JP2018502610A - 採血チューブ用の複合体セパレータ - Google Patents
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Abstract
Description
・上部試験画分から、ゲル内に発生し得るいずれの細胞の捕捉を分離する能力;
・少なくとも、必要な光硬化性シーラント成分の体積が低減されることを理由として、バリアを完全に硬化(固化)させるために必要なUV光強度及び曝露時間が低減される。例えば本発明者らは、(同一のUV光強度を用いた場合に)必要な時間を、1分から10〜20秒へと低減した。この低減は:光感受性顔料に対するUVの影響を低減する;処理時間を削減することによってワークフローを改善する;及び酵素等の特定の血液成分に影響を及ぼし得る、硬化中の発熱による熱生成を低減する、といった更なる利点を有する;
・少なくとも、固化した光硬化性シーラント成分が上記ゲル成分からのバリアとして機能することを理由として、上記ゲル成分からの汚染が仮に存在する場合であっても実質的には存在しない状態で、試料の完全な吸引が可能となる;
・均一なサンプリングを保証するために、全血の細胞非含有画分の混合及び再混合を可能とする;
・軟質ゲルセパレータが、例えば運送又は混合中の振盪によって物理的に破壊された場合に発生し得る、血液の再混合を防止する;
・上記チューブの繰り返しの冷凍/解凍サイクルが可能となる。血清又は血漿の冷凍は、例えば後の試験のため、又は一定の規則の要件に従うために、一般的に実施される。ゲルセパレータを用いて試料の複数の画分を分離する場合、セパレータの下側の画分は典型的には、ゲルの前に冷凍され、これによって膨張し、ゲルセパレータバリアの形状を歪ませる。本発明の主題のセパレータ物質は、好適なエネルギ源への曝露後に固化するよう処方された光硬化性シーラント成分を含むため、セパレータチューブの冷凍及び解凍に関連する典型的な課題の一部又は全ては大幅に削減されるか、又は排除されさえする;
・上記光硬化性層の体積を最小化でき、これによってコストを削減できる;
・チキソトロピー性軟質ゲルがチューブ内の上記光硬化性層の上側に装填され、使用前に流れが発生しないため、上記光硬化性層をチキソトロピー性とする必要がない。これにより、細胞の捕捉が少ない単純な組成物が可能となり、また、血液細胞の劣化に寄与し得る、又は研究室アッセイを妨害し得る添加剤の必要を排除できる;
・二次チューブへの血清又は血漿の取り出しに関連する作業コストが低減される;
・二次チューブへの血清又は血漿の取り出しに関連する再標識化のエラーの可能性が低減される。
オリゴマー又はモノマー(又はこれら両方)、光開始剤、安定剤、抗酸化剤、密度調整剤又はゲル化剤(又はこれら両方)を様々に含む、様々な候補組成物を試験して、特に様々な放射線量における及び様々な期間に亘る照射(eビーム又はガンマ線)滅菌中に所定の流動性を維持できるかどうかを判定した。より具体的には、上記組成物を以下に関して試験した:
a.最終密度‐遠心分離中の全血のピクノメトリー及び性能によって試験。いくつかの好ましい組成物の最終密度は、1.04〜1.08g/cm3であった。
b.研究室試験による干渉‐結果を、BDチューブ内に採集した血液において得られた結果と比較することによって試験。測定手段がアッセイCV内である場合、干渉は全く暗示されなかった。この研究室試験比較は、遠心分離機内でセパレータを使用し、UVを用いて硬化させるプロセス全体を含んでいた。また、遅延干渉を期待して、血液をフォトポリマーに最大8日間接触させて放置した場合に関して、モノマー及びオリゴマーを試験した。
i.包括的代謝パネル(ナトリウム、カリウム、塩素、CO2、クレアチニン、ビリルビン(直接及び合計)、総タンパク質、AST、ALT、アルカリホスファターゼ、グルコース、尿素窒素、アルブミン)
ii.イムノアッセイ(PSA、テストステロン、エストラジオール、TSH、チロキシン(遊離T4)、フェリチン、感受性CRP)
iii.電気泳動(血清タンパク質電気泳動及び免疫固定(画分の定量(5画分)、異常タンパク質同定)、電気泳動による脂質パネル)
iv.脂質(総コレステロール、LDL‐c、HDL‐c、LVDL‐c、Lp(a)、トリグリセリド)
v.分子試験(DNA(B‐Raf)、エキソソームRNA(HBB、ACTB、DEFA3)、GAPDH、ITGA2B))
vi.治療薬モニタリング(アミカシン、プリマドン、リドカイン、カフェイン、アセトアミノフェン、NAP、プロカインアミド)
vii.リストセチン、コラーゲン及びADPへの血小板凝集を含む、血漿中の血小板、赤血球及び白血球数(差異あり)。
c.フォトポリマー又はゲルセパレータの量を低減した場合、上記i〜viiのうちの1つ又は複数によって観察される干渉が小さくなった。フォトポリマー又はゲルセパレータの成分は、干渉の能力を有する。特定の分析物が上記ゲル成分によって干渉される場合、該成分を低減できる。特定の分析物が上記フォトポリマー成分によって干渉される場合、該成分を低減できる。
d.溶血‐自動化されたアナライザにおける指数、視認による評価及び上昇したカリウムレベルによって測定。
e.UVランプ(アーク灯、マイクロ波電球、LED)による硬化時間
i.抗酸化剤濃度が大きく上昇すると(例えば500mMを超えるトコフェロール)、硬化時間に悪影響を及ぼす(延長する)。この効果を相殺するおよそ3%を超える光開始剤濃度の上昇は、滅菌照射による化合物の保存における上記抗酸化剤の機能に悪影響を及ぼした。
f.硬化時の熱生成。
g.硬化時の収縮。
h.熱又は照射(様々な線量及び線量送達スキームでのeビーム及びガンマ線)によって滅菌する
i.熱滅菌に関しては、抗酸化剤は不要であり、L及びMの複数の組み合わせによって、他の性能要件が満たされる。
ii.照射による滅菌に関しては、線量が(例えばガンマ線によってよりもeビームによって)迅速に送達される場合に、所与の組成物が作用しやすい。
1.LAIは、抗酸化剤を用いずに、最大3kGyによって滅菌できる。
a.30%のL=エベクリル230及び70%のD
b.ここで:
i.(L+Dの)1%のA1(アディトールBDK);
ii.(L+Dの)8.19%のR、フュームドシリカR1(デグサ(Degussa)社製アエロジル(AEROSIL)R805);及び
iii.(L+Dの)0.1%のI(Sigma社製フェノチアジン)
を含む。
以下の実験データは、本明細書において提示されている本発明の主題の様々な態様を例示するために提供される。より具体的には、上記データは、指定された濃度のトコフェロール及びアディトールBDKの、指定された放射線量での照射滅菌後の(遠心分離後の全血の2つの相の間の沈降を可能とするための)組成物の流動性の維持における驚くべき効果を示す。示されているように、オリゴマー(エベクリル230)、光開始剤、2重量%未満の濃度のアディトールBDK、及びラジカルスカベンジャー(少なくとも75mMの濃度のトコフェロール)を含む組成物は、20kGy未満の線量での照射滅菌(ガンマ線又はeビーム)後に、驚くほど流動性を維持した。より低い濃度のトコフェロール又は光開始剤が存在する場合、放射プロトコルを(例えばより高い線量率(eビーム)、滅菌後加熱、及びより低い線量(kGy)、より長い硬化時間を要求するように)改変する場合があった。約60mM未満の量のトコフェロールが存在する場合、一般に、送達可能な合計容量はより低くなり、これによって滅菌プロトコルが実行不可能となることが観察された。対照的に、ラジカルスカベンジャーを含まない組成物、及び3重量%超(例えば5重量%超)の光開始剤濃度を有する組成物は、照射滅菌後に流動性を維持できなかった。
100B 本発明の主題のチューブ
110A ゲルセパレータ
110B 市販のゲルセパレータ
120 光硬化性シーラント、フォトシーラント
125 全血の試料
125A 全血の比較的密な画分
125B 全血の比較的密でない画分
130 全血の別の試料
130A 全血の比較的密な画分
130B 全血の比較的密でない画分
200 試料採集チューブ
210 重合性組成物
220 全血の細胞欠失相
230 全血の富細胞相
Claims (13)
- 試料採集チューブであって:
内腔を有するチューブ;並びに
前記内腔に入れられたセパレータ物質であって:
チキソトロピー性ゲルを含む、ゲル成分層材料;並びに
前記ゲル成分層材料とは別個であり、(1)オリゴマー、(2)光開始剤、及び(3)安定剤を含む、光硬化性シーラント成分層材料
を有する、セパレータ物質
を備える、試料採集チューブ。 - 前記光硬化性シーラント成分層材料は、好適なエネルギ源によってトリガした場合に、10分以内に、ショア00硬度スケールにおいて少なくとも1の硬度まで重合する、請求項1に記載のチューブ。
- 前記ゲル成分層材料は、前記光硬化性シーラント成分層材料の密度とは別個の密度を有し、
前記ゲル成分層材料及び前記光硬化性シーラント成分層材料はそれぞれ、1.00〜1.09g/cm3(両端を含む)の密度を有する、請求項1又は2に記載のチューブ。 - 前記セパレータ物質は、全血の細胞欠失画分の平均密度と全血の富細胞画分の平均密度との間の密度を有し、
また前記セパレータ物質は、前記セパレータ物質が、遠心力の下で、全血の前記細胞欠失相と全血の前記富細胞相との間の位置へと定着できるような流動性を有する、請求項1〜3のいずれか1項に記載のチューブ。 - 前記光硬化性シーラント成分層材料は、前記光硬化性シーラント成分層材料が、遠心力の下で、全血の前記細胞欠失相と全血の前記富細胞相との間の位置へと定着できるように、流動性を失うことなく、照射滅菌が可能であり、
前記光硬化性シーラント成分層材料は続いて、UV硬化によって重合できる、請求項1〜4のいずれか1項に記載のチューブ。 - 前記光硬化性シーラント成分層材料は、好適なエネルギ源によってトリガした場合に、10分以内にショア00硬度スケールにおいて少なくとも1の硬度までの重合を引き起こすプロモータを含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載のチューブ。
- 前記光硬化性シーラント成分層材料は、少なくとも4日に亘って、前記試料のカリウムレベルを初期カリウムレベルの10%以内に維持すること、及び前記試料のグルコースレベルを初期グルコースレベルの5%以内に維持することのうちの少なくとも一方を実現する、請求項1〜6のいずれか1項に記載のチューブ。
- 血液分離用の試料採集チューブを製造する方法であって:
チューブの内腔にゲル成分層材料を入れるステップであって、前記ゲル成分層材料はチキソトロピー性ゲルを含む、ステップ;並びに
前記チューブの前記内腔に光硬化性シーラント成分層材料を入れるステップであって、前記光硬化性シーラント成分層材料は、オリゴマー、光開始剤及び安定剤を含む、ステップ
を含み、
前記光硬化性シーラント成分層材料は、10分未満に亘って好適なエネルギ源に曝露した後、ショア00硬度スケールにおいて少なくとも1の硬度まで重合可能である、方法。 - 前記チューブの前記内腔に試料を入れるステップ;及び
前記試料と、前記ゲルセパレータ成分層材料と、前記光硬化性シーラント成分層材料とを含む前記試料採集チューブを遠心分離するステップ
を更に含む、請求項8に記載の方法。 - 全血と合わせた前記光硬化性シーラント成分層材料の流動性を維持しながら、前記ゲルセパレータ成分層材料及び前記光硬化性シーラント成分層材料が入れられた前記試料採集チューブを、照射滅菌によって滅菌するステップを更に含む、請求項8又は9に記載の方法。
- 前記光硬化性シーラント成分層材料は、10分未満に亘って好適なエネルギ源に曝露した後、前記光硬化性シーラント成分層材料がショア00硬度スケールにおいて少なくとも1の硬度まで重合できるようにする、プロモータを含む、請求項8〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 前記光硬化性シーラント成分層材料及び前記ゲルセパレータ成分層材料はそれぞれ、全血の血清画分の平均密度と全血の細胞含有画分の平均密度との間の密度を有し、更に全血中で流動可能である、請求項8〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料採集チューブを少なくとも250℃まで加熱して、全血と合わせた前記光硬化性シーラント成分層材料の流動性を維持しながら、前記試料採集チューブを滅菌するステップを更に含む、請求項8〜12のいずれか1項に記載の方法。
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