JP2019165676A - 植物病害防除剤及び植物病害の防除方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]有機資材から分離し貧栄養培地にて培養した細菌集団。
[2]前記貧栄養培地が、培地1L当たり、肉エキス成分が100 mg以下、酵母エキス成分が100 mg以下、かつペプトンが100mg以下である培地である[1]に記載の細菌集団。
[3][1]又は[2]に記載の細菌集団を含む植物病害防除剤。
[4]前記植物病害がイネ苗病害である[3]に記載の植物病害防除剤。
[5][1]又は[2]に記載の細菌集団を溶媒に希釈した懸濁液である[3]又は[4]に記載の植物病害防除剤。
[6][1]又は[2]に記載の細菌集団又は[3]〜[5]のいずれか一項に記載の植物病害防除剤によって、植物の種子、苗、育苗土壌又は育苗培地を処理することを含む植物病害の防除方法。
[7]有機資材から細菌集団を分離すること、及び
分離した細菌集団を貧栄養培地で培養することからなる細菌集団の製造方法。
本発明の第1の態様は、有機資材から分離し貧栄養培地にて培養した細菌集団である。
(方法)
有機栽培育苗土としては、東日本を中心とした各地の有機栽培農家が自作したもの(12点)を入手し解析に用いた(図は宮城県涌谷町の有機農家)。対照区としては市販の慣行栽培育苗土を用いた。イネもみ枯細菌病、イネ苗立枯細菌病による苗腐敗症を対象病害とし、イネ(品種:コシヒカリ)の種子を温湯消毒後、2日間28℃で吸水し、はと胸期に達したところで、Burkholderia glumae (MAFF 302746)の菌液(OD600, 0.01)に浸漬し、5分間減圧接種を行った。接種後、各育苗土に播種し(7.5×7.5×5.5 cmのプラスティック容器を使用)、30℃一定条件(明期:14 h, 暗期10 h)で9日間培養し、発病検定を行った(図1A)。発病検定は病徴を4段階(0:無病徴、1:生育抑制・黄白化、2:半枯死、3:完全枯死)に分けて数え、発病度(Disease index, DI)を以下の式で算出した(図1B)。
(結果)
東日本を中心に全国12地点から有機栽培育苗土を収集し、イネもみ枯細菌病の抑制効果を検討した(図は宮城県涌谷町の有機農家)。対照としては市販の慣行栽培育苗土3点を用いた。その結果、慣行栽培育苗土では病原菌接種により激しい病徴を示し、枯死したのに対し、有機栽培育苗土に播種した場合は発病が有意に抑制された(図1A,図1B)。有機栽培育苗土では慣行栽培育苗土に比べてイネの生育が遅延するなどの特徴も認められたが(図1A)、解析した全ての有機栽培育苗土でイネもみ枯細菌病抑制効果が確認された。
(方法)
1 gの有機栽培育苗土に10 mlの滅菌水を加えて室温で1時間振とうし、土壌懸濁液を作製した。その後、100μlをNA普通培地又はPPGA培地に滴下し、均一に塗布して、暗所25 ℃で1日培養を行った。1/1,000希釈NA培地[支持剤として1%寒天又は2%ゲランガムを使用]、1/1,000希釈PPGA培地[支持剤として1%寒天]、DR2A培地[支持剤として1%寒天]では、2日間培養を行った。培養後、形成されたコロニーを滅菌水を加えて全て懸濁し、OD600の値を0.1に調製し、細菌集団液を得た(細菌Mix液)。
1 gの有機栽培育苗土に10 mlの滅菌水を加えて室温で1時間振とうし、土壌懸濁液を作製した。その後、100 μlを1/1,000希釈NA培地[支持剤として1%寒天]又はDR2A培地[支持剤として1%寒天]に滴下し、均一に塗布して、暗所25 ℃で2日培養を行った。培養後、形成されたコロニーを滅菌水を加えて全て懸濁し、OD600の値を0.1に調製し、細菌集団液を得た(細菌Mix液)。実施例2に記載の通りにイネもみ枯細菌病菌を接種したイネ種子を播種した育苗土の細菌Mix液を添加し、9日間の培養の後に発病検定を行った。
NA普通培地、1/1000希釈NA培地、DR2A培地を用いて培養して得た細菌Mix液をイネもみ枯細菌病菌を接種したイネ種子を播種した慣行栽培育苗土に添加したところ、NA普通培地から得た細菌Mixでは無添加区(Control)同様に激しい発病が認められたのに対し、1/1000希釈NA培地、DR2A培地から得た細菌Mixではイネもみ枯細菌病による苗腐敗症が抑制された(図3A、B)。この際の細菌集団をPCR-DGGE法を用いて解析した結果、添加した細菌Mixの細菌集団は培養に用いる培地の栄養生物の豊富さによって大きく変動することが確認された(図3C)。さらに、細菌Mix添加9日後の発病検定時の育苗土からDNAを抽出し、PCR-DGGE解析した結果、育苗土の微生物相は添加した細菌Mixとは異なっていたが、病害抑制効果が認められた場合には、病原菌の接種による細菌相の変動が小さく、形成される微生物相が安定している傾向が観察された。このことは、細菌Mixの添加により、土壌の微生物相の多様性とその堅牢性が回復し、その結果、病害発生が抑制された可能性を示唆するものである。
(方法)
栃木県芳賀町の育苗土を用いて、富栄養培地で培養した細菌を施用した場合の病害抑制効果について検討した。富栄養培地としては、NA普通培地及び、PPGA培地、LB培地[トリプトン10 g、酵母抽出物 5 g、NaCl 10 g、蒸留水1 L]、オートミール培地[オートミール粉末 30 g、砂糖 5 g、寒天 16 g、蒸留水1 L]を用いた。1 gの有機栽培育苗土に10 mlの滅菌水を加えて室温で1時間振とうし、土壌懸濁液を作製した。その後、100 μlをNA普通培地又はPPGA培地に滴下し、均一に塗布して、暗所25 ℃で1日培養を行った。培養後、形成されたコロニーを滅菌水を加えて全て懸濁し、OD600の値を0.1に調製し、細菌集団液を得た(細菌Mix液)。実施例2に記載の通りにイネもみ枯細菌病菌を接種したイネ種子を播種した育苗土の細菌Mix液を添加し、9日間の培養の後に発病検定を行った。
NA普通培地及び、PPGA培地、LB培地、オートミール培地を用いて細菌集団を培養し、滅菌した慣行栽培育苗土に施用して9日後に発病検定を行った結果、本実施例の4種類の富栄養培地で培養して得られた細菌集団の施用では、イネもみ枯細菌病抑制効果は認められなかった(図4A〜D)。
(方法)
貧栄養培地を用いて有機栽培育苗土から得た細菌集団の病害抑制活性が繰り返し培養によって失われないことを確認するため、以下の実験を行った。実施例2に記載の通り土壌懸濁液(有機栽培育苗土 1g、滅菌水 10ml)100μlを1/1000NA培地に塗布後、25℃で2日間培養し、すべてのコロニーを滅菌水に懸濁し、OD600 0.1に調整 (1回培養;細菌Mix液(1))した。細菌Mix液(1)を 100μlとり、同様に培地に塗布し、25℃で2日間培養し、すべてのコロニーを滅菌水に懸濁し、OD600 0.1に調整 (2回培養;細菌Mix液(2))した。実施例2に記載の通りにイネもみ枯細菌病菌を接種したイネ種子を播種した育苗土の細菌Mix液を添加し、9日間の培養の後に発病検定を行った。
図5A,Bによると、1回培養した場合も2回培養した場合も、同様にイネもみ枯細菌病を抑制していることが確認された。また、図5CのPCR-DGGE解析からは、多少の変動はあるものの、1回培養した場合も2回培養した場合も培養して得られた細菌相が、全体的には類似していることも確認された。さらに、土壌の細菌相については、繰り返し培養した場合でも、Control区の細菌相の変動に比べて、病原菌の接種の有無によらず比較的安定しており、1回培養の場合と同様の傾向が見られた。従って、1/1000希釈NA培地を用いることで、病害抑制効果のある細菌集団を繰り返し培養できることが示唆された。
Claims (7)
- 有機資材から分離し貧栄養培地にて培養した細菌集団。
- 前記貧栄養培地が、培地1L当たり、肉エキス成分が100 mg以下、酵母エキス成分が100 mg以下、かつペプトンが100mg以下である培地である請求項1に記載の細菌集団。
- 請求項1又は2に記載の細菌集団を含む植物病害防除剤。
- 前記植物病害がイネ苗病害である請求項3に記載の植物病害防除剤。
- 請求項1又は2に記載の細菌集団を溶媒に希釈した懸濁液である請求項3又は4に記載の植物病害防除剤。
- 請求項1若しくは2に記載の細菌集団又は請求項3〜5のいずれか一項に記載の植物病害防除剤によって、植物の種子、苗、育苗土壌又は育苗培地を処理することを含む植物病害の防除方法。
- 有機資材から細菌集団を分離すること、及び
分離した細菌集団を貧栄養培地で培養することからなる細菌集団の製造方法。
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