JP2019172718A

JP2019172718A - 植物性プロテオグリカン及びその用途

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Publication number: JP2019172718A
Application number: JP2018059079A
Authority: JP
Inventors: 真佐夫原; Masao Hara; 衛土田; Mamoru Tsuchida
Original assignee: NOF Corp
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 2018-03-26
Filing date: 2018-03-26
Publication date: 2019-10-10
Anticipated expiration: 2038-03-26
Also published as: JP7067182B2

Abstract

【課題】動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する植物性プロテオグリカンを提供すること。【解決手段】アカシア属植物（ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗ又はＡｃａｃｉａＳｅｙａｌＤｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから得られる、重量平均分子量９０万〜３５０万、且つ、総アルデヒド含有量が２．０μｍｏｌ当量／ｇ以下であることを特徴とする植物性プロテオグリカン。【選択図】なし

Description

本発明は植物性プロテオグリカンに関する。詳しくは、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する植物性プロテオグリカンに関する。

近年、糖蛋白質が顕著な生理活性を有すると明らかになってきた。糖蛋白質のひとつである動物性プロテオグリカンは、グルコサミノグリカン糖鎖と蛋白質との共有結合化合物の総称であり、その高い保湿性や細胞増殖促進作用から化粧品成分として広く用いられている。動物性プロテオグリカンとしては、例えば、サケ鼻軟骨、サメ鰭軟骨及びイカ頭部軟骨を由来としたものが知られている。しかし、動物性プロテオグリカンは軟骨に微量に存在する物質であるため、製造コストが高いという問題があった。また、化粧品市場や食品市場においては、動物由来成分よりも植物由来成分の方がイメージに優れるため、動物性プロテオグリカンも植物由来成分で代替することが求められていた。

植物には、動物性プロテオグリカンに類似する構造をもつアラビノガラクタン蛋白質が含まれている。アラビノガラクタン蛋白質はアラビノガラクタン糖鎖と蛋白質との共有結合化合物の総称でありプロテオグリカンである。アラビノガラクタン蛋白質のもつ効果として、乳化性が知られている（非特許文献１）。アラビアゴムは、アラビノガラクタン蛋白質、アラビノガラクタン、グリコプロテインの混合物である（非特許文献１）。アラビアゴムはアカシア（Ａｃａｃｉａ）の滲出液より回収される樹液である。アラビアゴムは、増粘作用、乳化作用を有することから化粧品用途において広く応用されており、毎年２千トン程度が国内に輸入されている。アラビアゴムは国内で入手が容易で、且つ、化粧品原料として「医薬部外品原料規格２００６」、食品原料として「第８版食品添加物公定書」に登録されている等の安全性等の面でも実績が多く、植物性プロテオグリカンの原料として有用といえる。

特開２０００−１６６４８９号公報特公平０５−４１６４２号公報特公平３−１６１６９号公報

ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ，２４６（１９９３）ｐ．３０３−３１８

特許文献１には、アラビアゴムを６０〜１４０℃で３０分以上加熱することによって乳化力が増強した変性アラビアゴムとなることが示されている。特許文献２には、アラビアゴムをカチオン交換樹脂で処理し、更に１００〜１６０℃で加熱変性すると、粘度が著しく増加することが示されている。これらの変性アラビアゴムは、変性前のアラビアゴムに比べて重量平均分子量が増加しており、生理活性も優れるものと予想されたが、本発明者の研究によれば、この方法で得られる変性アラビアゴムは、総アルデヒド含有量が高いために生理活性は低い。またこの変性アラビアゴムは、重量平均分子量が高すぎるためにべたつき感があり肌に塗布した際の使用感が悪く、臭いを生じる。これらのため、動物性プロテオグリカンの代替えにはならないことが分かった。

特許文献３には、アラビアゴムをカチオン交換樹脂で処理し、乳化安定性が向上することが示されている。本発明者の研究によれば、この方法で得られる精製アラビアゴムはアラビノガラクタン蛋白質が十分量存在しないために生理活性は低く、動物性プロテオグリカンの代替えにはならないことが分かった。

従って、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有し肌に塗布した際の使用感に優れた、臭いに問題のない植物性プロテオグリカンは未だ見出されていない。

本発明は上記の事情に鑑みて成されたものであり、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有し、肌に塗布した際の使用感に優れた臭いに問題のない植物性プロテオグリカンを提供することを目的とする。

本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、アカシア属植物（ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａＳｅｙａｌＤｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する植物性プロテオグリカンを得ることができることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］アカシア属植物（ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗ又はＡｃａｃｉａＳｅｙａｌＤｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから得られる、重量平均分子量９０万〜３５０万、且つ、総アルデヒド含有量が２．０μｍｏｌ当量／ｇ以下であることを特徴とする植物性プロテオグリカン。
［２］下記の工程（Ａ）及び工程（Ｂ）を含むことを特徴とする請求項１に記載の植物性プロテオグリカンの製造方法。
工程（Ａ）：アラビアゴム水溶液を濃度０．５〜４０％（ｗ／ｗ）に調製する工程
工程（Ｂ）：アラビアゴム水溶液を、ポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂および強酸性カチオン交換樹脂に供する工程
［３］上記［１］に記載の植物性プロテオグリカンを含む細胞増殖促進剤。
［４］上記［１］に記載の植物性プロテオグリカンを含む化粧料。
［５］上記［３］に記載の細胞増殖促進剤を含む化粧料。

本発明の植物性プロテオグリカンは、既知の動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有し、ヒトの皮膚に対して優れた保湿効果及び細胞増殖促進効果を発揮する。また、植物性であるため、化粧料原料に使用することで、優れた保湿効果及び細胞増殖促進効果を有し、イメージもよい化粧料を実現できる。

実施例１のアラビアゴムのポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理精製物のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。実施例２のアラビアゴムのハイポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理精製物のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。実施例３のアラビアゴムのハイポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理精製物のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である比較例１のアラビアゴムのサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。比較例２の脱塩アラビアゴムのサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。比較例３のアラビアゴムのポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂処理精製物のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。比較例４のアラビアゴムのゲル型強酸性カチオン交換樹脂処理精製物のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。比較例８の変性アラビアゴムのゲル型強酸性カチオン交換樹脂処理精製物のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。

以下、本発明を実施形態に即して説明する。
本発明でいう「植物性プロテオグリカン」とは、アカシア属植物（ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａＳｅｙａｌＤｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから、主にアラビノガラクタンとグリコプロテインを除いた精製物であり、有効量のアラビノガラクタン蛋白質成分を含み、細胞増殖活性を阻害するアルデヒド化合物の含有量が少ないことによって、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を示すものを指す。

本発明の植物性プロテオグリカンは、サイズ排除クロマトグラフィーに基づく重量平均分子量、および、総アルデヒド含有量によって規定される。即ち、サイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムの全ピークの重量平均分子量を求めたとき、その値が９０万〜３５０万となり、且つ、アルデヒド定量キットにより総アルデヒド含有量を求めたとき、その値が２．０μｍｏｌ当量／ｇ以下となる関係を満足することが特徴である。

上記の重量平均分子量は、好ましくは１００万〜３００万であり、より好ましくは１３０万〜２５０万、更に好ましくは１５０万〜２００万である。また、上記の総アルデヒド含有量は、好ましくは０．００５〜２．０μｍｏｌ当量／ｇであり、より好ましくは０．００５〜１．７μｍｏｌ当量／ｇ、更に好ましくは０．００５〜１．０μｍｏｌ当量／ｇ、特に好ましくは０．００５〜０．８μｍｏｌ当量／ｇである。

なお、重量平均分子量が３５０万を超える場合、アラビノガラクタン蛋白質成分は増加するものの、粘度が高くなる場合がある。このため、例えば、本発明の植物性プロテオグリカンを生理活性成分として化粧料を調製する際に、取り扱いが難しくなることがある。

（ＳＥＣ測定）
重量平均分子量は、多角度光散乱検出器と示差屈折率検出器をオンライン接続したゲル浸透クロマトグラフィーを使用することによって求めることができる。なお、本明細書において、多角度光散乱検出器を「ＭＡＬＳ検出器」、示差屈折率検出器を「ＲＩ検出器」とも称し、多角度光散乱検出器及び示差屈折率検出器をオンライン接続したサイズ排除クロマトグラフィーを「ＳＥＣ測定」と称する。当該ＳＥＣ測定によれば、当該ＲＩ検出器により測定対象物の濃度が算出され、当該ＭＡＬＳ検出器により絶対分子量が算出され、重量平均分子量を求めることができる。

本発明で採用されるＳＥＣ測定の条件は以下のとおりである。
システム：ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅＨＰＬＣシステム（島津製作所製）
カラム：Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６１０／３００ＧＬ（ＧＥヘルスケア・ジャパン製）
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
溶出溶媒：０．２Ｍ塩化ナトリウム水溶液
試料調製：分析試料を溶出溶媒にて希釈後１時間混合し、２５℃で１８時間静置し、０．４５μｍセルロースアセテートメンブランフィルターにて不溶物を除去した液を測定する。
試料濃度：０．４％（ｗ／ｖ）
試料液注入量：１００μｌ
カラムオーブン温調：３０℃
ＲＩ検出器：ＯｐｔｉｌａｂＴ−ｒＥＸ（温調２５℃）（ＷＹＡＴＴＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）
ＭＡＬＳ検出器：ＤＡＷＮＨＥＬＥＯＳ II ８＋（ＷＹＡＴＴＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）
ｄｎ／ｄｃ：０．１４１
データプロットモデル：Ｂｅｒｒｙ

（重量平均分子量）
上記条件で行ったＳＥＣ測定で得られたデータをＡｓｔｒａＶｅｒ．６．１．２．８４（ＷＹＡＴＴＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）等を用いて処理することにより、重量平均分子量が求められる。本発明でいう重量平均分子量は、ＳＥＣ測定によりＲＩ検出器及びＭＡＬＳ検出器を用いて得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線から上の全ピークの重量平均分子量を意味する。

（総アルデヒド含有量）
総アルデヒド含有量は、アルデヒド定量キットＡｍｐｌｉｔｅ^ＴＭＣｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃＡｌｄｅｈｙｄｅＱｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＫｉｔ（ＰｒｏｄｕｃｔＮｕｍｂｅｒ１００５１）（ＡＡＴＢｉｏｑｕｅｓｔ社）を使用することによって求めることができる。

本発明で採用される総アルデヒド含有量の測定条件は以下のとおりである。
検出容器：９６ウェルクリアボトムマイクロプレート
標準溶液調製：キット付属ＡｄｌｅｈｙｄｅＳｔａｎｄａｒｄを、キット付属バッファー水溶液を用いて希釈する。
標準溶液濃度：０、１、３、１０、３０、１００、３００、１，０００μＭ
標準溶液量：５０μｌ
試料調製：測定試料を超純水にて希釈する。
試料濃度：５．０％（ｗ／ｖ）
試料液量：５０μｌ
反応溶液量：５０μｌ
反応条件：２５℃・遮光
反応時間：３０分間
測定波長：４０５ｎｍ

上記条件で行った総アルデヒド含有量の測定において、得られた標準溶液の吸光度から、検量線を作成する。得られた試料の吸光度を検量線に当てはめ、試料の１ｇあたりの総アルデヒド含有量が求められる。

重量平均分子量は試料中の有効成分であるアラビノガラクタン蛋白質（高分子量成分）の占める割合を意味し、総アルデヒド含有量は精製物中の生理活性に悪影響を及ぼすアルデヒド化合物の残存の程度を意味する。

本発明の植物性プロテオグリカンは、重量平均分子量が９０万〜３５０万、且つ、総アルデヒド含有量が２．０μｍｏｌ当量／ｇ以下である関係を満足する。すなわち、生理活性に悪影響を及ぼすアルデヒド化合物の残存量が少なく、アラビノガラクタン蛋白質が十分量存在することから、後述の実施例（実施例１〜３）から明らかなように、保湿性、細胞増殖活性効果及び官能試験結果のいずれにおいても優れた結果が得られ、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する（表１参照）。

後述の比較例１、２は未精製のアラビアゴムであり、いずれにおいても重量平均分子量９０万以上を満足せず、生理活性に悪影響を及ぼすアルデヒド化合物を多量に含むため、その生理活性は動物性プロテオグリカンに比べて遥かに低く、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。

後述の比較例３はアラビアゴムのポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂処理精製物であり、重量平均分子量は１４２万である。しかし、生理活性に悪影響を及ぼすアルデヒド化合物の残存量が多いために、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有さず、樹脂の臭いが精製物に移り、肌に塗布した際の使用感が悪く、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。

後述の比較例４はアラビアゴムのゲル型強酸性カチオン交換樹脂処理精製物であり、生理活性に悪影響を及ぼすアルデヒド化合物の残存量が少ないが、重量平均分子量９０万以上を満足せず、アラビノガラクタン蛋白質が十分量存在しない。このため、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有さず、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。

後述の比較例５はアラビアゴムのゲル型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理精製物であり、生理活性に悪影響を及ぼすアルデヒド化合物の残存量が少ないが、重量平均分子量９０万以上を満足せずアラビノガラクタン蛋白質が十分量存在しない。このため、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有さず、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。

後述の比較例６はアラビアゴムのポーラス型II型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理精製物であり、生理活性に悪影響を及ぼすアルデヒド化合物の残存量が少ないが、重量平均分子量９０万以上を満足せずアラビノガラクタン蛋白質が十分量存在しない。このため、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有さず、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。

後述の比較例７はアラビアゴムのポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び弱酸性カチオン交換樹脂処理精製物であり、重量平均分子量は１４２万である。しかし、生理活性に悪影響を及ぼすアルデヒド化合物の残存量が多いために、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有さず、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。

後述の比較例８は、特許文献１のアラビアゴムを６０〜１４０℃で３０分以上加熱する方法により変性されたアラビアゴムであり、比較例１、２の未精製のアラビアゴムよりも細胞増殖活性効果がさらに低くなっている（表１参照）。なお、重量平均分子量は３９９万であり、高分子量成分を多く含む結果になっているが、加熱によって生理活性を阻害する成分であるアルデヒド化合物の含有量が高く、生理活性を発揮しない。また、重量平均分子量が高すぎるため、べたつき感があり、肌に塗布した際の使用感が悪い。

（原料）
本発明の植物性プロテオグリカンの原料として用いるアラビアゴムは、マメ科植物であるＡｃａｃｉａ属に属するＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗ、またはＡｃａｃｉａＳｅｙａｌＤｅｌｉｌｅの幹や枝から得られる天然滲出物である。特に、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗから得られるアラビアゴムを原料とするのが好ましい。アラビアゴムはその由来を問うことなく、いずれの産地由来のものであってもよい。また、アラビアゴムは、脱塩物、塊状物、玉状物、粗粉砕物、顆粒状、粒状や粉末状（スプレードライ粉末を含む）の形態で入手することができるが、本発明ではこれらの形状を問わず、いずれの形態のものも処理対象のアラビアゴム原料として使用することができる。

本発明の植物性プロテオグリカンは、アラビアゴムを、イオン交換樹脂処理に供して、精製することによって得られる。特に、アラビアゴムを水系溶媒に溶解して水溶液とし、この水溶液をイオン交換樹脂処理に供する方法が好ましい。

（アニオン交換樹脂）
本発明においては、アニオン交換樹脂処理により、アラビアゴム中の低分子不純物を除去し、高分子含有率を増加することができる。アニオン交換樹脂の樹脂母体としては、例えば、スチレン−ジビニルベンゼン等のスチレン系、及び（メタ）アクリル系、及びハイドロゲル系等が挙げられるが、低分子不純物の除去効率の観点からスチレン系が好ましい。また、アニオン交換樹脂の母体構造としては、一般に、ゲル型、ポーラス型が挙げられ、ゲル型とは、膨潤によって生じる細孔であるミクロポアのみを有するものをいい、ポーラス型とは、ミクロポアの他に、乾燥状態でも消滅しない物理的細孔であるマクロポアを有するものをいうが、低分子不純物の除去効率の観点から、アニオン交換樹脂はポーラス型であることが重要である。なお、本発明において、「ポーラス型」は、「ハイポーラス型」や「ＭＲ型（Macro-Reticular Type）」を含む概念である。「ハイポーラス型」はポーラス型よりも細孔をさらに発達させた構造を有するものを指し、ＭＲ型とは、ゲル微小ビーズの集合体のものを指す。アニオン交換樹脂の形態としては、例えば、粉状、球状、繊維状、膜状等が挙げられる。また、アニオン交換樹脂には、一般に、Ｉ型強塩基性、II型強塩基性及び弱塩基性のものが存在するが、低分子不純物の除去効率の観点から、Ｉ型強塩基性のものを使用することが重要である。

本発明で使用するポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂は、公知の方法により製造したものでも、市販品でもよい。市販のポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂として、例えば、ＤＩＡＩＯＮＰＡ３０６、ＰＡ３０８、ＰＡ３１２、ＰＡ３１６、ＰＡ３１８、ハイポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂として、ＨＰＡ２５、ＨＰＡ２５Ｌ（以上、三菱ケミカル製）、ＭＲ型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂として、アンバーライトＩＲＡ９００Ｊ、ＩＲＡ９０４、ＩＲＡ９５８（以上、オルガノ製）が挙げられる。アニオン交換樹脂は、小粒径部をカットしたタイプ、大粒径部をカットしたタイプ、脱臭処理したタイプ、カラミ防止処理したタイプでもよい。アニオン交換樹脂の対イオンは、水酸化物イオン、塩化物イオン、亜硫酸水素イオン等が挙げられるが、特に限定されない。

また、アニオン交換樹脂の総交換容量は特に限定されないが、低分子不純物の除去効率の観点から、０．１〜３．０ｍｅｑ／ｍＬが好ましく、より好ましくは０．２〜２．０ｍｅｑ／ｍＬ、更に好ましくは０．３〜１．５ｍｅｑ／ｍＬ、特に好ましくは０．４〜１．２ｍｅｑ／ｍＬである。アニオン交換樹脂の使用量は、低分子不純物の除去効率の観点から、アラビアゴム１ｋｇに対し１．０〜２０Ｌとなる量が好ましく、より好ましくは２．０〜１５Ｌ、更に好ましくは４．０〜１０Ｌとなる量である。

（カチオン交換樹脂）
本発明においては、強酸性カチオン交換樹脂処理により、アルデヒド化合物含有量を減少することができる。強酸性カチオン交換樹脂の樹脂母体としては、例えば、スチレン−ジビニルベンゼン等のスチレン系、及び（メタ）アクリル系、及びハイドロゲル系等が挙げられるが、アルデヒド化合物除去効率の観点からスチレン系が好ましい。また、母体構造としては、例えば、ゲル型、ポーラス型が挙げられるが、特に限定されない。強酸性カチオン交換樹脂の形態としては、例えば、粉状、球状、繊維状、膜状等が挙げられる。なお、カチオン交換樹脂には、弱酸性のものが存在するが、アルデヒド化合物除去効率の観点から、強酸性のものを使用する。

本発明で使用する強酸性カチオン交換樹脂は、公知の方法により製造したものでも、市販品でもよい。市販のゲル型強酸性カチオン交換樹脂として、例えば、ＤＩＡＩＯＮＳＫ１０４、ＳＫ１Ｂ、ＳＫ１ＢＨ、ＳＫ１１０、ＳＫ１１２、ＵＢＫ０８、ＵＢＫ５１０、ポーラス型強酸性カチオン交換樹脂として、ＰＫ２０８、ＰＫ２１２、ＰＫ２１６、ＰＫ２２０、ＰＫ２２８、ＲＣＰ１６０Ｍ、ＨＰＫ２５（以上、三菱ケミカル製）、アンバーライトＩＲ１２０Ｂ、ＩＲ１２４、２００ＣＴ、２５２（以上、オルガノ製）が挙げられる。カチオン交換樹脂は、小粒径部をカットしたタイプ、大粒径部をカットしたタイプでもよい。カチオン交換樹脂の対イオンは、水素イオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、バリウムイオン等が挙げられるが、特に限定されない。

また、強酸性カチオン交換樹脂の総交換容量は特に限定されないが、アルデヒド化合物除去効率の観点から、０．５〜５．０ｍｅｑ／ｍＬが好ましく、より好ましくは１．０〜４．０ｍｅｑ／ｍＬ、更に好ましくは１．５〜３．０ｍｅｑ／ｍＬ、特に好ましくは１．８〜２．５ｍｅｑ／ｍＬである。強酸性カチオン交換樹脂の使用量は、アルデヒド化合物除去効率の観点から、アラビアゴム１ｋｇに対し０．０５〜０．５０Ｌとなる量が好ましく、より好ましくは０．１〜０．４０Ｌ、更に好ましくは０．１５〜０．３０Ｌとなる量である。

不純物が吸着して能力が低下したイオン交換樹脂（ポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂および強酸性カチオン交換樹脂）は、公知の方法、即ち通常の酸・アルカリ洗浄、酵素洗剤、アルコール洗浄、界面活性剤洗浄、キレート洗浄、次亜塩素酸洗浄、過酸化水素洗浄等の化学的洗浄、ブラッシングや逆洗等の物理的洗浄等で吸着能力を回復できる。

バッチ方式を採用する場合、接触方法としては、アニオン交換樹脂及びカチオン交換樹脂の混合物と接触させても、アニオン交換樹脂とカチオン交換樹脂を任意の順序で接触させてもよい。一方、カラム方式を採用する場合、アニオン交換樹脂及びカチオン交換樹脂の混合物をカラムに充填して接触させても、アニオン交換樹脂とカチオン交換樹脂を別個独立のカラムに充填し、これらを任意の順序で接触させてもよい。また、アニオン交換樹脂とカチオン交換樹脂を充填した各カラムを直列に接続して接触させることもできる。

イオン交換樹脂処理に供するアラビゴム水溶液の温度は好ましくは６０℃以下、より好ましくは２〜６０℃、より好ましくは２〜５０℃であり、アラビアゴム水溶液の濃度は好ましくは４０％（ｗ／ｗ）以下、より好ましくは０．５〜４０％（ｗ／ｗ）、特に好ましくは１．０〜２０％（ｗ／ｗ）である。アラビゴム水溶液の温度が６０℃を超えると、処理中にアラビアゴムが変性して凝集体が生じる場合や、イオン交換樹脂の耐熱温度を超える。また、アラビアゴム水溶液の濃度が４０％（ｗ／ｗ）を超えると、溶液粘度が高くなり処理が困難になる。また、アラビゴム水溶液のｐＨが１０以上であるとアラビアゴムの分解が起こるため、アラビゴム水溶液のｐＨは１０未満とすることが好ましい。

ポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂および強酸性カチオン交換樹脂を用いた精製処理後に、植物性プロテオグリカンを含有する水溶液を得ることができる。この植物性プロテオグリカンを含有する水溶液を任意の有機溶媒や有機溶媒を含有する溶媒により精製処理をしてもよい。また、さらにイオン交換樹脂処理、担体処理、脱臭処理、脱塩処理、膜分離処理、ｐＨ調整処理等を行って精製してもよい。植物性プロテオグリカンを含有する水溶液を得た場合は、さらに脱塩、滅菌等を目的として膜処理等を実施してもよい。水溶液を凍結乾燥処理、蒸発乾固処理することで、植物性プロテオグリカンを含有する固形分を得ることもできる。

本発明の植物性プロテオグリカンは、その形状を特に制限するものではなく、水溶液、塊状物、玉状物、粗粉砕物、顆粒状、粒状、及び粉末状のいずれの形状をも有することができる。

上記のようにして得られた本発明の植物性プロテオグリカンは、高い生理活性、特に高い細胞増殖活性作用を有する。しかも、天然の植物由来であって非常に安全性が高い。従って、本発明の植物性プロテオグリカンは細胞増殖促進剤として使用することができる。

かかる本発明の細胞増殖促進剤は、医薬部外品、化粧品、食品等に配合される成分、特に化粧品用の成分（化粧料）として好適に利用することができる。

本発明の細胞増殖促進剤は、そのまま、または必要に応じて一般的な添加剤を加えて、医薬部外品、化粧品、食品等とすることができる。添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、基剤、溶剤、溶解補助剤、可溶化剤、懸濁化剤、分散剤、乳化剤、安定化剤、抗酸化剤、粘稠化剤、保存剤、ｐＨ調整剤、矯味剤、香料、着色剤等が挙げられ、これらは１種または２種以上を用いることができる。

以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

〔実施例１〕ポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理
５０ｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をイオン交換水に溶解し、４．０％（ｗ／ｗ）アラビアゴム水溶液１，２５０ｇを調製した。アラビアゴム水溶液と１７０ｇ（２５１ｍｌ）のポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＰＡ３０８（三菱ケミカル製、総交換容量：１．１ｍｅｑ／ｍＬ）及び１０ｇ（１２ｍｌ）の強酸性カチオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＳＫ１ＢＨ（三菱ケミカル製、ゲル型、総交換容量：１．９ｍｅｑ／ｍＬ）をタンクに入れ、攪拌機により３時間攪拌させた（液温４０±２℃）。ろ過によりイオン交換樹脂を分離し、ろ過液を回収した。ろ過液へ１ＭＮａＯＨを添加しｐＨ４．０に調整した。凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分３１．７ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。図１はこのクロマトグラムを示す。

〔実施例２〕ハイポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理
３．６ｋｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をイオン交換水に溶解し、４．０％（ｗ／ｗ）アラビアゴム水溶液９０ｋｇを調製した。アラビアゴム水溶液と１７．２４ｋｇ（２５Ｌ）のハイポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＨＰＡ２５Ｌ（三菱ケミカル製、総交換容量：０．７ｍｅｑ／ｍＬ）及び０．７ｋｇ（０．８Ｌ）の強酸性カチオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＳＫ１ＢＨ（三菱ケミカル製、ゲル型、総交換容量：１．９ｍｅｑ／ｍＬ）をタンクに入れ、攪拌機により３時間攪拌させた（液温２０±２℃）。ろ過によりイオン交換樹脂を分離し、ろ過液を回収した。ろ過液へ１ＭＮａＯＨを添加しｐＨ４．０に調整した。ろ過液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分２．２ｋｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒドを求めた。図２はこのクロマトグラムを示す。

〔実施例３〕ハイポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理
５０ｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をイオン交換水に溶解し、４．０％（ｗ／ｗ）アラビアゴム水溶液１，２５０ｇを調製した。アラビアゴム水溶液と１０２ｇ（１５０ｍｌ）のハイポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＨＰＡ２５Ｌ（三菱ケミカル製、総交換容量：０．７ｍｅｑ／ｍＬ）及び５．０ｇ（６．０ｍｌ）の強酸性カチオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＳＫ１ＢＨ（三菱ケミカル製、ゲル型、総交換容量：１．９ｍｅｑ／ｍＬ）をタンクに入れ、攪拌機により３時間攪拌させた（液温４０±２℃）。ろ過によりイオン交換樹脂を分離し、ろ過液を回収した。ろ過液へ１ＭＮａＯＨを添加しｐＨ４．０に調整した。ろ過液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分３７．９ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。図３はこのクロマトグラムを示す。

〔比較例１〕アラビアゴム
アラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。図４はこのクロマトグラムを示す。

〔比較例２〕脱塩アラビアゴム
脱塩アラビアゴム（商品名サンアラビック、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。図５はこのクロマトグラムを示す。

〔比較例３〕ポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂処理
５０ｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をイオン交換水に溶解し、４．０％（ｗ／ｗ）アラビアゴム水溶液１，２５０ｇを調製した。アラビアゴム水溶液と１７０ｇ（２５１ｍｌ）のポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＰＡ３０８（三菱ケミカル製、総交換容量：１．１ｍｅｑ／ｍＬ）をタンクに入れ、攪拌機により３時間攪拌させた（液温４０±２℃）。ろ過によりイオン交換樹脂を分離した。ろ過液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分３２．２ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。図６はこのクロマトグラムを示す。

〔比較例４〕ゲル型強酸性カチオン交換樹脂処理
５０ｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易製）、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種）をイオン交換水に溶解し、４．０％（ｗ／ｗ）アラビアゴム水溶液１，２５０ｇを調製した。アラビアゴム水溶液と１０ｇ（１２ｍｌ）の強酸性カチオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＳＫ１ＢＨ（三菱ケミカル製、ゲル型、総交換容量：１．９ｍｅｑ／ｍＬ）をタンクに入れ、攪拌機により３時間攪拌させた（液温４０±２℃）。ろ過によりイオン交換樹脂を分離し、ろ過液を回収した。ろ過液へ１ＭＮａＯＨを添加しｐＨ４．０に調整した。ろ過液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分４９．７ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。図７はこのクロマトグラムを示す。

〔比較例５〕ゲル型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理
５０ｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をイオン交換水に溶解し、４．０％（ｗ／ｗ）アラビアゴム水溶液１，２５０ｇを調製した。アラビアゴム水溶液と１７０ｇ（２５１ｍｌ）のゲル型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＳＡ１０Ａ（三菱ケミカル製、総交換容量：１．４ｍｅｑ／ｍＬ）及び１０ｇ（１２ｍｌ）の強酸性カチオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＳＫ１ＢＨ（三菱ケミカル製、ゲル型、総交換容量：１．９ｍｅｑ／ｍＬ）をタンクに入れ、攪拌機により３時間攪拌させた（液温４０±２℃）。ろ過によりイオン交換樹脂を分離し、ろ過液を回収した。ろ過液へ１ＭＮａＯＨを添加しｐＨ４．０に調整した。凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分４９．５ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。

〔比較例６〕ポーラス型II型強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂処理
５０ｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をイオン交換水に溶解し、４．０％（ｗ／ｗ）アラビアゴム水溶液１，２５０ｇを調製した。アラビアゴム水溶液と１７０ｇ（２５１ｍｌ）のポーラス型II型強塩基性アニオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮ４０８（三菱ケミカル製、総交換容量：１．０ｍｅｑ／ｍＬ）及び１０ｇ（１２ｍｌ）の強酸性カチオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＳＫ１ＢＨ（三菱ケミカル製、ゲル型、総交換容量：１．９ｍｅｑ／ｍＬ）をタンクに入れ、攪拌機により３時間攪拌させた（液温４０±２℃）。ろ過によりイオン交換樹脂を分離し、ろ過液を回収した。ろ過液へ１ＭＮａＯＨを添加しｐＨ４．０に調整した。凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分４９．２ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。

〔比較例７〕ポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂及び弱酸性カチオン交換樹脂処理
５０ｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）をイオン交換水に溶解し、４．０％（ｗ／ｗ）アラビアゴム水溶液１，２５０ｇを調製した。アラビアゴム水溶液と１７０ｇ（２５１ｍｌ）のポーラス型Ｉ型強塩基性アニオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮ３０８（三菱ケミカル製、総交換容量：１．１ｍｅｑ／ｍＬ）及び１０ｇ（１２ｍｌ）の弱酸性カチオン交換樹脂ＤＩＡＩＯＮＷＫ１０（三菱ケミカル製、メタクリル系、総交換容量：２．６ｍｅｑ／ｍＬ）をタンクに入れ、攪拌機により３時間攪拌させた（液温４０±２℃）。ろ過によりイオン交換樹脂を分離し、ろ過液を回収した。ろ過液へ１ＭＮａＯＨを添加しｐＨ４．０に調整した。凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分３２．５ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。

〔比較例８〕変性アラビアゴム
２．０ｇのアラビアゴム（商品名アラビックコールＳＳ、ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌ種、三栄薬品貿易製）を１１０℃に設定したオーブンに入れ、２４時間加熱した。固形分１．９ｇを回収し、この固形分をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。図８はこのクロマトグラムを示す。

〔比較例９〕動物性プロテオグリカン
動物性プロテオグリカン（和光純薬工業製）をＳＥＣ測定し、得られたクロマトグラムにおいて、重量平均分子量を求めた。またアルデヒド定量キットにより、総アルデヒド含有量を求めた。

〔評価試験〕
＜細胞増殖活性試験＞
ヒト正常表皮角化細胞（クラボウ製）を、１０μｇ／ｍｌインスリン、０．５μｇ／ｍｌハイドロコーチゾン含有ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地（クラボウ製）を用いて２×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ濃度で９６ウェル培養マイクロプレートに１００μｌずつ播種し、５％ＣＯ_２、３７℃の条件にて２４時間培養した。その後、実施例、比較例で得られた各試料（終濃度２５０μｇ／ｍｌ）を含む培地（０．２０μｍセルロースアセテートメンブランフィルターにて不溶物を除去済み）を１００μｌ添加し９６時間培養した。細胞数をＢｒｄＵ化学発光キット（アブカム製）により測定し、未添加時の細胞数を１００としたときの、表皮細胞増殖促進作用を解析した。

＜保湿性試験＞
実施例、比較例で得られた各試料を２．０％（ｗ／ｗ）含む水溶液を用意し、各水溶液を１００μｌずつシャーレに滴下した。このシャーレを室温２５±１℃湿度２０±１％ＲＨ環境で６０分間放置し、放置後の重量（試料水溶液）を初期の重量（試料水溶液）で割った割合（％）を求めた。

＜官能試験＞
実施例、比較例で得られた各試料を１．０％（ｗ／ｗ）含む水溶液について、専門パネラー２０名の前腕内側部に塗布したときの使用感を以下の判断基準で官能評価した。評価結果の平均値を、小数点以下四捨五入をして求めた。
（１）べたつき感
３：べたつかない、２：ややべたつかない、１：べたつく、０：つよくべたつく
（２）臭い
３：無臭である、２：やや臭いがある、１：臭いがある、０：つよい臭いがある

下記表１に、全実施例及び全比較例のパラメーター（重量平均分子量、総アルデヒド含有量）及び試験結果を示す。

Claims

アカシア属植物（ＡｃａｃｉａＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗ又はＡｃａｃｉａＳｅｙａｌＤｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから得られる、重量平均分子量９０万〜３５０万、且つ、総アルデヒド含有量が２．０μｍｏｌ当量／ｇ以下であることを特徴とする植物性プロテオグリカン。
下記の工程（Ａ）及び工程（Ｂ）を含むことを特徴とする請求項１に記載の植物性プロテオグリカンの製造方法。
工程（Ａ）：アラビアゴム水溶液を濃度０．５〜４０％（ｗ／ｗ）に調製する工程
工程（Ｂ）：アラビアゴム水溶液を、ポーラス型I型強塩基性アニオン交換樹脂および強酸性カチオン交換樹脂に供する工程
請求項１に記載の植物性プロテオグリカンを含む細胞増殖促進剤。
請求項１に記載の植物性プロテオグリカンを含む化粧料。
請求項３に記載の細胞増殖促進剤を含む化粧料。