JP2018511628A - 部位特異的な抗体−薬物複合体 - Google Patents
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Abstract
Description
抗体治療は、癌、免疫学的障害、及び血管新生障害を有する患者の標的化治療を目的として確立されてきた(Carter,P.(2006)Nature Reviews Immunology 6:343−357)。癌治療において腫瘍細胞を殺傷または抑制するための細胞傷害性または細胞分裂阻害性の薬剤、すなわち薬物の局所送達を目的とする抗体−薬物複合体(ADC)、すなわち免疫複合体は、薬物部分を腫瘍に送達し、そこで細胞内に薬物部分を蓄積させることを狙って使用される(Junutula,et al.,2008b Nature Biotech.,26(8):925−932;Dornan et al(2009)Blood 114(13):2721−2729;US7521541;US7723485;WO2009/052249;McDonagh(2006)Protein Eng.Design & Sel.19(7):299−307;Doronina et al(2006)Bioconj.Chem.17:114−124;Erickson et al(2006)Cancer Res.66(8):1−8;Sanderson et al(2005)Clin.Cancer Res.11:843−852;Jeffrey et al(2005)J.Med.Chem.48:1344−1358;Hamblett et al(2004)Clin.Cancer Res.10:7063−7070)。
ADCでは、細胞傷害性薬物は抗体に対して、典型的には、部位非特異的様式でリジンの側鎖を介して複合化されるか、または抗体に存在する鎖間ジスルフィド結合を還元して活性化した元々のシステインスルフヒドリル基とすることによって複合化されてきた。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、(ii)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、及び(iii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによるHC226及びHC229を未置換で保持し、(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システイン残基κLC214または鎖間システイン残基λLC213のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ(iii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるHC220に複合化される。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号120の位置14におけるシステインに複合化される。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号130の位置14におけるシステインに複合化される。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、(ii)CLドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、かつ(iii)CH1ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによるHC226及びHC229を未置換で保持し、(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインκLC214または鎖間システインλLC213をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、かつ(iii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CLドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるκLC214またはλLC213に複合化される。
配列番号110の位置103におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
配列番号120の位置14及び位置103におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
配列番号130の位置14におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
配列番号140の位置14におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ(iii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによるHC226及びHC229のそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システイン残基κLC214または鎖間システイン残基λLC213のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ(iii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるHC220に複合化される。
配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。
配列番号120の位置103、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号120の位置102におけるシステインもまた、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号120の位置14におけるシステインに複合化される。
配列番号120の位置14、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号120の位置102におけるシステインもまた、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号120の位置103におけるシステインに複合化される。
配列番号130の位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号130の位置14におけるシステインに複合化される。
配列番号140の位置106及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)CLドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、かつ(iii)CH1ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによるHC226及びHC229のそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインκLC214または鎖間システインλLC213をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、かつ(iii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CLドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるκLC214またはλLC213に複合化される。
配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
配列番号120の位置14、位置103、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
配列番号130の位置14、位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
配列番号140の位置14、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
(1)システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基の置換を1つまたは複数含み、抗体に対する薬物部分の複合化を目的とする未置換の鎖間システイン残基を少なくとも1つ保持し;かつ(2)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基の置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸(すなわち、「野生型」配列に見られるものと同一ではないアミノ酸)によるものである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、(ii)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、(iii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含み、かつ(iv)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基のアミノ酸置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号130の位置164におけるロイシン、及び/または配列番号130の位置165におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号130の位置14におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号130の位置164及び位置165におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号140の位置115におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、(ii)CLドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、(iii)CH1ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ(iv)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基のアミノ酸置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
配列番号110の位置103におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
配列番号130の位置14におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号130の位置164におけるロイシン、及び/または配列番号130の位置165におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号130の位置164及び位置165におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
配列番号140の位置14におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号140の位置115におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、(iii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含み、かつ(iv)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基のアミノ酸置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
配列番号130の位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号130の位置164におけるロイシン、及び/または配列番号130の位置165におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号130の位置14におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号130の位置164及び位置165におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
配列番号140の位置106及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
ならびに配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号140の位置115におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)CLドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、(iii)CH1ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ(iv)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基のアミノ酸置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
配列番号130の位置14、位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号130の位置164におけるロイシン、及び/または配列番号130の位置165におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号130の位置164及び位置165におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
配列番号140の位置14、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号140の位置115におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、PBD薬物部分を含む。ピロロベンゾジアゼピン(PBD)のいくつかは、特定のDNA配列を認識して結合する能力を有しており、この認識結合に好ましい配列は、PuGPuである。最初のPBD抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンは、1965年に発見された(Leimgruber,et al.,J.Am.Chem.Soc.,87,5793−5795(1965);Leimgruber,et al.,J.Am.Chem.Soc.,87,5791−5793(1965))。それ以来、天然起源のPBDが多く報告されており、さまざまな類似体に対する合成経路が開発され、これまでに開発された合成経路の数は10を超えている(Thurston,et al.,Chem.Rev.1994,433−465(1994);Antonow,D.and Thurston,D.E.,Chem.Rev.2011 111(4),2815−2864)。ファミリーのメンバーには、アッベイマイシン(abbeymycin)(Hochlowski,et al.,J.Antibiotics,40,145−148(1987))、チカマイシン(chicamycin)(Konishi,et al.,J.Antibiotics,37,200−206(1984))、DC−81(日本国特許58−180 487;Thurston,et al.,Chem.Brit.,26,767−772(1990);Bose,et al.,Tetrahedron,48,751−758(1992))、マゼトラマイシン(mazethramycin)(Kuminoto,et al.,J.Antibiotics,33,665−667(1980))、ネオトラマイシンA(neothramycins A)及びネオトラマイシンB(neothramycin B)(Takeuchi,et al.,J.Antibiotics,29,93−96(1976))、ポロトラマイシン(porothramycin)(Tsunakawa,et al.,J.Antibiotics,41,1366−1373(1988))、プロトラカルシン(prothracarcin)(Shimizu,et al,J.Antibiotics,29,2492−2503(1982);Langley and Thurston,J.Org.Chem.,52,91−97(1987))、シバノマイシン(sibanomicin)(DC−102)(Hara,et al.,J.Antibiotics,41,702−704(1988);Itoh,et al.,J.Antibiotics,41,1281−1284(1988))、シビロマイシン(sibiromycin)(Leber,et al.,J.Am.Chem.Soc.,110,2992−2993(1988))、ならびにトママイシン(tomamycin)(Arima,et al.,J.Antibiotics,25,437−444(1972))が含まれる。PBDは、下記の一般構造を有する:
本発明者らは、薬物単位(DL)が特定の鎖間システイン残基に複合化した複合体が、予想外かつ有利な特性を有することを見出した。こうした特性には、向上した有効性及び安定性、改善した製造容易性、ならびに減少した全身毒性が含まれる。
式中:
Lは、PSMAに結合する抗体(Ab)であり;
C2’とC3’との間に二重結合が存在するとき、R12は、
(ia)ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、C1−7アルキル、C3−7ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−C1−3アルキレンを含む群から選択される1つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたC5−10アリール基;
(ib)C1−5飽和脂肪族アルキル;
(ic)C3−6飽和シクロアルキル;
(id)R21、R22、及びR23が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、R12基における炭素原子の総数が5以下である、
(if)R24が、Hと、C1−3飽和アルキルと、C2−3アルケニルと、C2−3アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
C2’とC3’との間に単結合が存在するとき、
R12は、
R6及びR9は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、ニトロ、Me3Sn、及びハロから独立して選択され;
ここで、R及びR’は、任意選択で置換されたC1−12アルキル基、C3−20ヘテロシクリル基、及びC5−20アリール基から独立して選択され;
R7は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR’、ニトロ、Me3Sn、及びハロから選択され;
R’’は、C3−12アルキレン基であり、当該C3−12アルキレン基の鎖は、例えば、O、S、NRN2(RN2は、HもしくはC1−4アルキルである)といった、1つもしくは複数のヘテロ原子、及び/または例えば、ベンゼンもしくはピリジンといった、1つもしくは複数の芳香族環によって分断され得るものであり;
Y及びY’は、O、S、またはNHから選択され;
R6’、R7’、R9’は、それぞれR6、R7、及びR9と同一の群から選択され;
[式I]
RL1’は、抗体(Ab)への連結のためのリンカーであり;
R11aは、OH、ORA(RAは、C1−4アルキルである)、及びSOzM(zは、2または3である)から選択され、かつMは、医薬的に許容可能な一価の陽イオンであり;
R20及びR21は、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R20は、H及びRCから選択され、ここで、RCは、キャッピング基(capping group)であり;
R21は、OH、ORA、及びSOzMから選択され;
C2とC3との間に二重結合が存在するとき、R2は、
(ia)ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、C1−7アルキル、C3−7ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−C1−3アルキレンを含む群から選択される1つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたC5−10アリール基;
(ib)C1−5飽和脂肪族アルキル;
(ic)C3−6飽和シクロアルキル;
(id)R11、R12、及びR13が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、R2基における炭素原子の総数が5以下である、
(if)R14が、Hと、C1−3飽和アルキルと、C2−3アルケニルと、C2−3アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
C2とC3との間に単結合が存在するとき、
R2は、
[式II]
R22は、式IIIa、式IIIb、または式IIIc:
(a)Aが、C5−7アリール基であり、
(i)Q1が、単結合であり、Q2が、単結合及び−Z−(CH2)n−から選択され、ここで、Zが、単結合、O、S、及びNHから選択され、nが、1〜3であるか;または
(ii)Q1が、−CH=CH−であり、Q2が、単結合である、
Xは、O−RL2’、S−RL2’、CO2−RL2’、CO−RL2’、NH−C(=O)−RL2’、NHNH−RL2’、CONHNH−RL2’、
RL2’は、抗体(Ab)への連結のためのリンカーであり;
R10及びR11は、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R10は、Hであり、R11は、OH、ORA、及びSOzMから選択され;
R30及びR31は、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R30は、Hであり、R31は、OH、ORA、及びSOzMから選択される。
[式I及び式II]
式中:
(1)抗体は、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含み、抗体に対する薬物部分の複合化は、鎖間システイン残基で生じ;かつ/または
(2)抗体は、Kabatに示されるEUインデックスの位置234におけるアミノ酸の置換、及び/もしくはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を含む。
RL1は、抗体(Ab)への複合化に適したリンカーであり;
R22Lは、式IIIaL、式IIIbL、または式IIIcL:
XLは、O−RL2、S−RL2、CO2−RL2、CO−RL2、N=C=O−RL2、NHNH−RL2、CONHNH−RL2、
RL2は、抗体(Ab)への複合化に適したリンカーであり;
かつ残りの基はすべて、第1の態様に定義されるものである。
または
本開示は、対象における好ましい部位へのPBD化合物の供給における使用に適している。複合体は、リンカーのいかなる部分も保持しない活性PBD化合物の遊離を可能にし得る。そのような場合、PBD化合物の反応性に影響する可能性がある残部は存在しない。
ConjB及びConjFであれば、化合物RelB:
ConjCであれば、化合物RelC:
ConjDであれば、化合物RelD:
ConjE及びConjHであれば、化合物RelE:
かつConjGであれば、化合物RelG:
第1の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含む。
天然起源の抗体は、一般に、2つの大型の重鎖、及び2つ小型の軽鎖を含む。天然の全長抗体の場合、こうした鎖は、連結によって一緒になって、「Y型」タンパク質を形成する。重鎖及び軽鎖は、ジスルフィド結合を介してお互いを連結することができるシステインアミノ酸を含む。重鎖は、それぞれの鎖に存在するシステインアミノ酸の間にジスルフィド結合が生じることによって抗体においてお互いが連結される。軽鎖は、鎖に存在するシステインアミノ酸の間にジスルフィド結合が生じることによって同様に重鎖に連結される。そのようなジスルフィド結合は、一般に、遊離システインアミノ酸のチオール側鎖部分の間で形成される。天然起源の抗体において、典型的には、こうした鎖間結合に関与するシステインアミノ酸は、本明細書では、「鎖間システイン残基」または「鎖間システイン」と記載される。例えば、IgG1アイソタイプでは、重鎖のそれぞれに特定のシステインアミノ酸が3つ(Kabatに示されるEUインデックスの「HC」−220、226、及び229)、軽鎖のそれぞれに特定のシステインが1つ(「LC」−κ(カッパー)214またはλ(ラムダ)213)存在し、こうした特定のシステインは、「鎖間システイン」である。この理由は、そうしたものが、一般に、抗体鎖の間に生じるジスルフィド結合に関与するためである。
上記のとおり、本明細書に記載の複合体の抗体は、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含む。鎖間システインと置換されるアミノ酸は、典型的には、チオール部分を含まないものであり、バリン、セリン、スレオニン、アラニン、グリシン、ロイシン、イソロイシン、他の天然起源のアミノ酸、または非天然起源のアミノ酸であることが多い。いくつかの好ましい実施形態では、鎖間システイン残基と置換されるアミノ酸は、バリンである。
本明細書に記載の複合体の抗体は、抗体に対する薬物部分の複合化を目的とする未置換の鎖間システイン残基を少なくとも1つ保持する。抗体において保持される鎖間システイン残基の数は、1つ以上であるが、親(天然)抗体における鎖間システイン残基の総数には満たない。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、鎖間システイン残基を少なくとも1つ、少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つ、少なくとも6つ、または少なくとも7つ有する。典型的な実施形態では、抗体は、偶数の鎖間システイン残基を有する(例えば、少なくとも2つ、少なくとも4つ、少なくとも6つ、または少なくとも8つ)。いくつかの実施形態では、抗体が有する鎖間システイン残基は、8つ未満である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する軽鎖、及び(ii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システイン残基κLC214または鎖間システイン残基λLC213のアミノ酸置換を有する軽鎖、及び(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220を未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるHC220に複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、(ii)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ(iii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによるHC226及びHC229を未置換で保持し、(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システイン残基κLC214または鎖間システイン残基λLC213のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ(iii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220を未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるHC220に複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、(ii)CLドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する軽鎖を含み、かつ(iii)CH1ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによるHC226及びHC229を未置換で保持し、(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインκLC214または鎖間システインλLC213を未置換で保持する軽鎖を含み、かつ(iii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CLドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるκLC214またはλLC213に複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ(iii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによるHC226及びHC229のそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システイン残基κLC214または鎖間システイン残基λLC213のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ(iii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220を未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるHC220に複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、(ii)CLドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する軽鎖を含み、かつ(iii)CH1ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)Kabatに示されるEUインデックスによるHC226及びHC229のそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインκLC214または鎖間システインλLC213を未置換で保持する軽鎖を含み、かつ(iii)Kabatに示されるEUインデックスによる鎖間システインHC220のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、CLドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Kabatに示されるEUインデックスによるκLC214またはλLC213に複合化される。
下記の表1では、特定の抗体アイソタイプの重鎖定常領域及び軽鎖定常領域における鎖間システインの、Kabatに示されるEUインデックスによる位置が、本明細書に開示の配列に対する参照と共に示される。抗体または抗体断片に存在する鎖間システイン位置はそれぞれ、システインではないアミノ酸で置換され得る。
AbLJ重鎖
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号130のアミノ酸配列もしくはその断片、または配列番号140のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステイン、配列番号120の位置14におけるシステイン、配列番号130の位置14におけるシステイン、または配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号110の位置103におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、配列番号111では、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号110の位置103におけるシステインは、セリン残基によって置換されている。配列番号112では、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号110の位置103におけるシステインは、バリン残基によって置換されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、配列番号113では、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインはそれぞれ、セリン残基によって置換されている。配列番号114では、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインはそれぞれ、バリン残基によって置換されている。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。いくつかの実施形態では、配列番号110の位置109におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置112におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。いくつかの実施形態では、配列番号110の位置112におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置109におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、配列番号115では、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインはそれぞれ、セリン残基によって置換されている。配列番号116では、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインはそれぞれ、バリン残基によって置換されている。いくつかの実施形態では、配列番号110の位置109におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置112におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。いくつかの実施形態では、配列番号110の位置112におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置109におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号150のアミノ酸配列もしくはその断片、または配列番号160のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号120のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号120の位置14におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号130のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号130の位置14におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号110の位置103におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号120のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号120の位置14及び位置103におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号130のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号130の位置14におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号140の位置14におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号120のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号120の位置103、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号120のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号120の位置14、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号130のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号130の位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号140の位置106及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号120のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号120の位置14、位置103、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号130のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号130の位置14、位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号140の位置14、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。
第2の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基の置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を含む。抗体が、こうした置換の一方、または好ましくは両方を有するADCでは、こうした特定の変異を欠いた抗体を含み、それ以外は同一のADCと比較すると、忍容性が改善し、血中半減期が増加することが明らかとなり、これは、予想外のことであった。
Hezareh,M.et al.,Journal of Virology,Vol.75,No.24,pp.12161−12168(2001)では、Kabat EUによる234におけるロイシン残基と、Kabat EUによる235におけるロイシン残基と、の両方がアラニンで置換された重鎖を含むIgG1抗体変異体が開示されており、その抗体は、その参考文献の中で「IgG1 b12(L234A,L235A)」として説明されている。Hazarehらは、IgG1 b12(L234A,L235A)をADCの一部としては開示していない。
したがって、第2の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基の置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を含む。好ましくは、Kabatに示されるEUインデックスの位置234及び位置235における残基は両方共、任意の他のアミノ酸によって置換される。
下記の表2は、特定の抗体アイソタイプの重鎖定常領域おける対応残基の、Kabatに示されるEUインデックスによる位置を、本明細書に開示の配列に対する参照と共に示す。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置117におけるロイシン、及び/または位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
第1の態様に記載の改変と、第2の態様に記載の改変と、を同一の抗体において有利に組み合わせることができる。したがって、第3の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、
(1)システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基の置換を1つまたは複数含み、抗体に対する薬物部分の複合化を目的とする未置換の鎖間システイン残基を少なくとも1つ保持し;かつ
(2)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基の置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸(すなわち、「野生型」配列に見られるものと同一ではないアミノ酸)によるものである。
AbLJ(LALA)
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、(ii)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、(iii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含み、かつ(iv)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基のアミノ酸置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、(ii)CLドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、(iii)CH1ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ(iv)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基のアミノ酸置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)CLドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、(iii)CH1ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含み、かつ(iv)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基のアミノ酸置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、(i)ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、(ii)CLドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、(iii)CH1ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ(iv)Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基のアミノ酸置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
AbLJ(LALA)
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置117におけるロイシン、及び/または位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置164におけるロイシン、及び/または位置165におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号130の位置14におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置164及び位置165におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置115におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号110の位置103におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置117におけるロイシン、及び/または位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
配列番号130の位置14におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置164におけるロイシン、及び/または位置165におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置164及び位置165におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
配列番号140の位置14におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置115におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置117におけるロイシン、及び/または位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
配列番号130の位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置164におけるロイシン、及び/または位置165におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号130の位置14におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置164及び位置165におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
配列番号140の位置106及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置115におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置117におけるロイシン、及び/または位置118におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置117及び位置118におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
配列番号130の位置14、位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置164におけるロイシン、及び/または位置165におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置164及び位置165におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
配列番号140の位置14、位置106、及び位置109におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ位置115におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
最大耐用量(MTD)
本明細書に記載の複合体は、インビボの疾患モデルにおいて忍容性が良好であり、これによって、複合体を投与される対象における副作用を低減することが明らかになっている。したがって、いくつかの実施形態では、薬物部分が抗体に部位非特異的に結合し、それ以外は同一の複合体と比較すると、本明細書に記載の複合体は高いMTDを有する。MTDは、典型的には、マウス(例えば、Mus musculus)、ラット(例えば、Rattus norvegicus)、またはサル(例えば、Macaca fascicularis)などの動物において試験される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体のMTDは、ラットにおいて、単回用量として送達されると、少なくとも1mg/kgであり、例えば、単回用量として送達されると、少なくとも1.2mg/kg、少なくとも1.4mg/kg、少なくとも1.6mg/kg、少なくとも1.8mg/kg、少なくとも2.0mg/kg、少なくとも2.2mg/kg、少なくとも2.4mg/kg、少なくとも2.6mg/kg、少なくとも2.8mg/kg、少なくとも3.0mg/kg、少なくとも4.0mg/kg、または少なくとも5.0mg/kgである。
いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、本明細書に記載の部位特異的複合体は、治療指数が改善している。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、本明細書に記載の部位特異的複合体の治療指数は、少なくとも2%高い。すなわち、部位非特異的複合体が、100:1の治療指数を有するのであれば、部位特異的複合体は、少なくとも102:1の治療指数を有する。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、本明細書に記載の部位特異的複合体の治療指数は、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、少なくとも5%高く、例えば、少なくとも5%高く、少なくとも7%高く、少なくとも10%高く、少なくとも12%高く、少なくとも15%高く、少なくとも20%高く、少なくとも25%高く、少なくとも30%高く、少なくとも40%高く、少なくとも50%高く、少なくとも70%高く、少なくとも100%高く、少なくとも150%高く、または少なくとも200%高い。
Strop et al.,Chemistry & Biology 20,161−167,February 21,2013では、抗体に薬物部分を複合化する部位は、ADCの安定性及び薬物動態に影響し得ることが報告された。
いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、部位特異的複合体の同種抗原(cognate antigen)に対する親和性は同一である。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、部位特異的複合体は、同種抗原に対して高い親和性を有する。いくつかの実施形態では、部位特異的複合体が同種抗原に結合する際の解離定数(Kd)は、少なくとも10−6Mであり、少なくとも5x10−7M、少なくとも10−7M、少なくとも5x10−8M、少なくとも10−9Mなど、少なくとも5x10−10M、少なくとも10−10M、少なくとも5x10−11M、少なくとも10−11M、少なくとも5x10−12M、少なくとも10−12M、少なくとも5x10−13M、少なくとも10−13M、少なくとも5x10−14M、少なくとも10−14M、少なくとも5x10−15M、または少なくとも10−15Mなどである。1つの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体の同種抗原に対する結合を、部位特異的複合体は、インビボ及び/またはインビトロで競合的に阻害する。
いくつかの実施形態では、部位特異的複合体のEC50は、35ng/ml未満であり、30ng/ml未満、25ng/ml未満、20ng/ml未満、または15ng/ml未満などである。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、部位特異的複合体のEC50はそれ以下である。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、部位特異的複合体のEC50は、少なくとも2ng/ml低く、例えば、少なくとも5ng/ml低く、少なくとも10ng/ml低く、少なくとも15ng/ml低く、少なくとも20ng/ml低く、少なくとも25ng/ml低く、または少なくとも30ng/ml低い。
本明細書に新たに記載される部位特異的ADCの実施形態は、ADCの製造手順の単純化を可能にするものである。
いくつかの実施形態では、Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基の置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を抗体が含む複合体では、234/235の置換(複数可)を欠いており、それ以外は同一の別の複合体と比較して、終末相半減期が改善している。終末相半減期は、実施例6において本明細書に記載のように測定してよい。したがって、いくつかの実施形態では、Kabatに示されるEUインデックスの位置234における残基の置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を抗体が含む複合体が有する半減期は、234/235の置換(複数可)を欠いており、それ以外は同一の複合体の半減期の少なくとも110%であり、例えば、234/235の置換(複数可)を欠いており、それ以外は同一の複合体の半減期の少なくとも115%、当該半減期の少なくとも120%、当該半減期の少なくとも125%、当該半減期の少なくとも130%、当該半減期の少なくとも135%、当該半減期の少なくとも140%、当該半減期の少なくとも145%、当該半減期の少なくとも150%、当該半減期の少なくとも160%、当該半減期の少なくとも170%、当該半減期の少なくとも180%、当該半減期の少なくとも190%、または当該半減期の少なくとも200%である。
本明細書に記載の複合体の抗体は、PSMAに結合する抗体(Ab)である。すなわち、本明細書に記載の複合体は、PSMAに特異的に結合する抗体を含む複合体である。
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号1;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号3;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号5;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号7;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号8;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号9;または
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号10からなる群から選択される配列を有する。例えば、配列番号2と対を形成した配列番号1、配列番号4と対を形成した配列番号3、配列番号6と対を形成した配列番号5、配列番号11と対を形成した配列番号7、配列番号12と対を形成した配列番号7、配列番号13と対を形成した配列番号7、配列番号14と対を形成した配列番号7、配列番号15と対を形成した配列番号7、配列番号16と対を形成した配列番号7、配列番号17と対を形成した配列番号7、配列番号18と対を形成した配列番号7、配列番号11と対を形成した配列番号8、配列番号12と対を形成した配列番号8、配列番号13と対を形成した配列番号8、配列番号14と対を形成した配列番号8、配列番号15と対を形成した配列番号8、配列番号16と対を形成した配列番号8、配列番号17と対を形成した配列番号8、配列番号18と対を形成した配列番号8、配列番号11と対を形成した配列番号9、配列番号12と対を形成した配列番号9、配列番号13と対を形成した配列番号9、配列番号14と対を形成した配列番号9、配列番号15と対を形成した配列番号9、配列番号16と対を形成した配列番号9、配列番号17と対を形成した配列番号9、配列番号18と対を形成した配列番号9、配列番号11と対を形成した配列番号10、配列番号12と対を形成した配列番号10、配列番号13と対を形成した配列番号10、配列番号14と対を形成した配列番号10、配列番号15と対を形成した配列番号10、配列番号16と対を形成した配列番号10、配列番号17と対を形成した配列番号10、または配列番号18と対を形成した配列番号10である。
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号21;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号22;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号23;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号24;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号25;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号26;及び
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号27からなる群から選択される配列を有する。例えば、配列番号31と対を形成した配列番号21、配列番号32と対を形成した配列番号21、配列番号33と対を形成した配列番号21、配列番号34と対を形成した配列番号21、配列番号35と対を形成した配列番号21、配列番号36と対を形成した配列番号21、配列番号37と対を形成した配列番号21、配列番号31と対を形成した配列番号22、配列番号32と対を形成した配列番号22、配列番号33と対を形成した配列番号22、配列番号34と対を形成した配列番号22、配列番号35と対を形成した配列番号22、配列番号36と対を形成した配列番号22、配列番号37と対を形成した配列番号22、配列番号31と対を形成した配列番号23、配列番号32と対を形成した配列番号23、配列番号33と対を形成した配列番号23、配列番号34と対を形成した配列番号23、配列番号35と対を形成した配列番号23、配列番号36と対を形成した配列番号23、配列番号37と対を形成した配列番号23、配列番号31と対を形成した配列番号24、配列番号32と対を形成した配列番号24、配列番号33と対を形成した配列番号24、配列番号34と対を形成した配列番号24、配列番号35と対を形成した配列番号24、配列番号36と対を形成した配列番号24、配列番号37と対を形成した配列番号24、配列番号31と対を形成した配列番号25、配列番号32と対を形成した配列番号25、配列番号33と対を形成した配列番号25、配列番号34と対を形成した配列番号25、配列番号35と対を形成した配列番号25、配列番号36と対を形成した配列番号25、配列番号37と対を形成した配列番号25、配列番号31と対を形成した配列番号26、配列番号32と対を形成した配列番号26、配列番号33と対を形成した配列番号26、配列番号34と対を形成した配列番号26、配列番号35と対を形成した配列番号26、配列番号36と対を形成した配列番号26、配列番号37と対を形成した配列番号26、配列番号31と対を形成した配列番号27、配列番号32と対を形成した配列番号27、配列番号33と対を形成した配列番号27、配列番号34と対を形成した配列番号27、配列番号35と対を形成した配列番号27、配列番号36と対を形成した配列番号27、または配列番号37と対を形成した配列番号27である。
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号1;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号3;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号5;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号7;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号8;
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号9;または
配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、もしくは配列番号18のいずれか1つと対を形成した配列番号10からなる群から選択される配列を有する。例えば、配列番号2と対を形成した配列番号1、配列番号4と対を形成した配列番号3、配列番号6と対を形成した配列番号5、配列番号11と対を形成した配列番号7、配列番号12と対を形成した配列番号7、配列番号13と対を形成した配列番号7、配列番号14と対を形成した配列番号7、配列番号15と対を形成した配列番号7、配列番号16と対を形成した配列番号7、配列番号17と対を形成した配列番号7、配列番号18と対を形成した配列番号7、配列番号11と対を形成した配列番号8、配列番号12と対を形成した配列番号8、配列番号13と対を形成した配列番号8、配列番号14と対を形成した配列番号8、配列番号15と対を形成した配列番号8、配列番号16と対を形成した配列番号8、配列番号17と対を形成した配列番号8、配列番号18と対を形成した配列番号8、配列番号11と対を形成した配列番号9、配列番号12と対を形成した配列番号9、配列番号13と対を形成した配列番号9、配列番号14と対を形成した配列番号9、配列番号15と対を形成した配列番号9、配列番号16と対を形成した配列番号9、配列番号17と対を形成した配列番号9、配列番号18と対を形成した配列番号9、配列番号11と対を形成した配列番号10、配列番号12と対を形成した配列番号10、配列番号13と対を形成した配列番号10、配列番号14と対を形成した配列番号10、配列番号15と対を形成した配列番号10、配列番号16と対を形成した配列番号10、配列番号17と対を形成した配列番号10、または配列番号18と対を形成した配列番号10である。
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号21;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号22;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号23;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号24;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号25;
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号26;及び
配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つと対を形成した配列番号27からなる群から選択される配列を有する。例えば、配列番号31と対を形成した配列番号21、配列番号32と対を形成した配列番号21、配列番号33と対を形成した配列番号21、配列番号34と対を形成した配列番号21、配列番号35と対を形成した配列番号21、配列番号36と対を形成した配列番号21、配列番号37と対を形成した配列番号21、配列番号31と対を形成した配列番号22、配列番号32と対を形成した配列番号22、配列番号33と対を形成した配列番号22、配列番号34と対を形成した配列番号22、配列番号35と対を形成した配列番号22、配列番号36と対を形成した配列番号22、配列番号37と対を形成した配列番号22、配列番号31と対を形成した配列番号23、配列番号32と対を形成した配列番号23、配列番号33と対を形成した配列番号23、配列番号34と対を形成した配列番号23、配列番号35と対を形成した配列番号23、配列番号36と対を形成した配列番号23、配列番号37と対を形成した配列番号23、配列番号31と対を形成した配列番号24、配列番号32と対を形成した配列番号24、配列番号33と対を形成した配列番号24、配列番号34と対を形成した配列番号24、配列番号35と対を形成した配列番号24、配列番号36と対を形成した配列番号24、配列番号37と対を形成した配列番号24、配列番号31と対を形成した配列番号25、配列番号32と対を形成した配列番号25、配列番号33と対を形成した配列番号25、配列番号34と対を形成した配列番号25、配列番号35と対を形成した配列番号25、配列番号36と対を形成した配列番号25、配列番号37と対を形成した配列番号25、配列番号31と対を形成した配列番号26、配列番号32と対を形成した配列番号26、配列番号33と対を形成した配列番号26、配列番号34と対を形成した配列番号26、配列番号35と対を形成した配列番号26、配列番号36と対を形成した配列番号26、配列番号37と対を形成した配列番号26、配列番号31と対を形成した配列番号27、配列番号32と対を形成した配列番号27、配列番号33と対を形成した配列番号27、配列番号34と対を形成した配列番号27、配列番号35と対を形成した配列番号27、配列番号36と対を形成した配列番号27、または配列番号37と対を形成した配列番号27である。
特に企図される実施形態のいくつかが以下に記載される。
AbLJ−PSMA IgG1
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって;
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。
配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号153のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号161のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号162のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって;
配列番号110の位置103におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって;
配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号153のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号161のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号162のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号153のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体
配列番号161のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号162のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号110の位置109におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置112におけるシステインが未置換であり;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103及び位置112におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置109におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号110の位置112におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置109におけるシステインが未置換であり;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103及び位置109におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置112におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって;
配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置103におけるシステインが未置換である、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、(i)配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステイン;及び(ii)配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号110の位置103及び位置112におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置109におけるシステインが未置換である、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、(i)配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステイン;及び(ii)配列番号110の位置109におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置112におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号110の位置103及び位置109におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号110の位置112におけるシステインが未置換である、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、(i)配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステイン;及び(ii)配列番号110の位置112におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置109におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって、
配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号130の位置164におけるロイシン、及び/または配列番号130の位置165におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号140の位置115におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
AbLJ(LALA) IgG1
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって;
配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。
配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号153のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号161のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号162のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって;
配列番号110の位置103におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号4の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって;
配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号153のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号161のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号162のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号153のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号161のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号162のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号3の配列を有するVHドメイン、及び配列番号3の配列を有するVLドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって;
配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され;
かつ配列番号110の位置117におけるロイシン、及び/または配列番号110の位置118におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインは、バリンによって置換される。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
免疫グロブリン(Ig)分子におけるアミノ酸位置の番号付け
本明細書で使用されるアミノ酸の番号付けは、Kabat et al.(1991,NIH Publication 91−3242,National Technical Information Service,Springfield,VA、これ以後は「Kabat」と称される)に示されるEUインデックスの番号付けシステムによるものである。「Kabatに示されるEUインデックス」は、前出のKabat et al.において説明されるヒトIgG1 EU抗体(human IgG 1 EU antibody)の残基番号付けを指す。
本明細書では、「抗体」という用語は、抗体の抗原結合部位(例えば、VHドメインとVLドメインとが対になることによって形成されるもの)を含む任意の分子を包含する。したがって、例えば、「抗体」という用語には、モノクローナル抗体(未変化のモノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、少なくとも2つの異なるエピトープ結合断片から形成される多特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化(camelised)抗体、キメラ抗体、単鎖抗体(CH3と融合したscFvなど)、所望の生物学的活性を示す抗体断片(例えば、抗原結合部分であり、例えば、低分子化抗体)、及び抗イディオタイプ(抗Id)抗体、細胞内抗体、ならびに上記のいずれかのエピトープ結合断片が、例えば、同種抗原に結合する能力といった、所望の生物学的活性を示す限り、包含される。抗体は、マウスのもの、ヒトのもの、ヒト化されたもの、キメラであるもの、または他の種に由来するものであり得る。1つの実施形態では、抗体は、CH3ドメインと融合した単鎖Fv抗体(scFv−CH3)である。1つの実施形態では、抗体は、Fc領域と融合した単鎖Fv抗体(scFv−Fc)である。1つの実施形態では、抗体は、低分子化抗体である。
本明細書では、「抗体重鎖定常領域」、「Fc領域」、「Fcドメイン」、及び「Fc」という用語は、IgG分子のパパイン消化によって得られる結晶性断片と関連する、抗体分子の一部を指す。
本明細書に開示の抗体重鎖可変領域及び/または抗体軽鎖可変領域の配列は、置換、挿入、または欠失によって改変され得る。本明細書の記載の配列と実質的に同一のアミノ酸配列は、アミノ酸の欠失及び/または挿入に加えて、保存的アミノ酸置換を含む配列を含む。保存的アミノ酸置換は、第1のアミノ酸を、第1のアミノ酸のものと類似の化学的特性及び/または物理的特性(例えば、電荷、構造、極性、疎水性/親水性)を有する第2のアミノ酸によって交換することを指す。好ましい保存的置換は、1つのアミノ酸が、本明細書の以下に示されるアミノ酸群に含まれる別のアミノ酸で置換される置換である:
・非極性側鎖を有するアミノ酸(Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Pro、及びMet)
・脂肪族側鎖を有するアミノ酸(Gly、Ala Val、Leu、Ile)
・環式側鎖を有するアミノ酸(Phe、Tyr、Trp、His、Pro)
・芳香族側鎖を有するアミノ酸(Phe、Tyr、Trp)
・酸性側鎖を有するアミノ酸(Asp、Glu)
・塩基性側鎖を有するアミノ酸(Lys、Arg、His)
・アミド側鎖を有するアミノ酸(Asn、Gln)
・ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸(Ser、Thr)
・含硫側鎖を有するアミノ酸(Cys、Met)
・中性の弱疎水性アミノ酸(Pro、Ala、Gly、Ser、Thr)
・親水性の酸性アミノ酸(Gin、Asn、Glu、Asp)、ならびに
・疎水性アミノ酸(Leu、Ile、Val)
本明細書に開示の抗体は改変され得る。これは、例えば、ヒト対象に対するその免疫原性を低減するためである。このことは、当業者に知られる多くの手法のいずれかを使用して達成してよい。こうした手法のいくつかは、以下により詳細に記載される。
非ヒトの抗体または抗体断片のインビボでの免疫原性を低減する手法には、「ヒト化」と呼ばれるものが含まれる。
この手法では、ヒト化抗体は、レシピエント抗体の相補性決定領域(CDR)に由来する残基が、所望の特性を有する、マウス、ラット、ラクダ、ウシ、ヤギ、またはウサギなどの非ヒト種(ドナー抗体)のCDRに由来する残基によって交換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である(事実上、非ヒトCDRが、ヒトフレームワークに「移植されている」)。いくつかの実例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域(FR)の残基は、対応する非ヒト残基によって交換される(これは、例えば、抗原結合性に対して特定のFR残基が顕著に影響するときに起こり得る)。
方法は、特定のエピトープに特異的な所与の非ヒト抗体のVHドメインまたはVLドメインと、ヒトのVHライブラリーまたはVLライブラリーとを組み合わせることからなるものであり、対象抗原を標的として特異的なヒトVドメインが選択される。こうして選択されたヒトVHを、次に、VLライブラリーと組み合わせることで、完全なヒトのVHxVLという組み合わせが得られる。この方法は、Nature Biotechnology(N.Y.)12,(1994)899−903において説明されている。
この方法では、ヒト抗体に由来するアミノ酸配列の2つ以上のセグメントが、最終的な抗体分子内に統合される。複合抗体は、最終的な複合抗体のV領域に、ヒトのT細胞エピトープを限定または回避する組み合わせにおいて、複数のヒトVH配列セグメントとヒトVL配列セグメントとを組わせることによって構築される。必要な場合は、T細胞エピトープに寄与またはそれをコードするV領域セグメントと、T細胞エピトープを回避する代替セグメントと、を交換することによって、T細胞エピトープは限定または回避される。この方法は、US2008/0206239A1において説明されている。
この方法は、治療抗体(または他の分子)のV領域からヒト(または他の第2の種)のT細胞エピトープを除去するものである。治療抗体のV領域配列は、例えば、MHC結合モチーフのデータベース(www.wehi.edu.auにおいて提供される「モチーフ」データベースなど)との比較によって、MHCクラスII−結合モチーフの存在が分析される。あるいは、MHCクラスII−結合モチーフは、Altuvia et al.(J.Mol.Biol.249 244−250(1995))によって考案されたものなどの計算スレッディング法を使用して同定してよい。こうした方法では、V領域配列に由来する連続的な重複ペプチドのMHCクラスIIタンパク質に対する結合エネルギーが試験される。その後、このデータは、成功裏に示されたペプチドに関する他の配列特徴に関する情報と組み合わせることができる。こうした情報は、両親媒性、ロスバード(Rothbard)モチーフ、ならびにカテプシンB及び他のプロセシング酵素の切断部位などである。
この方法は、
(a)非ヒト抗体の可変領域の三次元モデルを構築することによる、非ヒト(例えば、げっ歯類)抗体(またはその断片)の可変領域の立体構造の決定と、
(b)重鎖及び軽鎖のフレームワーク位置のセットが得られるように、十分な数の非ヒト及びヒトの抗体可変領域重鎖及び抗体可変領域軽鎖のx線結晶構造に由来する相対露出度分布(relative accessibility distribution)を使用した配列アライメントの取得であって、十分な数の非ヒト抗体重鎖及び非ヒト抗体軽鎖の98%でアライメント位置が同一となる配列アライメントの取得と、
(c)ヒト化されることになる非ヒト抗体を対象とした定義であって、段階(b)において取得したフレームワーク位置のセットを使用した、重鎖及び軽鎖の表面に露出するアミノ酸残基のセットの定義と、
(d)段階(c)において定義される表面露出アミノ酸残基のセットと最も密接に同一である、重鎖及び軽鎖の表面に露出するアミノ酸残基のセットの、ヒト抗体アミノ酸配列からの同定であって、ヒト抗体に由来する重鎖及び軽鎖が、自然に対を形成するか、または自然に対を形成しない同定と、
(e)ヒト化されることになる非ヒト抗体のアミノ酸配列における、段階(c)で定義される、重鎖及び軽鎖の表面に露出するアミノ酸残基のセットと、段階(d)で同定される、重鎖及び軽鎖の表面に露出するアミノ酸残基のセットとの置換と、
(f)段階(e)で特定される置換から生じる非ヒト抗体の可変領域の三次元モデルの構築と、
(g)段階(a)及び段階(f)において構築される三次元モデルの比較による同定であって、段階(c)または段階(d)において同定されるセットに由来し、ヒト化されることになる非ヒト抗体の相補性決定領域の任意の残基の任意の原子の5オングストローム以内に入る任意のアミノ酸残基の同定と、
(h)ヒトのアミノ酸残基から元々の非ヒトのアミノ酸残基への、段階(g)において同定される任意の残基の変更であって、それによって、表面露出アミノ酸残基の非ヒト抗体ヒト化セットが定義される変更と、を含む。但し、段階(a)は、最初に実施される必要はないが、段階(g)に先んじて実施されなくてはならない。
この方法は、非ヒト配列と、機能性のヒト生殖系列遺伝子レパートリーとを比較するものである。非ヒト配列と同一または密接に関連する基準構造をコードするヒト遺伝子が選択される。選択されるヒト遺伝子は、CDR内の相同性が最も高いものであり、FRドナーとして選択される。最終的に、非ヒトCDRは、こうしたヒトFRに移植される。この方法は、特許WO2005/079479A2において説明されている。
この方法は、非ヒト(例えば、マウス)の配列と、ヒトの生殖系列遺伝子レパートリーとを比較するものであり、差異は、潜在的なMHC/T細胞エピトープのレベルにおいて配列を定量化するヒトストリング含量(HSC)としてスコア化される。その後、標的配列は、網羅的な相同性尺度を使用するのではなく、そのHSCを最大化することによってヒト化され、その結果、複数の多用なヒト化変異体が得られる(Molecular Immunology,44,(2007)1986−1998において説明されている)。
非ヒト抗体のCDRは、重鎖及び軽鎖のヒト生殖系列遺伝子フレームワークとして知られるものをすべて包含するcDNAプールとインフレームで融合される。その後、ヒト化抗体は、例えば、ファージディスプレイされた抗体ライブラリーのパニングによって選択される。これについては、Methods 36,43−60(2005)において説明されている。
本明細書では、エピトープ結合ドメインという用語は、抗原エピトープを特異的に認識して結合することが可能なドメインを指す。エピトープ結合ドメインの古典的な例を挙げるとすれば、抗原結合部位を形成するVHドメイン及びVLドメインを含む抗体パラトープであろう。
本明細書では、「治療指数」という用語は、治療作用を引き起こす治療薬剤の量と、死(動物試験におけるもの)または毒性(ヒト試験におけるもの)を引き起こす量との比較として使用される。
本明細書では、「部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体」という用語は、薬物単位(DL)が抗体重鎖の定常領域またはその一部に複合化した位置(複数可)以外のすべての点において、定義または請求される部位特異的複合体と同一の複合体を指す。具体的には、定義または請求される部位特異的複合体では、薬物単位(DL)は、特定の残基(複数可)に一律かつ一貫して複合化される一方で、部位非特異的であり、それ以外は同一のものでは、薬物単位(DL)が抗体に複合化される程度及び位置は、バッチ間で可変である。
本開示のヒト化抗体は、機能性部分に複合化され得る。機能性部分の例には、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、多糖、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、薬物、ホルモン、脂質、脂質会合体(lipid assembly)、合成ポリマー、ポリマー微粒子、生体細胞、ウイルス、レポーター(フルオロフォア、発色団、もしくは色素)、毒素、ハプテン、酵素、結合性メンバー(抗体もしくは抗体断片など)、放射性同位体、固体マトリックス、半固体マトリックス、及びそれらの組み合わせ、または有機部分が含まれる。
医薬的に許容可能な一価及び二価の陽イオンの例は、Berge,et al.,J.Pharm.Sci.,66,1−19(1977)において考察されており、当該文献は、参照によって本明細書に援用される。
本明細書では、「任意選択で置換された」という語句は、未置換であり得るか、または置換され得る親基に関する。
飽和の単環式炭化水素化合物:
シクロプロパン(C3)、シクロブタン(C4)、シクロペンタン(C5)、シクロヘキサン(C6)、シクロヘプタン(C7)、メチルシクロプロパン(C4)、ジメチルシクロプロパン(C5)、メチルシクロブタン(C5)、ジメチルシクロブタン(C6)、メチルシクロペンタン(C6)、ジメチルシクロペンタン(C7)、及びメチルシクロヘキサン(C7);
不飽和の単環式炭化水素化合物:
シクロプロペン(C3)、シクロブテン(C4)、シクロペンテン(C5)、シクロヘキセン(C6)、メチルシクロプロペン(C4)、ジメチルシクロプロペン(C5)、メチルシクロブテン(C5)、ジメチルシクロブテン(C6)、メチルシクロペンテン(C6)、ジメチルシクロペンテン(C7)、及びメチルシクロヘキセン(C7);ならびに
飽和の多環式炭化水素化合物:
ノルカラン(C7)、ノルピナン(C7)、ノルボルナン(C7)
に由来するものが含まれる。
N1:アジリジン(C3)、アゼチジン(C4)、ピロリジン(テトラヒドロピロール)(C5)、ピロリン(例えば、3−ピロリン、2,5−ジヒドロピロール)(C5)、2H−ピロールまたは3H−ピロール(イソピロール、イソアゾール)(C5)、ピペリジン(C6)、ジヒドロピリジン(C6)、テトラヒドロピリジン(C6)、アゼピン(C7);
O1:オキシラン(C3)、オキセタン(C4)、オキソラン(テトラヒドロフラン)(C5)、オキソール(ジヒドロフラン)(C5)、オキサン(テトラヒドロピラン)(C6)、ジヒドロピラン(C6)、ピラン(C6)、オキセピン(C7);
S1:チイラン(C3)、チエタン(C4)、チオラン(テトラヒドロチオフェン)(C5)、チアン(テトラヒドロチオピラン)(C6)、チエパン(C7);
O2:ジオキソラン(C5)、ジオキサン(C6)、及びジオキセパン(C7);
O3:トリオキサン(C6);
N2:イミダゾリジン(C5)、ピラゾリジン(ジアゾリジン)(C5)、イミダゾリン(C5)、ピラゾリン(ジヒドロピラゾール)(C5)、ピペラジン(C6);
N1O1:テトラヒドロオキサゾール(C5)、ジヒドロオキサゾール(C5)、テトラヒドロイソオキサゾール(C5)、ジヒドロイソオキサゾール(C5)、モルホリン(C6)、テトラヒドロオキサジン(C6)、ジヒドロオキサジン(C6)、オキサジン(C6);
N1S1:チアゾリン(C5)、チアゾリジン(C5)、チオモルホリン(C6);
N2O1:オキサジアジン(C6);
O1S1:キサチオール(C5)及びオキサチアン(チオキサン)(C6);ならびに
N1O1S1:オキサチアジン(C6)
に由来するものが含まれる。
N1:ピロール(アゾール)(C5)、ピリジン(アジン)(C6);
O1:フラン(オキソール)(C5);
S1:チオフェン(チオール)(C5);
N1O1:オキサゾール(C5)、イソキサゾール(C5)、イソオキサジン(C6);
N2O1:オキサジアゾール(フラザン)(C5);
N3O1:オキサトリアゾール(C5);
N1S1:チアゾール(C5)、イソチアゾール(C5);
N2:イミダゾール(1,3−ジアゾール)(C5)、ピラゾール(1,2−ジアゾール)(C5)、ピリダジン(1,2−ジアジン)(C6)、ピリミジン(1,3−ジアジン)(C6)(例えば、シトシン、チミン、ウラシル)、ピラジン(1,4−ジアジン)(C6);
N3:トリアゾール(C5)、トリアジン(C6);及び
N4:テトラゾール(C5)
に由来するものが含まれる。
ベンゾフラン(O1)、イソベンゾフラン(O1)、インドール(N1)、イソインドール(N1)、インドリジン(N1)、インドリン(N1)、イソインドリン(N1)、プリン(N4)(例えば、アデニン、グアニン)、ベンゾイミダゾール(N2)、インダゾール(N2)、ベンゾキサゾール(N1O1)、ベンゾイソオキサゾール(N1O1)、ベンゾジオキソール(O2)、ベンゾフラザン(N2O1)、ベンゾトリアゾール(N3)、ベンゾチオフラン(S1)、ベンゾチアゾール(N1S1)、ベンゾチアジアゾール(N2S)に由来するC9(2つの融合環を有する);
クロメン(O1)、イソクロメン(O1)、クロマン(O1)、イソクロマン(O1)、ベンゾジオキサン(O2)、キノリン(N1)、イソキノリン(N1)、キノリジン(N1)、ベンゾキサジン(N1O1)、ベンゾジアジン(N2)、ピリドピリジン(pyridopyridine)(N2)、キノキサリン(N2)、キナゾリン(N2)、シンノリン(N2)、フタラジン(N2)、ナフチリジン(N2)、プテリジン(N4)に由来するC10(2つの融合環を有する);
ベンゾジアゼピン(N2)に由来するC11(2つの融合環を有する);
カルバゾール(N1)、ジベンゾフラン(O1)、ジベンゾチオフェン(S1)、カルボリン(N2)、ペリミジン(N2)、ピリドインドール(N2)に由来するC13(3つの融合環を有する);及び
アクリジン(N1)、キサンテン(O1)、チオキサンテン(S1)、オキサントレン(O2)、フェノキサチイン(O1S1)、フェナジン(N2)、フェノキサジン(N1O1)、フェノチアジン(N1S1)、チアントレン(S2)、フェナントリジン(N1)、フェナントロリン(N2)、フェナジン(N2)に由来するC14(3つの融合環を有する)
が含まれる。
C3−12アルキレン:本明細書では、「C3−12アルキレン」という用語は、(別段の記載がない限り)3〜12個の炭素原子を有する炭化水素化合物の炭素原子から2個の水素原子を除去する(同一の炭素原子から2個の水素原子を除去するか、または2個の異なる炭素原子のそれぞれから水素原子を1個ずつ除去する)ことによって得られる二座部分(bidentate moiety)に関する。当該炭化水素化合物は、脂肪族または脂環式であり得ると共に、飽和、部分不飽和、または完全不飽和であり得る。したがって、「アルキレン」という用語には、サブクラスであるアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンなどが含まれ、こうしたものは、以下で考察される。
本開示は、リンカー単位を介して抗体に連結されたPBD化合物を含む複合体を提供する。
−C(=O)NH−、
−C(=O)O−、
−NHC(=O)−、
−OC(=O)−、
−OC(=O)O−、
−NHC(=O)O−、
−OC(=O)NH−、及び
−NHC(=O)NH−
から選択される結合によって連結され得る。
式中、アスタリスクは、N10位への結合点を示し、波線は、リンカーL1への結合点を示し、Yは、−N(H)−、−O−、−C(=O)N(H)−、または−C(=O)O−であり、nは、0〜3である。フェニレン環は、本明細書に記載の置換基のうちの1つ、2つ、または3つで、任意選択で置換される。1つの実施形態では、フェニレン基は、ハロ、NO2、R、またはORで、任意選択で置換される。
1つの実施形態では、nは、0または1である。好ましくは、nは、0である。
式中、L*は、リンカーの残部の活性化形態である。こうした基は、活性化部位と、保護されている化合物とが分離されているという利点を有する。上記のとおり、フェニレン基は、任意選択で置換され得る。
式中、アスタリスク、波線、Y、及びnは、上に定義されるとおりである。フェニレン環はそれぞれ、本明細書に記載の置換基のうちの1つ、2つ、または3つで、任意選択で置換される。1つの実施形態では、置換基Yを有するフェニレン環は、任意選択で置換され、置換基Yを有さないフェニレン環は、未置換である。1つの実施形態では、置換基Yを有するフェニレン環は、未置換であり、置換基Yを有さないフェニレン環は、任意選択で置換される。
式中、アスタリスク、波線、Y、及びnは、上に定義されるとおりであり、Eは、O、S、またはNRであり、Dは、N、CH、またはCRであり、かつFは、N、CH、またはCRである。
1つの実施形態では、Dは、CHである。
1つの実施形態では、Eは、OまたはSである。
1つの実施形態では、Fは、CHである。
−Phe−Lys−、
−Val−Ala−、
−Val−Lys−、
−Ala−Lys−、
−Val−Cit−、
−Phe−Cit−、
−Leu−Cit−、
−Ile−Cit−、
−Phe−Arg−、
−Trp−Cit−
から選択され、
ここで、Citは、シトルリンである。
−Phe−Lys−、
−Val−Ala−、
−Val−Lys−、
−Ala−Lys−、
−Val−Cit−
から選択される。
1つの実施形態では、アスパラギン酸などの側鎖アミノ酸(side chain amino acid)のカルボキシ基COOHは、COOR、CONH2、CONHR、及びCONRR’からなる群から選択される誘導体化形態である。
Arg:Z、Mtr、Tos;
Asn:Trt、Xan;
Asp:Bzl、t−Bu;
Cys:Acm、Bzl、Bzl−OMe、Bzl−Me、Trt;
Glu:Bzl、t−Bu;
Gln:Trt、Xan;
His:Boc、Dnp、Tos、Trt;
Lys:Boc、Z−Cl、Fmoc、Z、Alloc;
Ser:Bzl、TBDMS、TBDPS;
Thr:Bz;
Trp:Boc;
Tyr:Bzl、Z、Z−Br。
1つの実施形態では、ジペプチドは、自壊性リンカーと組み合わせて使用される。自壊性リンカーは、−X2−に連結され得る。
式中、アスタリスクは、N10位への結合点を示し、波線は、リンカーL1の残部への結合点またはAへの結合点を示す。好ましくは、波線は、Aへの結合点を示す。Lysアミノ酸の側鎖は、例えば、上記のBoc、Fmoc、または、Allocで保護され得る。
−C(=O)NH−、
−C(=O)O−、
−NHC(=O)−、
−OC(=O)−、
−OC(=O)O−、
−NHC(=O)O−、
−OC(=O)NH−、
−NHC(=O)NH−、
−C(=O)NHC(=O)−、
−S−、
−S−S−、
−CH2C(=O)−、及び
=N−NH−
から選択され得る。
抗体に連結されるL1のカルボキシル基は、アミノ酸のC末端であり得るか、または例えば、グルタミン酸のアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のカルボキシル基に由来し得る。
抗体に連結されるL1のヒドロキシル基は、例えば、セリンのアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のヒドロキシル基に由来し得る。
抗体に連結されるL1のチオール基は、例えば、セリンのアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のチオール基に由来し得る。
式中、アスタリスクは、N10位への結合点を示し、波線は、L1への結合点を示し、nは、0〜3であり、Yは、共有結合または官能基であり、かつEは、例えば、酵素作用または光によって活性化可能な基であり、それによって自壊性単位が得られる。フェニレン環は、本明細書に記載の置換基のうちの1つ、2つ、または3つで、任意選択でさらに置換される。1つの実施形態では、フェニレン基は、ハロ、NO2、R、またはORで、任意選択でさらに置換される。好ましくは、nは、0または1であり、最も好ましくは、0である。
式中、アスタリスクは、N10位への結合点を示し、E*は、Eの活性化形態であり、Yは、上記のとおりである。こうした基は、活性化部位と、保護されている化合物とが分離されているという利点を有する。上記のとおり、フェニレン基は、任意選択でさらに置換され得る。
Y基は、
−C(=O)−
−NH−
−O−
−C(=O)NH−、
−C(=O)O−、
−NHC(=O)−、
−OC(=O)−、
−OC(=O)O−、
−NHC(=O)O−、
−OC(=O)NH−、
−NHC(=O)NH−、
−NHC(=O)NH、
−C(=O)NHC(=O)−、及び
−S−
から選択される官能基であり得、
ここで、L1は、ジペプチドであり、Yは、−NH−または−C(=O)−であることが好ましく、それによってL1とYとの間にアミド結合が形成される。この実施形態では、ジペプチド配列は、酵素活性の基質である必要はない。
−C(=O)NH−、
−C(=O)O−、
−NHC(=O)−、
−OC(=O)−、
−OC(=O)O−、
−NHC(=O)O−、
−OC(=O)NH−、及び
−NHC(=O)NH−
から選択される結合によって連結され得る。
式中、アスタリスクは、L1への結合点を示し、波線は、抗体への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、かつmは、0〜10、1〜8、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。別の実施形態では、mは、10〜30であり、好ましくは、20〜30である。あるいは、mは、0〜50である。この実施形態では、mは、好ましくは、10〜40であり、nは、1である。
式中、アスタリスクは、L1への結合点を示し、波線は、抗体への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、かつmは、0〜10、1〜8、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。別の実施形態では、mは、10〜30であり、好ましくは、20〜30である。あるいは、mは、0〜50である。この実施形態では、mは、好ましくは、10〜40であり、nは、1である。
式中、波線は、前述のように抗体への結合点を示し、アスタリスクは、A基の残部への結合を示す。
−C(=O)NH−、
−C(=O)O−、
−NHC(=O)−、
−OC(=O)−、
−OC(=O)O−、
−NHC(=O)O−、
−OC(=O)NH−、
−NHC(=O)NH−、
−NHC(=O)NH、
−C(=O)NHC(=O)−、
−S−、
−S−S−、
−CH2C(=O)−、
−C(=O)CH2−、
=N−NH−、及び
−NH−N=
から選択される基と交換される。
式中、波線は、抗体への結合点、またはA基の残部への結合のいずれかを示し、アスタリスクは、抗体へのもう1つの結合点またはA基の残部へのもう1つの結合を示す。
−C(=O)N<、
−C(=O)O−、
−NHC(=O)−、
−OC(=O)−、
−OC(=O)O−、
−NHC(=O)O−、
−OC(=O)N<、及び
−NHC(=O)N<、
から選択される結合によって連結され得、
ここで、N<またはO−は、Dの一部である。
−C(=O)N<、及び
−NHC(=O)−
から選択される結合によって連結される。
−Phe−Lys−、
−Val−Ala−、
−Val−Lys−、
−Ala−Lys−、
−Val−Cit−、
−Phe−Cit−、
−Leu−Cit−、
−Ile−Cit−、
−Phe−Arg−、及び
−Trp−Cit−;
から選択され、
ここで、Citは、シトルリンである。そのようなジペプチドでは、−NH−は、X1のアミノ基であり、COは、X2のカルボニル基である。
−Phe−Lys−、
−Val−Ala−、
−Val−Lys−、
−Ala−Lys−、及び
−Val−Cit−
から選択される。
−Gly−Gly−、
−Pro−Pro−、及び
−Val−Glu−
が含まれる。
式中、−NH−X1−X2−COは、ジペプチドであり、−N<は、薬物単位の一部であり、アスタリスクは、薬物単位の残部への結合点を示し、かつ波線は、L1の残部への結合点またはAへの結合点を示す。好ましくは、波線は、Aへの結合点を示す。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、nは、0または1であり、及びmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、及びmは、0〜10、1〜8、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、かつmは、0〜10、1〜7、好ましくは、3〜7、最も好ましくは、3または7である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、及びmは、0〜10、1〜8、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、かつmは、0〜10、1〜8、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、Sは、リガンド単位の硫黄基(sulfur group)であり、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、かつnは、0〜6である。1つの実施形態では、nは、5である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、Sは、リガンド単位の硫黄基であり、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、かつnは、0〜6である。1つの実施形態では、nは、5である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、Sは、リガンド単位の硫黄基であり、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、かつmは、0〜10、1〜8、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、かつmは、0〜10、1〜7、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、かつnは、0〜6である。1つの実施形態では、nは、5である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、かつnは、0〜6である。1つの実施形態では、nは、5である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、かつmは、0〜10、1〜8、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。
式中、アスタリスクは、L2またはDへの結合点を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、nは、0または1であり、かつmは、0〜30である。好ましい実施形態では、nは、1であり、かつmは、0〜10、1〜8、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。
リンカーは、1つまたは複数のアミノ酸単位を含んだ、プロテアーゼによる切断が可能なペプチド部分を含み得る。ペプチドリンカー試薬は、ペプチド化学の分野においてよく知られる固相または液相の合成方法(E.Schroder and K.Lubke,The Peptides,volume 1,pp 76−136(1965)Academic Press)によって調製してよい。こうしたペプチド化学には、Rainin Symphonyペプチド合成機(Protein Technologies,Inc.,Tucson,AZ)、またはモデル433(Applied Biosystems,Foster City,CA)などの自動合成機でのt−BOC化学(Geiser et al “Automation of solid−phase peptide synthesis” in Macromolecular Sequencing and Synthesis,Alan R.Liss,Inc.,1988,pp.199−218)、及びFmoc/HBTU chemistry(Fields,G.and Noble,R.(1990)“Solid phase peptide synthesis utilizing 9−fluoroenylmethoxycarbonyl amino acids”,Int.J.Peptide Protein Res.35:161−214)が含まれる。
アミノ酸側鎖が、水素(グリシン)以外を含むとき、アミノ酸側鎖が結合する炭素原子は、キラルである。アミノ酸側鎖が結合する炭素原子はそれぞれ独立して、(S)または(R)の立体配置をとるか、またはラセミ混合物である。したがって、薬物−リンカー試薬は、エナンチオマー的に純粋、ラセミ性、またはジアステレオマー性である。
式中、Qは、C1−C8アルキル、−O−(C1−C8アルキル)、−ハロゲン、−NO2、または−CNであり;かつmは、0〜4の範囲の整数である。
式中、Mtrは、モノ−4−メトキシトリチルであり、Qは、C1−C8アルキル、−O−(C1−C8アルキル)、−ハロゲン、−NO2、または−CNであり;かつmは、0〜4の範囲の整数である。
本開示の第1の態様の複合体は、N10位にキャッピング基であるRCを有し得る。
Alloc、Fmoc、Boc、Troc、Teoc、Psec、Cbz、及びPNZ
から選択される。
任意選択で、カルバメート保護基は、Mocからさらに選択される。
式中、アスタリスクは、N10位への結合点を示し、G2は、終結基であり、L3は、共有結合であるか、または切断可能なリンカーL1であり、L2は、共有結合であるか、またはOC(=O)と一緒になって自壊性リンカーを形成する。
L2は、R10に関して上に定義されるとおりである。
Alloc、Fmoc、Boc、Troc、Teoc、Psec、Cbz、及びPNZ
から選択されるカルバメート保護基である。
任意選択で、カルバメート保護基は、Mocからさらに選択される。
式中、アスタリスクは、L3への結合点を示し、nは、0〜6であり、かつG4は、OH、OR、SH、SR、COOR、CONH2、CONHR、CONRR’、NH2、NHR、NRR’、NO2、及びハロから選択される。OH基、SH基、NH2基、及びNHR基は、保護される。1つの実施形態では、nは、1〜6であり、好ましくは、nは、5である。1つの実施形態では、G4は、OR、SR、COOR、CONH2、CONHR、CONRR’、及びNRR’である。1つの実施形態では、G4は、OR、SR、及びNRR’である。好ましくは、G4は、OR及びNRR’から選択され、最も好ましくは、G4は、ORである。最も好ましくは、G4は、OMeである。
式中、アスタリスクは、L3への結合点を示し、nは、0または1であり、mは、0〜50であり、かつG4は、OH、OR、SH、SR、COOR、CONH2、CONHR、CONRR’、NH2、NHR、NRR’、NO2、及びハロから選択される。好ましい実施形態では、nは、1であり、mは、0〜10、1〜2、好ましくは、4〜8であり、最も好ましくは、4または8である。別の実施形態では、nは、1であり、mは、10〜50、好ましくは、20〜40である。OH基、SH基、NH2基、及びNHR基は、保護される。1つの実施形態では、G4は、OR、SR、COOR、CONH2、CONHR、CONRR’、及びNRR’である。1つの実施形態では、G4は、OR、SR、及びNRR’である。好ましくは、G4は、OR及びNRR’から選択され、最も好ましくは、G4は、ORである。好ましくは、G4は、OMeである。
式中、nは、1〜20であり、mは、0〜6であり、かつG4は、OH、OR、SH、SR、COOR、CONH2、CONHR、CONRR’、NH2、NHR、NRR’、NO2、及びハロから選択される。1つの実施形態では、nは、1〜10である。別の実施形態では、nは、10〜50、好ましくは、20〜40である。1つの実施形態では、nは、1である。1つの実施形態では、mは、1である。OH基、SH基、NH2基、及びNHR基は、保護される。1つの実施形態では、G4は、OR、SR、COOR、CONH2、CONHR、CONRR’、及びNRR’である。1つの実施形態では、G4は、OR、SR、及びNRR’である。好ましくは、G4は、OR及びNRR’から選択され、最も好ましくは、G4は、ORである。好ましくは、G4は、OMeである。
1つの実施形態では、OHは、Bzl、TBDMS、またはTBDPSで保護される。
1つの実施形態では、SHは、Acm、Bzl、Bzl−OMe、Bzl−Me、またはTrtで保護される
1つの実施形態では、NH2またはNHRは、Boc、Moc、Z−Cl、Fmoc、Z、またはAllocで保護される。
本開示の実施形態では、ConjAを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
薬物負荷は、例えば、抗体といった抗体当たりのPBD薬物の平均数である。本開示の化合物を、元々存在するシステインに結合する場合、薬物負荷の範囲は、抗体当たりの薬物(DL)の数として1〜8であり得、すなわち薬物部分が抗体に共有結合で結合する数は、1、2、3、4、5、6、7、及び8である。複合体の組成物は、1〜8の数の範囲の薬物と複合化した抗体の集団を含む。本開示の化合物が、リジンに結合する場合、薬物負荷の範囲は、抗体当たりの薬物(DL)の数として1〜80であり得るが、上限数は、40、20、10、または8であることが好ましくあり得る。複合体の組成物は、1〜80、1〜40、1〜20、1〜10、または1〜8の数の範囲の薬物と複合化した抗体の集団を含む。
別段の記載がない限り、前述のものには、こうした置換基のよく知られるイオン性形態、塩形態、溶媒和物形態、及び保護形態が含まれる。例えば、カルボン酸(−COOH)に対する参照には、その陰イオン性(カルボキシレート)形態(−COO−)、塩、または溶媒和物、ならびに通常の保護形態も含まれる。同様に、アミノ基に対する参照には、そのアミノ基のプロトン化形態(−N+HR1R2)、塩、または溶媒和物、例えば、塩酸塩、ならびにアミノ基の通常の保護形態が含まれる。同様に、ヒドロキシル基に対する参照には、その陰イオン性形態(−O−)、塩、または溶媒和物、ならびに通常の保護形態も含まれる。
例えば、医薬的に許容可能な塩といった、活性化合物の対応する塩を調製する、精製する、かつ/または取り扱うことが簡便または望ましくあり得る。医薬的に許容可能な塩の例は、Berge,et al.,J.Pharm.Sci.,66,1−19(1977)において考察されている。
活性化合物の対応する溶媒和物を調製、精製、及び/または取り扱うことが簡便または望ましくあり得る。本明細書では、「溶媒和物」という用語は、通常の意味において使用され、溶質(例えば、活性化合物、活性化合物の塩)と溶媒との複合体を指す。溶媒が水であるならば、溶媒和物は、便宜上、水和物と称され得、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などと称され得る。
本開示のある特定の化合物は、1つまたは複数の特定の幾何学形態、光学形態、エナンチオマー形態、ジアステレオマー形態、エピマー形態、アトロプ異性形態、立体異性形態、互変異性形態、立体構造形態、またはアノマー形態で存在し得、こうした形態には、限定はされないが、シス−形態及びトランス−形態;E−形態及びZ−形態;c−形態、t−形態、及びr−形態;エンド−形態及びエキソ−形態;R−形態、S−形態、及びメソ−形態;D−形態及びL−形態;d−形態及びl−形態;(+)形態及び(−)形態;ケト−形態、エノール−形態、及びエノラート−形態;シン−形態及びアンチ−形態;シンクリナル−形態及びアンチクリナル−形態;α−形態及びβ−形態;アキシャル形態及びエクアトリアル形態;舟形、いす形、ねじれ型、エンベロープ型、及び半椅子型の形態;ならびにそれらの組み合わせが含まれ、本明細書ではこれ以後、これらはまとめて「異性体」(または「異性形態」)と称される。
インビトロでの細胞増殖アッセイ
一般に、抗体−薬物複合体(ADC)の細胞傷害活性または細胞分裂阻害活性は、細胞培養培地における、ADCの抗体に対する、受容体タンパク質を有する哺乳類細胞の曝露と、約6時間〜約5〜7日の期間の細胞の培養と、細胞生存率の測定と、によって測定される。細胞に基づくインビトロアッセイは、本開示のADCによる生存率(増殖)、細胞傷害性、及びアポトーシス誘導(カスパーゼ活性化)を測定するために使用される。
ADC(20μg/ml)の保存溶液(1ml)は、適切な細胞培養培地で調製する。
15mlの遠心管において、100μlを900μlの細胞培養培地に連続的に移すことによって、保存ADCの10倍の段階希釈系列を調製する。
予め細胞浮遊液(100μl)を播種した96ウェルの黒色プレートにADC希釈液(100μl)をそれぞれ分注して、最終体積を200μlとし、ウェルを4連にする。対照ウェルには、細胞培養培地(100μl)を添加する。
細胞株の倍加時間が30時間を超えるのであれば、ADCと共に5日間インキュベートし、そうでなければ、4日間のインキュベートを実施する。
インキュベート期間の終了時点で、細胞生存率をAlamar blueアッセイで評価する。全プレートにAlamarBlue(Invitrogen)を分注(ウェル当たり20μl)し、4時間インキュベートする。励起波長を570nm、蛍光波長を585nmとし、Alamar blueの蛍光をVarioskan flashプレートリーダーで測定する。対称ウェルの平均蛍光と比較して、ADC処理したウェルの平均蛍光から細胞生存率を計算する。
本開示の複合体は、PBD化合物を標的位置に供給するために使用してよい。
本開示の複合体は、治療方法において使用してよい。治療方法も提供され、当該方法は、治療上有効な量の本開示の複合体化合物の、治療を必要とする対象への投与を含む。「治療上有効な量」という用語は、患者に対する利益供与に十分な量である。そのような利益は、少なくとも1つの症状が多少なりとも寛解することであり得る。実際の投与量、ならび投与の速度及び過程は、治療されているものの性質及び重症度に依存することになる。例えば、投与量の決定といった、治療の処方は、一般医及び他の医師の責任の範囲内である。
化学療法剤の追加の例には、オキサリプラチン(ELOXATIN(登録商標)、Sanofi)、ボルテゾミブ(VELCADE(登録商標)、Millennium Pharm.)、スーテント(sutent)(SUNITINIB(登録商標)、SU11248、Pfizer)、レトロゾール(FEMARA(登録商標)、Novartis)、メシル酸イマチニブ(GLEEVEC(登録商標)、Novartis)、XL−518(Mek阻害剤、Exelixis、WO2007/044515)、ARRY−886(Mek阻害剤、AZD6244、Array BioPharma、Astra Zeneca)、SF−1126(PI3K阻害剤、Semafore Pharmaceuticals)、BEZ−235(PI3K阻害剤、Novartis)、XL−147(PI3K阻害剤、Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、フルベストラント(FASLODEX(登録商標)、AstraZeneca)、ロイコボリン(フォリン酸)、ラパマイシン(シロリムス、RAPAMUNE(登録商標)、Wyeth)、ラパチニブ(TYKERB(登録商標)、GSK572016、Glaxo Smith Kline)、ロナファーニブ(SARASAR(商標)、SCH66336、Schering Plough)、ソラフェニブ(NEXAVAR(登録商標)、BAY43−9006、Bayer Labs)、ゲフィチニブ(IRESSA(登録商標)、AstraZeneca)、イリノテカン(CAMPTOSAR(登録商標)、CPT−11、Pfizer)、ティピファニブ(ZARNESTRA(商標)、Johnson & Johnson)、ABRAXANE(商標)(Cremophor非含有)、パクリタキセルのアルブミン結合ナノ粒子製剤(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Il)、バンデタニブ(rINN、ZD6474、ZACTIMA(登録商標)、AstraZeneca)、クロラムブシル(chloranmbucil)、AG1478、AG1571(SU5271;Sugen)、テムシロリムス(TORISEL(登録商標)、Wyeth)、パゾパニブ(GlaxoSmithKline)、カンホスファミド(TELCYTA(登録商標)、Telik)、チオテパ、及びシクロスホスファミド(cyclosphosphamide)(CYTOXAN(登録商標)、NEOSAR(登録商標));ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなどのアルキルスルホネート;ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)などのアジリジン;アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン(methylamelamine);アセトゲニン(特に、ブラタシン及びブラタシノン);カンプトテシン(合成類似体のトポテカンを含む);ブリオスタチン;カリスタチン(callystatin);CC−1065(そのアドゼレシン合成類似体、カルゼレシン(carzelesin)合成類似体、及びビセレシン合成類似体を含む);クリプトフィシン(具体的には、クリプトフィシン1及びクリプトフィシン8);ドラスタチン;デュオカルマイシン(合成類似体であるKW−2189及びCB1−TM1を含む);エリュテロビン;パンクラチスタチン(pancratistatin);サルコジクチン(sarcodictyin);スポンジスタチン(spongistatin);クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド(chlorophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビキン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード;カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムヌスチン(ranimnustine)などのニトロソウレア;エンジイン抗生物質(例えば、カリチアマイシン、カリチアマイシンガンマ1I、カリチアマイシンオメガI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183−186)などの抗生物質;ジネマイシン、ジネマイシンA;クロドロネートなどのビスホスホネート;エスペラミシン;ならびにネオカルチノスタチン発色団及び関連色素タンパク質のエンジイン抗生物質発色団)、アクラシノマイシン(aclacinomysin)、アクチノマイシン、オウトラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモミシニス(chromomycinis)、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorubicin)、6−ジアゾ−5−オキソ−L−ノルロイシン、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、2−ピロリノ−ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシン)、エピルビシン、エソルビシン(esorubicin)、イダルビシン、ネモルビシン(nemorubicin)、マルセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシンCなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン;メトトレキサート及び5−フルオロウラシル(5−FU)などの代謝拮抗剤;デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキサートなどの葉酸類似体;フルダラビン、6−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体;アンシタビン、アザシチジン、6−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体;カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン;アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤(anti−adrenal);フロリン酸(frolinic acid)などの葉酸補充剤;アセグラトン;アルドホスファミドグリコシド(aldophosphamide glycoside);アミノレブリン酸;エニルウラシル;アムサクリン;ベストラブシル(bestrabucil);ビサントレン(bisantrene);エダトラキセート(edatraxate);デホファミン(defofamine);デメコルチン;ジアジクオン;エルホルニチン;酢酸エリプチニウム;エポチロン;エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシ尿素;レンチナン;ロニダイニン(lonidainine);マイタンシン及びアンサミトシン(ansamitocin)などのマイタンシノイド;ミトグアゾン;ミトキサントロン;モピダンモール(mopidanmol);ニトラエリン(nitraerine);ペントスタチン;フェナメット(phenamet);ピラルビシン;ロソキサントロン(losoxantrone);ポドフィリン酸;2−エチルヒドラジド;プロカルバジン;PSK(登録商標)多糖複合体(JHS Natural Products,Eugene,OR);ラゾキサン;リゾキシン;シゾフィラン;スピロゲルマニウム;テヌアゾン酸;トリアジコン;2,2’,2”−トリクロロトリエチルアミン;トリコテシン(特に、T−2毒素、ベルラクリンA(verracurin A)、ロリジンA(roridin A)、及びアングイジン(anguidine));ウレタン;ビンデシン;ダカルバジン;マンノムスチン;ミトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン;ガシトシン;アラビノシド(「Ara−C」);シクロホスファミド;チオテパ;6−チオグアニン;メルカプトプリン;メトトレキサート;シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金類似体;ビンブラスチン;エトポシド(VP−16);イホスファミド;ミトキサントロン;ビンクリスチン;ビノレルビン(NAVELBINE(登録商標));ノバントロン;テニポシド;エダトレキセート;ダウノマイシン;アミノプテリン;カペシタビン(XELODA(登録商標)、Roche);イバンドロネート;CPT−11;トポイソメラーゼ阻害剤であるRFS2000;ジフルオロメチルオルニチン(DMFO);レチノイン酸などのレチノイド;ならびに上記のいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、及び誘導体が含まれる。
複合体化合物を単独で使用(例えば、投与)することは可能である一方で、複合体化合物は、組成物または製剤とすることが好ましいことが多い。
複合体化合物、及び複合体化合物を含む組成物の適切な投与量は、患者ごとに変わり得ることを、当業者であれば理解するであろう。最適な投与量の決定には、一般に、任意の危険または有害な副作用に対する治療利益レベルのバランスを保つことが必要となる。選択される投与量レベルは、限定はされないが、特定の化合物の活性、投与経路、投与時期、化合物の排出速度、治療期間、組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び/または材料、病状の重症度、ならびに患者の種、性別、年齢、体重、病状、総体的な健康、及び既往歴を含む、さまざまな因子に依存することになる。一般に、投与量は、実質的に有害(harmful)または有害(deleterious)な副作用を誘起することなく、所望の作用が達成される局所濃度が作用部位で達成されるように選択されることになるものの、化合物の量、及び投与経路は、最終的には、医師、獣医、または臨床医の裁量に委ねられることになる。
本明細書では、病状の治療との関連において使用される「治療」という用語は、一般に、ヒトまたは動物(例えば、獣医学的用途において)へのものであるかを問わず、何らかの所望の治療作用が達成される治療(treatment)及び治療(therapy)に関し、こうした治療作用は、例えば、病状進行の抑制であり、進行速度の低減、進行速度の停止、病状の軽減、病状の寛解、及び病状の治癒が含まれる。予防対策としての治療(すなわち、予防(prophylaxis)、予防(prevention))も含まれる。
抗体薬物複合体は、抗体の求核基と薬物−リンカー試薬との反応を含む、当業者に知られる有機化学の反応、条件、及び試薬を用いて、いくつかの経路によって調製してよい。この方法を、本開示の抗体−薬物複合体の調製に用いてよい。
対象/患者は、動物、哺乳類、胎盤哺乳類、有袋類(例えば、カンガルー、ウオンバット)、単孔類(例えば、カモノハシ)、げっ歯類(例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス)、マウス(murine)(例えば、マウス)、ウサギ(lagomorph)(例えば、ウサギ)、トリ(avian)(例えば、トリ)、イヌ(canine)(例えば、イヌ)、ネコ(feline)(例えば、ネコ)、ウマ(equine)(例えば、ウマ)、ブタ(porcine)(例えば、ブタ)、ヒツジ(ovine)(例えば、ヒツジ)、ウシ(bovine)(例えば、雌ウシ)、霊長類、サル(simian)(例えば、サルもしくは類人猿)、サル(monkey)(例えば、マーモセット、ヒヒ)、類人猿(例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル)、またはヒトであり得る。
下記の好ましい形態は、上記の本開示の態様のすべてに適用され得るか、または単一の態様に関連し得る。好ましい形態は、任意の組み合わせで共に組み合わせてよい。
Y及びY’は、好ましくは、Oである。
R9は、好ましくは、Hである。
C2’とC3’との間に二重結合が存在するとき、R12は、
(a)ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、C1−7アルキル、C3−7ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−C1−3アルキレンを含む群から選択される1つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたC5−10アリール基;
(b)C1−5飽和脂肪族アルキル;
(c)C3−6飽和シクロアルキル;
(d)R21、R22、及びR23が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、R12基における炭素原子の総数が5以下である、
(f)R24が、Hと、C1−3飽和アルキルと、C2−3アルケニルと、C2−3アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
R12がC5−10アリール基であるときのR12に存在する置換基がハロであるならば、ハロは、好ましくは、FまたはClであり、より好ましくは、Clである。
いくつかの実施形態では、R24は、H、メチル、エチル、エテニル、及びエチニルから選択される。こうした実施形態のいくつかでは、R24は、H及びメチルから選択される。
R12は、
R12を対象とする上記の好ましい形態は、R2に等しくに適用される。
いくつかの実施形態では、R22は、式IIaを有する。
いくつかの実施形態では、R10及びR11は一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する。
いくつかの実施形態では、R11aは、OHである。
いくつかの実施形態では、R20及びR21は一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する。
いくつかの実施形態では、R30及びR31は一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する。
Mは、医薬的に許容可能な一価の陽イオンであることが好ましく、より好ましくは、Na+である。
式中、
RL1’、R20、及びR21は、上に定義されるとおりであり;
nは、1または3であり;
R1aは、メチルまたはフェニルであり;かつ
R2aは、
式中、
RL1’、R20、及びR21は、上に定義されるとおりであり;
nは、1または3であり;かつ
R1aは、メチルまたはフェニルである。
式中、RL2’、R10、R11、R30、及びR31は、上に定義されるとおりであり、
nは、1または3であり;
R12aは、
アミノ基は、フェニル基のメタ位またはパラ位のいずれかに位置する。
式中、RL2’、R10、R11、R30、及びR31は、上に定義されるとおりであり、
nは、1または3であり;
R1aは、メチルまたはフェニルであり;
R12aは、
式中、RL2’、R10、R11、R30、及びR31は、上に定義されるとおりであり、
nは、1または3であり;
R1aは、メチルまたはフェニルであり;
R12aは、
旋光度は、ADP220旋光計(Bellingham Stanley Ltd.)で測定したものであり、濃度(c)は、g/100mLで示される。融点は、デジタル融点装置(Electrothermal)を使用して測定した。IRスペクトルは、Perkin−Elmer Spectrum 1000 FT IR分光計で記録した。1H NMRスペクトル及び13C NMRスペクトルは、Bruker Avance NMR分光計を300Kで使用して、それぞれ400MHz及び100MHzで測定した。化学シフトは、TMS(δ=0.0ppm)に対して記録し、シグナルは、s(一重線)、d(二重線)、t(三重線)、dt(二重の三重線)、dd(二重線の二重線)、ddd(二重線の二重の二重線)、またはm(多重線)と記載され、カップリング定数はヘルツ(Hz)で示される。質量分析(MS)のデータは、Waters 2996 PDAを備えたWaters 2695 HPLCにWaters Micromass ZQ機器を組み合わせて使用することで収集した。Waters Micromass ZQで使用したパラメーターは、下記のとおりである:キャピラリー(kV)、3.38;コーン(V)、35;引き込み電極(Extractor)(V)、3.0;ソース温度(℃)、100;脱溶媒温度(℃)、200;コーン流速(L/h)、50;脱溶媒流速(L/h)、250。高分解能質量分析(HRMS)のデータは、機器への試料導入に金属被覆されたホウケイ酸ガラスチップを使用し、ポジティブW−モードを用いてWaters Micromass QTOF Globalで記録した。薄層クロマトグラフィー(TLC)は、シリカゲルのアルミニウムプレート(Merck 60、F254)で実施し、フラッシュクロマトグラフィーでは、シリカゲル(Merck 60、230−400メッシュASTM)を利用した。HOBt(NovaBiochem)及び固体担体試薬(Argonaut)を除き、他の化学物質及び溶媒はすべて、Sigma−Aldrichから購入し、追加精製せずにそのまま使用した。無水溶媒は、適切な脱水剤の存在下で、乾燥窒素雰囲気下で蒸留することによって調製し、4Åのモレキュラーシーブまたはナトリウムワイヤーを入れて保存した。石油エーテルは、40〜60℃で沸騰する画分を指す。
HPLC(Waters Alliance 2695)は、移動相として水(A)(ギ酸含量0.1%)及びアセトニトリル(B)(ギ酸含量0.1%)を使用して実施した。グラジエント:B含量5%の初期組成を1.0分間保持した後、3分かけてB含量を5%から95%へと増加させる。組成をB含量95%として0.1分間保持した後、0.03分かけてB含量を5%に戻し、その組成を0.87分保持する。グラジエントの総実施時間は、5分に相当する。
AbHJ591、AbDJ591、AbBJ591の複合化
還元に向けて、pH7.4の1mMのEDTAのPBSを含む緩衝液で抗体AbHJ591、抗体AbDJ591、抗体AbBJ591を、抗体濃度1〜10mg/mlで調製した。還元剤であるTCEPをバッチに添加して抗体に対して50倍のモル過剰とし、インキュベーターにおいてゆっくりと軌道を描いて振とうしながら還元混合物を+37℃で3時間加熱した。還元の完了をRP−HPLCによって確認した後、抗体を室温まで冷却し、抗体の緩衝液を、1mMのEDTAを含むPBS緩衝液に交換して過剰なTCEPを除去した。抗体に対して50倍のモル過剰となるように50mMのデヒドロアスコルビン酸(DHAA)を添加することによって還元抗体を再酸化し、混合物の再酸化をHPLCで監視しながら合計2時間進行させた。その後、当該混合物を滅菌濾過してDHAAを除去した。10mMの薬物リンカー保存液をDMSOに加えて希釈(最終濃度10%v/v)したものを添加し、抗体に対して10倍過剰とすることによって複合化を開始した。複合化反応液は、室温で16時間インキュベートした。複合化の後、10倍モル過剰のN−アセチルシステインで反応物の反応を停止し、さらに30分間インキュベートした。最終生成物の緩衝液を交換することで製剤緩衝液(30mMのヒスチジン、200mMのソルビトール、0.02%のTween−20)に最終生成物を含め、SEC、HIC、RP−HPLCによって分析した。
AbLJ591の直接的な複合化、または完全還元/再酸化後の複合化を最初に試みた結果、複合化は全く生じず、対を形成しなかった重鎖Cysは、一緒になってジスルフィド架橋を形成しており、重鎖−重鎖ジスルフィド結合と同一速度で再酸化されることが確認された。溶液中及び樹脂上の両方で、先行文献に基づく部位特異的還元プロセス(mAbs 1:6,563−571;November/December,2009)を試みた。手法は両方共成功したが、固相手法がある特定の実践的な利点を有していた:
・還元の間のタンパク質濃度を増加させるためのプロセス最適化の必要性が回避され、以後の段階の間に濃度が維持されるという点
・還元された抗体が希釈されていない濃度で得られるという点
・溶液に基づくプロセスの場合はG25またはTFFへの複数回の通液が必要となり得る毒素リンカーの除去が、良好かつ確実に実施されるという点
・還元プロセスに由来して潜在性の生じた抗体を捕捉する能力
・Cysに対する親和性/結合性を有さないこと
・標的遊離チオールを遮断しないこと
AbLJ591(PBS中、25.5mg、5.1mg/mL)を、複数段階のプロセスにおいて化合物Eと複合化させた。最初の段階では、G25カラムクロマトグラフィー(NAP25、GE Healthcare)を介してAbLJ591抗体の緩衝液を交換することでpH8.0の20mMのHEPESにAbLJ591抗体を含め、希釈して1mg/mLとした。その後、脱イオン水において新たに調製した500mMの保存液を用いてシステインを添加し、最終濃度を5mMとした。37℃で90分間、部位特異的な還元プロセスを進行させた。その後、還元AbLJ591を2mLのプロテインL模倣樹脂カラムで捕捉して、還元剤の迅速かつ完全な除去を達成した(FabSorbent F1P HF、Prometic biosciences Ltd)。20カラム体積のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)でカラムを迅速に洗浄した後、ジメチルアセトアミド(DMA)5%v/v含有PBSで洗浄した。抗体に対して5倍モル過剰で化合物Eを含めた10mLのDMA5%v/v含有PBSに樹脂を懸濁し、室温で60分間複合化させた。その後、20カラム体積のジメチルアセトアミド(DMA)5%v/v含有PBSを用いてカラムを洗浄した後、20カラム体積のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で洗浄した。その後、pH3.0の0.1Mのグリシンを用いて樹脂から精製複合体を溶出させ、G25カラムクロマトグラフィー(HiTrap G25、GEHealthcare)を介して精製複合体の緩衝液を迅速に交換することで、30mMのヒスチジン、200mMのソルビトールを含むpH6の緩衝液に精製複合体を含めた。その後、脱イオン水において新たに調製した1%w/vのポリソルベート20保存液を用いてポリソルベート20を添加し、0.01%w/vとした。その後、孔径0.22μmのポリエーテルスルホン膜(Steriflip、EMD Millipore)を介した無菌化グレードの濾過を製剤化複合体に対して行った。
AbLJ591(PBS中、25.5mg、5.1mg/mL)を、複数段階のプロセスにおいて化合物Eと複合化させた。最初の段階では、G25カラムクロマトグラフィー(NAP25、GE Healthcare)を介してAbLJ591抗体の緩衝液を交換することでpH8.0の20mMのHEPESにAbLJ591抗体を含め、希釈して1mg/mLとした。その後、脱イオン水において新たに調製した500mMの保存液を用いてシステインを添加し、最終濃度を5mMとした。37℃で90分間、部位特異的な還元プロセスを進行させた。その後、G25カラムクロマトグラフィー(NAP25、GE Healthcare)を介して還元AbLJ591の緩衝液を、DMA5%v/v含有PBSに交換し、抗体に対して5倍モル過剰で化合物Eを添加し、室温で60分間複合化させた。その後、G25カラムクロマトグラフィー(HiTrap G25、GE Healthcare)を介して複合体の緩衝液を交換することで、30mMのヒスチジン、200mMのソルビトールを含むpH6の緩衝液に複合体を含めた。その後、脱イオン水において新たに調製した1%w/vのポリソルベート20保存液を用いてポリソルベート20を添加し、0.01%w/vとした。その後、孔径0.22μmのポリエーテルスルホン膜(Steriflip、EMD Millipore)を介した無菌化グレードの濾過を製剤化複合体に対して行った。
AbLJ−ConjE
G25精密脱塩カラム(GE Healthcare HiPrep 26/10)を使用して、AbLJを含む4mL(約5mg/mL)のPBSの緩衝液交換を実施し、20mMのTris/Cl、1Mのリジン、5mMのEDTAを含むpH 8.0の緩衝液にAbLJを含めた。
AbLJ(LALA)−ConjE
AbLJ(LALA)抗体は、AbLJの複合化番号2を対象として上に記載したとおりに化合物Eに複合化させた。
10μLのホウ酸緩衝液(100mM、pH8.4)及び5μLのDTT(水中0.5M)を添加することによって、抗体またはADC(35μL中、約35μg)を還元し、37℃で15分間加熱した。1体積量のアセトニトリル:水:ギ酸(49%:49%:2%v/v)で試料を希釈し、緩衝液A(トリフルオロ酢酸(0.1%v/v)(TFA)含有水)の含量を75%、緩衝液B(アセトニトリル:水:TFA 90%:10%:0.1%v/v)の含量を25%として、1ml/分の流速で平衡化したUPLCシステム(Shimadzu Nexera)におけるWidepore 3.6μ XB−C18 150x2.1mm(P/N 00F−4482−AN)カラム(Phenomenex Aeris)に80℃で希釈試料を注入した。緩衝液Bの含量を25%から55%へと10分かけて変化させるグラジエントを使用して結合材料を溶出した。214nmのUV吸収ピークを積算した。ADCまたは抗体のそれぞれについて、下記のピークを同定した:未変化の抗体軽鎖(L0)、未変化の抗体重鎖(H0)、及びこうした鎖に薬物−リンカーが付加したもののそれぞれ(1つの薬物を有する軽鎖はL1、及び薬物−リンカー結合数が1、2、または3である重鎖は、H1、H2、H3と記載)。薬物−リンカーを含む断片(すなわち、L1、H1、H2、H3)の同定には、330nmでのUVクロマトグラムを使用した。
細胞傷害性アッセイ
浮遊細胞培養物(最大1×106個/ml)の濃度及び生存率は、トリパンブルーと1:1で混合し、血球計算盤を用いて透明(生存)/青色(死滅)細胞の計数を実施することによって決定した。細胞浮遊液を希釈し、必要な播種密度(一般に105個/ml)として、96ウェルの平底プレートに分注した。Alamar blueアッセイについては、分注は黒色ウェルプレートに100μl/ウェルで実施した。MTSアッセイについては、分注は透明ウェルプレートに50μl/ウェルで実施した。ADC(20μg/ml)の保存溶液(1ml)は、濾過滅菌したADCを細胞培養培地で希釈することによって調製した。24ウェルプレートにおいて、100μlを900μlの細胞培養培地に連続的に移すことによって保存ADCの一連の8×10倍の段階希釈系列を調製した。細胞浮遊液を含む96ウェルプレートのウェルにADC希釈液(Alamar blueについては100μl/ウェル、MTSについては50μl/ウェル)をそれぞれ分注して4連とした。対照ウェルには、同一体積量の培養培地のみを添加した。4日間インキュベートした後、Alamar blueアッセイまたはMTSアッセイのいずれかによって細胞生存率を測定した。
部位特定的バージョンのPSMA標的化ADCを得るために、操作されたバージョンのAbJ抗体を、PBD薬物部(warhead)リンカーConjEに複合化した。操作されたAbJ抗体は、CHO細胞において一過性に産生させた。部位特異的ADCのインビトロでの細胞傷害性の効力は、PSMA陽性細胞株であるLNCaPにおいて野生型AbJ−ADC複合体(AbJ−ConjE)と比較した。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖;
配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン
を含む抗体。
配列番号111のアミノ酸配列を含む重鎖;
配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン;
を含み、配列番号150のC105において化合物Eに複合化した抗体。
配列番号115のアミノ酸配列を含む重鎖;
配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン;
を含み、配列番号150のC105において化合物Eに複合化した抗体。
配列番号113のアミノ酸配列を含む重鎖;
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン;
を含み、配列番号113のC103において化合物Eに複合化した抗体。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖;
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
配列番号3の配列を有するVHドメイン;及び
配列番号4の配列を有するVLドメイン;
を含み、配列番号110のC103において化合物Eに複合化した抗体。
部位特異的抗PSMA複合体、及び部位非特異的抗PSMA複合体のインビボでの有効性
8〜12週齢の雄CB.17 SCIDマウスの側腹部の皮下に、1x107個のCWR22Rv1腫瘍細胞を含む50%のMatrigelを移植した。試験の1日目に、確立したCWR22Rv1異種移植片(平均サイズ100〜150mm3)を有するマウスを選別して治療群(n=10)とし、0.33mg/kgまたは1.0mg/kgのいずれかで投薬を開始した。試験が終了するまで、1週間に2回、腫瘍の測定を実施した。
CWR22Rv1異種移植片モデルにおいてさまざまなADCを試験した。0.3mg/kgの投与を1日1回実施した場合、AbHJ591−ConjE及びAbBJ591−ConjEは、腫瘍の進行を30日間停止させ、同等の有効性を有していた。AbDJ591−ConjEは、腫瘍の進行を最大35日間停止させ、僅かに高い有効性を有していた。1.0mg/kgの投与を1日1回実施した場合、AbBJ591−ConjE、AbHJ591−ConjE、及びAbDJ591−ConjEは、腫瘍の進行を55日間、70日間、及び95日超の期間停止させた。
部位特異的複合体及び部位非特異的複合体の血漿/血清中での安定性:
確率論的に複合化したADC(AbJ)、及び部位特異的に複合化したADCを、60ug/mlの濃度でカニクイザル血漿もしくはヒト血漿またはPBSに添加し、37℃で24時間、1週間、及び3週間インキュベートした。
異なる部位特異的複合体の忍容性
Kabat EUによる位置234及び位置235の残基の変異が、ラットに対するADCの忍容性に与える影響を検討した。
AbLJ−ConjE →
配列番号1103のアミノ酸配列を含む重鎖;
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
VHドメイン;及び
VLドメイン;
を含み、配列番号1103のC103において化合物Eに複合化した抗体。
配列番号1103のアミノ酸配列を含む重鎖;
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖;
VHドメイン;及び
VLドメイン;
を含み、配列番号1103のC103において化合物Eに複合化した抗体。
異なる部位特異的複合体の薬物動態
Kabat EUによる位置234及び位置235の残基の変異が、薬物動態に与える影響を検討した。実施例5における上記のAbLJ−ConjE及びAbLJ(LALA)−ConjEを使用した。
ラットに2mg/kgでADCを投与し、20日目まで血清試料を高頻度で採取した。複合化した抗体を測定するために、目的に適合したELISAを開発した。検量線用試料、QC試料、及び試験試料を低接着性プレートにおいて希釈し、抗SG3249を標的とするマウスモノクローナル抗体で被覆されたプレートに添加した。インキュベート及び洗浄の後、ヒトFcを標的とするHRP複合化マウスモノクローナル抗体を用いてプレートをインキュベートした。
全身毒性の低減
ヒトPSMAに特異的なAbCJを、位置442においてセリンの代わりにシステインを含むように操作し(AbCJ591と記載される)、薬物−リンカーであるConjH及びConjEに複合化した。
顕著な血小板の枯渇と関連する出血を含む、有害な臨床徴候に起因して、AbCJ591−ConjH(13日目まで)及びAbCJ591−ConjE(16日目まで)では、動物は早期に死亡または安楽死のいずれかに至った;図1を参照のこと。AbBJ591−ConjEは、顕著な血小板涸渇を誘導しなかったため、21日目に第2の用量をサルに投与した。
ビス−エノールトリフレート12(500mg、0.44mmol)(WO2010/043880に記載の化合物8a)、N−メチルピペラジンボロン酸エステル(100mg、0.4mmol)、Na2CO3(218mg、2.05mmol)、MeOH(2.5mL)、トルエン(5mL)、及び水(2.5mL)の混合物を撹拌し、当該混合物に対して、Pd(PPh3)4(20.6mg、0.018mmol)を添加した。窒素雰囲気下、30℃で24時間反応混合物を継続的に撹拌し、その後すべてのボロン酸エステルが消費された。その後、反応混合物を蒸発乾燥させた後、残留物をEtOAc(100mL)に取り込み、H2O(50mLで2回)、ブライン(50mL)で洗浄し、脱水(MgSO4)してから濾過した後、減圧下で蒸発させることで、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー(80:20v/vのヘキサン/EtOAcから60:40v/vのヘキサン/EtOAcとするグラジエント溶出)によって精製することで、黄色がかった泡沫として生成物82を得た(122.6mg、25%)。
LC/MS 3.15分 (ES+) m/z (相対強度) 1144 ([M + H]+., 20%)。
PBD−トリフレート82(359mg、0.314mmol)、ボロン酸ピナコールエステル20(boronic pinacol ester 20)(250mg、0.408mmol)(WO2014/057073に記載の化合物20)、及びトリエチルアミン(0.35mL、2.51mmol)を、トルエン/MeOH/H2Oを2:1:1で含む混合物(3mL)に溶解した。マイクロ波用容器にアルゴンの通気充填処理を3回実施した後、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(21.7mg、0.018mmol)を添加し、反応混合物を80℃で10分間マイクロ波に供した。その後、CH2Cl2(100mL)を添加し、有機物を水(50mLで2回)及びブライン(50mL)で洗浄した後、MgSO4で脱水してから濾過し、減圧下での回転蒸発によって揮発性物質を除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーカラム(CHCl3/MeOH、100%から9:1)によって精製することで、純粋な83を得た(200mg、収率43%)。LC/MS 3.27分 (ES+) m/z (相対強度) 1478 ([M + H]+., 100%)。
THF(5mL)中にSEM−ジラクタム83(200mg、0.135mmol)を含む溶液に対して、Super−Hydride(登録商標)(0.34mL、THF中1M)の溶液をアルゴン雰囲気下、−78℃で滴下して添加した。反応混合物の内部温度を一定に維持するために、5分かけて添加を完了させた。20分後、LC/MS分析のために一定分量を取り出して水で反応を停止させた。このLC/MS分析によって、反応が完了したことを確認した。反応混合物に水(20mL)を添加し、反応混合物を冷却浴から取り出した。有機層をEtOAc(30mLで3回)で抽出し、統合した有機物をブライン(50mL)で洗浄し、MgSO4で脱水してから濾過した後、減圧下での回転蒸発によって溶媒を除去した。粗生成物をMeOH(6mL)、CH2Cl2(3mL)、水(1mL)、及び十分量のシリカゲルに溶解し、撹拌しながら粘性懸濁液を形成させた。5日後、懸濁液を焼結式漏斗に通して濾過し、生成物の溶出が完了するまでCH2Cl2/MeOH(9:1)(100mL)で洗浄した。有機層をブライン(50mLで2回)で洗浄し、MgSO4で脱水してから濾過した後、減圧下での回転蒸発によって溶媒を除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー(100%のCHCl3から96%CHCl3/4%MeOH)によって精製することで、黄色の固体として生成物84を得た(100mg、63%)。LC/MS 2.67分 (ES+) m/z (相対強度) 1186 ([M + H]+., 5%)。
DMF(0.9mL)中にPBD84(36.4mg、0.03mmol)を含む溶液に対して、過剰なピペリジン(0.1mL、1mmol)を添加した。混合物を室温で20分間撹拌し、この時点で反応が完了した(LC/MSによって監視した)。反応混合物をCH2Cl2(50mL)で希釈し、ピペリジンの除去が完了するまで有機相をH2O(50mLで3回)で洗浄した。有機相をMgSO4で脱水してから濾過し、減圧下での回転蒸発によって過剰な溶媒を除去することで粗生成物85を得て、これをそのまま次の段階に使用した。LC/MS 2.20分 (ES+) m/z (相対強度) 964 ([M + H]+., 5%)。
脱水CH2Cl2(4mL)中にマレイミド−PEG8−酸(25mg、0.042mmol)を含む懸濁液に対して、EDCI塩酸塩(8mg、0.042mmol)をアルゴン雰囲気下で添加した。PBD85(42mg、未精製物)を迅速に添加し、反応が完了(3時間)するまで撹拌を維持した。反応物をCH2Cl2で希釈し、有機相をH2O及びブラインで洗浄した後、MgSO4で脱水してから濾過し、減圧下での回転蒸発によって過剰な溶媒を除去した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(100%のCHCl3から開始し、9:1のCHCl3/MeOHへと変化させて徐々に溶出)によって慎重に精製した後、逆相HPLCを実施することで未反応のマレイミド−PEG8−酸を除去した。生成物86を単離し、2段階の総収率は10%であった(6.6mg)。LC/MS 1.16分 (ES+) m/z (相対強度) 770.20 ([M + 2H]+., 40%)。
PBD−トリフレート21(469mg、0.323mmol)(WO2014/057073に記載の化合物21)、ボロン酸ピナコールエステル(boronic pinacol ester)(146.5mg、0.484mmol)、及びNa2CO3(157mg、1.48mmol)を、トルエン/MeOH/H2Oを2:1:1で含む混合物(10mL)に溶解した。反応用フラスコにアルゴンを3回通気した後、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(7.41mg、0.0064mmol)を添加し、反応混合物を30℃に一晩加熱した。減圧下で溶媒を除去し、残留物をH2O(50mL)に取り込んでからEtOAc(50mLで3回)で抽出した。統合した有機物をブライン(100mL)で洗浄し、MgSO4で脱水してから濾過した後、減圧下での回転蒸発によって揮発性物質を除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(CHCl3100%からCHCl3/MeOH 95%:5%)によって精製することで、純粋な83を収率33%で得た(885mg)。LC/MS 3.27分 (ES+) m/z (相対強度) 1478 ([M + H]+., 100%)。
ビス−エノールトリフレート87(1g、0.87mmol)(WO2010/043880に記載の化合物8b)、4−(4−メチルピペラジン−1−イル)フェニルボロン酸ピナコールエステル(264mg、0.87mmol)、Na2CO3(138mg、1.30mmol)、EtOH(5mL)、トルエン(10mL)、及び水(5mL)の混合物を撹拌し、当該混合物に対してPd(PPh3)4(30mg、26μmol)を添加した。反応混合物を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した後、出発材料が完全に消費されたことをTLC(EtOAc)及びLC/MS(1.52分 (ES+) m/z (相対強度) 1171.40 ([M + H]+., 100))によって確認した。反応混合物をEtOAc(400mL)で希釈してから、H2O(300mLで2回)、ブライン(200mL)で洗浄し、脱水(MgSO4)してから濾過した後、減圧下で蒸発させることによって粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー(100:0v/vのEtOAc/MeOHから85:15v/vのEtOAc/MeOHとするグラジエント溶出)によって精製することで、非対称型トリフレート88を得た(285mg、28%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (s, 1H), 7.37 − 7.29 (m, 4H), 7.23 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 7.14 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 5.54 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 4.71 (dd, J = 10.0, 2.6 Hz, 2H), 4.62 (td, J = 10.7, 3.5 Hz, 2H), 4.13 − 4.01 (m, 4H), 3.97 − 3.87 (m, 8H), 3.85 − 3.75 (m, 2H), 3.74 − 3.63 (m, 2H), 3.31 − 3.22 (m, 4H), 3.14 (tdd, J = 16.2, 10.8, 2.2 Hz, 2H), 2.73 − 2.56 (m, 4H), 2.38 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.02 − 1.92 (m, 4H), 1.73 (dd, J = 9.4, 6.0 Hz, 2H), 1.04 − 0.90 (m, 4H), 0.05 − −0.00 (m, 18H)。MS (ES+) m/z (相対強度) 1171.40 ([M + H]+., 100)。
非対称型トリフレート88(269mg、0.23mmol)、Fmoc−Val−Ala−4−アミノフェニルボロン酸ピナコールエステル20(210mg、0.34mmol)、Na2CO3(36.5mg、0.34mmol)、EtOH(5mL)、トルエン(10mL)、THF(1mL)、及び水(5mL)の混合物を撹拌し、当該混合物に対してPd(PPh3)4(8mg、7μmol)を添加した。反応混合物を窒素雰囲気下、35℃で2時間撹拌した後、TLC(80:20v/vのEtOAc/MeOH)及びLC/MS (1.68分 (ES+) m/z (相対強度) 1508.10 ([M + H]+., 100))によって出発材料が完全に消費されたことを確認した。反応混合物をEtOAc(100mL)で希釈してから、H2O(100mLで1回)、ブライン(200mL)で洗浄し、脱水(MgSO4)してから濾過した後、減圧下で蒸発させることによって粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー(100:0v/vのEtOAc/MeOHから80:20v/vのEtOAc/MeOHとするグラジエント溶出)によって精製することで、SEMで保護された二量体89を得た(240mg、69%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1H), 7.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.63 − 7.49 (m, 4H), 7.45 − 7.28 (m, 9H), 7.25 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.87 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 6.41 (s, 1H), 5.63 − 5.49 (m, 2H), 5.25 (s, 1H), 4.71 (d, J = 10.1 Hz, 2H), 4.68 − 4.57 (m, 2H), 4.49 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 4.20 (s, 1H), 4.16 − 4.02 (m, 4H), 4.00 − 3.87 (m, 7H), 3.86 − 3.61 (m, 7H), 3.30 − 3.21 (m, 4H), 3.19 − 3.05 (m, 2H), 2.69 − 2.54 (m, 4H), 2.37 (s, 3H), 2.04 − 1.92 (m, 4H), 1.91 − 1.79 (m, 4H), 1.72 (s, 2H), 1.46 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.04 − 0.82 (m, 8H), 0.04 − −0.02 (m, 18H)。MS (ES+) m/z (相対強度) 1508.10 ([M + H]+., 100)。
無水THF(10mL)中にSEM−テトララクタム89(216mg、0.143mmol)を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してスーパーヒドリド(Super hydride)(0.358mL、0.358mmol、THF中1.0M)を−78℃で滴下して添加した。反応混合物を3時間撹拌した後、出発材料が完全に変換されたことをLC/MS (1.37分 (ES+) m/z (相対強度) 608.15 (([M + 2H]2+)/2, 100))によって直接的に確認した。反応混合物をH2O(100mL)で慎重に希釈し、DCM(100mL)で抽出した。有機層をブライン(100mL)で洗浄し、MgSO4で脱水してから濾過した後、減圧下で蒸発させることによって、中間体であるSEM−カルビノールアミンを得た。この白色の固体をMeOH(100mL)、DCM(10mL)、及びH2O(20mL)に迅速に溶解し、フラッシュシリカゲル(50g)で処理した。粘性懸濁液を室温で4日間撹拌した後、所望の生成物が十分量形成されたことをTLC(90:10v/vのCHCl3/MeOH)によって確認した。反応混合物を多孔度3の焼結式漏斗に通して濾過し、90:10v/vのCHCl3/MeOHを用いて、生成物がもはや溶出されなくなるまで(TLCによって確認)パッドをゆっくりと完全に洗い込んだ。濾液をブライン(100mL)で洗浄し、脱水(MgSO4)してから濾過した後、減圧下での蒸発処理後に高減圧下で乾燥させることで粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー(HPLCグレードのものを使用し、98:2v/vのCHCl3/MeOHから88:12v/vのCHCl3/MeOHとするグラジエント溶出)によって精製することで、カルビノールアミンエーテル及びイミンの混合物として90を得た(80mg、46%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.52 (s, 1H), 7.87 (d, J = 3.9 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.66 − 7.26 (m, 12H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.64 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.74 − 4.58 (m, 2H), 4.54 − 4.31 (m, 4H), 4.26 − 3.98 (m, 6H), 3.94 (s, 2H), 3.86 (dd, J = 13.6, 6.6 Hz, 1H), 3.63 − 3.48 (m, 2H), 3.37 (dd, J = 16.5, 5.6 Hz, 2H), 3.31 − 3.17 (m, 4H), 2.66 − 2.51 (m, 4H), 2.36 (s, 3H), 2.16 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 2.06 − 1.88 (m, 4H), 1.78 − 1.55 (m, 6H), 1.46 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 6.8 Hz, 6H)。MS (ES+) m/z (相対強度) 608.15 (([M + 2H] 2+)/2, 100)。
DMF(1mL)中に90(77mg、63.4μmol)を含む溶液に対してピペリジン(0.2mL)を添加した。反応混合物を20分間撹拌した。反応混合物をDCM(50mL)で慎重に希釈し、水(50mL)で洗浄した。有機層をブライン(100mL)で洗浄し、MgSO4で脱水してから濾過した後、減圧下で蒸発させることで、無保護のバリン中間体を得た。粗残留物をクロロホルム(5mL)に迅速に再溶解させた。Mal(Peg)8−酸(56mg、95μmol)及びEDCI(18mg、95μmol)を添加した後、メタノール(0.1mL)を添加した。反応物を室温で3時間撹拌し、この時点でTLC及びLC/MS (1.19分 (ES+) m/z (相対強度) 784.25 (([M + 2H] 2+)/2, 100))によって反応が完了したことを確認した。反応混合物をクロロホルム(50mL)で希釈してから水(100mL)で洗浄し、脱水(MgSO4)してから濾過した後、減圧下での蒸発処理後に高減圧下で乾燥させることで粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー(HPLCグレードのものを使用し、96:4v/vのCHCl3/MeOHから90:10v/vのCHCl3/MeOHとするグラジェント溶出)によって精製することで、黄色の固体として91を得た(43mg、43%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.73 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 7.6, 3.9 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 7.44 (s, 1H), 7.40 − 7.28 (m, 4H), 6.91 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.81 (s, 2H), 6.69 (s, 2H), 6.48 (s, 1H), 4.72 − 4.63 (m, 1H), 4.46 − 4.34 (m, 2H), 4.25 − 4.03 (m, 6H), 3.95 (s, 4H), 3.84 (dd, J = 17.2, 10.1 Hz, 4H), 3.72 − 3.46 (m, 30H), 3.44 − 3.32 (m, 4H), 3.30 − 3.20 (m, 4H), 2.75 − 2.63 (m, 1H), 2.59 (s, 4H), 2.55 − 2.43 (m, 3H), 2.37 (s, 3H), 2.29 (dd, J = 12.7, 6.7 Hz, 1H), 2.03 − 1.89 (m, 4H), 1.72 (d, J = 22.7 Hz, 8H), 1.46 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.01 (dd, J = 11.5, 6.9 Hz, 6H)。MS (ES+) m/z (相対強度) 784.25 (([M + 2H] 2+)/2, 100)。
(i)(S)−((ペンタン−1,5−ジイルビス(オキシ))ビス(2−アミノ−5−メトキシ−4,1−フェニレン))ビス(((S)−2−(((tert−ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)−4−メチル−2,3−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)メタノン)(98)
無水DCM(450mL)中に4,4’−(ペンタン−1,5−ジイルビス(オキシ))ビス(5−メトキシ−2−ニトロ安息香酸)(92)(36.64g、74.0mmol)、及び塩化オキサリル(18.79mL、0.222mol、3.0当量)を含む懸濁液を撹拌し、当該懸濁液に対して、発泡が活発に生じるまで無水DMF(約0.5mL)を滴下して添加し、反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物を蒸発乾燥させ、ジエチルエーテルを用いて粉砕した。得られた黄色の沈殿物を溶液から濾過分離してからジエチルエーテル(100mL)で洗浄し、無水DCM(400mL)中に(3R,5S)−5−((tert−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピロリジン−3−オール(93)(39.40g、0.170mol、2.3当量)及び無水トリエチルアミン(82.63mL、0.592mol、8当量)を含む溶液に対して−40℃で迅速に添加した。反応混合物を室温まで徐々に温めた後(2.5時間かけて実施)、LCMSによって分析し、反応が完了したことを確認した。DCM(250mL)を添加し、混合物を分液漏斗に移した。有機層を0.1MのHCl(800mLで2回)、飽和NaHCO3(500mL)、及びブライン(300mL)で順次洗浄した。MgSO4によって脱水してから濾過した後、溶媒を蒸発させることで、黄色の泡沫として生成物を得た(62.8g、92%)。LC/MS: RT 1.96分;MS (ES+) m/z (相対強度) 921.45 ([M+H]+, 100)。
無水DCM(500mL)中にジオール94(61.90g、67.20mmol)及びTEMPO(2.10g、13.44mmol、0.2当量)を含む溶液に対して、トリクロロイソシアヌル酸(21.86g、94.07mmol、1.4当量)をアルゴン雰囲気下、0℃で一度に添加した。反応混合物を0℃で20分間撹拌した後、反応混合物をLCMSによって分析し、反応が完了したことを確認した。反応混合物をDCM(400mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム(500mL)、0.2Mのチオ硫酸ナトリウム溶液(600mL)、ブライン(400mL)で洗浄してから脱水(MgSO4)した。溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー[80%n−ヘキサン/20%酢酸エチルから100%酢酸エチルとするグラジエント溶出]を実施することで、黄色の固体として純粋な95を得た(49.30g、80%)。LC/MS: RT 2.03分;MS (ES+) m/z (相対強度) 917.55 ([M+H]+, 100)。
2,6−ルチジン(22.33mL、0.192mol、8.0当量)を含む無水DCM(400mL)中にビス−ケトン95(21.98g、23.96mmol)を含む溶液を激しく撹拌し、当該溶液に対してトリフルオロメタンスルホン酸無水物(24.19mL、0.144mol、6.0当量)を−40℃で滴下して添加した。反応混合物を−40℃で30分間撹拌した後、LCMSによって分析し、反応が完了したことを確認した。反応混合物をDCM(500mL)で迅速に希釈してから、氷冷水(600mL)、氷冷飽和炭酸水素ナトリウム(400mL)、及びブライン(500mL)で洗浄し、MgSO4で脱水してから濾過した後、蒸発させることで未精製の茶色の油を得た。フラッシュクロマトグラフィー[80%n−ヘキサン/20%酢酸エチルから66%n−ヘキサン/33%酢酸エチルとするグラジエント溶出]を実施することで、茶色の泡沫として純粋な96を得た(16.40g、58%)。LC/MS: RT 2.28分;MS (ES+) m/z (相対強度)データなし。
トリフレート96(5.06g、4.29mmol)、メチルボロン酸(1.80g、30.00mmol、7当量)、及びトリフェニルアルシン(1.05g、3.43mmol、0.8当量)を無水ジオキサンに溶解し、アルゴン雰囲気下で撹拌した。その後、Pd(II)ビスベンゾニトリルクロリドを添加し、反応混合物を20分間80℃まで迅速に加熱した。反応混合物を冷却してからセライト(酢酸エチルを通して洗浄済)に通して濾過し、濾液を水(500mL)、ブライン(500mL)で洗浄し、MgSO4で脱水してから濾過後に蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー[50%n−ヘキサン/50%酢酸エチルのグラジエント溶出]を実施することで、茶色の泡沫として純粋な97を得た(4.31g、59%)。LC/MS: RT 2.23分;MS (ES+) m/z (相対強度) 913.50 ([M+H]+, 100)。
5%ギ酸/メタノール(200mL)中にビス−ニトロ化合物97(10.26g、11.24mmol)を含む溶液に対して、冷却水浴を利用して温度を25〜30℃に保ちながら、亜鉛末(26.48g、0.405mol、36.0当量)を一度に添加した。反応物を30℃で20分間撹拌した後、LCMSによって反応が完了したことを確認した。反応混合物をセライトに通して濾過することで過剰な亜鉛を除去し、これを酢酸エチル(600mL)で洗浄した。有機画分を水(500mL)、飽和炭酸水素ナトリウム(500mL)、及びブライン(400mL)で洗浄し、MgSO4で脱水してから蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー[100%クロロホルムから99%クロロホルム/1%メタノールとするグラジエント溶出]を実施することで、オレンジ色の泡沫として純粋な98を得た(6.22g、65%)。LC/MS: RT 2.20分;MS (ES+) m/z (相対強度) 853.50 ([M+H]+, 100)。
無水DCM(350mL)中にビス−アニリン98(8.14g、9.54mmol)を含む溶液に対して、ピリジン(1.156mL、14.30mmol、1.5当量)をアルゴン雰囲気下、−78℃で添加した。5分後、アリルクロロホルメート(0.911mL、8.58mmol、0.9当量)を添加し、反応混合物を室温まで温めた。反応混合物をDCM(250mL)で希釈し、飽和CuSO4溶液(400mL)、飽和炭酸水素ナトリウム(400mL)、及びブライン(400mL)で洗浄してからMgSO4で脱水した。フラッシュクロマトグラフィー[66%n−ヘキサン/33%酢酸エチルから33%n−ヘキサン/66%酢酸エチルとするグラジエント溶出]を実施することでオレンジ色の泡沫として純粋な99を得た(3.88g、43%)。LC/MS: RT 2.27分;MS (ES+) m/z (相対強度) 937.55 ([M+H]+, 100)。
無水THF(50mL)中にアニリン99(2.62g、2.79mmol)及びトリホスゲン(0.30g、1.00mmol、0.36当量)を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してトリエチルアミン(0.854mL、6.14mmol,2.2当量)をアルゴン雰囲気下、0℃で添加した。反応混合物を室温で5分間撹拌した。一定分量を取り出してメタノールで反応を停止し、LCMSによって分析してイソシアネートが形成されたことを確認した。脱水THF(50mL)中にmPEG2−Val−Ala−PAB−OH(1.54g、3.63mmol、1.3当量)及びトリエチルアミン(0.583mL、4.19mmol、1.5当量)を含む溶液を一度に添加し、得られた混合物を40℃で一晩撹拌した。反応混合物の溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー[100%クロロホルムから98%クロロホルム/2%メタノールとするグラジエント溶出]を実施することで、薄オレンジ色の固体として純粋な100を得た(2.38g、62%)。LC/MS: RT 2.29分;MS (ES+) m/z (相対強度)データなし。
無水DCM(25mL)中に100(2.35g、1.69mmol)及びピロリジン(0.35mL、4.24mmol、2.5当量)を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(39mg、0.034mmol,0.02当量)をアルゴン雰囲気下、室温で添加した。反応混合物を45分間撹拌した後、DCM(100mL)で希釈し、飽和塩化アンモニウム溶液(100mL)、ブライン(100mL)で洗浄した後、MgSO4で脱水してから濾過し、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー[100%クロロホルムから95%クロロホルム/5%メタノールとするグラジエント溶出]を実施することで、黄色の固体として純粋な101を得た(1.81g、82%)。LC/MS: RT 2.21分;MS (ES+) m/z (相対強度) 1303.65 ([M+H]+, 100)。
無水THF(50mL)中にアニリン101(1.78g、1.37mmol)及びトリホスゲン(0.15g、0.49mmol、0.36当量)を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してトリエチルアミン(0.419mL、3.01mmol、2.2当量)をアルゴン雰囲気下、0℃で添加した。反応混合物を室温で5分間撹拌した。一定分量を取り出してメタノールで反応を停止し、LCMSによって分析してイソシアネートが形成されたことを確認した。脱水THF(45mL)中にAlloc−Val−Ala−PAB−OH(0.67g、1.78mmol、1.3当量)及びトリエチルアミン(0.29mL、2.05mmol、1.5当量)を含む溶液を一度に添加し、得られた混合物を40℃で一晩撹拌した。反応混合物の溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー[100%酢酸エチルから97%酢酸エチル/3%メタノールとするグラジエント溶出]を実施することで、淡黄色の固体として純粋な102を得た(1.33g、57%)。
LC/MS: RT 2.21分;MS (ES+) m/z (相対強度)データなし。
無水THF(15mL)中にTBSで保護された化合物102(1.30g、0.76mmol)を含む溶液に対して、テトラ−n−ブチルアンモニウムフルオリド(1M、1.52mL、1.52mmol、2.0当量)を添加した。反応混合物を室温で4時間撹拌した。反応混合物をクロロホルム(100mL)で希釈し、水(40mL)及びブライン(40mL)で順次洗浄した。有機相をMgSO4で脱水し、蒸発させて黄色の固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー[95%酢酸エチル/5%メタノールから90%酢酸エチル/10%メタノールとするグラジエント溶出]を実施することで、淡黄色の固体として純粋な103を得た(1.00g、89%)。LC/MS: RT 1.60分;MS (ES+) m/z (相対強度) 1478.45 (100)。
無水DCM中に103(0.97g、0.66mmol)を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してデス・マーチン(Dess−Martin)ペルヨージナン(0.59g、1.38mmol、2.1当量)をアルゴン雰囲気下、室温で添加した。反応混合物を4時間撹拌した。反応混合物をDCM(100mL)で希釈してから、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mLで3回)、水(100mL)、ブライン(100mL)で洗浄し、MgSO4で脱水してから濾過した後、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー[100%クロロホルムから95%クロロホルム/5%メタノールとするグラジエント溶出]を実施することで、淡黄色の固体として純粋な104を得た(0.88g、90%)。LC/MS: RT 1.57分;MS (ES+) m/z (相対強度) 1473.35 (100)。
無水DCM(5mL)中に104(105mg、0.071mmol)及びピロリジン(7μL、0.086mmol、1.2当量)を含む溶液に対して、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(5mg、0.004mmol、0.06当量)を添加した。反応混合物を15分間撹拌した後、クロロホルム(50mL)で希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液(30mL)及びブライン(30mL)で順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過してから蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー[100%クロロホルムから90%クロロホルム/10%メタノールとするグラジエント溶出]を実施することで、淡黄色の固体として純粋な105を得た(54mg、55%)。LC/MS: RT 1.21分;MS (ES+) m/z (相対強度) 1389.50 (100)。
クロロホルム(5mL)中に105(203mg、0.146mmol)及びマレイミド−PEG8酸(87mg、0.146mmol)を含む溶液に対して、N−(3−ジメチルアミノプロピル)−N’−エチルカルボジイミド(28mg、0.146mmol、1当量)を添加した。反応物を1.5時間撹拌した後、クロロホルム(50mL)で希釈してから、水(50mL)、ブライン(30mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水してから濾過した後、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー[100%DCMから90%DCM/10%メタノールとするグラジエント溶出]を実施することで、淡黄色の固体として106を得た(205mg、72%)。LC/MS: RT 5.75分;MS (ES+) m/z (相対強度) 982.90 (100), 1963.70 (5)。
K562アッセイ
10%のウシ胎仔血清及び2mMのグルタミンが添加されたRPM1 1640培地において、5%のCO2を含む加湿雰囲気下、37℃でK562ヒト慢性骨髄性白血病細胞を維持し、特定用量の薬物と共に37℃で暗所において1時間または96時間インキュベートした。遠心分離(5分、300g)によって培養を終結させ、薬物を含まない培地で細胞を1回洗浄した。この適切な薬物処理の後、96ウェルマイクロタイタープレートに細胞を移した(ウェル当たり104個の細胞、試料当たり8ウェル使用)。5%のCO2を含む加湿雰囲気下、37℃で暗所においてプレートを保持した。アッセイは、黄色の可溶性テトラゾリウム塩である3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニル−2H−テトラゾリウムブロミド(MTT、Aldrich−Sigma)を還元して不溶性ホルマザンの紫色沈殿を生じさせるという能力を生存細胞が有していることに基づくものである。プレートを4日間インキュベート(対照細胞数は約10倍に増加可能)した後、20μLのMTT溶液(リン酸緩衝生理食塩水中5mg/mL)をそれぞれのウェルに添加し、プレートをさらに5時間インキュベートした。その後、プレートを300gで5分間遠心してから、細胞のペレットから培地の大部分をピペットで除去し、ウェル当たりの残存量を10〜20μLとした。それぞれのウェルにDMSO(200μL)を添加し、試料を撹拌して確実に混合が完了するようにした。その後、Titertek Multiscan ELISAプレートリーダーを用いて波長550nmで光学濃度を読み取り、用量反応曲線を作成した。それぞれの曲線について、最終的な光学濃度を対照値の50%まで低減するために必要な用量としてIC50値を読み取った。
1.式L−(DL)pの複合体であって、ここで、DLが、式Iまたは式II::
式中:
Lが、PSMAに結合する抗体(Ab)であり;
C2’とC3’との間に二重結合が存在するとき、R12が、
(ia)ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、C1−7アルキル、C3−7ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−C1−3アルキレンを含む群から選択される1つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたC5−10アリール基;
(ib)C1−5飽和脂肪族アルキル;
(ic)C3−6飽和シクロアルキル;
(id)R21、R22、及びR23が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、前記R12基における炭素原子の総数が5以下である、
(if)R24が、Hと、C1−3飽和アルキルと、C2−3アルケニルと、C2−3アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
C2’とC3’との間に単結合が存在するとき、
R12が、
R6及びR9が、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、ニトロ、Me3Sn、及びハロから独立して選択され;
ここで、R及びR’が、任意選択で置換されたC1−12アルキル基、C3−20ヘテロシクリル基、及びC5−20アリール基から独立して選択され;
R7が、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR’、ニトロ、Me3Sn、及びハロから選択され;
R’’が、C3−12アルキレン基であり、前記C3−12アルキレン基の鎖が、例えば、O、S、NRN2(RN2が、HもしくはC1−4アルキル)といった、1つもしくは複数のヘテロ原子、及び/または例えば、ベンゼンもしくはピリジンといった、1つもしくは複数の芳香族環によって分断され得るものであり;
Y及びY’が、O、S、またはNHから選択され;
R6’、R7’、R9’が、それぞれR6、R7、及びR9と同一の群から選択され;
[式I]
RL1’が、前記抗体(Ab)への連結のためのリンカーであり;
R11aが、OH、ORA(RAは、C1−4アルキルである)、及びSOzM(zは、2または3である)から選択され、かつMが、医薬的に許容可能な一価の陽イオンであり;
R20及びR21が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R20が、H及びRCから選択され、ここで、RCが、キャッピング基であり;
R21が、OH、ORA、及びSOzMから選択され;
C2とC3との間に二重結合が存在するとき、R2が、
(ia)ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、C1−7アルキル、C3−7ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−C1−3アルキレンを含む群から選択される1つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたC5−10アリール基;
(ib)C1−5飽和脂肪族アルキル;
(ic)C3−6飽和シクロアルキル;
(id)R11、R12、及びR13が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、前記R2基における炭素原子の総数が5以下である、
(if)R14が、Hと、C1−3飽和アルキルと、C2−3アルケニルと、C2−3アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
C2とC3との間に単結合が存在するとき、
R2が、
[式II]
R22が、式IIIa、式IIIb、または式IIIc:
(a)Aが、C5−7アリール基であり、
(i)Q1が、単結合であり、Q2が、単結合及び−Z−(CH2)n−から選択され、ここで、Zが、単結合、O、S、及びNHから選択され、nが、1〜3であるか;または
(ii)Q1が、−CH=CH−であり、Q2が、単結合である、
Xが、O−RL2’、S−RL2’、CO2−RL2’、CO−RL2’、NH−C(=O)−RL2’、NHNH−RL2’、CONHNH−RL2’、
RL2’が、前記抗体(Ab)への連結のためのリンカーであり;
R10及びR11が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R10が、Hであり、R11が、OH、ORA、及びSOzMから選択され;
R30及びR31が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R30が、Hであり、R31が、OH、ORA、及びSOzMから選択される、前記複合体
[式I]
式中、アスタリスクが、N10位への結合点を示し、G2が、終結基であり、L3が、共有結合であるか、または切断可能なリンカーL1であり、L2が、共有結合であるか、またはOC(=O)と一緒になって自壊性リンカーを形成する、記述57に記載の複合体。
[式II]
RC1、RC2、及びRC3が、H及びメチルから独立して選択される、記述1〜30のいずれか1つに記載の複合体。
式中、アスタリスクが、PBDへの結合点を示し、Abが、前記抗体であり、L1が、切断可能なリンカーであり、Aが、L1を前記抗体に連結する連結基であり、L2が、共有結合であるか、または−OC(=O)−と一緒になって自壊性リンカーを形成する、記述1〜84のいずれか1つに記載の複合体。
−Phe−Lys−、
−Val−Ala−、
−Val−Lys−、
−Ala−Lys−、
−Val−Cit−、
−Phe−Cit−、
−Leu−Cit−、
−Ile−Cit−、
−Phe−Arg−、
−Trp−Cit−、
から選択される、記述87に記載の複合体。
−Phe−Lys−、
−Val−Ala−、
−Val−Lys−、
−Ala−Lys−、
−Val−Cit−、
から選択される、記述88に記載の複合体。
式中、アスタリスクが、PBDへの結合点を示し、波線が、リンカーL1への結合点を示し、Yが、NH、O、C(=O)NH、またはC(=O)Oであり、かつnが、0〜3である、記述93に記載の複合体。
式中、アスタリスクが、PBDへの結合点を示し、波線が、リンカーL1の残部への結合点またはAへの結合点を示す、記述95に記載の複合体。
(i)アスタリスクが、L1への結合点を示し、波線が、前記抗体への結合点を示し、かつnが、0〜6である、
(ii)アスタリスクが、L1への結合点を示し、波線が、前記抗体への結合点を示し、nが、0または1であり、かつmが、0〜30である、
配列番号150のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置105におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖;または
配列番号160のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置102におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖
を含む、記述102または記述103のいずれか1つに記載の複合体。
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される、記述101に記載の複合体。
配列番号110のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号110の位置103におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号120の位置14及び位置103におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号130のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号130の位置14におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;または
配列番号140のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号140の位置14におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、記述1011〜100に記載の複合体。
配列番号111のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、記述101に記載の複合体。
配列番号112のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、記述101に記載の複合体。
配列番号110のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号120の位置103、位置106、及び位置109におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号120の位置14、位置106、及び位置112におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号130のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号130の位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;または
配列番号140のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号140の位置106及び位置109におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、記述101に記載の複合体。
配列番号150のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置105におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖;または
配列番号160のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置102におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖
を含む、記述111〜113のいずれか1つに記載の複合体。
配列番号113のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号113の位置103におけるシステインに複合化される、記述101に記載の複合体。
配列番号114のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号114の位置103におけるシステインに複合化される、記述101に記載の複合体。
配列番号110のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号120の位置14、位置103、位置106、及び位置109におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号130のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号130の位置14、位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;または
配列番号140のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号140の位置14、位置106、及び位置109におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、記述101に記載の複合体。
配列番号130の位置164におけるロイシン、及び/もしくは配列番号130の位置165におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換されるか;または
配列番号140の位置115におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述102〜121のいずれか1つに記載の複合体。
配列番号130の位置164におけるロイシン、及び配列番号130の位置165におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述129に記載の複合体。
かつ任意選択で、配列番号4の配列を有するVLドメインをさらに含む、先行記述のいずれか1つに記載の複合体。
かつ任意選択で、配列番号2の配列を有するVLドメインをさらに含む、先行記述のいずれか1つに記載の複合体。
Claims (145)
- 式L−(DL)pの複合体であって、ここで、DLが、式Iまたは式II::
式中:
Lが、PSMAに結合する抗体(Ab)であり、前記抗体が、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含み;
C2’とC3’との間に二重結合が存在するとき、R12が、
(ia)ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、C1−7アルキル、C3−7ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−C1−3アルキレンを含む群から選択される1つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたC5−10アリール基;
(ib)C1−5飽和脂肪族アルキル;
(ic)C3−6飽和シクロアルキル;
(id)R21、R22、及びR23が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、前記R12基における炭素原子の総数が5以下である、
(ie)R25a及びR25bの一方がHであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
ならびに
(if)R24が、Hと、C1−3飽和アルキルと、C2−3アルケニルと、C2−3アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
C2’とC3’との間に単結合が存在するとき、
R12が、
R6及びR9が、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、ニトロ、Me3Sn、及びハロから独立して選択され;
ここで、R及びR’が、任意選択で置換されたC1−12アルキル基、C3−20ヘテロシクリル基、及びC5−20アリール基から独立して選択され;
R7が、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR’、ニトロ、Me3Sn、及びハロから選択され;
R’’が、C3−12アルキレン基であり、前記C3−12アルキレン基の鎖が、例えば、O、S、NRN2(RN2が、HもしくはC1−4アルキル)といった、1つもしくは複数のヘテロ原子、及び/または例えば、ベンゼンもしくはピリジンといった、1つもしくは複数の芳香族環によって分断され得るものであり;
Y及びY’が、O、S、またはNHから選択され;
R6’、R7’、R9’が、それぞれR6、R7、及びR9と同一の群から選択され;
[式I]
RL1’が、前記抗体(Ab)への連結のためのリンカーであり;
R11aが、OH、ORA(RAは、C1−4アルキルである)、及びSOzM(zは、2または3である)から選択され、かつMが、医薬的に許容可能な一価の陽イオンであり;
R20及びR21が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R20が、H及びRCから選択され、ここで、RCが、キャッピング基であり;
R21が、OH、ORA、及びSOzMから選択され;
C2とC3との間に二重結合が存在するとき、R2が、
(ia)ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、C1−7アルキル、C3−7ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−C1−3アルキレンを含む群から選択される1つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたC5−10アリール基;
(ib)C1−5飽和脂肪族アルキル;
(ic)C3−6飽和シクロアルキル;
(id)R11、R12、及びR13が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、前記R2基における炭素原子の総数が5以下である、
(ie)R15a及びR15bの一方がHであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
ならびに
(if)R14が、Hと、C1−3飽和アルキルと、C2−3アルケニルと、C2−3アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
からなる群から選択され、
C2とC3との間に単結合が存在するとき、
R2が、
であり、ここで、R16a及びR16bが、H、F、C1−4飽和アルキル、C2−3アルケニルから独立して選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、C1−4アルキルアミド及びC1−4アルキルエステルから選択される基によって任意選択で置換され、またはR16a及びR16bの一方がHであるとき、もう一方が、ニトリル及びC1−4アルキルエステルから選択され;
[式II]
R22が、式IIIa、式IIIb、または式IIIc:
(a)Aが、C5−7アリール基であり、
(i)Q1が、単結合であり、Q2が、単結合及び−Z−(CH2)n−から選択され、ここで、Zが、単結合、O、S、及びNHから選択され、nが、1〜3であるか;または
(ii)Q1が、−CH=CH−であり、Q2が、単結合である、
(b)RC1、RC2、及びRC3が、H及び未置換のC1−2アルキルから独立して選択される、
(c)Qが、O−RL2’、S−RL2’、及びNRN−RL2’から選択され、RNが、H、メチル、及びエチルから選択される、
を有し、
Xが、O−RL2’、S−RL2’、CO2−RL2’、CO−RL2’、NH−C(=O)−RL2’、NHNH−RL2’、CONHNH−RL2’、
RL2’が、前記抗体(Ab)への連結のためのリンカーであり;
R10及びR11が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R10が、Hであり、R11が、OH、ORA、及びSOzMから選択され;
R30及びR31が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または;
R30が、Hであり、R31が、OH、ORA、及びSOzMから選択され;
[式I及び式II]
前記抗体に対する薬物部分の複合化が、鎖間システイン残基で生じる、前記複合体。 - R7が、H、OH、及びORから選択される、請求項1または請求項2のいずれかに記載の複合体。
- R7が、C1−4アルキルオキシ基である、請求項3に記載の複合体。
- Yが、Oである、請求項1〜4のいずれか1項に記載の複合体。
- R’’が、C3−7アルキレンである、先行請求項のいずれか1項に記載の複合体。
- R9が、Hである、請求項1〜6のいずれか1項に記載の複合体。
- R6が、H及びハロから選択される、請求項1〜7のいずれか1項に記載の複合体。
- C2’とC3’との間に二重結合が存在し、R12が、C5−7アリール基である、請求項1〜8のいずれか1項に記載の複合体。
- R12が、フェニルである、請求項9に記載の複合体。
- C2’とC3’との間に二重結合が存在し、R12が、C8−10アリール基である、請求項1〜8のいずれか1項に記載の複合体。
- R12が、1〜3つの置換基を有する、請求項9〜11のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記置換基が、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ、及びメチル−チオフェニルから選択される、請求項9〜12のいずれか1項に記載の複合体。
- C2’とC3’との間に二重結合が存在し、R12が、C1−5飽和脂肪族アルキル基である、請求項1〜8のいずれか1項に記載の複合体。
- R12が、メチル、エチル、またはプロピルである、請求項14に記載の化合物。
- C2’とC3’との間に二重結合が存在し、R12が、C3−6飽和シクロアルキル基である、請求項1〜8のいずれか1項に記載の複合体。
- R12が、シクロプロピルである、請求項16に記載の複合体。
- 前記R12基における炭素原子の総数が4以下である、請求項18に記載の複合体。
- 前記R12基における炭素原子の総数が3以下である、請求項19に記載の複合体。
- R21、R22、及びR23のうちの1つが、Hであり、残りの2つの基が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、請求項18〜20のいずれか1項に記載の複合体。
- R21、R22、及びR23のうちの2つが、Hであり、残りの基が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、請求項18〜20のいずれか1項に記載の複合体。
- R24が、H、メチル、エチル、エテニル、及びエチニルから選択される、請求項25に記載の複合体。
- R24が、H及びメチルから選択される、請求項26に記載の複合体。
- C2とC3との間に二重結合が存在し、R2が、C5−7アリール基である、請求項1〜30のいずれか1項に記載の複合体。
- R2が、フェニルである、請求項31に記載の複合体。
- C2とC3との間に二重結合が存在し、R1が、C8−10アリール基である、請求項1〜30のいずれか1項に記載の複合体。
- R2が、1〜3つの置換基を有する、請求項31〜33のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記置換基が、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ、及びメチル−チオフェニルから選択される、請求項31〜34のいずれか1項に記載の複合体。
- C2とC3との間に二重結合が存在し、R2が、C1−5飽和脂肪族アルキル基である、請求項1〜30のいずれか1項に記載の複合体。
- R2が、メチル、エチル、またはプロピルである、請求項36に記載の複合体。
- C2とC3との間に二重結合が存在し、R2が、C3−6飽和シクロアルキル基である、請求項1〜30のいずれか1項に記載の複合体。
- R2が、シクロプロピルである、請求項38に記載の複合体。
- 前記R2基における炭素原子の総数が4以下である、請求項40に記載の複合体。
- 前記R2基における炭素原子の総数が3以下である、請求項41に記載の複合体。
- R11、R12、及びR13のうちの1つが、Hであり、残りの2つの基が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、請求項40〜42のいずれか1項に記載の複合体。
- R11、R12、及びR13のうちの2つが、Hであり、残りの基が、H、C1−3飽和アルキル、C2−3アルケニル、C2−3アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、請求項40〜42のいずれか1項に記載の複合体。
- R14が、H、メチル、エチル、エテニル、及びエチニルから選択される、請求項47に記載の複合体。
- R14が、H及びメチルから選択される、請求項47に記載の複合体。
- R11aが、OHである、請求項1〜52のいずれか1項に記載の複合体。
- R21が、OHである、請求項1〜53のいずれか1項に記載の複合体。
- R21が、OMeである、請求項1〜53のいずれか1項に記載の複合体。
- R20が、Hである、請求項1〜55のいずれか1項に記載の複合体。
- R20が、RCである、請求項1〜55のいずれか1項に記載の複合体。
- RCが、Alloc、Fmoc、Boc、及びTrocからなる群から選択される、請求項57に記載の複合体。
- RCが、Teoc、Psec、Cbz、及びPNZからなる群から選択される、請求項57に記載の複合体。
- G2が、AcもしくはMocであるか、またはAlloc、Fmoc、Boc、Troc、Teoc、Psec、Cbz、及びPNZからなる群から選択される、請求項60に記載の複合体。
- R20及びR21が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、請求項1〜53のいずれか1項に記載の複合体。
[式II] - R22が、式IIIaを有し、Aが、フェニルである、請求項1〜30のいずれか1項に記載の複合体。
- R22が、式IIaを有し、Q1が、単結合である、請求項1〜30及び請求項63のいずれか1項に記載の複合体。
- Q2が、単結合である、請求項63に記載の複合体。
- Q2が、−Z−(CH2)n−であり、Zが、OまたはSであり、かつnが、1または2である、請求項63に記載の複合体。
- R22が、式IIIaを有し、Q1が、−CH=CH−である、請求項1〜30及び請求項63のいずれか1項に記載の複合体。
- R22が、式IIIbを有し、RC1、RC2、及びRC3が、H及びメチルから独立して選択される、請求項1〜30のいずれか1項に記載の複合体。
- RC1、RC2、及びRC3がすべて、Hである、請求項68に記載の複合体。
- RC1、RC2、及びRC3がすべて、メチルである、請求項68に記載の複合体。
- R22が、式IIIaまたは式IIIbを有し、Xが、O−RL2’、S−RL2’、CO2−RL2’、−N−C(=O)−RL2’、及びNH−RL2’から選択される、請求項1〜30及び請求項63〜70のいずれか1項に記載の複合体。
- Xが、NH−RL2’である、請求項71に記載の複合体。
- R22が、式IIIcを有し、Qが、NRN−RL2’である、請求項1〜30のいずれか1項に記載の複合体。
- RNが、Hまたはメチルである、請求項73に記載の複合体。
- R22が、式IIIcを有し、Qが、O−RL2’またはS−RL2’である、請求項1〜30のいずれか1項に記載の複合体。
- R11が、OHである、請求項1〜30及び請求項63〜75のいずれか1項に記載の複合体。
- R11が、OMeである、請求項1〜30及び請求項63〜75のいずれか1項に記載の複合体。
- R10が、Hである、請求項1〜30及び請求項63〜77のいずれか1項に記載の複合体。
- R10及びR11が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、請求項1〜30及び請求項63〜75のいずれか1項に記載の複合体。
- R31が、OHである、請求項1〜30及び請求項63〜79のいずれか1項に記載の複合体。
- R31が、OMeである、請求項1〜30及び請求項63〜79のいずれか1項に記載の複合体。
- R30が、Hである、請求項1〜30及び請求項63〜81のいずれか1項に記載の複合体。
- R30及びR31が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、請求項1〜30及び請求項63〜79のいずれか1項に記載の複合体。
- R6’、R7’、R9’、及びY’が、R6、R7、R9、及びYと同一である、請求項1〜83のいずれか1項に記載の複合体。
- L1が、酵素的に切断可能である、請求項85に記載の複合体。
- L1が、アミノ酸の連続配列を含む、請求項85または請求項86に記載の複合体。
- L1が、ジペプチドを含み、ジペプチドである−NH−X1−X2−CO−における−X1−X2−基が、
−Phe−Lys−、
−Val−Ala−、
−Val−Lys−、
−Ala−Lys−、
−Val−Cit−、
−Phe−Cit−、
−Leu−Cit−、
−Ile−Cit−、
−Phe−Arg−、
−Trp−Cit−
から選択される、請求項87に記載の複合体。 - ジペプチドである−NH−X1−X2−CO−における−X1−X2−基が、
−Phe−Lys−、
−Val−Ala−、
−Val−Lys−、
−Ala−Lys−、
−Val−Cit−
から選択される、請求項88に記載の複合体。 - ジペプチドである−NH−X1−X2−CO−における−X1−X2−基が、−Phe−Lys−、−Val−Ala−、または−Val−Cit−である、請求項89に記載の複合体。
- 前記X2−CO−基が、L2に連結される、請求項88〜90のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記NH−X1−基が、Aに連結される、請求項88〜91のいずれか1項に記載の複合体。
- L2が、OC(=O)と一緒になって、自壊性リンカーを形成する、請求項88〜92のいずれか1項に記載の複合体。
- Yが、NHである、請求項94に記載の複合体。
- nが、0である、請求項94または請求項95に記載の複合体。
- 前記波線が、Aへの結合点を示す、請求項97に記載の複合体。
- 前記抗体が、
配列番号110のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号110の位置109及び位置112におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号120の位置103、位置106、及び位置109におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号120の位置14、位置106、及び位置112におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号130のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号130の位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;または
配列番号140のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号140の位置106及び位置109におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。 - 配列番号120の位置102におけるシステインも、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される、請求項101に記載の複合体。
- 前記薬物部分が、配列番号110の位置103におけるシステイン、配列番号120の位置14におけるシステイン、配列番号120の位置103におけるシステイン、配列番号130の位置14におけるシステイン、または配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される、請求項101または請求項102のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記抗体が、
配列番号150のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置105におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖;または
配列番号160のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置102におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖
を含む、請求項101〜103のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、
配列番号113のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号113の位置103におけるシステインに複合化される、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、
配列番号114のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み;
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号114の位置103におけるシステインに複合化される、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、配列番号110のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号130のアミノ酸配列もしくはその断片、または配列番号140のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖を含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記薬物部分が、配列番号110の位置103におけるシステイン、配列番号120の位置14におけるシステイン、配列番号120の位置103におけるシステイン、配列番号130の位置14におけるシステイン、または配列番号140の位置14におけるシステインに複合化される、請求項107に記載の複合体。
- 前記抗体が、
配列番号150のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置105におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖;または
配列番号160のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置102におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖
を含む、請求項107または請求項108のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、
配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号161、配列番号162、または配列番号163のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号110の位置103におけるシステインに複合化される、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、
配列番号110のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号110の位置103におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号120の位置14及び位置103におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号130のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号130の位置14におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;または
配列番号140のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号140の位置14におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項111に記載の複合体。
- 前記抗体が、
配列番号111のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、
配列番号112のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記薬物部分が、配列番号150の位置105におけるシステイン、または配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される、請求項112〜114のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記抗体が、
配列番号110のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号110の位置103、位置109、及び位置112におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号120のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号120の位置14、位置103、位置106、及び位置109におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;
配列番号130のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号130の位置14、位置111、位置114、位置120、位置126、位置129、位置135、位置141、位置144、位置150、位置156、及び位置159におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖;または
配列番号140のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号140の位置14、位置106、及び位置109におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項116に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号115のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号116のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号150または配列番号160のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記薬物部分が、配列番号150の位置105におけるシステイン、配列番号160の位置102におけるシステインに複合化される、請求項117に記載の複合体。
- 前記抗体が、Kabatに示されるEUインデックスの位置234におけるアミノ酸の置換、及び/またはKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を含む、請求項1〜120のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記抗体が、Kabatに示されるEUインデックスの位置234におけるアミノ酸の置換、及びKabatに示されるEUインデックスの位置235における残基の置換を有する重鎖を含む、請求項121に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置117におけるロイシン、及び/または位置118におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項121〜122のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号110のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置117におけるロイシン、及び位置118におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項123に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号130のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置164におけるロイシン、及び/または位置165におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項121〜122のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号130のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置164におけるロイシン、及び位置165におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項125に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置115におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項121に記載の複合体。
- 前記置換アミノ酸が、アラニン、グリシン、バリン、またはイソロイシンによって交換される、請求項1〜127のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記置換アミノ酸が、アラニンによって交換される、請求項128に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、または配列番号27のいずれか1つによる配列を有するVHドメインを含む、請求項1〜129のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、または配列番号37のいずれか1つによる配列を有するVLドメインをさらに含む、請求項130に記載の複合体。
- 前記抗体が、配列番号3の配列を有するVHドメインを含み;
かつ任意選択で、配列番号4の配列を有するVLドメインをさらに含む、先行請求項のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、配列番号1の配列を有するVHドメインを含み;
かつ任意選択で、配列番号2の配列を有するVLドメインをさらに含む、先行請求項のいずれか1項に記載の複合体。 - 前記抗体が、未変化の抗体である、先行請求項のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記抗体が、ヒト化、脱免疫化(deimmunised)、または表面再構成(resurfaced)される、先行請求項のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記複合体が、ラットにおいて単回用量として送達されると、少なくとも2.0mg/kgの最大耐用量を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の複合体。
- 抗体(Ab)に対する薬物(D)の薬物負荷(p)が、2または4である、先行請求項のいずれか1項に記載の複合体。
- 治療における使用を目的とする、請求項1〜137のいずれか1項に記載の複合体。
- 対象における増殖性疾患の治療における使用を目的とする、請求項1〜137のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記疾患が、癌である、請求項139に記載の複合体。
- 請求項1〜137のいずれか1項に記載の複合体、及び医薬的に許容可能な希釈剤、担体、または賦形剤を含む、医薬組成物。
- 治療上有効な量の化学療法剤をさらに含む、請求項141に記載の医薬組成物。
- 対象における増殖性疾患の治療における使用を目的とする薬剤の調製における、請求項1〜137のいずれか1項に記載の複合体の使用。
- 患者に対する、請求項141に記載の医薬組成物の投与を含む、癌の治療方法。
- 前記複合体と組み合わせて、化学療法剤が前記患者に投与される、請求項144に記載の方法。
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