JP2018514220A5 - - Google Patents
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Description
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、それぞれが個々に参照により組み込まれているかのように同じ程度まで、それらの全体が参照により明示的に組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
(構成1)
ナイーブ型多能性幹細胞の誘導方法であって、有効量のリゾホスファチジン酸受容体(LPAR)のアゴニストを含む培養培地中でプライム型多能性幹細胞を培養し、それにより、前記プライム型多能性幹細胞をナイーブ型多能性幹細胞に復帰させることを含む、方法。
(構成2)
ナイーブ型多能性幹細胞の、そのナイーブ状態での維持方法であって、有効量のLPARのアゴニストを含む培養培地中で前記ナイーブ型多能性幹細胞を培養することを含む、方法。
(構成3)
前記培地が、有効量の骨形成タンパク質(BMP)、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの1つ以上をさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成4)
前記培養培地が、有効量のシグナル伝達兼転写活性化因子3(STAT3)をさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成5)
前記STAT3活性化因子が、白血病抑制因子(LIF)である、構成4に記載の方法。
(構成6)
前記LPARのアゴニストが、1−オレオイル−2−メチル−sn−グリセロ−3−ホスホチオネート(OMPT)、リゾホスファチジン酸(LPA)、またはこれらの任意の組み合わせである、構成1または構成2に記載の方法。
(構成7)
前記有効量の前記LPARのアゴニストが、約10nM〜約5μMである、構成1または構成2に記載の方法。
(構成8)
前記酸化防止剤が、n−アセチルシステインである、構成3に記載の方法。
(構成9)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成3に記載の方法。
(構成10)
前記培養培地が、有効量のERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、及びPKC阻害剤のうちの少なくとも1つをさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成11)
前記培養培地が、有効量のアクチビンA、トランスフォーミング成長因子−β(TGF−β)、塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成12)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、胚性幹細胞、胚盤胞、誘導多能性幹細胞、及び体細胞からなる群から選択される、構成1または構成2に記載の方法。
(構成13)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、ヒト細胞である、構成1または構成2に記載の方法。
(構成14)
フィブロネクチン層またはラミニン層上で前記プライム型多能性幹細胞及び/またはナイーブ型多能性幹細胞を培養することをさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成15)
前記プライム型多能性幹細胞が、10日未満で前記ナイーブ型多能性幹細胞に復帰する、構成1に記載の方法。
(構成16)
前記プライム型多能性幹細胞が、少なくとも1つの外因性リプログラミング因子、少なくとも1つの外因性RNA、またはこれらの両方を発現する、構成1に記載の方法。
(構成17)
前記少なくとも1つの外因性リプログラミング因子が、Oct4、Sox2、L−Myc、C−Myc、Klf4、またはLin28である、構成16に記載の方法。
(構成18)
前記少なくとも1つの外因性RNAが、p53またはLin28の発現を下方調節する、構成16に記載の方法。
(構成19)
ある一定期間の間、低酸素条件下で前記プライム型多能性幹細胞及び/または前記ナイーブ型多能性幹細胞を培養するステップをさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成20)
構成1〜19のいずれか1項に記載の方法により調製された、単離されたナイーブ型多能性幹細胞。
(構成21)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、X染色体不活性化特異的転写産物(XIST)を発現する、構成20に記載の単離されたナイーブ型多能性幹細胞。
(構成22)
単離されたナイーブ型多能性幹細胞と、有効量のLPARのアゴニストと、を含む、組成物。
(構成23)
有効量のBMP、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの1つ以上をさらに含む、構成22に記載の組成物。
(構成24)
有効量のSTAT3活性化因子をさらに含む、構成22に記載の組成物。
(構成25)
前記STAT3活性化因子が、白血病抑制因子(LIF)である、構成24に記載の組成物。
(構成26)
前記LPARのアゴニストが、OMPT、LPA、またはこれらの組み合わせである、構成22に記載の組成物。
(構成27)
前記LPARのアゴニストが、約10nM〜約5μMの濃度で前記培地中に存在する、構成22に記載の組成物。
(構成28)
前記酸化防止剤が、n−アセチルシステインである、構成23に記載の組成物。
(構成29)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成23に記載の組成物。
(構成30)
有効量のERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成22に記載の組成物。
(構成31)
有効量のアクチビンA、TGFβ、bFGF、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成22に記載の組成物。
(構成32)
前記単離されたナイーブ型多能性幹細胞の少なくとも一部が、少なくとも1つの外因性リプログラミング因子、少なくとも1つの外因性RNA、またはこれらの両方を発現するように改変されている、構成22に記載の組成物。
(構成33)
前記少なくとも1つのリプログラミング因子が、Oct4、Sox2、L−Myc、C−Myc、Klf4、またはLin28である、構成32に記載の組成物。
(構成34)
前記少なくとも1つのRNAが、p53またはLin28の発現を下方調節する、構成33に記載の組成物。
(構成35)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、低酸素条件下で培養される、構成22に記載の組成物。
(構成36)
10nM〜約10μMのLPARのアゴニストを含む、細胞培養培地。
(構成37)
前記細胞培養培地が、有効量のBMP、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの1つ以上をさらに含む、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成38)
前記細胞培養培地が、有効量のSTAT3活性化因子をさらに含む、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成39)
前記STAT3活性化因子が、LIFである、構成38に記載の細胞培養培地。
(構成40)
前記LPARのアゴニストが、OMPT、LPA、またはこれらの任意の組み合わせである、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成41)
前記LPARのアゴニストが、約10nM〜約5μMの濃度で前記培地中に存在する、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成42)
前記酸化防止剤が、n−アセチルシステインである、構成37に記載の細胞培養培地。
(構成43)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成37に記載の細胞培養培地。
(構成44)
前記細胞培養培地が、有効量のERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成45)
bFGFと、アクチビンAまたはトランスフォーミング成長因子−β(TGF−β)のうちの1つ以上と、を含む、プライム型多能性幹細胞を培養するための細胞培養培地。
(構成46)
ナイーブ型多能性幹細胞の誘導方法であって、培養培地中でプライム型多能性幹細胞を培養することを含み、前記培養培地が、ERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせを実質的に含まない、方法。
(構成47)
単離されたプライム型多能性幹細胞であって、前記単離されたプライム型多能性幹細胞が、LPARのアゴニストを含む培地の存在下でインキュベートされ、前記プライム型ヒト多能性幹細胞が、インキュベーション中またはインキュベーション後に、ナイーブ型多能性幹細胞に復帰される、単離されたプライム型多能性幹細胞。
(構成48)
前記培地が、有効量の骨形成タンパク質(BMP)、酸化防止剤、脱メチル化酵素、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成47に記載の細胞。
(構成49)
前記培地が、有効量のSTAT3活性化因子をさらに含む、構成47に記載の細胞。
(構成50)
前記STAT3活性化因子が、LIFである、構成49に記載の細胞。
(構成51)
前記LPARが、LPAR1である、構成47に記載の細胞。
(構成52)
前記LPARのアゴニストが、OMPT、LPA、またはこれらの組み合わせである、構成48に記載の細胞。
(構成53)
前記酸化防止剤が、n−アセチルシステインである、構成49に記載の細胞。
(構成54)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成49に記載の細胞。
(構成55)
前記培養培地が、有効量のERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成48に記載の細胞。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
(構成1)
ナイーブ型多能性幹細胞の誘導方法であって、有効量のリゾホスファチジン酸受容体(LPAR)のアゴニストを含む培養培地中でプライム型多能性幹細胞を培養し、それにより、前記プライム型多能性幹細胞をナイーブ型多能性幹細胞に復帰させることを含む、方法。
(構成2)
ナイーブ型多能性幹細胞の、そのナイーブ状態での維持方法であって、有効量のLPARのアゴニストを含む培養培地中で前記ナイーブ型多能性幹細胞を培養することを含む、方法。
(構成3)
前記培地が、有効量の骨形成タンパク質(BMP)、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの1つ以上をさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成4)
前記培養培地が、有効量のシグナル伝達兼転写活性化因子3(STAT3)をさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成5)
前記STAT3活性化因子が、白血病抑制因子(LIF)である、構成4に記載の方法。
(構成6)
前記LPARのアゴニストが、1−オレオイル−2−メチル−sn−グリセロ−3−ホスホチオネート(OMPT)、リゾホスファチジン酸(LPA)、またはこれらの任意の組み合わせである、構成1または構成2に記載の方法。
(構成7)
前記有効量の前記LPARのアゴニストが、約10nM〜約5μMである、構成1または構成2に記載の方法。
(構成8)
前記酸化防止剤が、n−アセチルシステインである、構成3に記載の方法。
(構成9)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成3に記載の方法。
(構成10)
前記培養培地が、有効量のERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、及びPKC阻害剤のうちの少なくとも1つをさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成11)
前記培養培地が、有効量のアクチビンA、トランスフォーミング成長因子−β(TGF−β)、塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成12)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、胚性幹細胞、胚盤胞、誘導多能性幹細胞、及び体細胞からなる群から選択される、構成1または構成2に記載の方法。
(構成13)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、ヒト細胞である、構成1または構成2に記載の方法。
(構成14)
フィブロネクチン層またはラミニン層上で前記プライム型多能性幹細胞及び/またはナイーブ型多能性幹細胞を培養することをさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成15)
前記プライム型多能性幹細胞が、10日未満で前記ナイーブ型多能性幹細胞に復帰する、構成1に記載の方法。
(構成16)
前記プライム型多能性幹細胞が、少なくとも1つの外因性リプログラミング因子、少なくとも1つの外因性RNA、またはこれらの両方を発現する、構成1に記載の方法。
(構成17)
前記少なくとも1つの外因性リプログラミング因子が、Oct4、Sox2、L−Myc、C−Myc、Klf4、またはLin28である、構成16に記載の方法。
(構成18)
前記少なくとも1つの外因性RNAが、p53またはLin28の発現を下方調節する、構成16に記載の方法。
(構成19)
ある一定期間の間、低酸素条件下で前記プライム型多能性幹細胞及び/または前記ナイーブ型多能性幹細胞を培養するステップをさらに含む、構成1または構成2に記載の方法。
(構成20)
構成1〜19のいずれか1項に記載の方法により調製された、単離されたナイーブ型多能性幹細胞。
(構成21)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、X染色体不活性化特異的転写産物(XIST)を発現する、構成20に記載の単離されたナイーブ型多能性幹細胞。
(構成22)
単離されたナイーブ型多能性幹細胞と、有効量のLPARのアゴニストと、を含む、組成物。
(構成23)
有効量のBMP、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの1つ以上をさらに含む、構成22に記載の組成物。
(構成24)
有効量のSTAT3活性化因子をさらに含む、構成22に記載の組成物。
(構成25)
前記STAT3活性化因子が、白血病抑制因子(LIF)である、構成24に記載の組成物。
(構成26)
前記LPARのアゴニストが、OMPT、LPA、またはこれらの組み合わせである、構成22に記載の組成物。
(構成27)
前記LPARのアゴニストが、約10nM〜約5μMの濃度で前記培地中に存在する、構成22に記載の組成物。
(構成28)
前記酸化防止剤が、n−アセチルシステインである、構成23に記載の組成物。
(構成29)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成23に記載の組成物。
(構成30)
有効量のERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成22に記載の組成物。
(構成31)
有効量のアクチビンA、TGFβ、bFGF、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成22に記載の組成物。
(構成32)
前記単離されたナイーブ型多能性幹細胞の少なくとも一部が、少なくとも1つの外因性リプログラミング因子、少なくとも1つの外因性RNA、またはこれらの両方を発現するように改変されている、構成22に記載の組成物。
(構成33)
前記少なくとも1つのリプログラミング因子が、Oct4、Sox2、L−Myc、C−Myc、Klf4、またはLin28である、構成32に記載の組成物。
(構成34)
前記少なくとも1つのRNAが、p53またはLin28の発現を下方調節する、構成33に記載の組成物。
(構成35)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、低酸素条件下で培養される、構成22に記載の組成物。
(構成36)
10nM〜約10μMのLPARのアゴニストを含む、細胞培養培地。
(構成37)
前記細胞培養培地が、有効量のBMP、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの1つ以上をさらに含む、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成38)
前記細胞培養培地が、有効量のSTAT3活性化因子をさらに含む、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成39)
前記STAT3活性化因子が、LIFである、構成38に記載の細胞培養培地。
(構成40)
前記LPARのアゴニストが、OMPT、LPA、またはこれらの任意の組み合わせである、構成36に記載の細胞培養培地。
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前記LPARのアゴニストが、約10nM〜約5μMの濃度で前記培地中に存在する、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成42)
前記酸化防止剤が、n−アセチルシステインである、構成37に記載の細胞培養培地。
(構成43)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成37に記載の細胞培養培地。
(構成44)
前記細胞培養培地が、有効量のERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成36に記載の細胞培養培地。
(構成45)
bFGFと、アクチビンAまたはトランスフォーミング成長因子−β(TGF−β)のうちの1つ以上と、を含む、プライム型多能性幹細胞を培養するための細胞培養培地。
(構成46)
ナイーブ型多能性幹細胞の誘導方法であって、培養培地中でプライム型多能性幹細胞を培養することを含み、前記培養培地が、ERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせを実質的に含まない、方法。
(構成47)
単離されたプライム型多能性幹細胞であって、前記単離されたプライム型多能性幹細胞が、LPARのアゴニストを含む培地の存在下でインキュベートされ、前記プライム型ヒト多能性幹細胞が、インキュベーション中またはインキュベーション後に、ナイーブ型多能性幹細胞に復帰される、単離されたプライム型多能性幹細胞。
(構成48)
前記培地が、有効量の骨形成タンパク質(BMP)、酸化防止剤、脱メチル化酵素、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成47に記載の細胞。
(構成49)
前記培地が、有効量のSTAT3活性化因子をさらに含む、構成47に記載の細胞。
(構成50)
前記STAT3活性化因子が、LIFである、構成49に記載の細胞。
(構成51)
前記LPARが、LPAR1である、構成47に記載の細胞。
(構成52)
前記LPARのアゴニストが、OMPT、LPA、またはこれらの組み合わせである、構成48に記載の細胞。
(構成53)
前記酸化防止剤が、n−アセチルシステインである、構成49に記載の細胞。
(構成54)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成49に記載の細胞。
(構成55)
前記培養培地が、有効量のERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成48に記載の細胞。
Claims (20)
- ナイーブ型多能性幹細胞を誘導するための組成物であって、有効量の1−オレオイル−2−メチル−sn−グリセロ−3−ホスホチオネート(OMPT)、リゾホスファチジン酸(LPA)、又はこれらの組み合わせを含む、前記組成物。
- ナイーブ型多能性幹細胞をそのナイーブ状態で維持するための組成物であって、有効量の1−オレオイル−2−メチル−sn−グリセロ−3−ホスホチオネート(OMPT)、リゾホスファチジン酸(LPA)、又はこれらの組み合わせを含む、前記組成物。
- 有効量の骨形成タンパク質(BMP)、酸化防止剤、脱メチル化酵素、ERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、アクチビンA、トランスフォーミング成長因子−β(TGF−β)、又は塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)のうちの1つ以上をさらに含む、請求項1又は請求項2に記載の組成物。
- 白血病抑制因子(LIF)をさらに含む、請求項1又は請求項2に記載の組成物。
- 前記1−オレオイル−2−メチル−sn−グリセロ−3−ホスホチオネート(OMPT)、リゾホスファチジン酸(LPA)、又はこれらの組み合わせが、約10nM〜約5μMである、請求項1又は請求項2に記載の組成物。
- 前記酸化防止剤がn−アセチルシステインであるか、前記脱メチル化酵素がアスコルビン酸であるか、又はその両方である、請求項3に記載の組成物。
- 前記ナイーブ型多能性幹細胞が、胚性幹細胞、胚盤胞、誘導多能性幹細胞、及び体細胞からなる群から選択される、請求項1又は請求項2に記載の組成物。
- 前記ナイーブ型多能性幹細胞が、ヒト細胞である、請求項1又は請求項2に記載の組成物。
- プライム型多能性幹細胞が、10日未満で前記ナイーブ型多能性幹細胞に復帰する、請求項1に記載の組成物。
- 請求項1〜9のいずれか1項に記載の組成物を使用して調製された、単離されたナイーブ型多能性幹細胞。
- 前記ナイーブ型多能性幹細胞が、X染色体不活性化特異的転写産物(XIST)を発現する、請求項10に記載の単離されたナイーブ型多能性幹細胞。
- 10nM〜約10μMの1−オレオイル−2−メチル−sn−グリセロ−3−ホスホチオネート(OMPT)、リゾホスファチジン酸(LPA)、又はこれらの組み合わせを含む、細胞培養培地。
- 前記細胞培養培地が、有効量のBMP、酸化防止剤、脱メチル化酵素、ERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、アクチビンA、TGF−β、又はbFGFのうちの1つ以上をさらに含む、請求項12に記載の細胞培養培地。
- 前記細胞培養培地が、有効量のLIFをさらに含む、請求項12に記載の細胞培養培地。
- bFGFと、アクチビンA又はトランスフォーミング成長因子−β(TGF−β)のうちの1つ以上とを含む、プライム型多能性幹細胞を培養するための細胞培養培地。
- インビトロでのナイーブ型多能性幹細胞の誘導方法であって、培養培地中でプライム型多能性幹細胞を培養することを含み、該培養培地が、ERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、又はこれらの任意の組み合わせを実質的に含まない、前記方法。
- 1−オレオイル−2−メチル−sn−グリセロ−3−ホスホチオネート(OMPT)、リゾホスファチジン酸(LPA)、又はこれらの組み合わせをさらに含む、請求項16に記載の方法。
- 単離されたプライム型多能性幹細胞であって、該単離されたプライム型多能性幹細胞が、1−オレオイル−2−メチル−sn−グリセロ−3−ホスホチオネート(OMPT)、リゾホスファチジン酸(LPA)、又はこれらの組み合わせを含む培地の存在下でインキュベートされ、該プライム型ヒト多能性幹細胞が、インキュベーション中又はインキュベーション後に、ナイーブ型多能性幹細胞に復帰される、前記単離されたプライム型多能性幹細胞。
- 前記培地が、有効量の骨形成タンパク質(BMP)、酸化防止剤、脱メチル化酵素、ERK1/2阻害剤、GSK3β阻害剤、PKC阻害剤、アクチビンA、トランスフォーミング成長因子−β(TGF−β)、若しくは塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)、又はこれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項18に記載の細胞。
- 前記培地が、LIFをさらに含む、請求項18に記載の細胞。
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