JP2019509270A - アリールスルファターゼａのｃｎｓ送達のための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

異染性白質ジストロフィーを治療する方法であって、治療を必要とする対象に、治療上有効な量の組換えアリールスルファターゼＡ酵素を投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して１つ以上の運動機能の低下を改善、安定化、または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法が提供される。

Description

関連出願の相互援用
本出願は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、２０１６年２月１７日に出願された米国仮出願第６２／２９６，５６３号および２０１７年２月２日に出願された米国仮出願第６２／４５３，８６４号に対する優先権の利益を主張する。

配列表
本出願は、電子的に提出された配列リストを含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。「ＳＨＲ−１０９６＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名前のファイルは２０１７年２月１３日に作成され、８，９２２バイトのサイズである。

酵素補充療法（ＥＲＴ）は、天然もしくは組換え由来タンパク質および／または酵素の対象への全身投与を含む。認可された療法は、典型的には、対象に静脈内投与され、根底にある酵素欠乏の身体症状の治療において一般的に有効である。中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞および組織への静脈内投与されたタンパク質および／または酵素の限定された分布の結果として、静脈内投与されたタンパク質および／または酵素が血液脳関門（ＢＢＢ）を十分に通過しないため、ＣＮＳ病因を有する疾患の治療は特に困難であった。

血液脳関門（ＢＢＢ）は、細菌、巨大分子（例えば、タンパク質）および他の親水性分子などの血流中の有害な物質から、そのような物質のＢＢＢを横切って下にある脳脊髄液（ＣＳＦ）およびＣＮＳへの拡散を制限することによって、中枢神経系（ＣＮＳ）を保護するように機能する内皮細胞を含む構造系である。

ＢＢＢを回避して、直接的な頭蓋内注射、ＢＢＢの一時的透過化、および組織分布を変化させるための活性薬剤の改変を含む、治療剤の脳送達を増強するためのいくつかの方法がある。脳組織への治療剤の直接注入は、血管系を完全にバイパスするが、頭蓋内注射によって引き起こされる合併症（感染、組織損傷、免疫応答）のリスクおよび投与部位からの活性剤の不十分な拡散に主に苦労している。今日まで、タンパク質の脳内への直接投与は、拡散障壁および投与可能な治療剤の限られた量のために、有意な治療効果を達成していない。対流補助拡散は、遅く長期間の注入を用いて脳実質に配置されたカテーテルを介して研究されてきたが（Ｂｏｂｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ９１，２０７６−２０８０（１９９４）；Ｎｇｕｙｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．９８，５８４−５９０（２００３））、認可された治療法は現在、この治療法を長期治療に使用していない。加えて、大脳内カテーテルの配置は、非常に侵襲的であり、臨床的代替としてあまり望ましくない。

くも膜下腔内（ＩＴ）注射、または脳脊髄液（ＣＳＦ）へのタンパク質の投与も試みられているが、まだ治療上の成功をもたらしていない。この治療における主な課題は、活性薬剤が室の上衣の層に非常に堅固に結合し、その後の拡散を妨げる傾向があったことである。現在、ＣＳＦに直接投与することにより、脳の遺伝病の治療のための認可された製品は存在しない。

事実、多くの人は、脳の表面における拡散に対する障壁、並びに、有効かつ便利な送達方法の欠如は、あらゆる疾患のための脳における適切な治療効果を達成するにはあまりにも大きな障害であると信じていた。

多くのリソソーム蓄積障害は神経系に影響を与え、伝統的な治療法でこれらの疾患を治療する際に独特の課題を示す。罹患者のニューロンおよび髄膜にグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）が大量に蓄積し、様々な形態のＣＮＳ症状が生じることが多い。今日まで、リソソーム障害に起因するＣＮＳ症状は、いかなる手段によってもうまく治療されていない。

従って、治療薬を脳に効果的に送達する大きな必要性が依然として存在する。より詳細には、リソソーム蓄積障害の治療のための中枢神経系への活性薬剤のより効果的な送達に対する大きな必要性が存在する。

Ｂｏｂｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ９１，２０７６−２０８０（１９９４） Ｎｇｕｙｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．９８，５８４−５９０（２００３）

本発明は、とりわけ、アリールスルファターゼＡのくも膜下腔内送達による異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療するための組成物および方法を提供する。

特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して１つ以上の運動機能の低下を改善、安定化、または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与は、さらに、１つ以上の認知機能、適応機能および／または実行機能の低下を改善、安定化、または減少をもたらす。

いくつかの実施形態では、１つ以上の運動機能は、粗大運動機能を含む。いくつかの実施形態では、粗大運動機能は、例えば、ＧＭＦＭ−８８のような、粗大運動能力尺度（ＧＭＦＭ）試験により評価される。いくつかの実施形態では、対象のベースラインＧＭＦＭ−８８スコアは、４０％超である。いくつかの実施形態では、患者のベースラインＧＭＦＭ−８８スコアは、４０％未満である。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与は、ＧＭＦＭ−８８スコアの１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％未満の低下をもたらす。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与は、ＧＭＦＭ−８８スコアの実質的な安定化をもたらす。いくつかの実施形態において、組換えＡＳＡ酵素の投与は、ＧＭＦＭ−８８スコアの改善をもたらす。

特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、治療上有効な用量で、かつ、バイオマーカーのベースラインレベルに対して脳脊髄液、尿、血液、および血清からなる群から選択される体液中におけるＭＬＤで蓄積するバイオマーカーのレベルを低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、スルファチド、リゾスルファチド、およびその組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、バイオマーカーはスルファチドである。いくつかの実施形態では、体液は脳脊髄液である。

いくつかの実施形態では、脳脊髄液におけるベースラインのスルファチドレベルは、約０．１μｇ／ｍＬ超である。いくつかの実施形態では、脳脊髄液におけるベースラインのスルファチドレベルは、約０．２μｇ／ｍＬ超である。いくつかの実施形態では、脳脊髄液におけるベースラインのスルファチドレベルは、約０．３μｇ／ｍＬ超である。

いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与は、約０．１μｇ／ｍＬ以上の脳脊髄液におけるスルファチドレベルの低減をもたらす。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与は、約０．２μｇ／ｍＬ以上の脳脊髄液におけるスルファチドレベルの低減をもたらす。

特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、治療上有効な用量で、かつ、バイオマーカーのベースラインレベルに対して脳組織中におけるＭＬＤで低減されるバイオマーカーのレベルを増加させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、脳組織は脳の深部白質である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、例えば、Ｎ−アセチルアスパラギン酸のような代謝産物である。いくつかの実施形態では、Ｎ−アセチルアスパラギン酸のレベルはプロトン磁気共鳴分光法により評価される。

特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳病変併発を安定化または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、脳病変併発は、ＭＬＤ ＭＲＩ（磁気共鳴画像法）重症度スコアによって評価される。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与が、ベースラインに対する対象におけるＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコアの低減をもたらす。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与が、ベースラインに対する対象におけるＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコアの安定化をもたらす。

いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は１０ｍｇ超である。いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は３０ｍｇ超である。いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は１００ｍｇ超である。いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は２００ｍｇ未満である。

いくつかの実施形態では、投与間隔は１週間に１回である。いくつかの実施形態では、投与間隔は２週間に１回である。いくつかの実施形態では、投与間隔は１ヶ月に１回である。

いくつかの実施形態では、対象は哺乳類である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

いくつかの実施形態では、対象は１６歳以下である。いくつかの実施形態では、対象は１２歳以下である。いくつかの実施形態では、対象は９歳以下である。いくつかの実施形態では、対象は６歳以下である。いくつかの実施形態では、対象は４歳以下である。いくつかの実施形態では、対象は３歳以下である。いくつかの実施形態では、対象は２歳以下である。いくつかの実施形態では、対象は１８ヶ月以下である。いくつかの実施形態では、対象は１２ヶ月以下である。

いくつかの実施形態では、対象は６ヶ月以下である。

いくつかの実施形態では、対象は少なくとも１つの異染性白質ジストロフィーの症状を示す。いくつかの実施形態では、対象は異染性白質ジストロフィーの何らかの症状も示さない。いくつかの実施形態では、対象は異染性白質ジストロフィーと診断されている。いくつかの実施形態では、対象は異染性白質ジストロフィーを発症するリスクがあると特定されている。

いくつかの実施形態では、アリールスルファターゼＡは脊柱管内に投与される。いくつかの実施形態では、アリールスルファターゼＡは腰部に投与される。いくつかの実施形態では、アリールスルファターゼＡは腰椎穿刺により投与される。

いくつかの実施形態では、くも膜下腔内投与は、移植された髄腔内薬物送達装置（ＩＤＤＤ）への間欠的または連続的アクセスによる。

いくつかの実施形態では、治療期間は少なくとも６ヶ月である。いくつかの実施形態では、治療期間は少なくとも９ヶ月である。いくつかの実施形態では、治療期間は少なくとも１２ヶ月である。いくつかの実施形態では、治療期間は少なくとも２４ヶ月である。いくつかの実施形態では、治療期間は少なくとも２６ヶ月である。

いくつかの実施形態では、対象において、組換えアリールスルファターゼＡの投与に関連する重篤な副作用が観察されない。

特定の実施形態では、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して１つ以上の運動機能の低下を改善、安定化、または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーを患うまたはそのリスクのある対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む方法における使用のための、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素が提供される。

特定の実施形態では、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるスルファチドレベルを低下させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーを患うまたはそのリスクのある対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む方法における使用のための、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素が提供される。

特定の実施形態では、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳病変併発を安定化または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーを患うまたはそのリスクのある対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む方法における使用のための、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素が提供される。

特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィーを治療または予防するための薬物の製造における組換えアリールスルファターゼＡ酵素の使用であって、治療は、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して１つ以上の運動機能の低下を改善、安定化、または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーを患うまたはそのリスクのある対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む、使用が提供される。

特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィーを治療または予防するための薬物の製造における組換えアリールスルファターゼＡ酵素の使用であって、治療は、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるスルファチドレベルを低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーを患うまたはそのリスクのある対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む、使用が提供される。

特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィーを治療または予防するための薬物の製造における組換えアリールスルファターゼＡ酵素の使用であって、治療は、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳病変併発を安定化または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーを患うまたはそのリスクのある対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む、使用が提供される。

いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１に対して、アミノ酸レベルで少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１に対して、アミノ酸レベルで少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１に対して、アミノ酸レベルで少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１に対して、アミノ酸レベルで少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のものと４を超えないミスマッチを含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のものと３を超えないミスマッチを含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のものと２を超えないミスマッチを含むアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のものと１を超えないミスマッチを含むアミノ酸配列を含む。

図１は、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）の小児におけるくも膜下腔内に送達された組換えヒトアリールスルファターゼＡのフェーズ１／２、無作為化、オープンラベル、４０週間用量漸増臨床研究の設計を示す。ＩＤＤＤ：髄腔内薬物送達装置；ｒｈＡＳＡ：組換えヒトアリールスルファターゼＡ。

図２は、実施例１に記載されているフェーズ１／２臨床研究の４０週での、３つの治療群（１０ｍｇ、３０ｍｇ、および１００ｍｇ ｒｈＡＳＡ）のそれぞれにおけるパーセンテージとしての総運動機能測定−８８（ＧＭＦＭ−８８）総スコアの（ベースラインからの）変化を示す。示されたデータは、最小二乗平均であり、誤差バーは標準誤差を表す。ベースラインデータは平均±標準偏差として示される。群間の比較は、共変量（ＡＮＣＯＶＡ）の分析によって、ＧＭＦＭ−８８スコアのベースラインからの変化を、共変量としての従属変数および用量群およびベースライン値として分析した。

図３は、実施例１に記載の臨床研究の患者のベースラインＧＭＦＭ−８８総スコア（％）に対する治療効果（ＧＭＦＭ−８８合計スコア（％）におけるベースラインからの変化によって測定される）を示す。円：１０ｍｇ ｒｈＡＳＡ；四角：３０ｍｇ ｒｈＡＳＡ；ダイヤモンド：１００ｍｇ ｒｈＡＳＡ。

図４は、実施例１に記載した臨床研究においてＧＭＦＭ−８８ベースライン総スコアが４０％を超える患者の値を別個のバーで表示した、すべての治療群におけるＧＭＦＭ−８８合計スコア（％）の変化を示す。黒い実線はすべての患者のデータを示し、白い実線はベースラインＧＭＦＭ−８８の合計スコアが４０％を超える患者のデータのみを示す。図中のデータは、標準偏差を示す誤差バーを有する手段として提示される。ベースラインデータは、平均±標準偏差として示される。

図５は、実施例１に記載された臨床研究に登録された患者における４０週目の変化性異染性白質ジストロフィー磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）重症度スコアを示す。示されているデータは、最小二乗法であり、誤差バーは標準誤差を表す。ベースラインデータは、平均±標準偏差として示される。アンバランスなベースライン値は、最小二乗平均を用いて調整された。

図６は、実施例１に記載の臨床研究に登録された患者における４０週目の脳脊髄液中のスルファチドレベルを示す。示されたデータは、手段として提示され、誤差バーは標準偏差を表す。ベースラインデータは、平均±標準偏差として示される。

図７は、臨床研究に登録された患者におけるコホートによる経時的な脳脊髄液中のスルファチドレベル（μｇ／ｍｌ）を示す。データは、少なくとも２つの兄弟対からのデータを含む。組換えヒトアリールスルファターゼＡを１０ｍｇ、３０ｍｇおよび１００ｍｇ投与した患者のデータを示す。

図８は、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）を患う小児におけるくも膜下腔内に送達された組換えヒトアリールスルファターゼＡのフェーズ１／２、オープンラベル、非制御、長期間の臨床研究のデザインを示す。

図９Ａおよび９Ｂは、治療の１０４週間にわたる運動機能に対するくも膜下腔内に送達されたｒｈＡＳＡの効果を実証する。図９Ａは、研究訪問による各コホートの平均ＧＭＦＭ−８８合計スコアを示す。図９Ｂは、１０４週の治療期間にわたる患者年齢別の個々のＧＭＦＭ−８８合計スコアを示す。

図１０は、処置の１０４週間後の合計ＭＲＩ−ＭＬＤ重症度スコアに対するくも膜下腔内に送達されたｒｈＡＳＡの効果を示す。ベースラインスコアは、ベースライン時の平均±標準偏差ＭＲＩ−ＭＬＤ重症度スコアとして示される（スコアは０〜３４の範囲であり、スコアが高いほど疾患の重症度が高いことを示す）。

図１１Ａおよび１１Ｂは、処置の１０４週間にわたる脳白質における平均ＮＡＡ／クレアチン代謝物比に対するくも膜下腔内に送達されたｒｈＡＳＡの効果を示す。右前頭白質は図１１Ａに示され、右前頭頭頂白質は図１１Ｂに示されている。データは、平均±標準誤差として示される。

図１２は、治療の１０４週間にわたるＣＳＦスルファチド濃度に対するくも膜下腔内に送達されたｒｈＡＳＡの効果を示す。データは、平均±標準偏差として示される。

定義
本発明をより容易に理解するために、いくつかの用語を最初に以下に定義する。以下の用語および他の用語の追加の定義は、明細書全体を通して述べられている。

略または約：本明細書で使用する場合、関心のある１つ以上の値に適用される「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、記載された基準値に類似する値を指す。特定の実施形態では、「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、特段の記載がない限り、または文脈から明らかでない限り（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除く）、いずれかの方向（より大きいまたは小さい）で２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ未満の値の範囲を指す。

改善：本明細書で使用される場合、用語「改善」は、状態の予防、軽減または緩和、または対象の状態の改善を意味する。改善には、疾患状態の完全な回復または完全な予防が含まれるが、必要はない。いくつかの実施形態では、改善には、関連する疾患組織が欠損している関連タンパク質またはその活性のレベルの増加が含まれる。

ベースライン：本明細書で使用する「ベースライン」という用語は、治療期間の開始前、典型的には治療開始時の値、レベル、状態、症状などを指す。

生物学的に活性である：本明細書で使用される場合、「生物学的に活性である」という句は、生物学的系において、特に生物において活性を有する任意の作用物質の特性を指す。例えば、生物に投与されたときに、その生物に対して生物学的効果を有する薬剤は、生物学的に活性であると考えられる。特定の実施形態では、タンパク質またはポリペプチドが生物学的に活性である場合、そのタンパク質またはポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を共有するそのタンパク質またはポリペプチドの部分は、典型的には「生物学的に活性な」部分と呼ばれる。

充填剤：本明細書で使用される「充填剤」という用語は、凍結乾燥混合物に質量を加え、凍結乾燥ケーキの物理的構造に寄与する化合物を指す（例えば、開気孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥ケーキの製造を容易にする）。例示的な充填剤としては、マンニトール、グリシン、塩化ナトリウム、ヒドロキシエチルデンプン、ラクトース、スクロース、トレハロース、ポリエチレングリコールおよびデキストランが挙げられる。

陽イオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）：本明細書で使用される「カチオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）」という用語は、リソソームへの輸送を予定しているゴルジ体内で酸加水分解酵素前駆体にマンノース−６−リン酸（Ｍ６Ｐ）タグを結合する細胞受容体を指す。マンノース−６−リン酸に加えて、ＣＩ−ＭＰＲは、ＩＧＦ−ＩＩを含む他のタンパク質にも結合する。ＣＩ−ＭＰＲは、「Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ−ＩＩ受容体」、「ＣＩ−ＭＰＲ／ＩＧＦ−ＩＩ受容体」、「ＩＧＦ−ＩＩ受容体」または「ＩＧＦ２受容体」としても知られている。これらの用語およびその略語は、本明細書では互換的に使用される。

同時免疫抑制療法：本明細書で使用される「同時免疫抑制療法」という用語は、治療前、プレコンディショニングとして、または治療法と並行して使用される任意の免疫抑制治療を含む。

希釈剤：本明細書で使用される場合、用語「希釈剤」は、再構成された製剤の調製に有用な医薬的に許容される（例えば、ヒトへの投与のための安全で非毒性の）希釈物質を指す。希釈剤の例には、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンガー溶液またはデキストロース溶液が含まれる。

投薬形態：本明細書で使用される「投薬形態」および「単位投薬形態」という用語は、治療される患者のための治療用タンパク質の物理的に別個のユニットを指す。各ユニットは、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性物質を含有する。しかしながら、組成物の総投与量は健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることが理解されるであろう。

酵素補充療法（ＥＲＴ）：本明細書中で使用される場合、用語「酵素補充療法（ＥＲＴ）」は、欠損酵素を提供することによって酵素欠損を矯正する任意の治療戦略を指す。いくつかの実施形態では、失われた酵素は、くも膜下腔内投与によって提供される。いくつかの実施形態において、失われた酵素は、血流に注入することによって提供される。一旦投与されると、酵素は細胞によって取り込まれ、酵素が酵素欠損のためにリソソームに蓄積した物質を除去するように作用するリソソームに輸送される。典型的には、リソソーム酵素補充療法が効果的であるためには、治療的酵素は、貯蔵欠陥が現れる標的組織中の適切な細胞のリソソームに送達される。

改善、増加または減少：本明細書で使用される用語「改善する」、「増加する」または「低減する」または文法的に等価なものは、本明細書に記載される治療の開始前に同じ個体における測定値などのベースライン測定または本明細書に記載される治療の不在下での対照個体（または複数の対照個体）における測定に関連する値を示す。「対照個体」は、治療されている個体とほぼ同じ年齢である、治療されている個体と同じ形のリソソーム蓄積症に罹患している個体である（治療された個体および対照個体における疾患の段階が同等であることを保証するため）。

個体、対象、患者：本明細書中で使用される場合、用語「対象」、「個体」または「患者」は、ヒトまたは非ヒト哺乳類対象をいう。治療される個体（「患者」または「対象」とも呼ばれる）は、疾患に罹患している個体（胎児、幼児、子供、青年または成人）である。

くも膜下腔内投与：本明細書中で使用される場合、「くも膜下腔内投与」または「くも膜下腔内注射」という用語は、脊柱管（脊髄を取り囲むくも膜下腔内空間）への注射を指す。腰椎穿刺を含む様々な技術を使用することができる。いくつかの実施形態では、本発明による「くも膜下腔内投与」または「くも膜下腔内送達」は、腰部領域または腰部を介するＩＴ投与または送達、すなわち腰部ＩＴ投与または送達を指す。本明細書で使用する用語「腰部」または「腰部領域」は、第３および第４の腰部（下背）椎骨の間の領域、より包括的には脊椎のＬ２−Ｓ１領域を指す。

リンカー：本明細書中で使用される場合、用語「リンカー」は、融合タンパク質において、天然タンパク質の特定の位置に現れるもの以外のアミノ酸配列を指し、一般に、２つのタンパク質部分の間にａ−螺旋のような構造を柔軟にまたは介在させるように設計されている。リンカーはスペーサーとも呼ばれる。

凍結乾燥剤：本明細書中で使用される場合、用語「凍結乾燥剤」は、凍結乾燥およびその後の保存時にタンパク質または他の物質の化学的および／または物理的不安定性を防止または低減する分子を指す。例示的な凍結乾燥剤には、ショ糖またはトレハロースなどの糖；グルタミン酸一ナトリウムまたはヒスチジンのようなアミノ酸；ベタイン等のメチルアミン；硫酸マグネシウムなどのリオトロピック塩：三価以上の糖アルコールなどのポリオール、例えば、グリセリン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；プルロニック；およびそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、凍結乾燥剤は、トレハロースまたはスクロースのような非還元糖である。

リソソーム酵素：本明細書中で使用される場合、「リソソーム酵素」という用語は、哺乳類のリソソーム中に蓄積された物質を減少させることができるか、または１以上のリソソーム蓄積症症状を救済または改善することができる任意の酵素を指す。本発明に適したリソソーム酵素は、野生型または改変されたリソソーム酵素の両方を含み、組換えおよび合成方法を用いて製造することができ、または天然源から精製することができる。例示的なリソソーム酵素を表１に列挙する。

リソソーム酵素欠損：本明細書中で使用される場合、「リソソーム酵素欠損」は、巨大分子（例えば、酵素基質）を、リソソーム中のペプチド、アミノ酸、単糖、核酸、および脂肪酸に分解するために必要とされる酵素の少なくとも１つの欠損に起因する遺伝的障害の群を指す。その結果、リソソーム酵素欠損症を患っている個体は、種々の組織（例えば、ＣＮＳ、肝臓、脾臓、腸、血管壁および他の器官）に物質を蓄積している。

リソソーム蓄積症：本明細書中で使用される場合、「リソソーム蓄積症」という用語は、天然の高分子を代謝するために必要な１つ以上のリソソーム酵素の欠乏に起因する任意の疾患を指す。これらの疾患は、典型的には、リソソーム中の分解されていない分子の蓄積をもたらし、貯蔵顆粒（貯蔵胞とも呼ばれる）の数が増加する。これらの疾患および様々な例は、以下により詳細に記載される。

ポリペプチド：本明細書で使用する「ポリペプチド」は、一般に、ペプチド結合によって互いに結合した少なくとも２つのアミノ酸のストリングである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは少なくとも３〜５個のアミノ酸を含み、その各々は少なくとも１つのペプチド結合によって他のアミノ酸に結合している。当業者であれば、ポリペプチドは時には、「非天然」のアミノ酸、または、それにもかかわらずポリペプチド鎖に任意に組み込まれ得る他の実体を含むことを理解するであろう。

置換酵素：本明細書中で使用される場合、用語「置換酵素」は、治療される疾患における欠損または欠損酵素の少なくとも一部を置換するように作用することができる任意の酵素をいう。いくつかの実施形態では、「置換酵素」という用語は、治療されるリソソーム蓄積症における欠損または欠損リソソーム酵素を少なくとも部分的に置換するように作用することができる任意の酵素を指す。いくつかの実施形態では、置換酵素は、哺乳類のリソソーム中の蓄積された物質を減少させることができ、または１つ以上のリソソーム蓄積症の症状を救済または改善することができる。本発明に適した置換酵素は、野生型または改変されたリソソーム酵素の両方を含み、組換えおよび合成方法を用いて産生され得るか、または天然源から精製され得る。置換酵素は、組換え、合成、遺伝子活性化または天然酵素であり得る。

可溶性：本明細書中で使用される場合、用語「可溶性」は、治療剤が均質な溶液を形成する能力を指す。いくつかの実施形態では、治療剤が投与され、それが作用の標的部位（例えば、脳の細胞および組織）に輸送される溶液中の治療剤の溶解性は、標的とされた作用部位に治療上有効な量の治療剤を送達させるのに十分である。いくつかの要因が治療薬の溶解性に影響を与える可能性がある。例えば、タンパク質の溶解性に影響を及ぼし得る関連因子には、イオン強度、アミノ酸配列、および他の共可溶化剤または塩（例えば、カルシウム塩）の存在が含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、カルシウム塩がこのような組成物から除外されるように処方される。いくつかの実施形態では、本発明による治療剤は、対応する医薬組成物に可溶性である。アイソトニック溶液は、非経口的に投与される薬物に対して一般に好ましいが、等張溶液の使用は、いくつかの治療剤、特にいくつかのタンパク質および／または酵素のための十分な溶解性を制限し得ることが理解される。わずかに高張性の溶液（例えば、ｐＨ７．０の５ｍＭリン酸ナトリウム中の最大１７５ｍＭの塩化ナトリウム）および糖含有溶液（例えば、ｐＨ７．０の５ｍＭリン酸ナトリウム中の最大２％のスクロース）は、忍容性が良好であることが猿で実証されている。例えば、最も一般的に認可されたＣＮＳボーラス製剤組成物は生理食塩水（１５０ｍＭ ＮａＣｌ／水）である。

安定性：本明細書で使用される「安定な」という用語は、治療薬（例えば、組換え酵素）が、その治療効果（例えば、その意図される生物学的活性および／または生理化学的完全性のすべてまたは大部分）を長期間にわたって維持する性能を指す。治療剤の安定性、およびそのような治療剤の安定性を維持するための医薬組成物の性能は、長期間（例えば、少なくとも１、３、６、１２、１８、２４、３０、３６ヶ月またはそれ以上）にわたり評価することができる。一般に、本明細書に記載の医薬組成物は、処方された１つ以上の治療剤（例えば、組換えタンパク質）の安定化、または代替的に分解の遅延または防止が可能であるように処方されている。製剤の文脈において、安定な製剤は、その中の治療剤が、保存時およびプロセス中（凍結／解凍、機械的混合および凍結乾燥など）にその物理的および／または化学的完全性および生物活性を本質的に保持する製剤である。タンパク質の安定性のためには、高分子量（ＨＭＷ）凝集体の形成、酵素活性の損失、ペプチド断片の生成および電荷プロファイルのシフトによって測定することができる。

対象：本明細書中で使用される場合、用語「対象」は、ヒトを含む任意の哺乳動物を意味する。本発明の特定の実施形態において、対象は、成人、青年、子供、または幼児である。本発明によって企図されるのは、医薬組成物の投与および／または子宮内での処置方法の実施である。

実質的相同性：本明細書では、「実質的相同性」という句は、アミノ酸または核酸配列間の比較を指すために使用される。当業者には理解されるように、２つの配列は、それらが対応する位置に相同残基を含む場合、一般的に「実質的に相同」であると考えられる。相同残基は同一残基であってもよい。代替的に、相同な残基は、非同一の残基であってもよく、構造的特徴および／または機能的特徴が適切に類似である。例えば、当業者には周知のように、特定のアミノ酸は、典型的には、「疎水性」または「親水性」アミノ酸として、および／または「極性」または「非極性」側鎖を有するとして分類される。同じ型の別のものへの１つのアミノ酸の置換は、しばしば「相同」置換とみなされ得る。

この技術分野でよく知られているように、アミノ酸配列または核酸配列は、ヌクレオチド配列のＢＬＡＳＴＮ、およびアミノ酸配列のＢＬＡＳＴＰ、ギャップドＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラムで利用可能なものを含む様々なアルゴリズムのいずれかを用いて比較することができる。例示的なそのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０，１９９０；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，”Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７；Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８；および Ｍｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。相同配列を同定することに加えて、上記のプログラムは、典型的には、相同性の程度の指標を提供する。いくつかの実施形態では、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上のそれらの対応する残基が、関連ストレッチの残基にわたって相同である場合、２つの配列は実質的に相同であると考えられる。いくつかの実施形態では、関連ストレッチは完全なシーケンスである。いくつかの実施形態では、関連ストレッチは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００またはそれ以上の残基を含む。

実質的同一性：本明細書では、「実質的同一性」という句は、アミノ酸または核酸配列間の比較を指すために使用される。当業者には理解されるように、２つの配列は、それらが対応する位置に同一の残基を含む場合、一般に「実質的に同一」であると考えられる。この技術分野でよく知られているように、アミノ酸配列または核酸配列は、ヌクレオチド配列のＢＬＡＳＴＮ、およびアミノ酸配列のＢＬＡＳＴＰ、ギャップドＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラムで利用可能なものを含む様々なアルゴリズムのいずれかを用いて比較することができる。例示的なそのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０，１９９０；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７；Ｂａｘｅｖａｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８；ａｎｄ Ｍｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。同一の配列を同定することに加えて、上記のプログラムは、典型的には、同一性の程度の指標を提供する。いくつかの実施形態では、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上のそれらの対応する残基が、関連ストレッチの残基にわたって同一である場合、２つの配列は実質的に同一であると考えられる。いくつかの実施形態では、関連ストレッチは完全なシーケンスである。いくつかの実施形態では、関連ストレッチは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００またはそれ以上の残基を含む。

合成ＣＳＦ：本明細書で使用する「合成ＣＳＦ」という用語は、ｐＨ、電解質組成、グルコース含量および脳脊髄液と一致する浸透圧を有する溶液を指す。合成ＣＳＦは、人工ＣＳＦとも呼ばれる。いくつかの実施形態では、合成ＣＳＦはエリオットＢ溶液である。

ＣＮＳ送達に適する：本明細書中で使用される場合、本発明の医薬組成物に関する「ＣＮＳ送達に適する」または「くも膜下腔内送達に適する」というフレーズは、一般に、そこに含まれる有効量の治療剤を標的送達部位（例えば、ＣＳＦまたは脳）に送達するために、そのような組成物の安定性、忍容性、および溶解性質、ならびにそのような組成物の性質を指す。

標的組織：本明細書中で使用される場合、用語「標的組織」は、治療されるリソソーム蓄積症または欠損したリソソーム酵素が通常発現される任意の組織により影響を受ける任意の組織を指す。いくつかの実施形態では、標的組織は、リソソーム蓄積症に罹患しているか、または罹患しやすい患者において、例えば組織の細胞リソソームに保存されている検出可能または異常に高い量の酵素基質がある組織を含む。いくつかの実施形態では、標的組織には、疾患関連病理、症状または特徴を示す組織が含まれる。いくつかの実施形態では、標的組織には、欠損リソソーム酵素が正常に高レベルで発現される組織が含まれる。本明細書中で使用される場合、標的組織は、脳標的組織、脊髄標的組織および／または末梢標的組織であり得る。例示的な標的組織を以下に詳細に記載する。

治療部分：本明細書中で使用される場合、用語「治療部分」は、分子の治療効果をもたらす分子の部分を指す。いくつかの実施形態において、治療的部分は、治療活性を有するポリペプチドである。

治療上有効な量：本明細書で使用される場合、用語「治療上有効な量」とは、任意の医療に適用される妥当な便益／リスク比で、治療対象に治療効果を与える治療用タンパク質（例えば、置換酵素）の量を指す。治療効果は、客観的（すなわち、何らかの試験またはマーカーによって測定可能）または主観的（すなわち、対象が効果を示しまたは感じる）であり得る。特に、「治療上有効な量」は、所望の疾患または状態を治療、改善または予防するため、または、この疾患に関連する症状を改善することにより、疾患の発症を予防または遅延させることにより、および／または疾患の症状の重篤度または頻度を軽減することにより、検出可能な治療もしくは予防効果を発揮するのに有効な治療用タンパク質または組成物の量を指す。治療上有効な量は、複数の単位用量を含み得る投薬レジメンで一般的に投与される。任意の特定の治療用タンパク質について、治療上有効な量（および／または有効な投与レジメン内の適切な単位投与量）は、例えば、投与経路に応じて、他の医薬品と組み合わせて変化し得る。また、特定の患者に対する特定の治療上有効な量（および／または単位用量）は、治療される障害および障害の重篤度；使用される特定の医薬品の活性；使用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別および食事；投与時間、投与経路、および／または使用される特定の融合タンパク質の排泄または代謝速度；治療の持続時間；医学分野でよく知られているような類似の因子を含む様々な因子に依存し得る。

忍容性：本明細書中で使用される場合、「忍容」および「忍容性」という用語は、本発明の医薬組成物が、そのような組成物が投与される対象において有害反応を誘発しないか、または代替的にそのような組成物が投与される対象において重篤な有害反応を誘発しないことを指す。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、そのような組成物が投与される対象によって十分に忍容される。

治療：本明細書中で使用される場合、用語「治療」（「治療する」または「治療すること」）は、部分的または完全に、軽減し、改善し、緩和し、阻害し、発症を遅延させ、重症度の低減しおよび／または特定の疾患、障害および／または状態（例えば、異染性白質ジストロフィー）の１つ以上の症状または特徴の発症率をさせる、治療用タンパク質（例えば、リソソーム酵素）のあらゆる投与を指す。そのような治療は、関連する疾患、障害および／または状態の兆候を示さない対象、および／または疾患、障害および／または状態の初期兆候のみを示す対象のものであり得る。代替的または追加的に、そのような治療は、関連する疾患、障害および／または状態の１つまたは複数の確立された徴候を示す対象であり得る。
（発明を実施するための形態）

本発明はとりわけ、中枢神経系（ＣＮＳ）への治療剤の効果的な直接送達のための改善された方法および組成物を提供する。本発明は、リソソーム蓄積症（例えば、異染性白質ジストロフィー病）のための置換酵素（例えば、ＡＳＡタンパク質）を、対象に実質的な有害作用を誘発することなく高濃度で、治療を必要とする対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に直接導入することができるという予期せぬ発見に基づいている。より驚くべきことに、本発明者らは、合成ＣＳＦを使用することなく、置換酵素が単純な生理食塩水または緩衝液ベースの製剤で送達され得ることを見出した。さらに意外にも、本発明によるくも膜下腔内送達は、対象において重篤な免疫応答のような実質的な有害作用をもたらさない。したがって、いくつかの実施形態では、本発明によるくも膜下腔内送達は、同時免疫抑制療法の不在下（例えば、前処置または前処置による免疫寛容の誘導なし）で使用することができる。

いくつかの実施形態では、本発明によるくも膜下腔内送達は、様々な脳組織にわたる効率的な拡散を可能にし、表面、浅いおよび／または深部脳領域の様々な標的脳組織における置換酵素の効果的な送達をもたらす。いくつかの実施形態では、本発明によるくも膜下腔内送達は、末梢循環に入る十分な量の置換酵素をもたらした。結果として、場合によっては、本発明によるくも膜下腔内送達は、肝臓、心臓、脾臓および腎臓などの末梢組織における置換酵素の送達をもたらした。この発見は予想外であり、通常はくも膜下腔内投与および静脈内投与の両方を必要とするであろうＣＮＳおよび末梢成分の両方を有するリソソーム蓄積症の治療に特に有用であり得る。本発明によるくも膜下腔内送達は、末梢症状を治療する際の治療効果を損なうことなく、静脈内注射の投薬量および／または頻度を低減させることができると考えられる。

本発明は、様々な脳標的組織への置換酵素の効率的かつ簡便な送達を可能にし、ＣＮＳ適応症を有するリソソーム蓄積症の有効な治療をもたらす様々な予想外の有益な特徴を提供する。

本発明の様々な態様は、以下のセクションで詳細に説明される。セクションの使用は、本発明を限定することを意味しない。各セクションは、本発明の任意の態様に適用することができる。本出願において、「または」の使用は、他に記載がない限り、「および／または」を意味する。

組換えアリールスルファターゼＡ酵素
いくつかの実施形態では、本発明により提供される本発明の方法および組成物は、異染性白質ジストロフィー病の治療のためにＣＮＳに組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を送達するために使用される。適切なＡＳＡ酵素は、天然のアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素活性を置換するか、またはＡＳＡ欠損に関連する１つまたは複数の表現型または症状を救済することができる任意の分子または分子の一部であり得る。いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、成熟ヒトＡＳＡ酵素と実質的に類似または同一のＮ末端およびＣ末端ならびにアミノ酸配列を有するポリペプチドである。

典型的には、ヒトＡＳＡは、成熟形態にプロセシングされる前駆体分子として産生される。このプロセスは、一般に、１８アミノ酸シグナルペプチドを除去することによって起こる。典型的には、前駆体形態は、５０７個のアミノ酸を含む全長前駆体または全長ＡＳＡエンザメ（ｅｎｚｕｍｅ）とも呼ばれる。Ｎ末端１８アミノ酸は切断され、４８９アミノ酸の長さの成熟型が得られる。従って、Ｎ末端１８アミノ酸は、一般に、ＡＳＡ酵素活性のために必要とされないことが企図される。典型的な野生型または天然に存在するヒトＡＳＡ酵素の成熟型（配列番号１）および完全長前駆体（配列番号２）のアミノ酸配列を表１に示す。

したがって、いくつかの実施形態では、本発明の組換えアリールスルファターゼＡは、成熟ヒトＡＳＡタンパク質（配列番号１）である。いくつかの実施形態において、適切な組換えアリールスルファターゼＡは、成熟ヒトＡＳＡタンパク質のホモログまたはアナログであり得る。例えば、成熟ヒトＡＳＡタンパク質のホモログまたは類似体は、実質的なＡＳＡタンパク質活性を保持し、一方、野生型または天然に存在するＡＳＡタンパク質（例えば、配列番号１）と比較して、１つ以上のアミノ酸置換、欠失および／または挿入を含む改変された成熟ヒトＡＳＡタンパク質であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、本発明に適した組換えアリールスルファターゼＡは、成熟ヒトＡＳＡタンパク質（配列番号１）と実質的に相同である。いくつかの実施形態では、本発明に適した組換えアリールスルファターゼＡは、配列番号１に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上相同であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本発明に適した組換えアリールスルファターゼＡは、成熟ヒトＡＳＡタンパク質（配列番号１）と実質的に同一である。いくつかの実施形態では、本発明に適した組換えアリールスルファターゼＡは、配列番号１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、配列番号１のアミノ酸レベルで少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のアミノ酸レベルで少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、配列番号１のアミノ酸レベルで少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、配列番号１のアミノ酸レベルで少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、配列番号１のものと数個のミスマッチを有するアミノ酸配列、例えば、配列番号１のものと、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下のミスマッチを有する。

いくつかの実施形態では、本発明に適した組換えアリールスルファターゼＡは、成熟ヒトＡＳＡタンパク質の断片または一部分を含む。いくつかの実施形態では、断片または部分は触媒的に活性である。

追加的または代替的に、本発明に適した置換酵素は全長ＡＳＡタンパク質である。いくつかの実施形態では、適切な置換酵素は、全長ヒトＡＳＡタンパク質の相同体または類似体であり得る。例えば、全長ヒトＡＳＡタンパク質の相同体または類似体は、野生型または天然に存在する全長ＡＳＡタンパク質（配列番号２）と比較して、実質的なＡＳＡタンパク質活性を保持しながら、１つ以上のアミノ酸置換、欠失および／または挿入を含む修飾全長ヒトＡＳＡタンパク質であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、全長ヒトＡＳＡタンパク質（配列番号２）と実質的に相同である。いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、配列番号２に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上相同であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、配列番号２と実質的に同一である。いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、配列番号２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、完全長ヒトＡＳＡタンパク質の断片または一部分を含む。本明細書中で使用される場合、全長ＡＳＡタンパク質は、典型的には、シグナルペプチド配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、標的部分（例えば、リソソーム標的配列）および／または膜貫通ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的配列および／または膜貫通ペプチドは、組換えアリールスルファターゼＡの内因性部分である（例えば、融合タンパク質を介し、化学結合を介する）。いくつかの実施形態では、標的配列は、マンノース−６−リン酸部分を含む。いくつかの実施形態において、標的配列は、ＩＧＦ−Ｉ部分を含む。いくつかの実施形態において、標的配列は、ＩＧＦ−ＩＩ部分を含む。

いくつかの実施形態では、本発明に適した組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、野生型または天然に存在する配列を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明に適した組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、野生型または天然に存在する配列と実質的な相同性または同一性を有する修飾配列（例えば、野生型または天然に存在する配列と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％の配列同一性を有する）を有し得る。

本発明に適した置換酵素（例えば、組換えアリールスルファターゼＡ酵素）は、例えば、組換え酵素をコードする核酸を発現するように操作された宿主細胞系を利用することによって組換えにより産生することができる。代替的または追加的に、置換酵素は、化学合成によって部分的にまたは完全に調製され得る。

置換酵素が組換え生産される場合、任意の発現系を使用することができる。ほんの数例を挙げると、公知の発現系には、例えば、卵、バキュロウイルス、昆虫、植物、酵母、または哺乳動物細胞が含まれる。

いくつかの実施形態において、本発明に適する酵素は、哺乳動物細胞において産生される。本発明に従って使用することができる哺乳類細胞の非限定的な例には、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳＯ／１、ＥＣＡＣＣ Ｎｏ：８５１１０５０３）；ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６、ＣｒｕＣｅｌｌ、Ｌｅｉｄｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）；ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚性腎臓系（懸濁培養における増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９，１９７７）；ヒト線維肉腫細胞株（例えば、ＨＴ１０８０）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞＋／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６，１９８０）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１ ５８７）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１，１９８０）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６，ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１ ５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２，ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２，ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，３８３：４４−６８，１９８２）；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；およびおよびヒト肝癌細胞株（Ｈｅｐ Ｇ２）が挙げられる。

いくつかの実施形態において、本発明による本発明の方法は、ヒト細胞から産生された置換酵素を送達するために使用される。いくつかの実施形態において、本発明による本発明の方法は、ＣＨＯ細胞から産生された置換酵素を送達するために使用される。

いくつかの実施形態では、本発明の方法を用いて送達された置換酵素は、細胞摂取および／またはリソソーム標的化を促進するために脳細胞の表面上の受容体に結合する部分を含む。例えば、そのような受容体は、マンノース−６−リン酸（Ｍ６Ｐ）残基に結合するカチオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）であり得る。さらに、ＣＩ−ＭＰＲは、ＩＧＦ−ＩＩを含む他のタンパク質にも結合する。いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、タンパク質の表面上にＭ６Ｐ残基を含む。いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、ＣＩ−ＭＰＲに対してより高い結合親和性を有するビス−リン酸化オリゴ糖を含み得る。いくつかの実施形態では、適切な酵素は、酵素あたり約平均して少なくとも約２０％のビス−リン酸化オリゴ糖を含む。他の実施形態では、適切な酵素は、酵素あたり約１０％、１５％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％のビスリン酸化オリゴ糖を含み得る。このようなビス−リン酸化オリゴ糖は酵素上に天然に存在することができるが、そのようなオリゴ糖を有するように酵素を修飾することができることに留意すべきである。例えば、適切な置換酵素は、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃからリソソーム酵素上のα−１，２−結合マンノースの６’位へのＮ−アセチルグルコサミン−Ｌ−リン酸の転移を触媒することができる特定の酵素によって修飾することができる。このような酵素を産生および使用するための方法および組成物は、例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれる、Ｃａｎｆｉｅｌｄらの米国特許第６，５３７，７８５号、および米国特許第６，５３４，３００号に記載されている。

いくつかの実施形態では、本発明で使用するための置換酵素は、脳細胞の表面上の受容体に結合することができるリソソーム標的化部分にコンジュゲートまたは融合することができる。適切なリソソーム標的化部分は、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＲＡＰ、ｐ９７、およびその変異体、その相同体またはフラグメントであり得る（野生型成熟ヒトＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＲＡＰ、ｐ９７ペプチド配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一の配列を有するこれらのペプチドを含む）。

いくつかの実施形態では、本発明に適した置換酵素は、ＢＢＢを介してＣＮＳへのそのような薬剤の送達または輸送を増強するように改変されていない。

いくつかの実施形態では、治療用タンパク質は、標的部分（例えば、リソソーム標的配列）および／または膜貫通ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的配列および／または膜貫通ペプチドは、組換えアリールスルファターゼＡの内因性部分である（例えば、融合タンパク質を介し、化学結合を介する）。いくつかの実施形態では、標的配列は、マンノース−６−リン酸部分を含む。いくつかの実施形態において、標的配列は、ＩＧＦ−Ｉ部分を含む。いくつかの実施形態において、標的配列は、ＩＧＦ−ＩＩ部分を含む。

製剤
対象のＣＮＳに治療剤を送達するために伝統的に使用されている水性の薬学的溶液および組成物（すなわち製剤）には、無緩衝生理食塩水および人工ＣＳＦであるエリオットＢ溶液が含まれる。エリオットＢ溶液と比較したＣＳＦの組成物を示す比較を以下の表２に示す。表２に示すように、エリオットＢ溶液の濃度はＣＳＦの濃度とほぼ同じである。しかし、エリオットＢ溶液は、非常に低い緩衝液濃度を含み、したがって、治療薬（例えば、タンパク質）を安定化させるのに必要な適切な緩衝能力を、特に長期間（例えば、貯蔵条件下で）提供することができない。さらに、エリオットのＢ溶液は、いくつかの治療剤、特にタンパク質または酵素を送達することが意図された製剤と適合しない可能性がある特定の塩を含む。例えば、エリオットＢ溶液中に存在するカルシウム塩は、タンパク質沈殿を仲介し、それによって製剤の安定性を低下させ得る。

本発明は、それらが処方された１つ以上の治療剤の安定化、またはその代わりに分解を遅延または代替的に防止することができるように処方された治療剤のための、水性、凍結乾燥前、凍結乾燥または再構成された形態の製剤を提供する（例えば、組換えタンパク質）。いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、治療剤のための凍結乾燥製剤を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、治療剤のための水性製剤を提供する。いくつかの実施形態では、製剤は安定な製剤である。

安定した製剤
本明細書で使用される「安定な」という用語は、治療薬（例えば、組換え酵素）が、その治療効果（例えば、その意図される生物学的活性および／または生理化学的完全性のすべてまたは大部分）を長期間にわたって維持する性能を指す。治療剤の安定性、およびそのような治療剤の安定性を維持するための医薬組成物の能力は、長期間にわたって（例えば、好ましくは少なくとも１，３，６、１２、１８、２４、３０、３６ヶ月以上）評価され得る。製剤の文脈において、安定な製剤は、その中の治療剤が、保存時およびプロセス中（凍結／解凍、機械的混合および凍結乾燥など）にその物理的および／または化学的完全性および生物活性を本質的に保持する製剤である。タンパク質の安定性のためには、高分子量（ＨＭＷ）凝集体の形成、酵素活性の損失、ペプチド断片の生成および電荷プロファイルのシフトによって測定することができる。

治療剤の安定性は、薬剤がその意図された治療機能を果たすために必要とされる治療剤濃度の特定の範囲の維持に関して特に重要である。治療剤の安定性は、長期間にわたる治療剤の生物学的活性または生理化学的完全性と比較してさらに評価され得る。例えば、所定の時点での安定性は、より早い時点（例えば、製剤の０日目）での安定性または非処方の治療剤と比較され、この比較の結果はパーセンテージとして表される。好ましくは、本発明の医薬組成物は、治療薬の生物学的活性または生理化学的完全性の少なくとも１００％、少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９７％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、または少なくとも５０％を長時間にわたって維持する（例えば、少なくとも約６〜１２ヶ月にわたって、室温で、または加速された貯蔵条件下で測定される）。

治療剤は、好ましくは、本発明の医薬組成物に可溶性である。本発明の治療剤に関する用語「可溶性」は、そのような治療剤が均質な溶液を形成する性能を指す。好ましくは、それが投与され、それが作用の標的部位（例えば、脳の細胞および組織）に輸送される溶液中の治療剤の溶解性は、治療上有効な量の治療薬を標的作用部位に送達させるのに十分である。いくつかの要因が治療薬の溶解性に影響を与える可能性がある。例えば、タンパク質の溶解性に影響を及ぼし得る関連因子には、イオン強度、アミノ酸配列、および他の共可溶化剤または塩（例えばカルシウム塩）の存在が含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、カルシウム塩がこのような組成物から除外されるように処方される。

水性、凍結乾燥前、凍結乾燥または再構成された形態のいずれかでの適切な製剤は、種々の濃度の目的の治療剤（例えば、組換えヒトアリールスルファターゼＡ）を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜８０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜４０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、または約５ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌ）の範囲の濃度で目的のタンパク質または治療剤を含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、少なくとも約１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇ／ｍｌの濃度で治療剤を含有することができる。いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも約２５ｍｇ／ｍｌの濃度で治療剤を含有する。いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも約３０ｍｇ／ｍｌの濃度で治療剤を含有する。

本発明の製剤は、水溶液または再構成された凍結乾燥溶液のいずれかとしての忍容性によって特徴付けられる。本明細書中で使用される場合、「忍容」および「忍容性」という用語は、本発明の医薬組成物が、そのような組成物が投与される対象において有害反応を誘発しないか、または代替的にそのような組成物が投与される対象において重篤な有害反応を誘発しないことを指す。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、そのような組成物が投与される対象によって十分に忍容される。

多くの治療剤、特に本発明のタンパク質および酵素は、本発明の医薬組成物中でそれらの溶解性および安定性を維持するために制御されたｐＨおよび特定の賦形剤を必要とする。以下の表３は、本発明のタンパク質治療剤の溶解性および安定性を維持すると考えられるタンパク質製剤の典型的な態様を同定する。

緩衝液
製剤のｐＨは、水性製剤または前凍結乾燥製剤の治療剤（例えば、酵素またはタンパク質）の溶解性を変更することができる追加の因子である。したがって、本発明の製剤は、好ましくは、１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、組成物の至適ｐＨを約４．０〜８．０（例えば、約４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．２、６．４、６．５、６．６、６．８、７．０、７．５、または８．０）の間に維持するのに十分な量の緩衝液を含む。いくつかの実施形態において、製剤のｐＨは、約５．０〜７．５、約５．５〜７．０、約６．０〜７．０、約５．５〜６．０、約５．５〜６．５、約５．０〜６．０、約５．０〜６．５、約６．０〜７．５の間である。適切な緩衝液は、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、コハク酸塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（「トリス」）および他の有機酸を含む。いくつかの実施形態では、緩衝液はリン酸塩である。

本発明の医薬組成物の緩衝液濃度およびｐＨ範囲は、製剤の忍容性を制御または調整する因子である。いくつかの実施形態において、緩衝液は、約１ｍＭ〜約１５０ｍＭ、または約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約１５ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約２５ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、適切な緩衝液は、約１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、１００ｍＭ、１２５ｍＭ、または１５０ｍＭの濃度で存在する。

いくつかの実施形態において、緩衝液は、上限を超えない濃度、例えば約１００ｍＭ、９０ｍＭ、８０ｍＭ、６０ｍＭ、５０ｍＭ、４０ｍＭ、３０ｍＭ、２０ｍＭ、１０ｍＭ、または５ｍＭで存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液は約５０ｍＭ以下の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液は約２５ｍＭ以下の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液は約２０ｍＭ以下の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液は約１０ｍＭ以下の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液は約５ｍＭ以下の濃度で存在する。

張度
いくつかの実施形態では、水性、プレ凍結乾燥、凍結乾燥または再構成のいずれかの形態の製剤は、製剤を等張に保つための等張剤を含有する。典型的には、「等張性」とは、目的の製剤が、ヒトの血液と本質的に同じ浸透圧を有することを意味する。等張性製剤は、一般に、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有するであろう。等張性は、例えば、蒸気圧または凝固点型浸透圧計を用いて測定することができる。例示的な等張剤には、グリシン、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウムおよびアルギニンが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、適切な等張剤は、約０．０１〜５重量％（例えば、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．３、０．４、０．５、０．７５、１．０、１．２５、１．５、２．０、２．５、３．０、４．０、または５．０％）の濃度で、水性および／またはプレ凍結乾燥剤の形態で存在し得る。いくつかの実施形態では、凍結乾燥のための製剤は、凍結前製剤または再構成製剤を等張性に保つための等張剤を含有する。

一般に等張溶液は非経口投与薬物に好ましいが、等張溶液の使用は、いくつかの治療薬、特にいくつかのタンパク質および／または酵素の溶解を変化させる可能性がある。わずかに高張性の溶液（例えば、ｐＨ７．０の５ｍＭリン酸ナトリウム中の１７５ｍＭまでの塩化ナトリウム）および糖含有溶液（例えば、ｐＨ７．０の５ｍＭリン酸ナトリウム中の２％までのスクロース）が忍容性が高いことが実証されている。最も一般的に認可されたＣＮＳボーラス製剤組成物は、生理食塩水（約１５０ｍＭ ＮａＣｌ／水）である。

安定剤
いくつかの実施形態では、製剤は、タンパク質を保護するために安定化剤または凍結乾燥剤を含み得る。典型的には、適切な安定剤は、糖、非還元糖および／またはアミノ酸である。例示的な糖としては、デキストラン、ラクトース、マンニトール、マンノース、ソルビトール、ラフィノース、スクロースおよびトレハロースが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアミノ酸としては、アルギニン、グリシンおよびメチオニンが挙げられるが、これらに限定されない。さらなる安定剤としては、塩化ナトリウム、ヒドロキシエチルデンプンおよびポリビニルピロリドンが挙げられ得る。凍結乾燥製剤中の安定化剤の量は、一般に製剤が等張性であるような量である。しかしながら、高張性再構成製剤もまた適切であり得る。さらに、安定剤の量は、許容できないほどの量の治療剤の分解／凝集が生じるほど低くしてはならない。製剤中の例示的な安定剤濃度は、約１ｍＭ〜約４００ｍＭ（例えば、約３０ｍＭ〜約３００ｍＭ、および約５０ｍＭ〜約１００ｍＭ）、あるいは代替的に０．１重量％〜１５重量％（例えば、１重量％〜１０重量％、５重量％〜１５重量％、５重量％〜１０重量％）の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、安定化剤と治療剤との質量比は約１：１である。他の実施形態では、安定剤と治療剤との質量比は、約０．１：１、０．２：１、０．２５：１、０．４：１、０．５：１、１：１、２：１、２．６：１、３：１、４：１、５：１、１０；１、または２０：１である。凍結乾燥に適したいくつかの実施形態では、安定化剤はまた、凍結乾燥剤でもある。

いくつかの実施形態では、本発明に適した液体製剤は非晶質物質を含む。いくつかの実施形態では、本発明に適した液体製剤は、実質量の非晶質物質（例えば、ショ糖ベースの製剤）を含有する。いくつかの実施形態では、本発明に適した液体配合物は、部分的に結晶性／部分的に非晶質の材料を含む。

充填剤
いくつかの実施形態において、凍結乾燥のための適切な製剤は、１つ以上の充填剤をさらに含み得る。「充填剤」は、凍結乾燥混合物に質量を加え、凍結乾燥ケーキの物理的構造に寄与する化合物である。例えば、充填剤は、凍結乾燥ケーキ（例えば、本質的に均一な凍結乾燥ケーキ）の外観を改善することができる。適切な充填剤には、塩化ナトリウム、ラクトース、マンニトール、グリシン、スクロース、トレハロース、ヒドロキシエチルデンプンが含まれるが、これらに限定されない。充填剤の例示的な濃度は、約１％〜約１０％（例えば、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％、５．５％、６．０％、６．５％、７．０％、７．５％、８．０％、８．５％、９．０％、９．５％、および１０．０％）である。

界面活性剤
いくつかの実施形態では、製剤に界面活性剤を添加することが望ましい。例示的な界面活性剤には、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）などの非イオン性界面活性剤；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；トリトン；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−またはステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−またはセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノールアミドプロピル−、ミリスアミドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアアミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスチルアミノプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアアミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−、またはメチル−オレイル−タウリン酸ジナトリウム；およびＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびエチレンとプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）が挙げられる。典型的には、添加される界面活性剤の量は、タンパク質の凝集を減少させ、微粒子または発泡体の形成を最小にするような量である。例えば、界面活性剤は、約０．００１〜０．５％（例えば、約０．００５〜０．０５％、または０．００５〜０．０１％）の濃度で製剤中に存在してもよい。特に、界面活性剤は、約０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、または０．５％などの濃度で製剤中に存在してもよい。代替的または追加的に、界面活性剤は、凍結乾燥製剤、凍結乾燥前製剤および／または再構成製剤に添加することができる。

他の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されているものは、製剤の所望の特性に悪影響を与えない限り、製剤（および／または凍結乾燥製剤および／または再構成製剤）に含まれてもよい。許容される担体、賦形剤または安定剤は、使用される用量および濃度でレシピエントに無毒であり、限定されないが、追加の緩衝剤；防腐剤；共溶媒；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ポリエステルのような生分解性ポリマー；および／またはナトリウムのような塩形成対イオンを含む。

本発明による水性、前凍結乾燥、凍結乾燥または再構成形態のいずれかの製剤は、製品品質分析、再構成時間（凍結乾燥された場合）、再構成品質（凍結乾燥された場合）、高分子量、水分、およびガラス転移温度に基づいて評価することができる。典型的には、タンパク質の品質および生成物の分析には、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、陽イオン交換−ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）、Ｘ線回折（ＸＲＤ）変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、マルチアングル光散乱（ＭＡＬＳ）、蛍光、紫外線吸収、比濁分析、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、およびそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明による製品の評価は、外観（液体またはケーキの外観）を評価する工程を含むことができる。

一般に、製剤（凍結乾燥または水性）は、室温で長時間保存することができる。貯蔵温度は、通常０℃〜４５℃（例えば、４℃、２０℃、２５℃、４５℃など）の範囲であり得る。製剤は、数ヶ月から数年間保存することができる。保存期間は、一般的に２４ヶ月、１２ヶ月、６ヶ月、４．５ヶ月、３ヶ月、２ヶ月または１ヶ月であろう。製剤は、投与のために使用される容器に直接保存することができ、移送工程を割愛することができる。

製剤は、凍結乾燥容器（凍結乾燥されている場合）に直接保存することができ、凍結乾燥容器は再構成容器としても機能し、移送工程を排除することができる。代替的に、凍結乾燥された製品製剤は、貯蔵のためにより小さな増分で測定されてもよい。貯蔵は、日光、ＵＶ放射、他の形態の電磁放射線、過度の熱または冷却、急速な熱ショック、および機械的衝撃にさらされることを含むがこれらに限定されないタンパク質の分解をもたらす状況を一般的に避けるべきである。

凍結乾燥
本発明による本発明の方法は、任意の物質、特に治療剤を凍結乾燥するために利用することができる。典型的には、凍結乾燥前製剤は、凍結乾燥および保存中の目的の化合物の分解（例えば、タンパク質凝集、脱アミド化および／または酸化）を防止するために、賦形剤または安定剤、緩衝剤、充填剤および界面活性剤などの他の成分の適切な選択をさらに含む。凍結乾燥のための製剤は、凍結乾燥剤または安定化剤、緩衝剤、充填剤、等張剤および界面活性剤を含む１つまたは複数の追加の成分を含むことができる。

目的の物質および任意のさらなる成分が一緒に混合された後、製剤は凍結乾燥される。凍結乾燥は、一般的に、凍結、一次乾燥および二次乾燥という３つの主要段階を含む。凍結は、水を氷またはいくつかの非晶質製剤成分を結晶形態に変換するために必要である。一次乾燥は、低圧および低温で直接昇華させて凍結した製品から氷を除去する処理工程である。二次乾燥は、蒸発した表面への残留水の拡散を利用して、結合した水が生成物マトリックスから除去されるときの処理工程である。二次乾燥中の製品温度は、一次乾燥中よりも通常高い。Ｔａｎｇ Ｘ．ｅｔ ａｌ．（２００４）”Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｆｏｒ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ： Ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｄｖｉｃｅ，”Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２１：１９１−２００；Ｎａｉｌ Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００２）”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ，”ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．Ｎａｉｌ Ｓ．Ｌ．ｅｄｉｔｏｒ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ｐｐ ２８１−３５３；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０００）”Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，２０３：１−６０；Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｎ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）”Ｔｈｅ ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ａ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗ．”Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，３８：４８−５９を参照されたい。一般に、本発明に関連して任意の凍結乾燥プロセスを使用することができる。

いくつかの実施形態では、製品の最初の凍結中にアニーリング工程を導入することができる。アニーリング工程は、全体のサイクル時間を短縮することができる。いずれの理論にも縛られることなく、アニーリング工程は、過冷却の間に形成された小さな結晶の再結晶化による賦形剤の結晶化およびより大きな氷結晶の形成の促進に役立つことができ、その結果、再構成が改善されると考えられている。典型的には、アニーリング工程は、凍結中の温度における間隔または振動を含む。例えば、凍結温度は−４０℃であり、アニーリング工程は例えば−１０℃に温度を上昇させ、この温度を一定時間維持する。アニーリング工程時間は、０．５時間〜８時間（例えば、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３、４、６、および８時間）の範囲であり得る。アニーリング温度は、凍結温度と０℃との間であり得る。

凍結乾燥は、チューブ、バッグ、ボトル、トレイ、バイアル（例えば、ガラスバイアル）、注射器または任意の他の適切な容器などの容器内で行うことができる。容器は使い捨てであってもよい。凍結乾燥は、大規模または小規模で実施することもできる。場合によっては、移送工程を回避するために、タンパク質の再構成が行われるべき容器中のタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましい場合がある。この場合の容器は、例えば、３、４、５、１０、２０、５０または１００ｃｃバイアルであってもよい。

Ｈｕｌｌパイロットスケール乾燥機（ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，ＵＳＡ）、Ｇｅｎｅｓｉｓ（ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）実験室凍結乾燥機、または所定の凍結乾燥プロセスパラメータを制御することができる任意の凍結乾燥機など、多くの異なる凍結乾燥機がこの目的のために利用可能である。凍結乾燥は、製剤を凍結し、続いて凍結した内容物から氷を一次乾燥に適した温度で昇華させることにより達成される。最初の凍結は、製剤を、典型的には約４時間以下（例えば、約３時間以下、約２．５時間以下、約２時間以下）で、約−２０℃未満の温度（例えば、−５０℃、−４５℃、−４０℃、−３５℃、−３０℃、−２５℃など）にする。この条件下では、生成物の温度は、典型的には、共沸点または製剤の崩壊温度よりも低い。典型的には、一次乾燥のための棚温度は、典型的には約２０〜２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適切な圧力で、約−３０〜２５℃（製品が一次乾燥中に融点以下に留まることを条件とする）の範囲にある。サンプル（例えば、ガラスバイアル）を保持する容器の処方、サイズおよびタイプおよび液体の容量は、主に乾燥に必要な時間を指示し、これは数時間から数日の範囲であり得る。第２の乾燥段階は、主に容器の種類およびサイズおよび使用される治療用タンパク質の種類に応じて約０〜６０℃で実施される。再び、液体の量は主に乾燥に必要な時間を指示し、数時間から数日の範囲であり得る。

一般的な提案として、凍結乾燥は、その水分含量が約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、および約０．５％未満である凍結乾燥製剤をもたらす。

再構成
本発明の医薬組成物は、一般に、対象への投与の際に水性形態であるが、いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は凍結乾燥される。そのような組成物は、対象に投与する前に１種以上の希釈剤をそれに添加することによって再構成しなければならない。所望の段階で、典型的には、患者への投与前の適切な時間に、凍結乾燥製剤は、再構成製剤中のタンパク質濃度が望ましいような希釈剤で再構成され得る。

様々な希釈剤を本発明に従って使用することができる。いくつかの実施形態では、再構成に適した希釈剤は水である。希釈剤として使用される水は、逆浸透、蒸留、脱イオン、ろ過（例えば、活性炭、精密ろ過、ナノろ過）およびこれらの処理方法の組合せを含む様々な方法で処理することができる。一般に、水は、限定されないが、滅菌水または注射用静菌水を含む注射に適しているべきである。

追加の例示的希釈剤には、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、Ｅｌｌｉｏｔ溶液、リンガー溶液またはデキストロース溶液が含まれる。適当な希釈剤は場合により防腐剤を含有することができる。例示的な防腐剤には、芳香族アルコール、例えばベンジルアルコールまたはフェノールアルコールが含まれる。使用される防腐剤の量は、タンパク質との適合性および保存剤有効性試験のための異なる防腐剤濃度を評価することによって決定される。例えば、防腐剤が芳香族アルコール（ベンジルアルコールなど）である場合、それは約０．１〜２．０％、約０．５〜１．５％、または約１．０〜１．２％の量で存在することができる。

本発明に適した希釈剤は、ｐＨ緩衝剤（例えば、トリス、ヒスチジン）塩（例えば、塩化ナトリウム）および上記のもの（例えば、安定剤、等張剤）を含む他の添加物（例えば、スクロース）を含む。

本発明によれば、凍結乾燥された物質（例えば、組換えヒトアリールスルファターゼＡのようなタンパク質）は、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／）およびそれらの間の任意の範囲の濃度に再構成することができる。いくつかの実施形態では、凍結乾燥された物質（例えば、タンパク質）は、約１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ約２５ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ約５０ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ約５０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ）の範囲の濃度に再構成され得る。いくつかの実施形態では、再構成された製剤中のタンパク質の濃度は、凍結乾燥前の製剤の濃度よりも高くてもよい。いくつかの実施形態において、凍結乾燥物質は、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、例えば３０ｍｇ／ｍＬの濃度に再構成される。再構成された製剤中の高タンパク質濃度は、再構成された製剤の皮下または筋肉内送達が意図される場合に特に有用であると考えられる。いくつかの実施形態では、再構成製剤中のタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤の約２〜５０倍（例えば、約２〜２０倍、約２〜１０倍または約２〜５倍）であり得る。いくつかの実施形態では、再構成製剤中のタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤の少なくとも約２倍（例えば、少なくとも約３、４、５、１０、２０、４０倍）であり得る。

本発明による再構成は、任意の容器内で行うことができる。本発明に適した例示的な容器には、チューブ、バイアル、シリンジ（例えば、単一チャンバまたは二重チャンバ）、バッグ、ボトル、およびトレイなどが含まれるが、これらに限定されない。適切な容器は、ガラス、プラスチック、金属などの任意の材料で作ることができる。容器は、使い捨てまたは再使用可能であってもよい。再構成は、大規模または小規模で実行されてもよい。

場合によっては、移送工程を回避するために、タンパク質の再構成が行われるべき容器中のタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましい場合がある。この場合の容器は、例えば、３、４、５、１０、２０、５０または１００ｃｃバイアルであってもよい。いくつかの実施形態において、凍結乾燥および再構成のための適切な容器は、二重チャンバシリンジ（例えば、Ｌｙｏ−Ｊｅｃｔ、（登録商標）（Ｖｅｔｔｅｒ）シリンジ）である。例えば、二重チャンバシリンジは、凍結乾燥された物質および希釈剤の両方を、別個のチャンバ内に含み、ストッパー（実施例５参照）によって分離されてもよい。再構成するために、プランジャーを希釈剤側のストッパーに取り付けることができ、希釈剤を製品チャンバに移動させるためにプレスすることができ、希釈剤が凍結乾燥物質と接触し、本明細書に記載のように再構成が行われる（実施例５参照）。

本発明の医薬組成物、製剤および関連する方法は、対象のＣＮＳに種々の治療剤（例えば、くも膜下腔内、脳室内または腸内）を送達するため、および関連する疾患の治療に有用である。本発明の医薬組成物は、リソソーム蓄積障害に罹患している対象にタンパク質および酵素（例えば、酵素補充療法）を送達するのに特に有用である。リソソーム蓄積症は、リソソーム機能の欠損に起因する比較的まれな遺伝性代謝障害の群を表す。リソソーム病は、リソソーム内に消化されていない巨大分子が蓄積することを特徴とし、このようなリソソームのサイズおよび数が増加し、最終的には細胞機能不全および臨床異常が増加する。

ＣＮＳ送達
本明細書に記載の種々の安定な製剤は、一般に、治療薬のＣＮＳ送達に適していると考えられる。本発明による安定な製剤は、脳実質内、脳内、脳室内大脳（ＩＣＶ）、くも膜下腔内（例えば、ＩＴ−腰椎、ＩＴ−大槽（ｃｉｓｔｅｒｎａ ｍａｇｎａ））の投与を含むがこれらに限定されない様々な技術および経路によるＣＮＳ送達に使用することができ、ＣＮＳおよび／またはＣＳＦに直接または間接的に注射するための任意の他の技術および経路を含む。用語「大槽」は、頭蓋骨と脊柱の頂部との間の開口部を介して小脳の周囲および下の空間を指す。典型的には、大槽を介する注入は、「大槽の送達」とも呼ばれる。

くも膜下腔内送達
いくつかの実施形態において、置換酵素は、本明細書に記載の製剤中のＣＮＳに送達される。いくつかの実施形態では、治療を必要とする対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に投与することによって、置換酵素がＣＮＳに送達される。いくつかの実施形態において、くも膜下腔内投与は、ＣＳＦ中に所望の置換酵素（例えば、ＡＳＡタンパク質）を送達するために使用される。本明細書で使用されるくも膜下腔内投与（くも膜下腔内注射とも呼ばれる）は、脊柱管（脊髄を取り囲むくも膜下腔内空間）への注射を指す。腰椎穿刺を含むが、これに限定されない様々な技術を使用することができる。例示的な方法は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｌａｚｏｒｔｈｅｓ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，１４３−１９２に記載される。

本発明によれば、脊柱管の周囲の任意の領域に酵素を注入することができる。いくつかの実施形態では、酵素が腰部領域に注入される。本明細書で使用する用語「腰部」または「腰部領域」は、第３および第４の腰部（下背）椎骨の間の領域、より包括的には脊椎のＬ２−Ｓ１領域を指す。典型的には、腰部または腰部領域を介するくも膜下腔内注射は、「腰椎髄腔内送達」または「腰髄腔内投与」とも呼ばれる。

いくつかの実施形態では、治療用タンパク質、例えば、組換えアリールスルファターゼＡは、例えば、第３および第４の腰椎（腰背部）椎骨間、より包括的には脊椎のＬ２−Ｓ１領域間に送達されるくも膜下腔内投与によって送達される。本発明による腰椎髄腔内投与または送達が、遠位脊柱管へのより良好でより効果的な送達を提供する点で、腰髄腔内投与または送達は、大槽内送達と区別され、一方、大槽内送達は、とりわけ、遠位の脊柱管に良好に送達されないと考えられる。

くも膜下腔内送達用デバイス
本発明によるくも膜下腔内送達のために、様々な装置を使用することができる。いくつかの実施形態では、くも膜下腔内投与のためのデバイスは、流体アクセスポート（例えば、注入ポート）を含み、流体アクセスポートと流体連通する第１の流れオリフィスと、脊髄に挿入するように構成された第２の流れオリフィスとを有する中空体（例えば、カテーテル）と、中空体の脊髄への挿入を確実にするための固定機構とを備える。非限定的な例として、適切な固定機構は、中空体の表面に取り付けられた１つ以上のノブと、１つ以上のノブ上で調節可能な縫合リングとを含み、中空体（例えば、カテーテル）が脊髄から滑り落ちるのを防止する。様々な実施形態において、流体アクセスポートはリザーバを含む。いくつかの実施形態では、流体アクセスポートは、機械的ポンプ（例えば、注入ポンプ）を備える。いくつかの実施形態では、移植されたカテーテルは、リザーバ（例えば、ボーラス送達用）または注入ポンプのいずれかに接続される。流体アクセスポートは、移植されていても外部にあってもよい。

いくつかの実施形態では、くも膜下腔内投与は、腰椎穿刺（すなわち、低速ボーラス）またはポートカテーテル送達システム（すなわち、注入またはボーラス）のいずれかによって行われ得る。いくつかの実施形態では、カテーテルは、腰椎の薄層の間に挿入され、先端は、心臓の空間を所望のレベル（一般的にはＬ３−Ｌ４）にねじ込まれる。

いくつかの実施形態では、くも膜下腔内投与は、移植された髄腔内薬物送達装置（ＩＤＤＤ）への間欠的または連続的なアクセスによるものである。

静脈内投与と比較して、くも膜下腔内投与に適した単回投与量は、典型的には小さい。典型的には、本発明によるくも膜下腔内送達は、対象の頭蓋内圧と同様にＣＳＦの組成物のバランスを維持する。いくつかの実施形態において、くも膜下腔内送達は、対象からのＣＳＦの対応する除去なしに行われる。いくつかの実施形態では、適切な単回投与量は、例えば、約１０ｍｌ、８ｍｌ、６ｍｌ、５ｍｌ、４ｍｌ、３ｍｌ、２ｍｌ、１．５ｍｌ、１ｍｌまたは０．５ｍｌ未満であり得る。いくつかの実施形態では、適切な単回投与量は、約０．５〜５ｍｌ、０．５〜４ｍｌ、０．５〜３ｍｌ、０．５〜２ｍｌ、０．５〜１ｍｌ、１〜３ｍｌ、１〜５ｍｌ、１．５〜３ｍｌ、１〜４ｍｌ、または０．５〜１．５ｍｌである。いくつかの実施形態では、本発明によるくも膜下腔内送達は、最初に所望量のＣＳＦを除去する工程を含む。いくつかの実施形態では、約１０ｍｌ未満（例えば、約９ｍｌ、８ｍｌ、７ｍｌ、６ｍｌ、５ｍｌ、４ｍｌ、３ｍｌ、２ｍｌ、１ｍｌ未満）のＣＳＦが、くも膜下腔内投与の前にまず除去される。そのような場合、適切な単回投与量は、例えば、約３ｍｌ、４ｍｌ、５ｍｌ、６ｍｌ、７ｍｌ、８ｍｌ、９ｍｌ、１０ｍｌ、１５ｍｌ、または２０ｍｌを超えてもよい。

個体への治療用組成物または製剤のくも膜下腔内投与のための他のデバイスは、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２１７，５５２号に記載されている。代替的に、薬物は、例えば、単回注射または連続注入によってくも膜下腔内投与することができる。投薬治療は、単回投与または複数回投与の形態であってもよいことを理解されたい。

注射のために、本発明の製剤は液体溶液中に製剤化することができる。さらに、酵素は、固体形態で処方され、使用直前に再溶解または懸濁されてもよい。凍結乾燥形態も含まれる。注射は、例えば、酵素のボーラス注射または連続注入（例えば、注入ポンプを使用する）の形態であり得る。

非くも膜下腔内送達法
治療的酵素、例えば、組換えアリールスルファターゼＡは、非くも膜下腔内手段、例えば対象の脳への側脳室注入によって投与することができる。注射は、例えば、対象の頭蓋骨に形成された穿頭孔を通して行うことができる。別の実施形態において、酵素および／または他の医薬製剤は、外科的に挿入されたシャントを通して、対象の脳室に投与される。例えば、より大きな側脳室に注射を行うことができる。いくつかの実施形態では、第３および第４のより小さい心室への注入を行うこともできる。

代替的に、医薬組成物は、対象の大槽または腰部領域への注射によって投与することができる。

ある種の装置を使用して、治療用組成物の投与を行うことができる。例えば、所望の酵素を含有する製剤は、髄膜癌腫症のためにくも膜下腔内に投与するために一般的に使用されているオマヤ（Ｏｍｍａｙａ）リザーバを用いて薬物を投与することができる（Ｌａｎｃｅｔ ２：９８３−８４，１９６３）。より具体的には、この方法では、前庭ホーンに形成された穴に心室チューブを挿入し、頭皮の下に設置されたオマヤ（Ｏｍｍａｙａ）リザーバに接続し、リザーバを皮下に穿刺して、置換された特定の酵素をくも膜下腔内に送達し、貯留槽に入れる。

徐放／持続的な送達
本発明の方法の別の実施形態では、薬学的に許容される製剤は、本発明で使用される酵素または他の医薬組成物の対象への持続放出、例えば、薬学的に許容される製剤が対象に投与された後、少なくとも１、２、３、４週間またはそれ以上の長い期間の「徐放」を提供する。

本明細書で使用される用語「持続送達」は、投与後の期間にわたり、好ましくは少なくとも数日、１週間または数週間にわたってインビボでの本発明の医薬製剤の継続的送達を指す。組成物の持続的送達は、例えば経時的な酵素の継続的な治療効果（例えば、酵素の持続的送達は、対象における保存顆粒の継続された減少した量によって示され得る）によって実証され得る。代替的に、酵素の持続的な送達は、経時的なインビボでの酵素の存在を検出することによって実証され得る。

標的組織への送達
上述のように、本発明の驚くべき重要な特徴の１つは、本発明の方法および組成物を用いて投与される治療剤、特に置換酵素が脳表面を効果的かつ広範囲に拡散し、深い脳領域を含む脳の様々な層または領域に浸透する。さらに、本発明の発明的な方法および組成物は、腰部を含む様々な組織、ニューロンまたは脊髄の細胞に治療剤（例えば、ＡＳＡ酵素）を効果的に送達するが、これは、ＩＣＶ注入などの既存のＣＮＳ送達方法によって標的とすることは困難である。さらに、本発明の発明的な方法および組成物は、十分な量の治療薬（例えば、ＡＳＡ酵素）を血流および種々の末梢器官および組織に送達する。

したがって、いくつかの実施形態では、治療用タンパク質（例えば、ＡＳＡ酵素）は、対象の中枢神経系に送達される。いくつかの実施形態において、治療用タンパク質（例えば、ＡＳＡ酵素）は、脳、脊髄、および／または末梢器官の標的組織の１つ以上に送達される。本明細書中で使用される場合、用語「標的組織」は、治療されるリソソーム蓄積症または欠損したリソソーム酵素が通常発現される任意の組織により影響を受ける任意の組織を指す。いくつかの実施形態では、標的組織は、リソソーム蓄積症に罹患しているか、または罹患しやすい患者において、例えば組織の細胞リソソームに保存されている検出可能または異常に高い量の酵素基質がある組織を含む。いくつかの実施形態では、標的組織には、疾患関連病理、症状または特徴を示す組織が含まれる。いくつかの実施形態では、標的組織には、欠損リソソーム酵素が正常に高レベルで発現される組織が含まれる。本明細書中で使用される場合、標的組織は、脳標的組織、脊髄標的組織および／または末梢標的組織であり得る。例示的な標的組織を以下に詳細に記載する。

脳標的組織
一般に、脳は異なる領域、層および組織に分けることができる。例えば、髄膜組織は、脳を含む中枢神経系を包む膜系である。髄膜には、硬膜、くも膜下腔、および軟部を含む３つの層が含まれる。一般に、髄膜および脳脊髄液の主要な機能は、中枢神経系を保護することである。いくつかの実施形態では、本発明による治療用タンパク質は、髄膜の１つ以上の層に送達される。

脳は、大脳、小脳、および脳幹を含む３つの主要な細分を有する。大半の他の脳構造の上に位置し、皮質層で覆われている大脳半球。大脳の下には脳幹があり、大脳が付いている柄に似ている。脳の後ろ、脳の下、脳幹の背後には、小脳がある。

脳の中線付近および中脳より上に位置する間脳は、背側視床、メタサラマス、視床下部、視床上部、腹側視床および視蓋前野を含む。中脳（ｍｉｄｂｒａｉｎ）とも呼ばれる中脳（ｍｅｓｅｎｃｅｐｈａｌｏｎ）は、視蓋、テグメンタム（ｔｅｇｕｍｅｎｔｕｍ）、心室中胚葉および大脳脚（ｃｅｒｅｂｒａｌ ｐｅｄｕｎｃｅｌ）、赤核、および脳神経ＩＩＩ核を含む。中脳は、視覚、聴覚、運動制御、睡眠／覚醒、覚醒、温度調節に関連する。

脳を含む中枢神経系の組織の領域は、組織の深さに基づいて特徴付けることができる。例えば、ＣＮＳ（例えば、脳）組織は、表面組織または浅い組織、中深部組織および／または深部組織として特徴付けることができる。

本発明によれば、治療用タンパク質（例えば、置換酵素）は、対象において治療される特定の疾患に関連する任意の適切な脳標的組織に送達され得る。いくつかの実施形態において、本発明による治療用タンパク質（例えば、置換酵素）は、表面または浅い脳の標的組織に送達される。いくつかの実施形態では、本発明による治療用タンパク質は、中深部脳標的組織に送達される。いくつかの実施形態では、本発明による治療用タンパク質は、深部脳標的組織に送達される。いくつかの実施形態では、本発明による治療用タンパク質は、表面または浅脳標的組織、中深部脳標的組織、および／または深部脳標的組織の組み合わせに送達される。いくつかの実施形態において、本発明による治療用タンパク質は、脳の外表面の少なくとも４ｍｍ、５ｍｍ、６ｍｍ、７ｍｍ、８ｍｍ、９ｍｍ、１０ｍｍまたはそれよりも下の（または内部の）深部脳組織に送達される。

いくつかの実施形態では、治療剤（例えば、酵素）は、大脳の１つ以上の表面組織または浅い組織に送達される。いくつかの実施形態では、大脳の標的化表面または浅い組織は、大脳の表面から４ｍｍ以内に位置する。いくつかの実施形態では、大脳の標的化表面または浅い組織は、皮質組織、大脳皮質リボン組織、海馬、Ｖｉｒｃｈｏｗ Ｒｏｂｉｎ空間、ＶＲ空間内の血管、海馬、脳の下表面上の視床下部の部分、視神経および管、嗅球および突起、およびそれらの組み合わせから選択される。

いくつかの実施形態では、治療剤（例えば、酵素）は、大脳の１つ以上の深部組織に送達される。いくつかの実施形態では、大脳の標的化表面または浅い組織は、大脳の表面の４ｍｍ（例えば、５ｍｍ、６ｍｍ、７ｍｍ、８ｍｍ、９ｍｍまたは１０ｍｍ）下に（または内部に）位置される。いくつかの実施形態では、大脳の標的化された深部組織には、大脳皮質リボンが含まれる。いくつかの実施形態では、大脳の標的組織は、１つ以上の間脳（例えば、視床下部、視床、前十字、副甲状腺など）、後脳、大脳基底核、基底核、尾状核、被殻、扁桃体、淡蒼球、およびそれらの組み合わせが挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療薬（例えば、酵素）は、小脳の１つ以上の組織に送達される。特定の実施形態では、小脳の標的化された１つ以上の組織は、分子層の組織、プルキンエ細胞層の組織、顆粒細胞層の組織、小脳の小斑点、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、治療剤（例えば、酵素）は、プルキンエ細胞層の組織、顆粒細胞層の組織、深部小脳白質組織（例えば、顆粒細胞層に対して深い）および深部小脳核組織を含むが、これらに限定されない小脳の１以上の深部組織に送達される。

いくつかの実施形態において、治療剤（例えば、酵素）は、脳幹の１つ以上の組織に送達される。いくつかの実施形態では、脳幹の標的化された１つ以上の組織には、脳幹白質組織および／または脳幹核組織が含まれる。

いくつかの実施形態では、治療剤（例えば、酵素）は、限定されないが、灰白質、白質、脳室周囲領域、髄膜、新皮質、小脳、大脳皮質の深部組織、分子層、尾状核／被殻領域、中脳、脳橋または髄質の深部およびその組み合わせを含む種々の脳組織に送達される。

いくつかの実施形態において、治療剤（例えば、酵素）は、ニューロン、グリア細胞、血管周囲細胞および／または髄膜細胞を含むが、これに限定されない脳の様々な細胞に送達される。いくつかの実施形態では、治療用タンパク質は深部白質の乏突起膠細胞に送達される。

脊髄
一般に、脊髄の領域または組織は、組織の深さに基づいて特徴付けることができる。例えば、脊髄組織は、表面組織または浅い組織、中深部組織および／または深部組織として特徴付けることができる。

いくつかの実施形態において、治療薬（例えば、酵素）は、脊髄の１つ以上の表面または浅い組織に送達される。いくつかの実施形態では、脊髄の標的化表面または浅い組織は、脊髄の表面から４ｍｍ以内に位置する。いくつかの実施形態では、脊髄の標的化表面または浅い組織は、ピア物質および／または白質の管を含む。

いくつかの実施形態では、治療薬（例えば、酵素）は、脊髄の１つ以上の深部組織に送達される。いくつかの実施形態では、脊髄の標的深部組織は、脊髄の表面から４ｍｍ内側に位置する。いくつかの実施形態において、脊髄の標的化された深部組織は、脊髄灰白質および／または上衣細胞を含む。

いくつかの実施形態において、治療剤（例えば、酵素）は、脊髄のニューロンに送達される。

末梢標的組織
本明細書で使用される場合、末梢器官または組織とは、中枢神経系（ＣＮＳ）の一部ではない任意の器官または組織をいう。末梢標的組織には、血液系、肝臓、腎臓、心臓、内皮、骨髄および骨髄由来細胞、脾臓、肺、リンパ節、骨、軟骨、卵巣および精巣が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明による治療用タンパク質（例えば、置換酵素）は、末梢標的組織の１つ以上に送達される。

生体内分布およびバイオアベイラビリティ
種々の実施形態では、一旦標的組織に送達されると、治療剤（例えば、ＡＳＡ酵素）が細胞内に局在化される。例えば、治療薬（例えば、酵素）は、標的細胞（例えば、プルキンエ細胞などのニューロン）のエキソン、軸索、リソソーム、ミトコンドリアまたは液胞に局在化され得る。例えば、いくつかの実施形態では、くも膜下腔内に投与された酵素は、酵素が血管周囲腔内を移動するような転位動態を示す（例えば、脈動補助対流機構によって）。さらに、投与されたタンパク質または酵素とニューロフィラメントとの関連に関する能動的軸索輸送機構は、中枢神経系のより深部の組織へのクモ膜下投与タンパク質または酵素の分布に寄与し、またはそうでなければ促進する。

いくつかの実施形態では、本発明に従って送達される治療剤（例えば、ＡＳＡ酵素）は、本明細書に記載の様々な標的組織において治療的または臨床的に有効なレベルまたは活性を達成することができる。本明細書中で使用される場合、治療上または臨床上有効なレベルまたは活性は、標的組織に治療効果を与えるのに十分なレベルまたは活性である。治療効果は、客観的（すなわち、何らかの試験またはマーカーによって測定可能）または主観的（すなわち、対象が効果を示しまたは感じる）であり得る。例えば、治療的または臨床的に有効なレベルまたは活性は、標的組織における疾患に関連する症状を改善するのに十分な酵素レベルまたは活性（例えば、ＧＡＧ貯蔵）であり得る。

いくつかの実施形態では、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、標的組織中の対応するリソソーム酵素の正常レベルまたは活性の少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％である酵素レベルまたは活性を達成することができる。いくつかの実施形態では、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、対照またはベースライン（例えば、内在性レベルまたは処置を伴わない活性）と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍増加した酵素レベルまたは活性を達成し得る。いくつかの実施形態では、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、標的組織において、少なくとも約１０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、５５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、または６００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇの酵素レベルまたは活性の増加を達成し得る。

いくつかの実施形態では、本発明による発明的な方法は、腰部を標的化するのに特に有用である。いくつかの実施形態では、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、少なくとも約５００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、６００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、７００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、８００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、９００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、１０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、１５００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、４０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、５０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、６０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、７０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、８０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、９０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、または１０，０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇの腰部における酵素レベルまたは活性の増加を達成することができる。

一般に、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、ＣＳＦおよび脳、脊髄および末梢器官の標的組織において十分に長い半減期を有する。いくつかの実施形態において、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、少なくとも約３０分、４５分、６０分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１６時間、１８時間、２０時間、２５時間、３０時間、３５時間、４０時間、最大３日間、最大７日間、最大１４日間、最大２１日間、または最大１ヶ月の半減期を有し得る。いくつかの実施形態において、いくつかの実施形態において、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、投与後の１２時間、２４時間、３０時間、３６時間、４２時間、４８時間、５４時間、６０時間、６６時間、７２時間、７８時間、８４時間、９０時間、９６時間、１０２時間、または１週間後にＣＳＦまたは血流において検出可能なレベルまたは活性を保持し得る。検出可能なレベルまたは活性は、当該分野で公知の様々な方法を用いて決定され得る。

特定の実施形態では、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、投与後の対象のＣＮＳ組織および細胞において少なくとも３０μｇ／ｍｌの濃度を達成する（例えば、医薬組成物を対象の髄腔内に投与した後、１週間、３日、４８時間、３６時間、２４時間、１８時間、１２時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間、３０分、またはそれ未満）。特定の実施形態では、本発明に従って送達される治療剤（例えば、置換酵素）は、対象の標的組織または細胞（例えば、脳組織またはニューロン）において、そのような対象への投与後に、少なくとも２０μｇ／ｍｌ、少なくとも１５μｇ／ｍｌ、少なくとも１０μｇ／ｍｌ、少なくとも７．５μｇ／ｍｌ、少なくとも５μｇ／ｍｌ、少なくとも２．５μｇ／ｍｌ、少なくとも１．０μｇ／ｍｌ、または少なくとも０．５μｇ／ｍｌの濃度で達成する（例えば、このような医薬組成物を対象にくも膜下腔内投与した後、１週間、３日、４８時間、３６時間、２４時間、１８時間、１２時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間、３０分、またはそれ未満）。

異染性白質ジストロフィー病（ＭＬＤ）の治療
ＭＬＤ症候群としても知られる異染性白質ジストロフィー病（ＭＬＤ）は、酵素アリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）の欠乏に起因する常染色体劣性疾患である。ヒトのＡＲＳＡ遺伝子によってコードされるＡＳＡは、セレブロシド３硫酸またはスフィンゴ脂質３−Ｏ−スルホガラクトシルセラミド（スルファチド）をセレブロシドおよび硫酸塩に分解する酵素である。酵素の非存在下では、スルファチドは神経系（例えば、ミエリン鞘、ニューロンおよびグリア細胞）に蓄積し、内臓器官においてはそれほどではない。これらの分子的および細胞的事象の結果は、臨床的に重度の運動および認知機能不全を伴うＣＮＳおよびＰＮＳ内の進行性脱髄および軸索喪失である。

この障害の明確な臨床的特徴は、中枢神経系（ＣＮＳ）変性であり、認知障害（例えば、精神遅滞、神経障害、および失明）をもたらす。

罹患した子供が典型的には生後１年目の直後（例えば、約１５〜２４ヶ月）に症状を呈し始め、一般に５歳を過ぎても生存しない幼児（幼児期後期）においてＭＬＤが現れることがある。ＭＬＤは、罹患した子供が典型的に約３〜１０歳の年齢で認知障害を示す小児（若年型）に現れることがあり、寿命は（例えば、発症後１０〜１５年の範囲内で）変化する可能性がある。ＭＬＤは成人（成人発症型）で現れ、任意の年齢の個体（例えば、典型的には１６歳以降）に現れることがある。病気の進行は大きく変わる可能性がある。

本発明の組成物および方法は、ＭＬＤに罹患しているかまたは感受性の個体を効果的に治療するために使用され得る。ＭＬＤを治療するための本発明のある種の方法は、一般に、治療上有効な用量で、かつ、対象における治療有効性の評価を観察するのに十分な治療期間の投与間隔で、で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を治療を必要とする対象にくも膜下腔内に投与する工程を含む。本開示で提供される多くの方法によれば、組換えアリールスルファターゼＡの投与に伴う重篤な副作用は、対象において観察されない。

本明細書で使用される「治療する」または「治療」という用語は、疾患に関連する１つ以上の症状の改善、疾患の１つ以上の症状の発症の予防または遅延、疾患の重篤度または頻度の１つ以上の症状の軽減、および／または１つ以上の機能における疾患関連衰退の進行を減速させ、安定化させ、または低下させる方法を提供する。典型的な症状としては、限定されないが、頭蓋内圧、水頭症、減圧下での中枢および末梢神経系および内臓器官におけるミエリン鞘の蓄積硫酸化糖脂質、ＣＮＳおよびＰＮＳ内の進行性脱髄および軸索喪失、および／または運動および認知機能障害が挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療は、ＭＬＤ患者における神経学的障害の緩和、改善、軽減、阻害、発症の遅延、重症度および／または発生率の低下、進行の遅延、安定化または逆転を部分的または完全に指す。本明細書中で使用される場合、用語「神経学的障害」は、中枢神経系（例えば、脳および脊髄）の障害に関連する様々な症状を含む。いくつかの実施形態において、ＭＬＤの様々な症状は、末梢神経系（ＰＮＳ）の障害に関連する。

運動機能
いくつかの実施形態では、ＭＬＤ患者における神経学的障害は、運動機能、例えば粗大運動機能の低下を特徴とする。いくつかの実施形態では、治療効力は、１つ以上の運動機能に関連する尺度を含む。

いくつかの実施形態では、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して１つ以上の運動機能の低下を改善、安定化または減少させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素の治療を必要とする対象にくも膜下腔内に投与する工程を含む異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与は、さらに、１つ以上の認知機能、適応機能および／または実行機能の低下を改善、安定化、または減少をもたらす。

１つ以上の運動機能は、例えば、粗大運動機能を含むことができる。粗大運動機能は、任意の適切な方法によって評価され得ることが理解されるであろう。例えば、いくつかの実施形態では、粗大運動機能は、例えば、粗大運動能力尺度−８８（ＧＭＦＭ−８８）または粗大運動能力尺度−６６（ＧＭＦＭ−６６）、総生スコアまたはパーセンテージのような、粗大運動能力尺度を使用する運動機能のベースラインからの変化として測定される。いくつかの実施形態では、治療される対象は、４０％を超えるベースラインＧＭＦＭ−８８スコアを有する。いくつかの実施形態において、治療される対象は、４０％未満のベースラインＧＭＦＭ−８８スコアを有する。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法に従って組換えＡＳＡ酵素を投与すると、投与なしで典型的に観察されるよりも運動機能の低下が小さくなる。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の方法による組換えＡＳＡ酵素の投与は、ＧＭＦＭ−８８スコアの１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％未満の低下をもたらす。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法に従って組換えＡＳＡ酵素を投与すると、運動機能の実質的な安定化、例えばＧＭＦＭ−８８スコアなどのスコアの実質的な安定化がもたらされる。「実質的な安定化」とは、ある期間にわたって、例えば治療期間にわたっておよび／または治療の不在下で減少または悪化が通常予想される期間にわたって、減少または悪化がないことを意味する。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法に従って組換えＡＳＡ酵素を投与すると、運動機能の改善、例えばＧＭＦＭ−８８スコアなどのスコアの改善がもたらされる。

バイオマーカー
特定の実施形態では、治療有効性は、例えばＭＬＤ患者において蓄積または減少する１つ以上のバイオマーカーのレベルの変化を含む。

いくつかの実施形態では、治療上有効な用量で、かつ、ＭＬＤに蓄積するバイオマーカーのレベルをバイオマーカーのベースラインレベルまで低下させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素の治療を必要とする対象にくも膜下腔内に投与する工程を含む異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法を提供する。

ＭＬＤに蓄積するバイオマーカーは、例えば、スルファチド、リゾスルファチド、またはその両方であり得る。いくつかの実施形態では、バイオマーカーはスルファチドである。バイオマーカーは、ＭＬＤ患者の１つ以上の体組織および／または１つ以上の体液に蓄積するものであり得る。例えば、いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、脳脊髄液、尿、血液、および血清からなる群から選択される体液に蓄積する。いくつかの実施形態では、体液は脳脊髄液である。

特定の実施形態では、治療対象の脳脊髄液中のベースラインのスルファチドレベルは、特定のレベルよりも大きく、例えば、約０．１μｇ／ｍＬ超、約０．２μｇ／ｍＬ超、または約０．３μｇ／ｍＬ超である。いくつかの実施形態では、本明細書中に開示される方法に従って組換えＡＳＡ酵素を投与すると、脳脊髄液中のスルファチドレベルの、例えば約０．１μｇ／ｍＬ超または約０．２μｇ／ｍＬ超の減少をもたらす。

いくつかの実施形態では、治療は、様々な組織または体液におけるスルファチド蓄積の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、治療は、脳標的組織、脊髄ニューロン、および／または末梢標的組織におけるスルファチド蓄積の減少をもたらす。特定の実施形態では、スルファチドの蓄積は、対照またはベースラインレベルと比較して約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはそれ以上減少する。いくつかの実施形態では、スルファチドの蓄積は、対照またはベースラインレベルと比較して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍低下する。スルファチド貯蔵は、任意の適切な方法によって評価され得ることが理解されるであろう。例えば、いくつかの実施形態では、スルファチド貯蔵は、アルシアンブルー染色によって測定される。いくつかの実施形態において、スルファチド貯蔵は、ＬＡＭＰ−１染色によって測定される。

いくつかの実施形態では、治療上有効な用量で、かつ、バイオマーカーのベースラインレベルと比較して、脳組織中のＭＬＤが減少するバイオマーカーのレベルを増加させることができるのに十分な治療期間の投与間隔で、治療を必要とする対象に、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素をくも膜下腔内に投与する工程を含む異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法を提供する。

脳組織は、ＭＬＤ患者において、典型的にはバイオマーカーのレベルが低下する任意の脳組織、例えば、脳の深部白質であり得る。有用であり得るバイオマーカーには、Ｎ−アセチルアスパラギン酸などの特定の代謝産物が含まれる。Ｎ−アセチルアスパラギン酸レベルは、例えば、プロトン磁気共鳴分光法によって、脳組織において評価することができる。

脳病変併発
特定の実施形態では、治療効力は、脳病変併発に関連する尺度を含む。特定の実施形態では、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳病変併発を安定化または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法が提供される。

脳病変併発は、例えば、画像法などの非侵襲的方法によって評価することができる。適切な評価方法には、定性的、定量的および半定量的方法が含まれる。例えば、ＭＬＤ患者における脳病変併発を評価するための非侵襲的撮像法は、ＭＬＤ ＭＲＩ（磁気共鳴画像法）重症度スコアである。（参照により本明細書に組み込まれる、Ｅｉｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．ＡＪＮＲ Ａｍ Ｊ Ｎｅｕｒｏｒａｄｉｏｌ．２００９ Ｎｏｖ；３０（１０）：１８９３−７参照。）いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与は、ベースラインと比較して対象におけるＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコアの低下をもたらす。いくつかの実施形態では、組換えＡＳＡ酵素の投与が、ベースラインに対する対象におけるＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコアの安定化をもたらす。

治療効果の追加尺度
本発明の方法は、代替的または追加的に、本明細書に記載される治療有効性の１つ以上の他の尺度をもたらすことができる。いくつかの実施形態では、治療は、ニューロン（例えば、プルキンエ細胞を含有するニューロン）における空胞化を減少させる。特定の実施形態では、ニューロンにおける空胞化は、対照またはベースラインと比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはそれ以上減少する。いくつかの実施形態では、空胞化は対照またはベースラインと比較して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍減少する。

いくつかの実施形態では、治療は、様々な組織におけるＡＳＡ酵素活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、治療は、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織におけるＡＳＡ酵素活性の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＳＡ酵素活性は、対照またはベースラインと比較して約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％以上増加する。いくつかの実施形態では、ＡＳＡ酵素活性は、対照またはベースラインと比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍増加する。いくつかの実施形態では、増加したＡＳＡ酵素活性は、少なくとも約１０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、５５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、６００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇまたはそれ以上である。いくつかの実施形態において、ＡＳＡ酵素活性は、腰部において増加する。いくつかの実施形態において、腰部におけるＡＳＡ酵素活性の増加は、少なくとも約２０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、４０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、５０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、６０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、７０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、８０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、９０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、１０，０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ以上である。

いくつかの実施形態において、治療は、認知能力の喪失の進行の減少をもたらす。特定の実施形態では、認知能力の喪失の進行は、対照またはベースラインと比較して約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはそれ以上減少する。いくつかの実施形態では、治療は発達遅延の減少を指す。特定の実施形態において、発達遅延は、対照またはベースラインと比較して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはそれ以上減少する。

いくつかの実施形態では、治療は、生存の増加（例えば、生存時間）を指す。例えば、治療は患者の平均寿命を延ばすことをもたらし得る。いくつかの実施形態では、本発明による治療は、治療を受けない同様の疾患を有する１人以上の対照個体の平均余命と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、約１５０％、約１５５％、約１６０％、約１６５％、約１７０％、約１７５％、約１８０％、約１８５％、約１９０％、約１９５％、約２００％以上増加された患者の平均余命をもたらす。いくつかの実施形態では、本発明による治療は、治療を受けていない類似の疾患を有する１人以上の対照個体の平均余命と比較して、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約２年、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年、約１０年以上増加された患者の平均余命をもたらす。いくつかの実施形態では、本発明による治療は、患者の長期生存をもたらす。本明細書中で使用される場合、用語「長期生存」は、約４０年、４５年、５０年、５５年、６０年、またはそれより長い生存時間または寿命を指す。

本明細書で使用される「改善する」、「増加させる」または「減少させる」という用語は、対照と比較した値を示す。いくつかの実施形態では、適切な対照は、本明細書に記載の治療の開始前に同じ個体での測定、または本明細書に記載される治療の非存在下で対照個体（または複数の対照個体）での測定などのベースライン測定である「対照個体」は、治療される個体とほぼ同じ年齢および／または性別である同じ形のＭＬＤ（例えば、乳幼児期後期、若年期、または成人期の発症形態）に罹患している個体である（治療された個体および対照個体における疾患の段階が同等であることを保証するため）。

対象
治療される個体（「患者」または「対象」とも称される）は、ＭＬＤを有するか、または（すなわち、ＭＬＤを発症するリスクで）ＭＬＤを発症する可能性を有する個体（例えば、胎児、幼児、子供、青年または成人）である。

多くの実施形態において、対象は哺乳動物、例えばヒトである。

いくつかの実施形態では、対象は１６歳以下、例えば、１２歳以下、９歳以下、６歳以下、４歳以下、３歳以下、２歳以下、１８ヶ月以下、１２ヶ月以下、または６ヵ月以下である。

対象は、ＭＬＤのいずれかの形態、例えば、成人形態、若年形態、または晩期幼児形態を有し得る。

対象は、治療開始時に本明細書に記載されるＭＬＤの少なくとも１つの症状を呈していても、いなくてもよい。

対象は、治療開始時にＭＬＤと診断されてもされなくてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、対象はＭＬＤを発症する危険性があると同定されていない。したがって、治療の方法は、であり得る。

この個体は、内因性ＡＳＡの発現および／または活性が残存するか、または測定可能な活性を有さない。例えば、ＭＬＤを有する個体は、約３０〜５０％未満、約２５〜３０％未満、約２０〜２５％未満、約１５〜２０％未満、約１０〜１５％未満、約５〜１０％未満、約０．１〜５％未満の正常ＡＳＡ発現レベルのＡＳＡ発現レベルを有する。

いくつかの実施形態では、個体は、最近病気と診断された個体である。典型的には、早期治療（診断後できるだけ早く開始する治療）は、疾患の影響を最小限に抑え、治療の利益を最大化するために重要である。

免疫寛容
一般に、本発明による治療剤（例えば、置換酵素）のくも膜下腔内投与は、対象に重篤な有害作用をもたらさない。本明細書中で使用される場合、重篤な副作用は、実質的な免疫応答、毒性、または死を誘発するが、これに限定されない。本明細書中で使用される場合、用語「実質的な免疫応答」は、適応性Ｔ細胞免疫応答のような重篤または深刻な免疫応答をいう。

したがって、多くの実施形態では、本発明に係る発明的なの方法は、同時免疫抑制療法（すなわち、前治療／予備調節または本方法と並行して使用される任意の免疫抑制治療）を伴わない。いくつかの実施形態では、本発明による発明的な方法は、治療される対象において免疫寛容誘導を伴わない。いくつかの実施形態では、本発明による本発明の方法は、Ｔ細胞免疫抑制剤を用いた対象の前処置またはプレコンディショニングを含まない。

いくつかの実施形態において、治療薬のくも膜下腔内投与は、これらの薬剤に対する免疫応答を賦与することができる。したがって、いくつかの実施形態では、置換酵素を受ける対象を酵素補充療法に耐性とすることは有用であり得る。免疫寛容は、当該分野で公知の様々な方法を用いて誘発され得る。例えば、サイクロスポリンＡ（ＣｓＡ）のようなＴ細胞免疫抑制剤およびアザチオプリン（Ａｚａ）のような抗増殖剤の最初の３０〜６０日のレジメンを、低用量の所望の置換酵素の毎週くも膜下腔内注入と組み合わせて使用することができる。

当業者に公知の任意の免疫抑制剤を、本発明の併用療法と一緒に用いることができる。このような免疫抑制剤としては、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、およびエタネルセプトなどの抗ＴＮＦ剤が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｍｏｄｅｒ，２０００，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｉｍｍｕｎｏｌ．８４，２８０−２８４；Ｎｅｖｉｎｓ，２０００，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１２，１４６−１５０；Ｋｕｒｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５１，２２４−２３０；Ｉｄｅｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ９５，２１７−２２６；Ｐｏｔｔｅｒｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７５，１５９−１７４；Ｓｌａｖｉｋ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．１９，１−２４；Ｇａｚｉｅｖ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２５，６８９−６９６；Ｈｅｎｒｙ，１９９９，Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１３，２０９−２２０；Ｇｕｍｍｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０，１３６６−１３８０；Ｑｉ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６９，１２７５−１２８３を参照されたい。）。移植患者において有効であることが示されている抗ＩＬ２受容体（α−サブユニット）抗体ダクリズマブ（例えば、Ｚｅｎａｐａｘ（商標））も、免疫抑制剤として使用することができる（例えば、Ｗｉｓｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｄｒｕｇｓ ５８，１０２９−１０４２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎ．Ｅｎｇｌ Ｊ．Ｍｅｄ．３４２，６１３−６１９；Ｐｏｎｔｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｄｒｕｇｓ Ｒ．Ｄ．１，５５−６０；Ｂｅｒａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ １９，１１２７−１１３７；Ｅｃｋｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６９，１８６７−１８７２；Ｅｋｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒａｎｓｐｌ．Ｉｎｔ．１３，１５１−１５９を参照されたい。）。さらなる免疫抑制剤としては、抗ＣＤ２（Ｂｒａｎｃｏ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８，１５８８−１５９６；Ｐｒｚｅｐｉｏｒｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｂｌｏｏｄ ９２，４０６６−４０７１）、抗ＣＤ４（Ｍａｒｉｎｏｖａ−Ｍｕｔａｆｃｈｉｅｖａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．４３，６３８−６４４；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９２，１３８−１５２）、および抗ＣＤ４０リガンド（Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｓｅｍｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．２０，１０８−１２５；Ｃｈｉｒｍｕｌｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４，３３４５−３３５２；Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４，１２３０−１２３５）が挙げられるが、これに限定されない。

投与
本発明の発明的方法は、治療上有効な量の本明細書に記載の治療剤（例えば、置換酵素）の単回投与および複数回投与を意図する。治療剤（例えば、置換酵素）は、対象の状態の性質、重症度および程度（例えば、リソソーム蓄積症）に応じて、定期的な間隔で投与することができる。いくつかの実施形態では、治療上有効な量の本発明の治療剤（例えば、置換酵素）は、定期的にくも膜下腔内に投与され得る（例えば、年１回、６ヶ月に１回、５ヶ月に１回、３ヶ月に１回、隔月（２ヶ月に１回）、毎月（月１回）、隔週（２週間に１回）、毎週）。

いくつかの実施形態では、くも膜下腔内投与は、他の投与経路（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、経皮、または経粘膜（例えば、経口または鼻腔））と併用され得る。いくつかの実施形態では、これらの他の投与経路（例えば、静脈内投与）は、隔週、毎月、１ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、６ヶ月に１回、毎年投与するよりも頻繁に行われなくてもよい。

本明細書中で使用される場合、用語「治療上有効な量」は、主に、本発明の医薬組成物に含まれる治療剤の総量に基づいて決定される。一般に、治療上有効な量は、対象に有意な利益（例えば、根底にある疾患または状態の治療、調節、治癒、予防および／または改善）を達成するのに十分である。例えば、治療上有効な量は、リソソーム酵素レセプターまたはその活性を調節してそのようなリソソーム蓄積症またはその症状を治療するのに十分な量などの、所望の治療および／または予防効果を達成するのに十分な量であり得る（例えば、本発明の組成物の対象への投与後の「ゼブラボディ」または細胞性空胞化の存在または発生の減少または排除）。一般に、それを必要とする対象に投与される治療剤（例えば、組換えリソソーム酵素）の量は、対象の特徴に依存するであろう。このような特徴には、対象の状態、疾患重症度、全般的健康、年齢、性別および体重が含まれる。当業者は、これらおよび他の関連因子に応じて適切な用量を容易に決定することができるであろう。さらに、最適な投薬量範囲を同定するために、客観的および主観的アッセイの両方を任意に用いることができる。

治療上有効な量は、複数の単位用量を含み得る投薬レジメンで一般的に投与される。任意の特定の治療用タンパク質について、治療上有効な量（および／または有効な投与レジメン内の適切な単位投与量）は、例えば、投与経路に応じて、他の医薬品と組み合わせて変化し得る。また、特定の患者に対する特定の治療上有効な量（および／または単位用量）は、治療される障害および障害の重篤度；使用される特定の医薬品の活性；使用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別および食事；投与時間、投与経路、および／または使用される特定の融合タンパク質の排泄または代謝速度；治療の持続時間；医学分野でよく知られているような類似の因子を含む様々な因子に依存し得る。

いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は、約１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ以上である。特定の実施形態では、治療上有効な用量は約１０ｍｇ以上である。特定の実施形態では、治療上有効な用量は、約３０ｍｇ以上である。特定の実施形態では、治療上有効な用量は、約１００ｍｇ以上である。いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は、約５００ｍｇ、４５０ｍｇ、４００ｍｇ、３５０ｍｇ、３００ｍｇ、２５０ｍｇまたは２００ｍｇ未満である。特定の実施形態では、治療上有効な用量は約２００ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は、約１〜１００ｍｇ、約５〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約５〜７０ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約１０〜７０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、または約１０〜５０ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、治療上有効な用量の、約１００ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲である。

一部の実施形態では、治療上有効な用量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜５００ｍｇ／ｋｇ脳重量、例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜４００ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜３００ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜２００ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜１００ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜９０ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜８０ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜７０ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜６０ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜５０ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜４０ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜３０ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜２５ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜脳重量２０ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜１５ｍｇ／ｋｇ脳重量、約０．００５ｍｇ／ｋｇ脳重量〜１０ｍｇ／ｋｇ脳重量の範囲である。

いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約０．５ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約１．０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約３ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約５ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約１０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約１５ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約２０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約３０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約４０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、、約５０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約６０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約７０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約８０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約９０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約１００ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約１５０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約２００ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約２５０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約３００ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約３５０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約４００ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約４５０ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きく、約５００ｍｇ／ｋｇ脳重量より大きい。

いくつかの実施形態では、治療上有効な用量はまた、ｍｇ／ｋｇ体重によって定義されてもよい。当業者が理解するように、脳重量および体重を相関させることができる。Ｄｅｋａｂａｎ ＡＳ．“Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｗｅｉｇｈｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓｐａｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｉｆｅ：ｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｗｅｉｇｈｔｓ ｔｏ ｂｏｄｙ ｈｅｉｇｈｔｓ ａｎｄ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔｓ，”Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ １９７８；４：３４５−５６。したがって、いくつかの実施形態では、用量は、表４に示すように変換することができる。

いくつかの実施形態では、治療上有効な用量はまた、ＣＳＦのｍｇ／１５ｃｃによって定義されてもよい。当業者であれば分かるように、脳重量および体重に基づく治療上有効な用量は、ＣＳＦのｍｇ／１５ｃｃに変換することができる。例えば、成人のＣＳＦの量は約１５０ｍＬである（Ｊｏｈａｎｓｏｎ ＣＥ，ｅｔ ａｌ．“Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ：Ｎｅｗ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ，”Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｒｅｓ．２００８ Ｍａｙ １４；５：１０）。したがって、成人に対する０．１ｍｇ〜５０ｍｇのタンパク質の単回用量の注射は、成人における約０．０１ｍｇ／１５ｃｃのＣＳＦ（０．１ｍｇ）〜５．０ｍｇ／１５ｃｃのＣＳＦ（５０ｍｇ）用量であろう。

任意の特定の対象について、個々の必要性および酵素補充療法の投与を管理または監督する者の専門的判断に従って、特定の投与計画を経時的に調整すべきであり、本明細書に記載の投与量範囲は、単なる例示であって、クレームされた発明の範囲または実施を限定するものではないことが理解されるべきである。

特定の実施形態では、組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、ある投与間隔、例えば定期的間隔で投与される。例えば、投与間隔は、１週間に１回、２週間に１回、または１ヶ月に１回であり得る。

特定の実施形態では、組換えアリールスルファターゼＡ酵素は、治療期間にわたって投与される。治療期間は、予め決定することができ、または、本明細書で論じる治療効力の可能性のある有害症状および／または証拠を含むが、これに限定されない治療に対する患者の応答に応じて調整することができる。例えば、治療期間は、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも２４ヶ月、またはそれ以上であり得る。

いくつかの実施形態では、対象は、ある治療期間にわたって治療を受け、それらが治療または代替治療を受けない一定期間を経て、再び別の治療期間を経ると考えられる。

キット
本発明はさらに、本発明の製剤を含有するキットまたは他の製品を提供し、その再構成（凍結乾燥された場合）および／または使用のための説明書を提供する。キットまたは他の製造物品は、容器、ＩＤＤＤ、カテーテル、および間接投与および関連手術に有用な、他の物品、器具または装置を含むことができる。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ（例えば、予め充填されたシリンジ）、アンプル、カートリッジ、リザーバ、またはＬｙｏ−Ｊｅｃｔが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。いくつかの実施形態では、容器は予め充填された注射器である。適切な予め充填されたシリンジには、焼成シリコンコーティングを有するホウケイ酸ガラスシリンジ、噴霧されたシリコンを有するホウケイ酸ガラスシリンジ、またはシリコンを含まないプラスチック樹脂シリンジが含まれるが、これらに限定されない。

典型的には、容器は、再構成および／または使用の指示を示す容器および容器上の製剤およびラベルを保持することができる。例えば、ラベルは、製剤が上記のようにタンパク質濃度に再構成されることを示し得る。このラベルは、製剤が、例えば、ＩＴ投与に有用または意図されていることをさらに示し得る。いくつかの実施形態では、容器は、治療剤（例えば、置換酵素）を含有する安定な製剤の単回用量を含み得る。様々な実施形態において、安定な製剤の単回用量は、約１５ｍｌ、１０ｍｌ、５．０ｍｌ、４．０ｍｌ、３．５ｍｌ、３．０ｍｌ、２．５ｍｌ、２．０ｍｌ、１．５ｍｌ、１．０ｍｌまたは０．５ｍｌ未満の容量で存在する。代替的に、製剤を保持する容器は、製剤の反復投与（例えば、２〜６回の投与）を可能にする多用途バイアルであってもよい。キットまたは他の製造物品は、適切な希釈剤（例えば、ＢＷＦＩ、生理食塩水、緩衝生理食塩水）を含む第２の容器をさらに含み得る。希釈剤と製剤の混合時に、再構成された製剤中の最終タンパク質濃度は、一般に少なくとも１ｍｇ／ｍｌであろう（例えば、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ）。いくつかの実施形態では、最終タンパク質濃度は少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、例えば３０ｍｇ／ｍＬである。キットまたは他の製造品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、ＩＤＤＤ、カテーテル、シリンジ、および使用説明書を含む添付文書を含む、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の物質をさらに含み得る。

本発明は、以下の実施例を参照することにより、より十分に理解されるであろう。しかしながら、それらは、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載された特定の化合物、組成物および方法は、特定の実施形態に従って特異性をもって記載されているが、以下の実施例は、本発明の化合物を説明するためのものであって、本発明の化合物を限定することを意図するものではない。すべての文献の引用は、参照により組み込まれる。

実施例１：組換えアリールスルファターゼＡのくも膜下腔内投与は安全であり、ヒト遅発乳児型および成人型異染性白質ジストロフィー患者の症状を改善する。
異染性白質ジストロフィーの臨床的形態は、発症年齢で通常除算され、遅発乳児型異染性白質ジストロフィーは３歳以下の発症年齢に関連し、若年型異染性白質ジストロフィーは４歳から１６歳の発症年齢に関連し、成人型異染性白質ジストロフィーは１６歳超の発症年齢に関する。

異染性白質ジストロフィーを有する小児は、典型的には運動機能の低下を経験し、遅発乳児型異染性異染性白質ジストロフィーを有する小児は、約５２％の５年生存率しか示さない（Ｍａｈｍｏｏｄ Ａ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｈｉｌｄ Ｎｅｕｒｏｌ．２０１０；２５：５７２−８０）。現在、承認された薬理学的治療はない。

本実施例は、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）、例えば、遅発乳児型または若年性異染性白質ジストロフィーを有する小児における組換えヒトアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）の安全性および有効性を評価するための、フェーズ１／２無作為化オープンラベル用量漸増臨床研究を記載する。効力を評価するために、粗大運動機能、脳病変併発、およびＣＳＦにおけるスルファチドレベルに対する組換えヒトＡＳＡ処置の効果を分析した。

１８人の男性または女性の患者が研究に登録され、以下のスクリーニング基準の全てに合致した：ＡＳＡ欠損（白血球におけるアッセイによる）および患者尿中のスルファチドレベルの上昇により確認されたＭＬＤ診断；３０ヶ月齢またはそれより前の最初の疾患症状の出現；スクリーニング時の歩行（例えば、最低限必要な機能レベル、立ち上がる能力、片手で支えながら１０歩歩く能力と定義される）；登録時には１２歳未満であること；およびスクリーニング検査に存在するＭＬＤの神経学的徴候。

除外基準には、造血幹細胞移植の病歴；気道の妥協または他の状態のために麻酔に対する過敏症または容認できないほど高い麻酔の危険性があることが知られているかまたは疑われるもの；他の病状、重度の病気、または研究への参加を妨げるような酌量すべき事情、が含まれる。試験設計を図１に示す。

登録時に、患者は上記の基準に基づいて適格性を評価し、インフォームドコンセントを得るためにスクリーニングされた。ＩＤＤＤの外科的埋め込みについても、手術前の安全性評価が行われた。手術のための標準的な病院手続きが行われた。
患者は、くも膜下腔内投与された組換えヒトＡＳＡの３つの漸増用量コホートのうちの１つ（コホートあたりｎ＝６患者、１用量あたり１０ｍｇ、３０ｍｇ、または１００ｍｇで）に登録された。患者は管理者の裁量で必要に応じて鎮静を受けた。新たに含まれる患者の次の用量レベルへの段階的拡大は、独立したデータ安全監視委員会およびＳｈｉｒｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓの代表者による低用量コホートの患者についての、患者が少なくとも２回の投与を受けた後にのみ、得られた安全性データのレビューに基づいている。表５は、この研究の患者人口統計を示す。

簡潔に述べると、ポートは、腰部レベルで脊髄チャネルにカテーテルでリブにわたって皮下に配置された。デバイスが機能しなくなった場合はいつでも、デバイスは取り外され、交換された。ＰＯＲＴ−Ａ−ＣＡＴＨＩＩ（登録商標）またはＳＯＰＨ−Ａ−ＰＯＲＴ（登録商標）Ｍｉｎｉ Ｓのいずれかが使用されたが、後者の方が忍容性が優れていた。（表６参照。）ベースライン時および各試験訪問時に一連のＣＳＦ評価を前段階で行った。組換えヒトＡＳＡに、移植したＩＤＤＤを介して隔週に３８週間（０週目から開始）合計２０回の注射を行った。ＩＤＤＤは、ＣＳＦサンプリングおよび組換えヒトＡＳＡ注射の両方に使用された。安全性／有効性を評価するための測定のためのサンプルを、投与前に１週間おきに採取した。

安全性
表６は、本研究で報告された有害事象を列挙し、その数は患者の数を表す。表６に示すように、３つのコホート（１０ｍｇ、３０ｍｇ、または１００ｍｇ投与）のいずれかに重大な治療関連有害事象、死亡、または中断はなかった。

運動機能
運動機能は、小児の粗大運動機能の変化を定量化するために設計された臨床ツールである粗大運動能力尺度８８（ＧＭＦＭ−８８）によって評価された。ＧＭＦＭ−８８の項目には、横転、転がり、歩行、ランニング、ジャンプスキルを含む活動が含まれる。

４０週目の全処置群におけるＧＭＦＭ−８８総スコアの変化を図２に示す。第４０週に、運動機能の低下は、群間で統計学的に有意な差は検出されなかったが、他の（低用量）よりも１００ｍｇ投与された患者群において数値的に低かった。

しかしながら、ベースラインＧＭＦＭ−８８合計スコアと治療効果（ベースラインからのＧＭＦＭ−８８スコアの変化によって評価される）との間の統計学的に有意な相互作用が検出された（ＡＮＣＯＶＡによるｐ＝０．００６７（共分散の分析）；図３参照）。４０週目で、ＧＭＦＭ−８８ベースライン総スコアの４０％以上の子供のうち、１００ｍｇのｒｈＡＳＡで治療された子供の運動機能低下は、他のグループよりも少なかった。（図４を参照）

脳病変併発
異染性白質ジストロフィー磁気共鳴画像法（ＭＬＤ ＭＲＩ）重症度スコアは、脳病変併発の定量的尺度である。（例えば、Ｅｉｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．ＡＪＮＲ Ａｍ Ｊ Ｎｅｕｒｏｒａｄｉｏｌ．２００９ Ｎｏｖ；３０（１０）：１８９３−７参照。）４０週目で、患者のＭＲＩデータを１人の研究者が盲検法で評価した。

図５に示すように、４０週目で、ＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコアは、１００ｍｇコホートにおいて安定しているように見え、スコアはわずかに低下した。１００ｍｇコホートにおけるＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコア変化は、１０ｍｇおよび３０ｍｇコホートで観察された変化と有意に異なり、ＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコアは治療経過にわたって増加した。

脳脊髄液におけるスルファチドレベル
異染性白質ジストロフィー患者に蓄積する代謝産物であるスルファチドの濃度を患者の脳脊髄液で調べた。図６に示すように、スルファチド濃度のわずかな減少が４０週目のすべてのコホートにおいて観察された。

ディスカッション
この実施例に記載された結果は、ＭＬＤを有する患者における組換えヒトＡＳＡのくも膜下腔内投与が許容可能な安全性プロファイルを有し、疾患の進行を安定化および／または遅延させることを実証する。この進行性の、そして最終的には致命的な疾患の治療法は現在のところ存在しないので、組換えヒトＡＳＡのくも膜下腔内投与はＭＬＤの治療に有望なアプローチである。

実施例２：異染性白質ジストロフィーの治療のための組換えアリールスルファターゼＡのさらなる安全性および有効性の評価
遅発乳児または若年型異染性白質ジストロフィーを有する患者は、実施例１に記載されたものと同様のデザインおよび包含および除外基準を有する臨床研究に登録される。特定の用量で組換えヒトＡＳＡの安全性をさらに評価するために、患者を物理的および神経学的に検査し、それらの生命徴候をモニターする。さらに、尿検査、血清化学、血清スルファチドレベル、完全血球数、脳脊髄液のルーチンおよびバイオマーカー分析、ならびに心電図を含む一連の分析が行われる。さらに、抗ｒｈＡＳＡ抗体濃度および／または代謝産物（例えば、スルファチド、リゾ（ｌｙｏ−）スルファチドおよび／またはＮ−アセチルアスパラトール）レベルは、脳脊髄液、尿および血液などの様々な流体中で測定される。代謝産物レベルは、プロトン磁気共鳴分光法によって脳の深部白質において評価することもできる。

効力を評価するために、ベースラインからのＧＭＦＭ−８８スコアの１つ以上の変化、運動ニューロン伝導指標（神経伝導速度、複合運動活動電位、および遠位潜時など）、感覚神経伝導指標（例えば神経伝導速度、振幅、遠位潜伏期）ＭＬＤ関連異常、体性感覚誘発電位、機能的内視鏡的腫脹評価、および脳幹聴覚誘発反応を検出するための磁気共鳴イメージングおよび／または磁気共鳴分光法が評価される。

実施例３：脳脊髄液中のスルファチド濃度の経時変化
小児は臨床試験に登録され、１０ｍｇ、３０ｍｇ、または１００ｍｇの組換えヒトアリールスルファターゼＡを、２週間おきにくも膜下腔内投与により、４０週間投与した。図７は、何人かの子供からのコホートによるデータを示し、２つの兄弟対（３０ｍｇ用量で１対および１００ｍｇ用量で１対）からのデータを含む。図７に示すように、３０ｍｇおよび１００ｍｇの投与量を与えられた小児において特に顕著な脳脊髄液中のスルファチドレベルの低下に伴う一般的傾向があった。さらに、１００ｍｇの組換えヒトアリールスルファターゼＡを投与された小児では、スルファチドレベルは最終的に正常範囲の上限内に低下した。

実施例４：くも膜下腔内に送達されたｒｈＡＳＡは、１０４週間以上忍容性が良好であった
実施例１〜３に記載された３つのコホートは、安全性の分析および第１０４週までの他のアウトカム評価（最初の４０週間の用量漸増試験（図８）を含む）を含む長期延長試験の対象となった。ＭＬＤの子供は、１２歳未満の場合、最初の４０週間の試験に登録する資格があり；彼らの最初のＭＬＤ症状の出現が３０ヵ月齢以前であり；スクリーニングでは、片手で支えながら１０歩歩くことができた。対象となる患者は、３つの漸増用量コホート（コホート１、ｒｈＡＳＡ １０ｍｇ；コホート２、ｒｈＡＳＡ ３０ｍｇ；コホート３、ｒｈＡＳＡ １００ｍｇ）のうちの１つに順次登録した。各患者には、初回投与を受ける前に髄腔内薬物送達装置（ＩＤＤＤ）を外科的に埋め込んだ。研究の初期段階で１１人の患者にＰＯＲＴ−Ａ−ＣＡＴＨ ＩＩ（Ｓｍｉｔｈｓ Ｍｅｄｉｃａｌ ＡＳＤ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ Ｐａｕｌ，ＭＮ，ＵＳＡ）を移植し、８人の患者にＳＯＰＨ−Ａ−ＰＯＲＴ ＭｉｎｉＳ（Ｓｏｐｈｙｓａ，Ｏｒｓａｙ，Ｆｒａｎｃｅ）を移植した（もともとＰＯＲＴ−Ａ−ＣＡＴＨ ＩＩを移植した後にこのデバイスに移行した１人の患者を含む）。

２週間ごとにｒｈＡＳＡのくも膜下腔内注射を子供に行った。最初の４０週間の研究の後、ｒｈＡＳＡ用量はコホート１および２（コホート１、段階的）で個々に増加し、すべての患者は最終的に進行中の研究においてｒｈＡＳＡ １００ｍｇを受けた。高用量への段階的拡大の決定は、患者が前回の用量の少なくとも２回の投与を受けた後のデータ安全監視委員会のレビューに基づいていた。主要アウトカム評価は、ｒｈＡＳＡおよびＩＤＤＤの安全性であった。１０４週間で評価された他の重要なアウトカムには、運動機能の変化が含まれ、粗大運動能力尺度−８８（ＧＭＦＭ−８８）合計スコア（０〜１００％の範囲）、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）を用いて評価したＭＬＤ重症度の変化、Ｅｉｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．と同様の採点方法（範囲０〜３４、スコアが高いほど疾患の重症度が高いことを示す）（例えば、Ｅｉｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．ＡＪＮＲ Ａｍ Ｊ Ｎｅｕｒｏｒａｄｉｏｌ．２００９ Ｎｏｖ；３０（１０）：１８９３−７参照。）、磁気共鳴分光法および脳脊髄液（ＣＳＦ）中のスルファチド濃度の変化によって評価される脳の白質中のＮ−アセチルアスパルテート（ＮＡＡ）のレベルの変化を用いて評価された。表８は、この研究の患者人口統計を示す。
表８：患者人口統計
安全性

記録された有害事象（ＡＥ）の１０４週までの要約が表９に示されている。１１名の患者は少なくとも１種類のＩＤＤＤ関連ＡＥを経験し、１４名は少なくとも１種類の重篤ＡＥ（ＳＡＥ）を経験した。６人の患者が少なくとも１つのＩＤＤＤ関連ＳＡＥを経験した。１３人の患者が少なくとも１つのＡＥを経験した。このＡＥは、調査治療に関連すると判断され、最も頻繁に発熱（ｎ＝６）と判定された。
表９：最大１０４週間の有害事象の概要

運動機能
ベースラインから１０４週までの全てのコホートにおいて減少した平均ＧＭＦＭ−８８合計スコアを図９Ａに示す。コホート３の２人の子供（治療開始時に２３歳および１０７ヶ月）は、運動機能の安定化の証拠を示し、絶対的ＧＭＦＭ−８８合計スコアは図９Ｂのアスタリックスとして示される１０４週目まで４０％を超えていた。１０４週で、これらの子供の１人（治療開始時に２３ヶ月齢）は、９４．３％のＧＭＦＭ−８８合計スコアを有した。４２ヵ月齢で治療を開始したこの患者の兄弟姉妹（コホート３由来）も、ほぼ同年齢で１２．２％のＧＭＦＭ−８８スコアを有し、１０４週では１３．７％のスコアを示した。３０ヶ月を超える健康な子供の平均ＧＭＦＭ−８８合計スコアは、０〜６歳の健康な３４人の子供のスコアに基づいて＞９０％であると推定された（例えば、Ｓｅｓｓａ Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ ２０１６；３８８：４７６−８７参照）。ベースラインから第１０４週までのＧＭＦＭ−８８合計スコアにおける平均変化±標準偏差。４０週後、コホート１および２の患者は、個々の用量を個別に増加させ（コホート１、段階的）、すべての患者は最終的にｒｈＡＳＡ １００ｍｇを受けた。

ＭＬＤ重症度の尺度
コホート１およびコホート２ではベースラインから１０４週まで平均ＭＲＩ−ＭＬＤ重症度スコアの合計が増加したが、しかしながら、それはコホート３（図１０）において同じ期間にわたって安定しているようであった。ベースライン時の平均±標準偏差合計ＭＲＩ−ＭＬＤ重症度スコア（スコアの範囲は０〜３４、スコアが高いほど疾患の重症度が高いことを示す）くも膜下腔内に送達されたｒｈＡＳＡの、治療の１０４週間にわたる脳白質における平均ＮＡＡ／クレアチン代謝物比に対する効果を評価した。正面（図１１Ａ）および正面−頭頂（図１１Ｂ）白質における平均ＮＡＡ／クレアチン代謝産物比は、コホート２および３では１０４週間にわたって安定して見えたが、コホート１では減少する傾向があった。ＮＡＡ／クレアチン比の減少は、ニューロンの損失およびＭＬＤ疾患の進行を示す。心室白質ＮＡＡ／クレアチン比は２．５〜６歳の健康な４人の子供で１．５１〜２．３０であった（例えば、Ａｓｓａｄｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｅｎｔ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ Ｄｉｓ ２０１３；５：２５−３０参照）。

ＣＳＦスルファチド濃度
平均ＣＳＦスルファチド濃度は、ベースラインから第１０４週まですべてのコホートにおいて減少し、コホート３は第１５週（図１２）からの正常範囲（６０人の小児患者からのＣＳＦサンプルに基づいて≦０．１１μｇ／ｍＬ）であった。ベースラインＣＳＦスルファチドレベルは、コホート３において他の２つのコホートよりも低かった。

延長実験の概要
くも膜下腔内に送達されたｒｈＡＳＡは、ＭＬＤの小児において良好な忍容性を示した。１０４週の治療期間にわたり運動機能の全般的な低下があったが、研究の開始時からｒｈＡＳＡ１００ｍｇを受けた患者（コホート３）において治療反応の証拠があった。コホート３の平均ＭＲＩ−ＭＬＤ重症度スコアおよび白質ＮＡＡレベルの変化は最小限であった。コホート３の２人の患者は、運動機能の安定化を示した。コホート１および２では治療反応が明らかでなかった。この研究の１人の子供は、幼児ＭＬＤの後期には非典型的であり、若年ＭＬＤのより代表的なものであり得る。これらの知見は、遅発乳児型異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）患者の潜在的治療法として、くも膜下腔内に投与されたｒｈＡＳＡの継続的な開発を支持している。続いて６人の追加の子供（コホート４）が研究に登録され、現在、毎週ｒｈＡＳＡ １００ｍｇを受けている。

本明細書および特許請求の範囲で使用される冠詞「ａ」および「ａｎ」は、明確に反対の指示がない限り、複数の指示対象を含むと理解されるべきである。グループの１つまたは複数のメンバーとの間に「または」を含むクレームまたは説明は、グループメンバーの１つ、１以上、またはすべてが、文脈から逆のまたはそうでないことが示されていない限り、所与の製品またはプロセスに存在し、採用され、またはそうでなければ関連する場合に満足されると考えられる。本発明は、グループのちょうど１つのメンバーが所与の製品またはプロセスに存在し、使用され、または関連する実施形態を含む。本発明はまた、２つ以上の、またはグループメンバー全体が所与の製品またはプロセスに存在し、使用され、または関連する実施形態も含む。さらに、本発明は、別段の指示がない限り、または当業者には矛盾または不一致が生じることが明らかでない限り、列挙された請求項の１つ以上からの１つ以上の制限、要素、句、記述的用語などが、同じ基本クレーム（または関連する他の請求項）に従属する別の請求項に導入されるすべての変形、組み合わせ、および置換を包含することが理解されるべきである。要素がリスト（例えば、マーカッシュグループまたは類似のフォーマット）として提示される場合、要素の各サブグループも開示され、任意の要素がグループから除去され得ることが理解されるべきである。一般に、本発明または本発明の態様は、特定の要素、特徴などを含むものとして言及し、本発明の特定の実施形態または本発明の態様は、そのような要素、特徴などからなるか、またはそれらから本質的になることを理解されたい。簡潔にするために、これらの実施形態は、すべての場合において、本明細書中に多くの言葉で具体的に記載されているわけではない。特定の排除が明細書に列挙されているかどうかにかかわらず、本発明の任意の実施形態または態様は、特許請求の範囲から明白に除外することができることも理解されるべきである。本発明の背景を説明し、その実施に関するさらなる詳細を提供するために本明細書で参照される刊行物、ウェブサイトおよび他の参考資料は、参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (75)

1. 異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して１つ以上の運動機能の低下を改善、安定化、または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法。
2. 前記組換えＡＳＡ酵素の投与は、さらに、１つ以上の認知機能、適応機能、および／または実行機能の低下を改善、安定化、または低減させることをもたらす、請求項１に記載の方法。
3. 前記１つ以上の運動機能は、粗大運動機能を含む、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記粗大運動機能は、粗大運動能力尺度（ＧＭＦＭ）試験により評価される、請求項３に記載の方法。
5. 前記ＧＭＦＭ試験は、ＧＭＦＭ−８８である、請求項４に記載の方法。
6. 前記ベースラインＧＭＦＭ−８８スコアは、４０％超である、請求項５に記載の方法。
7. 前記ベースラインＧＭＦＭ−８８スコアは、４０％未満である、請求項５に記載の方法。
8. 前記組換えＡＳＡ酵素の投与は、１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％未満の前記ＧＭＦＭ−８８スコアの低減をもたらす、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記組換えＡＳＡ酵素の投与は、前記ＧＭＦＭ−８８スコアの実質的な安定化をもたらす、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
10. 前記組換えＡＳＡ酵素の投与は、前記ＧＭＦＭ−８８スコアの改善をもたらす、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
11. 異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、
    治療上有効な用量で、かつ、バイオマーカーのベースラインレベルに対して脳脊髄液、尿、血液、および血清からなる群から選択される体液中におけるＭＬＤで蓄積する前記バイオマーカーのレベルを低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法。
12. 前記バイオマーカーは、スルファチド、リゾスルファチド、およびその組み合わせからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
13. 前記バイオマーカーは、スルファチドである、請求項１２に記載の方法。
14. 前記体液は、脳脊髄液である、請求項１１、１２、または１３に記載の方法。
15. 前記脳脊髄液における前記ベースラインのスルファチドレベルは、約０．１μｇ／ｍＬ超である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記脳脊髄液における前記ベースラインのスルファチドレベルは、約０．２μｇ／ｍＬ超である、請求項１４に記載の方法。
17. 前記脳脊髄液における前記ベースラインのスルファチドレベルは、約０．３μｇ／ｍＬ超である、請求項１４に記載の方法。
18. 前記組換えＡＳＡ酵素の投与は、約０．１μｇ／ｍＬ以上の前記脳脊髄液におけるスルファチドレベルの低減をもたらす、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
19. 前記組換えＡＳＡ酵素の投与は、約０．２μｇ／ｍＬ以上の前記脳脊髄液におけるスルファチドレベルの低減をもたらす、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
20. 異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、
    治療上有効な用量で、かつ、バイオマーカーのベースラインレベルに対して脳組織中におけるＭＬＤで低減される前記バイオマーカーのレベルを増加させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法。
21. 前記脳組織は脳の深部白質である、請求項２０に記載の方法。
22. 前記バイオマーカーは代謝産物である、請求項２０または２１に記載の方法。
23. 前記代謝産物はＮ−アセチルアスパラギン酸である、請求項２２に記載の方法。
24. Ｎ−アセチルアスパラギン酸のレベルはプロトン磁気共鳴分光法により評価される、請求項２３に記載の方法。
25. 異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）症候群を治療する方法であって、
    治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳病変併発を安定化または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、治療を必要とする対象に対してくも膜下腔内に投与する工程を含む、方法。
26. 脳病変併発は、ＭＬＤ ＭＲＩ（磁気共鳴画像法）重症度スコアによって評価される、請求項２５に記載の方法。
27. 前記組換えＡＳＡ酵素の投与が、ベースラインに対する前記対象における前記ＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコアの低減をもたらす、請求項２６に記載の方法。
28. 前記組換えＡＳＡ酵素の投与が、ベースラインに対する前記対象における前記ＭＬＤ ＭＲＩ重症度スコアの安定化をもたらす、請求項２６に記載の方法。
29. 前記治療上有効な用量は１０ｍｇ超である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
30. 前記治療上有効な用量は３０ｍｇ超である、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
31. 前記治療上有効な用量は１００ｍｇ超である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
32. 前記治療上有効な用量は２００ｍｇ未満である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記投与間隔は１週間に１回である、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
34. 前記投与間隔は２週間に１回である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
35. 前記投与間隔は１ヶ月に１回である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
36. 前記対象は哺乳類である、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
37. 前記対象はヒトである、請求項３６に記載の方法。
38. 前記対象は１６歳以下である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
39. 前記対象は１２歳以下である、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
40. 前記対象は９歳以下である、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
41. 前記対象は６歳以下である、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
42. 前記対象は４歳以下である、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
43. 前記対象は３歳以下である、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
44. 前記対象は２歳以下である、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
45. 前記対象は１８ヶ月以下である、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
46. 前記対象は１２ヶ月以下である、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の方法。
47. 前記対象は６ヶ月以下である、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
48. 前記対象は少なくとも１つの異染性白質ジストロフィーの症状を示す、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の方法。
49. 前記対象は異染性白質ジストロフィーの何らかの症状も示さない、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の方法。
50. 前記対象は異染性白質ジストロフィーと診断されている、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の方法。
51. 前記対象は異染性白質ジストロフィーを発症するリスクがあると特定されている、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の方法。
52. 前記アリールスルファターゼＡは脊柱管内に投与される、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
53. 前記アリールスルファターゼＡは腰部に投与される、請求項５２に記載の方法。
54. 前記アリールスルファターゼＡは腰椎穿刺により投与される、請求項５３に記載の方法。
55. くも膜下腔内投与は、移植された髄腔内薬物送達装置（ＩＤＤＤ）への間欠的または連続的アクセスによる、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の方法。
56. 前記治療期間は少なくとも６ヶ月である、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
57. 前記治療期間は少なくとも９ヶ月である、請求項５６に記載の方法。
58. 前記治療期間は少なくとも１２ヶ月である、請求項５６に記載の方法。
59. 前記治療期間は少なくとも２４ヶ月である、請求項５６に記載の方法。
60. 前記対象において、前記組換えアリールスルファターゼＡの投与に関連する重篤な副作用が観察されない、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の方法。
61. 治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して１つ以上の運動機能の低下を改善、安定化、または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーを患うまたはそのリスクのある対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む方法における使用のための、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素。
62. 治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるスルファチドレベルを低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーを患うまたはそのリスクのある対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む方法における使用のための、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素。
63. 治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳病変併発を安定化または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーのリスクのある、またはそれを患う対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む方法における使用のための、組換えアリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）酵素。
64. 異染性白質ジストロフィーを治療または予防するための薬物の製造における組換えアリールスルファターゼＡ酵素の使用であって、前記治療は、
    治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して１つ以上の運動機能の低下を改善、安定化、または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、前記組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーのリスクのある、またはそれを患う対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む、使用。
65. 異染性白質ジストロフィーを治療または予防するための薬物の製造における組換えアリールスルファターゼＡ酵素の使用であって、前記治療は、
    治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるスルファチドレベルを低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、前記組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーのリスクのある、またはそれを患う対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む、使用。
66. 異染性白質ジストロフィーを治療または予防するための薬物の製造における組換えアリールスルファターゼＡ酵素の使用であって、前記治療は、
    治療上有効な用量で、かつ、ベースラインに対して脳病変併発を安定化または低減させるのに十分な治療期間の投与間隔で、前記組換えアリールスルファターゼＡ酵素を、異染性白質ジストロフィーのリスクのある、またはそれを患う対象に対して、くも膜下腔内に投与する工程を含む、使用。
67. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１に対して、アミノ酸レベルで少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜６６のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。
68. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１に対して、アミノ酸レベルで少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜６７のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。
69. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１に対して、アミノ酸レベルで少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜６８のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。
70. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１に対して、アミノ酸レベルで少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜６９のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。
71. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１〜７０のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。
72. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のものと４を超えないミスマッチを含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜７１のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。
73. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のものと３を超えないミスマッチを含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜７２のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。
74. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のものと２を超えないミスマッチを含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜７３のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。
75. 前記組換えＡＳＡ酵素は、配列番号１のものと１を超えないミスマッチを含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜７４のいずれか１項に記載の方法または組換えアリールスルファターゼＡ酵素。