JP2018516593A5 - ２型糖尿病患者のアカルボース治療効果のスクリーニング方法及び試薬キット - Google Patents
２型糖尿病患者のアカルボース治療効果のスクリーニング方法及び試薬キット Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018516593A5 JP2018516593A5 JP2018511310A JP2018511310A JP2018516593A5 JP 2018516593 A5 JP2018516593 A5 JP 2018516593A5 JP 2018511310 A JP2018511310 A JP 2018511310A JP 2018511310 A JP2018511310 A JP 2018511310A JP 2018516593 A5 JP2018516593 A5 JP 2018516593A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- type
- intestinal
- phase
- bacteroides
- volume
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- XUFXOAAUWZOOIT-WVJZLWNXSA-N (2S,3R,4R,5S,6R)-5-[(2R,3R,4R,5S,6R)-5-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4-dihydroxy-6-methyl-5-[[(1S,4R,5S,6S)-4,5,6-trihydroxy-3-(hydroxymethyl)cyclohex-2-en-1-yl]amino]oxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4-triol Chemical compound O([C@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O)[C@H]1O)N[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)C(CO)=C1)O)C)[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O XUFXOAAUWZOOIT-WVJZLWNXSA-N 0.000 title claims description 28
- 229960002632 acarbose Drugs 0.000 title claims description 28
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 19
- 208000001072 Type 2 Diabetes Mellitus Diseases 0.000 title claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 9
- 230000000968 intestinal Effects 0.000 claims description 68
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims description 38
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 claims description 30
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 30
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 20
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 claims description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 17
- 206010022489 Insulin resistance Diseases 0.000 claims description 16
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 14
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 14
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 14
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 13
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims description 11
- 230000002550 fecal Effects 0.000 claims description 11
- 230000000813 microbial Effects 0.000 claims description 11
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 claims description 11
- 244000045947 parasites Species 0.000 claims description 9
- 235000020828 fasting Nutrition 0.000 claims description 8
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 7
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 claims description 6
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N Taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000003608 Feces Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000000271 cardiovascular Effects 0.000 claims description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 5
- 230000002218 hypoglycaemic Effects 0.000 claims description 5
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- BHTRKEVKTKCXOH-AYSJQVDDSA-N taurochenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)C1C2C2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 BHTRKEVKTKCXOH-AYSJQVDDSA-N 0.000 claims description 5
- 102000011690 Adiponectin Human genes 0.000 claims description 4
- 108010076365 Adiponectin Proteins 0.000 claims description 4
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 claims description 4
- 210000001736 Capillaries Anatomy 0.000 claims description 4
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 4
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 241000287463 Phalacrocorax Species 0.000 claims description 3
- 229960003080 Taurine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 3
- 230000003071 parasitic Effects 0.000 claims description 3
- 102000002045 Endothelin Human genes 0.000 claims description 2
- 108050009340 Endothelin Proteins 0.000 claims description 2
- ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N Endothelin-1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](N)CSSC1)C1=CNC=N1 ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N 0.000 claims description 2
- 241000531897 Loma Species 0.000 claims description 2
- 101700082383 VEGFC Proteins 0.000 claims description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 claims description 2
- DAXBISKSIDBYEU-UHFFFAOYSA-N Tidiacic Chemical compound OC(=O)C1CSC(C(O)=O)N1 DAXBISKSIDBYEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229950005578 tidiacic Drugs 0.000 claims 2
- 230000001737 promoting Effects 0.000 claims 1
- 241000605861 Prevotella Species 0.000 description 14
- 210000001035 Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 description 10
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N Lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 7
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N Ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 7
- 229960001661 Ursodiol Drugs 0.000 description 7
- 229940115889 ursodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 7
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 6
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 6
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N Deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M sodium taurocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M 0.000 description 5
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000000576 supplementary Effects 0.000 description 4
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000003629 gastrointestinal hormone Substances 0.000 description 3
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RUDATBOHQWOJDD-PSTGXAJBSA-N (4R)-4-[(3R,5R,7R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-2,2,4,4-tetradeuterio-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-3,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoic acid Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCC(O)=O)CC[C@H]3[C@@H]1[C@H](O)C[C@H]1[C@]2(C)CC([2H])([2H])[C@@H](O)C1([2H])[2H] RUDATBOHQWOJDD-PSTGXAJBSA-N 0.000 description 2
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 2
- 229960001091 Chenodeoxycholic Acid Drugs 0.000 description 2
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N Chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 2
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 2
- GHCZAUBVMUEKKP-XROMFQGDSA-N Glycoursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 GHCZAUBVMUEKKP-XROMFQGDSA-N 0.000 description 2
- 230000002429 anti-coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229950001904 chenodiol Drugs 0.000 description 2
- XTEGARKTQYYJKE-UHFFFAOYSA-M chlorate Chemical compound [O-]Cl(=O)=O XTEGARKTQYYJKE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940005991 chloric acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N glycodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N 0.000 description 2
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 2
- 230000003595 spectral Effects 0.000 description 2
- IIYSTUUVIASHBG-YEUHZSMFSA-N 2-[[(4R)-4-[(3R,5R,8R,9S,10S,12S,13R,14S,17R)-3,12-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]acetic acid;sodium Chemical compound [Na].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 IIYSTUUVIASHBG-YEUHZSMFSA-N 0.000 description 1
- YWXCPBUMOMIAJB-HRHHVWJRSA-N 2-[[(4R)-4-[(3R,5R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-3-hydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]ethanesulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 YWXCPBUMOMIAJB-HRHHVWJRSA-N 0.000 description 1
- 101710006356 ACTI Proteins 0.000 description 1
- 101700077954 APOA1 Proteins 0.000 description 1
- 101700046715 CSTI Proteins 0.000 description 1
- 101700020566 DEFA4 Proteins 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 208000004205 Diabetic Angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 101700077246 EHMT1 Proteins 0.000 description 1
- 101710042131 GCG Proteins 0.000 description 1
- 101710004768 GER5 Proteins 0.000 description 1
- 101710004110 GLP Proteins 0.000 description 1
- 229960004666 Glucagon Drugs 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N Glucagonum Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 101700022962 HSP12 Proteins 0.000 description 1
- 206010020993 Hypoglycaemia Diseases 0.000 description 1
- 101710006353 IP3R Proteins 0.000 description 1
- 101700035656 ISOTI Proteins 0.000 description 1
- 101700035039 ITI Proteins 0.000 description 1
- 101700052013 ITR2 Proteins 0.000 description 1
- 101700068039 ITRP Proteins 0.000 description 1
- 101700036939 MTI Proteins 0.000 description 1
- 230000036740 Metabolism Effects 0.000 description 1
- 101710042151 Os01g0681900 Proteins 0.000 description 1
- 101710039481 Os03g0179100 Proteins 0.000 description 1
- 101700067075 PYY Proteins 0.000 description 1
- 229940045946 Sodium Taurodeoxycholate Drugs 0.000 description 1
- 101700062451 TI Proteins 0.000 description 1
- BHTRKEVKTKCXOH-BJLOMENOSA-N Taurochenodesoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 BHTRKEVKTKCXOH-BJLOMENOSA-N 0.000 description 1
- 102100005236 ZGLP1 Human genes 0.000 description 1
- 101700078733 ZGLP1 Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 1
- 230000023298 conjugation with cellular fusion Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 101700061043 dpp5 Proteins 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal Effects 0.000 description 1
- 230000005176 gastrointestinal motility Effects 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- GHCZAUBVMUEKKP-GYPHWSFCSA-N glycochenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 GHCZAUBVMUEKKP-GYPHWSFCSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 201000008267 intestinal tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000035786 metabolism Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000513 principal component analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- YXHRQQJFKOHLAP-FVCKGWAHSA-M sodium;2-[[(4R)-4-[(3R,5R,8R,9S,10S,12S,13R,14S,17R)-3,12-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]ethanesulfonate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 YXHRQQJFKOHLAP-FVCKGWAHSA-M 0.000 description 1
- YWROUPFMHKARON-HJRQWJHVSA-M sodium;2-[[(4R)-4-[(3R,5S,7R,8R,9S,10S,12S,13R,14S,17R)-3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]acetate;hydrate Chemical compound O.[Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 YWROUPFMHKARON-HJRQWJHVSA-M 0.000 description 1
- AAYACJGHNRIFCT-YRJJIGPTSA-M sodium;2-[[(4R)-4-[(3R,5S,7R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]acetate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)CC1 AAYACJGHNRIFCT-YRJJIGPTSA-M 0.000 description 1
- IYPNVUSIMGAJFC-HLEJRKHJSA-M sodium;2-[[(4R)-4-[(3R,5S,7R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]ethanesulfonate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 IYPNVUSIMGAJFC-HLEJRKHJSA-M 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000021037 unidirectional conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Description
本発明は具体的に、腸管微生物メタゲノム特徴の２型糖尿病のアカルボース治療効果のスクリーニングマーカーとしての使用に関する。
現在、２型糖尿病の治療分野において、薬物治療効果に対する判断、及び治療前の分型診断はまだ揃っていない。２型糖尿病の病理生理メカニズムに基づき、主にインスリン抵抗性及びインスリン分泌欠陥に分けられる。２型糖尿病の治療分野では、インスリン抵抗性及びインスリン分泌欠陥に対する薬物がそれぞれ存在するが、患者本人に対してインスリン抵抗性をメインとするか分泌欠陥をメインとするかについての分型診断については、まだ科学的な簡素な方法がなかった。
本発明の目的は以下の技術的な解決手段によって実現される。
本発明は、２型糖尿病のアカルボース治療効果のスクリーニングマーカーとしての腸管微生物メタゲノム特徴の使用であって、前記腸管微生物メタゲノム特徴がバクテロイデス属腸型である使用に関する。
本発明は、２型糖尿病のアカルボース治療効果のスクリーニングマーカーとしての腸管微生物メタゲノム特徴の使用であって、前記腸管微生物メタゲノム特徴がバクテロイデス属腸型である使用に関する。
好ましくは、前記バクテロイデス属腸型は、生体外糞便内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって確定される。
好ましくは、前記ＰＣＲ増幅は具体的に、生体外糞便内の寄生菌ＤＮＡを抽出し、特異に富ませる菌属に対して、１６Ｓｒｎａ ＰＣＲ増幅を行うことを含む。
好ましくは、前記バクテロイデス属腸型は、生体外血液サンプル内の二次胆汁酸を測定することによって確定され、前記二次胆汁酸はＵＤＣＡ、ＴＵＤＣＡ、ＧＵＤＣＡ、ＤＣＡ、ＴＤＣＡ、ＧＤＣＡ、ＬＣＡ、ＴＬＣＡ、ＧＬＣＡを含む。本発明の研究対象では、主に２種類の腸型を発見しており、１つはプレボテラをメインとするプレボテラ腸型、他１つはバクテロイデスをメインとするバクテロイデス腸型である。バクテロイデス腸型において、二次胆汁酸におけるデオキシコール酸及びリトコール酸レベルがプレボテラ腸型より顕著に低く、一方、保護作用を有するウルソデオキシコール酸がプレボテラ腸型より高い。さらに、腸管メタゲノムの分析の結果、ウルソデオキシコール酸をさらにリトコール酸に分解するＫＯがプレボテラ腸型内に豊富であることを発見した。２種類の腸型の患者、それらの腸管菌群の胆汁酸を代謝する能力が顕著に異なっていることを示している。
好ましくは、前記二次胆汁酸の測定は、
７５μＬの血液サンプルにつき、３００μＬの内部標準含有メタノールを加え、ターゲット化合物を抽出し且つタンパク質を沈殿させ、ボルテックスし、遠心分離して、上澄み液を吸い取り、凍結乾燥し、５０μＬの２５％（容積）アセトニトリル含有水溶液で再び溶解し、サンプル注入を待つ、サンプル事前処理工程Ｓ１と、
１２９０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ液相及び６４６０Ａトリプル四重極型質量分析計用システムを使用してサンプル分析を行う測定工程Ｓ２と、
を含み、
液相分離では、１００ｍｍ×２．１ｍｍのＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｃ８クロマトグラフカラム、粒子径１．７μｍが使用され、Ａ相が１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液であり、Ｂ相が純粋なアセトニトリルであり、初期時２５％（容積）Ｂ相で、０．５分保留し、その後１２．５分内に４０％（容積）Ｂ相まで直接的に上昇し、次に、１分内に９０％（容積）Ｂ相まで上昇し、且つシステムを３分リンスし、０．５分内に２５％（容積）Ｂ相まで復帰し、２．５分平衡化し、流速が０．３５ｍｌ／分であり、カラム温度が３５℃であり、注入サンプルの容積が５μＬであり、
質量分析スペクトルがＥＳＩの負イオンモードを使用して測定され、メインパラメータは、Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：３５０℃、Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ：４０ｐｓｉ、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：４００℃、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ：３５００Ｖ、Ｎｏｚｚｌｅ ｖｏｌｔａｇｅ：４００Ｖである。
７５μＬの血液サンプルにつき、３００μＬの内部標準含有メタノールを加え、ターゲット化合物を抽出し且つタンパク質を沈殿させ、ボルテックスし、遠心分離して、上澄み液を吸い取り、凍結乾燥し、５０μＬの２５％（容積）アセトニトリル含有水溶液で再び溶解し、サンプル注入を待つ、サンプル事前処理工程Ｓ１と、
１２９０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ液相及び６４６０Ａトリプル四重極型質量分析計用システムを使用してサンプル分析を行う測定工程Ｓ２と、
を含み、
液相分離では、１００ｍｍ×２．１ｍｍのＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｃ８クロマトグラフカラム、粒子径１．７μｍが使用され、Ａ相が１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液であり、Ｂ相が純粋なアセトニトリルであり、初期時２５％（容積）Ｂ相で、０．５分保留し、その後１２．５分内に４０％（容積）Ｂ相まで直接的に上昇し、次に、１分内に９０％（容積）Ｂ相まで上昇し、且つシステムを３分リンスし、０．５分内に２５％（容積）Ｂ相まで復帰し、２．５分平衡化し、流速が０．３５ｍｌ／分であり、カラム温度が３５℃であり、注入サンプルの容積が５μＬであり、
質量分析スペクトルがＥＳＩの負イオンモードを使用して測定され、メインパラメータは、Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：３５０℃、Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ：４０ｐｓｉ、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：４００℃、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ：３５００Ｖ、Ｎｏｚｚｌｅ ｖｏｌｔａｇｅ：４００Ｖである。
好ましくは、バクテロイデス属腸型の２型糖尿病患者のアカルボース治療効果は、血糖降下以外に、インスリン抵抗性の改善、二次胆汁酸の降下、心血管リスク低減の促進を含む。
好ましくは、前記有害な二次胆汁酸の降下の指標は、ＧＤＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＬＣＡを含み、タウリン結合胆汁酸の降下の指標は、ＴＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＬＣＡ、ＴＵＤＣＡを含む。
好ましくは、前記インスリン抵抗性の改善の指標は、空腹時血糖の降下、空腹時Ｃペプチド及びインスリンレベルの降下、ウエストヒップ比の下方制御、ＨＯＭＡインスリン抵抗性指数の下方制御、アディポネクチンの上方制御を含む。
本発明はさらに、２型糖尿病のアカルボース治療効果のスクリーニングに用いられる試薬キットであって、前記試薬キットは、
生体外糞便サンプルまたは生体外血液サンプルを収集する試薬と、
生体外糞便サンプル内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって腸型を確定する試薬、または、生体外血液サンプル内の二次胆汁酸を測定することによって腸型を確定する試薬と、
を含む。
生体外糞便サンプルまたは生体外血液サンプルを収集する試薬と、
生体外糞便サンプル内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって腸型を確定する試薬、または、生体外血液サンプル内の二次胆汁酸を測定することによって腸型を確定する試薬と、
を含む。
従来の技術と比べ、本発明は以下の有益な効果を有する。
１）本発明は、まず、異なる腸管寄生菌群を有する２型糖尿病患者では、糖尿病の血糖降下薬であるアカルボースに対する治療効果が顕著に異なっているという腸型の概念を発見したことを利用するものである。そのため、前記薬を使用する前に、患者に対して腸型の区分けを行うことによって、最適の治療効果群を選択し、個体の２型糖尿病患者がアカルボースを使用して糖尿病治療の行うことの適否を判断できる。
２）腸型の普通の分類では糞便内の寄生菌のＤＮＡを使用してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うが、ベースライン状況下で、胆汁酸成分、特に、二次胆汁酸が腸型に対して良好な分類の役割を有するので、血液におけるマーカー（すなわち血漿における二次胆汁酸のレベル）を通じて腸管寄生菌群落の分型（すなわち腸型）の鑑別を実現し、診断に用いるマーカーとすることができる。
１）本発明は、まず、異なる腸管寄生菌群を有する２型糖尿病患者では、糖尿病の血糖降下薬であるアカルボースに対する治療効果が顕著に異なっているという腸型の概念を発見したことを利用するものである。そのため、前記薬を使用する前に、患者に対して腸型の区分けを行うことによって、最適の治療効果群を選択し、個体の２型糖尿病患者がアカルボースを使用して糖尿病治療の行うことの適否を判断できる。
２）腸型の普通の分類では糞便内の寄生菌のＤＮＡを使用してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うが、ベースライン状況下で、胆汁酸成分、特に、二次胆汁酸が腸型に対して良好な分類の役割を有するので、血液におけるマーカー（すなわち血漿における二次胆汁酸のレベル）を通じて腸管寄生菌群落の分型（すなわち腸型）の鑑別を実現し、診断に用いるマーカーとすることができる。
以下、実施例に合わせて本発明を詳細に説明する。以下の実施例は当業者の本発明に対する理解に寄与することを目的とするが、いかなる形式でも本発明を制限するものではない。指摘すべきであるのは、当業者にとって、本発明の構想から離脱しない限りに、若干の調整及び改善を行うことができるが、それらは共に本発明の保護範囲内に属する。
１．臨床標本の収集
ａ）まず、ランダム開放、陽性対照の方法で、初発の２型糖尿病群及びその正常配偶対照群を収集し、糖尿病患者のアカルボースを服用する前後時期の臨床及び生物化学的資料、胃腸運動状況を比較し、それと同時に血液サンプル及び糞便標本を収集する。初診の、薬投与しなかった２型糖尿病患者に対してルーチン検査を行い、糞便及び血液サンプルを採取する。
糞便サンプルの採集
ｂ）糞便
ｉ．試験器材：プラスチック小皿（直径は家庭用の水洗便所の口径より小さい）
ｉｉ．ポリバッグ、無菌細長柄小匙
ｉｉｉ．無菌５０ｍｌ遠心分離チューブ
ｉｖ．プラスチック小皿（直径は家庭用の水洗便所の口径より小さい）を水洗便所内に入れ、ポリバッグ（ポリバッグの辺縁を便所の水内に浸入させない）を被せて、病院でサンプリングする場合は直接清浄便所内にポリバッグを被せて、糞便サンプルを採取し、
ｖ．細長柄小匙で新鮮な糞便サンプルの上層を均一に混合し、少量を取って無菌の５０ｍｌ遠心分離チューブ内に入れ、チューブ毎に少なくとも１０ｇのサンプルを取り、チューブの蓋を回し締める（遠心分離チューブの壁にはサンプリング時間、サンプリング個体の群別、番号を記載する）。試験対象者の毎回の採取大便を、３チューブのサンプル（ＲＮＡｌａｔｅｒ処理チューブ、グリセリンチューブ、及び無処理チューブ）に取る。
ｖｉ．採集したサンプルを直ちに−８０℃で冷凍保存する。
ｃ）血清標本の留置
ｉ．空腹時で静脈血１５ｍｌを抜き取り、そのうち１．５ｍｌは血漿糖を測定し、残り６．５ｍｌは普通チューブ（トリプシン阻害剤、ＤＰＰＶ阻害薬含有）、６．５ｍｌは抗凝固チューブ（ヘパリヌス及びＲＮＡｌａｔｅｒ含有）に入れ、
ｉｉ．普通チューブ血液を４℃で遠心分離し、血清を析出させた後約３ｍｌを吸い取り、均等に３つの１．５ｍｌのエッペンドルフチューブ内に分け入れ、チューブの蓋を閉め、
ｉｉｉ．抗凝血チューブは直ちに４℃で遠心分離して、血漿を約３ｍｌ析出させ、均等に３つの１．５ｍｌの輸入ＲＮＡａｓｅ ｆｒｅｅエッペンドルフチューブ内に入れ、
ｉｖ．チューブに標本姓名、中心番号及びランダム番号を詳細に記載し、
ｖ．シールテープでチューブ蓋を１週間密封し、
ｖｉ．−２０℃で保存（条件が有れば−８０℃）し、分注血漿は直ちに−２０℃またはドライアイス内に置く。
ａ）まず、ランダム開放、陽性対照の方法で、初発の２型糖尿病群及びその正常配偶対照群を収集し、糖尿病患者のアカルボースを服用する前後時期の臨床及び生物化学的資料、胃腸運動状況を比較し、それと同時に血液サンプル及び糞便標本を収集する。初診の、薬投与しなかった２型糖尿病患者に対してルーチン検査を行い、糞便及び血液サンプルを採取する。
糞便サンプルの採集
ｂ）糞便
ｉ．試験器材：プラスチック小皿（直径は家庭用の水洗便所の口径より小さい）
ｉｉ．ポリバッグ、無菌細長柄小匙
ｉｉｉ．無菌５０ｍｌ遠心分離チューブ
ｉｖ．プラスチック小皿（直径は家庭用の水洗便所の口径より小さい）を水洗便所内に入れ、ポリバッグ（ポリバッグの辺縁を便所の水内に浸入させない）を被せて、病院でサンプリングする場合は直接清浄便所内にポリバッグを被せて、糞便サンプルを採取し、
ｖ．細長柄小匙で新鮮な糞便サンプルの上層を均一に混合し、少量を取って無菌の５０ｍｌ遠心分離チューブ内に入れ、チューブ毎に少なくとも１０ｇのサンプルを取り、チューブの蓋を回し締める（遠心分離チューブの壁にはサンプリング時間、サンプリング個体の群別、番号を記載する）。試験対象者の毎回の採取大便を、３チューブのサンプル（ＲＮＡｌａｔｅｒ処理チューブ、グリセリンチューブ、及び無処理チューブ）に取る。
ｖｉ．採集したサンプルを直ちに−８０℃で冷凍保存する。
ｃ）血清標本の留置
ｉ．空腹時で静脈血１５ｍｌを抜き取り、そのうち１．５ｍｌは血漿糖を測定し、残り６．５ｍｌは普通チューブ（トリプシン阻害剤、ＤＰＰＶ阻害薬含有）、６．５ｍｌは抗凝固チューブ（ヘパリヌス及びＲＮＡｌａｔｅｒ含有）に入れ、
ｉｉ．普通チューブ血液を４℃で遠心分離し、血清を析出させた後約３ｍｌを吸い取り、均等に３つの１．５ｍｌのエッペンドルフチューブ内に分け入れ、チューブの蓋を閉め、
ｉｉｉ．抗凝血チューブは直ちに４℃で遠心分離して、血漿を約３ｍｌ析出させ、均等に３つの１．５ｍｌの輸入ＲＮＡａｓｅ ｆｒｅｅエッペンドルフチューブ内に入れ、
ｉｖ．チューブに標本姓名、中心番号及びランダム番号を詳細に記載し、
ｖ．シールテープでチューブ蓋を１週間密封し、
ｖｉ．−２０℃で保存（条件が有れば−８０℃）し、分注血漿は直ちに−２０℃またはドライアイス内に置く。
２．胆汁酸測定
試薬：Ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＴＣＤＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｏｃｈｏｌａｔｅ ｈｙｄｒａｔｅ（ＧＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＴＤＣＡ）、Ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＣＤＣＡ）、Ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＵＤＣＡ）、Ｔａｕｒｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＴＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＧＤＣＡ）、Ｇｌｙｃｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＧＵＤＣＡ）、Ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＣＡ）、Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＤＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＧＣＤＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＴＵＤＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｌｉｔｈｏｃｈｏｌａｔｅ（ＴＬＣＡ）、Ｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＬＣＡ）、ＮＨ４ＨＣＯ３ はいずれも米国Ｓｉｇｍａ社から購入。Ｇｌｙｃｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ ３―Ｓｕｌｆａｔｅ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ Ｓａｌｔ（ＧＣＤＣＳ）は浙江大学試験室で合成。Ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ４（ＣＤＣＡ―ｄ４）、Ｇｌｙｃｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ５ ３―Ｓｕｌｆａｔｅ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ Ｓａｌｔ（ＧＣＤＣＳ―ｄ５）、Ｔａｕｒｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ５ （ＴＣＤＣＡ―ｄ５）、Ｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ５（ＣＡ―ｄ５）、Ｇｌｙｃｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ―ｄ５（ＧＣＡ―ｄ５）、Ｌｉｔｈｏｃｈｏｌｙｌｇｌｙｃｉｎｅ（ＧＬＣＡ）はいずれもカナダＴＲＣ社から購入。Ｔａｕｒｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ５（ＴＤＣＡ―ｄ５）、Ｔａｕｒｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ ―ｄ５（ＴＣＡ―ｄ５）は米国ＣＩＬ社から購入。アセトニトリル、メタノールはＭｅｒｋ社から購入。
試薬：Ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＴＣＤＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｏｃｈｏｌａｔｅ ｈｙｄｒａｔｅ（ＧＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＴＤＣＡ）、Ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＣＤＣＡ）、Ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＵＤＣＡ）、Ｔａｕｒｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＴＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＧＤＣＡ）、Ｇｌｙｃｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＧＵＤＣＡ）、Ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＣＡ）、Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＤＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＧＣＤＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＴＵＤＣＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｌｉｔｈｏｃｈｏｌａｔｅ（ＴＬＣＡ）、Ｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＬＣＡ）、ＮＨ４ＨＣＯ３ はいずれも米国Ｓｉｇｍａ社から購入。Ｇｌｙｃｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ ３―Ｓｕｌｆａｔｅ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ Ｓａｌｔ（ＧＣＤＣＳ）は浙江大学試験室で合成。Ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ４（ＣＤＣＡ―ｄ４）、Ｇｌｙｃｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ５ ３―Ｓｕｌｆａｔｅ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ Ｓａｌｔ（ＧＣＤＣＳ―ｄ５）、Ｔａｕｒｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ５ （ＴＣＤＣＡ―ｄ５）、Ｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ５（ＣＡ―ｄ５）、Ｇｌｙｃｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ―ｄ５（ＧＣＡ―ｄ５）、Ｌｉｔｈｏｃｈｏｌｙｌｇｌｙｃｉｎｅ（ＧＬＣＡ）はいずれもカナダＴＲＣ社から購入。Ｔａｕｒｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄ―ｄ５（ＴＤＣＡ―ｄ５）、Ｔａｕｒｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ ―ｄ５（ＴＣＡ―ｄ５）は米国ＣＩＬ社から購入。アセトニトリル、メタノールはＭｅｒｋ社から購入。
サンプルの事前処理：血液サンプル７５μＬを取り、内部標準含有メタノール３００μＬを加え、ターゲット化合物を抽出し且つタンパク質を沈殿し、３０秒間ボルテックスして、回転速度１５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄み液２００μＬを吸い取り、凍結乾燥し、５０μＬの２５％アセトニトリル含有水溶液で再び溶解し、サンプル注入を待つ。機器の方法：１２９０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ液相（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＵＳＡ）及び６４６０Ａトリプル四重極型質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＵＳＡ）システムでサンプル分析を行う。液相分離は１００ｍｍ×２．１ｍｍのＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｃ８クロマトグラフカラム、粒子径１．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ、ＵＳＡ）を使用する。Ａ相が１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、Ｂ相が純粋なアセトニトリルである。初期時２５％Ｂ相で、０．５分保留する。その後１２．５分内に４０％Ｂまで直線的に上昇する。次に、１分内に９０％Ｂまで上昇し、且つシステムを３分リンスし、０．５分内に２５％Ｂまで復帰し、２．５分平衡化する。流速が０．３５ｍｌ／分、カラム温度が３５℃、注入サンプルの容積が５μＬである。質量スペクトルはＥＳＩの負イオンモードを使用して測定する。主要パラメータは、Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：３５０℃、Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ：４０ｐｓｉ、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：４００℃、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ：３５００Ｖ、Ｎｏｚｚｌｅ ｖｏｌｔａｇｅ：４００Ｖである。各胆汁酸の測定は反応モニタリングモード（ＭＲＭ）を使用する。内部標準の調製濃度及び主要な質量スペクトルパラメータを表１に示し、胆汁酸分析の質量スペクトルパラメータの設置を表２に示す。
３．腸管菌群ＤＮＡシーケンシング
ＨｉＳｅｑ２５００でシーケンシングを行い、いずれのサンプルも３５０ｂｐ長さのセクションでデータベース構築し、９．９Ｍヒト腸管遺伝子集と比較する。ＩＭＧの門、種、属の生物系統（門レベルが７０％のカバー率及び６５％識別率、属レベルが８５％識別率、及び種レベルが９５％の識別率）を得る。主成分分析の方法（ＰＣＡ）を使用して腸管寄生菌クラスタに対して分析判断を行う。
ＨｉＳｅｑ２５００でシーケンシングを行い、いずれのサンプルも３５０ｂｐ長さのセクションでデータベース構築し、９．９Ｍヒト腸管遺伝子集と比較する。ＩＭＧの門、種、属の生物系統（門レベルが７０％のカバー率及び６５％識別率、属レベルが８５％識別率、及び種レベルが９５％の識別率）を得る。主成分分析の方法（ＰＣＡ）を使用して腸管寄生菌クラスタに対して分析判断を行う。
本発明は患者糞便に対して腸管微生物コロニーＤＮＡ抜出し及びメタゲノム二世代シーケンシングを行い、且つすでに発表された９．９Ｍヒト腸管メタゲノム遺伝子集と比較することを通じ、比較率が約７７％に達する。クラスタ分析の方法によって注釈情報を有する腸管微生物のうち薬投与前後に差異の存在するもの約１４３種を見つけた。属レベルの情報に基づき分析した結果、２型糖尿病患者のベースラインの腸管菌群が異なる密集を有する状況を発見し、それによって特徴性腸管菌群密集の状況に基づき、いわゆる腸型（Ｅｎｔｅｒｏｔｙｐｅ）を得る。本発明の研究対象において、主に２種類の腸型を発見し、１つがプレボテラをメインとするプレボテラ腸型で、他一つがバクテロイデスをメインとするバクテロイデス腸型である（図１）。
空腹時Ｃペプチド及びインスリンレベルが共にバクテロイデス腸型において治療後顕著に降下し、計算の結果、インスリン抵抗性を表すＨＯＭＡＩＲ指数がアカルボースの治療後降下するが、前記受益がバクテロイデス腸型にのみ顕著であり、プレボテラ腸型には降下が顕著ではなかった。バクテロイデス腸型の２型糖尿病患者がアカルボースを投与した後そのインスリン抵抗性の状態をより改善しやすいことを示した。インスリン抵抗性に関し、標準料理に誘導されたインスリン放出曲線、ウエストヒップ比及びアディポネクチンレベルは、共にバクテロイデス腸型のＴ２ＤＭ患者がアカルボースの治療を受けた後顕著に降下し、プレボテラ腸型においては前記治療効果が顕著ではなかった。
アカルボースは血清トリグリセリン、ＡＰＯＡ及び拡張期血圧の降下をもたらし、２つの腸型における治療後の変化には顕著な差異がなかったが、ＰＤＧＦＡＡとＰＤＧＦＡＡＢＢ、エンドセリン、ＶｅｇｆＣ等の一部の糖尿病血管合併症に関する血漿因子がバクテロイデス腸型にて顕著に降下し、より良い血糖降下、大血管病変リスクの降下以外に、バクテロイデス腸型がアカルボースを使用した後より多くの血管合併症を降下させる有益な効果も取得できることを示した。
腸管ホルモンは最近２型糖尿病の治療分野におけるホットターゲットとされ、そのレベルのアカルボースにおける応用も顕著に変わる。測定された複数の腸管ホルモンにおいて、薬投与後上昇したＧＬＰ１、グルカゴン、ＰＹＹ、及び各時間帯のグヘレリン及びＧＩＰは共にバクテロイデス腸型にて顕著であるが、プレボテラ腸型にて顕著ではなかった。アカルボースのいかなる腸管ホルモンをも通じてもたらされた代謝有益な効果は、おそらく共にバクテロイデス腸型においてより顕著であることが示された。
第三に、２種類の腸型はベースラインレベルにおいてすでに胆汁酸スペクトルの差異を表した（図３（Ａ）、（Ｂ））。バクテロイデス腸型において、二次胆汁酸におけるデオキシコール酸及びリトコール酸レベルが顕著にプレボテラ腸型より低く、一方、保護作用の有するウルソデオキシコール酸がプレボテラ腸型より高い。さらに腸管メタゲノム分析は、ウルソデオキシコール酸をさらに分解してリトコール酸にするＫＯが顕著にプレボテラ腸型において豊富であることを発見した（図３（Ｃ））。２種類の腸型の患者、その腸管菌群の胆汁酸を代謝する能力には顕著な差異が存在することが示された。アカルボースで治療した後、胆汁酸の組成差異が２種類の腸型においてより顕著になる（図３（Ｄ））。２種類の一次胆汁酸がアカルボースの治療後２種類の腸型において共に顕著に上昇したが、腸型の特異な変化は発生せず、アカルボースはおそらく全体的に胆汁酸の小腸における再吸収に影響していることが示された。
そのため、前記研究は、異なる腸型は患者のアカルボースの糖尿病治療の受益を予測でき、特に血糖降下以外ではそれはインスリン抵抗性の改善、二次胆汁酸の降下、心血管リスク降下の促進の作用である。腸型の診断は、普通にＤＮＡ ＰＣＲ増幅した特徴菌属の１６ｓＲＮＡを使用すれば完成でき、便利で経済的である。２型糖尿病の正確な医療に対して新しい可能性をもたらす。
（付記）
（付記１）
２型糖尿病のアカルボース治療効果のスクリーニングマーカーとしての腸管微生物メタゲノム特徴の用途であって、
前記腸管微生物メタゲノム特徴がバクテロイデス属腸型である、
ことを特徴とする用途。
（付記１）
２型糖尿病のアカルボース治療効果のスクリーニングマーカーとしての腸管微生物メタゲノム特徴の用途であって、
前記腸管微生物メタゲノム特徴がバクテロイデス属腸型である、
ことを特徴とする用途。
（付記２）
前記バクテロイデス属腸型は、生体外糞便内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって確定される、
ことを特徴とする付記１に記載の用途。
前記バクテロイデス属腸型は、生体外糞便内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって確定される、
ことを特徴とする付記１に記載の用途。
（付記３）
前記ＰＣＲ増幅は、具体的に、生体外糞便内の寄生菌ＤＮＡを抽出し、特異に増加させる菌属に対して、１６Ｓｒｎａ ＰＣＲ増幅を行うことを含む、
ことを特徴とする付記２に記載の用途。
前記ＰＣＲ増幅は、具体的に、生体外糞便内の寄生菌ＤＮＡを抽出し、特異に増加させる菌属に対して、１６Ｓｒｎａ ＰＣＲ増幅を行うことを含む、
ことを特徴とする付記２に記載の用途。
（付記５）
前記二次胆汁酸の測定は、
７５μＬの血液サンプルにつき、３００μＬの内部標準含有メタノールを加え、ターゲット化合物を抽出し且つタンパク質を沈殿させ、ボルテックスし、遠心分離して、上澄み液を吸い取り、凍結乾燥し、５０μＬの２５％（容積）アセトニトリル含有水溶液で再び溶解し、サンプル注入を待つ、サンプル事前処理工程Ｓ１と、
１２９０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ液相及び６４６０Ａトリプル四重極型質量分析計用システムを使用してサンプル分析を行う測定工程Ｓ２と、
を含み、
液相分離では、１００ｍｍ×２．１ｍｍのＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｃ８クロマトグラフカラム、粒子径１．７μｍが使用され、Ａ相が１０ｍＭ ＮＨ ４ ＨＣＯ ３ 水溶液であり、Ｂ相が純粋なアセトニトリルであり、初期時２５％（容積）Ｂ相で、０．５分保留し、その後１２．５分内に４０％（容積）Ｂ相まで直線的に上昇し、次に、１分内に９０％（容積）Ｂ相まで上昇し、且つシステムを３分リンスし、０．５分内に２５％（容積）Ｂ相まで復帰し、２．５分平衡化し、流速が０．３５ｍｌ／分であり、カラム温度が３５℃であり、注入サンプルの容積が５μＬであり、
質量分析スペクトルがＥＳＩの負イオンモードを使用して測定され、メインパラメータは、Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：３５０℃、Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ：４０ｐｓｉ、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：４００℃、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ：３５００Ｖ、Ｎｏｚｚｌｅ ｖｏｌｔａｇｅ：４００Ｖである、
ことを特徴とする付記４に記載の用途。
前記二次胆汁酸の測定は、
７５μＬの血液サンプルにつき、３００μＬの内部標準含有メタノールを加え、ターゲット化合物を抽出し且つタンパク質を沈殿させ、ボルテックスし、遠心分離して、上澄み液を吸い取り、凍結乾燥し、５０μＬの２５％（容積）アセトニトリル含有水溶液で再び溶解し、サンプル注入を待つ、サンプル事前処理工程Ｓ１と、
１２９０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ液相及び６４６０Ａトリプル四重極型質量分析計用システムを使用してサンプル分析を行う測定工程Ｓ２と、
を含み、
液相分離では、１００ｍｍ×２．１ｍｍのＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｃ８クロマトグラフカラム、粒子径１．７μｍが使用され、Ａ相が１０ｍＭ ＮＨ ４ ＨＣＯ ３ 水溶液であり、Ｂ相が純粋なアセトニトリルであり、初期時２５％（容積）Ｂ相で、０．５分保留し、その後１２．５分内に４０％（容積）Ｂ相まで直線的に上昇し、次に、１分内に９０％（容積）Ｂ相まで上昇し、且つシステムを３分リンスし、０．５分内に２５％（容積）Ｂ相まで復帰し、２．５分平衡化し、流速が０．３５ｍｌ／分であり、カラム温度が３５℃であり、注入サンプルの容積が５μＬであり、
質量分析スペクトルがＥＳＩの負イオンモードを使用して測定され、メインパラメータは、Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：３５０℃、Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ：４０ｐｓｉ、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：４００℃、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ：３５００Ｖ、Ｎｏｚｚｌｅ ｖｏｌｔａｇｅ：４００Ｖである、
ことを特徴とする付記４に記載の用途。
（付記６）
バクテロイデス属腸型の２型糖尿病患者のアカルボース治療効果は、血糖降下以外に、インスリン抵抗性の改善、二次胆汁酸の降下、心血管リスク低減の促進を含む、
ことを特徴とする付記１に記載の用途。
バクテロイデス属腸型の２型糖尿病患者のアカルボース治療効果は、血糖降下以外に、インスリン抵抗性の改善、二次胆汁酸の降下、心血管リスク低減の促進を含む、
ことを特徴とする付記１に記載の用途。
（付記７）
前記二次胆汁酸の降下の指標は、ＧＤＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＬＣＡを含み、タウリン結合胆汁酸の降下の指標は、ＴＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＬＣＡ、ＴＵＤＣＡを含む、
ことを特徴とする付記６に記載の用途。
前記二次胆汁酸の降下の指標は、ＧＤＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＬＣＡを含み、タウリン結合胆汁酸の降下の指標は、ＴＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＬＣＡ、ＴＵＤＣＡを含む、
ことを特徴とする付記６に記載の用途。
（付記８）
前記インスリン抵抗性の改善の指標は、空腹時血糖の降下、空腹時Ｃペプチド及びインスリンレベルの降下、ウエストヒップ比の下方制御、ＨＯＭＡインスリン抵抗性指数の下方制御、アディポネクチンの上方制御を含む、
ことを特徴とする付記６に記載の用途。
前記インスリン抵抗性の改善の指標は、空腹時血糖の降下、空腹時Ｃペプチド及びインスリンレベルの降下、ウエストヒップ比の下方制御、ＨＯＭＡインスリン抵抗性指数の下方制御、アディポネクチンの上方制御を含む、
ことを特徴とする付記６に記載の用途。
（付記１０）
２型糖尿病のアカルボース治療効果をスクリーニングするための試薬キットであって、
前記試薬キットは、
生体外糞便サンプルまたは生体外血液サンプルを収集する試薬と、
生体外糞便サンプル内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって腸型を確定する試薬、または、生体外血液サンプル内の二次胆汁酸を測定することによって腸型を確定する試薬と、
を含む、
ことを特徴とする試薬キット。
２型糖尿病のアカルボース治療効果をスクリーニングするための試薬キットであって、
前記試薬キットは、
生体外糞便サンプルまたは生体外血液サンプルを収集する試薬と、
生体外糞便サンプル内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって腸型を確定する試薬、または、生体外血液サンプル内の二次胆汁酸を測定することによって腸型を確定する試薬と、
を含む、
ことを特徴とする試薬キット。
Claims (10)
- 腸管微生物メタゲノム特徴がバクテロイデス属腸型であることをスクリーニングマーカーとして、２型糖尿病患者のアカルボース治療効果をスクリーニングする方法。
- 前記腸管微生物メタゲノム特徴が前記バクテロイデス属腸型であることは、生体外糞便内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって確定される、
請求項１に記載の方法。 - 前記ＰＣＲ増幅は、生体外糞便内の寄生菌ＤＮＡを抽出し、特異に増加させる菌属に対して１６Ｓｒｎａ ＰＣＲ増幅を行うことを含む、
請求項２に記載の方法。 - 前記腸管微生物メタゲノム特徴が前記バクテロイデス属腸型であることは、生体外血液サンプル内の二次胆汁酸を測定することによって確定される、
請求項１に記載の方法。 - 前記二次胆汁酸の測定は、
７５μＬの血液サンプルにつき、３００μＬの内部標準含有メタノールを加え、ターゲット化合物を抽出し且つタンパク質を沈殿させ、ボルテックスし、遠心分離して、上澄み液を吸い取り、凍結乾燥し、５０μＬの２５％（容積）アセトニトリル含有水溶液で再び溶解し、サンプル注入を待つ、サンプル事前処理工程Ｓ１と、
１２９０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ液相及び６４６０Ａトリプル四重極型質量分析計用システムを使用してサンプル分析を行う測定工程Ｓ２と、
を含み、
液相分離では、１００ｍｍ×２．１ｍｍのＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｃ８クロマトグラフカラム、粒子径１．７μｍが使用され、Ａ相が１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液であり、Ｂ相が純粋なアセトニトリルであり、初期時２５％（容積）Ｂ相で、０．５分保留し、その後１２．５分内に４０％（容積）Ｂ相まで直線的に上昇し、次に、１分内に９０％（容積）Ｂ相まで上昇し、且つシステムを３分リンスし、０．５分内に２５％（容積）Ｂ相まで復帰し、２．５分平衡化し、流速が０．３５ｍｌ／分であり、カラム温度が３５℃であり、注入サンプルの容積が５μＬであり、
質量分析スペクトルがＥＳＩの負イオンモードを使用して測定され、メインパラメータは、Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：３５０℃、Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ：４０ｐｓｉ、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｔｅｍｐ：４００℃、Ｓｈｅａｔｈ Ｇａｓ Ｆｌｏｗ：８ｌ／分、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ：３５００Ｖ、Ｎｏｚｚｌｅ ｖｏｌｔａｇｅ：４００Ｖである、
請求項４に記載の方法。 - バクテロイデス属腸型の２型糖尿病患者のアカルボース治療効果は、血糖降下以外に、インスリン抵抗性の改善、二次胆汁酸の降下、心血管リスク低減の促進を含む、
請求項１に記載の方法。 - 前記二次胆汁酸の降下の指標は、ＧＤＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＬＣＡを含み、タウリン結合胆汁酸の降下の指標は、ＴＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＬＣＡ、ＴＵＤＣＡを含む、
請求項６に記載の方法。 - 前記インスリン抵抗性の改善の指標は、空腹時血糖の降下、空腹時Ｃペプチド及びインスリンレベルの降下、ウエストヒップ比の下方制御、ＨＯＭＡインスリン抵抗性指数の下方制御、アディポネクチンの上方制御を含む、
ことを特徴とする請求項６に記載の方法。 - 前記心血管リスク低減の促進の指標は、ＰＤＧＦＡＡ、ＰＤＧＦＡＡＢＢ、エンドセリン、ＶｅｇｆＣ血漿因子の降下を含む、
ことを特徴とする請求項６に記載の方法。 - ２型糖尿病患者のアカルボース治療効果をスクリーニングするための試薬キットであって、
前記試薬キットは、
（ｉ）生体外糞便サンプルまたは生体外血液サンプルを収集する試薬と、
（ｉｉ）生体外糞便サンプル内の寄生菌のＤＮＡに対してシーケンシングまたはＰＣＲ増幅を行うことによって前記２型糖尿病患者の腸管微生物メタゲノム特徴がバクテロイデス属腸型であることを確定する試薬、または、生体外血液サンプル内の二次胆汁酸を測定することによって前記２型糖尿病患者の腸管微生物メタゲノム特徴がバクテロイデス属腸型であることを確定する試薬と、
を含む、
ことを特徴とする試薬キット。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510703463.9 | 2015-10-26 | ||
| CN201510703463.9A CN105296620B (zh) | 2015-10-26 | 2015-10-26 | 肠道宏基因组特征作为2型糖尿病阿卡波糖疗效筛选标志 |
| PCT/CN2015/097566 WO2017071018A1 (zh) | 2015-10-26 | 2015-12-16 | 肠道宏基因组特征作为2型糖尿病阿卡波糖疗效筛选标志 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2018516593A JP2018516593A (ja) | 2018-06-28 |
| JP2018516593A5 true JP2018516593A5 (ja) | 2019-11-14 |
| JP6644133B2 JP6644133B2 (ja) | 2020-02-12 |
Family
ID=55194439
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018511310A Expired - Fee Related JP6644133B2 (ja) | 2015-10-26 | 2015-12-16 | ２型糖尿病患者のアカルボース治療効果のスクリーニング方法及び試薬キット |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20180340225A1 (ja) |
| EP (1) | EP3301185B1 (ja) |
| JP (1) | JP6644133B2 (ja) |
| KR (1) | KR102061985B1 (ja) |
| CN (1) | CN105296620B (ja) |
| WO (1) | WO2017071018A1 (ja) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105950780A (zh) * | 2016-07-22 | 2016-09-21 | 昆明医科大学第附属医院 | 艾滋病相关肠道梭形巨单胞菌移位的特异性检测引物及应用 |
| CN105950779A (zh) * | 2016-07-22 | 2016-09-21 | 昆明医科大学第附属医院 | 艾滋病相关肠道普氏菌移位的特异性检测引物及应用 |
| CN108072704B (zh) * | 2016-11-08 | 2021-05-11 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于液相色谱质谱联用的粪便中胆汁酸的检测方法 |
| CN107625775A (zh) * | 2017-09-12 | 2018-01-26 | 上海市内分泌代谢病研究所 | 一种降糖药在提高人肠共生扭链瘤胃球菌及udca丰度的应用 |
| CN107510697A (zh) * | 2017-09-12 | 2017-12-26 | 上海市内分泌代谢病研究所 | 一种降糖药在阻断肠道共生菌次级胆汁酸生成的应用 |
| CN111134329A (zh) * | 2018-11-06 | 2020-05-12 | 深圳华大生命科学研究院 | 植物性多聚糖作为制备肠型相关的高尿酸血症药物的应用 |
| CN109797190B (zh) * | 2019-03-11 | 2020-05-05 | 上海宝藤生物医药科技股份有限公司 | 一种用于评估ii型糖尿病风险的微生物标志物及其应用 |
| CN110220987B (zh) * | 2019-06-11 | 2021-09-28 | 上海市内分泌代谢病研究所 | 胆汁酸联合标志物在制备用于预测或诊断糖尿病的检测试剂或检测物的用途 |
| CN111370069B (zh) * | 2020-02-26 | 2023-09-12 | 康美华大基因技术有限公司 | 一种人体肠道菌群检测方法、装置及存储介质 |
| CN112458157A (zh) * | 2020-12-01 | 2021-03-09 | 贾卫国 | 一种基于肠道微生物的体外代谢活性检测系统 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1872781A4 (en) | 2005-04-20 | 2009-04-01 | Kissei Pharmaceutical | COMBINED PHARMACEUTICAL PREPARATION FOR THE TREATMENT OF TYPE 2 DIABETES |
| EP2102350A4 (en) * | 2006-12-18 | 2012-08-08 | Univ St Louis | INTESTINAL MICROBIOMA AS A BIOMARKER AND THERAPEUTIC TARGET FOR TREATING OBESITY OR OBESITY-RELATED DISORDER |
| JP6133005B2 (ja) * | 2010-02-25 | 2017-05-24 | 富士フイルム株式会社 | 一次胆汁酸及び二次胆汁酸生成調節剤 |
| CN102477460A (zh) * | 2010-11-24 | 2012-05-30 | 深圳华大基因科技有限公司 | 对宏基因组16s高可变区v6进行测序聚类分析的方法 |
| CN104540962B (zh) * | 2012-08-01 | 2017-09-19 | 深圳华大基因研究院 | 糖尿病生物标志物及其应用 |
| US20150211053A1 (en) * | 2012-08-01 | 2015-07-30 | Bgi-Shenzhen | Biomarkers for diabetes and usages thereof |
| WO2014019408A1 (en) * | 2012-08-01 | 2014-02-06 | Bgi Shenzhen | Biomarkers for diabetes and usages thereof |
| CN104603283B (zh) * | 2012-08-01 | 2017-09-19 | 深圳华大基因研究院 | 确定异常状态相关生物标志物的方法及系统 |
| EP3401396A1 (en) * | 2012-10-03 | 2018-11-14 | Metabogen AB | Treating or preventing atherosclerosis or associated diseases by beta-carotene |
| ES2683826T3 (es) * | 2012-10-17 | 2018-09-28 | Institute National De La Recherche Agronomique | Determinación de la diversidad bacteriana intestinal reducida |
| KR101445243B1 (ko) | 2014-03-28 | 2014-09-29 | 서울대학교산학협력단 | 장내 세균의 군집과 기능의 변화를 이용한 대사성 및 염증성 질환의 조기진단 |
-
2015
- 2015-10-26 CN CN201510703463.9A patent/CN105296620B/zh active Active
- 2015-12-16 EP EP15907079.6A patent/EP3301185B1/en active Active
- 2015-12-16 KR KR1020187003917A patent/KR102061985B1/ko active IP Right Grant
- 2015-12-16 US US15/771,398 patent/US20180340225A1/en not_active Abandoned
- 2015-12-16 JP JP2018511310A patent/JP6644133B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-12-16 WO PCT/CN2015/097566 patent/WO2017071018A1/zh active Application Filing
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2018516593A5 (ja) | ２型糖尿病患者のアカルボース治療効果のスクリーニング方法及び試薬キット | |
| JP6644133B2 (ja) | ２型糖尿病患者のアカルボース治療効果のスクリーニング方法及び試薬キット | |
| CN108990420B (zh) | 肝病相关生物标志物和其使用方法 | |
| Gribovskaja-Rupp et al. | Obesity and colorectal cancer | |
| Hart et al. | Endoscopic pancreas fluid collection: methods and relevance for clinical care and translational science | |
| EP2580596A1 (en) | Methods to diagnose liver diseases | |
| CN110220987B (zh) | 胆汁酸联合标志物在制备用于预测或诊断糖尿病的检测试剂或检测物的用途 | |
| CN115364126A (zh) | 罗伊氏乳酸杆菌在制备多囊卵巢综合征治疗药物中的应用 | |
| Liu et al. | Regulation of gut microbiota of Astragali Radix in treating for chronic atrophic gastritis rats based on metabolomics coupled with 16S rRNA gene sequencing | |
| Bilson et al. | Markers of adipose tissue fibrogenesis associate with clinically significant liver fibrosis and are unchanged by synbiotic treatment in patients with NAFLD | |
| CN110694067A (zh) | 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用 | |
| Feng et al. | Leucine aminopeptidase 3: a promising serum biomarker candidate for nonalcoholic steatohepatitis diagnosis | |
| JP7031104B2 (ja) | 難治性夜間頻尿・夜間多尿症バイオマーカー、これを用いた検査方法及び難治性夜間頻尿・夜間多尿症の予防剤又は改善剤のスクリーニング方法 | |
| Hasan et al. | The association among serum leptin, insulin and insulin resistance in Iraqi patients with cholelithiasis | |
| Xiaoying | Proteomics Research on Gastric Intraepithelial Neoplasia | |
| Saito et al. | Feminizing adrenocortical carcinoma with selective suppression of follicle-stimulating hormone secretion and disorganized steroidogenesis: a case report and literature review | |
| CN117310059B (zh) | 用于早期诊断或监测克罗恩病的血浆代谢标志物组合及应用 | |
| KR102343165B1 (ko) | 생물학적 시료를 이용한 대장암 발암물질 노출 여부 진단방법 | |
| Samir et al. | Urinary biomarkers analysis as a diagnostic tool for early detection of pancreatic adenocarcinoma: Molecular quantification approach | |
| Xu et al. | Vaginal microbiota transplantation alleviates vaginal atrophy in ovariectomized mice | |
| Mustafa et al. | Correlation of Serum Adiponectin with Hepatic Fibrosis in Patients with Non-Alcoholic Fatty Liver Disease | |
| JP2022064961A (ja) | 難治性夜間頻尿・夜間多尿症バイオマーカーの測定方法及び難治性夜間頻尿・夜間多尿症の予防剤又は改善剤のスクリーニング方法 | |
| JP2024520100A (ja) | 肝癌診断装置 | |
| CN115128257A (zh) | 肝癌发病风险预测的代谢标志物及其应用 | |
| El Sheashaey et al. | Studying of serum bile acids metabolomics as potential biomarkers for differentiation between hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma |