JP2018506587A

JP2018506587A - 眼疾患治療用組成物

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Publication number: JP2018506587A
Application number: JP2017563380A
Authority: JP
Inventors: リャオ・チーチョウ
Original assignee: Springsky Biomed Co Ltd
Current assignee: Springsky Biomed Co Ltd
Priority date: 2015-02-26
Filing date: 2016-02-25
Publication date: 2018-03-08
Anticipated expiration: 2036-02-25
Also published as: EP3261635A4; TWI766565B; TW201705953A; CN107530319B; TWI719962B; TW202133841A; KR20170132176A; CA2977697A1; EP3261635A1; CA2977697C; JP6700315B2; US9370503B1; CN107530319A; AU2016223994B2; WO2016134660A1; AU2016223994A1; EP3261635B1; KR102082351B1

Abstract

本発明は、眼疾患の治療を必要とする被験者においてそれを治療する方法であって、式（Ａ）の化合物の有効量を被験者に投与する工程を含む、眼疾患の治療方法を提供する。また、式（Ａ）の化合物と、薬学的に許容可能な担体を含む、眼疾患治療用医薬組成物も提供する。

Description

本発明は眼疾患を治療する方法に関する。

人口の高齢化が進むにつれて、視機能の低下がより顕著かつ深刻になっている。緑内障、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、視神経症、虚血性網膜症、老年性白内障などの加齢に密接な関係がある眼疾患が数多くある。これらの眼疾患は、高齢者の視力障害、さらには失明の主要な原因となっている。

網膜色素上皮（ＲＰＥ）は一層の細胞で、網膜視細胞と脈絡膜血管の間に位置し、視細胞の機械的および代謝的サポートにおいて重要な役割を果たす。さらに、ＲＰＥの機能障害は、増殖硝子体網膜症（ＰＶＲ）、ブドウ膜炎、ＡＭＤなどいくつかの眼疾患の主因である。ＡＭＤと、糖尿病性網膜症（ＤＲ）などのその他疾患は、対光反応または代謝反応から生じる酸素ラジカルの影響に恐らく関連がある。

一方で、眼血流も緑内障、虚血性網膜症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む数々の眼疾患に密接に関連している。したがって、前述の眼疾患の予防または治療には正常な眼血流の維持が不可欠である。

加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は米国および西欧において６５歳を超える人々の失明を引き起こす一番の原因となっている。両大陸に共通する危険因子には、加齢、喫煙、高血圧、狭心症、家族歴陽性が含まれる。ＡＭＤには非滲出型と滲出型がある。非滲出型はゆっくり進行する中心性視力喪失を伴う中心網膜の萎縮が生じる。滲出型は、ブルッフ膜から網膜下腔への血管新生と、血管新生プロセスを通じた脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の発生によって特徴付けられる。血管新生は往々にして虚血と低酸素症によって引き起こされる。黄斑は血液供給源が１つしかなく、また網膜は人体内で最も酸素吸収量が多いため、虚血がＡＭＤの形成に強い関連性を持つことに驚きはない（ＳｔｒａｕｓｓＯ．、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｓ．２００５；８５（３）：８４５〜８８１）。

上皮は酸素圧と酸素ラジカル関連ストレスの変化に非常に脆弱であるため、虚血関連疾患中にＲＰＥで産生される活性酸素種（ＲＯＳ）がＲＰＥ細胞にとって有害である可能性がある。ＡＭＤの重要な「早期」の事象は酸化的損傷によるＲＰＥ細胞の喪失である。酸化的ストレスは、癌や糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患など複数の加齢性慢性疾患の病因に関与していることが分かっている。

ＳｔｒａｕｓｓＯ．、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｓ．２００５；８５（３）：８４５〜８８１。

本発明の目的は、必要とする被験者において眼疾患を治療する方法と、眼疾患治療用医薬組成物を提供することにある。

本発明は、意外にも、一般式（Ａ）を有するプレニルフラバノン化合物が眼疾患の治療に有効であることを見出した。

そのうち、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立して‐Ｈ、‐ＯＨ、直鎖アルキル基または分岐アルキル基、或いは‐ＯＨで置換もしくは無置換のイソプレン基を表す。

したがって、一態様において、本発明は必要とする被験者において眼疾患を治療する方法であって、式（Ａ）の化合物の有効量を被験者に投与する工程を含む、眼疾患の治療方法を提供する。

別の一態様において、本発明は式（Ａ）の化合物と、薬学的に許容可能な担体を含む、眼疾患治療用医薬組成物を提供する。

前記式（Ａ）の化合物は、既知の方法を通じて化学合成される。

前述の概要の説明と、以下の詳細な説明は、本発明を限定するものではなく、例示と説明のみを目的としていると理解されるべきである。

本発明の前述の概要、および以下の詳細な説明は、添付の図面を参照しながら読むことでより理解されるであろう。本発明の例示を目的として、現時点で好ましい実施形態が図面に記載されている。

図１ＡはＡＲＰＥ−１９細胞の増殖に対する式（ＩＩ）の化合物の効果を示す図である。ＡＲＰＥ−１９細胞が式（ＩＩ）の化合物（「（ＩＩ）」）とともに７２時間培養された。図１ＢはＨＵＶＥＣの増殖に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＨＵＶＥＣが（ＩＩ）とともに７２時間培養された。データは平均±ＳＥＭで示されている。各群ｎ＝６、^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．０１（ＩＩ）群対ビークル対照群。図２ＡはＡＲＰＥ−１９細胞中の低酸素症誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＡＲＰＥ−１９細胞が（ＩＩ）とともに７２時間培養された。図２ＢはＨＵＶＥＣ中の低酸素症誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＨＵＶＥＣが（ＩＩ）とともに７２時間培養された。標準条件（５％ＣＯ_２と９５％空気）下においてビークル（３０％ＨＰ‐β‐ＣＤ溶液）で７２時間処理された対照群、低酸素条件（１％Ｏ_２、５％ＣＯ_２、９４％Ｎ_２）においてビークルで７２時間処理されたモデル群。データは平均±ＳＥＭで示されている。各群ｎ＝６、^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．０１対モデル群。図３ＡはＡＲＰＥ−１９細胞中のＮａＩＯ_３誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＡＲＰＥ−１９細胞が（ＩＩ）およびＮａＩＯ_３とともに７２時間培養された。図３ＢはＨＵＶＥＣ中のＮａＩＯ_３誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＨＵＶＥＣが（ＩＩ）およびＮａＩＯ_３とともに７２時間培養された。データは平均±ＳＥＭで示されている。各群ｎ＝６、^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．０１対モデル群。図４ＡはＡＲＰＥ−１９細胞中のＨ_２Ｏ_２誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＡＲＰＥ−１９細胞が（ＩＩ）およびＨ_２Ｏ_２とともに２４時間培養された。図４ＢはＨＵＶＥＣ中のＨ_２Ｏ_２誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＨＵＶＥＣが（ＩＩ）およびＨ_２Ｏ_２とともに２４時間培養された。データは平均±ＳＥＭで示されている。各群ｎ＝６、^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．０１対モデル群。図５ＡはＡＲＰＥ−１９細胞中のＮａＮ_３誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＡＲＰＥ−１９細胞が（ＩＩ）およびＮａＮ_３とともに７２時間培養された。図５ＢはＨＵＶＥＣ中のＮａＮ_３誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＨＵＶＥＣが（ＩＩ）およびＮａＮ_３とともに７２時間培養された。データは平均±ＳＥＭで示された。各群ｎ＝６、^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．０１対モデル群。図６ＡはＡＲＰＥ−１９細胞中のｔ−ＢＨＰ誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＡＲＰＥ−１９細胞が（ＩＩ）およびｔ−ＢＨＰとともに１２時間培養された。図６ＢはＨＵＶＥＣ中のｔ−ＢＨＰ誘発障害に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。ＨＵＶＥＣが（ＩＩ）およびｔ−ＢＨＰとともに１２時間培養された。データは平均±ＳＥＭで示されている。各群ｎ＝６、^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．０１対モデル群。図７Ａ−７Ｃは高眼圧症ラビットにおける眼血流に対する式（Ｉ）（「（Ｉ）」）の１％化合物の効果を示す図であって、ここで図７Ａ虹彩の血流をＱｍで示し；図７Ｂは毛様体の血流をＱｍで示し；および図７Ｃは毛脈絡膜の血流をＱｍで示す。図８Ａ−８Ｃは高眼圧症ラビットにおける眼血流に対する１％の（ＩＩ）の効果を示す図であって、図８Ａは虹彩の血流をＱｍで示し；図８Ｂは毛様体の血流をＱｍで示し；および図８Ｃは毛脈絡膜の血流をＱｍで示す。虚血発作後のラット網膜機能のｂ波回復に対する（Ｉ）の効果を示す図である。アスタリスクは対照群と治療群間におけるＰ＜０．０５（*）とＰ＜０．０１（**）での有意差を表す。虚血発作後のラット網膜機能のｂ波回復に対する（ＩＩ）の効果を示す図である。アスタリスクは対照群と治療群間におけるＰ＜０．０５（*）での有意差を表す。レーザー誘発ＡＭＤラットモデルに対する１％の（ＩＩ）の効果を表す図である。アスタリスクは２つの値間におけるＰ＜０．０５での有意差を表す。ＮａＩＯ_３誘発ドライ型ＡＭＤラットモデルに対する１％の（ＩＩ）の効果を表す図である。アスタリスクは２つの値間におけるＰ＜０．０１での有意差を表す。式（Ｉ）の化合物合成スキームを示す図である。式（ＩＩ）の化合物合成スキームを示す図である。

一態様において、本発明は必要とする被験者において眼疾患を治療する方法であって、式（Ａ）の化合物の有効量を被験者に投与する工程を含む、眼疾患の治療方法を提供する；
そのうち、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７はそれぞれ独立して‐Ｈ、‐ＯＨ、直鎖アルキル基または分岐アルキル基、或いは‐ＯＨで置換もしくは無置換のイソプレン基を表す。式（Ａ）の化合物のいくつかの例は、米国特許第７５８５８９２号に記載されており、その特許の全体は、参照することによって本願に組み込まれる。

たとえば、式（Ｉ）の化合物は、図１３に示すスキームＩを通じて合成してもよい。

別の一例では、式（ＩＩ）の化合物は、図１４に示すスキームＩＩを通じて合成してもよい。

本発明で使用される式（Ａ）の化合物は、式Ｉ〜Ｘの任意の構造を有する化合物を含むが、これに限らない。

本明細書で使用される「眼疾患」という用語は、緑内障、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、虚血性網膜症、視神経症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、ブドウ膜炎、老年性白内障を含むがこれらに限らない、目に関連する疾患を指す。眼疾患は、緑内障、ＡＭＤ、虚血性網膜症、視神経症、ＤＲ、ＤＭＥを含むがこれらに限らない、酸化的ストレスおよび（または）低酸素症に誘発される、目またはより具体的には網膜色素上皮（ＲＰＥ）の損傷に関連する疾患または異常とすることができる。眼疾患は、緑内障、虚血性網膜症、ＤＲ、ＡＭＤを含むがこれらに限らない、眼血流の減少に関連する疾患または異常とすることができる。

本明細書で使用される「有効量」という用語は、式（Ａ）の化合物の所望される治療効果、または特定種類の反応の誘導を提供するに足る量を指す。必要とされる有効量は、被験者の疾患の状態、身体状態、年齢、性別、人種、体重などに応じて、被験者によって異なる。しかしながら、適切な有効量は通常の実験のみを使用して当業者が判断することが可能であろう。本発明の一実施形態において、前記有効量は、酸化的ストレスおよび（または）低酸素症に誘発される損傷を受けたＲＰＥ細胞の生存率向上に有効な量である。好ましい一実施形態において、前記有効量は、酸化的ストレスおよび（または）低酸素症に誘発される損傷を受けたＲＰＥ細胞の生存率向上に有効な量であり、かつ同時にヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の生存率にほぼまたはまったく影響力を持たない、またはＨＵＶＥＣの生存率低下に有効である。本発明の別の実施形態において、前記有効量は、眼血流の向上に有効な量である。さらに別の一実施形態において、前記有効量は、絡膜血管新生（ＣＮＶ）の減少に有効な量である。別の一実施形態において、前記有効量は、少なくとも、ＥＲＧによって測定されるそのｃ波振幅の向上または回復によるＲＰＥ機能の向上に有効な量である。たとえば、式（Ａ）の化合物は被験者に対し１日１〜３回経口投与することができる。各経口投与について、式（Ａ）の化合物の量は０．５〜５０ｍｇ、好ましくは２〜２５ｍｇとすることができる。式（Ａ）の化合物は被験者に対し１日１〜１０回、１回１〜１０滴量、好ましくは１日１〜４回、１回１〜５滴量を点眼投与することができる。たとえば、被験者は式（Ａ）の化合物を含む製剤を毎回３滴、１日３回使用することができる。眼局所投与の場合、式（Ａ）の化合物０．０１〜１０％、好ましくは式（Ａ）の化合物０．１〜１．０％を使用することができる。

本発明の実施例において、式（Ａ）の組成物は、虚血発作後の網膜機能障害、レーザー誘発ＡＭＤなどさまざまな眼疾患の治療に有効であることが明らかにされた。

したがって、式（Ａ）の化合物は、眼疾患を患う被験者に投与することができ、そのうち、前記眼疾患は、緑内障、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、虚血性網膜症、視神経症、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ブドウ膜炎、老年性白内障で構成される群より選択される。本発明の一実施例において、前記眼疾患はＡＭＤである。特定の一実施形態において、前記眼疾患はドライ型ＡＭＤである。前記眼疾患は、眼がんであってもなくてもよい。

本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体を用いて従来既知の方法で製造することができる。本明細書で使用される用語「薬学的に許容可能な担体」とは、任意の標準的な薬学的担体を指す。そのような担体は、生理食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、プロピレングリコール、クレモフォール、ナノ粒子、リポソーム、重合体、およびそれらの組み合わせを含むことができるが、これらに限らない。

本発明の医薬組成物は、選択された投与方法に適した任意の形態に構成することができる。たとえば、経口投与に適した組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、粉末剤などの固形剤形、および溶剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤などの液体剤形を含む。局所投与に役立つ剤形は、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、懸濁剤、滴剤、乳剤、パップ剤を含む。

標準の担体に加え、本発明の経口医薬組成物は、界面活性剤、吸入剤、溶解剤、安定剤、乳化剤、増粘剤、着色剤、甘味剤、香味剤、防腐剤など経口製剤で一般的に使用される１つ以上の賦形剤を添加することができる。前記賦形剤は当業者に既知である。

本発明によれば、前記医薬組成物は、経口投与、非経口投与、眼内注射（例：硝子体内注射）、皮膚パッチ、眼に対する局所投与など、任意の経路を通じて被験者に投与することができる。局所投与用の前記医薬組成物は、眼軟膏剤、眼ゲル剤、眼クリーム剤、点眼剤の形態に製剤化することができる。

好ましい一実施形態において、前記医薬組成物は式（Ｉ）の化合物を含む。

別の好ましい一実施形態において、前記医薬組成物は式（ＩＩ）の化合物を含む。

以下、限定ではなく例示を目的として提供される次の実施例により、本発明についてさらに説明する。

式（Ａ）の化合物の合成
式（Ｉ）の化合物は、図１３で説明されるスキームＩに従って合成された。式（ＩＩ）の化合物は、図１４で説明されるスキームＩＩに従って合成された。スキームＩＩを使用して、図１４に示す式（Ｂ）の化合物を合成することができ、そのうち、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、水素基（Ｈ）とゲラニル基で構成される群より独立して選択される。

ＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣにおける酸化誘発障害に対する式（ＩＩ）の化合物の効果

材料および方法

１、材料
チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ、純度９７．５％以上）、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２、５０重量％水溶液）、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ｔ−ＢＨＰ、７０重量％水溶液）、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_３、純度９９．５％以上）、アジ化ナトリウム（ＮａＮ_３、純度９９．５％以上）、ダルベッコ変法イーグル培地／ハムＦ１２（ＤＭＥＭ／Ｆ１２、１：１）がＳｉｇｍａ―ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌ社（米国ミズーリ州セントルイス）よりすべて購入された。ヒト網膜色素上皮（ＡＲＰＥ−１９）細胞、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、血管細胞系基礎培地、内皮細胞増殖キットがＡＴＣＣ（米国バージニア州マナサス）より購入された。

ヒト網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞は視細胞（ｐｈｏｔｏｃｅｌｌ）と脈絡膜層の間にある重要／特異な細胞で、正常／良好な視機能／活動を維持するために、視細胞に栄養を提供し、かつ視細胞から代謝廃棄物を除去する。一方で、ＨＵＶＥＣは脈絡膜血管と網膜血管を含む体全体の血管系に存在する。特に脈絡膜血管新生により視機能に悪影響を及ぼす。ＶＥＧＦ阻害剤での血管新生抑制は、ウェット型ＡＭＤの治療において血管新生／血管形成を減少する主要なメカニズムである。このため、細胞増殖／ＲＰＥの増殖を向上できるが、ＨＵＶＥＣの細胞増殖に影響を与えない、またはこれを抑制する薬剤は、ＡＭＤの予防／治療に有用である。

２、細胞培養
ＡＲＰＥ−１９細胞が１０％ＦＢＳ、１００単位／ｍｌのペニシリンＧ、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン硫酸塩を添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で増殖された。ＨＵＶＥＣが内皮細胞増殖キットを添加した血管細胞系基礎培地で増殖された。細胞は加湿インキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ_２と９５％空気下において培養された。

３、ＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣの生存率に対する式（ＩＩ）の化合物の効果
ＭＴＴアッセイを使用してＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣの生存率が測定された。２×１０^５のＡＲＰＥ−１９細胞または５×１０^４のＨＵＶＥＣが９６ウェルプレート（１００μｌ／ウェル）に播種され、オーバーナイトで培養された。細胞なしの１００μｌの培地を添加して陰性対照が作製された。細胞はその後式（ＩＩ）の化合物（「（ＩＩ）」）（０．０３、０．１、０．３、１、３、１０μｇ／ｍｌ）および（または）酸化剤（ＮａＩＯ_３、Ｈ_２Ｏ_２、ｔ−ＢＨＰ、ＮａＮ_３）を加えた新鮮な培地で１２、２４、または７２時間処理された（２００μｌ／ウェル）。ビークル対照群はビークルで処理された。２０μｌのＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌ）がウェルに添加され、さらに４時間培養された。培養後、培地が廃棄され、１００μｌのＤＭＳＯを添加して生存細胞によってＭＴＴから産生されたホルマザンを溶解させた。吸光度がマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ―ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、カリフォルニア州）を使用して５７０ｎｍで測定された。次の式に従って細胞生存率が計算された：細胞生存率（％）＝（試験試料の吸光度−陰性対照の吸光度）／（ビークル対照の吸光度−陰性対照の吸光度）×１００％。

４、低酸素症処理
細胞はオーバーナイトで付着され、その後（ＩＩ）またはビークルに低酸素条件で７２時間暴露された。Ｎ_２およびＣＯ_２ガス源でＯ_２およびＣＯ_２コントローラ（Ｐｒｏｏｘモデル１１０およびＰｒｏＣＯ_２モデル１２０、ＢｉｏＳｐｈｅｒｉｘＬｔｄ．、米国ニューヨーク州レッドフィールド）により温度と湿度が管理された環境Ｃ−チャンバーを使用して、低酸素条件（１％Ｏ_２、５％ＣＯ_２、９４％Ｎ_２）が維持された。

５、統計分析
すべてのデータは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍで示された。スチューデントＴ検定を使用して統計分析が実施された。Ｐ＜０．０５の値が統計的有意であると見なされた。

結果

１、ＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣにおける（ＩＩ）の細胞毒性
結果によると、（ＩＩ）は０．０３μｇ／ｍｌ〜３μｇ／ｍｌでＡＲＰＥ−１９細胞またはＨＵＶＥＣの増殖に影響しないことが示された。しかし、（ＩＩ）は１０μｇ／ｍｌの濃度でＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣの増殖をそれぞれ３４％と９２％有意に阻害した（図１Ａと図１Ｂ）。ただし、前者は後者よりも軽度である。

２、ＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣにおける低酸素症誘発損傷に対する（ＩＩ）の効果
(ＩＩ）は０．０３μｇ／ｍｌ〜３μｇ／ｍｌで低酸素条件のＡＲＰＥ−１９細胞の生存率に影響しなかった（図２A）。１０μｇ／ｍｌの濃度で、（ＩＩ）はＡＲＰＥ−１９細胞おける低酸素症により誘発された損傷を２４％回復させた。（ＩＩ）は低酸素条件でＨＵＶＥＣの生存率を０．０３、０．１、０．３μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ２２％、１９％、２６％有意に増加させた（図２Ｂ）が、１０μｇ／ｍｌの濃度で、（ＩＩ）はＨＵＶＥＣの生存率を９７％有意に減少させた（Ｐ＜０．０１）。

３、ＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣにおけるＮａＩＯ_３誘発障害に対する（ＩＩ）の効果
０．０３、１、３、１０μｇ／ｍｌの濃度で、（ＩＩ）はＡＲＰＥ−１９細胞における３０μｇ／ｍｌのＮａＩＯ３誘発障害の生存率を有意に回復させた（Ｐ＜０．０５、図３Ａ）。また、（ＩＩ）はＡＲＰＥ−１９細胞における１００および３００μｇ／ｍｌのＮａＩＯ_３誘発障害を１０および３μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ２４％と７％回復させた（Ｐ＜０．０５、図３Ａ）。しかし、３および１０ μｇ／ｍｌの濃度で、（ＩＩ）はＨＵＶＥＣにおけるＮａＩＯ_３誘発障害を増加させた（図３Ｂ）。

４、ＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣにおけるＨ₂Ｏ₂誘発障害に対する（ＩＩ）の効果
１０μｇ／ｍｌの濃度で、（ＩＩ）はＡＲＰＥ−１９細胞における２００μＭおよび４００μＭのＨ₂Ｏ₂誘発障害をそれぞれ５５％と７２％回復させた（Ｐ＜０．０１、図４Ａ）。一方、０．３および１μｇ／ｍｌの（ＩＩ）もＨＵＶＥＣにおけるＨ₂Ｏ₂誘発障害を回復させた。しかし、１０μｇ／ｍｌの（ＩＩ）は、ＨＵＶＥＣにおける２００および４００μＭのＨ₂Ｏ_２誘発障害をそれぞれ６３％と４２％増加させた（Ｐ＜０．０１、図４Ａ）。

５、ＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣにおけるＮａＮ_３誘発障害に対する（ＩＩ）の効果（ＩＩ）はＡＲＰＥ−１９細胞におけるＮａＮ３誘発障害を０．０３μｇ／ｍｌ〜１０μｇ／ｍｌで有意に回復させた（図５Ａ）。１０ μｇ／ｍｌの濃度で、（ＩＩ）はＨＵＶＥＣにおける０．３、１、３ｍＭのＮａＮ３誘発障害をそれぞれ９５％、７５％、７１％増加させた（Ｐ＜０．０１、図５Ｂ）。３μｇ／ｍｌの（ＩＩ）もＨＵＶＥＣにおける０．３および３ｍＭのＮａＮ３誘発障害を７５％と４４％増加させた（図５Ｂ）。

６、ＡＲＰＥ−１９細胞とＨＵＶＥＣにおけるｔ−ＢＨＰ誘発障害に対する（ＩＩ）の効果
（ＩＩ）はＡＲＰＥ−１９細胞におけるｔ−ＢＨＰ誘発障害を有意に回復させた（図６Ａ）。しかし、１０μｇ／ｍｌの（ＩＩ）は、ＨＵＶＥＣにおける５０、１００、２００μＭのｔ−ＢＨＰ誘発障害をそれぞれ７１％、８０％、７６％増加させた（Ｐ＜０．０１、図６Ｂ）。３μｇ／ｍｌの（ＩＩ）も、ＨＵＶＥＣにおいて５０および１００μＭのｔ−ＢＨＰ誘発障害を２７％と２１％増加させた（図６Ｂ）。

眼血流（ＯＢＦ）の向上

眼血流は緑内障、虚血性網膜症、糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む数々の眼疾患に密接に関連している。したがって、前述の眼疾患の予防または治療には正常な眼血流の維持が不可欠である。

材料および方法

１、材料
０．５％アルカインは市販品が購入された。２０％滅菌高張性生理食塩溶液が試験室で調製された。着色ミクロスフェアがＥ−ＺＴｒａｃ（米国カリフォルニア州ロサンゼルス）より購入された。着色ミクロスフェアは、ミクロスフェアが相互に貼り付かないように、０．０１％（ｖ／v）のＴｗｅｅｎ８０を含有する生理食塩水で希釈された。０．４ｍｌ中２００万ミクロスフェアが各時間点で注射された。

体重２〜３．０ｋｇのメスのニュージーランド白ウサギは市販品が購入された。動物の飼育と処理は機関のガイドラインに従って行われた。

２、方法
ウサギは筋肉内注射により３５ｍｇ／ｋｇのケタミンと５ｍｇ／ｋｇのキシラジンで麻酔された。その後は初回量の半量が１時間毎に投与された。着色ミクロスフェア注入用に右頸動脈を通じて左心室にカニューレが挿入され、血液試料採取用に大腿動脈にカニューレが挿入された。左眼がプロパラカイン塩酸塩点眼液（Ｂａｕｓｃｈ＆Ｌｏｍｂ、Ｉｎｃ．、米国フロリダ州タンパ）１滴で処理された。針は左眼の前眼房に直接挿入され、４０ｍｍＨｇ生理食塩水マノメーターに接続された。高眼圧モデルでは眼血流が正常値の約３分の１に減少した。１０ｇ／ｌのフラボンまたはビークル（３０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液）５０μｌが、高眼圧モデル確立の３０分後に左眼に局所注入された。眼血流が組成物またはビークルでの処理の０、３０、６０、１２０分後に着色ミクロスフェアによって測定された。各時間点で、２００万ミクロスフェアが基準として注入され、ミクロスフェア注入のちょうど１分後に血液試料が大腿動脈から取得された。血液試料がヘパリン処理チューブに採取され、容量が記録された。ウサギは最後の採血後、１００ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールナトリウム注射で安楽死された。左眼が摘出され、虹彩、毛様体、網膜、脈絡膜、網膜に切断された。すべての組織が秤量された。

試料処理およびミクロスフェア計数の詳細はＥ−ＺＴｒａｃ（米国カリフォルニア州ロサンゼルス）により提供された。簡単には、溶血試薬が血液試料を入れたマイクロ遠心チューブに添加され、続いてボルテックスにかけて６０００ｒｐｍで３０分間遠心分離された。上清が除去され、組織／血液消化試薬ＩおよびＩＩが添加された。チューブに蓋をしてボルテックスにかけ、３０分間遠心分離された。上清が除去され、計数試薬が添加された後、ボルテックスにかけて１５分間遠心分離された。上清が除去され、ミクロスフェアが正確な量の計数試薬に再懸濁された。ミクロスフェアの数が顕微鏡下で血球計数器によりカウントされた。組織試料が入れられたマイクロ遠心チューブに組織／血液消化試薬Ｉが添加され、密封後９５℃で１５分間加熱された。その後チューブが３０秒間ボルテックスにかけられ、再加熱後、すべての組織試料が溶解されるまで再度ボルテックスで遠心分離された。組織試料がまだ熱いうちに組織／血液消化試薬ＩＩが添加され、続いてマイクロ遠心チューブに蓋をしてボルテックスにかけ、３０分間遠心分離された。その後のプロトコルは血液試料の処理に用いたものと同じであり、ミクロスフェアがカウントされた。

特定の時間点の各組織の血流量を次の式に従って算出した：Ｑｍ＝（Ｃｍ×Ｑｒ）／Ｃｒ。Ｑｍはμｌ／分／ｍｇで表した組織の血流量、Ｃｍは組織のミクロスフェア数、Ｑｒはμｌ／分で表した血液試料の流速、Ｃｒは基準血液試料中のミクロスフェア数である。

結果
虹彩と網膜における血流は、式（Ｉ）の１％化合物（「(Ｉ）」）と１％の（ＩＩ）で薬物注入の３０分後に有意に増加した（それぞれ図７Ａから図７Ｃおよび図８Ａから図８Ｃを参照）。

虚血発作後の網膜機能の増進

眼圧（ＩＯＰ）測定単独では、緑内障診断の唯一の決定要因とすべきでなく、ＩＯＰの減少単独を新規薬物開発の唯一の評価とすべきではない（Ｃｈｉｏｕｅｔａｌ．、ＯｐｈｔｈａｌｍｉｃＲｅｓ．１８：２６５〜２６９、１９８６）。理想的な緑内障治療薬は、ＩＯＰを低下させ、眼血流も改善できる必要がある（Ｈｏｎｇｅｔａｌ．、Ｊ．ＯｃｕｌａｒＰｈａｒｍａｃｏｌ．９：１１７〜１２４、１９９３）。眼のさまざまな部分における血流に関する研究は薬物の作用機序の理解につながるだけでなく、より安全な緑内障治療薬の開発にもつながる（ＣｈｉｏｕＥｔＡｌ．、ＯｐｈｔｈａｌｍｉｃＲｅｓ．１８：２６５〜２６９、１９８６）。さらに、網膜変性は失明原因の第１位、緑内障では第２位となっている（Ｌｉｅｒｍａｎ、ＭａｒｙＡｎｎＬｉｅｂｅｒｔ、Ｉｎｃ．、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＮＹ、１９８７）。網膜症の多くは、血管拡張剤、抗凝血剤、血液粘度低下剤を含む数々の薬剤が試されているが、治療が難しい虚血性変性により引き起こされている（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ、Ｍｅｄｃｏｍ、Ｉｎｃ．、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＮＹ、１９７４）。今日まで、これら薬剤のいずれも虚血性網膜症に福音をもたらすには至っていないようである（ＬａＶａｉｌｅｔａｌ．、ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＮＹ、１９８５.）。したがって、虚血性網膜変性の治療に使用できる新しい薬剤の開発が重要である。虚血後の網膜機能の回復は、網膜電図写真におけるｂ波の振幅の回復によって判定することができる。緑内障に加え、ＡＭＤ、ＤＲ、ＤＭＥも網膜機能の回復を促進するこれら薬剤の恩恵を受けることができる。

材料および方法

１、方法
網膜虚血実験についてはすでに説明がなされている（Ｃｈｉｏｕｅｔａｌ．、Ｊ．ＯｃｕｌａｒＰｈａｒｍａｃｏｌ．９：１７９〜１８５、１９９３、およびＣｈｉｏｕｅｔａｌ．、Ｊ．ＯｃｕｌａｒＰｈａｒｍａｃｏｌ．１０：４９３〜４９８、１９９４）。虚血発作前および後の網膜機能を評価するために網膜電図（ＥＲＧ）が実施された。ＥＲＧは、角膜に接触させて配置されたＡｇ／ＡｇＣｌ電極により記録された。１本のステンレス針が基準電極として２つの眼の間の皮下に挿入され、もう１本の針が接地電極として頸部に皮下挿入された。光刺激装置（ｐｈｏｔｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ；ＧｒａｓｓＰＳ２２Ｆｌａｓｈ）を用いて眼から５インチで光のフラッシュを発生させ、ＥＲＧ電位をポリグラフで記録した。ＥＲＧシステムはＬＫＣＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．（米国メリーランド州ゲイサーズバーグ）より購入された。１回（１０ミリ秒）の白色光刺激を用いて、ＥＲＧａ波およびｂ波を誘発した。ｂ波の最大振幅をａ波の谷とｂ波のピークから測定した。

２時間以上暗順応させたＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラット（２００〜２５０ｇ）が筋肉内へのケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）投与で麻酔された。その後は初回量の半量が１時間毎に投与され、適切な麻酔が維持された。ＥＲＧ実験のため瞳孔が１％トロピカミド（５０μｌ）で散瞳された。視神経および後毛様体動脈周りの結紮による中心網膜および後毛様体動脈の閉塞によって網膜虚血が発生された。眼球孔の基部に配置されたマイクロピペットチップで結紮糸を３０分間きつくしぼり、網膜血管を閉塞させた。３０分の網膜虚血後、結紮糸が緩められ、網膜動脈が再灌流された。その後ＥＲＧが３０、６０、９０、１２０、１８０、２４０分の時点で測定された。組成物とビークルが中心網膜動脈の閉塞前に局所投与された。

２、統計分析
すべてのデータは平均±ＳＥＭで示された。スチューデントＴ検定を使用して結果の有意性が分析された。すべての実験でＰ値＜０．０５が有意であるとみなされた。

結果
中心網膜と後毛様体動脈が結紮されると、これら動脈の血流が停止し、ＥＲＧのｂ波は速やかにゼロになった。結紮が取り除かれると、それまで通りに血流が再開されたが、ｂ波の振幅は元のレベルの２０％しか回復されなかった。しかし、１％の（Ｉ）が注入されると、ｂ波の振幅は元のレベルの約５０％に戻り（図９）、薬剤の作用は薬剤投与後少なくとも２４０分持続した。

１％の（ＩＩ）でも類似の結果が得られたが、薬剤の作用時間はより短く、１２０分間のみ持続した（図１０）。しかし、有効性は１％の（Ｉ）とほぼ同じであった。

レーザー誘発ＡＭＤの抑制

加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、西洋諸国の５０歳を超える患者における視力障害の第一の原因となっている疾患である。ＡＭＤの有病率は年齢と共に増加し、７５歳以上の人の３分の１が何らかの形のＡＭＤを罹患している。高齢人口に対するＡＭＤの大きな影響を踏まえ、過去十年間でこの状況に多くの関心が集まり、研究が行われている。

初期のＡＭＤは網膜色素上皮（ＲＰＥ）における病変とドルーゼン形成を伴う「ドライ型」で発生し、地図状萎縮および（または）脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を伴う「ウェット型」ＡＭＤへと進行することがある（Ｋｌｅｉｎ、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ１９９７；０４：７〜２１）。剥離したＲＰＥ下のブルッフ膜の破壊は、新しい未成熟の脈絡膜血管が網膜下腔へと成長するための入り口となり、ＣＮＶの形成につながる。ＣＮＶは網膜下腔内で液体漏出と出血を生じ、視界不良、視覚のゆがみ、突然の視力喪失を引き起こすことがある。治療しないと、これらの障害が進行して器質化された線維性瘢痕（円板状瘢痕と呼ばれる）を形成し、通常不可逆の中心性視力喪失を引き起こす。

材料および方法

ラットが無作為に２群に分けられた。対照群にはビークル（３０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液）が注入された。実験群には５ｍｇ／ｍｌの本発明の化合物の点眼剤が注入された。すべてのラットの両目に１滴の点眼剤が１日３回、レーザー誘発障害の前１週間と後４週間注入された。ラットはすべての手順に際してケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射で麻酔された。瞳孔が１０ｍｇ／ｍｌのアトロピンと２５ｍｇ／ｍｌのフェニレフリンそれぞれ１滴で散瞳された。ＶＯＬＫｓｕｐｅｒｐｕｐｉｌＸＬ生体顕微鏡検査法レンズ（ＫｅｅｌｅｒＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｉｎｃ．、米国ペンシルベニア州ブルームオール）を用いて眼底が視覚化された。２周波Ｎｄ：ＹＡＧレーザー（ＬａｓｅｒｅｘＬＰ３５３２；ＬｕｍｅｎｉｓＩｎｃ．、米国ユタ州ソルトレークシティ）が５３２ｎｍ波長で使用された。レーザーパラメータはスポットサイズ１００μｍ、曝露０．１５秒、電力１５０〜２００ｍＷが使用された。視神経からほぼ等しい距離で眼底に５つのレーザースポットが作製された。急性の蒸気泡はブルッフ膜の破裂を示唆した。バブル形成を伴うレーザースポットのみが研究に含められた。網膜下出血を伴う病変は除外された。レーザー処置の２週間および４週間後、デジタル眼底カメラ（ＴＲＣ−５０ＥＸ：ＴＯＰＣＯＮ、日本東京）で蛍光眼底血管造影（ＦＡ）が実施された。１００ｍｇ／ｍｌのフルオレセインナトリウム塩が舌下静脈を介して注射された（０．５ｍｌ／ｋｇ）。早期（２分未満）と後期（７分超）のフルオレセインフェーズが取得された。３滴のフルオレセインナトリウム塩注射後、１００ｍｇ／ｍｌのフルオレセインイソチオシアネート−デキストランが舌下静脈を介して注射された（１．４ｍｇ／ｋｇ）。フルオレセイン画像が２０分以内に撮影された。Ｉｍａｇｅｎｅｔ２０００デジタル画像システム（ＴｏｐｃｏｎＭｅｄｉｃａｌＳｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．、米国ニュージャージー州パラマス）によるＣＮＶ形成面積測定のため、最も鮮明な画質の画像が選ばれた。

結果
ラットの眼のブルッフ膜をレーザービームで破壊したとき、蛍光眼底血管造影でフルオレセイン漏出が測定された。ＣＮＶ形成面積がコンピュータで定量的に測定され、ｍｍ^２で表された。図１１から分かるように、対照の眼では約２．５ｍｍ^２のＣＮＶ面積が形成され、これは１％の（ＩＩ）の注入により有意に抑制された。

ＮａＩＯ_３誘発ドライ型ＡＭＤの減少

２００４年の分析によると、４０歳を超える米国人の中で、ＡＭＤおよび（または）地図状萎縮が当該人口の１．４７％の少なくとも片目に存在し、１７５万人がＡＭＤを患っていることが報告された。ＡＭＤの有病率は年齢に伴って大幅に増加し、８０歳を超える白人女性の１５％以上が新生血管を伴うＡＭＤおよび地図状萎縮を罹患している。７００万人以上にＡＭＤ罹患の相当なリスクがある。急速に高齢化する人口を背景に、ＡＭＤ罹患者数は２０２０年に５０％増加して２９５万人に達する。別の研究で、米国白人人口における現在の全失明事例のうち５４％がＡＭＤによるものであることが報告されている。この研究は、２０２０年までに米国における失明者数が７０％も増加する可能性があると予測している。

材料および方法

３０匹の８週齢オスブラウンノルウェー（ＢＮ）ラットが無作為に、正常群１０匹、ＮａＩＯ_３群１０匹、（ＩＩ）＋ＮａＩＯ_３群１０匹の３群に分けられた。対照群には溶媒（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）がＮａＩＯ_３注射なしの単独で注射された。ＮａＩＯ_３群には溶媒と３５ｍｇ／ｋｇのＮａＩＯ_３注射が舌下静脈を介して注射された。一方、（ＩＩ）＋ＮａＩＯ_３群には１％の（ＩＩ）点眼剤＋３５ｍｇ／ｋｇのＮａＩＯ_３注射が注射された。すべてのラットの両目に１滴が１日３回、ＮａＩＯ_３注射の前１週間と後４週間注入された。２週間と４週間の終わりに、ＲＰＥ機能がＥＲＧのｃ波で測定された。

ＢＮラットは２時間暗順応させた後、筋肉内へのケタミン３５ｍｇ／ｋｇとキシラジン５ｍｇ／ｋｇ投与で麻酔された。その後は初回量の半量が１時間毎に投与された。すべてのラットの瞳孔が１％のアトロピンと２．５％のフェニレフリンそれぞれ１滴で散瞳された。記録前に０．５％のテトラカイン１滴が表面麻酔のために与えられた。ＥＲＧ測定中、すべてのラットは暖かく保たれた。Ｐｅａｃｈｅｙにより開発されたＤＣ−ＥＲＧ記録法に従って記録された。簡単に説明すると、Ｈａｎｋｓ平衡塩類溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州カールスバッド）を充填した、直径１ｍｍのフィラメント付ガラスキャピラリー管（ＳｕｔｔｅｒＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国カリフォルニア州ノバート）を使用して、コネクタ付のＡｇ／ＡｇＣｌワイヤ電極に接続した。電極は角膜表面に配置された。応答は増幅され（ｄｃ−１００Ｈｚ、ゲイン＝１０００ｘ；ＤＰ−３０１、ＷａｒｎｅｒＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国コネチカット州ハムデン）、１０Ｈｚまたは１０００Ｈｚでデジタル化された。データはｉＷＯＲＸＬａｂＳｃｒｉｂｅＤａｔａＲｅｃｏｒｄｉｎｇＳｏｆｔｗａｒｅ（ｉＷｏｒｘ０ＣＢＳｃｉｅｎｃｅｓ、米国ニューハンプシャー州ドーバー）で分析された。刺激輝度を調整するため、光路内にＮＤ（ニュートラルデンシティ）フィルタ（Ｏｒｉｅｌ、米国コネチカット州ストラトフォード）を配置した、ファイバーライト高強度照明装置（Ｄｏｌａｎ−ＪｅｎｎｅｒＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、米国マサチューセッツ州）を使用して、光チャネルから光刺激が誘導された。この実験で使用された刺激輝度は、３．２２ログｃｄ／ｍ^２で、刺激時間は４分間であった。ラットの眼が位置している光ファイバー束の出力側に焦点を絞ったＭｉｎｏｌｔａ（米国ニュージャージー州ラムジー）のＬＳ−１１０測光器により、輝度較正が行われた。

結果

ラットがＮａＩＯ_３で処理されたとき、ＲＰＥ細胞の特異的な変性が引き起こされた。その結果、ＮａＩＯ_３がドライ型ＡＭＤ動物モデルの構築に使用され、損傷を受けた細胞機能がＥＲＧのｃ波振幅で測定された。図１２から分かるように、対照のＥＲＧのｃ波はＮａＩＯ_３により著しく抑制された。しかし、ＮａＩＯ_３処理ラットの１％（ＩＩ）による処理は、ＥＲＧのｃ波を著しく回復させることができる。ＮａＩＯ_３は眼でＲＰＥ細胞を特異的に変性させる強力な毒素である。その結果、ＥＲＧのｃ波はＮａＩＯ_３処理済みの眼でほぼ完全に抑制された（図１２）。このＮａＩＯ_３誘発ドライ型ＡＭＤモデルは１％の（ＩＩ）により４倍回復可能であることに注意することが重要である（図１２）。ＮａＩＯ_３の抑制がより少量の用量を与えることで最小限にされた場合、１％の（ＩＩ）による回復はより顕著かつ印象的なものになり得る。ドライ型ＡＭＤは失明を引き起こす恐ろしい疾病であるため、ドライ型ＡＭＤを予防／治療できる薬剤は非常に貴重である。

本発明の広範な概念を逸脱することなく上述した実施態様に変更を加えることが可能であることは、当業者には明らかであろう。従って、本発明は開示された具体的な実施態様に限定されず、添付の特許請求の範囲により定義される本発明の要旨と範囲内の変更は、本発明に含まれると理解される。

Claims

必要とする被験者において眼疾患を治療する方法であって、式（Ａ）の化合物の有効量を前記被験者に投与する工程を含み、
そのうち、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立して−Ｈ、−ＯＨ、直鎖アルキル基または分岐アルキル基、或いは−ＯＨで置換もしくは無置換のイソプレン基を表すことを特徴とする、眼疾患を治療する方法。
前記有効量が、酸化的ストレスおよび（または）低酸素症に誘発される損傷を受けたＲＰＥ細胞の生存率向上に有効な量；酸化的ストレスおよび（または）低酸素症に誘発される損傷を受けたＲＰＥ細胞の生存率向上に有効な量であり、かつ同時にヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の生存率にほぼまたはまったく影響力を持たない、またはＨＵＶＥＣの生存率低下に有効な量；眼血流の向上に有効な量；絡膜血管新生（ＣＮＶ）の減少に有効な量；ＲＰＥ機能の向上に有効な量；および上述の効果の組み合わせの達成に有効な量から構成される群より選択される量であることを特徴とする、請求項１に記載の眼疾患を治療する方法。
式（Ａ）の前記化合物が、次の式（Ｉ）〜（Ｘ）の任意の構造を持つ化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の眼疾患を治療する方法。
および
前記眼疾患が、緑内障、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、虚血性網膜症、視神経症、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ブドウ膜炎、老年性白内障で構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の眼疾患を治療する方法。
前記眼疾患がＡＭＤであることを特徴とする、請求項４に記載の眼疾患を治療する方法。
前記ＡＭＤがドライ型ＡＭＤであることを特徴とする、請求項５に記載の眼疾患を治療する方法。
式（Ａ）の前記化合物が、被験者の目に局所的に投与される、または被験者に経口投与されることを特徴とする、請求項１に記載の眼疾患を治療する方法。
式（Ａ）の前記化合物が、眼軟膏剤、眼ゲル剤、眼クリーム剤、または点眼剤に製剤化されることを特徴とする、請求項１に記載の眼疾患を治療する方法。
前記眼疾患が眼の癌ではないことを特徴とする、請求項１に記載の眼疾患を治療する方法。