JP2018522055A - がんを処置するためのサプレッサー細胞の近赤外光免疫療法（ｎｉｒ−ｐｉｔ） - Google Patents

がんを処置するためのサプレッサー細胞の近赤外光免疫療法（ｎｉｒ−ｐｉｔ） Download PDF

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Abstract

ＣＤ２５標的化近赤外光免疫療法により、独特、迅速、かつ空間的に選択的なＴｒｅｇの枯渇が引き起こされ、それにより、処置された腫瘍の退縮が導かれ、また、処置されていない腫瘍における全身免疫学的応答が誘導されることが示されている。これらの知見に基づいて、例えば、がんを処置するために、免疫サプレッサー細胞を死滅させる組成物および方法が提供される。例えば、被験体自身の免疫系を使用してがんを処置するために、被験体におけるサプレッサー細胞の数を低減させることにより、エフェクターＴ細胞の抑制を取り除くことができる。特定の実施例では、方法は、サプレッサー細胞表面タンパク質を有するサプレッサー細胞を抗体−ＩＲ７００分子と接触させるステップを含み、抗体は、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合するものであり、一部の実施例では、抗体は、機能的Ｆｃ領域を有さない。

Description

関連出願への相互参照
この出願は、２０１５年８月７日に出願された米国仮出願第６２／２０２，２５２号（これは、参考として本明細書に援用される）に対する優先権を主張する。
本出願は、抗体−ＩＲ７００コンジュゲート、および、抗体に特異的に結合するサプレッサー細胞を近赤外（ＮＩＲ）光の照射後に死滅させるための、その使用方法に関する。この方法を使用してサプレッサー細胞を死滅させることによってがんを処置する方法も提供される。
免疫調節性抗体、がんワクチン、および細胞に基づく療法の使用を含むがん免疫療法は、がんの制御における重要な戦略になっている（１〜４）。これらの療法は、最小限の侵襲性であるが、なお改善の余地がある（５、６）。最近、免疫細胞とがん細胞の相互作用の理解の改善により、免疫チェックポイント阻害剤の開発が導かれ、その注目すべき治療有効性が示されている（７〜９）。免疫抑制性の調節機構を阻害し、したがって、抗がん免疫応答を増強するための種々の戦略が開発されてきたが、正常な器官においてこれらの同じ機能が全身的に遮断されることにより、生命にかかわり、したがって、用量を限定する自己免疫性副作用が導かれている（１０〜１３）。全身的にではなく、腫瘍内の調節性Ｔ細胞を選択的かつ局所的に抑制する方法では、全身性有害作用を回避することができる。
近赤外光免疫療法（ＮＩＲ−ＰＩＴ）は、近赤外光によって活性化される抗体−光吸収体コンジュゲートの活性化を使用して細胞を死滅させる、がんの処置方法である（１４）。抗体は、適切な細胞表面抗原に結合するものであり、光活性化可能なシリカ−フタロシアニン色素（ＩＲＤｙｅ７００ＤＸ）は、ＮＩＲ光曝露後に細胞膜に対する致死的な損傷を誘導するものである。ＮＩＲ光曝露（６９０ｎｍ）により、隣接する細胞の損傷は伴わずに、高度に選択的な壊死性がん細胞死が数分以内に誘導される。手術不能の頭頸部がんの処置に関して、腫瘍ＥＧＦＲを標的とする、セツキシマブ−ＩＲ７００を使用したＮＩＲ−ＰＩＴの第Ｉ相ヒト試験が現在進行中である。ＮＩＲ−ＰＩＴは、近接する正常細胞は無傷のままにしながら、標的細胞を特異的に死滅させるものと思われる（１５〜１７）。
ＣｈｅｎおよびＭｅｌｌｍａｎ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１３）３９、１〜１０ ＣｈｉｌｄｓおよびＣａｒｌｓｔｅｎ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１５）１４、４８７〜４９８ Ｊｕｎｅら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．（２０１５）７、２８０ｐｓ７−２８０ｐｓ７
がん組織内では、がん細胞を認識するＴ細胞およびＮＫ細胞が多数存在する場合が多いが、それらの細胞傷害性機能は、近くの免疫サプレッサー細胞、例えば調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）などによって抑制される（２１、２２）。したがって、腫瘍浸潤性ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを制御することが、抗がん免疫反応を増強するために必須のステップであると考えられている（２３〜２５）。Ｔｒｅｇを枯渇させるまたは除去するために種々の手法が使用されているが、それらの成功は限られている（２２、２６〜２８）。例えば、全身性抗ＣＤ２５抗体を使用してＴｒｅｇを枯渇させることにより、ＣＤ２５を発現する抗腫瘍エフェクター細胞も枯渇し、それにより、Ｔｒｅｇ枯渇の治療効果が低減する（２９）。研究環境では、Ｔｒｅｇの排除は、抗ＣＤ４抗体の腫瘍内注射を用いて達成されている（３０）。あるいは、Ｔｒｅｇの一過性の条件付き除去が可能になるように、遺伝子操作された動物モデルが設計されている（３１〜３３）。しかし、この方法は、臨床へ変換するのは不可能である。したがって、他の細胞型および／または全身性Ｔｒｅｇを枯渇させることなく、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇの局所的な選択的枯渇を可能にする実用的な技法が大いに望ましい。
本発明者らは、腫瘍微小環境内のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを選択的に枯渇させて同系腫瘍モデルにおける抗腫瘍エフェクター細胞の活性化を誘導するために、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを使用した。サプレッサー細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ））を標的とする薬剤、例えば、光子吸収体とコンジュゲートした、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇに対する、Ｆｃ領域を有さない抗ＣＤ２５抗体（例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片）などにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの両方で、近赤外光（ＮＩＲ）への曝露後にのみ、これらのサプレッサー細胞を選択的に死滅させることができることが本明細書において示されている。そのような処置により、迅速かつ有効な腫瘍死滅をもたらすことができることも示されている。これらの知見に基づいて、例えば腫瘍を処置するために、サプレッサー細胞を死滅させる方法が提供される。抗体が、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合する、一部の実施例では機能的Ｆｃ領域を含まないものである、抗体−ＩＲ７００分子も提供される。そのような分子を開示されている方法において使用することができる。
サプレッサー細胞を死滅させる方法が本明細書で提供される。特定の実施例では、方法は、非サプレッサー細胞などの非標的細胞の死滅数は有意ではない（例えば、非サプレッサー細胞の１％未満または０．１％未満が死滅する、など）が、標的サプレッサー細胞の死滅数は有意であるという点で特異的である。しかし、一部の実施例では、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてサプレッサー細胞の全てが死滅するとは限らず、したがって、自己免疫の発生が導かれ得る。したがって、一部の実施例では、方法により、被験体の領域内、例えば、腫瘍の領域内または以前に腫瘍を有した領域内の抗体−ＩＲ７００分子の標的となるサプレッサー細胞の数が少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減する。一部の実施例では、方法により、被験体内の抗体−ＩＲ７００分子の標的となるサプレッサー細胞の総数が少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減する。
一部の実施例では、方法は、サプレッサー細胞表面タンパク質を発現するサプレッサー細胞を治療有効量の１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と接触させるステップを含み、抗体は、サプレッサー細胞表面タンパク質（例えば、ＣＤ２５、ＣＤ４、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン−１デコイ受容体、ＣＤ１０３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂなど）に特異的に結合する、一部の実施例では機能的Ｆｃ領域を含まないものである（例えば、１つまたは複数のＦ（ａｂ’）２断片からなる）。機能的Ｆｃ部分の存在により、自己免疫性毒性（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）など）が生じる可能性がある。ＡＤＣＣの結果は、ＮＩＲ光に曝露したサプレッサー細胞だけでなく、あまりに多くのサプレッサー細胞が死滅するというものである。したがって、抗体のＦｃ部分を変異させるまたは除去してその機能を実質的に低減させることができる（例えば、Ｆｃγ受容体に結合する能力などのＦｃ機能の、変異していないＦｃ領域と比較して少なくとも５０％、少なくとも７５％ 少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の低下など）。
サプレッサー細胞表面タンパク質は、少なくとも部分的にまたは完全にサプレッサー細胞の細胞表面上にあり、したがって、適切な特異的抗体（またはその断片）がそれに結合することが可能なものである。例えば、サプレッサー細胞表面タンパク質は、膜貫通タンパク質であり得、その細胞外ドメインに抗体−ＩＲ７００分子の抗体（またはその断片）が結合することが可能である。一部の実施例では、サプレッサー細胞表面上のタンパク質（複数可）は他の細胞上（例えば、非Ｔ細胞など）には有意には見いだされず、したがって、抗体は、非標的細胞には有意には結合しない。標的化することができるそのようなサプレッサー細胞表面タンパク質の例としては、これだけに限定されないが、ＣＤ２５、ＣＤ４、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン−１デコイ受容体、ＣＤ１０３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂが挙げられる。例えば、サプレッサー細胞と１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子とを、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子がサプレッサー細胞表面タンパク質（複数可）に結合することが可能になる条件下でインキュベートすることができる。次いで、サプレッサー細胞に対して、６６０〜７４０ｎｍ、例えば、６６０〜７１０ｎｍ（例えば、６８０ｎｍまたは６９０ｎｍ）などの波長、少なくとも１Ｊ ｃｍ−２（例えば、少なくとも２Ｊ ｃｍ−２、少なくとも３Ｊ ｃｍ−２、少なくとも４Ｊ ｃｍ−２、少なくとも５Ｊ ｃｍ−２、少なくとも６Ｊ ｃｍ−２、少なくとも７Ｊ ｃｍ−２、少なくとも８Ｊ ｃｍ−２、少なくとも９Ｊ ｃｍ−２、少なくとも１０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも２０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも３０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも４０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも５０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも７５Ｊ ｃｍ−２、または少なくとも１００Ｊ ｃｍ−２など）の線量で照射を行い、それにより、ＮＩＲ光に曝露したサプレッサー細胞を死滅させる。この方法を用いて標的化することができるサプレッサー細胞の例としては、これだけに限定されないが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、ＩＩ型ナチュラルキラーＴ細胞（ＩＩ型ＮＫＴ細胞）、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ、Ｍ２マクロファージ、腫瘍浸潤線維芽細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、ならびにこれらの組合せ（例えば、それぞれが特定の型のサプレッサー細胞に特異的な複数の抗体−ＩＲ７００分子を使用することによって）が挙げられる。一部の実施例では、方法により、これらの型のサプレッサー細胞の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全ての少なくとも一部分が死滅する。
そのような方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、例えば、サプレッサー細胞の培養物を１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と一緒にインキュベートし、次いで、細胞に対して６６０〜７４０ｎｍの波長、少なくとも１Ｊ ｃｍ−２の線量で照射を行い、それにより、サプレッサー細胞を死滅させることにより、実施することができる。別の実施例では、サプレッサー細胞は被験体内に存在し、サプレッサー細胞を１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と接触させるステップは、治療有効量の１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を被験体に投与すること（例えば、注射によって）を含む。次いで、被験体（例えば、被験体内の腫瘍または被験体の別の部分）に対して６６０〜７４０ｎｍの波長、少なくとも４Ｊ ｃｍ−２の線量で照射を行い、それにより、ＮＩＲ光に曝露した被験体内のサプレッサー細胞を死滅させる。例えば、方法は、被験体が装着した、ＮＩＲ発光ダイオード（ＬＥＤ）を含むデバイスを使用することによってサプレッサー細胞に対して照射を行い、それにより、抗体−ＩＲ７００分子が結合しており、ＮＩＲ光に曝露したサプレッサー細胞を死滅させるステップを含んでよい。
開示されている方法は、一部の実施例では、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、がんなどの腫瘍を処置するために使用することができる。開示されている療法を用いて処置される被験体は、追加的な抗新生物療法などの他の処置を受けることができる。例えば、方法により、腫瘍の体積、腫瘍のサイズ、腫瘍の重量、転移の数、またはこれらの組合せを、処置を欠く場合と比較して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減させることができる。一部の実施例では、方法により、抗体−ＩＲ７００分子の投与および照射を欠く場合と比較して被験体の生存時間が増大する。一部の実施例では、方法により、転移自体にはＮＩＲ光の照射を行わなくても（その代わりに、原発腫瘍にのみＮＩＲ光の照射を行う）、転移の体積、転移のサイズ、転移の重量、転移の数、またはこれらの組合せを、例えば、開示されている方法を用いた処置前の転移の体積、転移のサイズ、転移の重量、または転移の数と比較して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減させることができる。
抗体が、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合する、一部の実施例では機能的Ｆｃ領域を含まないものである、抗体−ＩＲ７００分子も提供される。例えば、サプレッサー細胞表面タンパク質は、ＣＤ２５、ＣＤ４、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、ＣＤ１０３、インターロイキン−１デコイ受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂであってよい。一部の実施例では、抗体は、１つまたは複数のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片である。一実施例では、抗体は、ＣＤ１０３に対して特異的なものである。一部の実施例では、抗体対ＩＲ７００の比は、約１：３である。
本開示の前述および他の特徴は、以下の、添付の図面を参照しながら進めるいくつかの実施形態の詳細な説明からより明らかになろう。
図１は、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２抗体断片をどのように生成したかを概略的に示す画像である。
図２Ａ〜２Ｃは、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を使用したＣＤ２５のｉｎ ｖｉｔｒｏ標的化を示す画像である。（Ａ）抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２および対照ＩｇＧから消化した対照−Ｆ（ａｂ’）２ならびにそれらのＩＲ７００のコンジュゲートのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析。抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００バンドおよび対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００バンドはどちらも同様のＩＲ７００−蛍光を示し、これは、（Ｂ）蛍光強度の定量化（ｎ＝３）（＊ｎｓ、マン・ホイットニー検定）によって確認された。（Ｃ）抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００のＣＤ２５発現ＨＴ−２ Ａ５Ｅ細胞への結合のフローサイトメトリー分析。 同上
図３Ａ〜３Ｃは、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２投与にはＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ枯渇効果はないが、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を用いたＮＩＲ−ＰＩＴでは、標的細胞が死滅することを示す。（Ａ）抗ＣＤ２５−ＩｇＧ（１００μｇ）の静脈内注射ではＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇが全身的に枯渇したが、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２（１００μｇ）では、注射後１日でＣＤ４ Ｔ細胞集団内のこれらの細胞は有意には枯渇しなかった（ｎ＝３）（＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｎｓ、有意でない、一元配置ＡＮＯＶＡとダネット検定）。（Ｂ）抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００と一緒に６時間インキュベートしたＨＴ−２ Ａ５Ｅ細胞（マウスＴリンパ球）を、ＮＩＲ光照射（４Ｊ／ｃｍ２）の前および０．５時間後に顕微鏡の下で検査した。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色を用いて示される通り、ＮＩＲ光照射により、細胞腫脹、ブレブ形成、および細胞の壊死が誘導された（バー＝１０μｍ）。（Ｃ）ＮＩＲ−ＰＩＴによって誘導される壊死性細胞死は、ＰＩ染色を伴うフローサイトメトリー分析によって決定したところ、ＮＩＲ光線量依存的に増大した（左側のグラフ、ｎ＝３、＊：０Ｊ／ｃｍ２に対してｐ＜０．０００１、対応のないｔ検定）。対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を使用した場合には有意な細胞死滅は検出されなかった（右側のグラフ、ｎ＝３、＊＊ｎｓ、０Ｊ／ｃｍ２に対して有意でない、対応のないｔ検定）。 同上
図４Ａ〜４Ｂは、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を使用したＮＩＲ−ＰＩＴにより、ＣＤ２５発現細胞の壊死がＮＩＲ光線量依存的に誘導されることを示す一連のグラフである。フローサイトメトリーによって分析したＰＩ染色によって示される通り、ＣＤ２５発現ＨＴ−２ Ａ５Ｅ細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００ ＮＩＲ−ＰＩＴにより、これらの細胞の壊死がＮＩＲ光線量依存的に誘導された。 同上
図５Ａ〜５Ｉは、ｉｎ ｖｉｖｏ局所ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、処置されたＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍の退縮が誘導されることを示す。（Ａ）腫瘍（ＬＬ／２−ｌｕｃまたはＭＣ３８−ｌｕｃ）において、脾臓におけるものと比較して、ＣＤ４ Ｔ細胞におけるＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ集団の増大が観察された（ｎ＝３）（＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．００１、対照に対して、一元配置ＡＮＯＶＡとダネット検定）。（Ｂ）局所的ＮＩＲ−ＰＩＴのレジメンが示されている。（Ｃ）処置されていないか、対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００投与の後にＮＩＲ−ＰＩＴを受けたか、ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を単独で投与されたか、または局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを用いて処置された、腫瘍を有するマウスについてのｉｎ ｖｉｖｏ ＢＬＩが示されている。ＮＩＲ−ＰＩＴの前には、腫瘍のサイズは同等であり、同様の生物発光が示されたが、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴでのみＢＬＩの低減が示された。（Ｄ）定量的ＲＬＵにより、実験的腫瘍（各群ｎ＝６のマウス）において有意なＲＬＵ低減が示された（＊ｐ＝０．０２１７（１日目）、０．０２４３（２日目）＜０．０５、ＰＩＴ 対 対照、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。（Ｅ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍体積の縮小が導かれた（各群ｎ＝８のマウス、＊ｐ＜０．０００１、ＰＩＴ対その他、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。グラフの下に示されている処置スケジュールは、（Ｂ）における処置スケジュールと対応する。（Ｆ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、マウスの長期生存が導かれた（各群ｎ＝８のマウス）（＊ｐ＜０．０００１、ＰＩＴ 対 対照、ログランク検定およびウィルコクソンの検定）。（Ｇ）ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを受けていないマウス体重は、腫瘍の成長に起因して徐々に増加し、それとは対照的に、ＰＩＴ群では１４日目において有意に少ない体重が示された（各群ｎ＝８のマウス）（＊ｐ＝０．０１２８＜０．０５、ＰＩＴ 対 対照、１４日目）。（Ｈ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍内ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの枯渇がもたらされたが、脾臓における枯渇はもたらされなかった（ｎ＝５）（＊ｐ＜０．０１、ｎｓ：有意でない、マン・ホイットニー検定）。（Ｉ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴは、ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）またはＮＫ細胞（ＣＤ３−ＮＫ１．１＋）の数に有意な影響を及ぼさなかった（ｎ＝５）（ｎｓ：有意でない、マン・ホイットニー検定）。 同上 同上 同上 同上
図６は、腫瘍に浸潤するＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞がＣＤ２５を発現しないことを示す一連のフローサイトメトリープロットを示す。ＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍、ＭＣ３８−ｌｕｃ腫瘍、またはＴＲＡＭＰ−Ｃ２腫瘍から採取したＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞のフローサイトメトリー分析により、これらの細胞がＣＤ２５を発現しないことが示された。
図７は、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００が腫瘍細胞に結合しないことを示す一連のフローサイトメトリープロットを示す。ＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍、ＭＣ３８−ｌｕｃ腫瘍、またはＴＲＡＭＰ−Ｃ２腫瘍細胞と一緒にインキュベートした抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００、対照−ＩｇＧ−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００、またはＩＲ７００色素の結合はフローサイトメトリー分析によって示されなかった。
図８は、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを用いた腫瘍浸潤性ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの枯渇がＮＩＲ光線量依存性であることを示すプロットである。漸増線量のＮＩＲ光を使用した局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの前および３０分後にＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍からリンパ球を採取した。ＣＤ４ Ｔ細胞内のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ集団のフローサイトメトリー分析により、ＴｒｅｇがＮＩＲ光線量依存的に低減することが示された（ｎ＝３）（＊ｐ＜０．００５、＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊＊ｐ＜０．０００１、０Ｊ／ｃｍ２に対して、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。
図９は、腫瘍浸潤性ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋細胞が局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴによって枯渇することを示すプロットである。局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの前およびすぐ（３０分）後にＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍からリンパ球を採取した。１グラム当たりのＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋細胞数のフローサイトメトリー分析により、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋細胞が局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後に低減することが示された（ｎ＝５）（＊ｐ＜０．０１、マン・ホイットニー検定）。
図１０Ａ〜１０Ｈは、ＭＣ３８−ｌｕｃ腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍の退縮が誘導されることを示す。（Ａ）局所的ＮＩＲ−ＰＩＴのレジメンが示されている。（Ｂ）処置されていないか、対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００の投与後ＮＩＲ−ＰＩＴを受けたか、ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を単独で投与されたか、または局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを用いて処置された、腫瘍を有するマウスについてのｉｎ ｖｉｖｏ ＢＬＩが示されている。ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴでのみシグナルの低減がもたらされた。（Ｃ）定量的ＲＬＵにより、ＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍におけるシグナルの有意な低減が示された（各群ｎ＝７のマウス）（＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＝０．０２６８（対照に対して）、０．０２３６（対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００＋ＮＩＲ光に対して）、０．００５６（抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００ ｉｖに対して）＜０．０５、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。（Ｄ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍体積の低減が導かれ（各群ｎ＝９のマウス）（＊ｐ＜０．０００１、ＰＩＴ対その他、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）、また、（Ｅ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、マウスの長期生存が導かれた（各群ｎ＝９のマウス）（＊ｐ＜０．０００１、ＰＩＴ 対 対照、ログランク検定およびウィルコクソンの検定）。（Ｆ）処置の過程中、マウスの群間で体重変化に有意差は示されなかった（各群ｎ＝９のマウス）。（Ｇ）腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、脾臓内のＴｒｅｇには影響を及ぼすことなく、ＣＤ４集団内のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの枯渇がもたらされた（ｎ＝５）（＊ｐ＜０．０１、ｎｓ：有意でない、マン・ホイットニー検定）。（Ｈ）ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴは、腫瘍内のＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）の数にもＮＫ細胞（ＣＤ３−ＮＫ１．１＋）の数にも有意な影響を及ぼさなかった（ｎ＝５）（ｎｓ：有意でない、マン・ホイットニー検定）。 同上 同上 同上
図１１Ａ〜１１Ｄは、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、ＴＲＡＭＰ−Ｃ２−ｌｕｃ側腹部腫瘍の退縮が誘導されることを示す。（Ａ）ＣＤ４ Ｔ細胞内のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ集団の画分がＴＲＡＭＰ−Ｃ２−ｌｕｃ腫瘍において脾臓と比較して増大した（ｎ＝３）（＊ｐ＜０．０１、マン・ホイットニー検定）。（Ｂ）局所的ＮＩＲ−ＰＩＴのレジメンが示されている。（Ｃ）腫瘍を有するマウスのｉｎ ｖｉｖｏ ＢＬＩにより、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴによる腫瘍における生物発光シグナルの低減が示された。（Ｄ）定量的ＲＬＵにより、ＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍におけるシグナルの有意な低減が示された（各群ｎ＝５のマウス）（＊ｐ＜０．０１、ＰＩＴ 対 対照、マン・ホイットニー検定）。 同上
図１２Ａ〜１２Ｆは、反復局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴと腫瘍微小環境におけるＴｒｅｇの再増殖の同期により、腫瘍の成長の長期にわたる抑制が可能になることを示す。（Ａ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後にＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍から採取したリンパ球のフローサイトメトリー分析により、腫瘍内ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの枯渇がおよそ４日間持続し、その後、腫瘍内ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇは腫瘍床において徐々に再増殖したことが示された（ｎ＝３）。（Ｂ）反復局所的ＮＩＲ−ＰＩＴのレジメンが示されている。（Ｃ）ＢＬＩにより、アルビノマウスに接種したＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍に対する反復局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍退縮を反復して誘導することができることが示された。（Ｄ）定量的ＲＬＵにより、ＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍におけるシグナルの有意な低減が示される（各群ｎ＝７のマウス）（＊ｐ＜０．００１、マン・ホイットニー検定）。（Ｅ）反復局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍体積の低減が導かれ（各群ｎ＝７のマウス）（＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００１、マン・ホイットニー検定）、また、（Ｆ）反復局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、マウスの長期生存が導かれる（＊ｐ＜０．０００１、ログランク検定およびウィルコクソンの検定）。 同上 同上 同上
図１３Ａ〜１３Ｂは、ｉｎ ｖｉｖｏ局所ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍内ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の迅速な活性化および細胞傷害性が誘導されることを示す。（Ａ）ＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍またはＭＣ３８−ｌｕｃ腫瘍に浸潤するＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の細胞傷害性作用を、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを伴うまたは伴わないフローサイトメトリー分析によって調査した。ＰＩＴの１．５時間後に採取したＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞はＩＦＮγおよびＩＬ−２を産生し、ＣＤ１０７ａが細胞表面上に露出していたが、処置されていない腫瘍由来の細胞はそうではなかった（ｎ＝５）（＊ｐ＜０．０１、マン・ホイットニー検定）。（Ｂ）ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の両方における、活性化マーカーであるＣＤ６９およびＣＤ２５の発現、ならびにＩＬ−２の産生が局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの１日後に上方制御された（ｎ＝５）（＊ｐ＜０．０１、マン・ホイットニー検定）。 同上
図１４Ａ〜１４Ｃは、各処置時に、反復局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞でのＣＤ２５発現の上方制御が誘導されることを示す。（Ａ）反復局所的ＮＩＲ−ＰＩＴにおけるＣＤ２５発現の分析のレジメンが示されている。（Ｂ）ＣＤ２５発現のＭＦＩ（幾何平均蛍光強度）は第１の局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後に増大した（ｎ＝３）（＊ｐ＝０．０３７６＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０００５、対応のないｔ検定）。（Ｃ）第１のＮＩＲ−ＰＩＴの４日後に、ＣＤ２５発現のレベルは処置前レベルまで戻った。第２の局所的ＮＩＲ−ＰＩＴにより、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化およびＣＤ２５発現の上方制御が再度誘導された（ｎ＝３）（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．００５、対応のないｔ検定）。 同上
図１５Ａ〜１５Ｄは、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍浸潤樹状細胞および他の抗原提示細胞の活性化が誘導されることを示す。腫瘍浸潤免疫細胞のフローサイトメトリーにより、処置の１日後に、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴが、腫瘍浸潤性の（Ａ）樹状細胞（ＣＤ１１ｃ＋）、（Ｂ）Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、（Ｃ）単球（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｃｈｉｇｈ）、および（Ｄ）マクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｃｌｏｗ−ｉｎｔ）の活性化を誘導することが示された（ｎ＝３）（＊ｐ＝０．０１０４＜０．０５、対応のないｔ検定）。分析の集団を左側のパネルに示した。 同上 同上
図１６は、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、処置された腫瘍内の顆粒球の増加が誘導されることを示すプロットである。腫瘍浸潤顆粒球（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｃｌｏｗ−ｉｎｔＬｙ６Ｇｈｉｇｈ）のフローサイトメトリー分析により、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴが、これらの細胞の増加を誘導することが示された（ｎ＝３）（＊ｐ＝０．０１８８（腫瘍１ｇ当たり）、０．０１６８（腫瘍当たり）＜０．０５、対応のないｔ検定）。腫瘍１ｇ当たりの細胞数と腫瘍当たりの細胞数の両方が示されている。
図１７Ａ〜１７Ｂは、腫瘍に対するＮＩＲ光照射により、無視できるレベルのサイトカインおよびケモカイン産生が誘導されることを示す棒グラフである。（Ａ）同じマウスにおいて腫瘍へのＮＩＲ光照射の前および１．５時間後の血清サイトカインおよびケモカインレベルを測定した。結果は増加倍率（ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ）として示されている（ｎ＝３）。（Ｂ）腫瘍内のサイトカインおよびケモカインレベルを、ＮＩＲ光照射された腫瘍を有するマウスとＮＩＲ光照射されていない腫瘍を有するマウスの間で比較した。１．５時間の時点で細胞外液を採取するために腫瘍を回収した（ｎ＝３）。 同上
図１８Ａ〜１８Ｊは、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより全身性および腫瘍内サイトカインストームが誘導されることを示すグラフである。（Ａ）腫瘍への局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの前および１．５時間後の血清サイトカインおよびケモカインレベルを同じマウスにおいて処置前および処置後に測定した。結果は増加倍率として示されている（ＩＬ−１０およびＩＬ−６は左側の軸を使用して測定し、その他は右側の軸を使用して測定した）（ｎ＝３）。（Ｂ）同様に、ＮＩＲ−ＰＩＴの前と１日後の血清サイトカインおよびケモカインレベルを比較した（ｎ＝３）。腫瘍内のサイトカインおよびケモカインレベルを、処置された腫瘍を有するマウスと処置されていない腫瘍を有するマウスの間で比較した。ＮＩＲ−ＰＩＴの１．５時間後（Ｃ）および１日後（Ｄ）に、細胞外液を採取するために腫瘍を回収した（ｎ＝３）。（Ｅ〜Ｇ）（Ｅ）ＩＦＮγ（Ｆ）ＩＬ−６および（Ｇ）Ｇ−ＣＳＦの血清中濃度（ｎ＝３）。（Ｈ〜Ｊ）（Ｈ）ＩＦＮγ（Ｉ）ＩＬ−６および（Ｊ）Ｇ−ＣＳＦの腫瘍内濃度（ｎ＝３）。 同上 同上 同上 同上
図１９は、肺におけるＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞によるＩＦＮγ産生がＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの１日後には検出されなかったことを示すプロットである。フローサイトメトリーアッセイにより、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの１日後に肺から採取されたＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞におけるＩＦＮγ産生は検出されなかった（ｎ＝５）（ｎｓ：有意でない、マン・ホイットニー検定）。
図２０Ａ〜２０Ｋは、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの治療効果が遠位の照射を受けていない腫瘍まで及ぶことを示す。（Ａ）ＮＩＲ−ＰＩＴのレジメンが示されている。（Ｂ）両側側腹部腫瘍を有するマウスに対し、注射を行わない（対照）か、または対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００もしくは抗ＣＤ２５ Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を注射し、その後、右側の腫瘍にのみＮＩＲ光照射を行った。（Ｃ）ｉｎ ｖｉｖｏ ＢＬＩにより、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴのみに応答して腫瘍における生物発光シグナルの変化が示された。ＮＩＲ−ＰＩＴの前には、腫瘍はおよそ同じサイズであり、また、同様の生物発光を示した。（Ｄ）定量的ＲＬＵにより、ＮＩＲ−ＰＩＴで処置された右側の腫瘍において、およびさらには照射を受けていない左側の腫瘍においてもシグナルの有意な低減が示された（各群ｎ＝６のマウス）（＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＝０．０１９７（ＰＩＴ：Ｒ）、＝０．０１４２（ＰＩＴ：Ｌ）＜０．０５、ＰＩＴ 対 対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００ ｉｖ：Ｒ、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。（Ｅ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、ＮＩＲ−ＰＩＴで処置された右側の腫瘍ならびに照射を受けていない左側の腫瘍のサイズの縮小が導かれた（各群ｎ＝８のマウス）（＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０００５、ＰＩＴ対その他、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。処置の時間がグラフの下に示されている。（Ｆ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、マウスの長期生存が導かれた（各群ｎ＝８のマウス）（＊ｐ＜０．０００１、ＰＩＴ 対 対照、ログランク検定およびウィルコクソンの検定）。（Ｇ）腫瘍を有するマウスの体重変化を追跡した。ＮＩＲ−ＰＩＴ後、右背部および左背部の両方が浮腫状になり、マウスの体重が増加し（各群ｎ＝８のマウス）（＊ｐ＜０．００１、ＰＩＴ対その他、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）、１０日目までに消失し始めた。（Ｈ）右背部の腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、浮腫が両側性に引き起こされた（矢印）。（Ｉ）ＮＩＲ−ＰＩＴにより、右背部の照射を受けた腫瘍内のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇは枯渇したが、左側の照射を受けていない腫瘍内のＴｒｅｇは枯渇しなかった。注射を受けていないマウス（対照）または対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００の注射を受けたマウスでは、右側の腫瘍と左側の腫瘍の間でＴｒｅｇ集団に有意差は示されなかった（各群ｎ＝５）（＊ｐ＜０．０００１、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。（Ｊ）右背部のＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、処置の１日後に他の多発性ＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍の退縮が引き起こされた。（Ｋ）右背部のＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴには、ＰＩＴの１日後に、左背部のＭＣ３８−ｌｕｃ腫瘍に対するごくわずかな抗腫瘍効果があった。 同上 同上 同上 同上 同上
図２１は、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、処置された腫瘍のＩＲ７００−蛍光が低減するが、対側の照射を受けていない腫瘍のＩＲ７００−蛍光は低減しなかったことを示すデジタル画像である。局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後にＩＲ７００−蛍光は右側のＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍では低減したが、左側の照射を受けていない腫瘍では蛍光の変化は見られなかった。ｅｘ ｖｉｖｏ腫瘍のＩＲ７００−蛍光画像も実証された。
図２２は、右背部の腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、遠位部位における多数の腫瘍の低減が誘導されることを示すデジタル画像である。右背部のＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、処置の１日後に、遠位部位に位置する他の多発性ＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍の退縮が引き起こされた（図２０Ｊにおける同じ実験の別のマウス）。
図２３Ａ〜２３Ｂは、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、対側にチャレンジした腫瘍の成長が阻害されることを示す。（Ａ）ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの１日後における腫瘍チャレンジのレジメンが示されている。略図も示されている。（Ｂ）同じ種類の腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの１日後に対側に接種したＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍が、対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００投与とＮＩＲ光照射を受けた対照マウス（ｎ＝５）に接種した腫瘍と比較して阻害された。
図２４Ａ〜２４Ｄは、同側ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後に、対側腫瘍内に活性化されたＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞が存在することを示す。（Ａ〜Ｄ）右背部の腫瘍に対する局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを受けたマウスにおける照射を受けていない左背部の腫瘍から採取したＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞を、活性化マーカーの発現について処置の１日後に分析した。右側の腫瘍に対するＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後に、照射を受けていない左側の腫瘍に、ＩＦＮγ（Ａ）およびＩＬ−２（Ｂ）を産生し、ＣＤ２５発現（Ｃ）およびＣＤ６９発現（Ｄ）が上方制御されたＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞が存在していた（ｎ＝５）（＊ｐ＜０．０１、マン・ホイットニー検定）。
図２５Ａ〜２５Ｃは、対側の照射を受けていない腫瘍におけるサイトカインおよびケモカインのレベルがＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後に上昇することを示す。（Ａ）療法の１日後に、照射を受けていない左背部の腫瘍で反対の右側の腫瘍に対するＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴに応答したサイトカイン／ケモカインレベルの上昇が示された（ｎ＝３）。（Ｂ〜Ｃ）左側の照射を受けていない腫瘍において、（Ｂ）ＩＦＮγの濃度（Ｃ）Ｇ−ＣＳＦの濃度が上昇した（ｎ＝３）（＊ｐ＜０．０１、マン・ホイットニー検定）。 同上
図２６Ａ〜２６Ｆは、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの抗腫瘍効果が、ＮＫ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＩＦＮγ産生のそれぞれに部分的に依存することを示す。（Ａ）ＮＫ細胞またはＣＤ８ Ｔ細胞の枯渇、またはＩＦＮγの中和の下でのＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍に対するＮＩＲ−ＰＩＴのレジメンが示されている（枯渇Ａｂｓ ｉ．ｐ．）。（Ｂ）ｉｎ ｖｉｖｏ ＢＬＩおよび（Ｃ）定量的ＲＬＵにより、ＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍における生物発光シグナルの有意な低減が示されたが、ＮＫ細胞の枯渇（抗ＮＫ１．１）またはＣＤ８ Ｔ細胞の枯渇（抗ＣＤ８）またはＩＦＮγの中和（抗ＩＦＮγ）により、その効果は低下した（各群ｎ＝５のマウス）（＊ｐ＝０．０１５８＜０．０５、ＰＩＴ 対 抗ＮＫ１．１＋ＰＩＴ、＊ｐ＜０．０００１、ＰＩＴ 対 対照、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。（Ｄ）同様に、腫瘍の成長の抑制における局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの効果は枯渇または中和抗体の組合せによって阻害され（各群ｎ＝７のマウス）（＊ｐ＜０．０００１、ＰＩＴ対その他、チューキー検定とＡＮＯＶＡ、処置がグラフの下に示されている）、その結果、（Ｅ）これらのマウスの群の生存がＰＩＴ群と比較して短くなった（各群ｎ＝７のマウス）（＊ｐ＜０．０００１ 対照に対して、ログランク検定およびウィルコクソンの検定）。（Ｆ）群間で体重変化に有意差は示されなかった（各群ｎ＝７のマウス、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。 同上 同上
図２７Ａ〜２７Ｆは、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの抗腫瘍効果が少なくとも部分的にＩＦＮγ依存性であることを示す。（Ａ）ＮＩＲ−ＰＩＴのレジメンが示されている。（Ｂ）野生型（ＷＴ）およびＩＦＮγ欠損（ＩＦＮγ ＫＯ）マウスにおける局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴに応答したＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏ ＢＬＩにより、１日目に、ＷＴマウスにおけるＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍のみで生物発光シグナルの低減が実証されたことが示された。（Ｃ）定量的ＲＬＵにより、ＷＴマウスにおけるＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍ではＲＬＵが有意に低減したが、ＩＦＮγ ＫＯにおけるＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍ではＲＬＵは有意に低減しなかった（各群ｎ＝５のマウス）（＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＝０．０４２２（ＷＴ対照に対して）、０．０３１５（ＫＯ対照に対して）、０．０２５５（ＫＯ−ＰＩＴに対して）＜０．０５、ＷＴ−ＰＩＴ対その他、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。（Ｄ）局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、ＷＴマウスにおけるＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍の腫瘍体積の低減が導かれたが、ＩＦＮγ ＫＯマウスにおける局所的ＮＩＲ−ＰＩＴの抗腫瘍効果は有意ではなかった（各群ｎ＝７のマウス）（＊ｐ＜０．０００１、ＷＴ−ＰＩＴ対その他、チューキー検定とＡＮＯＶＡ、処置がグラフの下に示されている）。（Ｅ）ＷＴマウスおよびＩＦＮγ ＫＯマウスにおける、ＰＩＴを用いたＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍を有するマウスの生存曲線により、ＩＦＮγの欠損により、処置の効果が少なくとも部分的に抑止されることが示された（各群ｎ＝７のマウス）（＊ｐ＜０．０００１、ＷＴ対照に対して、ログランク検定およびウィルコクソンの検定）。（Ｆ）ＷＴマウスおよびＩＦＮγ ＫＯマウスにおいて体重変化に有意差は示されなかった（各群ｎ＝７のマウス、チューキー検定とＡＮＯＶＡ）。 同上 同上
図２８は、提唱された局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ誘導性免疫療法の機構を示す概略図である。ＴｒｅｇによりＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化が抑制され、それにより、腫瘍の成長に対する許容的環境がもたらされる（上のパネル）。ＮＩＲ−ＰＩＴ後にＴｒｅｇが選択的に枯渇したら、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞が腫瘍に対して活性化される（中央のパネル）。活性化されたＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、処置された腫瘍を離れて、放出されたサイトカインおよびケモカインと共同して遠位の腫瘍を攻撃し得る（下のパネル）。
特に説明がなければ、本明細書において使用される全ての科学技術用語は、開示されている発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。単数の用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでないことが明らかでない限り、複数の指示対象を包含する。同様に、「または（ｏｒ）」という単語は、文脈によりそうでないことが明白に示されない限り、「および（ａｎｄ）」を含むものとする。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」を意味する。したがって、「ＡまたはＢを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ａ ｏｒ Ｂ）」とは、「Ａを含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ａ）」または「Ｂを含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｂ）」または「ＡおよびＢを含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ａ ａｎｄ Ｂ）」を意味する。
本開示の複数の実施形態を実施および／または試験するための適切な方法および材料が下に記載されている。そのような方法および材料は単に例示的なものであり、限定されるものではない。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９年；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、２００１年；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、１９９２年（および２０００年までの補遺）；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第４版、Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９９年；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９０年；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９年におけるものなどの、本明細書に記載のものと同様または同等である他の方法および材料を使用することができる。
特許および特許出願を含めた全ての参考文献が参照により本明細書に組み込まれる。さらに、本明細書において参照される全てのＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号に関連する配列は、２０１５年８月７日時点で入手可能な配列に関して参照により組み込まれる。本開示の種々の実施形態についての精査を容易にするために、以下の特定の用語の説明を提示する：
投与：被験体に抗体−ＩＲ７００分子などの薬剤を任意の有効な経路によって提供するまたは与えること。例示的な投与経路としては、これだけに限定されないが、局部経路、注射経路（例えば、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、腫瘍内、および静脈内など）、経口経路、眼経路、舌下経路、直腸経路、経皮経路、鼻腔内経路、膣経路および吸入経路が挙げられる。
抗体：腫瘍特異的タンパク質などの抗原のエピトープを特異的に認識し、それに結合する、少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドリガンド。抗体は、重鎖および軽鎖で構成され、そのそれぞれが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域と称される可変領域を有する。まとめると、ＶＨ領域およびＶＬ領域は、抗体によって認識される抗原の結合に関与する。
抗体は、抗体の部分、例えば、Ｆｃ領域を有さないものなど、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ＣＨ２欠失Ａｂ、単一ドメインＶ領域Ａｂ、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、およびジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）などを含む。ｓｃＦｖタンパク質は、免疫グロブリンの軽鎖可変領域および免疫グロブリンの重鎖可変領域がリンカーによって結合した融合タンパク質であり、一方、ｄｓＦｖは、鎖の会合を安定化するために、ジスルフィド結合が導入されるように鎖を変異させたものである。この用語は、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体など）などの、遺伝子操作された形態も包含する。Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、１９９４〜１９９５年（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）；Ｋｕｂｙ， Ｊ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３版、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９７年も参照されたい。
一部の実施例では、抗体は、Ｆｃ領域の機能が実質的に低下するようにＦｃ領域を変異させた、またはさらには欠失させた免疫グロブリンを含む。一部の実施例では、変異により、Ｆｃγ受容体に結合する能力などのＦｃ領域の機能が、変異を伴わないＦｃ領域の機能と比較して少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％低下する。
一般には、天然に存在する免疫グロブリンは、ジスルフィド結合によって相互接続した重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。軽鎖には２つの型、ラムダ（λ）およびカッパ（ｋ）が存在する。抗体分子の機能活性を決定する５つの主要な重鎖クラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥが存在する。
重鎖および軽鎖はそれぞれ定常領域および可変領域を含有する（領域は「ドメイン」としても公知である）。重鎖可変領域および軽鎖可変領域は共同して抗原に特異的に結合する。軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも称される３つの超可変領域が割り込んだ「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は定義されている（これによって参照により組み込まれる、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９９１年を参照されたい）。Ｋａｂａｔデータベースは現在オンラインで維持されている。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、ヒトなどの種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち構成要素である軽鎖および重鎖のフレームワーク領域の組合せは、ＣＤＲを３次元空間内に位置付け、アラインメントする働きをする。
ＣＤＲは、主に抗原のエピトープへの結合に関与する。各鎖のＣＤＲは、一般には、Ｎ末端から逐次的に番号を付して、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と称され、また、一般には、特定のＣＤＲが位置する鎖によって同定される。したがって、ＶＨ ＣＤＲ３は、それが見いだされる抗体の重鎖の可変ドメインに位置し、ＶＬ ＣＤＲ１は、それが見いだされる抗体の軽鎖の可変ドメインに由来するＣＤＲ１である。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。ＣＤＲは抗体ごとに変動するが、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位だけが抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と称される。
「ＶＨ」または「ＶＨ」への言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖまたはＦａｂのものを含め、免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」または「ＶＬ」への言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖまたはＦａｂのものを含め、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。
「モノクローナル抗体」とは、Ｂリンパ球の単一のクローンによって、または単一の抗体の軽鎖および重鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞によって産生される抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例えば、骨髄腫細胞と免疫脾臓細胞の融合物からハイブリッド抗体形成細胞を作製することによって産生される。モノクローナル抗体はヒト化モノクローナル抗体を含む。
「キメラ抗体」は、ヒトなどの１つの種に由来するフレームワーク残基と、メソテリンに特異的に結合するマウス抗体などの、別の種に由来するＣＤＲ（一般に抗原結合性を付与する）とを有する。
「ヒト化」免疫グロブリンとは、ヒトフレームワーク領域と非ヒト（例えば、マウス、ラット、または合成）免疫グロブリンに由来する１つまたは複数のＣＤＲとを含む免疫グロブリンである。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と称され、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは「アクセプター」と称される。一実施形態では、ヒト化免疫グロブリンにおけるＣＤＲの全てがドナー免疫グロブリンに由来するものである。定常領域は存在する必要はないが、存在する場合には、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一である、すなわち、少なくとも約８５〜９０％、例えば約９５％またはそれよりも多く、同一である。したがって、ヒト化免疫グロブリンの、おそらくＣＤＲ以外の全ての部分が、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。「ヒト化抗体」は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。ヒト化抗体は、ＣＤＲを提供したドナー抗体と同じ抗原に結合する。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体のアクセプターフレームワークは、ドナーフレームワークから取得されたアミノ酸による限られた数の置換を有してよい。ヒト化または他のモノクローナル抗体は、抗原結合性または他の免疫グロブリン機能に実質的に影響を及ぼさない追加的な保存的アミノ酸置換を有してよい。ヒト化免疫グロブリンは、遺伝子工学によって構築することができる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号を参照されたい）。
「ヒト」抗体（「完全ヒト」抗体とも称される）は、ヒトフレームワーク領域および全てがヒト免疫グロブリンに由来するＣＤＲを含む抗体である。一実施例では、フレームワークおよびＣＤＲは起源が同じヒト重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列に由来する。しかし、１つのヒト抗体に由来するフレームワークを、異なるヒト抗体に由来するＣＤＲを含むように操作することができる。ヒト免疫グロブリンの全ての部分が天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。
「特異的に結合する」とは、個々の抗体の、非サプレッサー細胞タンパク質、例えば、アルブミンなどの無関係のタンパク質への結合と比較して、サプレッサー細胞表面抗原などの抗原と特異的に免疫反応する能力を指す。例えば、ＣＤ２５特異的結合剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて実質的にＣＤ２５タンパク質のみに結合する。本明細書で使用される場合、「サプレッサー細胞表面特異的結合剤」という用語は、サプレッサー細胞表面特異的抗体およびその調製物において実質的にサプレッサー細胞表面タンパク質のみに結合する他の薬剤を包含する。
結合は、抗体分子とＴ細胞表面分子の抗原性決定因子との非ランダム結合反応である。所望の結合特異性は、一般には、抗体の、Ｔ細胞表面分子および無関係の抗原と異なって結合する、したがって、特に２つの抗原が独特のエピトープを有する場合に２つの異なる抗原を区別する能力という基準点から決定される。特定のエピトープに特異的に結合する抗体は、「特異的抗体」と称される。
一部の実施例では、抗体またはその断片（例えば、抗体−ＩＲ７００分子など）は、標的（例えば、サプレッサー細胞表面タンパク質など）に、試料または被験体内の他の分子に対する結合定数よりも少なくとも１０３Ｍ−１大きい、１０４Ｍ−１大きいまたは１０５Ｍ−１大きい結合定数で特異的に結合する。一部の実施例では、抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその断片は、１ｎＭまたはそれ未満の平衡定数（Ｋｄ）を有する。例えば、抗体またはその断片は、サプレッサー細胞表面タンパク質などの標的に、少なくとも約０．１×１０−８Ｍ、少なくとも約０．３×１０−８Ｍ、少なくとも約０．５×１０−８Ｍ、少なくとも約０．７５×１０−８Ｍ、少なくとも約１．０×１０−８Ｍ、少なくとも約１．３×１０−８Ｍ、少なくとも約１．５×１０−８Ｍ、または少なくとも約２．０×１０−８Ｍの結合親和性で結合する。Ｋｄ値は、例えば、競合ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）によって、またはＢｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪから入手可能なＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００などの表面プラズモン共鳴デバイスを使用して決定することができる。
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）：免疫系のエフェクター細胞により、膜表面抗原に特異的抗体が結合した標的細胞が能動的に溶解される、細胞媒介性免疫防御の機構である。ＡＤＣＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球／マクロファージ、好中球および好酸球によって媒介され得る。細胞免疫系の死滅機構を動員する抗体の能力は、抗体Ｆｃドメインとマクロファージおよびナチュラルキラー細胞などの細胞上に見いだされるＦｃ受容体との間の相互作用に依存する。
抗体−ＩＲ７００分子または抗体−ＩＲ７００コンジュゲート：どちらもＩＲ７００とコンジュゲートしたサプレッサー細胞表面抗体などの抗体を含む分子である。一部の実施例では、抗体は、機能的Ｆｃ領域を有さない（例えば、Ｆａｂ領域（複数可）または変異Ｆｃ領域のみを有する）。一部の実施例では、抗体は、サプレッサー細胞上の表面タンパク質に特異的に結合するヒト化抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体など）であり、一部の実施例では機能的Ｆｃ領域を有さない（例えば、Ｆａｂ領域（複数可）または変異Ｆｃ領域のみを有する）。
がん：異常なまたは制御されていない細胞増殖を特徴とする悪性腫瘍である。多くの場合がんに伴う他の特徴としては、転移、近隣細胞の正常な機能への干渉、サイトカインまたは他の分泌産物の異常なレベルでの放出、および炎症性応答または免疫学的応答の抑制または増悪、リンパ節などの周囲または遠位の組織または器官への浸潤などが挙げられる。「転移性疾患」とは、元の腫瘍部位を離れ、例えば血流またはリンパ系を介して体の他の部分に移動するがん細胞を指す。
接触：固体および液体の形態のどちらも含め、直接物理的に関連する状態に置くこと。接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、例えば、試薬をサプレッサー細胞などの単離された細胞に添加することによって行うこともでき、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、被験体（例えば、腫瘍を有する被験体など）に投与することによって行うこともできる。
低減する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）：あるものの質、量、または強度が低下することである。一実施例では、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を含む治療用組成物により、抗体−ＩＲ７００分子が特異的に結合する細胞の生存度が、細胞にＮＩＲ光（例えば、６９０ｎｍ＋／−２０ｎｍ、例えば約６８０ｎｍなどの波長）少なくとも１または少なくとも４Ｊ／ｃｍ２の線量で照射した後に、例えば、抗体−ＩＲ７００分子の不在下での応答と比較して低減する。一部の実施例では、そのような低減は、細胞の死滅によって証明される。一部の実施例では、細胞の生存度の低減は、抗体−ＩＲ７００分子を含まない組成物または抗体−ＩＲ７００分子を含むがＮＩＲ光に曝露していない組成物を用いて観察される生存度と比較して少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはさらには少なくとも９９％である。他の例では、低減は、例えば、抗体−ＩＲ７００分子を含まない組成物または抗体−ＩＲ７００分子を含むがＮＩＲ光に曝露していない組成物を用いて観察される生存度と比較して少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、またはさらには少なくとも１５または２０倍の細胞の生存度の低減など、倍数変化（ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ）として表される。そのような低減は、本明細書に開示されている方法を使用して測定することができる。芳しい
断片、抗原結合性（Ｆａｂ）領域（抗体の）：抗原に結合する、抗体の「Ｙ」の「上部」である。これは、重鎖および軽鎖のそれぞれの１つの定常ドメインと１つの可変ドメインで構成される。酵素パパインを使用して免疫グロブリン単量体を切断して２つのＦａｂ断片および１つのＦｃ断片にすることができる。酵素ペプシンまたはフィシンによりヒンジ領域の下が切断され、それにより、Ｆ（ａｂ’）２断片およびｐＦｃ’断片が生じる。別の実施例では、酵素ＩｄｅＳ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の免疫グロブリン分解酵素、商品名ＦａｂＲＩＣＡＴＯＲ）により、ＩｇＧを中性のｐＨで配列特異的に切断し、それにより、Ｆ（ａｂ’）２断片がもたらされ、これは、穏やかな還元によって２つのＦａｂ’断片に分割することができる。インタクトな抗体からＦ（ａｂ’）２断片を生成する他の方法は、実施例１に開示されている。
断片、結晶化可能（Ｆｃ）領域（抗体の）：免疫細胞活性の調節において役割を果たす、抗体の「Ｙ」の基部である。この領域は、抗体のクラスに応じて２つまたは３つの定常ドメインを供する２つの重鎖で構成される。重鎖の定常ドメインのみで抗体のＦｃ領域が構成されるので、抗体の重鎖のクラスによってそれらのクラスの効果が決定される。抗体の重鎖のクラスとしては、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、およびミューが挙げられ、これらにより、それぞれ抗体のアイソタイプＩｇＡ、Ｇ、Ｄ、Ｅ、およびＭが規定される。Ｆｃ領域により、各抗体が、特定のクラスのＦｃ受容体、および補体タンパク質などの他の免疫分子に結合することによって所与の抗原に対して適切な免疫応答を生じることが確実になる。これにより、オプソニン化粒子の認識（ＦｃγＲへの結合）、細胞の溶解（補体への結合）、ならびに肥満細胞、好塩基球、および好酸球の脱顆粒（ＦｃεＲへの結合）を含めた異なる生理作用が媒介される。
ＩＲ７００（ＩＲＤｙｅ（登録商標）７００ＤＸ）：次式
を有するフタロシアニン色素である。
以下に示すエステルを含めた、そのような分子の誘導体も包含する
ＬＩ−ＣＯＲ（Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ）から市販されている。アミノ反応性ＩＲ７００は、比較的親水性の色素であり、例えば、ＩＲ７００のＮＨＳエステルを使用して、抗体または抗体断片に共有結合によりコンジュゲートすることができる。
医薬組成物：被験体に適正に投与されると所望の治療効果または予防効果を誘導することができる化学化合物または組成物である。医薬組成物は、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子などの治療剤を含み得る。治療剤または医薬品は、単独でまたは追加的な化合物と共に、所望の応答を誘導するものである（例えば、被験体に投与されると治療効果または予防効果を誘導するなど）。特定の実施例では、医薬組成物は、治療有効量の少なくとも１つの抗体−ＩＲ７００分子を含む。
薬学的に許容されるビヒクル：本開示において有用な薬学的に許容される担体（ビヒクル）は従来のものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｅ． Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、第１９版（１９９５年）には、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子などの１つまたは複数の治療用化合物の医薬送達に適した組成物および製剤が記載されている。
一般に、担体の性質は、使用される特定の投与形式に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、例えば、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールなどの薬学的におよび生理的に許容される流体をビヒクルとして含む注射液を含む。固体組成物（例えば、散剤、丸剤、錠剤、またはカプセル剤の形態）に関しては、従来の無毒性固体担体として、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムを挙げることができる。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、微量の無毒性補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、防腐剤、およびｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含有してよい。
光免疫療法（ＰＩＴ）：標的タンパク質（例えば、サプレッサー細胞表面タンパク質）に特異的であり、一部の実施例では、実質的に非機能的なＦｃ領域を有する（またはＦｃ領域を有さない）１つまたは複数の抗体（または他の特異的な結合剤）とコンジュゲートした近赤外（ＮＩＲ）フタロシアニン色素、ＩＲ７００に基づく標的特異的光増感剤を利用する分子標的化治療である。例示的なサプレッサー細胞表面タンパク質が本明細書において提示されており、したがって、そのような細胞を死滅させるためにＰＩＴを使用することができる。したがって、抗体−ＩＲ７００分子をサプレッサー細胞に結合させ、サプレッサー細胞にＮＩＲを照射すると細胞死が起こるが、抗体−ＩＲ７００分子により認識されるサプレッサー細胞表面タンパク質を発現しない細胞は、有意な数では死滅しない。
被験体または患者：ヒトおよび非ヒト哺乳動物を含む用語である。一実施例では、被験体は、ヒトまたは獣医学的な被験体、例えば、マウス、ネコ、イヌ、ラットまたは非ヒト霊長類などである。一部の実施例では、被験体は、がんを有する、またはがんに対する処置を受けている哺乳動物である（例えば、ヒトなど）。
サプレッサー細胞：免疫系を調節し、自己抗原に対する寛容性を維持し、また、自己免疫疾患を抑止する、免疫細胞の亜集団である。これらの細胞は、一般に、エフェクターＴ細胞、ＮＫ細胞および樹状細胞などの他の免疫細胞の誘導、増殖、および機能を抑制または下方制御する。サプレッサー細胞は、ＣＤ４、ＣＤ２５、およびＦｏｘｐ３（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３調節性Ｔ細胞）を発現するものを含めた多くの形態になる。開示されている療法により標的化することができるサプレッサー細胞の他の例としては、ＩＩ型ナチュラルキラーＴ（ＮＫ−Ｔ）細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ、Ｍ２マクロファージ、腫瘍浸潤線維芽細胞、および骨髄由来サプレッサー細胞が挙げられる。サプレッサー細胞表面タンパク質は、少なくとも一部がサプレッサー細胞の表面上に発現するタンパク質であり、したがって、当該タンパク質は抗体または抗体断片と特別に結合することができる。したがって、サプレッサー細胞表面タンパク質は、表面上にのみ見いだされるもの、または表面上に一部分を有するもの（例えば、適切な抗体と特異的に結合することができる１つまたは複数の細胞外ドメインを有する膜貫通タンパク質など）であってよい。サプレッサー細胞表面タンパク質の例としては、これだけに限定されないが、ＣＤ２５、ＣＤ４、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、ＣＤ１０３、インターロイキン−１デコイ受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂ）が挙げられる。
治療有効量：組成物の、単独で、または追加的な治療剤（複数可）（例えば、化学療法薬または生物学的薬剤など）と共に、当該薬剤を用いた処置を受ける被験体または細胞における所望の効果を達成するために十分な量である。薬剤（例えば、抗体−ＩＲ７００分子など）の有効量は、これだけに限定されないが、処置を受ける被験体または細胞、特定の治療剤、および治療用組成物の投与の様式を含めたいくつかの因子に依存し得る。一実施例では、治療有効量または濃度は、サプレッサー細胞またはサプレッサー細胞の集団を死滅させるために十分なものである。一部の実施例では、治療有効量または濃度は、進行（例えば、転移など）を妨げるため、進行を遅延させるため、もしくは疾患の退縮を引き起こすために十分なものである、または、がんなどの疾患によって引き起こされる症状を軽減することが可能なものである。一実施例では、治療有効量または濃度は、腫瘍を有する患者の生存時間を増大させるために十分なものである。
一実施例では、所望の応答は、サプレッサー細胞の数を、例えば、サプレッサー細胞またはサプレッサー細胞の集団を死滅させることによって低減することである。組成物が有効であるために、サプレッサー細胞またはサプレッサー細胞の亜集団が完全に排除される必要はない。一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子を使用すると、処置前のＣＤ２５＋／ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞の量と比較して、ＣＤ２５＋／ＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％が死滅する。一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子を使用すると、処置前のＩＩ型ＮＫＴ細胞の量と比較して、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％が死滅する。一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子を使用すると、処置前のＣＤ８＋ＣＤ１２２＋調節性Ｔ細胞の量と比較して、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋調節性Ｔ細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％が死滅する。一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子を使用すると、処置前のＭ２マクロファージ細胞の量と比較して、Ｍ２マクロファージ細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％が死滅する。
一実施例では、所望の応答は、がんに付随する１つまたは複数の症状が軽減または阻害されることである。組成物が有効であるために、１つまたは複数の症状が完全に排除される必要はない。例えば、抗体−ＩＲ７００分子を含有する組成物を投与し、その後、照射を行うことにより、腫瘍のサイズ（例えば、腫瘍、または腫瘍の転移の体積または重量など）を、例えば、抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲ照射の不在下での腫瘍／転移サイズ（または転移の数）と比較して少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、またはさらには少なくとも１００％低減させることができる。１つの特定の例では、所望の応答は、がん細胞が所望の量だけ死滅する、例えば、抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲ照射の不在下での細胞死滅と比較して、細胞の少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、またはさらには少なくとも１００％が死滅することである。一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子を含有する組成物を投与し、その後、原発腫瘍に対してＮＩＲ照射を行うことにより、遠位の照射を受けていない転移のサイズおよび／または数（例えば、転移の体積、転移の重量、転移の数、またはこれらの組合せなど）を、例えば、原発腫瘍に対する抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲ照射の不在下での転移の体積／重量／数と比較して、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、またはさらには少なくとも１００％低減させることができる。１つの特定の例では、所望の応答は、腫瘍を有する患者（または最近腫瘍が除去された患者）の生存時間が、所望の量だけ増大すること、例えば、生存が、抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲ照射の不在下での生存時間と比較して、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、またはさらには少なくとも１００％増大することである。
ヒトまたは獣医学的な被験体に投与される、開示されている抗体−ＩＲ７００分子のうちの１つを含む薬剤有効量は、被験体に関連するいくつもの因子、例えば、被験体の全体的な健康に応じて変動する。薬剤の有効量は、産物の投与量を変動させ、腫瘍の退縮などの、結果生じる治療応答を測定することによって決定することができる。有効量は、種々のｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｓｉｔｕにおけるイムノアッセイによって決定することもできる。開示されている薬剤は、所望の応答を得るために、必要に応じて、単回用量で投与することもでき、いくつかの用量で投与することもできる。しかし、有効量は、適用される供給源、処置される被験体、処置される状態の重症度および型、ならびに投与の様式に依存し得る。
特定の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子の治療有効用量は、例えば、ｉｖ投与する場合、６０キログラム当たり少なくとも０．５ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）、少なくとも５ｍｇ／６０ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／６０ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／６０ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／６０ｋｇ、少なくとも５０ｍｇ／６０ｋｇ、例えば、０．５〜５０ｍｇ／６０ｋｇ、例えば、１ｍｇ／６０ｋｇ、２ｍｇ／６０ｋｇ、５ｍｇ／６０ｋｇ、２０ｍｇ／６０ｋｇ、または５０ｍｇ／６０ｋｇ用量などである。別の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子の治療有効用量は、例えば、腫瘍内またはｉｐ投与する場合、少なくとも１０μｇ／ｋｇ、例えば、少なくとも１００μｇ／ｋｇ、少なくとも５００μｇ／ｋｇ、または少なくとも５００μｇ／ｋｇなど、例えば、１０μｇ／ｋｇ〜１０００μｇ／ｋｇ、例えば、１００μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、７５０μｇ／ｋｇ、または１０００μｇ／ｋｇの用量などである。一実施例では、治療有効用量は、局部用溶液として投与する場合、少なくとも１μｇ／ｍｌ、例えば、少なくとも５００μｇ／ｍｌなど、例えば、２０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌなど、例えば、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、６０μｇ／ｍｌ、７０μｇ／ｍｌ、８０μｇ／ｍｌ、９０μｇ／ｍｌまたは１００μｇ／ｍｌなどである。しかし、例えば、特定の抗体−ＩＲ７００分子に応じて、より多いまたはより少ない投与量も使用することができることが当業者には理解されよう。特定の実施例では、毎日の投与量を１つまたは複数の分割用量（例えば、２、３、または４用量など）として、または単一の製剤として投与する。特定の実施例では、被験体は、例えば、１週間、数カ月、または数年にわたってなど、ある期間にわたって複数回の抗体−ＩＲ７００分子の投与（例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも１０回、少なくとも１５回、または少なくとも２０回の別々の投与など、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回、１７回、１８回、１９回、２０回、２５回、３０回、４０回、または５０回などの別々の投与）を受け、その後、ＮＩＲ照射を受ける。開示されている抗体−ＩＲ７００分子は、単独で、薬学的に許容される担体の存在下で、他の治療剤（例えば、他の抗新生物剤など）の存在下で投与することができる。
一般に、抗体−ＩＲ７００の投与後の適切な照射線量は、６６０〜７４０ｎｍの波長で少なくとも１Ｊ ｃｍ−２、例えば、６６０〜７４０ｎｍの波長で少なくとも４Ｊ ｃｍ−２、６６０〜７４０ｎｍの波長で少なくとも５Ｊ ｃｍ−２、６６０〜７４０ｎｍの波長で少なくとも１０Ｊ ｃｍ−２、６６０〜７４０ｎｍの波長で少なくとも５０Ｊ ｃｍ−２、または６６０〜７４０ｎｍの波長で少なくとも１００Ｊ ｃｍ−２、例えば、６６０〜７４０ｎｍの波長で１〜５００Ｊ ｃｍ−２、６６０〜７４０ｎｍの波長で４〜５０Ｊ ｃｍ−２、または６６０〜７４０ｎｍの波長で４〜８Ｊ ｃｍ−２、例えば、６７０〜７１０ｎｍの波長で４Ｊ ｃｍ−２、５Ｊ ｃｍ−２、６Ｊ ｃｍ−２、７Ｊ ｃｍ−２、８Ｊ ｃｍ−２、９Ｊ ｃｍ−２、または１０Ｊ ｃｍ−２などである。一部の実施例では、波長は、６６０〜７１０ｎｍである。特定の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子の投与後の適切な照射線量は、６９０ｎｍ＋／−２０ｎｍ（例えば、６８０ｎｍ）の波長で少なくとも１．０Ｊ ｃｍ−２、例えば、６９０ｎｍ＋／−２０ｎｍ（例えば、６８０ｎｍ）の波長で少なくとも１０Ｊ ｃｍ−２、６９０ｎｍ＋／−２０ｎｍ（例えば、６８０ｎｍ）の波長で少なくとも５０Ｊ ｃｍ−２、または６９０ｎｍ＋／−２０ｎｍ（例えば、６８０ｎｍ）の波長で少なくとも１００Ｊ ｃｍ−２、例えば、６９０ｎｍ＋／−２０ｎｍ（例えば、６８０ｎｍ）の波長で１〜５００ １．０Ｊ ｃｍ−２である。特定の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子の投与後、複数回の照射を実施する（例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、または少なくとも４回の照射など、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回または１０回の別々の投与など）。
処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）：細胞または組織を治療剤で処置することを指すのに使用される場合、薬剤（例えば、抗体−ＩＲ７００分子など）を細胞または組織と接触させるまたは一緒にインキュベートすることを含む用語である。処置された細胞とは、所望の応答のために十分な量および条件下で所望の組成物と接触させた細胞である。一実施例では、処置された細胞とは、抗体が細胞上の表面タンパク質に結合するのに十分な条件下で抗体−ＩＲ７００分子に曝露させ、その後、十分な細胞死滅が達成されるまでＮＩＲ照射を行った細胞である。
腫瘍、新形成、悪性疾患またはがん：新生物は、過剰な細胞分裂に起因する、組織または細胞の異常な成長である。新生物の成長により、腫瘍が生じ得る。個体における腫瘍の量は、腫瘍の数、体積、または重量として測定することができる「腫瘍量」である。転移しない腫瘍は、「良性」と称される。周囲の組織に浸潤し、かつ／または転移し得る腫瘍は、「悪性」と称される。「非がん性組織」は、悪性新生物を形成した同じ器官に由来する組織であるが、新生物に特有の病態を有さない。一般に、非がん性組織は、組織学的に正常に見える。「正常な組織」は、器官に由来する組織であり、その器官は、がんまたはその器官の別の疾患または障害の影響を受けていない。「がんを有さない」被験体は、その器官のがんを有するという診断を受けておらず、検出可能ながんを有さない。
開示されている方法を用いて処置することができる、がんなどの例示的な腫瘍としては、固形腫瘍、例えば、乳癌（例えば、小葉癌および腺管癌）、肉腫、肺癌（例えば、非小細胞癌、大細胞癌、扁平上皮癌、および腺癌）、肺の中皮腫、結腸直腸腺癌、胃癌、前立腺腺癌、卵巣癌（例えば、漿液性嚢胞腺癌および粘液性嚢胞腺癌など）、卵巣胚細胞性腫瘍、精巣癌および胚細胞性腫瘍、膵臓腺癌、胆管腺癌、肝細胞癌、膀胱癌（例えば、移行上皮癌、腺癌、および扁平上皮癌を含む）、腎細胞腺癌、子宮内膜癌（例えば、腺癌およびミュラー管混合腫瘍（癌肉腫）を含む）、子宮頚内膜、子宮頸膣部（ｅｃｔｏｃｅｒｖｉｘ）、および膣の癌（例えば、それぞれの腺癌および扁平上皮癌など）、皮膚の腫瘍（例えば、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、悪性黒色腫、皮膚付属器腫瘍（ｓｋｉｎ ａｐｐｅｎｄａｇｅ ｔｕｍｏｒ）、カポジ肉腫、皮膚リンパ腫、皮膚付属器腫瘍（ｓｋｉｎ ａｄｎｅｘａｌ ｔｕｍｏｒ）および種々の型の肉腫およびメルケル細胞癌）、食道癌、上咽頭および中咽頭の癌（その扁平上皮癌および腺癌を含む）、唾液腺癌、脳および中枢神経系腫瘍（例えば、グリア起源、ニューロン起源、および髄膜起源の腫瘍）、末梢神経の腫瘍、骨および軟骨の軟部肉腫および肉腫、ならびにリンパ性腫瘍（Ｂ細胞悪性リンパ腫およびＴ細胞悪性リンパ腫を含む）などが挙げられる。一実施例では、腫瘍は、腺癌である。
当該方法は、リンパ性、白血球性、または他の型の白血病などの液性腫瘍を処置するために使用することもできる。特定の実施例では、処置される腫瘍は、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、大顆粒リンパ球性白血病、および成人Ｔ細胞白血病）、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫など）、ならびに骨髄腫）などの血液の腫瘍である。
〜のために十分な条件下で：所望の活性を可能にする任意の環境を指すために使用される句である。一実施例では、「ために十分な条件下で」は、抗体−ＩＲ７００分子がサプレッサー細胞上の細胞表面タンパク質（複数可）に結合することが可能になるように十分に抗体−ＩＲ７００分子を被験体に投与することを含む。特定の実施例では、所望の活性は、細胞に対する治療的ＮＩＲ照射後の、抗体−ＩＲ７００分子が結合した細胞の死滅である。
処置されていない細胞／被験体：抗体−ＩＲ７００分子などの所望の薬剤と接触させていない細胞／被験体である。ある実施例では、処置されていない細胞／被験体は、所望の薬剤が送達されたビヒクルを受ける細胞／被験体である。
ある特定の実施例の開示は、他の実施形態を排除するものではない。さらに、本明細書に記載されている任意の処置は、必ずしも他の処置を排除するものではなく、他の生物活性のある薬剤または処置モダリティと組み合わせることができる。
概要
例えば免疫チェックポイント阻害剤によってなどで免疫サプレッサーを阻害することによるがん免疫療法を、がんを処置するために使用することができる。しかし、免疫系の活性化が標的がん組織だけでなく正常組織においても見いだされ得るようになるので、全身性自己免疫性反応の潜在性が、これらの薬剤に伴う問題である。したがって、方法は、体内の他の所の恒常性を撹乱することなく、腫瘍内のサプレッサーとエフェクター細胞の平衡の操作を可能にするものである必要がある。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、腫瘍免疫回避において重要な役割を果たす免疫サプレッサー細胞であり、全身性免疫療法の標的にされている。
がん療法では、免疫抑制性細胞を阻害する薬物および免疫チェックポイント阻害剤の全身投与により、一部の患者において治療的利益がもたらされる一方で、多くの場合、自己免疫性様疾患および急性間質性肺炎−急性呼吸窮迫症候群（ＡＩＰ−ＡＲＤＳ）などの重度の副作用が導入される（３６、３７）。代替手法は、全身的にではなく腫瘍内の免疫抑制性細胞のみを阻害するまたは死滅させることである。しかし、エフェクター細胞を傷つけることなく、そのような細胞を腫瘍微小環境から選択的に除去することができる方法は限定されている。
現在利用可能ながん免疫療法とは対照的に、開示されている方法では、近赤外光免疫療法（ＮＩＲ−ＰＩＴ）を使用して、サプレッサー細胞、例えば、腫瘍微小環境内に特異的に存在するサプレッサー細胞を選択的に死滅させる。これは、例えば、サプレッサー細胞の表面上の抗原を標的とする、ＮＩＲ光子吸収体ともコンジュゲートした抗体または抗体断片（例えば、機能的Ｆｃ領域を有さない抗体または抗体断片）（本明細書では、抗体−ＩＲ７００分子と称される）を使用することによって達成される。ＮＩＲ光の適用後、抗体−ＩＲ７００分子に結合し、ＮＩＲ光に曝露したサプレッサー細胞が腫瘍の微小環境から選択的に排除される。したがって、サプレッサー細胞のＮＩＲ−ＰＩＴによる標的化により、全身性自己免疫性副作用は最小にしながら、高度に有効な抗がん宿主免疫活性化を誘導し、それにより、がん細胞死を導くことができる。
本明細書のデータから、ＣＤ２５に特異的な抗体−光増感剤コンジュゲートおよびＮＩＲ光により、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇが有効に死滅し、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、ＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍からＣＤ４＋ＣＤ２５＋ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇが排除されることが示される。さらに、当該方法により、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、ＰＩＴで処置されていない遠位の腫瘍（例えば、転移）の低減が首尾よく誘導された。したがって、開示されている方法により、宿主免疫を引き出すことによって二次腫瘍または転移も処置することができる。開示されている方法により、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞が活性化され、局所的抗腫瘍免疫が回復し、それにより、処置された腫瘍の退縮が導かれるだけでなく、同じ細胞株に由来する別の処置されていない腫瘍における応答も誘導される。したがって、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、空間的に選択的なＴｒｅｇの枯渇が引き起こされ、それにより、がん免疫療法に関する代替手法が可能になる。
この最小限の侵襲性の方法では、ＣＤ２５を標的とする抗体−光吸収体コンジュゲートを使用した。コンジュゲートは全身的に投与されるが、抗体−光吸収体コンジュゲートが細胞に結合し、ＮＩＲ光に曝露した部位でのみ活性化される；ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを有効に死滅させるためには、両方の条件を満たす必要があった。一方、この方法では、Ｔｒｅｇが局所的にのみ枯渇するので、他の器官ではＴｒｅｇが正常に維持された。腫瘍におけるＴｒｅｇの死滅により、すでに腫瘍内に存在していたがＴｒｅｇによって抑制されていたＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化が導かれた。ＮＩＲ−ＰＩＴ時に、既存の腫瘍内ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞はＣＤ２５を発現していなかった。したがって、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、Ｔｒｅｇは選択的に死滅したが、腫瘍浸潤性の非活性化ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞は無傷のままであった。局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後、腫瘍内ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞は直ちに活性化され、腫瘍に対する細胞傷害性を示した。この時点、ＮＩＲ−ＰＩＴが適用されて十分経ってからのみ、これらの細胞によりＣＤ２５が上方制御された。さらに、反復ＮＩＲ−ＰＩＴの場合、腫瘍内エフェクター細胞上のＣＤ２５は４日間の間隔を空けた後の反復ＰＩＴの前にすでに下方制御されていた。したがって、Ｔｒｅｇの局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、サプレッサー細胞を全身的に排除することなく、エフェクター細胞を活性化することが可能になる。これらの所見は、以前報告された、Ｔｒｅｇおよび活性化エフェクター細胞の両方が枯渇する、抗ＣＤ２５抗体またはＩＬ−２毒素コンジュゲートの全身投与を用いた全身Ｔｒｅｇ枯渇の方法とは対照的であり、これは、そのような抗体は半減期が長いことが理由である（２９、３８）。したがって、Ｔｒｅｇを全身的に枯渇させるために抗ＣＤ２５抗体を使用する方法では、腫瘍の生着が妨げられるだけであり、確立された腫瘍の成長は干渉されず、さらには、同時に自己免疫性様副作用が引き起こされる（２２）。以前の試験と一致して（２７、３９）、開示されている局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの抗腫瘍効果は、ＣＤ８ Ｔ細胞またはＮＫ細胞が枯渇した場合またはＩＦＮγが中和された場合、部分的に抑止された。
自己寛容を維持するために、全てのＴｒｅｇ集団を排除するのではなく成熟Ｔｒｅｇの亜集団を枯渇させる試みが成人Ｔ細胞白血病を有する患者において行われている（２８）。最終分化したＴｒｅｇ上ならびに白血病細胞上に高度に発現するＣ−Ｃケモカイン受容体であるＣＣＲ４を標的とする抗体の全身投与が処置として使用された。Ｔｈ２細胞および一部のセントラルメモリーＣＤ８ Ｔ細胞もＣＣＲ４を発現するが、この戦略では、ナイーブおよび前駆Ｔｒｅｇが残され、その結果、白血病細胞の数が減少する。腫瘍微小環境内で成熟およびナイーブＴｒｅｇを含むＣＤ２５陽性細胞を局所的に標的化することにより、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴは、全身性自己免疫性様副作用を誘導することなく、ＣＣＲ４標的化戦略よりも強力かつ持続的な腫瘍微小環境内の免疫サプレッサー機能の排除を生じさせることができる。したがって、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴは、免疫チェックポイント阻害剤またはがん型特異的療法などの他の免疫調節療法と組み合わせて使用することもでき、２つの異なる抗ＣＤ２５クローン（４０）（例えば、異なるＣＤ２５エピトープを認識する抗体など）、または、方法の治療有効性を強化するために、エフェクターＴｒｅｇ枯渇のためのＣＤ１０３標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ（ＣＤ１０３はエフェクター（成熟）Ｔｒｅｇ細胞上に発現する）（４１、４２）を含むように改変することもできる。例えば、ＩＲ７００コンジュゲートの抗ＣＤ１０３抗体が機能的Ｆｃ領域を有さないようなものなどの抗ＣＤ１０３−ＩＲ１００コンジュゲートを使用することができる。一実施例では、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴは、ダクリズマブ−ＩＲ７００およびバシリキシマブ−ＩＲ７００の使用を含み、ここで、ＩＲ７００コンジュゲートの抗体は、機能的Ｆｃ領域を有さない。
各腫瘍に対して腫瘍特異的抗体−光吸収体コンジュゲートを必要とする従来のＮＩＲ−ＰＩＴとは異なり、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴは、高レベルのＣＤ２５を発現するＴｒｅｇは多くの場合それらの型にかかわらず腫瘍において豊富であるので、広範囲の腫瘍に対して有効である（２２）。したがって、全宿主の標的コンジュゲートの開発ではなく、抗ＣＤ２５−ＩＲ７００コンジュゲートが多くの異なる型の腫瘍において有用である（２２、２６）。例えば、同じコンジュゲートを使用した局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴが３つの異なるがんモデル（肺、結腸、前立腺）において有効であったことが本明細書において示されている。
ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、活性化されたＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞による迅速な腫瘍死滅が導かれ、おそらく腫瘍における多数の細胞型の活性化が誘導された。「サイトカインストーム」（３４、３５）が腫瘍内だけでなく、血清中でも処置後数時間以内に観察され、これにより、処置された腫瘍の外側での免疫応答の追加的な活性化が示される。炎症促進特性を有するものおよび抗炎症特性を有するものを含めたサイトカインおよびケモカインが高度に増加し、その一部はマクロファージ起源のものであった可能性がある。ＩＦＮγおよびＩＬ−２などのサイトカインの放出により、エフェクター細胞の完全な活性化が導かれ、これは、ＮＩＲ−ＰＩＴで直接処置されていない遠位の腫瘍における抗腫瘍効果を部分的に説明するものである。処置後にサイトカインストームが存在することにより、一過性だとしても重度の副作用が引き起こされる可能性があるが、上昇した、ＩＬ−６を含めたサイトカイン／ケモカインは、療法から１日以内に低減し始め、したがって、自己限定的なものであった。したがって、観察されたサイトカイン／ケモカインの一過性の上昇に基づいて、臨床的な副作用は穏当であり短期のものである可能性がある。患者におけるＮＩＲ−ＰＩＴ処置後に症状が発生した場合、ＩＬ−６に対するトシリズマブなどの抗サイトカイン処置を使用することができる（４３）。
局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、局所的エフェクター細胞または他の器官におけるＴｒｅｇを排除することなく、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇを選択的に枯渇させることができることを本明細書に示す。その結果、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の迅速な活性化がもたらされ、それにより、細胞媒介性がん死滅が導かれる。局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、遠位の同じ型の腫瘍の成長が変化する、腫瘍型特異的な全身性抗腫瘍効果ももたらされる（図２８）。したがって、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを、Ｔｒｅｇによって引き起こされる免疫抑制を低下させ、したがって、エフェクター細胞媒介性腫瘍死滅を強化するために使用することができる。ＣＤ２５発現Ｔｒｅｇは多くの腫瘍に存在するので、この手法は広範囲のがん型にわたって有効であり、さらには、一方で他の組織におけるＴｒｅｇによる自己寛容は維持される。
これらの知見に基づいて、抗体−ＩＲ７００分子の標的とならない周囲の細胞または他の細胞への損傷は最小限にしながらＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを含めた任意の選択的な標的サプレッサー細胞を局所的に死滅させることが可能な、ＮＩＲ−ＰＩＴを使用してサプレッサー細胞を死滅させる方法が本明細書で提供される。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇはがん細胞を宿主免疫から保護するものであるので、腫瘍（または腫瘍を有する被験体）におけるこれらおよび／または他のサプレッサー細胞の局所的死滅により、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を使用する迅速かつ高度に有効な抗腫瘍宿主免疫活性化が誘導され、その結果、最小限の副作用で、局所的に、さらには、処置部位から離れた遠隔転移においての両方で、被験体自身の免疫系を使用した種々のがんに対する高度に有効な処置がもたらされる。サプレッサー細胞が全身的に排除された場合、望ましくない自己免疫の出現を妨げるためのステップを行うことができる。例えば、抗体−ＩＲ７００分子の結合したサプレッサー細胞の全てが死滅するわけではないことを、例えば、ＮＩＲへの曝露の量または面積を減少させることによって、投与する抗体−ＩＲ７００分子の量、ＮＩＲ光への反復曝露を減少させることによって、かつ／またはｅｘ ｖｉｖｏで増大させたＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを腫瘍排除後に養子移入することによって、確実にするための方法を実施することができる。サプレッサー細胞はがんにおいて見いだされる免疫寛容に関与するので、これらの方法は、多数の遠隔転移を伴うものを含めた、様々ながんを有する広範なスペクトルの患者において使用することができる。一部の実施例では、開示されている方法を用いた単一の局所的部位の処置により、がんに対する全身性宿主免疫が可能になり、それにより、処置部位ならびに処置されていない遠隔転移病変における迅速な腫瘍退縮が導かれる一方で誘導される副作用は最小限になる。
サプレッサー細胞を死滅させ、腫瘍を処置するための方法
本開示は、サプレッサー細胞を死滅させるための方法を提供する。サプレッサー細胞は、その表面上にＩＲ７００などの光増感剤とコンジュゲートした抗体（本明細書では、抗体−ＩＲ７００分子と称される）と特異的に結合することが可能なタンパク質（複数可）を発現する。サプレッサー細胞を、治療有効量の１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子（例えば、薬学的におよび生理的に許容される流体などの、薬学的に許容される担体の存在下）と、抗体がサプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合することが可能になる条件下で接触させる。例えば、抗体−ＩＲ７００分子は、例えば水、生理食塩水、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ／ＥＤＴＡなど）、水性デキストロース、ゴマ油、グリセロール、エタノール、これらの組合せなどの薬学的に有効な担体をビヒクルとしてその中に存在してよい。担体および組成物を滅菌で有り得、製剤は投与形式に適したものである。サプレッサー細胞をＮＩＲ範囲内の光に曝露させ、それにより、ＮＩＲに曝露した、サプレッサー細胞膜抗体−ＩＲ７００分子（複数可）と結合したサプレッサー細胞の死滅を導く。抗体−ＩＲ７００分子（複数可）は全身に分布し得るが、ＮＩＲが適用されたところでのみ活性であり、それによりオフターゲットの効果の可能性が低下する。
サプレッサー細胞を死滅させる方法が本明細書で提供される。特定の実施例では、方法は、非サプレッサー細胞などの非標的細胞の死滅数は有意ではないという点で特異的である。一部の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子との結合も適切な線量のＮＩＲ光への曝露もしていない細胞は、例えば、そのような細胞の１％未満、そのような細胞の０．５％未満、または０．１％未満など、いかなる有意な量でも死滅しないが、抗体−ＩＲ７００分子に結合し、かつ適切な線量のＮＩＲ光に曝露したサプレッサー細胞は有意な数が死滅する。しかし、一部の実施例では、標的化されたサプレッサー細胞の全てが死滅するのではなく、したがって、望ましくない自己免疫が導かれる可能性がある。したがって、一部の実施例では、方法により、被験体の領域内、例えば、腫瘍の領域内または以前に腫瘍を有した領域内の抗体−ＩＲ７００分子の標的となるサプレッサー細胞の数が、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％低減する。腫瘍の領域または以前に腫瘍があった領域とは、腫瘍自体または腫瘍があった領域、および一部の実施例では、腫瘍または以前の腫瘍の領域の周囲の少なくとも１ｃｍ、少なくとも２ｃｍ、少なくとも３ｃｍ、少なくとも４ｃｍまたは少なくとも５ｃｍを含む追加的な領域を含む。一部の実施例では、方法により、被験体内の抗体−ＩＲ７００分子の標的となるサプレッサー細胞の総数が、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％低減する。
一部の実施例では、方法は、サプレッサー細胞表面タンパク質を発現するサプレッサー細胞（複数可）を治療有効量の１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と接触させることを含み、ここで、抗体は、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合する、一部の実施例では機能的Ｆｃ領域を含まないものである（例えば、１つまたは複数のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片からなる）。機能的Ｆｃ部分の存在により、自己免疫性毒性（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）など）が生じる可能性がある。したがって、抗体のＦｃ部分を変異させるまたは除去してその機能を実質的に低下させることができる（例えば、ＦｃγＲに結合する能力など）。一部の実施例では、Ｆｃ領域の機能が、変異を伴わないＦｃ機能と比較して、少なくとも５０％、少なくとも７５％ 少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％低減する。一部の実施例では、抗体のＦｃ領域を変異させるまたは除去することにより、抗体の半減期が低減する。例えば、完全なＩｇＧは約２週間の半減期を有し得るが、Ｆｃ領域の機能を有さないＩｇＧは約１日という短い半減期を有し得る。したがって、一部の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子の抗体は、１４日未満、例えば、１０日未満、７日未満、５日未満、４日未満、３日未満など、または２日未満、例えば、１〜７日など、例えば、０．５〜７日など、例えば、１〜３日など、または０．５〜２日の半減期を有する。抗体を変異させる典型的な方法は、Ｆｃ領域内の１つまたは複数のアミノ酸の欠失、挿入および／または置換、例えば、Ｆｃ領域の少なくとも１０アミノ酸、少なくとも２５アミノ酸、少なくとも５０アミノ酸、少なくとも１００アミノ酸、または少なくとも２００アミノ酸の欠失、挿入および／または置換などを含む。
サプレッサー細胞表面タンパク質は、少なくとも部分的にまたは完全にサプレッサー細胞の細胞表面上にあり、したがって、適切な特異的抗体（またはその断片）と結合することが可能なものである。例えば、サプレッサー細胞表面タンパク質は、膜貫通タンパク質であり得、その細胞外ドメインが抗体−ＩＲ７００分子の抗体（またはその断片）と結合することが可能である。一部の実施例では、サプレッサー細胞表面上のタンパク質（複数可）は他の細胞（例えば、上皮細胞など）上には有意には見いだされず、したがって、抗体は、非標的細胞には有意には結合しない。標的化することができるそのようなサプレッサー細胞表面タンパク質の例としては、これだけに限定されないが、ＣＤ２５、ＣＤ４、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン−１デコイ受容体、ＣＤ１０３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂが挙げられる。一部の実施例では、サプレッサー細胞表面タンパク質はＣＤ２５ではない。
例えば、サプレッサー細胞と１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子とを、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子がサプレッサー細胞表面タンパク質（複数可）に結合することが可能になる条件下でインキュベートすることができる。次いで、サプレッサー細胞に対して、６６０〜７４０ｎｍ、例えば、６６０〜７１０ｎｍなど（例えば、６９０ｎｍ＋／−２０ｎｍ、例えば、６８０ｎｍ）の波長、少なくとも１Ｊ ｃｍ−２または少なくとも４Ｊ ｃｍ−２（例えば、４〜８Ｊ ｃｍ−２など）の線量で照射を行い、それにより、サプレッサー細胞を死滅させる。この方法を用いて標的化することができるサプレッサー細胞の例としては、これだけに限定されないが、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、ＩＩ型ＮＫＴ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ、Ｍ２マクロファージ、腫瘍浸潤線維芽細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、ならびにこれらの組合せ（例えば、それぞれが特定の型のサプレッサー細胞に特異的な複数の抗体−ＩＲ７００分子を使用することによって）が挙げられる。したがって、開示されている方法により、一部の実施例では、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲを用いた処置を欠く場合と比較して、処置されたＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％（例えば、処置前の被験体におけるＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの総数に対する％または腫瘍の領域（例えば、処置前の腫瘍および腫瘍の周囲少なくとも１ｍｍ（例えば、少なくとも２ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも４ｍｍ、または少なくとも５ｍｍなど）を含む領域など）におけるＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの総数に対する％として）が死滅する。一部の実施例では、開示されている方法により、一部の実施例では、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲを用いた処置を欠く場合と比較して、処置されたＩＩ型ＮＫＴ細胞の少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％（例えば、処置前の被験体におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞の総数に対する％または腫瘍の領域（例えば、処置前の腫瘍および腫瘍の周囲少なくとも１ｍｍ（例えば、少なくとも２ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも４ｍｍ、または少なくとも５ｍｍなど）を含む領域など）におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞の総数に対する％として）が死滅する。一部の実施例では、開示されている方法により、一部の実施例では、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲを用いた処置を欠く場合と比較して、処置されたＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇの少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％（例えば、処置前の被験体におけるＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ細胞の総数に対する％または腫瘍の領域（例えば、処置前の腫瘍および腫瘍の周囲少なくとも１ｍｍ（例えば、少なくとも２ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも４ｍｍ、または少なくとも５ｍｍなど）を含む領域など）におけるＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇの総数に対する％として）が死滅する。一部の実施例では、開示されている方法により、一部の実施例では、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲを用いた処置を欠く場合と比較して、処置されたＭ２マクロファージの少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％、（例えば、処置前の被験体におけるＭ２マクロファージの総数に対する％または腫瘍の領域（例えば、処置前の腫瘍および腫瘍の周囲少なくとも１ｍｍ（例えば、少なくとも２ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも４ｍｍ、または少なくとも５ｍｍなど）を含む領域など）におけるＭ２マクロファージの総数に対する％として）が死滅する。一部の実施例では、開示されている方法により、一部の実施例では、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲを用いた処置を欠く場合と比較して、処置された腫瘍浸潤線維芽細胞の少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％（例えば、処置前の被験体における腫瘍浸潤線維芽細胞の総数に対する％または腫瘍の領域（例えば、処置前の腫瘍および腫瘍の周囲少なくとも１ｍｍ（例えば、少なくとも２ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも４ｍｍ、または少なくとも５ｍｍなど）を含む領域など）における腫瘍浸潤線維芽細胞の総数に対する％として）が死滅する。一部の実施例では、開示されている方法により、一部の実施例では、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子およびＮＩＲを用いた処置を欠く場合と比較して、処置された骨髄由来サプレッサー細胞の少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％（例えば、処置前の被験体におけるＭ２マクロファージの総数に対する％または腫瘍の領域（例えば、処置前の腫瘍および腫瘍の周囲少なくとも１ｍｍ（例えば、少なくとも２ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも４ｍｍ、または少なくとも５ｍｍなど）を含む領域など）における骨髄由来サプレッサー細胞の総数に対する％として）が死滅する。これらのサプレッサー細胞、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ全てのサプレッサー細胞型などの組合せが達成される。
一実施例では、患者を、少なくとも２つの異なる抗体−ＩＲ７００分子を用いて処置する。一実施例では、２つの異なる抗体−ＩＲ７００分子は、同じタンパク質（例えば、ＣＤ２５など）に特異的であるが、タンパク質の別のエピトープ（例えば、ＣＤ２５のエピトープ１およびエピトープ２など）に特異的である。別の実施例では、２つの異なる抗体−ＩＲ７００分子は、ＣＤ４に特異的な１つの抗体とＣＤ２５に特異的な別の抗体など、２つの異なるタンパク質または抗原に特異的である。例えば、ＣＤ４またはＣＤ２５のいずれかを有する細胞の死滅を容易にするために、抗ＣＤ４−ＩＲ７００と抗ＣＤ２５−ＩＲ７００を一緒にカクテルとして注射することができる。別の実施例では、２つの異なる抗体−ＩＲ７００分子は、例えば、ＣＤ１０３に特異的な１つの抗体とＣＤ２５に特異的な別の抗体など、２つの異なるタンパク質または抗原に特異的である。例えば、ＣＤ１０３またはＣＤ２５のいずれかを有する細胞の死滅を容易にするために、抗ＣＤ１０３−ＩＲ７００および抗ＣＤ２５−ＩＲ７００を一緒にカクテルとして注射することができる。表１の情報に基づく特定の組合せを生成することができる。
そのような方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、例えば、サプレッサー細胞の培養物を１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と一緒にインキュベートし、次いで、細胞に対して６６０〜７４０ｎｍの波長、少なくとも１Ｊ ｃｍ−２または少なくとも４Ｊ ｃｍ−２の線量で照射を行い、それにより、抗体−ＩＲ７００分子が結合し、かつＮＩＲ光に曝露したサプレッサー細胞を死滅させることによって実施することができる。別の実施例では、サプレッサー細胞は被験体内に存在し、サプレッサー細胞を１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と接触させるステップは、治療有効量の１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を被験体に投与すること（例えば、注射によって）を含む。次いで、被験体または被験体の一部（例えば、被験体内の腫瘍）に対して６６０〜７４０ｎｍの波長、少なくとも１Ｊ ｃｍ−２または少なくとも４Ｊ ｃｍ−２の線量で照射を行い、それにより、抗体−ＩＲ７００分子が結合し、かつＮＩＲ光に曝露した、被験体内のサプレッサー細胞を死滅させる。一実施例では、方法は、被験体が装着したデバイスを使用して血液に対して照射を行うことによってサプレッサー細胞に対して照射を行うことを含んでよく、デバイスは、近赤外（ＮＩＲ）発光ダイオード（ＬＥＤ）を含む。
１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子がサプレッサー細胞の表面上のそれらの標的に結合することが可能になる条件下で接触させるかまたは投与した後、次いで、サプレッサー細胞に対して、サプレッサー細胞の死滅が可能になる条件下で照射を行う、例えば、６６０〜７４０ｎｍの波長、少なくとも１Ｊ ｃｍ−２または少なくとも４Ｊ ｃｍ−２の線量で照射を行う。表面に抗体−ＩＲ７００分子が結合し、かつＮＩＲ光に曝露したサプレッサー細胞は、死滅する。一実施例では、細胞を抗体−ＩＲ７００分子と接触させるのと照射との間に少なくとも１０分、少なくとも３０分、少なくとも１時間、少なくとも４時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間（例えば、１〜４時間、３０分〜１時間、１０分〜６０分、または３０分〜８時間など）置く。ＮＩＲ励起光波長により、組織内への少なくとも数センチメートルの透過が可能になる。例えば、ディフューザーチップを有するファイバーカップリングレーザーダイオードを使用することにより、そうでなければ隔絶された体表の深部に位置する腫瘍の数センチメートル以内にＮＩＲ光を送達することができる。固形がんの処置に加えて、循環性腫瘍細胞も標的化することができ、これは、循環性腫瘍細胞が表在血管を横切る時にそれらを励起することができる（例えば、ＮＩＲ ＬＥＤ装着型デバイスを使用して）からである。
開示されている方法は、一部の実施例では、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、がんなどの腫瘍を処置するために使用することができる。例示的ながんとしては、乳房、肝臓、結腸、卵巣、前立腺、膵臓、脳、子宮頸部、骨、皮膚、頭頸部、肺、および血液のがんが挙げられる。特定の例示的ながんが本明細書において提示されている。一部の実施例では、処置されるがんは、転移性がんである。
例えば、腫瘍を有する被験体への１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子の投与とＮＩＲ光の組合せにより、抗体と特異的に結合することが可能なサプレッサー細胞表面タンパク質を発現し、かつＮＩＲに曝露したサプレッサー細胞が死滅し、それにより、Ｔｅｆｆ細胞ががん細胞を死滅させることが可能になる。例えば、抗体−ＩＲ７００分子とＮＩＲ光を組み合わせて使用することにより、腫瘍の体積、腫瘍のサイズ、腫瘍の重量、転移の数、転移の体積、転移のサイズ、転移の重量、またはこれらの組合せを、処置を欠く場合と比較して少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減することができる。一部の実施例では、原発腫瘍の抗体−ＩＲ７００分子（例えば、局所的にまたは全身的に）およびＮＩＲ光を用いた処置により、転移を処置することが可能な全身の免疫応答をもたらすことができるので（例えば、サプレッサー細胞によるＴｅｆｆ細胞の阻害を低下または除去することによって）、転移が、ＮＩＲ光に直接曝露せずに処置される。一部の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子とＮＩＲ光を組み合わせて使用することにより、腫瘍の成長を遅くすること、腫瘍の転移を低減するまたは遅くすること（例えば、転移の数を低減させるまたは転移の重量、体積またはサイズを低減させることによって）、またはこれらの組合せが可能である。
開示されている方法により、腫瘍および／または転移性腫瘍に付随する症状の低減をもたらすことができる。例えば、開示されている方法により、腫瘍のサイズ、重量、体積、および／または転移性腫瘍細胞の体積、重量、もしくはサイズ（または転移性腫瘍の数）、またはこれらの組合せを、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子の投与、その後のＮＩＲ光を欠く場合と比較して、例えば、少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、またはそれを超えてなど、低減させることができる。一実施例では、開示された組成物の投与により、腫瘍の成長および／または転移が、抗体−ＩＲ７００分子の投与、その後のＮＩＲ光を欠く場合と比較して、例えば、少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、またはそれを超えてなど、遅くなる。一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子とＮＩＲ光の組合せで処置された腫瘍および／または転移の体積は、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光を用いて処置されていない腫瘍の体積の、多くとも２分の１、多くとも３分の１、多くとも４分の１、またはさらには多くとも５分の１である（例えば、処置後少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも１４日間、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、または少なくとも１２０日間の後）。一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子とＮＩＲ光の組合せで処置された腫瘍および／または転移のサイズは、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光を用いて処置されていない腫瘍のサイズの多くとも２分の１、多くとも３分の１、多くとも４分の１、またはさらには多くとも５分の１である（例えば、処置後少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも１４日間、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、または少なくとも１２０日間の後）。
開示されている方法により、サイトカインおよびケモカイン産生を増大させることができる。例えば、開示されている方法により、腫瘍および／または血清における検出可能なサイトカインおよびケモカイン産生（例えば、図１８Ａおよび１８ＢのＧ−ＣＳＦ、ＩＬ１０、ＩＬ６、ＫＣ、ＭＩＰ１β、ＴＮＦ−α、およびその他のうちの１つまたは複数など）を、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子の投与、その後のＮＩＲ光を欠く場合と比較して、少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００、少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％、増大させることができる。
開示されている方法により、例えば、ＩＮＦγ、ＩＬ２、ＣＤ６９、ＣＤ２５、Ｇ−ＣＳＦ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ２、およびＭＩＰ１αのうちの１つまたは複数の発現の増大によって示される通り、ＮＫ細胞およびＣＤ８ Ｔ細胞を活性化することができる。例えば、開示されている方法により、腫瘍におけるＩＮＦγ、ＩＬ２、ＣＤ６９、ＣＤ２５、Ｇ−ＣＳＦ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ２、およびＭＩＰ１αのうちの１つまたは複数の発現を、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子の投与、その後のＮＩＲ光を欠く場合と比較して、少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００、少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％増大させることができる。
開示されている方法により、樹状細胞（ＤＣ）およびＡＰＣによるサイトカインの発現を増大させることができる。例えば、開示されている方法により、ＤＣによるＭＨＣＩ、ＣＤ８６、およびＣＤ４０のうちの１つもしくは複数の発現、またはＡＰＣによるＣＤ６９の発現を、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子の投与、その後のＮＩＲ光を欠く場合と比較して、少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００、少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％、増大させることができる。
開示されている方法により、腫瘍による顆粒球産生を、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子の投与、その後のＮＩＲ光を欠く場合と比較して、例えば、少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２００、少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％、増大させることができる。
一部の実施例では、方法は、抗体−ＩＲ７００分子の投与および照射を欠く場合と比較して被験体の生存時間が増大する。一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子とＮＩＲ光の組合せで処置された腫瘍を有する被験体の生存時間が、抗体−ＩＲ７００分子で処置されていない腫瘍を有する被験体の生存時間よりも、少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、または少なくとも１０倍長くなる（例えば、処置後の指定の期間、少なくとも１４日間、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、少なくとも１２０日間、少なくとも６カ月、少なくとも１２カ月、少なくとも２４カ月、または少なくとも５年などの後に、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ療法を用いて処置された被験体が、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光を用いて処置されていない場合よりも多く生存する）。一部の実施例では、開示されている方法により、被験体の生存時間を、抗体−ＩＲ７００分子の投与およびＮＩＲ光を欠く場合の平均生存時間と比較して、少なくとも３カ月、少なくとも６カ月、少なくとも１２カ月、少なくとも１８カ月、少なくとも２４カ月、少なくとも３６カ月またはそれよりも長く、増大させることができる。
一部の実施例では、方法は、１つまたは複数の追加的な治療剤をサプレッサー細胞と接触させること（または被験体に投与すること）をさらに含む。１つまたは複数の追加的な治療剤は、ＰＩＴと同時にまたは逐次的に接触させる（または被験体に投与する）ことができる。一実施例では、追加的な治療剤（複数可）を、照射後、例えば、照射の少なくとも１０分後、少なくとも３０分後、少なくとも６０分後、少なくとも２時間後、少なくとも３時間後、少なくとも４時間後、少なくとも５時間後、少なくとも６時間後、少なくとも７時間後、少なくとも８時間後、少なくとも１０時間後、少なくとも１２時間後、少なくとも２４時間後、少なくとも４８時間後、少なくとも７２時間後、少なくとも１週間後、少なくとも１カ月後、または少なくとも１年後、例えば、照射の１時間〜１０時間後、１時間〜９時間後、１時間〜８時間後、２時間〜８時間後、４時間〜８時間後、１時間〜２４時間後、または１時間〜４８時間後などに投与する。別の実施例では、追加的な治療剤（複数可）を、照射の直前（例えば、照射の約１０分〜１２０分前、例えば、照射の１０分〜６０分前または１０分〜３０分前など）に投与する。
一部の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光を追加的な療法（例えば、抗新生物剤など）と組み合わせることにより、腫瘍に対する処置の効果が増強される。例えば、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光と追加的な療法（例えば、他の抗新生物剤など）を組み合わせることにより、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光単独または追加的な療法単独のいずれかで処置した場合の腫瘍体積よりも小さな腫瘍体積がもたらされ得る、すなわち、相乗効果がある。一実施例では、併用療法を用いて処置された腫瘍および／または転移の体積は、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光単独または追加的な療法単独のいずれかで処置された腫瘍および／または転移の体積の多くとも２分の１、多くとも３分の１、多くとも４分の１、またはさらには多くとも５分の１である（例えば、処置後少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも１４日間、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、または少なくとも１２０日間の後）。一実施例では、併用療法を用いて処置された腫瘍および／または転移のサイズは、対照の処置されていない腫瘍のサイズの多くとも５分の１、多くとも６分の１、多くとも７分の１、またはさらには多くとも１０分の１である（例えば、処置後少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも１４日間、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、または少なくとも１２０日間の後）。別のまたは追加的な実施例では、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光を追加的な療法（例えば、抗新生物剤など）と組み合わせることにより、腫瘍を有する被験体の生存時間が、腫瘍を抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光単独または追加的な療法単独のいずれかを用いて処置した場合の被験体の生存時間と比較して増大することができる、すなわち、相乗効果がある。一実施例では、併用療法を用いて処置された腫瘍を有する被験体の生存時間は、抗体−ＩＲ７００分子／ＮＩＲ光単独または追加的な療法単独のいずれかで処置された腫瘍を有する被験体の生存時間よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、または少なくとも１０倍長い（例えば、処置後の指定の期間、少なくとも１４日間、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、少なくとも１２０日間、少なくとも６カ月、少なくとも１２カ月、少なくとも２４カ月、または少なくとも５年などの後に、併用療法を用いて処置された被験体が、いずれかの療法単独で処置された場合よりも多く生存する）。
使用することができる例示的な追加的な治療剤としては、化学療法剤および抗血管新生剤などの抗新生物剤、または、放射線療法などの療法が挙げられる。一実施例では、薬剤は、化学療法免疫抑制剤（例えば、リツキシマブ、ステロイドなど）またはサイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦなど）である。化学療法剤は公知である（例えば、ＳｌａｐａｋおよびＫｕｆｅ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、第８６章、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１４版；Ｐｅｒｒｙら、Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、第１７章、Ａｂｅｌｏｆｆ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、第２版、２０００年、Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ， Ｉｎｃ；ＢａｌｔｚｅｒおよびＢｅｒｋｅｒｙ．（編）：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｐｏｃｋｅｔ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、第２版、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ、１９９５年；Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｋｎｏｂｆ、およびＤｕｒｉｖａｇｅ（編）：Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第４版、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ、１９９３年を参照されたい）。本明細書で提供される方法で使用することができる例示的な化学療法剤としては、これだけに限定されないが、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、トポテカン、イリノテカン、ゲムシタビン、チアゾフリン（ｉａｚｏｆｕｒｉｎｅ）、ゲムシタビン、エトポシド、ビノレルビン、タモキシフェン、バルスポダール、シクロホスファミド、メトトレキサート、フルオロウラシル、ミトキサントロン、Ｄｏｘｉｌ（リポソームに封入されたドキソルビシン（ｄｏｘｉｏｒｕｂｉｃｉｎｅ））およびビノレルビンが挙げられる。一実施例では、使用することができる追加的な治療剤として、抗体が腫瘍特異的タンパク質に特異的に結合するものである抗体−ＩＲ７００分子、例えば、パニツムマブ−ＩＲ７００分子、トラスツズマブ−ＩＲ７００分子、バシリキシマブ（Ｂａｓｉｌｉｔｕｍａｂ）−ＩＲ７００分子、Ｚｅｎａｐａｘ−ＩＲ７００分子、Ｓｉｍｉｔｅｃｔ−ＩＲ７００分子、セツキシマブ−ＩＲ７００分子またはＪ５９１−ＩＲ７００分子などが挙げられる（例えば、どちらも参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，５２４，２３９号および米国特許出願公開第２０１４／０１２０１１９号Ａ１を参照されたい）。他の例示的な追加的な処置は本明細書において提示されている。
開示されている方法は、体内に固定された腫瘍ならびに循環中の腫瘍（例えば、白血病細胞、転移、循環性腫瘍細胞）を処置するために使用することができる。一実施例では、循環しているサプレッサー細胞に対して、装着することが可能であるまたは身体の一部を覆うデバイスを使用して照射を行う。例えば、そのようなデバイスを短期間または長期間にわたって装着することができる。ＮＩＲ放出発光ダイオード（ＬＥＤ）および電池パックが組み入れられた日常装着品（例えば、腕時計、宝飾品（例えば、ネックレスまたはブレスレットなど）、毛布、衣類（例えば、肌着、靴下、および靴の中敷き）ならびに他の日常装着品）を使用することができる。そのようなデバイスからデバイスの下にある皮膚に所望の期間にわたって光が出され、それにより、表在血管が光に長期間にわたって曝露する。循環しているサプレッサー細胞は、デバイスの下にある領域を通って移行すると光に曝露する。
１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子の投与後（例えば、静脈内）、循環しているサプレッサー細胞に抗体−ＩＲ７００コンジュゲートが結合し、ＰＩＴによって死滅しやすくなる。これらのサプレッサー細胞が日常装着品（例えば、ブレスレットまたは腕時計）中に存在するＬＥＤに近接する血管中を流れると、それらはＮＩＲ光に曝露し、それにより、細胞死滅しやすくなる。光の線量は、診断およびサプレッサー細胞型に応じて調整可能であり得る。
一部の実施例では、方法は、例えばサプレッサー細胞の死滅など、療法をモニタリングすることをさらに含む。一部の実施例では、モニタリングはリアルタイムで行われる。そのような実施例では、抗体−ＩＲ７００コンジュゲートを細胞と接触させ（または被験体に投与し）、細胞／被験体／腫瘍に対して上記の通り照射を行う。そのような方法は、例えば、細胞死滅を達成するために十分な量の抗体−ＩＲ７００分子および／または１つまたは複数の治療剤、または十分な量の照射が投与されることを確実にするために有用である。これらの方法により、形態学的変化が明らかになる前に細胞死滅を検出することが可能になり得る。一実施例では、方法は、サプレッサー細胞表面タンパク質を有するサプレッサー細胞を治療有効量の１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子（例えば、少なくとも０．０１ｎＭ、少なくとも０．１ｎＭ、少なくとも１ｎＭ、または少なくとも１０ｎＭなど、例えば、０．１〜２ｎＭ、０．５〜１．５ｎＭなど、例えば、１ｎＭなどの１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子）と接触させるステップであり、抗体が、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合するものであるステップと、細胞に対して６６０〜７４０ｎｍの波長および少なくとも２０Ｊ ｃｍ−２の線量で照射を行うステップと、細胞に対する照射の約０〜４８時間後（例えば、細胞に対する照射の少なくとも１時間後、少なくとも２時間後、少なくとも４時間後、少なくとも６時間後、少なくとも１２時間後、少なくとも１８時間後、少なくとも２４時間後、少なくとも３６時間後、少なくとも４８時間後、または少なくとも７２時間後など、例えば、細胞に対する照射の１分〜３０分後、１０分〜３０分後、１０分〜１時間後、１時間〜８時間後、６時間〜２４時間後、または６時間〜４８時間後）に蛍光寿命イメージング（ＦＬＩ）を用いて細胞を検出し、それにより、細胞死滅をリアルタイムで検出するステップとを含む。ＦＬＴの短縮がＰＩＴによって誘導される急性膜損傷の指標としての機能を果たす。したがって、ＩＲ７００ ＦＬＴを少なくとも２５％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％または少なくとも７５％など短縮するために十分な条件下で、細胞に対する照射を行う。一実施例では、６６０ｎｍ〜７４０ｎｍ（例えば、６８０ｎｍ〜７００ｎｍなど）の波長および少なくとも２０Ｊ ｃｍ−２または少なくとも３０Ｊ ｃｍ−２、例えば、少なくとも４０Ｊ ｃｍ−２または少なくとも５０−２Ｊ ｃｍ−２または少なくとも６０Ｊ ｃｍ−２など、例えば、３０〜５０Ｊ ｃｍ−２などの線量で細胞に対して照射を行う。
例示的なサプレッサー細胞およびサプレッサー細胞表面タンパク質
１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子によって死滅するサプレッサー細胞は、培養物中で成長しているものであってもよく、がんを有する患者などの、処置される哺乳動物中に存在するものであってもよい。任意の型のサプレッサー細胞を開示されている方法を用いて死滅させることができる。サプレッサー細胞は、細胞表面タンパク質を発現し、それに対して、そのようなサプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合する抗体を選択または生成することができ、そのサプレッサー細胞表面タンパク質に対する抗体−ＩＲ７００分子を生成することができる。表１に、開示されている療法を用いて標的化することができる例示的なサプレッサー細胞およびサプレッサー細胞表面タンパク質を提示する。抗体−ＩＲ７００分子の抗体または抗体断片は、表１に列挙されているサプレッサー細胞表面タンパク質、または細胞表面上に存在するタンパク質の一部（例えば、これらのタンパク質について以下に提示されているＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号で提供されるタンパク質の細胞表面エピトープなど）に特異的に結合するものであってよい。
線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂ
開示されている療法によって標的化することができるサプレッサー細胞の例としては、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、ＩＩ型ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ、Ｍ２マクロファージ、腫瘍浸潤線維芽細胞、および骨髄由来サプレッサー細胞のうちの１つまたは複数が挙げられる。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇは、それらの細胞表面上にＣＤ２５およびＣＤ４タンパク質を発現し、転写因子フォークヘッドボックスＰ３（Ｆｏｘｐ３）タンパク質を細胞内に発現するサプレッサー細胞の一種である。ＣＤ４、ＣＤ２５、および転写因子Ｆｏｘｐ３を特徴とする調節性Ｔ細胞は、免疫抑制に特化したＣＤ４＋Ｔ細胞の亜集団である。ＩＩ型ＮＫＴ細胞は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞の両方の性質を共有するＴ細胞の不均質な群であり、ＣＤ１ｄ制限Ｔ細胞であり、また、α§Ｔ細胞受容体ならびにＮＫ１．１を同時発現する。ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇは、免疫恒常性の維持に関与する。そのような細胞は、それらの表面上にＣＤ８およびＣＤ１２２の両方を発現する。Ｍ２マクロファージは、炎症を低減し、また、例えばオルニチンを代謝することによって組織修復を促進するマクロファージの一種である。
サプレッサー細胞表面タンパク質は、サプレッサー細胞によって発現されるタンパク質であり、当該タンパク質の少なくとも一部分が細胞表面上に存在し、検出可能である。例えば、タンパク質は、表面上に完全に存在するものであってもよく、特異的抗体またはその断片（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片）と結合することが可能な独特のエピトープを有する細胞外部分（複数可）を有する膜貫通タンパク質であってもよい。一部の実施例では、サプレッサー細胞表面タンパク質は、サプレッサー細胞に独特なものである、またはそれらの細胞においてがん細胞などの他の細胞と比較してはるかに豊富である。例示的なサプレッサー細胞表面タンパク質（そのタンパク質に特異的な抗体を使用して抗体−ＩＲ７００分子を製剤化することができる）としては、これだけに限定されないが、ＣＤ２５、ＣＤ４、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン−１デコイ受容体、ＣＤ１０３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂが挙げられる。
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞
死滅させる／標的化するサプレッサー細胞がＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇである場合、抗ＣＤ４、抗ＣＤ２５、抗ＣＸＣＲ４、抗ＣＣＲ４、抗ＧＩＴＲ、抗ＯＸ４０、抗ＦＲ４、および／または抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、機能的Ｆｃ領域を有さない）を抗体−ＩＲ７００分子の一部として使用することができる。
ＣＤ４（表面抗原分類４）は、一部の免疫細胞の表面上に見いだされる糖タンパク質であり、抗原提示細胞を用いた伝達においてＴ細胞受容体を補助する補助受容体として作用する。ＣＤ４は、細胞の表面上に発現する４つの免疫グロブリンドメイン（Ｄ１〜Ｄ４）を有する。ＣＤ４配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００６０７．１、ＮＰ＿０３８５１６．１、Ｐ０１７３０．１、ＸＰ＿００４０５２６３０．１、およびＸＰ＿００８７６１５０２．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ４に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−５１４５７１、ｓｃ−５１４７４６、およびｓｃ−０７２１９；Ｄａｋｏ、Ｄｅｎｍａｒｋからのクローン４Ｂ１２、ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１３３６１６、ａｂ２５４７５、およびａｂ５１０３７）。ＣＤ４抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ領域が除去／不活化されるように改変することができる。
ＣＤ２５は、ＩＬ−２受容体のアルファ鎖である（ＩＬ２ＲＡとも称される）。ＣＤ２５は、活性化Ｔ細胞、活性化Ｂ細胞、一部の胸腺細胞、骨髄前駆体、および希突起神経膠細胞上に見いだされる膜貫通タンパク質である。ＣＤ２５配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００４０８．１、ＮＰ＿００１２９５１７２．１、ＮＰ＿００１２９５１７１．１、ＡＡＩ１４４３８．１、ＮＰ＿９９９０００．１、およびＣＡＡ４４２９７．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ２５に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−３７６６６５、ｓｃ−３６５９１２、およびｓｃ−１６２８；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ８２３５、ａｂ９４９６、およびａｂ６１７７７）。一実施例では、ＣＤ２５抗体は、ダクリズマブである（例えば、ＦＣ部分を含有するもの）。一実施例では、ＣＤ２５抗体は、機能的Ｆｃ領域を含有しないものなどのバシリキシマブである（例えば、ＦＣ部分を含有するもの）。一実施例では、ＣＤ２５抗体は、機能的Ｆｃ領域を含有しないものなどのダクリズマブである。ＣＤ２５抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。一部の実施例では、本明細書で提供される方法に、非機能的Ｆｃ領域を有するバシリキシマブおよびダクリズマブを含有する抗ＣＤ２５−ＩＲ７００分子などの２つの異なる抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００分子を使用する。
Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）は、フーシンまたはＣＤ１８４としても公知であり、間質由来因子１に特異的なアルファケモカイン受容体である。ＣＸＣＲ４は、ＨＩＶがＣＤ４＋Ｔ細胞に感染するために使用することが可能ないくつかのケモカイン受容体のうちの１つである。ＣＸＣＲ４配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＣＡＡ１２１６６．１、ＮＰ＿００１００８５４０．１、ＮＰ＿０３４０４１．２、ＡＡＺ３２７６７．１、およびＸＰ＿００４０３２６４６．１を参照されたい）。さらに、ＣＸＣＲ４に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂからのＢＭＳ−９３６５６４（ＭＤＸ−１３３８）、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−１２７６４、ｓｃ−５３５３４、およびｓｃ−６２７９；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ２０７４、ａｂ１２４８２４、およびａｂ７１９９）。ＣＸＣＲ４抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ領域が除去／不活化されるように改変することができる。
Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）は、ＣＤ１９４としても公知であり、ケモカインＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１７およびＣＣＬ２２のＧタンパク質共役受容体である。ＣＣＲ４配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００５４９９．１、ＮＰ＿０３４０４６．２、Ｐ５１６８０．２、ＮＰ＿５９８２１６．２、およびＮＰ＿００１２５２９４９．１を参照されたい）。さらに、ＣＣＲ４に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−１０１３７５およびｓｃ−３２１３３；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１６６９、ａｂ１６６４、およびａｂ５９５５０）。ＣＣＲ４抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ領域が除去／不活化されるように改変することができる。
グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体（ＧＩＴＲ）は、調節性Ｔ細胞の抑制活性の阻害およびＴ−エフェクター細胞の生存の延長に関与する表面受容体分子である。ＧＩＴＲ配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００４１８６．１、ＮＰ＿０３３４２６．１、ＮＰ＿００１１７１８７９．１、ＮＰ＿００１０１９５２０．２、およびＮＰ＿００１０２６０４５．１を参照されたい）。さらに、ＧＩＴＲに特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−５７５９、ｓｃ−５３９７２、およびｓｃ−３５５３９１；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１２９２７２、ａｂ８６５７４、およびａｂ１００３０）。ＧＩＴＲ抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ領域が除去／不活化されるように改変することができる。
ＯＸ４０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４）またはＣＤ１３４としても公知であり、活性化の２４〜７２時間後に発現する二次共刺激免疫チェックポイント分子である。ＯＸ４０配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００３３１８．１、ＣＡＡ５９４７６．１、ＮＰ＿０３５７８９．１、ＣＡＢ９６５４３．１、およびＮＰ＿０３７１８１．１を参照されたい）。さらに、ＯＸ４０に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−２００７３、ｓｃ−１０９３８、およびｓｃ−１１４０４；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ２０３２２０、ａｂ１１９９０４、およびａｂ７６０００）。ＯＸ４０抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ領域が除去／不活化されるように改変することができる。
葉酸受容体４（ＦＲ４）は、ＪｕｎｏおよびＩＺＵＭＯ１Ｒとしても公知であり、哺乳動物卵細胞の表面上に位置し、精子に保持される対応物、ＩＺＵＭＯ１を認識し、受精を容易にする。ＦＲ４はまた、形質転換増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）誘導性Ｔｒｅｇおよび天然のＴｒｅｇにも高レベルで発現する。エクソン３が欠失したＦＲ４転写物バリアントであるＦＲ４Ｄ３は、主にＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞に発現する。ＦＲ４配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：Ａ６ＮＤ０１．３、ＸＰ＿００６５１０５９９．１、およびＸＰ＿００６５１０５９６．１を参照されたい）。さらに、ＦＲ４に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−３９９６９；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ５３６８２およびａｂ１７０５３５）。ＦＲ４抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ領域が除去／不活化されるように改変することができる。
細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）は、ＣＤ１５２としても公知であり、免疫系を下方制御する免疫チェックポイントとして機能するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞の表面上に見いだされる。ＣＴＬＡ４配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：Ｐ１６４１０．３、ＮＰ＿００１２６８９０５．１、ＮＰ＿１１３８６２．１、ＮＰ＿００１００９２３６．１、およびＴ０９５３６を参照されたい）。さらに、ＣＴＬＡ４に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−１６３０およびｓｃ−９０９；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１３４０９０、ａｂ１９７９２、およびａｂ１０２７３０）。一実施例では、ＣＴＬＡ４抗体は、イピリムマブ（例えば、ＦＣ部分を含有するもの）である。一実施例では、ＣＴＬＡ４抗体は、トレメリムマブ（例えば、ＦＣ部分を含有するもの）である。ＣＴＬＡ４抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ領域が除去／不活化されるように改変することができる。
ＣＤ１０３（表面抗原分類１０３）は、インテグリンアルファＥ（ＩＴＧＡＥ）としても公知であり、成熟Ｔｒｅｇの表面上に見いだされるインテグリンである。ＣＤ１０３は、インテグリンベータ７（β７−ＩＴＧＢ７）に結合して、完全なヘテロ二量体インテグリン分子αＥβ７を形成する。ＣＤ１０３配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００２１９９．３、ＮＰ＿０３２４２５．２、ＡＡＭ２７１７３．１、ＡＡＩ１３４３７．１、およびＮＰ＿１１３９５６．２を参照されたい）。さらに、ＣＤ１０３に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｌ Ｂｉｏｔｅｃｈからのモノクローナル抗体Ｂｅｒ−ＡＣＴ８ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号１２９２０２およびａｂ１２８７５６）。ＣＤ１０３抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ領域が除去／不活化されるように改変することができる。
ＩＩ型ナチュラルキラーＴ細胞
死滅させる／標的化するサプレッサー細胞がＩＩ型ＮＫＴ細胞である場合、抗ＣＤ１６および／または抗ＣＤ５６抗体（例えば、機能的Ｆｃ領域を有さない）を抗体−ＩＲ７００分子の一部として使用することができる。
ＣＤ１６は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）およびＦｃγＲＩＩＩｂ（ＣＤ１６ｂ）として同定されている。これらの受容体は、ＩｇＧ抗体のＦｃ部分に結合し、次いでそれによりＮＫ細胞が抗体依存性細胞媒介性細胞傷害に関して活性化される。ＣＤ１６配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００１１２１０６４．１、ＮＰ＿００１２３１６８２．１、ＮＰ＿０３４３１８．２、ＢＡＡ９２３４８．１、およびＡＡＨ３６７２３．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ１６に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−１９６２０、ｓｃ−５８９６２、およびｓｃ−５２３７６；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１８３３５４、ａｂ２０３８８３、およびａｂ６６４）。ＣＤ１６抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
ＣＤ５６は、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）としても公知であり、休止状態ＮＫ細胞および活性化ＮＫ細胞上に発現するＩｇ−スーパーファミリーの糖タンパク質である。ＣＤ５６の細胞外ドメインは、５つの免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン、その後ろに続く２つのフィブロネクチンＩＩＩ型（ＦＮＩＩＩ）ドメインからなる。ＣＤ５６配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００６０６．３、ＮＰ＿８５１９９６．２、ＮＰ＿００１０７４９１４．１、ＮＰ＿８５１９９６．２、およびＮＰ＿１１３７０９．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ５６に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−７１６５１およびｓｃ−７３２６；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１９１１０５およびａｂ９０１８）。ＣＤ５６抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ
死滅させる／標的化するサプレッサー細胞がＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇである場合、抗ＣＤ８および／または抗ＣＤ１２２抗体（例えば、機能的Ｆｃ領域を有さない）を抗体−ＩＲ７００分子の一部として使用することができる。
表面抗原分類８（ＣＤ８）は、クラスＩ主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）に結合する、Ｔ細胞受容体に対する補助受容体としての機能を果たす膜貫通糖タンパク質である。２つのアイソフォーム、アルファおよびベータが存在する。ＣＤ８配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００１１３９３４５．１、ＮＰ＿００１０７４５７９．１、ＸＰ＿００６５０５５２８．１、ＡＡＢ２１６７１．２、およびＥＤＫ９８９３５．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ８に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−１１７７、ｓｃ−７９７０、およびｓｃ−２５２７７；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ９３２７８、ａｂ２２３７８、およびａｂ３４３６４）。ＣＤ８抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
ＣＤ１２２は、インターロイキン−２受容体サブユニットベータ（ＩＬ２ＲＢ）としても公知であり、Ｔ細胞媒介性免疫応答に関与するＩ型膜タンパク質である。ＣＤ１２２配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００８６９．１、ＮＰ＿０３２３９４．１、ＮＰ＿０３７３２７．１、ＮＰ＿００１２７４２３７．１、およびＰ１６２９７．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ１２２に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−１９５８３；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ６１１９５およびａｂ６２６９９）。ＣＤ１２２抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
Ｍ２マクロファージ細胞
死滅させる／標的化するサプレッサー細胞がＭ２マクロファージ細胞である場合、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ１６３、抗ＣＤ２０６、抗ＣＤ１１ｂ、抗Ｇｒ−１、抗ＣＤ１４、抗ＩＬ−４Ｒａ、抗ＩＬ−１Ｒａ、および／または抗ＩＬ−１デコイ受容体抗体（例えば、機能的Ｆｃ領域を有さない）を抗体−ＩＲ７００分子の一部として使用することができる。
ＣＤ２３は、ＦｃイプシロンＲＩＩとしても公知であり、ＩｇＥの低親和性受容体であり、また、抗体フィードバック調節において役割を果たす。アイソフォームＣＤ２３ｂは、Ｔ細胞上に発現する。ＣＤ２３配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００１１９３９４８．２、ＮＰ＿００１２４０６６６．１、およびＮＰ＿５９８２３４．２を参照されたい）。さらに、ＣＤ２３に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−７０２３、ｓｃ−２３９２３、およびｓｃ−１８９１０；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ９２４９５、ａｂ１６７０２、およびａｂ１３５３８６）。ＣＤ２３抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
表面抗原分類１６３（ＣＤ１６３）は、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体の膜貫通スカベンジャー受容体である。ＣＤ１６３配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＣＡＢ４５２３３．１、ＮＰ＿００４２３５．４、Ｑ８６ＶＢ７．２、ＮＰ＿００１１６３８６６．１、およびＱ２ＶＬＨ６．２を参照されたい）。さらに、ＣＤ１６３に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ２００６６、ｓｃ３３７１５、およびｓｃ−５８９６５；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１７０５１およびａｂ８７０９９）。ＣＤ１６３抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
表面抗原分類２０６（ＣＤ２０６）は、マンノース受容体Ｃ１型（ＭＣ１）としても公知であり、マクロファージの表面上、未成熟樹状細胞の表面上、ならびにヒト皮膚線維芽細胞およびケラチノサイトなどの皮膚細胞の表面上に存在する。ＣＤ２０６配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００２４２９．１、ＡＡＩ４１３３９．１、およびＮＰ＿００１０８６９０７．２を参照されたい）。さらに、ＣＤ２０６に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−５８９８６、ｓｃ−７０５８５、およびｓｃ−７０５８６；およびａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ８９１８、ａｂ６４６９３、およびａｂ１１７６４４）。ＣＤ２０６抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
表面抗原分類１１ｂ（ＣＤ１１ｂ）は、インテグリンアルファＭ（ＩＴＧＡＭ）としても公知であり、ヘテロ二量体インテグリンアルファ−Ｍベータ２（αＭβ２）分子を形成するタンパク質サブユニットの１つである。αＭβ２は、単球、顆粒球、マクロファージ、およびナチュラルキラー細胞を含めた、自然免疫系に関与する多くの白血球の表面上に発現する。ＣＤ１１ｂ配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００６２３．２、ＮＰ＿００１０７６４２９．１、およびＥＤＭ１７１９８．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ１１ｂに特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−２００５０、ｓｃ−１１８６、およびｓｃ２８６６４；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ６４３４７、ａｂ５２４７８、およびａｂ８８７８）。ＣＤ１１ｂ抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
Ｇｒ−１は、リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｃ１（Ｌｙ−６Ｃ）またはリンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ（Ｌｙ−６Ｇ）としても公知であり、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）連結タンパク質である。Ｇｒ−１は、顆粒球およびマクロファージ上に発現する骨髄分化抗原である。Ｇｒ−１配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００１２９７３６７．１、ＡＡＡ３９４６９．１、およびＰ３５４６１．１を参照されたい）。さらに、Ｇｒ−１に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−５３５１５およびｓｃ−１０３６０３；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ２５３７７、ａｂ１７１２５４、およびａｂ１３４７７５）。Ｇｒ−１抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
表面抗原分類１４（ＣＤ１４）は、細菌リポ多糖の検出に関する補助受容体として作用する（Ｔｏｌｌ様受容体ＴＬＲ４およびＭＤ−２と共に）。ＣＤ１４は、マクロファージによって、ならびにより少ない程度に好中球および樹状細胞によって発現される。ＣＤ１４配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００５８２．１、Ｐ０８５７１．２、ＮＰ＿０３３９７１．１、ＣＡＡ３２１６６．１、およびＢＡＡ２１５１７．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ１４に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−１１８２、ｓｃ−５７４９およびｓｃ−６９９８；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１３３３３５、ａｂ１８３３２２、およびａｂ１８２０３２）。ＣＤ１４抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
ＩＬ−４Ｒａは、インターロイキン４受容体（ＩＬ４Ｒ）としても公知であり、ＩＬ４Ｒのアルファ鎖であり、インターロイキン４に結合してＴｈ２細胞の分化を促進することが可能なＩ型膜貫通タンパク質である。ＩＬ−４Ｒａ配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００４０９．１、ＮＰ＿５９６８７１．２、ＮＰ＿００１００８７００．１、Ｐ２４３９４．１、およびＮＰ＿００１０７５２４３．１を参照されたい）。さらに、ＩＬ−４Ｒａに特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡからのカタログ番号ＬＳ−Ｃ７０８９６；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１３１０５８およびａｂ５０２７７）。ＩＬ−４Ｒａ抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）は、ＩＬ１ Ｉ型（ＩＬ−１Ｒ１）およびＣＤ１２１ａ）としても公知であり、ＩＬ１アルファ、ＩＬ１ベータおよびＩＬ１Ｒアンタゴニストに結合するサイトカイン受容体である。ＩＬ−１Ｒａ配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００８６８．１、ＮＰ＿００１１１６８５４．１、ＪＡＡ４３６８３．１、およびＮＰ＿０３７２５５．３を参照されたい）。さらに、ＩＬ−１Ｒａに特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−６８８およびｓｃ−６６０５４；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１０６２７８およびａｂ１１５４９７）。ＩＬ−１Ｒａ抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
インターロイキン−１デコイ受容体は、ＩＬ１ ＩＩ型（ＩＬ−１Ｒ２）およびＣＤ１２１ｂ）としても公知であり、ＩＬ１アルファ、ＩＬ１ベータおよびＩＬ−１Ｒａに結合するサイトカイン受容体であり、そのリガンドの活性を阻害するデコイ受容体として作用する。ＩＬ−１デコイ受容体配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＡＡＨ３９０３１．１、ＮＰ＿００１２４８３４８．１、ＮＰ＿０３４６８５．１、およびＡＡＨ９１５６４．１を参照されたい）。さらに、ＩＬ−１デコイ受容体に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−２７８５４およびｓｃ−５２６７８；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ８９１５９およびａｂ９７３８８）。ＩＬ−１デコイ受容体抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
腫瘍浸潤線維芽細胞
死滅させる／標的化するサプレッサー細胞が腫瘍浸潤線維芽細胞である場合、抗線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）抗体（例えば、機能的Ｆｃ領域を有さない）を抗体−ＩＲ７００分子の一部として使用することができる。
ＦＡＰは、セプラーゼとしても公知であり、セリンプロテアーゼファミリーに属するホモ二量体内在性膜ゼラチナーゼである。ＦＡＰは、上皮がん、治癒創傷の肉芽組織、ならびに骨および軟部肉腫の悪性細胞の反応性間質線維芽細胞において選択的に発現する。ＦＡＰ配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＡＡＢ４９６５２．１、ＣＡＡ７１１１６．１、ＢＡＩ４７３４４．１、ＪＡＡ２１４３０．１、およびＤＡＡ３２６７７．１を参照されたい）。さらに、ＦＡＰに特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能であり（例えば、ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ５３０６６およびａｂ５４６５１）、また、ＵＳ２０１２／０２５８１１９において開示されている。ＦＡＰ抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
骨髄由来サプレッサー細胞
死滅させる／標的化するサプレッサー細胞が骨髄由来サプレッサー細胞である場合、抗ＣＸＣＲ２抗体、抗ＣＤ１１ｂ抗体、抗ＣＤ１４抗体、抗ＣＤ３３抗体、および抗ＣＤ６６ｂ抗体（例えば、機能的Ｆｃ領域を有さない）を抗体−ＩＲ７００分子の一部として使用することができる。
Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体２型（ＣＸＣＲ２）は、ＩＬ８Ｒ８としても公知であり、インターロイキン８の受容体である。ＣＸＣＲ２は、Ｇタンパク質活性化二次メッセンジャー系を通じてシグナルを伝達する。この受容体は、黒色腫成長刺激活性を有するタンパク質であるケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＸＣＬ１／ＭＧＳＡ）にも結合する。さらに、ＣＸＣＲ２は、リガンドＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、およびＣＸＣに結合する。ＣＸＣＲ２配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００１５４８．１、ＮＰ＿００１１６１７７０．１、ＮＰ＿０３４０３９．１、ＮＰ＿０５８８７９．１、およびＡＢＣ５９０６０．１を参照されたい）。さらに、ＣＸＣＲ２に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｒｏｃｋｌａｎｄ（Ｌｉｍｅｒｉｃｋ、ＰＡ）からのカタログ番号６００−４０１−Ｐ５４、ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのａｂ１４９３５およびａｂ６１１００）。ＣＸＣＲ２抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
表面抗原分類１１ｂ（ＣＤ１１ｂ）は、インテグリンアルファＭ（ＩＴＧＡＭ）としても公知であり、ヘテロ二量体インテグリンアルファ−Ｍベータ２（αＭβ２）分子を形成するタンパク質サブユニットの１つである。αＭβ２は、単球、顆粒球、マクロファージ、およびナチュラルキラー細胞を含めた、自然免疫系に関与する多くの白血球の表面上に発現する。ＣＤ１１ｂ配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００６２３．２、ＮＰ＿００１０７６４２９．１、およびＥＤＭ１７１９８．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ１１ｂに特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−２００５０、ｓｃ−１１８６、およびｓｃ２８６６４；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ６４３４７、ａｂ５２４７８、およびａｂ８８７８）。ＣＤ１１ｂ抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
表面抗原分類１４（ＣＤ１４）は、細菌リポ多糖の検出に関する補助受容体として作用する（Ｔｏｌｌ様受容体ＴＬＲ ４およびＭＤ−２と共に）。ＣＤ１４は、マクロファージによって、ならびにより少ない程度に好中球および樹状細胞によって発現される。ＣＤ１４配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿０００５８２．１、Ｐ０８５７１．２、ＮＰ＿０３３９７１．１、ＣＡＡ３２１６６．１、およびＢＡＡ２１５１７．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ１４に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸからのカタログ番号ｓｃ−１１８２、ｓｃ−５７４９およびｓｃ−６９９８；ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１３３３３５、ａｂ１８３３２２、およびａｂ１８２０３２）。ＣＤ１４抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
表面抗原分類３３（ＣＤ３３）は、シグレック−３、ｇｐ６７およびｐ６７としても公知であり、骨髄系列の細胞に発現する膜貫通型受容体、また、一部のリンパ系細胞上にも見いだされる。ＣＤ３３配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００１０７６０８７．１、ＮＰ＿００１１７１０７９．１、ＮＰ＿００１７６３．３、ＮＰ＿００１１０４５２８．１、およびＮＰ＿０６７２６８．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ３３に特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、ゲムツズマブオゾガマイシン（ｇｅｍｉｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）の一部である組換えヒト化抗ＣＤ３３モノクローナル抗体（ＩｇＧ４κ抗体ｈＰ６７．６）（Ｐｆｉｚｅｒ／Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、バダスツキシマブタリリン（ｖａｄａｓｔｕｘｉｍａｂ ｔａｌｉｒｉｎｅ）の一部である抗ＣＤ３３抗体（ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ）Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、クローンＭ１９５（ヒト化ＩｇＧ２ａモノクローナル、ＣａｒｏｎおよびＳｃｈｅｉｎｂｅｒｇ、Ｌｅｕｋ． Ｌｙｍｐｈｏｍ．、１１巻：１〜６頁、２００９年）、ならびにａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１９９４３２およびａｂ１９４６２）。ＣＤ３３抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
ＣＤ６６ｂは、癌胎児性抗原関連接着分子８（ＣＥＡＣＡＭ８）としても公知であり、セリンプロテアーゼファミリーに属するホモ二量体内在性膜ゼラチナーゼである。ＣＤ６６ｂは、顆粒球上に発現し、細胞接着、細胞遊走、および病原体結合に関与する。ＣＤ６６ｂ配列はいくつかの生物体について公知である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号：ＮＰ＿００１８０７．２、ＡＡＨ２６２６３．１、ＡＡＩ２０２０５．１、およびＸＰ＿００９４３３９７７．１を参照されたい）。さらに、ＣＤ６６ｂに特異的な抗体は、商業的な供給源から公的に入手可能である（例えば、ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡからのカタログ番号ａｂ１９７６７８およびａｂ１７０８７５ならびにＳｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａからのカタログ番号６００８６）。ＣＤ６６ｂ抗体は、例えば実施例１に記載の方法またはペプシンを使用して、Ｆｃ部分が除去／不活化されるように改変することができる。
例示的な腫瘍
開示されている、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を使用してサプレッサー細胞を死滅させる方法は、腫瘍細胞、例えば、がん細胞など、例えば、がんを有する患者の細胞を処置する（例えば、死滅させる）ために使用することができる。サプレッサー細胞は、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）、ＮＫ細胞、および／または樹状細胞を抑制して免疫抑制を駆動し、がんの免疫媒介性拒絶反応を妨げる可能性がある。したがって、開示されている方法を使用して生存可能なサプレッサー細胞の数を減少させることにより、今度は、Ｔｅｆｆ（例えば、細胞傷害性ＣＤ８＋細胞）が腫瘍／がん細胞を死滅させるために利用可能になる。
開示されている方法を用いて処置する（例えば、死滅させる）ことができる例示的な腫瘍としては、これだけに限定されないが、急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、および骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病および赤白血病など）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病など）、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病）を含めた白血病などの液性腫瘍が挙げられる。別の実施例では、細胞は、肉腫および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、肺がん、結腸直腸がん、頭頸部がん、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌（例えば、膵臓、結腸、卵巣、肺、乳房、胃、前立腺、子宮頸部、または食道の腺癌）、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、膀胱癌、ＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫など）などの固形腫瘍細胞である。
例示的な被験体
一部の実施例では、開示されている方法を使用して、本明細書に記載されている腫瘍などの腫瘍を有する被験体を処置する。一部の実施例では、腫瘍が以前に処置されている、例えば、外科的にまたは化学的に除去されており、その後、患者中に残っている可能性があるあらゆる残りの望ましくない腫瘍細胞を死滅させるために、開示されている方法を使用する。
開示されている方法は、がんなどの腫瘍を有する、またはがんなどの腫瘍が以前に除去または処置された、ヒトなどの任意の哺乳動物の被験体を処置するために使用することができる。開示されている療法を必要とする被験体は、がんを有するヒト被験体を含み得る。例えば、開示されている方法を、単独で、または放射線もしくは他の化学療法もしくは生物学的療法（例えば、モノクローナル抗体療法など）と組み合わせてのいずれかで、がんに対する最初の処置として使用することができる。開示されている方法は、以前の放射線または化学療法が失敗した患者において使用することもできる。したがって、一部の実施例では、被験体は、他の療法を受けたが、それらの他の療法により所望の治療応答がもたらされなかった被験体である。開示されている方法は、局在および／または転移性がんを有する患者において使用することもできる。
抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療剤の投与
抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療剤（例えば、抗新生物剤など）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、例えば、抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療薬を細胞が成長している成長培地に添加することによってサプレッサー細胞と接触させることもでき、またはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、例えば、抗体−ＩＲ７００分子を処置される被験体に投与することによってサプレッサー細胞と接触させることもできる。
抗体−ＩＲ７００分子、ならびに追加的な治療剤は、例えば、がんなどの腫瘍を有する被験体、または以前に腫瘍が除去された（例えば、外科手術または他の療法によって）被験体に、当技術分野で公知の任意の方法を使用して局所的にまたは全身的に投与することができる。特定の実施例が提示されているが、開示されている抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療剤の代替的投与方法を使用することができることが当業者には理解されよう。そのような方法としては、例えば、処置を必要とする被験体への数時間〜数日にわたる持続注入をもたらすためのカテーテルまたは埋め込み型ポンプの使用を挙げることができる。
一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療剤を、腫瘍への（腫瘍内）直接注射または注入を含めた非経口手段によって投与する。一部の実施例では、抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療剤を、抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療剤を腫瘍に適用することによって、例えば、抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療剤を含有する溶液中に腫瘍を浸漬することによってまたは抗体−ＩＲ７００分子および追加的な治療剤を腫瘍上に注ぐことによって、腫瘍に投与する。
それに加えてまたはその代わりに、開示された組成物（例えば、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を含有するもの）ならびに追加的な治療剤を、腫瘍（例えば、がんなど）を有する被験体に、全身的に、例えば、静脈内に、筋肉内に、皮下に、皮内に、腹腔内に、皮下に、または経口的に投与することができる。
被験体に投与される抗体−ＩＲ７００分子（および追加的な治療剤）の投与量には絶対的な制限の条件はないが、組成物およびその活性成分の性質ならびにその望ましくない副作用（例えば、抗体に対する免疫応答）、処置される被験体ならびに処置される状態の型ならびに投与の様式に依存する。一般に、用量は、所望の生物学的効果を達成するために十分な量、例えば、腫瘍のサイズ（例えば、体積および／または重量）を低減する、またはさらなる腫瘍の成長を減弱させる、または腫瘍の望ましくない症状を低減するために有効な量などの治療有効量になる。追加的な治療剤の投与量は、当技術分野で公知である。
抗体−ＩＲ７００分子の静脈内投与に関しては、単回処置で被験体に投与するための例示的な投与量は、０．５〜１００ｍｇ／体重６０ｋｇ、１〜１００ｍｇ／体重６０ｋｇ、１〜５０ｍｇ／体重６０ｋｇ、１〜２０ｍｇ／体重６０ｋｇ、例えば、約１ｍｇまたは２ｍｇ／体重６０ｋｇにわたる。さらに別の実施例では、ｉｐ投与または腫瘍内投与される抗体−ＩＲ７００分子の治療有効量は、体重１ｋｇに対して１０μｇから５０００μｇまでの抗体−ＩＲ７００分子、例えば、１０μｇ／ｋｇ〜１０００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜 ５００μｇ／ｋｇ、または１００μｇ／ｋｇ〜１０００μｇ／ｋｇで変動し得る。
一実施例では、ヒト患者に投与される抗体−ＩＲ７００分子の用量は、少なくとも５０ｍｇ、例えば、少なくとも１００ｍｇ、少なくとも３００ｍｇ、少なくとも５００ｍｇ、少なくとも７５０ｍｇ、またはさらには１ｇなど、例えば、５０〜１００ｍｇなどである。
開示されている抗体−ＩＲ７００分子（および追加的な治療剤）を用いた処置は、１日で完了させることもでき、複数日、同じまたは異なる投与量で反復して行うこともできる。反復処置は、同日に、連続した日に、または１〜３日毎に、３〜７日毎に、１〜２週間毎に、２〜４週間毎に、１〜２カ月毎に、またはさらに長い間隔で行うことができる。したがって、一部の実施例では、被験体を、開示されている抗体−ＩＲ７００分子を用いて少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも１０回、または少なくとも２０回（例えば、２〜５回、または３〜４回など）処置する。
サプレッサー細胞に対する照射
サプレッサー細胞を１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と接触させた後、それらに対して照射を行う。照射の方法は当技術分野で周知である。サプレッサー細胞表面タンパク質（複数可）を発現するサプレッサー細胞のみが抗体によって認識されるので、それらのサプレッサー細胞のみに十分な量の抗体−ＩＲ７００分子が結合する。これにより、照射により抗体−ＩＲ７００分子が結合した細胞のみが死滅し、他の細胞は死滅しないので、他の免疫細胞の死滅などの望ましくない副作用の可能性が低減する。
一部の実施例では、サプレッサー細胞に対する照射を、組織培養ディッシュにおいてなど、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて行う。他の例では、サプレッサー細胞に対する照射を、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて行う、例えば、予め抗体−ＩＲ７００分子を投与された被験体に対して照射を行う。一部の実施例では、被験体に対して照射を行う、例えば、被験体内の腫瘍に対して照射を行うことができる。
サプレッサー細胞（例えば、被験体内の）に、治療線量の放射線を６６０〜７１０ｎｍ、例えば、６６０〜７００ｎｍ、６８０〜７００ｎｍ、６７０〜６９０ｎｍ、６７０〜７１０ｎｍなど、例えば、６８０ｎｍまたは６９０ｎｍの波長で照射する。特定の実施例では、サプレッサー細胞（例えば、被験体内の）に、少なくとも１Ｊ ｃｍ−２、少なくとも２Ｊ ｃｍ−２、少なくとも３Ｊ ｃｍ−２、少なくとも４Ｊ ｃｍ−２、少なくとも５Ｊ ｃｍ−２、少なくとも６Ｊ ｃｍ−２、少なくとも７Ｊ ｃｍ−２、少なくとも８Ｊ ｃｍ−２、少なくとも９Ｊ ｃｍ−２、少なくとも１０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも３０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも５０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも６０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも１００Ｊ ｃｍ−２、または少なくとも５００Ｊ ｃｍ−２、例えば、１〜１０００Ｊ ｃｍ−２、１〜５００Ｊ ｃｍ−２、４〜１０Ｊ ｃｍ−２、４〜８Ｊ ｃｍ−２、４〜６５Ｊ ｃｍ−２、３０〜５０Ｊ ｃｍ−２、１０〜１００Ｊ ｃｍ−２、または１０〜５０Ｊ ｃｍ−２の線量で照射を行う。
本明細書で提供される抗体−ＩＲ７００分子の投与後に、サプレッサー細胞（または患者）に対して１回または複数回の照射を行うことができる。したがって、照射は、１日で完了させることもでき、複数日、同じまたは異なる投与量で反復して行うこともできる（例えば、少なくとも２つの異なる時間、３つの異なる時間、４つの異なる時間、５つの異なる時間または１０の異なる時間の照射など）。反復照射は、同日に、連続した日に、または１〜３日毎に、３〜７日毎に、１〜２週間毎に、２〜４週間毎に、１〜２カ月毎に、またはさらに長い間隔で行うことができる。したがって、一部の実施例では、被験体にＮＩＲを少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも１０回、または少なくとも２０回照射する。
追加的な処置
上記の通り、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を投与する前、その間、またはその後に、被験体は１つまたは複数の他の療法を受けることができる。一実施例では、被験体は、抗体−ＩＲ７００分子を投与する前に、腫瘍を除去するまたは縮小させるために１つまたは複数の処置を受ける。一実施例では、被験体は、抗体−ＩＲ７００分子の投与後に１つまたは複数の処置を受ける。一部の実施例では、１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を投与し、ＮＩＲ照射を行った後に、被験体に、例えば、サイトカイン／ケモカインの上昇に起因する副作用が生じた場合、被験体を、１つまたは複数の抗サイトカイン剤（例えば、トシリズマブなど、例えば、４〜８ｍｇ／ｋｇでのＩＶ注入として）を用いて処置する。
開示されている方法と組み合わせて使用することができるそのような療法の例としては、これだけに限定されないが、腫瘍を除去するまたは縮小させるための外科的処置（例えば、外科的切除、寒冷療法、または化学塞栓療法など）、ならびに、放射線療法剤、抗新生物化学療法剤、抗生物質、アルキル化剤および抗酸化剤、キナーゼ阻害剤、生物学的製剤（例えば、抗体）および他の薬剤を含み得る抗腫瘍医薬による処置が挙げられる。
一部の実施例では、追加的な治療剤（例えば、放射線療法剤、抗新生物化学療法剤、抗生物質、アルキル化剤、抗酸化剤、キナーゼ阻害剤、生物学的製剤（例えば、抗体、モノクローナル抗体など）または他の薬剤など）を、直径が少なくとも１ｎｍ（例えば、直径が少なくとも１０ｎｍ、直径が少なくとも３０ｎｍ、直径が少なくとも１００ｎｍ、直径が少なくとも２００ｎｍ、直径が少なくとも３００ｎｍ、直径が少なくとも５００ｎｍ、または直径が少なくとも７５０ｎｍ、例えば、直径１ｎｍ〜５００ｎｍ、１ｎｍ〜３００ｎｍ、１ｎｍ〜１００ｎｍ、１０ｎｍ〜５００ｎｍ、または１０ｎｍ〜３００ｎｍなど）のものなどのナノ粒子とコンジュゲートする（または別のやり方で付随させる）。
使用することができる追加的な治療剤の特定の例としては、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレーターまたは架橋剤、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡ転写阻害剤、抗体、酵素、酵素阻害剤、および遺伝子調節因子が挙げられる。これらの薬剤（治療有効量で投与される）および処置は、単独でまたは組み合わせて使用することができる。そのような薬剤に関する方法および治療的投与量は当業者に公知であり、熟練臨床医が決定することができる。
「微小管結合剤」とは、チューブリンと相互作用して微小管形成を安定化または不安定化し、それにより、細胞分裂を阻害する薬剤を指す。開示されている抗体−ＩＲ７００分子療法と併せて使用することができる微小管結合剤の例としては、限定することなく、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン（ナベルビン）、エポチロン、コルヒチン、ドラスタチン１５、ノコダゾール、ポドフィロトキシンおよびリゾキシンが挙げられる。そのような化合物の類似体および誘導体も使用することができ、当業者に公知である。例えば、適切なエポチロンおよびエポチロン類似体が国際公開第ＷＯ２００４／０１８４７８号に記載されている。パクリタキセルおよびドセタキセルなどのタキソイド、ならびに米国特許第６，６１０，８６０号；同第５，５３０，０２０号；および同第５，９１２，２６４号により教示されるパクリタキセルの類似体を使用することができる。
以下のクラスの化合物を本明細書に開示されている方法に使用することができる：これだけに限定することなく、アントラサイクリンファミリーメンバー（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、およびバルルビシン）およびアクチノマイシンＤを含めた、適切なＤＮＡおよび／またはＲＮＡ転写調節因子、加えて、その誘導体および類似体もまた、開示されている療法と組み合わせた使用に適している。被験体に投与することができるＤＮＡインターカレーターおよび架橋剤としては、限定することなく、白金化合物（例えば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、およびＢＢＲ３４６４）、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ブレオマイシン、クロラムブシル、シクロホスファミド、ならびにブスルファン、ダカルバジン、メクロレタミン、プロカルバジン、テモゾロミド、チオテパ、およびウラムスチンならびにその誘導体および類似体が挙げられる。治療剤として使用するために適したＤＮＡ合成阻害剤としては、限定することなく、メトトレキサート、５−フルオロ−５’−デオキシウリジン、５−フルオロウラシルおよびその類似体が挙げられる。適切な酵素阻害剤の例としては、限定することなく、カンプトテシン、エトポシド、ホルメスタン、トリコスタチンならびにその誘導体および類似体が挙げられる。遺伝子調節に影響を及ぼす適切な化合物としては、ラロキシフェン、５−アザシチジン、５−アザ−２’−デオキシシチジン、タモキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ミフェプリストンならびにその誘導体および類似体などの１つまたは複数の遺伝子の発現の増大または低減をもたらす薬剤が挙げられる。キナーゼ阻害剤としては、増殖因子のリン酸化および活性化を妨げるイマチニブ、ゲフィチニブ、およびエルロチニブ（ｅｒｏｌｉｔｉｎｉｂ）が挙げられる。
一実施例では、追加的な治療剤は、葉酸（例えば、メトトレキサート、ペメトレキセド、およびラルチトレキセド）、プリン（例えば、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、およびチオグアニン）、ピリミジン（例えば、カペシタビン）、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ならびにその誘導体および類似体である。一実施例では、追加的な治療剤は、ポドフィルム（例えば、エトポシド、およびテニポシド）などの植物アルカロイドならびにその誘導体および類似体である。一実施例では、追加的な治療剤は、細胞傷害性／抗腫瘍抗生物質、ブレオマイシン、リファンピシン、ヒドロキシウレア、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉ）などの代謝拮抗薬、ならびにその誘導体および類似体である。一実施例では、追加的な治療剤は、トポテカン、イリノテカンなどのトポイソメラーゼ阻害剤、ならびにその誘導体および類似体である。一実施例では、追加的な治療剤は、アミノレブリン酸、アミノレブリン酸メチル、ポルフィマーナトリウム、ベルテポルフィンなどの光増感剤、ならびにその誘導体および類似体である。一実施例では、追加的な治療剤は、ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブシル、クロルメチン、シクロホスファミド、イホスファミド、およびメルファラン）またはニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、フォテムスチン、ロムスチン、およびストレプトゾシン）、ならびにその誘導体および類似体である。
他の治療剤、例えば、上記の分類のうちの１つまたは複数に入り得るか入り得ない抗腫瘍剤も、開示されている療法と組み合わせた投与に適している。例として、そのような薬剤としては、アドリアマイシン、アピゲニン、ラパマイシン、ゼブラリン、シメチジン、アリトレチノイン、アルトレタミン、アムサクリン、アナグレリド、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アキシチニブ、ベキサロテン、ベバシズマブ、ボルテゾミブ、セレコキシブ、デニロイキンジフチトクス、エストラムスチン、ヒドロキシカルバミド、ラパチニブ、パゾパニブ、ペントスタチン、マソプロコール、ミトタン、ペグアスパラガーゼ、タモキシフェン、ソラフェニブ、スニチニブ、ベムラフェニブ（ｖｅｍｕｒａｆｉｎｉｂ）、バンデタニブ、トレチノイン、ならびにその誘導体および類似体が挙げられる。
他の治療剤としては、１つまたは複数の治療用抗体などの生物学的製剤を挙げることができる。そのような生物学的製剤の例としては、これだけに限定されないが、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、ならびに表２に示されているものなどのモノクローナル抗体が挙げられる。他の特定の生物学的製剤およびそれらを使用することができる対応する腫瘍を表２に示す。
一実施例では、使用することができる追加的な治療剤として、抗体が腫瘍特異的タンパク質に特異的に結合するものである他の抗体−ＩＲ７００分子、例えば、パニツムマブ−ＩＲ７００分子、トラスツズマブ−ＩＲ７００分子、バシリキシマブ−ＩＲ７００分子、Ｚｅｎａｐａｘ−ＩＲ７００分子、Ｓｉｍｉｔｅｃｔ−ＩＲ７００分子、セツキシマブ−ＩＲ７００分子またはＪ５９１−ＩＲ７００分子が挙げられる。腫瘍特異的タンパク質に特異的に結合する他の抗体−ＩＲ７００分子としては、表２に列挙されている分子のうちの１つまたは複数とコンジュゲートしたＩＲ７００が挙げられる。
一実施例では、追加的な治療剤として、抗ＣＤ１０３−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００分子が挙げられる。
開示されている方法で使用することができる化学療法および生物学的療法の特定の例としては、これだけに限定されないが、以下のうちの１つまたは複数が挙げられる：５−フルオロウラシル（例えば、Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標））、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）（塩酸イリノテカン）、カペシタビン（例えば、Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、オキサリプラチン（例えば、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）、ロイコボリンカルシウム、レゴラフェニブ、Ｓｔｉｖａｒｇａ（登録商標）（レゴラフェニブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）（パニツムマブ）、Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標）（ロイコボリンカルシウム）、およびＺａｌｔｒａｐ（登録商標）（Ｚｉｖ−アフリバーセプト）。
開示されている方法と組み合わせて使用することができる薬物の組合せの例としては、これだけに限定されないが、ＧＳＫ２２５６０９８およびトラメチニブ；ＶＳ−６０６３およびパクリタキセル；ダサチニブおよびエルロチニブ；ダサチニブおよびベバシズマブ；ならびにダサチニブおよびダカルバジンが挙げられる。
一部の実施例では、治療用抗体−ＩＲ７００分子組成物を受ける被験体に、インターロイキン−２（ＩＬ−２）も、例えば、静脈内投与によって投与する。特定の実施例では、ＩＬ−２（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）を少なくとも５００，０００ＩＵ／ｋｇの用量で静脈内ボーラスとして８時間毎に１５分間にわたって投与し、これは、ペプチドを投与した翌日に開始し、最大５日間継続する。用量は被験体の耐性に応じてスキップすることができる。
一部の実施例では、開示されている抗体−ＩＲ７００分子を細胞傷害性Ｔリンパ球抗原−４（抗ＣＴＬＡ−４）に対する完全ヒト抗体と同時投与する（またはＮＩＲのすぐ前またはすぐ後に投与する）。一部の実施例では、被験体は、少なくとも１ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４を受ける（例えば、３週間毎に３ｍｇ／ｋｇ、または初回用量として３ｍｇ／ｋｇ、その後の用量を３週間毎に１ｍｇ／ｋｇに低下させるなど）。
一実施例では、開示されている療法の投与（例えば、抗体−ＩＲ７００分子の投与など）の前に、腫瘍（例えば、転移性腫瘍など）の少なくとも一部分を外科的に除去する（例えば、寒冷療法によって）、照射を行う、化学的に処置する（例えば、化学塞栓療法によって）、またはこれらの組合せを行う。例えば、転移性腫瘍を有する被験体は、開示されている療法の投与の前に腫瘍の全部または一部が外科的に切り取られていてよい。ある実施例では、抗体−ＩＲ７００分子を用いた処置および照射の後で、１つまたは複数の化学療法剤を投与する。別の特定の実施例では、被験体は、転移性腫瘍を有し、放射線療法、化学塞栓療法、またはその両方を、開示されている療法の投与と同時に投与される。
ＮＩＲ ＬＥＤを含有する例示的なデバイス
身体に装着することまたは配置することができ、ＮＩＲ ＬＥＤの組み入れに適した任意の型の物品を使用することができる。一実施例では、デバイスは、患者が挿入されるチャンバーである。そのようなデバイスは、白血病、リンパ腫などの血液またはリンパ液中を循環しているサプレッサー細胞および／または腫瘍細胞、ならびに血液またはリンパ液中に存在する転移性細胞を死滅させるために使用することができる。
一実施例では、体内を循環しているサプレッサー細胞を長期間にわたって死滅させ、そのような場合では、デバイスは、数週間または数カ月などの長期間にわたって装着することができるものである。したがって、これらのデバイスは、日常の衣類、宝飾品および毛布などの寝具に組み入れることができるものである。これらのデバイスにより、携帯できる日用品である衣類および宝飾品を使用して患者をＮＩＲ光に曝露させることができ、したがって、処置は個人的なものにとどまり、また日常の活動に干渉しない。例えば、ＮＩＲ ＬＥＤが組み入れられたネックレスは、患者の嗜好に合わせてカスタマイズでき、ＰＩＴ療法の日中に目立たずに装着するものであってよい（例えば、頸動脈および他の頸部の脈管構造を通過するサプレッサー細胞を死滅させることによる）。同様の「日常」性の多数のデバイス（毛布、ブレスレット、ネックレス、肌着、靴下、靴の中敷きなど）を処置期間にわたって同じ患者に装着させることができる。例えば、睡眠中、患者はＮＩＲ毛布を使用することができる。デバイスは、電池などの電源装置、および毛布などのデバイスの過熱を防ぐための冷却要素も含んでよい。
一実施例では、デバイスは、指輪、時計、ブレスレット、またはネックレスなどの宝飾品である。別の実施例では、物品は、例えば、シャツ、ベルト、ズボン、肌着、靴下、コート、靴の中敷き、スカーフ、帽子、リストガード（ｗｒｉｓｔ ｇｕａｒｄ）、手袋などの衣料品または装身具である。別の実施例では、デバイスは、毛布またはタオルなどの身体を覆うことができる物である。別の実施例では、デバイスは、皮膚が直接曝露する全身光チャンバーである（そのようなデバイスは、電源装置および／または冷却供給要素も含んでよい）。
１つまたは複数のＮＩＲ ＬＥＤ（例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、または少なくとも５０のＮＩＲ ＬＥＤなど）が組み入れられたデバイスを装着することにより、血液またはリンパ液中に存在する死滅させるべきサプレッサー細胞がＮＩＲ ＬＥＤ（例えば、６６０〜７４０ｎｍ、例えば６７０〜７００ｎｍまたは６８０〜７２０ｎｍなどを放出するＮＩＲ ＬＥＤ）により生成された光に曝露する。ＮＩＲ ＬＥＤから放出された光は、皮膚および血管（例えば、頸動脈または皮膚の微小血管系など）を透過し、したがって、光による、標的細胞に結合した抗体−ＩＲ７００分子の活性化が可能になり、したがって、抗体−ＩＲ７００分子が結合した細胞が死滅する。ＮＩＲ ＬＥＤは、皮膚または血管もしくはリンパ系が確実に標的となるようにデバイス中に配置することができる。
本明細書で提供される方法において使用することができるＮＩＲ ＬＥＤデバイスは市販されている。製造者の１つ、Ｍａｒｕｂｅｎｉ Ａｍｅｒｉｃａからの適用可能な製品を以下に列挙する。第１の産物、成形ＬＥＤは、低出力であるが、より長い曝露時間にわたって使用することができる。他の選択肢は、高出力であり、したがって、追加的な冷却を提供することが有益であり得る。２５ｍｍ×１８ｍｍの金属ケースにパッケージングされた最後の１つを除いて、他のものは、ブレスレット、ネックレス、肌着、靴下、手袋、帽子および他の装着品などの装着型デバイスに適用可能である。全てが毛布、手持ち型デバイスまたはチャンバーに使用可能である。
例えば、Ｍａｒｕｂｅｎｉ Ａｍｅｒｉｃａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ｔｅｃｈ−ｌｅｄ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｓｈｔｍｌ）から、以下の、照射パターンを設定するためのレンズオプションを伴うＮＩＲ ＬＥＤが提供される：成形ＬＥＤ（ｗｗｗ．ｔｅｃｈ−ｌｅｄ．ｃｏｍ／ｄａｔａ／Ｌ６８０−ＡＵ．ｐｄｆ）、直径５ｍｍ、総照射出力４ｍＷ、計算出力密度５ｍＷ ｃｍ−２および電源条件１．８Ｖ、２０ｍＡ；Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｏｕｎｔ ＬＥＤ、３．５ｍｍ×２．７ｍｍ、総照射出力３ｍＷ、計算出力密度３２ｍＷ ｃｍ−２、および電源条件１．９Ｖ、５０ｍＡ；Ｓｕｐｅｒ Ｂｅａｍ（ｔｅｃｈ−ｌｅｄ．ｃｏｍ／Ｓｕｐｅｒｂｅａｍ＿ＬＥＤｓ．ｓｈｔｍｌ）、７．６ｍｍ×７．６ｍｍ、総照射出力２０〜５２ｍＷ、計算出力密度３４〜９０ｍＷ ｃｍ−２、および電源条件１．６５Ｖ、１００ｍＡ；高出力Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｏｕｎｔ（ｔｅｃｈ−ｌｅｄ．ｃｏｍ／ＳＭＢ＿ＢＬ＿ＬＥＤｓ．ｓｈｔｍｌ）、５ｍｍ×５ｍｍまたは直径７ｍｍ、総照射出力９０ｍＷ、計算出力密度３６０ｍＷ ｃｍ−２および電源条件２．４Ｖ、５００ｍＡ；ならびに高出力Ｉｌｌｕｍｉｎａｔｏｒｓ（ｔｅｃｈ−ｌｅｄ．ｃｏｍ／Ｈｉｇｈ＿Ｐｏｗｅｒ＿Ｉｌｌｕｍｉｎａｔｏｒｓ．ｓｈｔｍｌ）、２５ｍｍ×１８ｍｍ、総照射出力１５０ｍＷ、計算出力密度３３ｍＷ ｃｍ−２および電源条件１０Ｖ、１２０ｍＡ。あるいは、６９０ｎｍの光を同様の出力、短い強力な断続的パルスで放出するデバイスを作製することができる。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける実験の間、出力密度２．２ｍＷ ｃｍ−２（または２．２ｍＪ ｓ−１ｃｍ−２）のＮＩＲ光により、細胞死が誘導された。組織に対する減衰係数を４ｃｍ−１と仮定すると、光の強度は５．８ｍｍでは１０％、１２ｍｍでは１％に低減する。これにより、ｉｎ ｖｉｖｏで適用するためには、出力密度が１０〜１００倍大きい必要があり得る。すなわち、ＮＩＲ ＬＥＤデバイスから放出される光の線量は、一部の実施例では、少なくとも２０ｍＷ ｃｍ−２、例えば、少なくとも５０ｍＷ ｃｍ−２、少なくとも１００ｍＷ ｃｍ−２、少なくとも１５０ｍＷ ｃｍ−２、少なくとも２００ｍＷ ｃｍ−２または、少なくとも３００ｍＷ ｃｍ−２などである。より大きな領域を網羅するために複数のＮＩＲ ＬＥＤを２次元アレイに配置することができる。一実施例では、レーザーをＬＥＤの代わりにＮＩＲ光源として使用する。
ＮＩＲ ＬＥＤには電源装置（直接または間接的にデバイスの一部であってよい）を使用することによって電力供給することができる。電源装置要件はデバイス内のＬＥＤの数に依存する。例えば、１つまたは複数の電池を使用してＮＩＲ ＬＥＤに電力供給することができる。一部のＬＥＤに関しては、４つのＡＡ電池により３つのＬＥＤに直列に電源供給することができる。アルカリＡＡ電池は最大３０００ｍＡｈが定格とされており、したがって、この構成では、２０ｍＡ、５０ｍＡおよび１００ｍＡで最大１５０時間、６０時間、および３０時間にわたって出力がもたらされる。
一部の実施例では、デバイスは、冷却デバイス（直接または間接的にデバイスの一部であってよい）をさらに含む。例えば、受動的または能動的な冷却のためにヒートシンクを使用することができる。別の代替物は、熱電気（ペルチェ）である。これにより、追加的な出力が引き出されるが、これは、電源条件にプラグインＡＣアダプターが必要とされる適用において使用することができる。
開示されている方法で使用することができる別の型のデバイスは、ＮＩＲ ＬＥＤを備えた閃光様デバイスである。そのようなデバイスは、外科手術中の病変の限局的療法のために使用することもでき、ＰＩＴ剤の投与後にＮＩＲ光を体表に適用するために内視鏡に組み入れることもできる。そのようなデバイスは、医師または適格の医療関係者が、身体上の特定の標的に対して処置を誘導するために使用することができる。
装着型ＮＩＲ ＬＥＤを使用した処置
本明細書に記載の通り、開示されている方法は、サプレッサー細胞に対して高度に特異的である。一部の実施例では、ＮＩＲ ＬＥＤを組み入れたデバイスを装着した患者の体内を循環しているサプレッサー細胞を死滅させることができる。一部の実施例では、患者は、少なくとも２つのデバイス、例えば、日中に衣料品または宝飾品を使用し、夜に毛布を使用する。一部の実施例では、患者は、少なくとも２つのデバイスを同時に、例えば、２つの衣料品を使用する。これらのデバイスにより、携帯できる日用品である衣類および宝飾品を使用して患者をＮＩＲ光に曝露させることが可能になり、したがって、処置は個人的なものにとどまり、また日常の活動に干渉しない。一部の実施例では、デバイスは、ＰＩＴ療法の日中に目立たずに装着するものであってよい。
一実施例では、本明細書に記載の方法を使用して患者に１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を投与する。次いで、患者にＮＩＲ ＬＥＤを組み入れたデバイスを装着させ、それにより、血液またはリンパ液中に存在するサプレッサー細胞の処置（例えば、死滅）を可能にする。一部の実施例では、照射の線量は、少なくとも少なくとも１Ｊ ｃｍ−２、少なくとも１０Ｊ ｃｍ−２、少なくとも２０Ｊ ｃｍ−２、または少なくとも３０Ｊ ｃｍ−２、例えば、２０Ｊ ｃｍ−２または３０Ｊ／ｃｍ２などである。一部の実施例では、治療レベルが体内に存在することを確実にするために、抗体−ＩＲ７００分子の投与をある期間にわたって反復する（例えば、２週間に１回または毎月など）。
一部の実施例では、患者は、デバイス、またはデバイスの組合せを少なくとも１週間、例えば、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも４カ月、少なくとも６カ月、またはさらには少なくとも１年などにわたって装着または使用する。一部の実施例では、患者は、デバイス、またはデバイスの組合せを１日に少なくとも１時間、１日に少なくとも２時間、４時間、例えば、１日に少なくとも１２時間、１日に少なくとも１６時間、１日に少なくとも１８時間、または１日に２４時間など、例えば、１日当たり１〜２時間、１日当たり１〜４時間、または１日当たり３０分〜６時間などで装着または使用する。同様の「日常」性の多数のデバイス（毛布、ブレスレット、ネックレス、肌着、靴下、靴の中敷き）を処置期間にわたって同じ患者に装着させることができる。夜には、患者はＮＩＲ ＬＥＤ毛布または他の被覆物を使用することができる。
抗体−ＩＲ７００分子
開示されている方法で使用することができる抗体−ＩＲ７００分子であって、抗体が、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合する、一部の実施例では機能的Ｆｃ領域を含まないものである、抗体−ＩＲ７００分子も提供される。一部の実施例では、抗体は、１つまたは複数のＦ（ａｂ’）２断片であるまたはそれからなる。一部の実施例では、抗体は、１つまたは複数のＦａｂ断片であるまたはそれからなる。一部の実施例では、抗体対ＩＲ７００の比は、約１：３である。一部の実施例では、抗体は、モノクローナル抗体またはその一部分（例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片またはＦａｂ断片）、例えば、ヒト化モノクローナル抗体またはその一部分（例えば、１つまたは複数のＦ（ａｂ’）２断片またはＦａｂ断片）などである。
一実施例では、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合する抗体は、ＣＤ４、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン−１デコイ受容体、ＣＤ１０３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、またはＣＤ６６ｂに対して特異的である。一実施例では、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合する抗体は、ＣＤ２５に対して特異的であり、抗体は、機能的Ｆｃ領域を含まない。サプレッサー細胞表面タンパク質配列は公的に入手可能であるので（例えば上記の通り）、当業者は、そのようなタンパク質に特異的な抗体（またはＩＲ７００とコンジュゲートすることができる他の小分子）を作製または購入することができる。例えば、サプレッサー細胞表面タンパク質ＣＤ２５を標的として選択する場合、ＣＤ２５に特異的な抗体（例えば、ダクリズマブまたはバシリキシマブなど）を購入または生成し、ＩＲ７００色素に付着させることができる（例えば、下の実施例１を参照されたい）。一部の実施例では、そのような抗体を、免疫グロブリンのＦｃ領域が除去または不活化されるようにさらに改変される。
一実施例では、抗体−ＩＲ７００分子は、ダクリズマブまたはバシリキシマブ、例えば、機能的Ｆｃ領域を有さないダクリズマブまたはバシリキシマブを含むものなどの、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００分子である。
したがって、本開示は、抗体−ＩＲ７００分子、そのような分子を含む組成物、およびそのような分子を含むキットも提供する。一実施例では、キットは、ＣＤ２５（例えば、機能的Ｆｃ領域を有さないものなどのバシリキシマブ−ＩＲ７００またはダクリズマブ−ＩＲ７００など）、ＣＤ４、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン−１デコイ受容体、ＣＤ１０３、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、またはＣＤ６６ｂに特異的な１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子、および１つまたは複数の追加的な抗がん療法、例えば、化学療法剤または生物学的製剤など、またはこれらの組合せを含む。そのようなキットの一部分とすることができる例示的な抗がん療法は上に提示されている。
（実施例１）
材料および方法
試薬
水溶性ケイ素−フタロシアニン誘導体ＩＲＤｙｅ ７００ＤＸ ＮＨＳエステルは、ＬＩ−ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ）から入手した。抗マウスＣＤ２５抗体（ＰＣ−６１．５．３）およびラット−ＩｇＧ１（ＨＲＰＮ）はＢｉｏＸＣｅｌｌ（Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）から入手した。他の化学物質は全て試薬グレードのものであった。
細胞培養
ルシフェラーゼを発現するＭＣ３８（マウス結腸がん）、ＬＬ／２（ルイス肺癌）、およびＴＲＡＭＰ−Ｃ２（前立腺がん）マウス細胞株（それぞれＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ．ＭＣ３８−ｌｕｃ、ＬＬ／２−ｌｕｃ、およびＴＲＡＭＰ−Ｃ２−ｌｕｃ）を、ＲｅｄｉＦｅｃｔ Ｒｅｄ−ＦＬｕｃレンチウイルス粒子（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を形質導入することによって樹立した。１０回の継代で高ルシフェラーゼ発現が確認された。ＩＬ−２依存性ＣＤ２５発現マウスＴリンパ球ＨＴ−２クローンＡ５Ｅ細胞（ＨＴ−２−Ａ５Ｅ）はＡＴＣＣから入手した。細胞を、１０％ウシ胎仔血清および１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン／１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を補充したＲＰＭＩ １６４０培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）で培養した。ＨＴ−２−Ａ５Ｅ細胞培養については、０．０５ｍＭの２−メルカプトエタノールおよび０．１ｎＭのヒトＩＬ−２（Ｒｏｃｈｅ、Ｎｕｔｌｅｙ、ＮＪ）も添加した。
抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２および対照−Ｆ（ａｂ’）２の調製
抗マウスＣＤ２５抗体のＦ（ａｂ’）２断片（ＰＣ−６１．５．３、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２）および対照としてラット−ＩｇＧ１のＦ（ａｂ’）２断片（対照−Ｆ（ａｂ’）２）を、全抗体を、４ｍＭのシステインおよび５ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ｐＨ６．０）を伴う１０ｍＭのクエン酸緩衝液中固定化フィシン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を使用して３７℃で２６時間にわたって消化することによって生成した。消化後、Ｆ（ａｂ’）２を、Ｇ２０００ＳＷｘＬカラムおよび溶離液としてリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（流量：毎分０．５ｍｌ）を用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて精製した。
ＩＲ７００と抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２または対照−Ｆ（ａｂ’）２のコンジュゲーション
抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２または対照−Ｆ（ａｂ’）２（９．１ｎｍｏｌ）をＩＲ７００ ＮＨＳエステル（４５．５ｎｍｏｌ、ＬＩ−ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と一緒に０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４（ｐＨ８．６）０．３ｍｌ中、室温で１時間インキュベートした。混合物を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラム（ＰＤ−１０；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて精製した。タンパク質濃度を、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｐｌｕｓタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を使用し、８４５３ Ｖａｌｕｅ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を使用して５９５ｎｍにおける吸収を測定することによって決定した。ＩＲ７００の濃度を、６８９ｎｍにおける吸収を測定することによって決定し、各Ｆ（ａｂ’）２分子にコンジュゲートしたフルオロフォア分子の数を算出した。平均で３つのＩＲ７００分子が単一のＦ（ａｂ’）２と結合するようにコンジュゲーションを実施した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して、ＩＲ７００とコンジュゲートしたＦ（ａｂ’）２の完全性を確認し、生物活性をＨＴ−２−Ａ５Ｅ細胞へのその結合を検査することによって確認した。細胞（１×１０５）を、培地中、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００（１０μｇ／ｍＬ）と一緒に３７℃で１〜６時間インキュベートした。結合の特異性を検証するために、無処理の抗ＣＤ２５抗体（５０μｇ）を過剰に添加することによって競合アッセイを実施した。細胞をフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）により、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
蛍光顕微鏡
抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を、１０，０００個のＨＴ−２−Ａ５Ｅ細胞と一緒に、１０μｇ／ｍＬで６時間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、２μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で３０分にわたって添加した。次いで、細胞を近赤外（ＮＩＲ）光（４Ｊ／ｃｍ２）に曝露し、ＩＲ７００蛍光に対するフィルターセット（５９０〜６５０ｎｍ励起フィルター；６６５〜７４０ｎｍバンドパス放出フィルター）を備えた蛍光顕微鏡（ＩＸ６１；Ｏｌｙｍｐｕｓ Ａｍｅｒｉｃａ、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ）を使用して連続的な画像を得た。画像を、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して解析した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＮＩＲ−ＰＩＴ
ＨＴ−２−Ａ５Ｅ細胞１００，０００個を、２４ウェルプレートに播種し、１０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００と一緒に３７℃で６時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄した後、フェノールレッドを伴わない培養培地を添加した。次いで、細胞に、６７０〜７１０ｎｍの波長で光を放出するＮＩＲ ＬＥＤ（Ｌ６９０−６６−６０；Ｍａｒｕｂｅｎｉ Ａｍｅｒｉｃａ Ｃｏ．、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を照射した。実際の出力密度（ｍＷ／ｃｍ２）を、光パワーメーター（ＰＭ１００、Ｔｈｏｒｌａｂｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、ＮＪ）を用いて測定した。ＰＩＴの細胞傷害効果を決定するために、照射の１時間後にＰＩを細胞懸濁物に添加し（最終的に２μｇ／ｍＬ）、室温で３０分インキュベートし、次いで、ＰＩ染色された（死）細胞をフローサイトメトリーによって分析した。
動物および腫瘍モデル
１１〜１５週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスまたはインターフェロンガンマ欠損（ＩＦＮγ−ＫＯ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）に、６百万個のＭＣ３８−ｌｕｃ細胞、ＬＬ／２−ｌｕｃ細胞、または８百万個のＴＲＡＭＰ−Ｃ２−ｌｕｃ細胞を右側／左側背部に接種した。およそ１５０ｍｍ３（直径６〜７ｍｍ）の腫瘍を有するマウスを実験に使用した（接種の約５〜７日後）。マウスの腫瘍部位を照射および画像解析のために剃毛した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスは剃毛後４日以内に皮膚色素沈着し始め、ルシフェラーゼ活性を検出するための実験には適切でないので、Ｃ５７ＢＬ／６アルビノマウスを反復局所的ＮＩＲ−ＰＩＴに使用した。マウスを毎日モニタリングし、腫瘍体積を１週間に３回、腫瘍（マウスが多数の腫瘍を有する場合には任意の腫瘍）の直径が２ｃｍに達するまで測定した。そこでマウスを二酸化炭素で安楽死させた。
ｉｎ ｖｉｖｏ ＩＲ７００−蛍光イメージング
療法の前後のＩＲ７００−蛍光画像を、蛍光イメージャー（Ｐｅａｒｌ Ｉｍａｇｅｒ、ＬＩ−ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて順次取得した。
ｉｎ ｖｉｖｏ局所ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ
腫瘍接種後、１つの腫瘍を有するマウスについては６日目、または多数の腫瘍を有するマウスについては７日目に、腫瘍への局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを実施した。マウスに、１００μｇの抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００または対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を注射し、翌日、ＮＩＲ光を、別段の指定がない限り右側の腫瘍に１００Ｊ／ｃｍ２で照射した。
腫瘍浸潤性および脾臓、肺リンパ球の分析
抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２投与のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞に対する全身的な影響を決定するために、１００μｇの抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２または抗ＣＤ２５−ＩｇＧをマウスに静脈内注射し、１日後に脾細胞をＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞について分析した。抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００ ＮＩＲ−ＰＩＴの種々のリンパ球に対する影響を決定するために、ＮＩＲ−ＰＩＴ後の示されている時間に腫瘍および脾臓を回収した。局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの潜在的な副作用を調査するために、療法の１日後に肺を回収した。切り出した組織を、７０μｍのフィルターを通過させ、その後、フィコール遠心分離することにより、単一細胞懸濁物を調製した。
細胞を、ＣＤ３ｅに対する抗体（１４５−２Ｃ１１）、ＣＤ８ａに対する抗体（５３−６．７）、ＣＤ４に対する抗体（ＲＭ４−５）、ＣＤ２５に対する抗体（３Ｃ７）、ＮＫ１．１に対する抗体（ＰＫ１３６）、ＣＤ１９に対する抗体（１Ｄ３）、ＣＤ１１ｃに対する抗体（Ｎ４１８）、ＣＤ１１ｂに対する抗体（Ｍ１／７０）、Ｌｙ−６Ｃに対する抗体（ＨＫ１．４）、Ｌｙ−６Ｇに対する抗体（１Ａ８−Ｌｙ６ｇ）、ＣＤ８６に対する抗体（ＧＬ１）、ＣＤ４０に対する抗体（３／２３）、およびＨ−２Ｋｂに対する抗体（ＡＦ６−８８．５）を用いて染色した。Ｆｏｘｐ３および細胞内サイトカイン染色を、Ｆｏｘｐ３／転写因子固定／透過処理濃縮物および希釈剤（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｃｓ）、ならびにＦｏｘｐ３に対する抗体（ＦＪＫ−１６ｓ）、ＩＦＮγに対する抗体（ＸＭＧ１．２）およびＩＬ−２に対する抗体（ＪＥＳ６−５Ｈ４）を使用し、製造者の指示に従って実施した。抗体は全てＡｆｆｙｍｅｔｒｉｃｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から入手した。染色された細胞をフローサイトメーターに適用し、データを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を用いて解析した。
血清、組織、および腫瘍内サイトカイン分析
腫瘍接種および処置を記載の通り実施した。ＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍への局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの前、ならびに１．５時間後および１日後にマウスから血清を順次採取した。腫瘍を回収し、切り出した組織をＣｏｍｐｌｅｔｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｒｏｃｈｅ）を伴うＰＢＳ中、７０μｍのフィルターを通過させることによって単一細胞懸濁物を調製した。次に、これらを５０００ｒｐｍで１５分遠心分離し、上清を採取し、０．２μｍで濾過した。肺または腸を回収し、試料を同様に調製した。全ての試料のタンパク質濃度を、ＢＣＡアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を使用して正規化し、種々のサイトカインおよびケモカインの濃度を、ＥＶＥ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｌｇａｒｙ、ＡＢ、Ｃａｎａｄａ）によるＭｏｕｓｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ａｒｒａｙ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ａｒｒａｙを用いて分析した。
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＮＫ細胞およびＣＤ８ Ｔ細胞の免疫枯渇ならびにＩＦＮγの中和
抗ＮＫ１．１（ＰＫ１３６）または抗ＣＤ８ａ（２．４３）枯渇抗体、または抗ＩＦＮγ（ＸＭＧ１．２）中和抗体を、ＰＩＴの２日前から開始して２日毎に、それぞれ２５μｇ、５０μｇ、１００μｇの用量で、マウスを安楽死させるまで腹腔内注射した（レジメン参照、図２３Ａ）。抗体は全てＢｉｏＸＣｅｌｌから入手した。
統計学
データは、別段の指定のない限り、最低４つの実験からの平均±ｓ．ｅ．ｍ．として表されている。統計プログラム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ；ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて統計解析を実施した。２つの群の比較にはマン・ホイットニー検定または対応のないｔ検定を利用した。多数の群の比較には一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）とチューキー検定またはダネット検定を使用した。各群における、本明細書では直径が２ｃｍに到達できない腫瘍として決定される生存の累積確率を、カプラン・マイヤー生存曲線分析として推定し、結果をログランク検定およびウィルコクソンの検定を用いて比較した。Ｐ＜０．０５を、統計的有意差を示すとみなした。
（実施例２）
抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００の調製
抗マウスＣＤ２５抗体のＦ（ａｂ’）２断片（抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２）または対照としてラット−ＩｇＧ１のＦ（ａｂ’）２断片を図１に示されている通り生成した。得られたＦ（ａｂ’）２断片はＦｃ部分を有さず、したがって、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて有意なＡＤＣＣ応答を生じない。
得られた抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２抗体断片を実施例１に記載の通りＩＲ７００とコンジュゲートした。得られた、単一のＦ（ａｂ’）２当たり約３つのＩＲ７００分子を有するコンジュゲート（抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００）を下記の実験に使用した。
（実施例３）
抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける特徴付け
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＦｃ媒介性抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を回避するために、抗ＣＤ２５抗体からＦ（ａｂ’）２（抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２）を、そして対照ＩｇＧ抗体からＦ（ａｂ’）２（対照−Ｆ（ａｂ’）２）を生成した。両方のＦ（ａｂ’）２を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて９０％超の純度（約９７％）に精製し、ＩＲ７００色素とコンジュゲートした（それぞれ抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００および対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００）（図２Ａおよび２Ｂ）。抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００では、マウスＴリンパ球ＨＴ−２クローンＡ５Ｅ（ＨＴ−２−Ａ５Ｅ）細胞上に発現するＣＤ２５への特異的な結合が示された（図２Ｃ）。これらの結果から、消化、精製およびコンジュゲーションの間、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２の生物活性および特異性が維持されることが示された。
全身性ＡＤＣＣまたはＣＤＣ効果が存在しないことを、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２（１００μｇ）をマウスに投与し、１日後に脾臓のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを分析することによって確認した。インタクトな抗ＣＤ２５−ＩｇＧの投与により、ＣＤ４ Ｔ細胞の中でＴｒｅｇの頻度が低減するが、Ｆｃ欠損抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２の投与により、Ｔｒｅｇは有意には枯渇しなかった（図３Ａ）。ＨＴ−２−Ａ５Ｅ細胞に対する抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ ＮＩＲ−ＰＩＴにより、細胞腫脹およびブレブ形成が誘導され（図３Ｂ）、それにより、壊死性細胞死が光線量依存的に導かれた（図３Ｃおよび４Ａ〜４Ｂ）。ＮＩＲ光単独、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００インキュベーション単独またはＮＩＲ光と対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００のインキュベーション（図３Ｃ）に関連する有意な細胞傷害性は観察されなかった。
したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００化合物により、ＣＤ２５発現細胞の壊死性細胞死が有効に誘導された。
（実施例４）
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇは腫瘍において豊富である
Ｔｒｅｇは、種々のがんにおいて豊富である（ＣｏｌｏｍｂｏおよびＰｉｃｏｎｅｓｅ、Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｃａｎｃｅｒ、７巻：８８０〜８８７頁、２００７年）。ＣＤ４ Ｔ細胞におけるＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ画分のフローサイトメトリー分析により、ＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍（ルイス肺がん）およびＭＣ３８−ｌｕｃ腫瘍（結腸がん）内でこの細胞集団が正常な脾臓と比較して増大していることが示された（図５Ａ）。ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞も、活性化前にはＣＤ２５陰性であった腫瘍内に行きわたっていた（図６）。抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００は腫瘍細胞に結合しなかった（図７）。これらのデータから、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇが腫瘍内で一般的なものであり、したがって、抗ＣＤ２５−ＩＲ７００ ＮＩＲ−ＰＩＴの標的になることが示される。
（実施例５）
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを標的とするｉｎ ｖｉｖｏ ＮＩＲ−ＰＩＴにより、処置された腫瘍の退縮が誘導される
ｉｎ ｖｉｖｏ局所的ＮＩＲ−ＰＩＴの効果を、ＬＬ／２−ｌｕｃ側腹部腫瘍における腫瘍内Ｔｒｅｇに対する抗ＣＤ２５−ＩＲ７００（ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ）を用いて決定した（図５Ｂ）。ＮＩＲ光線量漸増試験により、１００Ｊ／ｃｍ２の光出力で３０分以内にＣＤ４ Ｔ細胞におけるＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの８５％超の枯渇が起こることが示された（図８）。この光線量を用いて、腫瘍におけるＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋細胞数の低減が観察され（図９）、これにより、この観察がＴｒｅｇにおけるＣＤ２５発現の単なる下方制御ではなく、細胞の実際の枯渇であることが示される。したがって、この光線量をｉｎ ｖｉｖｏにおける処置に選択した。この光線量は、非熱的であり、皮膚または腫瘍が曝露した際に局所的に過剰な加熱を引き起こすものではないと考えられる。
ＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍を有するマウスの実験群に抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００を注射し、その後、ＮＩＲ光に曝露させた（「ＰＩＴ」群）。この群では、１日目における生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって示される通り、３つの対照群：処置されていないマウス、対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００とＮＩＲ光を受けたマウス、および抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００のみを受け、光は受けていないマウスと比較して、腫瘍のルシフェラーゼ活性の低下が示された（図５Ｃおよび５Ｄ）。ルシフェラーゼ活性の定量的分析により、ＰＩＴ群ではＲＬＵ（相対的光単位）が処置後の２日間で有意に低減するが（＊ｐ＜０．０５）、他の群のＲＬＵは腫瘍が成長するにしたがって徐々に増加することが示された（図５Ｄ）。ＢＬＩデータと一致して、ＰＩＴ群では腫瘍の成長も抑制され（図５Ｅ）、それにより、対照群と比較してマウスの有意に長い生存が導かれた（＊ｐ＜０．０００１）（図５Ｆ）。マウスの体重（ＢＷ変化）には、腫瘍接種の１４日後に至るまで、群の間で有意差は示されなかった（図５Ｇ）。処置の０．５時間後における腫瘍浸潤リンパ球および脾臓リンパ球の分析により、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの枯渇が腫瘍に限られ、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞には有意な影響がなかったことが確認された（図５Ｈおよび５Ｉ）。ＭＣ３８−ｌｕｃ側腹部腫瘍を局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴで処置した場合に同様の所見が観察された（図１０Ａ〜１０Ｈ）。さらに、ＴＲＡＭＰ−Ｃ２−ｌｕｃ前立腺がんモデルにおいて腫瘍浸潤Ｔｒｅｇの増大が観察され、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、このモデルにおける抗腫瘍効果が首尾よく誘導された（図１１Ａ〜１１Ｄ）。これらのデータから、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを標的とするＮＩＲ−ＰＩＴにより、これらの細胞が局所的かつ特異的に枯渇し、その後、がんの種類と関係なく、腫瘍の低減および長期生存がもたらされることが実証される。
腫瘍内Ｔｒｅｇの枯渇は、およそ４日間持続し、その後、Ｔｒｅｇが徐々に再増殖し、療法のおよそ６日後に処置前レベルに達した（図１２Ａ）。漸進的な腫瘍の再成長も観察された（図５Ｅ）。ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを用いた反復処置により、持続的な腫瘍抑制および生存が誘導された（図１２Ｂ〜１２Ｆ）。
（実施例６）
腫瘍に対するｉｎ ｖｉｖｏ局所ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の迅速な活性化ならびに抗原提示細胞の活性化が誘導される
局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを用いた腫瘍浸潤Ｔｒｅｇの特異的な枯渇によってどのように腫瘍退縮が導かれるかを解明するために、腫瘍内ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞がＮＩＲ−ＰＩＴ後に活性化されるかどうかを決定した。
早ければ処置の１．５時間後に、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞がインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）およびインターロイキン−２（ＩＬ−２）を産生し始め、またＣＤ１０７ａが露出し始め、これにより、腫瘍細胞の活性化および死滅が示される（図１３Ａ）。処置の１日後に、これらのエフェクター細胞においてＣＤ６９およびＣＤ２５の上方制御ならびにＩＬ−２の産生が観察された（図１３Ｂ）。しかし、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、ＮＩＲ−ＰＩＴ前にＣＤ２５陰性であり、ＮＩＲ処置後にのみＣＤ２５を発現し始めたエフェクター細胞は枯渇しなかった（図５Ｉおよび１３Ｂ）。したがって、ＮＩＲ−ＰＩＴによるＴｒｅｇ枯渇により、腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の迅速な活性化が導かれ、その結果、腫瘍退縮がもたらされた。反復ＮＩＲ−ＰＩＴレジメンでの局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの前後のＣＤ２５発現レベルの比較により、各ＰＩＴ処置後のＣＤ２５の上方制御が示された（図１４Ａ〜１４Ｃ）。ＣＤ２５は、第１のＰＩＴから４日間の間隔を空けた後に第２のＰＩＴを実施した時にはすでに処置前レベルまで下方制御されていた。
腫瘍内の抗原提示細胞（ＡＰＣ）がＴｒｅｇに対するＰＩＴの際に活性化されるかどうかを決定した。腫瘍において見いだされる樹状細胞（ＤＣ）によるＭＨＣ Ｉ分子の発現は比較的高かったが、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、さらなる上方制御が誘導された（図１５Ａ）。この上方制御には、ＣＤ８６およびＣＤ４０などの共刺激分子の上方制御が伴った（図１５Ａ）。この活性化は、死Ｔｒｅｇの成分への曝露、およびまた、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞により死滅した腫瘍細胞の成分への曝露によって引き起こされる可能性がある。Ｂ細胞、単球およびマクロファージなどの他のＡＰＣでもＣＤ６９の上方制御が示され、これにより、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後にそれらのＡＰＣが活性化されることが示される（図１５Ｂ〜１５Ｄ）。これらの所見から、Ｔｒｅｇ標的化ＰＩＴ後に、エフェクター細胞によって腫瘍細胞が死滅し、これにはＡＰＣ媒介性「多抗原ワクチン効果」が関与することが示される。療法後に、処置された腫瘍内の顆粒球の増大も検出された（図１６）。
（実施例７）
局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、全身性および腫瘍内サイトカインストームが誘導される
局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴによって誘導される血清サイトカインおよびケモカインレベルならびに腫瘍内サイトカインおよびケモカインレベルの両方の変化を調査した。まず、腫瘍に対するＮＩＲ光照射の影響がごくわずかであることを確認した（図１７Ａおよび１７Ｂ）。療法の１．５時間後に、血清中および腫瘍中の広範囲のサイトカインおよびケモカインが増大した（図１８Ａおよび１８Ｂ）。ＮＩＲ−ＰＩＴ後に上昇したサイトカインおよびケモカインは、臨床的な「サイトカインストーム」で報告されたものと広範に重複した（３４、３５）。療法の１日後、サイトカインおよびケモカインのレベルは、Ｇ−ＣＳＦ以外は突然低減した（図１８Ｃおよび１８Ｄ）。血清中および腫瘍中のＩＦＮγ、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦの濃度の変化が示されている（図１８Ｅ〜１８Ｊ）。
これらのデータから、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、迅速であるが一過性の、血清中へのサイトカインおよびケモカインの放出が示され、これは、処置の１日後までに弱まった。局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを受けているマウスの肺内のリンパ球では、処置の１日後にはＩＦＮγ産生の徴候は示されず（図１９）、また、ＩＦＮγ濃度は処置の１日後には肺および腸のどちらにおいても検出可能なレベルを下回った。
（実施例８）
ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの治療効果は、腫瘍特異的様式で、遠位の処置されていない腫瘍まで及ぶ
迅速な抗腫瘍免疫活性化およびＰＩＴで処置された腫瘍の退縮により、活性化された細胞傷害性エフェクター細胞が、ＮＩＲ−ＰＩＴで処置された病変から遠位に位置する他の腫瘍を攻撃させることができるかどうかを決定した。両側ＬＬ／２−ｌｕｃ側腹部腫瘍を有するマウスの左側の腫瘍は光から遮蔽して、右側の腫瘍にのみ局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを実施した（図２０Ａおよび２０Ｂ）。この遮蔽はＮＩＲ−ＰＩＴ前に蛍光画像で確認し、ＩＲ７００−蛍光が両方の腫瘍に存在したが、ＰＩＴで処置された側の蛍光は照射の直後に退色に起因して低減したことが実証された（図２１）。処置されていない左側では、対側のＮＩＲ−ＰＩＴ後にＩＲ７００−蛍光が維持された。しかし、腫瘍生物発光は右側（ＰＩＴで処置された側）の腫瘍およびＮＩＲ光を受けていない左側の腫瘍のどちらにおいても有意に低減した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０５）。この処置されていない腫瘍は、ＰＩＴで処置された腫瘍と比較して類似した緩徐化成長曲線に従った（図２０Ｃ〜２０Ｅ）。
マウスの生存は、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ群において対照群と比較して有意に延長された（＊ｐ＜０．０００１）（図２０Ｆ）。ＢＷ測定から、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴで処置されたマウスの体重が処置の１〜３日後に増加したことが示され（図２０Ｇ）、これは、両側腹部の浮腫に起因する可能性が高く（図２０Ｈ）、これは、およそ４日目に消散した（図２０Ｇ）。腫瘍浸潤性ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ＴｒｅｇはＮＩＲ−ＰＩＴで処置された腫瘍においてのみ低減した（図２０Ｉ）。多数の転移を模倣する動物モデルでは、１つの腫瘍を対象とする局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴにより、同じ細胞型の遠位の処置されていない腫瘍に対する抗腫瘍効果が誘導された。これらの部位においても浮腫が示された（図２０Ｊおよび２２）。さらに、ＰＩＴで処置された腫瘍の対側に接種した腫瘍はＮＩＲ−ＰＩＴの１日後にＮＩＲ光照射を伴う対照−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００投与と比較して阻害された（図２３Ａおよび２３Ｂ）。マウスに対して、異なる細胞型（ＭＣ３８−ｌｕｃ）の腫瘍を左側腹部に接種し、ＮＩＲ−ＰＩＴを、右側のＬＬ／２−ｌｕｃ腫瘍に向けた場合、ＭＣ３８−ｌｕｃ腫瘍の最小限の変化が観察された（図２０Ｋ）。
これらのデータから、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴが遠位の腫瘍に対して細胞型に特異的な抗腫瘍効果を有することが示される。
（実施例９）
ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴ後に、照射を受けていない腫瘍において活性化マーカーを発現するＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞が存在する
対側腫瘍に対してＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴを実施した後に、照射を受けていない腫瘍が活性化されたＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞を含有するかどうかを決定した。局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの１日後に、照射を受けていない腫瘍において、ＩＦＮγおよびＩＬ−２を産生し、上方制御された活性化マーカー、ＣＤ６９およびＣＤ２５を発現するＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞が同定された（図２４Ａ〜２４Ｄ）。照射を受けていない腫瘍のサイトカインおよびケモカインレベルの分析により、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−２およびＭＩＰ−１αの増大も示された（図２５Ａ〜２５Ｃ）。まとめると、右側に対するＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴによって誘発される免疫応答により、反対側に位置する処置されていない腫瘍においても同様の変化が誘導された。
（実施例１０）
ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの抗腫瘍効果はＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞ならびにＩＦＮγ産生に部分的に依存する
局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの治療有効性におけるエフェクター細胞の役割をさらに解明するために、抗ＮＫ１．１もしくは抗ＣＤ８抗体を反復全身投与することによってＮＫ細胞もしくはＣＤ８ Ｔ細胞を枯渇させたまたは抗ＩＦＮγ抗体を反復注射することによってＩＦＮγを中和した（図２６Ａ）。ＮＫ細胞およびＣＤ８ Ｔ細胞の枯渇ならびにＩＦＮγの中和のどちらによっても、定量的ルシフェラーゼ活性を伴うＢＬＩによって、ならびに腫瘍成長およびマウス生存データによって実証された通り、ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの有効性を減弱した（図２６Ｂ〜２６Ｅ）。ＢＷ測定では群の間で差異は示されなかった（図２６Ｆ）。ＩＦＮγ中和抗体のＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴに対する阻害効果は、ＩＦＮγ欠損（ＩＦＮγ−ＫＯ）マウスを使用すると再現された（図２７Ａ〜２７Ｆ）。
これらのデータから、局所的ＣＤ２５標的化ＮＩＲ−ＰＩＴの抗腫瘍有効性が、少なくとも部分的に、ＮＫ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＩＦＮγ産生によって、ならびに、おそらくこれらの因子の全ての組合せによって、媒介されたことが示される。
（実施例１１）
ヒトにおける腫瘍の処置
一実施例では、ＣＤ２５抗体は、ダクリズマブ（ヒト化ＩｇＧ１、例えば、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ製）である。一実施例では、ＣＤ２５抗体は、バシリキシマブ（キメラマウス−ヒトＩｇＧ１、例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓ製）である。そのようなＦＤＡに認可され、かつ／または市販されている抗体を、例えば、実施例１に記載の方法、またはペプシンを使用して、それらのＦｃ領域が除去されるまたは別のやり方で不活化するように改変することができる。抗体は、実施例１に記載の方法を使用してＩＲ７００とコンジュゲートすることができる。
得られたダクリズマブ−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００および／またはバシリキシマブ−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００化合物を、がんを有するヒト（または他の大型哺乳動物、例えばイヌなど）に５０ｍｇまたは１００ｍｇの用量で投与する（例えば、ｉ．ｖ．、ｉ．ｐ．、または腫瘍内など）。投与の少なくとも４時間後（例えば、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間、例えば、４〜１２時間または６〜１８時間など）、続いて、患者および／または腫瘍にＮＩＲ光を少なくとも４Ｊ／ｃｍ２（例えば、４〜８Ｊ／ｃｍ２など）の線量で照射する。一部の実施例では、ダクリズマブ−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００および／またはバシリキシマブ−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００化合物の投与、その後のＮＩＲ光の照射を複数回ラウンド、例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回または少なくとも１０回など、実施する。
被験体をがんの縮小についてモニタリングする。
参考文献
本開示の原理を適用することができる多くの可能性のある実施形態を考慮して、例示されている実施形態は単に本開示の例であり、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではないことが理解されるべきである。そうではなく、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によって定義される。したがって、これらの特許請求の範囲の範囲および主旨に入る全てが我々の発明であると主張する。

Claims (24)

  1. サプレッサー細胞を死滅させる方法であって、
    サプレッサー細胞表面タンパク質を含むサプレッサー細胞を治療有効量の１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と接触させるステップであり、前記抗体が、前記サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合するものであり、
    前記抗体が、機能的Ｆｃ領域を含まず、かつ／または
    前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、表面抗原分類４（ＣＤ４）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＣＲ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン−１デコイ受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＤ１０３、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂのうちの１つまたは複数であり、かつ／または
    前記サプレッサー細胞表面タンパク質がＣＤ２５を含み、かつ前記抗体が機能的Ｆｃ領域を含まない
    ステップと、
    前記サプレッサー細胞に、６６０〜７４０ｎｍの波長および少なくとも４Ｊ ｃｍ−２の線量で照射を行い、それにより、前記サプレッサー細胞を死滅させるステップと
    を含む、方法。
  2. 前記サプレッサー細胞が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ＩＩ型ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ、Ｍ２マクロファージ、腫瘍浸潤線維芽細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、またはこれらの組合せである、請求項１に記載の方法。
  3. 前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＤ２５ではない、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記サプレッサー細胞が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇであり、かつ、前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＤ２５、ＣＤ４、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＦＲ４、ＣＸＣＲ４、ＣＣＬ４、ＣＴＬＡ４、およびＣＤ１０３のうちの１つまたは複数である、
    前記サプレッサー細胞が、ＩＩ型ＮＫＴ細胞であり、かつ、前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＤ１６およびＣＤ５６のうちの１つまたは複数である、
    前記サプレッサー細胞が、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇであり、かつ、前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＤ８およびＣＤ１２２のうちの１つまたは複数である、
    前記サプレッサー細胞が、Ｍ２マクロファージであり、かつ、前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、ＩＬ−４Ｒａ、ＩＬ−１Ｒａ、およびインターロイキン−１デコイ受容体のうちの１つまたは複数である、
    前記サプレッサー細胞が、腫瘍浸潤線維芽細胞であり、かつ、前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）である、あるいは、
    前記サプレッサー細胞が、骨髄由来サプレッサー細胞であり、かつ、前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、ＣＤ１４、ＣＤ６６ｂおよびＣＤ１１ｂのうちの１つまたは複数である、
    請求項１から３までのいずれかに記載の方法。
  5. 前記抗体が、１つまたは複数のＦａｂ’および／またはＦ（ａｂ’）２断片である、請求項１から４までのいずれかに記載の方法。
  6. 前記抗体−ＩＲ７００分子が、抗ＣＤ２５−Ｆ（ａｂ’）２−ＩＲ７００分子を含む、請求項１から５までのいずれかに記載の方法。
  7. 前記サプレッサー細胞に、６８０ｎｍの波長で照射を行う、請求項１から６までのいずれかに記載の方法。
  8. 前記１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子が、少なくとも２つの異なる抗体−ＩＲ７００分子を含み、第１の抗体−ＩＲ７００分子が、第１のサプレッサー細胞表面タンパク質に対して特異的なものであり、第２の抗体−ＩＲ７００分子が、前記第１のサプレッサー細胞表面タンパク質の別のエピトープに対して特異的である、または、第２のサプレッサー細胞表面タンパク質に対して特異的なものである、請求項１から７までのいずれかに記載の方法。
  9. 前記サプレッサー細胞が被験体内に存在し、前記サプレッサー細胞を前記１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子と接触させるステップが、治療有効量の前記１つまたは複数の抗体−ＩＲ７００分子を前記被験体に投与することを含む、請求項１から８までのいずれかに記載の方法。
  10. 治療有効量の１つまたは複数の追加的な化学療法剤、生物学的薬剤、または放射線剤を前記被験体に投与するステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
  11. 腫瘍を処置する、請求項１から１０までのいずれかに記載の方法。
  12. 前記腫瘍が、がんである、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記がんが、乳房、肝臓、結腸、卵巣、前立腺、膵臓、脳、子宮頸部、骨、皮膚、頭頸部、または肺のがんである、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記がんが、血液のがんである、請求項１２に記載の方法。
  15. 前記がんが、転移性がんである、請求項１２に記載の方法。
  16. 前記サプレッサー細胞が被験体内に存在し、前記サプレッサー細胞に対して照射を行うステップが、
    前記被験体に対して照射を行うこと、および／または
    前記被験体内の腫瘍に対して照射を行うこと
    を含む、請求項１から１５までのいずれかに記載の方法。
  17. 処置を欠く場合と比較して前記腫瘍の重量、体積、またはサイズが少なくとも２５％低減する、請求項９から１６までのいずれかに記載の方法。
  18. ６６０〜７４０ｎｍの波長での照射を受けていない転移の重量、体積、またはサイズが少なくとも２５％低減する、請求項９から１７までのいずれかに記載の方法。
  19. 前記抗体−ＩＲ７００分子の投与および照射を欠く場合と比較して前記被験体の生存時間が増大する、請求項９から１８までのいずれかに記載の方法。
  20. 前記サプレッサー細胞に対して照射を行うステップが、前記被験体が装着した、近赤外（ＮＩＲ）発光ダイオード（ＬＥＤ）を含むデバイスを使用することによって血液に対して照射を行うことを含む、請求項１から１９までのいずれかに記載の方法。
  21. 抗体が、サプレッサー細胞表面タンパク質に特異的に結合するものであり、
    前記抗体が、機能的Ｆｃ領域を含まず、かつ／または、
    前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＤ４、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＯＸ４０、葉酸受容体４（ＦＲ４）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド４（ＣＣＬ４）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＤ１２２、ＣＤ２３、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ−１、ＣＤ１４、インターロイキン４受容体アルファ鎖（ＩＬ−４Ｒａ）、インターロイキン−１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン−１デコイ受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＸＣＲ２、ＣＤ３３、およびＣＤ６６ｂのうちの１つまたは複数であり、かつ／または、
    前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＤ２５を含み、かつ、前記抗体が、機能的Ｆｃ領域を含まない、
    抗体−ＩＲ７００分子。
  22. 前記サプレッサー細胞表面タンパク質が、ＣＤ２５ではない、請求項２１に記載の抗体−ＩＲ７００分子。
  23. 前記抗体が、１つまたは複数のＦａｂ’および／またはＦ（ａｂ’）２断片である、請求項２１または２２に記載の抗体−ＩＲ７００分子。
  24. 抗体対ＩＲ７００の比が約１：３である、請求項２１から２３までのいずれかに記載の抗体−ＩＲ７００分子。
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