JP2018534359A - マグノリア花抽出物、その画分、またはそれらから単離された化合物を活性成分として含む、歯周組織の成長を促進するための、および歯周炎を予防および処置するための医薬組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、マグノリア花抽出物、その画分、または下記式１または式２で表される化合物を活性成分として含む医薬組成物に関する。マグノリア花抽出物およびその画分から単離されるファーゲシンは歯根の成長を促進し、歯の周囲に歯槽骨を形成することにより歯周組織の成長を促進し、歯周炎を抑制する効果を有する。それゆえ、ファーゲシンのみならず、それを含むマグノリア花抽出物およびその画分も、歯根および歯周組織の成長を促進するための、および歯周炎を予防および処置するための医薬組成物の活性成分として有効に使用することができる。

Description

発明の背景
１．発明の分野
本発明は、マグノリア花抽出物、その画分またはそれらから単離された化合物を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防および処置するための医薬組成物に関する。
この研究（助成金番号Ｓ２４８６２８６）は、２０１８年に韓国中小企業庁により拠出されたスタートアップ成長と技術開発（ＴＩＰＳプログラム）のための事業により支援を受けた。

２．関連技術の説明
歯周組織は、歯肉（歯茎）、セメント質、歯周靭帯および歯槽骨からなる軟組織および硬組織の両方を含む複雑な器官である。歯肉は、歯の支持および咀嚼プロセスに関与する単純な結合組織であり、歯周靭帯は、歯と歯槽骨との間に位置し、歯を顎に支持して付着させる高度に分化した細胞結合組織であり、機械的咀嚼力などの様々な方向にストレスに耐え、また感覚機能を有する。

歯周靱帯は、歯槽骨側の骨芽細胞および破骨細胞；線維芽細胞、マラッセ上皮細胞、マクロファージ、未分化間葉細胞、神経因子、歯周靭帯の中心の血管内皮細胞；および歯根側のセメント芽細胞；などの様々な細胞を含み、歯周靱帯は、歯槽骨、歯根およびセメント質の回復および再生に関与することが知られている。

歯肉は、疾患（歯肉炎）が発症する口腔内で観察される歯の支持組織の一部である。疾患が悪化して支持組織に深く入り込むと、歯根を取り囲む骨組織に結合する歯周靱帯が破壊され、また歯を覆う歯槽骨が破壊されて歯周病が生じる可能性がある。

歯周病は、細菌によって引き起こされる歯の支持組織における炎症の一種であり、歯肉炎および歯周炎に分けることができる。この疾患の原因は、口腔衛生の不良に起因する口腔細菌による歯垢の形成である。歯垢は、唾液に含まれる粘着性物質を接着剤として使用して付着した後、歯の表面上で増殖した細菌の塊である。歯垢を未処理のまま放置すると、炎症が発生して歯肉および口臭の出血を引き起こし、これが歯肉炎と呼ばれる。

歯肉炎が進行すると、歯と歯肉との間の隙間が深くなり、その結果として歯周ポケットが形成され、歯周病を引き起こす細菌が増殖して歯周炎を引き起こす。歯周炎が進行すると、歯磨きのような弱い刺激が歯肉の出血を引き起こし、歯肉を腫脹させ、急性の炎症および痛みを引き起こすことがある。かかる炎症は、骨形成機能を低下させ、骨吸収機能を増大させるので、歯槽骨が徐々に低下し、歯槽骨が破壊され、最終的に歯が失われる。進行した歯周炎は歯の損失を引き起こし得る。４０歳以上の成人では、歯周炎は歯の除去の原因の４０％を占め、歯周炎による歯の損失が深刻な問題であることを示している。

歯周病における歯周靭帯および歯槽骨の破壊は、これらの組織の主成分であるコラーゲンの分解によるものである。かかる破壊の正確なメカニズムはまだ明らかにされていないが、コラーゲンの分解は、宿主において分泌されたコラゲナーゼおよび歯周病原細菌によって分泌された中性プロテアーゼによって引き起こされることが知られている。したがって、コラゲナーゼおよびプロテアーゼの活性を抑制して歯周病の進行を抑制する研究がなされている。

歯周病処置のためには、患者の口腔衛生の改善、非外科的または外科的歯科矯正、歯根平滑化、歯肉掻爬および新しい付着を使用した歯周再生が試みられている。しかし、そのような外科的処置方法は、歯科医院を訪問することの不便さを引き起こし、効率的な処置は保証されず、進行した疾患のみに限定され、この処置では予防効果がないことを示唆する。

この疾患が処置されなければ、ほとんどの場合慢性疾患に進行する。補充的な処置として、全身性抗生物質および持続放出製剤が使用されている。しかしながら、薬物が不要な領域にあまりに多く送達され、副作用を生じるという深刻な問題がある。最近、抗生物質に対する耐性を示す歯周病菌が報告されており、問題が悪化している。歯周病によって歯が失われた場合、補綴処置または歯科インプラント処置が必要となり、患者の負担が増す。

特に、社会的、経済的に脆弱な人々のためのより高い医療障壁となり得る。したがって、歯の損失の前に損傷組織を再生することができれば、歯の損失に起因する人工歯または人工器官などの処置に対する需要を減らすことによって、経済的および社会的負担を軽減することができる。

歯周病の予防および処置の効果を高めることで、外科的処置の限界および抗生物質の使用の問題を克服するために、損傷および失われた歯周組織の回復に有効な新薬を開発することが急務である。歯周組織は構造特性がすべて異なるため、歯周病で損傷または破壊された病変を再生するための効率的な処置法を確立することは困難である。

歯周病は、プラークおよび歯石などの炎症性結合組織の非外科的または外科的除去によって治癒段階に改善することができる。しかしながら、歯周組織を構成する各成分を完全に回収することができないため、従来の処置方法では破壊された歯周組織を完全に回復させることはできない。

マグノリア花はマグノリア科に属するマグノリア花芽の名前で、少しスパイシーな味がする。韓国では、Magnolia denudata Desrousseauxまたはその同属植物の乾燥した花芽が使用される。日本では、M. denudata Desr、M. flower Pamp、M. kobus DC、M. salicifolia MaximおよびM. sprengeri Pampが使用される。中国では、M. denudata Desr、M. flower PampおよびM. sprengeri Pampが使用される。東洋医学では、マグノリア花は温かみのある特徴を有し、頭痛、腰痛、鼻炎、副鼻腔炎の処置に効果的であることが知られている。以前の報告によると、鎮痛作用もまたある。

米国特許出願第１３／７３９，３４０号には、副作用なく骨成長を促進し骨密度を高めることができることが知られているので、マグノリア科に属する植物の葉または葉の抽出物に由来する骨形成を促進する医薬組成物を記載している。ヒトの骨は、骨芽細胞および破骨細胞の作用による骨のモデリングおよび骨のリモデリングを通じてその恒常性を維持する。

骨形成の初期段階では、硝子軟骨が骨の形態で形成され、その後カルシウムが沈着し、その間に軟骨が消失し、骨が成長し、軟骨細胞が骨芽細胞に変わる。

歯は、上記骨形成プロセスとは異なるプロセスによって形成される。特に、出生から６週間で細胞が発達し始めると、表面上皮が浸潤し始め、この細胞は陥入した結合組織内で成長し始める。陥入した細胞が上皮内で成長するにつれて、歯周組織が形成される。象牙質を形成する象牙芽細胞および種々の歯髄細胞が内部で分化される間に、上皮上の細胞は、歯を覆うエナメル芽細胞に分化する。上述したように、骨形成および歯形成に関与する機構および細胞は、完全に異なる。

本発明者らは、歯周病による歯周組織の損失を防ぎ、歯周組織の再生を促進させる物質を探索する研究の過程で、本発明者らは、マグノリア花抽出物から単離されたファーゲシンが歯根の成長を促進し、歯の周囲の歯槽骨形成を効率的に誘導できることを確認し、本発明を完成した。

発明の概要
本発明の目的は、マグノリア花抽出物、その画分またはそれから単離された化合物を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物を提供することである。

上記目的を達成するために、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長促進または歯周炎の予防または処置のための医薬組成物を提供する。

また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎の予防または改善するための医薬部外品組成物を提供する。
また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎の予防または改善するための健康機能性食品を提供する。
また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物を提供する。

本発明は、さらに下記式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物を提供する：

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物を提供する。

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎の予防または改善するための健康機能性食品を提供する。
また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物を提供する。

また、本発明は上記式１または式２で表される化合物を単離するための方法であって、以下のステップ：
１）マグノリア花抽出物を酢酸エチルで分画することにより生じた酢酸エチル層にメタノールを加えることによりメタノール画分を生成すること；
２）ステップ１）のメタノール画分に酢酸エチルおよびヘキサンを含む混合溶媒を加えることにより溶出液を得ること；および
３）ステップ２）の溶出液に結晶を析出させた後、フィルターで濾過すること
を含む、方法を提供する。

また本発明は、薬理学的に有効な用量のマグノリア花粉抽出物またはそれから単離された画分を対象に投与するステップを含む、歯根または歯周組織の成長を促進する方法を提供する。

また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物の使用を提供する。
また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物の使用を提供する。

また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎の予防または改善するための健康機能性食品の使用を提供する。
また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物の使用を提供する。

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体の薬理学的に有効な用量を対象に投与するステップを含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置のための方法を提供する。

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎の予防または処置するための医薬組成物の使用を提供する。

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、またはたは歯周炎の予防または改善するための医薬部外品組成物の使用を提供する。

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善する健康機能性食品の使用を提供する。

また、本発明は式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物の使用を提供する。

有利な効果
本発明のマグノリア花抽出物、その画分および下記式１または式２で表される化合物は、歯根の成長を促進する；歯の周囲に歯槽骨を形成することによって歯周組織の成長を促進し；歯周炎を抑制することができ、それによって本発明のマグノリア花抽出物、その画分および化合物は、歯根または歯周組織の成長促進または歯周炎の予防または処置のための医薬組成物の活性成分として有効に使用することができる。

本発明の好ましい態様の適用は、添付の図面を参照することによって最もよく理解される。
図１は、ヒトの歯の構造を示す図である。 図２は、マグノリア花抽出物、その画分および上記化合物の製造方法を示す図である。

図３は、ファーゲシンを含むアガロースビーズに埋め込まれた歯を宿主マウスに移植した結果を示す図である。 ＰＢＳ：ＰＢＳを含むアガロースビーズに埋め込まれた歯；および ファーゲシン：ファーゲシンを含むアガロースビーズに埋め込まれた歯。

図４は、マグノリア花抽出物を含むアガロースビーズに埋め込まれた歯の移植の結果を示す図である。 ＰＢＳ：ＰＢＳを含むアガロースビーズに埋め込まれた歯； ファーゲシン：ファーゲシンを含むアガロースビーズに埋め込まれた歯； 低濃度：低濃度のマグノリア花抽出物を含むアガロースビーズに埋め込まれた歯；および 高濃度：高濃度のマグノリア花抽出物を含むアガロースビーズに埋め込まれた歯。

好ましい態様の説明
以下、本発明について詳細に説明する。 本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長促進、または歯周炎の予防または処置のための医薬組成物を提供する。

また、本発明は、薬理学的に有効な用量のマグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を対象に投与するステップを含む、歯根または歯周組織の成長を促進する方法または歯周炎を予防または処置する方法を提供する。

また、本発明はマグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進するため、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物の使用を提供する。

マグノリア花は購入または栽培することができる。茎、葉、根および花芽などのマグノリア花の部分はすべて使用することができるが、本発明の好ましい態様では、花芽を使用した。
マグノリア花の抽出方法は、濾過、熱水抽出、アンフルラージュ（enfleurage）、還流抽出、超音波処理抽出によって例示される、この分野で受け入れられている従来の方法の１つであり得る。

抽出が熱水抽出により行われる場合、抽出回数は、好ましくは１〜５回、より好ましくは３回であるが、これに限定されるものではない。抽出溶媒は、乾燥したマグノリア花の体積の０．１〜１０倍の体積、より好ましくは乾燥したマグノリアのフラクションの体積の０．３〜５倍の体積で添加することができる。抽出温度は好ましくは２０℃〜４０℃であり、抽出時間は好ましくは１２〜４８時間である。

マグノリア花抽出物またはその画分は、以下のステップ
１）マグノリア花を乾燥させて水分を除去し、その後、乾燥したマグノリア花を粉砕すること； ２）乾燥したマグノリア花を室温で抽出溶媒により抽出すること； ３）ステップ２で得られた抽出物を濾過した後、減圧下で濃縮すること；および ４）有機溶媒を加えて抽出物を分画すること を含む調製方法によって調製することができる：

上記方法において、ステップ１）の乾燥は、減圧乾燥、真空乾燥、沸騰乾燥、噴霧乾燥、または凍結乾燥により行うことが好ましいが、必ずしもこれに限定されるものではない。

上記方法において、ステップ２）の抽出溶媒は、水、Ｃ_１〜Ｃ_２低級アルコールまたはそれらの混合溶媒であってもよい。

この方法において、ステップ３）における減圧下での濃縮は、真空濃縮器または真空ロータリーエバポレーターを使用して行うことが好ましいが、これに限定されるものではない。
上記の方法において、ステップ４）の有機溶媒は、酢酸エチル、ヘキサン、ベンゼンまたはクロロホルムであってもよい。

前記画分は、酢酸エチルを使用してマグノリア花抽出物を分画した後、メタノールを使用することにより画分のさらなる分画を行っても；あるいは酢酸エチルとヘキサンを３：７または５：５の割合で含む混合溶媒を使用することにより画分のさらなる分画を行ってもよい。

本発明の好ましい態様において、本発明者らは、マグノリア花抽出物を含むアガロースビーズに歯を埋め込んで培養すると、歯根の成長が著しく促進され、歯の周囲に歯槽骨が新たに形成されることを確認し（図４を参照）、マグノリア花抽出物が歯根または歯周組織の成長を促進するのに有効であることが示された。

上記態様の結果に関して、５日齢でマウスから歯を抜去したとき、歯が歯槽骨の内部にあるように取り出されたため、歯だけでなく歯に付着して歯や歯根の成長を助けることができる歯周靭帯も抜去された。歯根および歯周組織は、抜去された歯の試料によって成長した。

その時点では、歯周靭帯に含まれる様々な細胞が相互作用して歯根の成長を助けていた。歯根の外表面は、歯周靭帯につながって歯を固定するセメント質と呼ばれる硬組織で覆われている。セメント質は歯周靭帯細胞によっても形成される。歯周靱帯に含まれる様々な細胞間の相互作用は、歯根の成長を促すだけでなく、歯根を取り巻くセメント質を形成する。したがって、歯周靱帯は、歯根および歯周組織の成長にとって重要な因子である。

したがって、マグノリア花抽出物またはその画分は、歯根または歯周組織の成長を促進するため、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物として有効に使用することができる。

本発明の組成物は、本発明のマングノアリア花抽出物を組成物の全重量に対して０．１〜９９．９重量％含有することが好ましいが、これに常に限定されるものではない。組成物はさらに、薬学的に許容し得る担体、賦形剤または希釈剤を含むことができる。

本発明の組成物は、経口的または非経口的に投与することができ、医薬製剤の一般的な形態で使用することができる。すなわち、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、および界面活性剤などの一般的に使用されている希釈剤または賦形剤と混合することにより、経口または非経口投与用に調製することができる。

経口投与のための固体製剤は、錠剤、丸剤、粉末剤、顆粒剤およびカプセル剤である。これらの固体製剤は、化合物をデンプン、炭酸カルシウム、スクロースまたはラクトース、ゼラチンなどの１つまたは複数の適切な賦形剤と混合することによって調製される。単純な賦形剤を除いて、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルクなどを使用することができる。

経口投与のための液体製剤は、懸濁液、溶液、エマルジョンおよびシロップであり、上記の製剤は、水および流動パラフィンなどの一般的に使用される単純な希釈剤に加えて、湿潤剤、甘味料、芳香剤および保存剤などの様々な賦形剤を含むことができる。非経口投与のための製剤は、滅菌水溶液、水不溶性賦形剤、懸濁液、エマルジョン、凍結乾燥製剤および坐剤である。

水不溶性の賦形剤および懸濁剤は、活性化合物または化合物に加えて、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エチノラートのような注射可能なエステルなどを含み得る。坐剤は、活性化合物に加えて、ウィテプソール、マクロゴール、ツイーン６１、カカオ脂、ラウリンバター、グリセロゼラチンなどを含有することができる。

本発明の組成物は、経口的または非経口的に投与することができる。本明細書における非経口投与は、外皮適用、腹腔内注射、直腸内注射、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、子宮内注射または脳室内注射によって行うことができる。これらのうち、外皮適用が最も好ましい。

本発明の組成物の有効投与量は、体重、年齢、性別、健康状態、食事、投与頻度、投与方法、排泄および疾患の重篤度に応じて決定することができる。投与量は、１日当たり０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは３０〜５００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１日当たり５０〜３００ｍｇ／ｋｇであり、投与頻度は１日当たり１〜６回であることが好ましい。

本発明の組成物は、単独で、または外科手術、放射線療法、ホルモン療法、化学療法および生物学的調節剤と一緒に処置することができる。

また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物を提供する。
また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物の使用を提供する。

医薬部外品組成物は、好ましくは、練り歯磨き、マウスウォッシュ、または口内洗浄剤などの口腔用組成物製剤である。
本発明のマグノリア花抽出物またはその画分を含む医薬部外品組成物は製剤に限定されず、練り歯磨き、マウスウォッシュ、または口内洗浄剤などの従来の形態で製剤化することができる。本発明の口腔用組成物は、製剤に必要な各種の基剤および添加剤を含有することができ、これらの成分の種類および量は当業者が容易に選択することができる。

例えば、口腔用組成物が、練り歯磨きとして配合される場合には、研磨剤、湿潤剤、発泡剤、結合剤、甘味剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、医薬成分、香味剤、着色剤、および溶剤を含む。

また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長促進または歯周炎の予防または改善のための健康機能性食品を提供する。

また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎の予防または改善のための健康機能性食品の使用を提供する。

本発明の健康機能性食品は、さらに様々な香味料または天然炭水化物を含むことができる。上記天然炭水化物は、グルコース、フルクトースなどの単糖類、マルトースやスクロースなどの二糖類、デキストリン、シクロデキストリンなどの多糖類、キシトール、ソルビトール、エリスリトールなどのグルコースアルコール類のいずれかである。

さらに、甘味剤としては、タウマチンおよびステビア抽出物などの天然甘味料、およびサッカリンおよびアスパルテームなどの合成甘味料を含めることができる。天然炭水化物の含有量は、本発明の健康機能性食品１００重量部に対して、好ましくは０．０１〜０．０４重量部、より好ましくは０．０２〜０．０３重量部である。

本発明の健康機能性食品は、上記成分に加えて、ビタミン、ミネラル、フレーバー、着色料、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護コロイド状粘稠化剤、ｐＨ調節剤、安定剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、ソーダに添加されて使用される炭酸塩など上記の成分に加えて種々の栄養素を含むことができる。

言及した全ての成分は、単独でまたは一緒に添加することができる。これらの成分の混合比は、実際問題ではないが、一般的には、本発明の健康機能性食品１００重量部に対して０．０１〜０．１重量部で添加することができる。

本明細書の食品は限定されない。例えば、本発明の抽出物は、肉、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンデー、スナック、クッキー、ピザ、ラーメン、小麦製品、ガム、アイスクリームを含む乳製品、スープ、飲料、茶、飲み物、アルコール飲料、ビタミン複合体に添加することができ、広義には、健康食品の製造に適用されるほとんどすべての食品を含めることができる。

また、本発明は、マングリナ花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物を提供する。

また、本発明は、マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物の使用を提供する。
本発明の化粧品組成物は、ローション、軟膏、ゲル、クリーム、パッチまたはスプレーによって例示される当該技術分野において許容され得る任意の形態で処方することができる。本発明のマグノリア花抽出物またはその画分を含む化粧品組成物を製造する際には、マグノリア花抽出物またはその画分を本発明の化粧品組成物に３〜３０重量部、好ましくは５〜２０重量部添加することができる。

本発明の化粧品組成物は、脂肪物質、有機溶剤、溶解剤、濃縮物、ゲル化剤、軟化剤、酸化防止剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤、付臭剤、界面活性剤、水、イオン性または非イオン性乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート剤、保存剤、ビタミン、ブロッカー、湿潤剤、精油、染料、顔料、親水性または疎水性活性化剤、脂質小胞、または化粧品組成物に一般的に使用される他の成分などの皮膚科学の分野で一般的に使用される補充剤をさらに含むことができる。

上記補充剤の量は、皮膚科学の分野で一般に認められているように決定することができる。
また、本発明は、下記式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長促進または歯周炎の予防または処置のための医薬組成物を提供する。

また、本発明は、下記式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体の薬理学的に有効な用量を対象へ投与するステップを含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置する方法を提供する。

また、本発明は下記式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物の使用を提供する。

下記の式１または式２で表される化合物は、マグノリア花抽出物から単離することができる。

本発明の好ましい態様において、本発明者らは、マグノリア花抽出物から単離されたファーゲシンを含有するアガロースビーズに歯を埋め込んで培養すると、歯根の成長が著しく促進され、歯槽骨が新たに生まれたことを確認した。これは式１または式２で表される化合物が歯根または歯周組織の成長を促進すること、または歯周炎を予防または処置することに有効であることを示している（図３を参照）。

本発明の式１または式２で表される化合物は、医薬的に許容される塩の形態で使用することができ、その塩は、好ましくは薬理学的に許容さる遊離酸により形成される酸付加塩である。

酸付加塩は、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜硝酸および亜リン酸などの無機酸、または脂肪族モノ／ジカルボキシレート、フェニル置換アルカノアート、ヒドロキシアルカノアート、アルカンジオアート、芳香族酸および脂肪族／芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸から得ることができる。

薬学的に非毒性塩は、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、酢酸塩、プロピオナート、デカナート、カプリラート、アクリラート、ギ酸塩、イソブチラート、カプリラート、ヘプタノアート、プロピオラート、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベラート、カベカート、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオアート、ヘキサン−１，６−ジオアート、安息香酸、クロロベンゾエート、メチルベンゾアート、ジニトロベンゾアート、ヒドロキシベンゾアート、メトキシベンゾアート、フタル酸塩、テレフタラート、ベンゼンスルホナート、トルエンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニルブチラート、クエン酸塩、乳酸塩、ヒドロキシブチラート、グリコール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩およびマンデラートが例示される。

本発明における酸付加塩は、当業者に公知の常法により製造することができる。例えば、本発明の式１または式２で表される化合物をメタノール、エタノール、アセトン、塩化メチレン、アセトニトリル等の有機溶媒に溶解し、それに有機酸または無機酸を添加して沈殿させる。次に、沈殿物を濾過し、乾燥して塩を得る。または、溶媒および過剰の酸を減圧下で蒸留し、乾燥して塩を得る。または、沈殿物を有機溶媒中で結晶化させて塩を得る。

薬学的に許容し得る金属塩は、塩基を使用して調製することができる。アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩は、以下のプロセス：化合物を過剰のアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物溶液に溶解すること；不溶性化合物塩を濾過すること；残りの溶液を蒸発させ、それらを乾燥させることによって得られる。

このとき、金属塩は、好ましくはナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩の薬理学的に適切な形態で調製される。そして、対応する銀塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩と適切な銀塩（例えば、硝酸銀）との反応によって調製される。

本発明には、式１または式２で表される化合物およびその薬学的に許容し得る塩だけでなく、溶媒和物、水和物および異性体も含まれる。
また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩または光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物を提供する。

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物の使用を提供する。
また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎の予防または改善するための健康機能性食品を提供する。

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための健康機能性食品の使用を提供する。
また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧用組成物を提供する。

また、本発明は、式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または改善歯周炎を改善するための化粧用組成物の使用を提供する。
本発明の好ましい態様において、本発明者らは、マグノリア花抽出物から単離されたファーゲシンを含むアガロースビーズに歯を埋め込んで培養すると、歯根の成長が著しく促進され、歯槽骨が新たに形成されたことを確認し（図３を参照）、式１または式２で表される化合物が、歯根または歯周組織の成長を促進するまたは歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物、化粧品または健康機能食品の活性成分として有効に使用できることを示す。

さらに、本発明は、上記の式１または式２で表される化合物を単離するための方法であって、以下のステップ：
１）マグノリア花抽出物を酢酸エチルで分画することにより生じた酢酸エチル層にメタノールを加えることによりメタノール画分を生成すること；
２）ステップ１）のメタノール画分に酢酸エチルとヘキサンを含む混合溶媒を加えることにより溶出液を得ること；および
３）ステップ２）の溶出液に結晶を析出させた後、フィルターで濾過すること
を含む方法を提供する。

上記マグノリア花抽出物は、水、Ｃ_１〜Ｃ_２低級アルコールまたはそれらの混合溶媒を使用して抽出することが好ましい。ステップ２の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒は、酢酸エチルとヘキサンを３：７または５：５の比率で含む。
本発明の現実的かつ現在の好適な態様は、以下の例に例示的に示す。
しかしながら、当業者は、本開示を考慮して、本発明の精神および範囲内で改変および改良を行うことができることが理解されよう。

例１：マグノリア花抽出物、画分および化合物の調製
本発明に使用したマグノリア花抽出物、画分、および化合物は、以下の方法で調製した。

＜１−１＞マグノリア花抽出物の調製
花芽の体積の１０倍の体積のメタノールを中国マグノリア（Chinese Magnolia flower）(Cheon Hyedang, Osaka, Japanから購入)に添加し、３〜７日間抽出した。抽出物を濾過して不溶性残留物を除去し、濾過した抽出物を真空濃縮器を使用して濃縮した。その後、濃縮抽出物を凍結乾燥させて固形マグノリア花抽出物を得た。

＜１−２＞マグノリア花画分の調製
例＜１−１＞で得られた抽出物を酢酸エチルと蒸留水で分画した。蒸留水層をブタノールで分画し、さらに酢酸エチル層を９０％メタノールとヘキサンで分画した。シリカゲルおよびヘキサンと酢酸エチルとの混合溶媒（酢酸エチル：ヘキサン）を使用して９０％メタノール層（２１．１７ｇ）を７つの溶出液（１：９、２：８、３：７、５：５、１００％酢酸エチルおよび１００％メタノール）に分画した。

＜１−３＞化合物の単離
上記例＜１−２＞で得られた７種類の溶出液のうち、２種類の溶出液（酢酸エチル：ヘキサン＝３：７および５：５）で結晶を析出させた。結晶をフィルターで濾過した結果、０．４４ｇおよび０．５３ｇのファーゲシンが得られた。 マグノリア花抽出物、画分、および化合物の調製プロセスを図１に示す（図１）。

例２：マグノリア花抽出物の活性成分含有量を増加させるための溶媒分画
ファーゲシンとマングノリンの含有量を増加させるために、マグノリア花抽出物、画分中のリグナン化合物を、以下に示すような異なる条件で得て、ファーゲシンとマグノリンの含有量を測定した。

＜２−１＞ｐＨによる溶媒分画
刻んだマグノリア花１００ｇに７０％エタノール（ｖ／ｖ）１．２リットルを加え、８５℃で６時間還流抽出した。その後、抽出物を濾過し、残留物を７０％エタノールで洗浄した。濾液を集め、減圧下で濃縮した。その結果、７０％エタノール抽出物１７ｇが得られた。上記で得られた抽出物に水を加え、完全に溶解させた。次に、条件（ｐＨ５．０、ｐＨ３．０およびｐＨ９．０）に従ってｐＨを調整した。Ｎ−ヘキサンを水に加え、続いて溶媒分画を数回行った。濃縮は減圧下で行った。ファーゲシンおよびマグノリンの含有量を、ファーゲジン含有量試験およびフィンガープリントパターンアッセイによって分析した。

その結果、表１に示すように、ｐＨが調整されていない対照群のヘキサン画分および水画分の両方においてファーゲシンおよびマグノリンが検出された。その際、水画分の回収率はヘキサン画分の回収率よりも高かった（表１）。

表２に示すように、酸性条件（ｐＨ３．０）で分画を行った場合、リグナンのフロフラン環が開いて分解されるため、全体の回収率が低下した。

表３に示すように、塩基性条件（ｐＨ９．０）で分画を行った場合、酸性条件における回収率と比べて全体の回収率が高くなり、塩基性条件に反応する他の物質により相対含有量が増加した。

実験例１：マングノリア花抽出物から単離されたファーゲシンの歯根または歯周組織への成長促進効果
歯根または歯周組織の成長に対するマグノリア花抽出物から単離されたファーゲシンの促進効果を調べるために、以下の実験を行った。

具体的には、例１で得られたファーゲシンをＰＢＳ（Dainippon Pharmaceuticals Inc., Japan）で最終濃度８０μｍに希釈し、４つのアガロースビーズ（Affi-Gel Blue Gel, #153-7301, Bio-Rad Laboratories Inc., Japan）をＰＢＳで洗浄し、ファーゲシンがこれらのビーズに吸収されるように少なくとも６０分間反応させた。対照として、４つの他のビーズをＰＢＳのみと反応させた。５日齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Sankyo Labo Service Corporation, Japan）を屠殺し、下顎から臼歯を抜去した。抜去された臼歯の歯髄を、ファーゲシンを含有するアガロースビーズに包埋した。

対照として、抜去した臼歯の歯髄をＰＢＳのみを含むアガロースビーズに包埋した。アガロースビーズを８週齢のＣ５７ＢＬ／６宿主マウス（雌、Sankyo Labo Service Corporation, Japan）の腎臓の莢膜に移植した。宿主マウスを、１２時間／１２時間明暗サイクル、室温、および自由摂食の条件で飼育した。３週間後、マウスを屠殺し、腎臓を摘出した。その後、歯を観察した。歯の３Ｄ画像を、マイクロＣＴ（Rigaku R_mCT2）によって撮影した。

結果として、図３に示すように、ＰＢＳ対照群では歯根および骨の成長はほとんど観察されなかったが、歯根の成長は有意であり、移植歯周囲の歯槽骨の形成はファーゲシンの実験群で観察された（図３）。したがって、本発明のマガノリア花抽出物から単離されたファージシン化合物は、歯根の成長や歯周組織の形成の促進に効果的であることが確認された。

実験例２：マグノリア花抽出物の歯根および歯周組織への成長促進効果
歯根および歯周組織の成長に及ぼすマグノリア花抽出物の促進効果を調べるために、以下の実験を行った。
具体的には、例１で得られたマグノリア花抽出物をＰＢＳで最終濃度５０および５００μｇ／ｍｌに希釈した。４つのアガロースビーズ（Affi-Gel Blue Gel、＃153-7301、Bio-Rad Laboratories Inc., Korea）をＰＢＳで洗浄し、ファーゲシンをこれらのビーズに吸収させるために少なくとも６０分間反応させた。

対照として、４つの他のビーズをＰＢＳのみと反応させた。比較群については、ビーズを実験例１に示したようにファーゲシン化合物と反応させた。５日齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（DBL Co., Ltd., Korea）を屠殺し、臼歯を下顎から抜去した。抜去した臼歯の歯髄を、ファーゲシンまたはマグノリア花抽出物を含むアガロースビーズに包埋した。対照として、抽出した臼歯の歯髄をＰＢＳのみを含むアガロースビーズに包埋した。アガロースビーズを８週齢のＣ５７ＢＬ／６宿主マウス（雌、DBL Co., Ltd., Korea）の腎臓の莢膜に移植した。宿主マウスを、１２時間／１２時間明暗サイクル、室温、および自由摂食の条件で飼育した。３週間後、マウスを屠殺し、腎臓を摘出した。その後、歯を観察した。歯の３Ｄ画像を、マイクロＣＴによって撮影した。

結果として、図４に示すように、ＰＢＳ対照群では歯根および骨の成長はほとんど見られなかったが、歯根の成長は用量依存的に実験群で有意であり、移植歯周囲の歯槽骨が観察された（図４）。したがって、マグノリア花抽出物は、ファーゲシン化合物と同程度またはそれ以上の歯根の成長および歯周組織の形成を促進するのに有効であることが確認された。

以下、本発明のマグノリア花抽出物、その画分、またはそれから単離された化合物を活性成分として含む、医薬組成物、医薬部外品組成物、および化粧品組成物の製造例について説明する。

製造例１：医薬製剤の製造
＜１−１＞錠剤の調製（直接加圧）
活性成分 ５．０ｍｇ
ラクトース １４．１ｍｇ
クロスポビドンＵＳＮＦ ０．８ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．１ｍｇ
上記全成分を所定量添加し、均一に混合、加圧して、常法に従い錠剤を調製した。

＜１−２＞錠剤の製造（スラリー造粒）
活性成分 ５．０ｍｇ
ラクトース １６．０ｍｇ
デンプン ４．０ｍｇ
ポリソルベート８０ ０．３ｍｇ
二酸化ケイ素 ２．７ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２．０ｍｇ
活性成分をふるい分けた後、ラクトースおよびでんぷんを加えて混合した。ポリソルベートを純水に溶解した後、活性成分、乳糖およびでんぷんの混合物に適量の溶液を添加し、続いて噴霧した。乾燥後、顆粒をふるい分け、コロイド状二酸化ケイ素およびステアリン酸マグネシウムと混合した。顆粒を加圧して錠剤を調製した。

製造例２：医薬部外品組成物の調製
＜２−１＞経口用マウスウォッシュの調製
活性成分 ０．１〜１．０ｇ
キシリトール ５〜１０ｇ
エチルアルコール ５〜１５ｇ
ソルビトール ５〜１５ｇ
サッカリンナトリウム １０〜１００ｍｇ
モノフルオロリン酸ナトリウム ５００〜１０００ｍｇ
ラウリル硫酸ナトリウム １００〜２００ｍｇ
ポリソルベート２０ １００〜１０００ｍｇ
ペパーミントフレーバー １０〜１００ｍｇ
安息香酸ナトリウム １０〜１００ｇ

＜２−２＞練り歯磨きの調製
活性成分 １．９重量部
無水ケイ酸 １０．０重量部
キサンタンガム ０．７重量部
硫酸マグネシウム ２．０重量部
モノフルオロリン酸ナトリウム ０．７重量部
ソルビトール ５９．０重量部
ポリエチレングリコール ４．０重量部
サッカリンナトリウム ０．２重量部
ラウリル硫酸ナトリウム １．０重量部
フレーバー ０．５重量部
精製水 ２０．０重量部

＜２−３＞液体練り歯磨きの調製
活性成分 ２．２重量部
モノフルオロリン酸ナトリウム ０．７重量部
ソルビトール ５４．０重量部
濃縮グリセリン ２．０重量部
エタノール ５．０重量部
硫酸マグネシウム ２．０重量部
サッカリンナトリウム ０．２重量部
カラギーナン ０．５重量部
ラウリル硫酸ナトリウム ０．５重量部
ポリグリセリン脂肪酸エステル ２．０重量部
フレーバー ０．９重量部
精製水 ３０重量部

当業者であれば、前述の説明に開示された概念および特定の態様は、本発明の同じ目的を実行するための他の態様を変更または設計するための基礎として容易に利用できることを理解するであろう。当業者であれば、そのような均等な態様は添付の請求項に記載された本発明の精神および範囲から逸脱しないことを理解するであろう。

Claims (27)

1. マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物。
2. マグノリア花抽出物が、抽出溶媒として、水、Ｃ_１〜Ｃ_２低級アルコール、またはそれらの混合溶媒を使用することにより抽出される、請求項１に記載の歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物。
3. 画分が、マグノアリア花抽出物を酢酸エチル、ヘキサン、ベンゼンまたはクロロホルムで分画することによって得られる、請求項１に記載の歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物。
4. 画分が、マグノリア花抽出物を酢酸エチルで分画すること、および次いでメタノールを使用することにより画分のさらなる分画を行うことによって得られる；または酢酸エチルとヘキサンを３：７または５：５で含む混合溶媒を使用することにより画分のさらなる分画を行なうことによって得られる、請求項１に記載の歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物。
5. マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物。
6. 医薬部外品組成物が、練り歯磨き、マウスウォッシュまたは口内洗浄剤の形態である、請求項５に記載の歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物。
7. マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための健康機能性食品。
8. マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物。
9. 式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物。
   
10. 式１または式２で表される化合物が、マグノリア花抽出物から単離される、請求項９に記載の歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物。
11. 式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物。
12. 医薬部外品組成物が、練り歯磨き、マウスウォッシュまたは口内洗浄剤の形態である、請求項１１に記載の歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物。
13. 式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための健康機能性食品。
14. 式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物。
15. 上記式１または式２で表される化合物を単離するための方法であって、以下のステップ：
    １）マグノリア花抽出物を酢酸エチルで分画することにより生じた酢酸エチル層にメタノールを加えることによりメタノール画分を生成すること、
    ２）ステップ１）のメタノール画分に酢酸エチルおよびヘキサンを含む混合溶媒を加えることにより溶出液を得ること；および
    ３）ステップ２）の溶出液に結晶を析出させた後、フィルターで濾過すること、
    を含む前記方法。
16. マグノリア花抽出物が、抽出溶媒として水、Ｃ_１〜Ｃ_２低級アルコールまたはそれらの混合溶媒を使用することにより抽出される、請求項１５に記載の式１または式２で表される化合物を単離するための方法。
17. ステップ２の混合溶媒が、酢酸エチルおよびヘキサンを３：７または５：５の比率で含む、請求項１５に記載の式１または式２で表される化合物を単離するための方法。
18. 薬理学的に有効な用量のマグノリア花粉抽出物またはそれから単離された画分を対象に投与するステップを含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための方法。
19. マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物の使用。
20. マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物の使用。
21. マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎の予防または改善するための健康機能性食品の使用。
22. マグノリア花抽出物またはそれから単離された画分を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進するため、または歯周炎を改善するための化粧品組成物の使用。
23. 薬理学的に有効な用量の式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を対象に投与するステップを含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための方法。
24. 式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または処置するための医薬組成物の使用。
25. 式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための医薬部外品組成物の使用。
26. 式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を予防または改善するための健康機能性食品の使用。
27. 式１または式２で表される化合物、その薬学的に許容し得る塩、またはその光学異性体を活性成分として含む、歯根または歯周組織の成長を促進する、または歯周炎を改善するための化粧品組成物の使用。