JP2019507128A

JP2019507128A - イヌ抗ｃｄ２０抗体

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Publication number: JP2019507128A
Application number: JP2018539354A
Authority: JP
Inventors: ジェイムズ・デイビッド・パンクック
Original assignee: Elanco US Inc
Current assignee: Elanco US Inc
Priority date: 2016-02-18
Filing date: 2017-02-10
Publication date: 2019-03-14
Anticipated expiration: 2037-02-10
Also published as: CN108699152A; AU2017219596A1; EA039434B1; EP3416984B1; US10941206B2; DK3416984T3; BR112018016367A2; CA3014461C; US10519244B2; US20230257476A1; US20190194342A1; ES2868650T3; KR20180096804A; US12195548B2; EA201891499A1; WO2017142800A1; US20200131273A1; CA3014461A1; JP6661019B2; EP3416984A1

Abstract

本発明は、イヌタンパク質ＣＤ２０に対するイヌ化キメラ抗ＣＤ２０抗体、及びイヌにおける非ホジキンＢ細胞リンパ腫などのある特定の障害を治療するための使用方法に関する。

Description

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含んでおり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１６年２月１０日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、「Ｐ２０９１４配列表」と命名され、１４Ｋｂの大きさである。

本発明は、癌の治療の分野にある。

イヌリンパ腫は、多様な癌の群であり、イヌにおいて診断される最も一般的な癌である。イヌリンパ腫は集合的に、イヌにおいて診断される癌全体のおよそ７〜１４％に相当する。イヌリンパ腫には説明されたタイプが３０を超えており、これらの癌は、これらの癌は挙動において大きく変化する。いくつかは急速に進行し、治療なしでは急性に生命の危険にさらされるが、その他は、非常に緩徐に進行し、慢性の無痛性疾患として対処される。リンパ腫は、体内のいかなる器官へも影響し得るが、最も一般的にはリンパ節において発症した後、脾臓、肝臓、及び骨髄などの他の器官へ拡がる。

ＣＤ２０は、４回膜貫通領域を有する細胞表面タンパク質である。ＣＤ２０分子は、β細胞の増殖及び分化の調節に関与している。ＣＤ２０抗原は、正常及び悪性ともに、ほぼすべてのＢ細胞の表面上のみに存在する。

リツキシマブは、免疫系Ｂ細胞の表面上に主として認められるヒトタンパク質ＣＤ２０に対するキメラモノクローナル抗体である。リツキシマブは、Ｂ細胞を破壊し、それゆえ過剰数のＢ細胞、過活動性のＢ細胞、または機能不全のＢ細胞を特徴とするヒトにおける疾患を治療するために使用される。この疾患は、多くのリンパ腫、白血病、移植片拒絶、及び自己免疫障害を含む。

リツキシマブは、細胞表面上にＣＤ２０を有する正常及び悪性のヒトＢ細胞の両方を破壊する。この作用は、身体からのＢ細胞（癌性Ｂ細胞を含む）の除去を結果的に生じ、健常Ｂ細胞の新たな集団がリンパ系幹細胞から発生することを可能にする。

残念なことに、イヌリンパ腫の治療法は依然として分かりにくいままであり、それらを治療するのに有効である可能性があるより多くの異なる治療法が必要とされている。

Ｋ９ＬＯ−１３３は、イヌにおける成熟Ｂリンパ球を標的にするキメラ抗ＣＤ２０抗体である。Ｋ９ＬＯ−１３３は、イヌＢリンパ細胞におけるＣＤ２０へ結合する。Ｋ９ＬＯ−１３３は、イヌにおける非ホジキンＢ細胞リンパ腫及び他のタイプのリンパ腫のための治療に潜在的に有用である。

したがって、本発明は、イヌＣＤ２０へ特異的に結合する抗体を提供する。本発明はまた、リンパ腫の治療を必要とするリンパ腫癌イヌ患者へ、有効量のイヌＣＤ２０へ特異的に結合する抗体を投与することによって、イヌ患者におけるリンパ腫を治療する方法を提供する。本発明は、イヌＣＤ２０へ特異的に結合する抗体と、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む薬学的組成物を提供する。本発明はまた、イヌＣＤ２０へ特異的に結合し、プロテインＡへも結合する抗体を提供する。

Ｋ９ＬＯ−１３３抗体で治療したイヌにおける−５〜３７日後のＢリンパ球ＣＤ２１＋及びＣＤ２２＋ならびにＴ−リンパ球ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の血清レベルを図示する。

他に示されない限り、「抗体」（Ａｂ）という用語は、ジスルフィド結合によって相互連結された２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）を含む免疫グロブリン分子を指す。各鎖のアミノ末端部分は、その中に含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識を主に担う約１００〜約１１０アミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクタ機能を主に担う定常領域を画定する。

本明細書で使用する際、「抗原結合フラグメント」という用語は、当該抗原へ結合する能力を保有する何らかの抗体フラグメントを指す。このような「抗原結合フラグメント」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ−Ｆｃのフラグメント及びダイアボディからなる群から選択することができる。抗体の抗原結合フラグメントは典型的には、少なくとも１つの可変領域を含むだろう。好ましくは、抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。より好ましくは、本明細書で使用する際の抗原結合フラグメントは、ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含み、イヌＣＤ２０へ抗原結合特異性を与える（すなわち、「イヌＣＤ２０結合フラグメント」）。

本明細書で使用する際、「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣポリペプチド及びＨＣポリペプチドの可変領域内に見出される非連続抗原結合部位を指す。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ，ｅｔａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−９３（１９７１）、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ，ｅｔａｌ，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１−３２４２（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２−７４５（１９９６）、及びＮｏｒｔｈ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０６，２２８−２５６（２０１１）を含むその他のものによって説明されてきており、当該画定は、互いに比較した際、アミノ酸残基の重複または部分集合を含む。

本明細書中で使用する際、「軽鎖可変領域」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列、ならびに軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲＷ）を含む抗体分子のＬＣの一部を指す。

本明細書中で使用する際、「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列、ならびに重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲＷ）を含む抗体分子のＨＣの一部を指す。

ＣＤＲは、フレームワーク領域（「ＦＲＷ」）と呼ばれる、より保存されている領域に散在している。各ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲは、ＦＲＷ１、ＣＤＲ１、ＦＲＷ２、ＣＤＲ２、ＦＲＷ３、ＣＤＲ３、ＦＲＷ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲＷから構成される。軽鎖の３つのＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称され、ＨＣの３つのＣＤＲは「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用を形成する残基の大部分を含む。ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の付番及び配置は、既知の慣例（例えば、Ｋａｂａｔ（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ（１９８７）及び／またはＮｏｒｔｈ（２０１１））に従う。本発明の異なる実施形態では、抗体のＦＲＷは、生殖系列配列と同一であってもよく、または天然もしくは人工的に修飾されていてもよい。

特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０Ａｂは、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって好都合に達成され得る。

他に示されない限り、抗体におけるアミノ酸残基を数によって称する際、ＥＵ付番システムが本明細書において、当該技術分野において従来使用されたのと同様に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ，ｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１−３２４２（１９９１）を参照されたい）。

本明細書で使用する際、「キット」という用語は、第１の容器がＫ９ＬＯ−１３３Ａｂを含有し、第２の容器が薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含有する、少なくとも２つの別個の容器を含むパッケージを指す。本明細書で使用する際、「キット」という用語はまた、第１の容器がＫ９ＬＯ−１３３Ａｂ、及び好ましくはリンパ腫以外の癌の治療のための別の抗体を含有する、少なくとも２つの別個の容器を含むパッケージを指す。「キット」はまた、これらの第１及び第２の容器の内容物のすべてまたは一部を癌患者に投与するための指示書を含むことができる。任意に、これらのキットはまた、既知の化学療法剤を含む組成物を含む第３の容器を含む。

本明細書で使用する際、「治療する」、「治療するため」、または「治療」という用語は、既存の症状、障害、状態または疾患の進行または重症度を抑制、減速、停止、軽減、または逆転させることを指す。

本明細書で使用する際、「有効量」という用語は、患者への単回用量投与または複数回用量投与の際に、診断または治療の下にある患者における有効な応答を提供するイヌ化抗ＣＤ２０Ａｂの量または用量を指す。

本明細書で使用する際、患者の「有効な応答」または薬剤の併用による治療に対する患者の「応答性、または「治療効果」は、イヌ化抗ＣＤ２０Ａｂの投与の際に患者へ与えられる臨床上または治療上の利点（複数可）を指す。このような利点（複数可）は、次のうちの何らか１つまたは複数を含む。生存の延長（全般的な生存及び進行のない生存を含む）、目標とする応答を結果的に生じること、Ｂ細胞量の減少、患者の血液または他の組織及び流体におけるＢ細胞の濃度低下、腫瘍の退縮、腫瘍の重量または大きさの縮小、疾患の進行までの時間が長くなること、生存期間の延長、進行のない生存が長くなること、全般的な応答率の改善、応答持続時間の延長、ならびに生活の質の改善及び／または癌の徴候もしくは症状の改善など。

有効量は、既知の技術を使用して、また類似の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者としての担当診断医によって容易に決定され得る。患者にとっての有効量を決定する上で、限定されないが以下を含む多数の要因が担当診断医によって考慮される：患者の種または品種、その体格、年齢、及び総体的健康、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の程度または関与または重症度、個々の患者の反応、投与される特定の化合物、投与様式、投与される調製物の生物学的利用能特性、選択される投与計画、併用薬の使用、及び他の関連する状況。

Ｋ９ＬＯ−１３３
ＡＭＥ−１３３Ｖは、第２世代のヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。Ｋ９ＬＯ−１３３は、イヌにおけるＣＤ２０タンパク質へ特異的に結合するＡＭＥ−１３３Ｖの部分的にイヌ化した（イヌ定常領域を伴うヒト可変領域）アイソタイプＣモノクローナル抗体版である。

実施形態において、Ｋ９ＬＯ−１３３は、重鎖及び軽鎖の操作された可変領域、ＣＤＲならびにフレームワークを含む。実施形態において、Ｋ９ＬＯ−１３３のＬＣＤＲ１における残基バリアントが導入される。実施形態において、Ｋ９ＬＯ−１３３のＬＣＤＲ１残基バリアントは、Ｖ１６５Ｇである。実施形態において、バリアントヒンジ領域が導入される。実施形態において、ヒンジの下流の可変領域が付加される。実施形態において、ヒンジの下流のバリアント領域は、Ｋ９ＬＯ−１３３をプロテインＡへ結合させる。

Ｋ９ＬＯ−１３３は、配列番号１に対応する重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１のアミノ酸をコードする対応するヌクレオチド配列の配列番号２を有する。Ｋ９ＬＯ−１３３は、配列番号３の重鎖可変領域配列を有する。重鎖可変配列領域はさらに、ＨＦＷＫ１（配列番号４）、ＨＣＤＲ１（配列番号５）、ＨＦＷＫ２（配列番号６）、ＨＣＤＲ２（配列番号７）、ＨＦＷＫ３（配列番号８）、及びＨＣＤＲ３（配列番号９）からなる。

Ｋ９ＬＯ−１３３は、配列番号１０に対応する軽鎖アミノ酸配列、及び配列番号１０のアミノ酸をコードする対応するヌクレオチド配列１１を有する。Ｋ９ＬＯ−１３３は、配列番号１２の軽鎖可変領域配列を有する。軽鎖可変配列領域はさらに、ＬＦＷＫ１（配列番号１３）、ＬＣＤＲ１（配列番号１４）、ＬＦＷＫ２（配列番号１５）、ＬＣＤＲ２（配列番号１６）、ＬＦＷＫ３（配列番号１７）、ＬＣＤＲ３（配列番号１８）、及びＪ領域（配列番号１９）からなる。

イヌリンパ腫組織におけるＣＤ２０発現
イヌリンパ腫組織におけるＣＤ２０発現は、ＡＭＥ−１３３Ｖ及びＫ９ＬＯ−１３３を用いた免疫組織化学的特性（ＩＨＣ）を用いて評価することができる。結合を検出するために、ＡＭＥ−１３３Ｖ及びＫ９ＬＯ−１３３は、ある濃度、例えば、１０μｇ／ｍＬにおけるイヌリンパ腫試料の凍結切片へ適用することができる。さらに、ＡＭＥ−１３３Ｖ及びＫ９ＬＯ−１３３は、適切な種及びタイプと符合した、検出抗体の抗原性特性とは異なる抗原性特性を有する陰性対照抗体、例えば、ＨｕＩｇＧ１と指定されたヒトＩｇＧ１（ＡＭＥ−１３３Ｖについて）及びＤｇＩｇＧと指定されたイヌＩｇＧ（Ｋ９ＬＯ−１３３について）のいずれかと置換することができる。他の対照は、アッセイからの検出抗体または陰性対照抗体の省略によって生じることができる（アッセイ対照）。

本質的に先に説明した通り検査した場合、ＡＭＥ−１３３Ｖ及びＫ９ＬＯ−１３３は、陽性対照単核白血球の７５％超の３＋染色を生じた。Ｋ９ＬＯ−１３３については、３＋染色は、イヌ脾臓の白脾髄におけるリンパ球において観察された。ＡＭＥ−１３３Ｖ及びＫ９ＬＯ−１３３は、イヌ脾臓における陰性対照平滑筋細胞（具体的には、Ｋ９ＬＯ−１３３については核）と特異的に反応することはなかった。陰性対照抗体ＨｕＩｇＧ１及びＤｇＩｇＧは、イヌ脾臓における陽性対照組織要素または陰性対照組織要素のいずれかと特異的に反応することはなかった。アッセイ対照スライドの染色もなかった。ＡＭＥ−１３３Ｖ及びＫ９ＬＯ−１３３と陽性対照組織要素との特異的反応ならびに陰性対照組織要素との特異的反応性の欠如、ならびに陰性対照抗体の欠如は、本アッセイが感度を有し、特異的であり、かつ再現性があることを示した。

ＣＤ２０は、検討した１０個のイヌリンパ腫試料のうち、８個において新生物細胞の７５％超において検出された。他の試料において、新生物細胞の１〜５％は、ＣＤ２０に対して陽性に染色された。

Ｋ９ＬＯ−１３３で治療したイヌ
非ホジキンリンパ腫の治療のためのリツキシマブのヒト用量は、３７５ｍｇ／ｍ^２である。概して、イヌ化学療法量は、癌のタイプにかかわらず、ヒト用量の４０％である。それゆえ、理論によって拘束されることなく、イヌ非ホジキンリンパ腫のための抗ＣＤ２０抗体の適切な開始用量は、約１５０ｍｇ／ｍ^２である。７ｋｇのイヌの体表面積に対して調整するために、１５０ｍｇ／ｍ^２の数に０．３７を乗じることによって修正した。イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の結果として生じる用量は、約５７ｍｇ／個体であった。

実施形態において、イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の用量は、体表面積平方メートル当たり約１４０ｍｇ〜約１６０ｍｇである。実施形態において、イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の用量は、体表面積平方メートル当たり約１３０ｍｇ〜約１７０ｍｇである。実施形態において、イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の用量は、体表面積平方メートル当たり約１１０ｍｇ〜約１９０ｍｇである。実施形態において、イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の用量は、体表面積平方メートル当たり約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇである。

実施形態において、イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の用量は、約５０ｍｇ／個体〜約６０ｍｇ／個体である。別の実施形態において、イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の用量は、約４０ｍｇ／個体〜約７０ｍｇ／個体である。実施形態において、イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の用量は、約３０ｍｇ／個体〜約１００ｍｇ／個体である。実施形態において、イヌへ投与されたＫ９ＬＯ−１３３の用量は、約１０ｍｇ／個体〜約１０００ｍｇ／個体である。

Ｋ９ＬＯ−１３３の効力は、イヌに０日後、７日後、及び３５日後に約１５０ｍｇ／ｍ^２静脈内投与することによって決定した。３匹の雌ビーグル犬を試験条件へ７日間順化させ、この間、当該雌ビーグル犬は、身体検査、体重測定、及び毎日の臨床観察に供された。投与当日、イヌに５７ｍｇのＫ９ＬＯ−１３３を、０．５〜１ｍＬ／分の速度の緩徐な静脈内注入を介して投与した。

血液を−５日後、２日後、９日後、１６日後、２３日後、３０日後、及び３７日後にリンパ球比率及び血清保持の決定のために収集した。

図１に図示するように、Ｋ９ＬＯ−１３３を用いた治療後の血液Ｂリンパ球の比率の低下があった。Ｂリンパ球（ＣＤ２１＋及びＣＤ２２＋）の比率は２日後に低下し、２日後〜３０日後に回復を示したが、３７日後までに基線レベルには依然として戻らなかった。ＣＤ８＋Ｔリンパ球は、１６日後に低下を示したが、２３日後までに基線レベルに戻った。ＣＤ４＋Ｔリンパ球の比率は、比較的定常のままであった。

したがって、Ｋ９ＬＯ−１３３の静脈内投与は、治療したイヌにおけるＣＤ８＋Ｔリンパ球の一過性減少とともに、循環中のＢリンパ球計数を減少させた。

態様において、アミノ酸配列が配列番号１２に定められる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、及びアミノ酸配列が配列番号３に定められる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を有する抗体が本明細書に開示される。実施形態において、当該抗体は、イヌＣＤ２０へ特異的に結合する。

別の態様において、アミノ酸配列が配列番号１０に定められる軽鎖（ＬＣ）、及びアミノ酸配列が配列番号１に定められる重鎖（ＨＣ）を有する抗体が本明細書に開示される。実施形態において、当該抗体は、イヌＣＤ２０へ特異的に結合する。

態様において、配列番号１０に定められるアミノ酸配列を各々有する２つの軽鎖（ＬＣ）、及び配列番号１に定められるアミノ酸配列を各々有する２つの重鎖（ＨＣ）を有する抗体が本明細書に開示される。実施形態において、当該抗体は、イヌＣＤ２０へ特異的に結合する。

別の態様において、リンパ腫を治療することを必要とするリンパ腫癌イヌ患者へ、アミノ酸配列が配列番号１２に定められる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、及びアミノ酸配列が配列番号３に定められる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を有する、イヌＣＤ２０へ特異的に結合する、有効量の抗体を含む、イヌ患者におけるリンパ腫を治療する方法が開示される。実施形態において、当該抗体は、アミノ酸配列が配列番号１０に定められる軽鎖（ＬＣ）、及びアミノ酸配列が配列番号１に定められる重鎖（ＨＣ）を有する。実施形態において、当該抗体は、Ｋ９ＬＯ−１３３である。

態様において、Ｋ９ＬＯ−１３３を、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに含有する薬学的組成物を有するキットが開示される。

別の態様において、アミノ酸配列が配列番号１０に定められる軽鎖（ＬＣ）、及びアミノ酸配列が配列番号１に定められる重鎖（ＨＣ）を有する抗体が開示され、当該抗体は、イヌＣＤ２０へ特異的に結合し、当該抗体は、プロテインＡへ結合する。

Ｋ９ＬＯ−１３３
Ｋ９ＬＯ−１３３は、１０ｍＭのクエン酸塩、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．５の中に２６．３ｍｇ／ｍＬで供給され得る。ビヒクルは、０．９％のＮａＣｌの生理塩類溶液であり得る。

Ｋ９ＬＯ−１３３の投与は、本試験におけるイヌについて０．３７ｍ^２であると概算された体表面積を基にし得る。各イヌは、各投与で１５０ｍｇ／ｍ^２（５７ｍｇ）のＫ９ＬＯ−１３３を受けた。用量は、５７ｍｇ（２．２ｍＬ）のＫ９ＬＯ−１３３をドローアップし、２７．８ｍＬの生理塩類溶液中に希釈して、注入用に総容積３０ｍＬにした。

フローサイトメトリー
Ｔリンパ球（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋）及びＢリンパ球（ＣＤ２１＋及びＣＤ２２＋）の量は、フローサイトメトリーによって決定することができる。フローサイトメトリーのための血液収集を給餌の前に実施した。およそ１ｍＬのＥＤＴＡ抗凝固剤処置した血液を基線（−５日後）ならびに２日後、９日後、１６日後、２３日後、３０日後及び３７日後の３匹のイヌから提供した。赤血球を塩化アンモニウム低張性緩衝液で溶解し、白血球をイヌＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１及びＣＤ２２と反応性のある抗体を用いて染色した。次に、結合していない抗体を除去し、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメータまたはＦＡＣＳＡｒｉａフローサイトメータにおける１０，０００個の白血球の獲得を得た。

リンパ腫試料
１０個の凍結イヌリンパ腫試料をトリミングし、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ（登録商標）ＯＣＴ（至適切断温度）コンパウンド中に包埋し、−８０℃を維持するよう設定した冷凍庫の中で切片作製時まで保存した。切片をおよそ５μｍで切断して、その後のＩＨＣ染色のために適切な数のスライドを作製した。

免疫組織化学染色
各リンパ腫試料由来の切片を、以下に詳述されるようにＩＨＣを用いて、ヒトＣＤ２０へ直接移動するヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体ＡＭＥ−１３３Ｖ、及びイヌＣＤ２０へ直接移動するキメライヌアイソタイプＣモノクローナル抗体Ｋ９ＬＯ−１３３を用いて染色した。ＡＭＥ−１３３Ｖは、リン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）中の１９．５ｍｇ／ｍＬ溶液にあった。Ｋ９ＬＯ−１３３は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の２．５ｍｇ／ｍＬ溶液にあった。

各染色実施において陽性対照材料及び陰性対照材料を含み、かつ染色特異性を確実にするための陰性対照抗体及びアッセイ対照のためのさらなるスライドを用いるＩＨＣ染色を実施した。ＡＭＥ−１３３Ｖのための染色手順、一次抗体及び二次抗体の希釈物、ならびに対照を予備染色の実施において定性化した。Ｋ９ＬＯ−１３３のための染色手順、一次抗体及び二次抗体の希釈物、ならびに対照を、発色染色実施という方法において定性化した。

ＡＭＥ−１３３Ｖ染色
間接的なイムノペルオキシダーゼ手順を用いて、イヌリンパ腫組織をＡＭＥ−１３３Ｖで染色して、ＣＤ２０を検出した。スライドをアセトン中に室温で１０分間、切片作製時に固定した。アセトン固定した凍結切片をリン酸緩衝塩類溶液、０．１５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．２ＰＢＳ中で２回すすいだ。次に、ＢｉｏｃａｒｅＰｅｒｏｘＡｂｏｌｉｓｈとともにスライドを室温で５分間インキュベーションによって内在性ペルオキシダーゼを自己消光させた。次に、このスライドをＰＢＳで２回すすぎ、アビジン溶液とともに１５分間インキュベートし、ＰＢＳで１回すすぎ、ビオチン溶液とともに１５分間インキュベートし、ＰＢＳで１回すすいだ。次に、このスライドを、非特異的結合を減少させるよう設計されたタンパク質ブロックを用いて２０分間処理した。タンパク質ブロックを次の通り調製した。ＰＢＳ＋１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．５％カゼイン、及び３％ロバ血清。

タンパク質ブロックの後、一次抗体ＡＭＥ−１３３Ｖ、ヒトＩｇＧ１、または何もなしをスライドへ１０μｇ／ｍＬの濃度で１時間適用した。次に、このスライドをＰＢＳで２回洗浄し、ビオチン化二次抗体（ロバ抗ヒトＩｇＧ）をスライドへ３０分間適用した。次に、このスライドをＰＢＳで２回洗浄し、ＡＢＣＥｌｉｔｅ試薬と３０分間反応させ、ＰＢＳで２回すすいだ。次に、ＤＡＢをペルオキシダーゼ反応のための基質として４分間適用した。スライドはすべて水道水ですすぎ、対比染色し、脱水し、及び包埋した。ＰＢＳ＋１％ＢＳＡは、一次抗体及びＡＢＣＥｌｉｔｅ試薬のための希釈剤として機能した。（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）＋イヌＩｇＧ（１：２５希釈）は、二次抗体のための希釈剤として機能した。

Ｋ９ＬＯ−１３３染色
間接的イムノペルオキシダーゼ手順を使用して、イヌリンパ腫組織をＫ９ＬＯ−１３３で染色して、ＣＤ２０を検出することができる。Ｋ９ＬＯ−１３３の標識付け（例えば、ビオチン、ペルオキシダーゼ、またはフルオレセイン）の必要条件及び二次標識した抗イヌＩｇＧと検討した組織に内在するＩｇＧの間の非特異的反応性の防止は、以下のプロセスにより除去することができる。標識した二次抗体は、組織凍結切片への適用の前に、一次／二次抗体混合物のインキュベーションによって、非標識一次抗体（Ｋ９ＬＯ−１３３、ＤｇＩｇＧ、または何もなし）へ特異的に付着させておいた。検出試薬または陰性対照抗体（１０μｇ／ｍＬの濃度の）を、１５μｇ／ｍＬの濃度のビオチン化ウサギ抗イヌＩｇＧ、Ｆｃフラグメント特異的抗体（ＲｂαＤｇＩｇＧ）と混合して、染色前日に一次抗体と二次抗体の比が１：１．５に到達した。

あらかじめ複合体形成した抗体を、４℃を維持するよう設定した冷蔵庫の中のロッカー機構上で一晩インキュベートした。後日、抗体の使用の前に、イヌガンマグロブリンを各バイアルに添加して、３ｍｇ／ｍＬの終濃度に到達した後、４℃を維持するよう設定した冷蔵庫の中のロッカー機構上で少なくとも２時間インキュベートした。切片作製時に、スライドをアセトン中で１０分間、室温で固定した。染色当日、このスライドをＴｒｉｓ緩衝塩類溶液（０．１５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．６のＴＢＳ）で２回すすいだ。次に、このスライドをＢｉｏｃａｒｅＰｅｒｏｘＡｂｏｌｉｓｈ試薬とともに室温で５分間インキュベーとすることによって、内在性ペルオキシダーゼを自己消光させた。次に、このスライドをＴＢＳで２回すすぎ、アビジン溶液とともに１５分間インキュベートし、ＴＢＳで１回すすぎ、ビオチン溶液とともに１５分間インキュベートし、ＴＢＳで１回すすいだ。次に、このスライドを、非特異的結合を減少させるよう設計されたタンパク質ブロックを用いて２０分間処理した。

タンパク質ブロックは、次の通り調製した。ＴＢＳ＋１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．５％カゼイン、及び３％正常ウサギ血清。タンパク質ブロックの後、あらかじめ複合体形成した一次抗体及び二次抗体をこのスライドへ２時間適用した。次に、このスライドをＴＢＳで２回すすぎ、ＡＢＣＥｌｉｔｅ試薬を用いて３０分間処理し、ＴＢＳで２回すすいだ後、ＤＡＢをペルオキシダーゼ反応のための基質として用いて４分間処理した。スライドはすべて水道水ですすぎ、対比染色し、脱水し、及び包埋した。ＴＢＳ＋１％ＢＳＡは、抗体すべて及びＡＢＣ試薬のための希釈剤として機能した。各染色実施は、イヌ脾臓の凍結切片の陽性対照（単核白血球）、及び陰性対照（平滑筋細胞）を含んだ。
配列表
配列番号１；ＰＲＴ；人工配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＲＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＡＩＹＰＬＴＧＤＴＳＹＮＱＫＳＫＬＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＴＹＶＧＧＤＷＱＦＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＴＡＰＳＶＦＰＬＡＰＳＣＧＳＱＳＧＳＴＶＡＬＡＣＬＶＳＧＹＩＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＳＬＴＳＧＶＨＴＦＰＳＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＭＶＴＶＰＳＳＲＷＰＳＥＴＦＴＣＮＶＡＨＰＡＴＮＴＫＶＤＫＰＶＰＫＲＥＮＧＲＶＰＲＰＰＤＣＰＫＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＬＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＬＤＰＥＮＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＳＫＱＶＱＴＡＮＴＱＰＲＥＥＱＳＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＧＨＱＤＷＬＳＧＫＱＦＫＣＫＶＮＮＫＡＬＰＳＰＩＥＥＩＩＳＫＴＰＧＱＡＨＱＰＮＶＹＶＬＰＰＳＲＤＥＭＳＫＮＴＶＴＬＴＣＬＶＫＤＦＦＰＰＥＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＳＫＹＲＭＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＲＧＤＴＦＩＣＡＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＩＳＬＳＨＳＰＧＫ
配列番号２；ＤＮＡ；人工配列
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＡＧＡＧＧＴＧＡＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＧＡＧＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＴＣＴＣＣＴＧＴＡＡＧＧＧＴＴＣＴＧＧＣＣＧＴＡＣＡＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＣＣＧＧＧＡＡＡＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＧＧＣＴＡＴＴＴＡＴＣＣＣＴＴＧＡＣＧＧＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＣＧＡＡＡＣＴＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＧＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＧＣＣＴＣＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＴＣＧＡＣＴＴＡＣＧＴＧＧＧＣＧＧＴＧＡＣＴＧＧＣＡＧＴＴＣＧＡＴＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＣＧＧＣＣＣＣＣＴＣＧＧＴＴＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＴＣＣＣＡＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＡＣＧＧＴＧＧＣＣＣＴＧＧＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＴＣＡＧＧＣＴＡＣＡＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＡＡＣＴＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＣＧＧＣＴＣＣＴＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＴＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＣＣＡＧＣＧＡＧＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＧＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＴＡＡＡＧＴＡＧＡＣＡＡＧＣＣＡＧＴＧＣＣＣＡＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＴＧＧＡＡＧＡＧＴＴＣＣＴＣＧＣＣＣＡＣＣＴＧＡＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＧＣＣＣＡＧＣＣＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴＧＡＴＴＧＣＣＣＧＡＡＣＡＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＣＣＣＡＧＡＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＧＡＴＡＧＴＡＡＧＣＡＧＧＴＧＣＡＡＡＣＡＧＣＣＡＡＣＡＣＧＣＡＧＣＣＴＣＧＴＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＣＣＣＡＴＴＧＧＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＴＴＣＡＧＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＴＣＣＣＣＣＡＴＴＧＡＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＡＣＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＧＣＣＣＡＴＣＡＧＣＣＴＡＡＴＧＴＧＴＡＴＧＴＣＣＴＧＣＣＧＣＣＡＴＣＧＣＧＧＧＡＴＧＡＧＡＴＧＡＧＣＡＡＧＡＡＴＡＣＧＧＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＡＣＴＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＧＡＧＡＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＡＡＧＴＡＣＣＧＣＡＴＧＡＣＣＣＣＧＣＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＴＧＡＡＧＡＴＧＧＧＴＣＣＴＡＣＴＴＣＣＴＡＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＴＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＧＧＡＧＡＣＡＣＣＴＴＣＡＴＡＴＧＴＧＣＧＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣＴＣＴＡＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＴＡＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＡＴＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡＴＧＡＴＡＧ
配列番号３；ＰＲＴ；人工配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＲＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＡＩＹＰＬＴＧＤＴＳＹＮＱＫＳＫＬＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＴＹＶＧＧＤＷＱＦＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号４；ＰＲＴ；人工配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣ
配列番号５；ＰＲＴ；人工配列
ＫＧＳＧＲＴＦＴＳＹＮＭＨ
配列番号６；ＰＲＴ；人工配列
ＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧ
配列番号７；ＰＲＴ；人工配列
ＡＩＹＰＬＴＧＤＴＳＹＮＱＫＳＫＬ
配列番号８；ＰＲＴ；人工配列
ＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣ
配列番号９；ＰＲＴ；人工配列
ＡＲＳＴＹＶＧＧＤＷＱＦＤＶ
配列番号１０；ＰＲＴ；人工配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＲＳＶＰＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＴＳＡＬＡＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＬＳＮＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＮＤＡＱＰＡＶＹＬＦＱＰＳＰＤＱＬＨＴＧＳＡＳＶＶＣＬＬＮＳＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＶＤＧＶＩＱＤＴＧＩＱＥＳＶＴＥＱＤＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＬＳＨＥＬＹＳＣＥＩＴＨＫＳＬＰＳＴＬＩＫＳＦＱＲＳＥＣＱＲＶＤ
配列番号１１；ＤＮＡ；人工配列
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＧＧＡＧＴＧＴＡＣＣＧＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＣＣＡＣＡＴＣＣＧＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＣＴＧＡＧＴＡＡＣＣＣＡＣＣＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＡＴＧＡＴＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴＴＧＴＴＣＣＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＴＴＧＣＴＧＡＡＴＡＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＴＧＴＣＡＴＣＣＡＡＧＡＣＡＣＡＧＧＣＡＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＧＧＡＣＡＧＴＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＡＴＧＴＣＣＡＧＴＡＣＴＧＡＧＴＡＣＣＴＡＡＧＴＣＡＴＧＡＧＴＴＧＴＡＣＴＣＣＴＧＴＧＡＧＡＴＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＣＡＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＣＡＡＡＧＧＡＧＣＧＡＧＴＧＴＣＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣ
配列番号１２；ＰＲＴ；人工配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＲＳＶＰＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＴＳＡＬＡＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＬＳＮＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３；ＰＲＴ；人工配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ
配列番号１４；ＰＲＴ；人工配列
ＲＡＳＲＳＶＰＹＩＨ
配列番号１５；ＰＲＴ；人工配列
ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩ
配列番号１６；ＰＲＴ；人工配列
ＹＡＴＳＡＬＡＳ
配列番号１７；ＰＲＴ；人工配列
ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ
配列番号１８；ＰＲＴ；人工配列
ＱＱＷＬＳＮＰＰＴ
配列番号１９；ＰＲＴ；人工配列
ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ

Claims

アミノ酸配列が配列番号１２に定められる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、アミノ酸配列が配列番号３に定められる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、抗体。
前記抗体がイヌＣＤ２０へ特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
アミノ酸配列が配列番号１０に定められる軽鎖（ＬＣ）と、アミノ酸配列が配列番号１に定められる重鎖（ＨＣ）と、を含む、抗体。
前記抗体がイヌＣＤ２０へ特異的に結合する、請求項３に記載の抗体。
配列番号１０に定められるアミノ酸配列を各々有する２つの軽鎖（ＬＣ）と、配列番号１に定められるアミノ酸配列を各々有する２つの重鎖（ＨＣ）と、を含む、抗体。
前記抗体がイヌＣＤ２０へ特異的に結合する、請求項５に記載の抗体。
イヌ患者におけるリンパ腫を治療する方法であって、このような治療を必要とするリンパ腫癌イヌ患者へ、アミノ酸配列が配列番号１２に定められる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、アミノ酸配列が配列番号３に定められる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む有効量の抗体を投与することを含み、前記抗体がイヌＣＤ２０へ特異的に結合する、方法。
前記抗体が、アミノ酸配列が配列番号１０に定められる軽鎖（ＬＣ）と、アミノ酸配列が配列番号１に定められる重鎖（ＨＣ）と、を含む、請求項７に記載の方法。
前記抗体がＫ９ＬＯ−１３３である、請求項７に記載の方法。
Ｋ９ＬＯ−１３３を、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに含む、薬学的組成物を含む、キット。
アミノ酸配列が配列番号１０に定められる軽鎖（ＬＣ）と、アミノ酸配列が配列番号１に定められる重鎖（ＨＣ）と、を含む抗体であって、イヌＣＤ２０へ特異的に結合し、かつプロテインＡへ結合する、抗体。
アミノ酸配列が配列番号１２に定められる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、アミノ酸配列が配列番号３に定められる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む抗体の、イヌ患者におけるリンパ腫を治療するための使用であって、前記抗体がイヌＣＤ２０へ特異的に結合する、使用。
前記抗体が、アミノ酸配列が配列番号１０に定められる軽鎖（ＬＣ）と、アミノ酸配列が配列番号１に定められる重鎖（ＨＣ）と、を含む、請求項１２に記載の使用。
前記抗体がＫ９ＬＯ−１３３である、請求項１２に記載の使用。
イヌ患者におけるリンパ腫を治療する上での使用のための、アミノ酸配列が配列番号１２に定められる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、アミノ酸配列が配列番号３に定められる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む抗体であって、イヌＣＤ２０へ特異的に結合する、抗体。