベクター。 - 前記非ヒト配列が、制限部位である、請求項98に記載のベクター。
- 前記誘導性カスパーゼポリペプチドの前記リガンド結合領域が、FK506結合タンパク質12(FKBP12)ポリペプチドを含む、請求項98または99に記載のベクター。
- 前記FK506結合タンパク質12(FKBP12)ポリペプチドのアミノ酸配列が、前記配列の36位に修飾を含む、請求項100に記載のベクター。
- 前記修飾が、36位におけるフェニルアラニン(F)からバリン(V)への置換(F36V)である、請求項101に記載のベクター。
- 前記FKBP12ポリペプチドが、
GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLE(配列番号23)
を含むアミノ酸配列によりコードされている、請求項100〜102のいずれか一項に記載のベクター。 - 前記FKBP12ポリペプチドが、
GGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGATGTGGAACTGCTGAAGCTGGAG(配列番号24)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項103に記載のベクター。 - 誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリンカー領域が、GGGGS(配列番号25)を含むアミノ酸によりコードされている、請求項98〜104のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記リンカー領域が、GGAGGAGGAGGATCC(配列番号26)を含む核酸配列によりコードされている、請求項105に記載のベクター。
- 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記切断型カスパーゼ9ポリペプチドが、配列の87位にアルギニン(R)を含まないアミノ酸配列によりコードされている、請求項98〜106のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記切断型カスパーゼ9ポリペプチドが、配列の282位にアラニン(A)を含まないアミノ酸配列によりコードされている、請求項98〜107のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記切断型カスパーゼ9ポリペプチドが、
GFGDVGALESLRGNADLAYISLMEPCGHCLIINNVNFCRESGLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCNFLRKKLFFKTS(配列番号27)
を含むアミノ酸によりコードされている、請求項98〜108のいずれか一項に記載のベクター。 - 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの前記切断型カスパーゼ9ポリペプチドが、
TTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC(配列番号28)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項109に記載のベクター。 - 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが、
GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLEGGGGGSGFGDVGALESLRGNADLAYISLMEPCGHCLIINNVNFCRESGLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCNFLRKKLFFKTS(配列番号29)
を含むアミノ酸配列によりコードされている、請求項98〜110のいずれか一項に記載のベクター。 - 前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが、
GGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGATGTGGAACTGCTGAAGCTGGAGGGAGGAGGAGGATCCGAATTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC(配列番号30)
を含む核酸配列によりコードされている、請求項111に記載のベクター。 - 少なくとも1つの自己切断ペプチドを含む、請求項86〜112のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記ベクターが少なくとも1つの自己切断ペプチドを含み、自己切断ペプチドが前記CARと選択遺伝子の間に位置する、請求項86〜112のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記トランスポゾンが少なくとも1つの自己切断ペプチドを含み、自己切断ペプチドが前記CARと前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの間に位置する、請求項98〜114のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記トランスポゾンが少なくとも2つの自己切断ペプチドを含み、第1の自己切断ペプチドが前記誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの上流に位置し、第2の自己切断ペプチドが前記アポトーシス誘導性ポリペプチドの下流に位置する、請求項98〜115のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記ベクターが少なくとも1つの自己切断ペプチドを含み、第1の自己切断ペプチドが前記CARの上流に位置し、第2の自己切断ペプチドが前記CARの下流に位置する、請求項86〜116のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記少なくとも1つの自己切断ペプチドが、T2Aペプチド、GSG−T2Aペプチド、E2Aペプチド、GSG−E2Aペプチド、F2Aペプチド、GSG−F2Aペプチド、P2Aペプチド、またはGSG−P2Aペプチドを含む、請求項113〜117のいずれか一項に記載のベクター。
- 前記T2Aペプチドが、EGRGSLLTCGDVEENPGP(配列番号31)を含むアミノ酸配列を含む、請求項118に記載のベクター。
- 前記GSG−T2Aペプチドが、GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP(配列番号32)を含むアミノ酸配列を含む、請求項118に記載のベクター。
- 前記E2Aペプチドが、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(配列番号34)を含むアミノ酸配列を含む、請求項118に記載のベクター。
- 前記GSG−E2Aペプチドが、GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP(配列番号35)を含むアミノ酸配列を含む、請求項118に記載のベクター。
- 前記F2Aペプチドが、VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(配列番号36)を含むアミノ酸配列を含む、請求項118に記載のベクター。
- 前記GSG−F2Aペプチドが、GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(配列番号37)を含むアミノ酸配列を含む、請求項118に記載のベクター。
- 前記P2Aペプチドが、ATNFSLLKQAGDVEENPGP(配列番号38)を含むアミノ酸配列を含む、請求項118に記載のベクター。
- 前記GSG−P2Aペプチドが、GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP(配列番号39)を含むアミノ酸配列を含む、請求項118に記載のベクター。
- 請求項86〜126のいずれか一項に記載のベクターを含む組成物。
- 請求項1〜36のいずれか一項に記載のCARを含む細胞。
- 請求項38〜85のいずれか一項に記載のトランスポゾンまたはトランスポザーゼを含む細胞。
- 請求項86〜126のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞。
- 細胞表面に前記CARを発現する、請求項128〜130のいずれか一項に記載の細胞。
- 免疫細胞である、請求項128〜131のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記免疫細胞が、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、ナチュラルキラー(NK)様細胞、造血前駆細胞、末梢血(PB)由来T細胞または臍帯血(UCB)由来T細胞である、請求項132に記載の細胞。
- 前記免疫細胞がT細胞である、請求項132に記載の細胞。
- 人工抗原提示細胞である、請求項128〜131のいずれか一項に記載の細胞。
- 腫瘍細胞である、請求項128〜131のいずれか一項に記載の細胞。
- 自己のものである、請求項118〜136のいずれか一項に記載の細胞。
- 同種異系のものである、請求項118〜136のいずれか一項に記載の細胞。
- 請求項128〜138のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
- 細胞の表面にキメラ抗原受容体(CAR)を発現させるための方法であって、
(a)細胞集団を得るステップ、
(b)前記細胞集団を、請求項1〜36のいずれか一項に記載のCARまたは前記CARをコードする配列を含む組成物に、前記細胞集団内の少なくとも1つの細胞の細胞膜を横切って前記CARを移行させるのに十分な条件下で接触させることによって、修飾された細胞集団を生成するステップ、
(c)修飾された前記細胞集団を、前記CARの組込みに好適な条件下で、培養するステップ、
(d)細胞表面に前記CARを発現する修飾された前記細胞集団の少なくとも1つの細胞を増殖および/または選択するステップ、
を含む、方法。 - 前記細胞集団が白血球を含む、請求項140に記載の方法。
- 前記細胞集団がCD4+およびCD8+白血球を最適化された比で含む、請求項141に記載の方法。
- CD4+白血球のCD8+白血球に対する前記最適化された比が、in vivoには天然に存在しない、請求項142に記載の方法。
- トランスポゾンまたはベクターが、前記CARまたは前記CARをコードする前記配列を含む、請求項140に記載の方法。
- 請求項38から73のいずれか一項に記載のトランスポゾンが前記CARまたは前記CARをコードする前記配列を含む、請求項140に記載の方法。
- 前記トランスポゾンがpiggyBacトランスポゾンを含む、請求項144または145に記載の方法。
- トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドを含む組成物をさらに含む、請求項146に記載の方法。
- トランスポザーゼ酵素をコードする前記配列がmRNA配列である、請求項147に記載の方法。
- 前記トランスポザーゼがpiggyBacトランスポザーゼである、請求項147または148のいずれか一項に記載の方法。
- 前記piggyBacトランスポザーゼが、配列番号12を含むアミノ酸配列を含む、請求項149に記載の方法。
- 前記piggyBacトランスポザーゼが、高活性改変体であり、前記高活性改変体が、配列番号12の30、165、282、および538位の1つまたは複数にアミノ酸置換を含む、請求項149または150に記載の方法。
- 配列番号12の30位における前記アミノ酸置換が、イソロイシン(I)からバリン(V)への置換(I30V)である、請求項151に記載の方法。
- 配列番号12の165位における前記アミノ酸置換が、グリシン(G)からセリン(S)への置換(G165S)である、請求項151に記載の方法。
- 配列番号12の282位における前記アミノ酸置換が、メチオニン(M)からバリン(V)への置換(M282V)である、請求項151に記載の方法。
- 配列番号12の538位における前記アミノ酸置換が、アスパラギン(N)からリシン(K)への置換(N538K)である、請求項151に記載の方法。
- 前記トランスポザーゼがSuper piggyBac(sPBo)トランスポザーゼである、請求項149〜155のいずれか一項に記載の方法。
- 前記Super piggyBac(sPBo)トランスポザーゼが、配列番号2を含むアミノ酸配列を含む、請求項156に記載の方法。
- 請求項76〜116のいずれか一項に記載のベクターが前記CARまたは前記CARをコードする前記配列を含む、請求項140に記載の方法。
- 前記細胞集団内の少なくとも1つの細胞の細胞膜を横切って前記CARをコードする前記配列を移行させるのに十分な条件がヌクレオフェクションを含む、請求項140、144、145、または158に記載の方法。
- (b)の前記細胞集団内の少なくとも1つの細胞の細胞膜を横切って前記CARをコードする前記配列を移行させるのに十分な条件が、指定電圧での1回または複数回の電気パルスの印加、緩衝液、および1つまたは複数のさらなる因子のうちの少なくとも1つを含む、請求項140〜158のいずれか一項に記載の方法。
- 前記緩衝液が、PBS、HBSS、OptiMEM、BTXpress、Amaxa Nucleofector、ヒトT細胞ヌクレオフェクション緩衝液またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項160に記載の方法。
- 前記1つまたは複数のさらなる因子が、
(a)組換えヒトサイトカイン、ケモカイン、インターロイキンまたはこれらの任意の組み合わせ、
(b)塩、無機物、代謝物またはこれらの任意の組み合わせ、
(c)細胞培地、
(d)細胞のDNA感知、代謝、分化、シグナル伝達、1つもしくは複数のアポトーシス経路またはこれらの組み合わせの阻害剤、および
(e)1つまたは複数の核酸を修飾または安定化する試薬
を含む、請求項160または161に記載の方法。 - 前記組換えヒトサイトカイン、前記ケモカイン、前記インターロイキンまたはこれらの任意の組み合わせが、IL2、IL7、IL12、IL15、IL21、IL1、IL3、IL4、IL5、IL6、IL8、CXCL8、IL9、IL10、IL11、IL13、IL14、IL16、IL17、IL18、IL19、IL20、IL22、IL23、IL25、IL26、IL27、IL28、IL29、IL30、IL31、IL32、IL33、IL35、IL36、GM−CSF、IFN−ガンマ、IL−1アルファ/IL−1F1、IL−1ベータ/IL−1F2、IL−12 p70、IL−12/IL−35 p35、IL−13、IL−17/IL−17A、IL−17A/Fヘテロ二量体、IL−17F、IL−18/IL−1F4、IL−23、IL−24、IL−32、IL−32ベータ、IL−32ガンマ、IL−33、LAP(TGF−ベータ1)、リンホトキシン−アルファ/TNF−ベータ、TGF−ベータ、TNF−アルファ、TRANCE/TNFSF11/RANK Lまたはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項162に記載の方法。
- 前記塩、前記無機物、前記代謝物またはこれらの任意の組み合わせが、HEPES、ニコチンアミド、ヘパリン、ピルビン酸ナトリウム、L−グルタミン、MEM非必須アミノ酸溶液、アスコルビン酸、ヌクレオシド、FBS/FCS、ヒト血清、代用血清、抗生物質、pH調節剤、アール塩、2−メルカプトエタノール、ヒトトランスフェリン、組換えヒトインスリン、ヒト血清アルブミン、Nucleofector PLUS Supplement、KCL、MgCl2、Na2HPO4、NAH2PO4、ラクトビオン酸ナトリウム、マンニトール、コハク酸ナトリウム、塩化ナトリウム、CINa、グルコース、Ca(NO3)2、Tris/HCl、K2HPO4、KH2PO4、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール、ポロクサマー188、ポロクサマー181、ポロクサマー407、ポリビニルピロリドン、Pop313、クラウン−5、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項162に記載の方法。
- 前記細胞培地が、PBS、HBSS、OptiMEM、DMEM、RPMI1640、AIM−V、X−VIVO 15、CellGro DC培地、CTS OpTimizer T Cell Expansion SFM、TexMACS培地、PRIME−XV T Cell Expansion培地、ImmunoCult−XF T Cell Expansion培地またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項162に記載の方法。
- 細胞のDNA感知、代謝、分化、シグナル伝達、1つもしくは複数のアポトーシス経路、またはこれらの組み合わせの前記阻害剤が、TLR9、MyD88、IRAK、TRAF6、TRAF3、IRF−7、NF−KB、1型インターフェロン、炎症促進性サイトカイン、cGAS、STING、Sec5、TBK1、IRF−3、RNA pol III、RIG−1、IPS−1、FADD、RIP1、TRAF3、AIM2、ASC、カスパーゼ1、Pro−IL1B、PI3K、Akt、Wnt3A、グリコーゲンシンターゼキナーゼ−3β(GSK−3β)の阻害剤、TWS119、バフィロマイシン、クロロキン、キナクリン、AC−YVAD−CMK、Z−VAD−FMK、Z−IETD−FMKまたはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項162に記載の方法。
- 1つまたは複数の核酸を修飾または安定化する前記試薬が、pH調整剤、DNA結合タンパク質、脂質、リン脂質、CaPO4、NLS配列を有するまたは有さない正味中性電荷DNA結合ペプチド、TREX1酵素、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項162に記載の方法。
- 前記CARまたは前記CARをコードする前記配列の組込みに好適な条件が、緩衝液および1つまたは複数のさらなる因子のうちの少なくとも1つを含む、請求項140〜158のいずれか一項に記載の方法。
- 前記緩衝液が、PBS、HBSS、OptiMEM、BTXpress、Amaxa Nucleofector、ヒトT細胞ヌクレオフェクション緩衝液、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項168に記載の方法。
- 前記1つまたは複数のさらなる因子が、
(a)組換えヒトサイトカイン、ケモカイン、インターロイキン、またはこれらの任意の組み合わせ、
(b)塩、無機物、代謝物、またはこれらの任意の組み合わせ、
(c)細胞培地、
(d)細胞のDNA感知、代謝、分化、シグナル伝達、1つまたは複数のアポトーシス経路、またはこれらの組み合わせの阻害剤、および
(e)1つまたは複数の核酸を修飾または安定化する試薬
を含む、請求項168または169に記載の方法。 - 前記組換えヒトサイトカイン、前記ケモカイン、前記インターロイキンまたはこれらの任意の組み合わせが、IL2、IL7、IL12、IL15、IL21、IL1、IL3、IL4、IL5、IL6、IL8、CXCL8、IL9、IL10、IL11、IL13、IL14、IL16、IL17、IL18、IL19、IL20、IL22、IL23、IL25、IL26、IL27、IL28、IL29、IL30、IL31、IL32、IL33、IL35、IL36、GM−CSF、IFN−ガンマ、IL−1アルファ/IL−1F1、IL−1ベータ/IL−1F2、IL−12 p70、IL−12/IL−35 p35、IL−13、IL−17/IL−17A、IL−17A/Fヘテロ二量体、IL−17F、IL−18/IL−1F4、IL−23、IL−24、IL−32、IL−32ベータ、IL−32ガンマ、IL−33、LAP(TGF−ベータ1)、リンホトキシン−アルファ/TNF−ベータ、TGF−ベータ、TNF−アルファ、TRANCE/TNFSF11/RANK Lまたはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項170に記載の方法。
- 前記塩、前記無機物、前記代謝物またはこれらの任意の組み合わせが、HEPES、ニコチンアミド、ヘパリン、ピルビン酸ナトリウム、L−グルタミン、MEM非必須アミノ酸溶液、アスコルビン酸、ヌクレオシド、FBS/FCS、ヒト血清、代用血清、抗生物質、pH調節剤、アール塩、2−メルカプトエタノール、ヒトトランスフェリン、組換えヒトインスリン、ヒト血清アルブミン、Nucleofector PLUS Supplement、KCL、MgCl2、Na2HPO4、NAH2PO4、ラクトビオン酸ナトリウム、マンニトール、コハク酸ナトリウム、塩化ナトリウム、CINa、グルコース、Ca(NO3)2、Tris/HCl、K2HPO4、KH2PO4、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール、ポロクサマー188、ポロクサマー181、ポロクサマー407、ポリビニルピロリドン、Pop313、クラウン−5、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項170に記載の方法。
- 前記細胞培地が、PBS、HBSS、OptiMEM、DMEM、RPMI1640、AIM−V、X−VIVO 15、CellGro DC培地、CTS OpTimizer T Cell Expansion SFM、TexMACS培地、PRIME−XV T Cell Expansion培地、ImmunoCult−XF T Cell Expansion培地またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項170に記載の方法。
- 細胞のDNA感知、代謝、分化、シグナル伝達、1つもしくは複数のアポトーシス経路、またはこれらの組み合わせの前記阻害剤が、TLR9、MyD88、IRAK、TRAF6、TRAF3、IRF−7、NF−KB、1型インターフェロン、炎症促進性サイトカイン、cGAS、STING、Sec5、TBK1、IRF−3、RNA pol III、RIG−1、IPS−1、FADD、RIP1、TRAF3、AIM2、ASC、カスパーゼ1、Pro−IL1B、PI3K、Akt、Wnt3A、グリコーゲンシンターゼキナーゼ−3β(GSK−3β)の阻害剤、TWS119、バフィロマイシン、クロロキン、キナクリン、AC−YVAD−CMK、Z−VAD−FMK、Z−IETD−FMKまたはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項170に記載の方法。
- 1つまたは複数の核酸を修飾または安定化する前記試薬が、pH調整剤、DNA結合タンパク質、脂質、リン脂質、CaPO4、NLS配列を有するまたは有さない正味中性電荷DNA結合ペプチド、TREX1酵素、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項170に記載の方法。
- (d)の前記増殖および前記選択を逐次的に行う、請求項140〜175のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増殖を選択の前に行う、請求項176に記載の方法。
- 前記増殖を選択の後に行う、請求項176に記載の方法。
- さらなる選択を増殖の後に行う、請求項178に記載の方法。
- (d)の前記増殖および前記選択を同時に行う、請求項140〜175のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増殖が、修飾された前記細胞集団の少なくとも1つの細胞を抗原と接触させて、前記CARにより前記少なくとも1つの細胞を刺激するステップを含む、請求項140〜180のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が支持体の表面に提示される、請求項181に記載の方法。
- 前記支持体がビーズまたは複数のビーズである、請求項182に記載の方法。
- 前記ビーズまたは複数のビーズが、増殖の後に修飾された前記細胞集団から分離される、請求項183に記載の方法。
- 前記抗原が細胞の表面に提示される、請求項181に記載の方法。
- 前記抗原が人工抗原提示細胞の表面に提示される、請求項185に記載の方法。
- 前記トランスポゾンまたは前記ベクターが選択遺伝子を含み、前記選択ステップが、修飾された前記細胞集団の少なくとも1つの細胞を、前記選択遺伝子が耐性を付与する化合物と接触させることによって、前記選択遺伝子を発現する細胞を、前記選択を生き抜くものとして同定し、前記選択遺伝子を発現することができない細胞を、前記選択ステップを生き抜くことができないものとして同定するステップを含む、請求項140〜186のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増殖ステップおよび前記選択ステップが、端点を含む10〜14日の期間にわたり進行する、請求項140〜187のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項140〜188のいずれか一項に記載の増殖および選択された細胞集団を含む組成物。
- がんの処置を必要とする被験体におけるがんを処置する方法であって、前記被験体に請求項37、74〜85、127、139または189のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含み、CARが腫瘍細胞上の抗原に特異的に結合する、方法。
- 前記腫瘍細胞が悪性腫瘍細胞である、請求項190に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が自己のものである、請求項190または191に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が同種異系のものである、請求項190または191に記載の方法。
- 自己免疫状態の処置を必要とする被験体の自己免疫状態を処置する方法であって、前記被験体に請求項37、74〜85、127、139または189のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含み、CARが前記被験体の自己免疫細胞上の抗原に特異的に結合する、方法。
- 前記自己免疫細胞が、前記被験体の標的細胞上の自己抗原に特異的に結合するリンパ球である、請求項194に記載の方法。
- 前記自己免疫細胞がBリンパ球である、請求項194または195に記載の方法。
- 前記自己免疫細胞がTリンパ球である、請求項194または195に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が自己のものである、請求項194〜197のいずれか一項に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が同種異系のものである、請求項194〜197のいずれか一項に記載の方法。
- 感染の処置または予防を必要とする被験体における感染を処置または予防する方法であって、前記被験体に請求項37、74〜85、127、139または189のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含み、CARが、感染因子を含む細胞、感染因子に伝染した細胞、または感染因子に曝露された細胞上の抗原に特異的に結合する、方法。
- 前記感染因子が、細菌、ウイルス、酵母または微生物である、請求項200に記載の方法。
- 前記感染因子が、感染、免疫不全状態、炎症状態および増殖性障害のうちの1つまたは複数を誘導しうる、請求項200または201に記載の方法。
- 前記感染が、結核、小頭症、神経変性またはマラリアを引き起こす、請求項202に記載の方法。
- 前記感染が、前記被験体の胎児で小頭症を引き起こす、請求項202または203に記載の方法。
- 前記感染因子がウイルスであり、前記ウイルスがジカウイルスである、請求項204に記載の方法。
- 前記免疫不全状態が後天性免疫不全症候群(AIDS)である、請求項202に記載の方法。
- 前記増殖性障害ががんである、請求項202に記載の方法。
- 前記がんが子宮頸がんであり、前記感染因子がヒトパピローマウイルス(HPV)である、請求項207に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が自己のものである、請求項200〜208のいずれか一項に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が同種異系のものである、請求項200〜208のいずれか一項に記載の方法。
- 肥満細胞疾患の処置を必要とする被験体における肥満細胞疾患を処置する方法であって、前記被験体に請求項37、74〜85、127、139または189のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含み、CARが肥満細胞上の抗原に特異的に結合する、方法。
- 前記肥満細胞疾患が肥満細胞の過剰な増殖と関連する障害である、請求項211に記載の方法。
- 前記肥満細胞疾患が肥満細胞症である、請求項212に記載の方法。
- 前記肥満細胞疾患が肥満細胞の異常な活性と関連する障害である、請求項213に記載の方法。
- 前記肥満細胞疾患が肥満細胞活性化症候群(MCAS)、アレルギー疾患、喘息または炎症性疾患である、請求項214に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が自己のものである、請求項211〜216のいずれか一項に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が同種異系のものである、請求項211〜216のいずれか一項に記載の方法。
- 変性疾患の処置を必要とする被験体における変性疾患を処置する方法であって、前記被験体に請求項37、74〜85、127、139または189のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含み、CARが有害な細胞または老化細胞上の抗原に特異的に結合する、方法。
- 前記変性疾患が、神経変性障害、代謝障害、血管障害または老化である、請求項218に記載の方法。
- 前記変性疾患が神経変性障害であり、前記有害な細胞または前記老化細胞が幹細胞、免疫細胞、ニューロン、グリアまたはミクログリアである、請求項218または219に記載の方法。
- 前記変性疾患が代謝障害であり、前記有害な細胞または前記老化細胞が幹細胞、体細胞、ニューロン、グリアまたはミクログリアである、請求項218または219に記載の方法。
- 前記変性疾患が血管障害であり、前記有害な細胞または前記老化細胞が幹細胞、体細胞、免疫細胞、内皮細胞、ニューロン、グリアまたはミクログリアである、請求項218または219に記載の方法。
- 前記変性疾患が老化であり、前記有害な細胞または前記老化細胞が卵母細胞、精子、幹細胞、体細胞、免疫細胞、内皮細胞、ニューロン、グリアまたはミクログリアである、請求項218または219に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が自己のものである、請求項218〜223のいずれか一項に記載の方法。
- 前記被験体に請求項139または185に記載の組成物を投与するステップを含み、前記細胞または細胞集団が同種異系のものである、請求項218〜223のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞療法の改変を必要とする被験体における細胞療法を改変する方法であって、前記被験体に請求項38〜73のいずれか一項に記載のトランスポゾンを含む細胞を含む組成物を投与するステップを含み、アポトーシスが、前記細胞を誘導剤と接触させることによって前記細胞に選択的に誘導されうる、方法。
- 細胞療法の改変を必要とする被験体における細胞療法を改変する方法であって、前記被験体に請求項86〜126のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞を含む組成物を投与するステップを含み、アポトーシスが、前記細胞を誘導剤と接触させることによって前記細胞に選択的に誘導されうる、方法。
- 前記細胞が自己のものである、請求項226または227に記載の方法。
- 前記細胞が同種異系のものである、請求項226または227に記載の方法。
- 前記細胞療法が養子細胞療法である、請求項226〜229のいずれか一項に記載の方法。
- 前記改変が、前記細胞療法の終了である、請求項226〜230のいずれか一項に記載の方法。
- 前記改変が、前記細胞療法で提供される細胞の一部の枯渇である、請求項226〜230のいずれか一項に記載の方法。
- 前記誘導剤の阻害剤を投与して、前記細胞療法の改変を阻害し、それによって前記細胞療法の機能および/または有効性を回復させるステップをさらに含む、、請求項226〜232のいずれか一項に記載の方法。
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