JP2019514349A - Il−21抗体及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
a)RASQDISNYLN(配列番号1)、YTSRLHS(配列番号2)、QQFHTLRTF(配列番号3)、GYTFTDYWMH(配列番号4)、LIDTSDSYTIYNQKFKG(配列番号5)、及びYGPLAMDY(配列番号6)、
b)RASKSIEKYIA(配列番号7)、AGGTLQS(配列番号8)、QQHEEYPLT(配列番号9)、GYDFTGYTMN(配列番号10)、LINPYNGGTAYSPKFKG(配列番号11)、及びTHYYGSEYTGMDY(配列番号12)、ならびに、
c)KSSQSLLDVDGKTYLN(配列番号13)、LVSKLDS(配列番号14)、WQGTHFPYT(配列番号15)、GYFFTLYMMH(配列番号16)、YINPSSGYTEYNQKFKD(配列番号17)、及びDFDY(配列番号18)からなる群から選択される。
a)配列番号19のアミノ配列及び配列番号20のアミノ配列
b)配列番号21のアミノ配列及び配列番号22のアミノ配列、ならびに
c)配列番号23のアミノ配列及び配列番号24のアミノ配列からなる群から選択される。
a)配列番号25のアミノ配列及び配列番号26のアミノ配列、
b)配列番号27のアミノ配列及び配列番号28のアミノ配列、ならびに
c)配列番号29のアミノ配列及び配列番号30のアミノ配列からなる群から選択される。
a)配列番号25のアミノ配列及び配列番号26のアミノ配列、
b)配列番号27のアミノ配列及び配列番号28のアミノ配列、ならびに
c)配列番号29のアミノ配列及び配列番号30のアミノ配列からなる群から選択される。
a)第1試薬であって、前記第1試薬は、配列番号21のアミノ配列を有するLCVR及び配列番号22のアミノ配列を有するHCVRを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第1試薬と、
b)第2試薬であって、前記第2試薬は、配列番号19のアミノ配列を有するLCVR及び配列番号20のアミノ配列を有するHCVRを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第2試薬と、を含む。
当業者が、安定した検出可能な抗原−抗体複合体を形成するために使用することができる周知の方法が当技術分野において存在する(検出可能な抗原/抗体複合体の形成を可能にする条件については、例えば、Antibodies,A Laboratory Manual by Harlow and Lane(current edition),Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New Yorkを参照されたい)。
IL−21などの特定のタンパク質は、例えば、限定されないが、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ELISA(酵素結合免疫吸着検定法)、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、およびプロテインAイムノアッセイを含むが、これらに限定されるものではない、技術を用いた、競合アッセイ及び非競合アッセイシステムなどを含む様々なイムノアッセイ法によって測定することができる。一般的な免疫学的及びイムノアッセイ手順の概説については、例えば、Stites and Terr(eds.)(1991)Basic and Clinical Immunology(7th ed.)を参照されたい。さらに、本発明のイムノアッセイは、当技術分野で知られているような多くの構成で実施することができる(例えば、Maggio(ed.)(1980)Enzyme Immunoassay CRC Press,Boca Raton,Fla.;Gosling J P 2000 Immunoassays:A Practical Approach(Practical Approach Series)Oxford Univ Press;Diamandis&Christopoulus,1996 Immunoassay Academic Press,San Diego,Calif.を参照されたい)。
抗体の発現及び精製
重鎖及び軽鎖の可変領域のポリペプチド、抗ヒトIL−21抗体の完全重鎖及び軽鎖アミノ酸配列、AbM2、Ab2−1、及びAb3−1、ならびにそれをコードするヌクレオチド配列が、以下の「配列表」と題する節に列挙される。AbM2、Ab2−1、及びAb3−1のCDRのアミノ酸配列及び対応する配列番号を、以下の表1A及び1Bに示し、AbM2、Ab2−1、及びAb3−1の軽鎖及び重鎖の可変領域及び全長のアミノ酸配列ならびにそれらをコードするDNA配列の配列番号を表1Cに示す。
表1A
表1B
表1C
IL−21抗体ペアリング解析
ELISAベースのアッセイにおいて対形成する(または同時に結合する)抗体を、HBS−P(GE Healthcare catalog BR−1003−68, 10 mM HEPES pH7.4+150mM NaCl+0.0005%surfactant P20)ランニング緩衝液でプライミングした及び25℃の分析温度でのBiacore 2000装置で表面プラズモン共鳴(SPR)アッセイを用いて決定した。固定されたヤギ抗マウスIgG Fc特異的抗体(Jackson ImmunoResearch catalog 115−005−008)を含むCM4チップを用いて、IL−21に対する抗体を捕捉する。IL−21抗体は、試験フローセル上に捕捉される。過剰なマウスIgGアイソタイプ対照抗体を注入して、抗体を捕捉する残存容量をブロックする。ヒトIL−21は、IL−21抗体によって捕捉される。捕捉されたIL−21への付加的結合を試験するために、第2の抗体を注入する。
Quanterix Simoa(商標)アッセイ
抗IL−21抗体Ab2−1を、標準Quanterixプロトコールに従って、カルボキシル化常磁性ビーズ(Quanterix Cat#100451)に1.0mg/mlでコンジュゲートさせる。抗IL−21抗体AbM2を標準Quanterixプロトコールに従ってビオチン化する(40:1ビオチン比)。Quanterixにおける各実行のために、Ab2−1ビーズ(約500万ビーズ/ml)のビーズ希釈剤(Quanterixカタログ番号100458)で調製し及びビオチン化AbM2抗体(0.5μgの/mL)を(試料/検出緩衝液(Quanterix Cat#101359)で希釈して適切な容量に希釈する。ストレプトアビジン−β−ガラクトシダーゼ(SBG)(Quanterix Cat#100439)をSBG希釈剤(QuanterixCat#100376)で、150pMで調製する。IL−21組換えタンパク質または試料を、適切な希釈度で、アッセイ緩衝液(600mM NaCl、0.5%Tween 20、25%FBS、2%BSA及び200μg/ml HBRのPBS液)で希釈する(それぞれBoston BioProducts Cat# BM−244、Thermo Scientific Cat #28320、Gibco Cat# 16010−159、Meso Scale Discovery Cat# R93BA−2、Scantibodies Cat# 3KC534−075 及びHyclone Cat# SH30258.01)。Ab2−1ビーズ、ビオチン化AbM2抗体、キャリブレーター、SBG、および供給されたレゾルフィン−ベータ−Dガラクトピラノシド(RGP)(Quanterix Cat#10030)試薬を装置に導入し、Simoa(商標)HD−1 Analyzer ユーザーガイドに従って室温でtwo−step Homebrew法として実行する。組換えヒトIL−21タンパク質へのAb2−1の結合データを表1及び図1に示す。Quanterix Simoaアッセイにおけるスパイク及び回収を決定するために、様々な量の組換えIL−21をヒト血清マトリックスに添加する。回収率を表2ならびに図2及び3に要約する。血清マトリックス中のLLOQは30fg/mlとして計算された。探索的検証もまた、ヘパリン血漿中で行われ、希釈直線性、スパイク回収及び全誤差について同等の結果が得られている。
表1.IL−21 Quanterixアッセイ結合データ
表2.ヒト血清中のIL−21スパイク及び回収
IL−21 Quanterix SIMOA(商標)アッセイにおけるヒト正常対照試料及び罹患試料の分析
健常者13人、シェーグレン11人、SLE血清試料14人を含むヒト正常対照試料及びシェーグレン及びSLE患者試料は、IL−21 Quanterix SIMOA(商標)Homebrewアッセイで実行される。試料は、PBS中のIL−21アッセイ緩衝液:NaCl(600mM,Boston BioProducts,Cat#BM−244),新生仔牛血清(25%,Gibco,Cat#16010−159),tween 20(0.5%,Thermo Scientific,Cat#28320),BSA(2%,MSD,Cat#R93BA−2),及びヘテロフィリックブロッカー(200ug/ml,Scantibodies,Cat#3KC534−075)のPBS液(1x,Hyclone,cat#SH30258.01)での1:2希釈でQuanterix SIMOA(商標)Homebrewアッセイで実行されるAb2.1抗体は捕捉のためにビーズにコンジュゲートされ、検出のためにビオチン化AbM2にコンジュゲートされる。結果を図1に示す。正常な健常対照と、シェーグレン及びSLE患者の血清の両方の間でIL−21レベルに有意差がある。これに関して、健常対照対象に対し自己免疫疾患対象における血漿IL−21の有意な増加が観察された。
配列番号1、PRT1、人工配列
RASQDISNYLN
配列番号2、PRT1、人工配列
YTSRLHS
配列番号3、PRT1、人工配列
QQFHTLRTF
配列番号4、PRT1、人工配列
GYTFTDYWMH
配列番号5、PRT1、人工配列
LIDTSDSYTIYNQKFKG
配列番号6、PRT1、人工配列
YGPLAMDY
配列番号7、PRT1、人工配列
RASKSIEKYIA
配列番号8、PRT1、人工配列
AGGTLQS
配列番号9、PRT1、人工配列
QQHEEYPLT
配列番号10、PRT1、人工配列
GYDFTGYTMN
配列番号11、PRT1、人工配列
LINPYNGGTAYSPKFKG
配列番号12、PRT1、人工配列
THYYGSEYTGMDY
配列番号13、PRT1、人工配列
KSSQSLLDVDGKTYLN
配列番号14、PRT1、人工配列
LVSKLDS
配列番号15、PRT1、人工配列
WQGTHFPYT
配列番号16、PRT1、人工配列
GYFFTLYMMH
配列番号17、PRT1、人工配列
YINPSSGYTEYNQKFKD
配列番号18、PRT1、人工配列
DFDY
配列番号19、PRT1、人工配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHTLRTFGGGTKVEIK
配列番号20、PRT1、人工配列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYWMHWVRQAPGQGLEWMGLIDTSDSYTIYNQKFKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARYGPLAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号21、PRT1、人工配列
DIQMNQSPSYLAASPGETITINCRASKSIEKYIAWYQEKPGKTNKLLIYAGGTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHEEYPLTFGAGTKLELK
配列番号22、PRT1、人工配列
QVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYDFTGYTMNWVKQSHGKNLEWIGLINPYNGGTAYSPKFKGKATLTVDKSSSTVYMELLSLTSEDSAVYHCARTHYYGSEYTGMDYWGQGTSVTVSS
配列番号23、PRT1、人工配列
DIQVTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDVDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLRISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPYTFGGGTRLEIK
配列番号24、PRT1、人工配列
QVQLKQSAAELARPGASVKMSCKASGYFFTLYMMHWAKQRPGQNLEWIGYINPSSGYTEYNQKFKDKTTLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAIYYCLTDFDYWGQGTSLTVSS
配列番号25、PRT1、人工配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHTLRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号26、PRT1、人工配列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYWMHWVRQAPGQGLEWMGLIDTSDSYTIYNQKFKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARYGPLAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
配列番号27、PRT1、人工配列
DIQMNQSPSYLAASPGETITINCRASKSIEKYIAWYQEKPGKTNKLLIYAGGTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHEEYPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
配列番号28、PRT1、人工配列
QVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYDFTGYTMNWVKQSHGKNLEWIGLINPYNGGTAYSPKFKGKATLTVDKSSSTVYMELLSLTSEDSAVYHCARTHYYGSEYTGMDYWGQGTSVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
配列番号29、PRT1、人工配列
DIQVTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDVDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLRISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPYTFGGGTRLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
配列番号30、PRT1、人工配列
QVQLKQSAAELARPGASVKMSCKASGYFFTLYMMHWAKQRPGQNLEWIGYINPSSGYTEYNQKFKDKTTLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAIYYCLTDFDYWGQGTSLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDT DGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
配列番号31、DNA、人工配列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTACACATCAAGATTACACTCAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGTTTCACACGCTTCGGACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
配列番号32、DNA、人工配列
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGCTACACATTCACTGACTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGACTGATTGATACTTCTGATAGTTATACTATCTACAATCAAAAGTTCAAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAGATATGGGCCCCTGGCTATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号33、DNA、人工配列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTACACATCAAGATTACACTCAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGTTTCACACGCTTCGGACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAAGAACTGTGGCGGCGCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCCGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
配列番号34、DNA、人工配列
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGCTACACATTCACTGACTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGACTGATTGATACTTCTGATAGTTATACTATCTACAATCAAAAGTTCAAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAGATATGGGCCCCTGGCTATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
配列番号35、DNA、人工配列
GACATCCAGATGAACCAGTCTCCATCTTATCTTGCTGCATCTCCTGGAGAAACCATTACTATTAATTGCAGGGCAAGTAAGAGCATTGAGAAATATATCGCCTGGTATCAAGAGAAACCTGGGAAAACTAATAAGCTTCTTATCTACGCAGGAGGCACTTTGCAATCTGGAATTCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACAGATTTCACTCTCACCATCAGTAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAATGTATTACTGTCAACAGCATGAGGAATACCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
配列番号36、DNA、人工配列
CAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGAGCTTCAATGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACGACTTCACTGGCTACACCATGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAACCTTGAGTGGATTGGACTTATTAATCCTTACAATGGTGGTACTGCCTACAGCCCTAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTAACTGTAGACAAGTCATCCAGCACAGTCTACATGGAGCTCCTCAGTCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATCACTGTGCAAGGACTCACTACTACGGAAGTGAATACACTGGTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA
配列番号37、DNA、人工配列
GACATCCAGATGAACCAGTCTCCATCTTATCTTGCTGCATCTCCTGGAGAAACCATTACTATTAATTGCAGGGCAAGTAAGAGCATTGAGAAATATATCGCCTGGTATCAAGAGAAACCTGGGAAAACTAATAAGCTTCTTATCTACGCAGGAGGCACTTTGCAATCTGGAATTCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACAGATTTCACTCTCACCATCAGTAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAATGTATTACTGTCAACAGCATGAGGAATACCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGATGCGGCGCCCACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCTAGCGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
配列番号38、DNA、人工配列
CAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGAGCTTCAATGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACGACTTCACTGGCTACACCATGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAACCTTGAGTGGATTGGACTTATTAATCCTTACAATGGTGGTACTGCCTACAGCCCTAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTAACTGTAGACAAGTCATCCAGCACAGTCTACATGGAGCTCCTCAGTCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATCACTGTGCAAGGACTCACTACTACGGAAGTGAATACACTGGTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCGCTAGCCCCTGGATCTGCCGCCCAGACCAACAGCATGGTGACCCTGGGCTGTCTGGTGAAGGGCTACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGACCTGGAACAGCGGCTCTCTGTCTAGCGGCGTGCACACATTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCGACCTGTACACCCTGAGCAGCAGCGTGACCGTGCCTAGCAGCACATGGCCTAGCGAGACCGTGACATGCAACGTGGCCCACCCTGCCTCTTCTACCAAGGTGGACAAGAAGATCGTGCCCAGAGACTGCGGCTGCAAGCCTTGCATCTGCACCGTGCCTGAGGTGAGCAGCGTGTTCATCTTCCCACCCAAGCCCAAGGACGTGCTCACCATCACCCTCACCCCCAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAA
配列番号39、DNA、人工配列
GACATCCAGGTGACTCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATGTGGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCTTACACGTTCGGAGGGGGGACCAGACTGGAAATAAAA
配列番号40、DNA、人工配列
CAGGTGCAGCTGAAGCAGTCTGCAGCTGAACTGGCAAGACCTGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTATTTTTTTACCCTGTACATGATGCACTGGGCAAAACAGAGGCCTGGACAGAATCTGGAATGGATTGGATACATTAATCCTAGCAGTGGATATACTGAATACAATCAGAAGTTCAAGGACAAGACCACATTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTGAGCAGCCTGACATCTGAGGATTCTGCGATCTATTACTGTCTAACGGACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCAGTCTCACAGTCTCCTCA
配列番号41、DNA、人工配列
GACATCCAGGTGACTCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATGTGGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCTTACACGTTCGGAGGGGGGACCAGACTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCGCCCACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCTAGCGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
配列番号42、DNA、人工配列
CAGGTGCAGCTGAAGCAGTCTGCAGCTGAACTGGCAAGACCTGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTATTTTTTTACCCTGTACATGATGCACTGGGCAAAACAGAGGCCTGGACAGAATCTGGAATGGATTGGATACATTAATCCTAGCAGTGGATATACTGAATACAATCAGAAGTTCAAGGACAAGACCACATTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTGAGCAGCCTGACATCTGAGGATTCTGCGATCTATTACTGTCTAACGGACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCAGTCTCACAGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCGCTAGCCCCTGGATCTGCCGCCCAGACCAACAGCATGGTGACCCTGGGCTGTCTGGTGAAGGGCTACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGACCTGGAACAGCGGCTCTCTGTCTAGCGGCGTGCACACATTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCGACCTGTACACCCTGAGCAGCAGCGTGACCGTGCCTAGCAGCACATGGCCTAGCGAGACCGTGACATGCAACGTGGCCCACCCTGCCTCTTCTACCAAGGTGGACAAGAAGATCGTGCCCAGAGACTGCGGCTGCAAGCCTTGCATCTGCACCGTGCCTGAGGTGAGCAGCGTGTTCATCTTCCCACCCAAGCCCAAGGACGTGCTCACCATCACCCTCACCCCCAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAA
配列番号43、PRT1、ホモサピエンス
MRSSPGNMERIVICLMVIFLGTLVHKSSSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
配列番号44、PRT1、人工配列
MQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
配列番号45、DNA、ホモサピエンス
ATGAGATCCAGTCCTGGCAACATGGAGAGGATTGTCATCTGTCTGATGGTCATCTTCTTGGGGACACTGGTCCACAAATCAAGCTCCCAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCCTGA
Claims (17)
- 軽鎖可変領域(LCVR)及び重鎖可変領域(HCVR)を含む、ヒトIL−21に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記LCVRは、3つの軽鎖相補性決定領域(LCDR)を含み、前記HCVRは、3つの重鎖相補性決定領域(HCDR)を含み、前記3つのLCDR及び前記3つのHCDRのアミノ酸配列は、
a)RASQDISNYLN(配列番号1)、YTSRLHS(配列番号2)、QQFHTLRTF(配列番号3)、GYTFTDYWMH(配列番号4)、LIDTSDSYTIYNQKFKG(配列番号5)、及びYGPLAMDY(配列番号6)、
b)RASKSIEKYIA(配列番号7)、AGGTLQS(配列番号8)、QQHEEYPLT(配列番号9)、GYDFTGYTMN(配列番号10)、LINPYNGGTAYSPKFKG(配列番号11)、及びTHYYGSEYTGMDY(配列番号12)、ならびに、
c)KSSQSLLDVDGKTYLN(配列番号13)、LVSKLDS(配列番号14)、WQGTHFPYT(配列番号15)、GYFFTLYMMH(配列番号16)、YINPSSGYTEYNQKFKD(配列番号17)、及びDFDY(配列番号18)からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント。 - 前記LCVR及び前記HCVRのアミノ酸配列が、
a)配列番号19のアミノ配列及び配列番号20のアミノ配列、
b)配列番号21のアミノ配列及び配列番号22のアミノ配列、ならびに
c)配列番号23のアミノ配列及び配列番号24のアミノ配列からなる群から選択される、請求項1に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。 - 前記抗体が、軽鎖及び重鎖を含み、前記軽鎖及び前記重鎖のアミノ酸配列が、
a)配列番号25のアミノ配列及び配列番号26のアミノ配列、
b)配列番号27のアミノ配列及び配列番号28のアミノ配列、ならびに
c)配列番号29のアミノ配列及び配列番号30のアミノ配列からなる群から選択される、請求項1または2に記載の抗体。 - 前記抗体が、2つの軽鎖及び2つの重鎖を含み、前記軽鎖の各々及び前記重鎖の各々のアミノ酸配列が、
a)配列番号25のアミノ配列及び配列番号26のアミノ配列、
b)配列番号27のアミノ配列及び配列番号28のアミノ配列、ならびに
c)配列番号29のアミノ配列及び配列番号30のアミノ配列からなる群から選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の抗体。 - 請求項1〜4のいずれか1項に記載のLCVR及び/もしくはHCVRをコードするヌクレオチド配列、または軽鎖及び/もしくは重鎖を含むポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチドが、配列番号31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、または42に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項5に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項5または請求項6に記載のポリヌクレオチドを含む、組換え発現ベクター。
- 請求項7に記載のベクターによって形質転換された、宿主細胞。
- 検出可能な標識をさらに含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 前記検出可能な標識が、発色団、色素原、色素、蛍光剤、蛍光発生剤、リン光剤、化学発光剤、生物発光剤、放射性核種、陽電子放出断層撮影可能な造影剤、及び磁気共鳴断層撮影可能な造影剤からなる群から選択される、請求項9に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
- インビトロでの診断、予後、及び/または患者モニタリング手順に使用するための、請求項1〜4のいずれか1項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと、許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、組成物。
- 組織または体液の試料中のヒトIL−21を検出または定量するインビトロの方法であって、
a)前記試料を請求項1〜4のいずれか1項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させることと、
b)任意に、非特異的に結合した全ての抗体またはその抗原結合フラグメントを除去することと、
c)前記試料中のヒトIL−21に特異的に結合している抗体またはその抗原結合フラグメントの量を検出または定量することと、を含む、方法。 - 前記方法は、酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)からなる、請求項13に記載のヒトIL−21を検出または定量する方法。
- 組織または体液の試料においてインビトロでヒトIL−21を検出または定量するのに使用するためのキットであって、
a)第1試薬であって、前記第1試薬は、配列番号21のアミノ配列を有するLCVR及び配列番号22のアミノ配列を有するHCVRを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第1試薬と、
b)第2試薬であって、前記第2試薬は、配列番号19のアミノ配列を有するLCVR及び配列番号20のアミノ配列を有するHCVRを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第2試薬と、を含む、キット。 - 前記試料は、血漿試料または血清試料である、請求項13に記載の方法または請求項14のキット。
- ヒト試料中のIL−21の量のインビトロでの測定に使用するための、請求項1〜10のいずれか1項に記載の抗体。
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