KR102036599B1 - 교육용 말초혈액단핵세포(pbmc) 분리 키트 - Google Patents

Abstract

본 발명은 제1 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 폴리머의 비중과는 다른 제1 비중을 갖는 제1 비드; 제2 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 비중과 다른 제2 비중을 갖는 제2 비드; 를 포함하고, 제1 비드와 제2 비드를 튜브에 넣고 원심분리할 때, 튜브 내에서 제1 비드와 제2 비드는 층 분리되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트를 제공하고자 한다.

Description

교육용 말초혈액단핵세포(PBMC) 분리 키트{Training Kit for separating Peripheral Blood Mononuclear Cell}

본 발명은 혈액으로부터 말초혈액단핵세포(PBMC, Peripheral Blood Mononuclear Cell)을 분리하는 작업의 숙련도를 높이기 위해, 사람의 혈액을 사용하지 않고 PBMC를 분리하는 숙련도를 향상시킬 수 있는 교육용 PBMC 분리 키트에 관한 것이다.

사람의 혈액 내에는, 혈장(plasma), 백혈구(leukocyte), 적혈구(erythrocyte) 등이 포함되어 있다.

특히 말초 혈액 중 백혈구는 호중구(neutrophil), 호산구(eosinophil), 호염구(basophil), 림프구(lymphocyte), 단핵구(monocyte)를 포함하며, 말초 혈액 단핵 세포(이하, 'PBMC'라 함)는 림프구와 단핵구로 이루어진다.

이러한 PBMC는, 면역학, 전염병, 혈액학 악성 종양, 백신 개발, 이식 면역학, 하이 스루풋(high-throughput) 스크리닝 분야 등의 연구에서 자주 사용하게 되는데, PBMC를 분리하는 숙련도를 향상시키기 위해 종래에는 실제 사람의 혈액을 이용하여야 하는 단점이 있다.

특히, 사람의 혈액은 채취 후 12~24시간 이내에 PBMC 분리를 실시하지 않으면, 세포가 사멸하므로 12~24시간 내에 분리를 실시해야 하고 IRB (Institutional Review Board) 승인 등의 공식절차로 인해 혈액 수급이 용이하지 않다는 단점이 있다.

본 발명은 혈액으로부터 말초혈액단핵세포(PBMC, Peripheral Blood Mononuclear Cell)을 분리하는 작업의 숙련도를 높이기 위해, 사람의 혈액을 사용하지 않고 PBMC를 분리하는 숙련도를 향상시킬 수 있는 교육용 PBMC 분리 키트를 제공하는데 그 목적이 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 측면에 따르면, 제1 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 폴리머의 비중과는 다른 제1 비중을 갖는 제1 비드; 제2 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 비중과 다른 제2 비중을 갖는 제2 비드; 를 포함하고, 제1 비드와 제2 비드를 튜브에 넣고 원심분리할 때, 튜브 내에서 제1 비드와 제2 비드는 층 분리되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트를 제공한다.

또한, 제1 비드는, 제1 폴리머를 소정의 압축비로 압축하여 제조되고, 제2 비드는, 제2 폴리머를 제1 비드와 다른 압축비로 압축하여 제조되는 것을 포함한다.

또한, 제1 비드는, 제1 폴리머에 충진재를 제1 중량으로 첨가하여 제조되고, 제2 비드는, 제2 폴리머에 제1 비드에 첨가된 충진재와 다른 충진재 또는 충진재를 제2 중량으로 첨가하여 제조된 것을 포함한다.

또한, 제1 비드는, 제1 폴리머에 소정의 발포율로 발포하여 제조되고, 제2 비드는, 제2 폴리머에 제1 비드와 다른 발포율로 발포하여 제조된 것을 포함한다.

또한, 제1 비중은, 1.04 내지 1.077 미만 이고, 제2 비중은, 1.078 내지 1.12 인 것을 포함한다.

또한, PBMC 분리 키트는, 초급자 키트 및 상급자 키트를 각각 포함하며, 초급자 키트에 각각 포함된 제1 비드와 제2 비드는 제1 비중 차이를 갖도록 마련되고, 상급자 키트에 각각 포함된 제1 비드와 제2 비드는 제1 비중 차이보다 작은 제2 비중 차이를 갖도록 마련된 것을 포함한다.

또한, 제1 및 제2 비드는, 2 내지 30μm의 크기를 갖도록 각각 분쇄된 것을 포함한다.

또한, 폴리머는, 열가소성 수지를 포함하며, 열가소성 수지는, 아크릴로니트릴-부타디엔-스티렌(ABS), 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 아세탈폴리옥시메틸렌, 폴리아미드, 폴리카보네이트, 폴리에스테르, 폴리페닐렌옥사이드, 폴리페닐렌설파이드, 및 폴리테트라플루오로에틸렌으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함한다.

또한, PBMC 분리 키트는, 제1 및 제2 비드가 혼합되도록 마련된 용매를 추가로 포함한다.

또한, 용매는, 수용성 용매를 포함한다.

또한, 용매는 소정의 색으로 착색 가능한 것을 포함한다.

또한, 제1 비드 및 제2 비드는, 서로 다른 소정의 색으로 각각 착색 가능한 것을 포함한다.

이에 더하여, 본 발명의 다른 측면에 따르면, 튜브; 튜브 내에 수용되도록 마련된 용매; 제1 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 폴리머의 비중과는 다른 제1 비중을 갖는 제1 비드; 제2 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 비중과 다른 제2 비중을 갖는 제2 비드; 및 용매, 제1 비드 및 제2 비드를 튜브에 넣고 원심분리할 때, 튜브 내에서 제1 비드와 제2 비드는 층 분리되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트를 제공한다.

본 발명에 따르면, 사람의 혈액을 사용하지 않고 PBMC를 분리하는 숙련도를 향상시킬 수 있는 효과가 있다.

또한, 사람의 혈액과 달리, IRB (Institutional Review Board) 승인 등의 공식절차 및 시간의 제한을 받지 않고 훈련을 실시할 수 있는 장점이 있다.

또한, 본 발명의 분리 키트는, 제1 비드와 제2 비드의 비중 차이를 조절하여 난이도를 조절한, 초급자 용과 고급자 용(숙련자 용) 등으로 따로 마련되어 있어, 숙련도에 따라 훈련을 수행할 수 있는 장점이 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 PBMC 분리 키트를 나타낸 모식도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 PBMC 분리 키트를 원심분리한 상태를 나타낸 도면이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 일 실시예를 상세히 설명하도록 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

또한, 도면 부호에 관계없이 동일하거나 대응되는 구성요소는 동일 또는 유사한 참조번호를 부여하고 이에 대한 중복 설명은 생략하기로 하며, 설명의 편의를 위하여 도시된 각 구성 부재의 크기 및 형상은 과장되거나 축소될 수 있다.

따라서, 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.

본 발명은 말초혈액단핵세포(이하 'PBMC' 라고 함) 분리 키트(10, 이하 '분리 키트'라고 함)에 관한 것이다. 본 발명의 분리 키트(10)는, 사람의 혈액을 사용하지 않고 PBMC를 분리하는 숙련도를 향상시킬 수 있도록 사람의 혈액 및 혈액에 포함된 성분들을 각각 실제 성분과 유사하게 모사하여 제조된 모사 혈액을 원심분리 시, 실제 혈액과 동일한 층 분리가 일어나도록 함으로써, 사용자가 PBMC를 분리하는 연습을 통해 실제 작업을 위한 숙련도를 향상시킬 수 있도록 할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 PBMC 분리 키트를 나타낸 모식도, 도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 PBMC 분리 키트를 원심분리한 상태를 나타낸 도면이다.

먼저, 도 1을 참조하면, 본 발명의 일 실시예에 따른 분리 키트(10)는, 제1 폴리머(polymer)의 비중을 조절하여 제조된, 제1 폴리머의 비중과는 다른 제1 비중을 갖는 제1 비드(100) 및 제2 폴리머의 비중을 조절하여 제조된 제1 비중과 다른 제2 비중을 갖는 제2 비드(200)를 포함한다.

여기서, 상기 제1 폴리머 및 제2 폴리머는 동일한 폴리머 이거나 상이한 폴리머 일 수 있다.

즉, 제1 비드는 제1 폴리머의 비중을 조절하여 제조할 수 있고, 제2 비드는 제1 폴리머 또는 제2 폴리머의 비중을 조절하여 제조할 수 있다.

이 때, 제2 비드를 제조하기 위해 제1 폴리머를 사용하는 경우, 제1 비드와 다른 비중을 갖도록 비중을 조절할 수 있으며, 제2 폴리머를 사용하는 경우에도 제1 비드와 다른 비중을 갖도록 비중을 조절할 수 있다.

특히, 제1 비드(100)와 제2 비드(200)를 튜브(300)에 넣고 원심분리할 때, 튜브 내에서 제1 비드(100)와 제2 비드(200)는 층 분리될 수 있다.

즉, 제1 비드(100)와 제2 비드(200)는 원심분리가 용이하도록 비중의 차이를 갖도록 제조함으로써, 비중 차이에 의해 층 분리가 될 수 있다.

본 문서에서, 상기 튜브(300)는 원심분리기(미도시)에 사용되는 원심분리기용 튜브를 의미한다.

이에 더하여, 상기 제1 비드(100)와 제2 비드(200)의 비중을 서로 다르게 조절하기 위하여, 본 발명에서는 폴리머를 압축할 때 압축비를 조절하여 비중을 다르게 하는 방법과, 폴리머에 충진재를 첨가할 때, 서로 다른 충진재를 첨가 또는 첨가되는 충진재의 함량을 조절하여 비중을 다르게 하는 방법 및 폴리머를 발포할 때 발포율을 조절하여 비중을 다르게 하는 방법을 사용할 수 있다.

구체적으로, 상기 제1 비드(100)는 제1 폴리머를 소정의 압축비로 압축하여 제조되고, 제2 비드(200)는 제2 폴리머를 제1 비드(100)와 다른 압축비로 압축하여 제조될 수 있다.

여기서, 상기 제2 비드(200)의 제2 폴리머는 제1 폴리머와 동일하거나 상이할 수 있으며, 제2 폴리머가 제1 폴리머와 동일한 경우, 제1 비드와 다른 압축비로 압축하여 제조될 수 있다.

즉, 상기 제1 폴리머와 제2 폴리머는 동일한 폴리머 또는 상이한 폴리머일 수 있다.

또한, 제2 폴리머가 제1 폴리머와 상이한 경우, 제1 비드와 동일한 압축비 또는 제1 비드와 다른 압축비로 압축하여 제조할 수 있다.

또한, 상기 제1 비드(100)는 제1 폴리머에 충진재를 제1 중량으로 첨가하여 제조되고, 제2 비드(200)는 제2 폴리머에 제1 비드(100)에 첨가된 충진재와 다른 충진재 또는 충진재를 제2 중량으로 첨가하여 제조될 수 있다.

여기서, 상기 제2 비드(200)의 제2 폴리머는 제1 폴리머와 동일하거나 상이할 수 있으며, 이 때, 폴리머의 종류 및 충진재의 종류에 따라 폴리머에 충진재가 제1 비드와 동일한 중량으로 첨가되거나 서로 다른 중량으로 첨가될 수 있다.

여기서 상기 충진재는, 암석분말, 이산화티탄, 황산바륨, 수산화알루미늄, 탄산칼슘, 실리카, 금속분말 및 금속염으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나를 포함할 수 있으며, 상기 암석분말은 벤토나이트 및 제오라이트(제올라이트)를 포함할 수 있다.

예를 들어, 제1 비드(100)는 이산화티탄을 이용하여 제1 비중을 갖도록 제조될 때, 제2 비드(200)는 이산화티탄의 중량을 조절하거나, 이산화티탄이 아닌 황산바륨을 이용하여 제2 비중을 갖도록 제조될 수 있다.

또한, 상기 제1 비드(100)는, 제1 폴리머에 소정의 발포율로 발포하여 제조되고, 제2 비드(200)는 제2 폴리머에 제1 비드와 다른 발포율로 발포하여 제조될 수 있다.

예를 들어, 상기 제2 비드(200)의 제2 폴리머는 제1 폴리머와 동일한 경우, 제1 비드와 다른 발포율로 발포할 수 있고, 제1 폴리머와 상이한 경우, 제1 비드와 다른 발포율 또는 동일한 발포율로 발포하여 제2 비중을 갖도록 제조될 수 있다.

여기서, 상기 제1 및 제2 폴리머는 열가소성 수지를 포함하며, 열가소성 수지는, 아크릴로니트릴-부타디엔-스티렌(Acrylonitrile butadiene styrene, ABS), 폴리에틸렌(Polyethylene(PE)), 폴리프로필렌(Polypropylene(PP)),폴리스티렌(Polystyrene(PS)), 아세탈폴리옥시메틸렌(Acetal(POM)),폴리아미드(Polyamide(PA),Polyamide(PA)-GR), 폴리카보네이트(Polycarbonate(PC),Polycarbonate(PC)-GR), 폴리에스테르(Polyester(PET,PBT),Polyester-GR), 폴리페닐렌옥사이드(Polyphenyleneoxide(PPO)), 폴리페닐렌설파이드(Polyphenylenesulfhide(PPS)) 및 폴리테트라플루오로에틸렌(Polytetrafluoroethylene(PTFE))으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

특히, 상기 제1 및 제2 비드를 제조할 때, 폴리머를 소정의 압축비로 압축하거나, 충진재를 첨가하여 제조하는 경우, 제1 및 제2 폴리머는 아크릴로니트릴-부타디엔-스티렌(ABS), 폴리에틸렌(Polyethylene(PE)), 폴리프로필렌(Polypropylene(PP)), 폴리스티렌(Polystyrene(PS)) 중 선택된 어느 하나를 사용하는 것이 바람직하다.

상기의 소정의 압축비로 압축하거나, 충진재를 첨가하여 제조할 때 사용하는 폴리머들('제1 폴리머 그룹'이라고도 함)은 각각의 비중(밀도)이 1.05 이하 이다. 따라서, 서로 다른 비중을 갖도록 제1 및 제2 비드를 제조할 때, 압축 또는 충진재를 첨가하여 비중을 조절할 수 있다.

또한, 상기 제1 및 제2 비드를 제조할 때, 제1 및 제2 폴리머를 소정의 발포율을 조절하여 제조하는 경우, 아세탈폴리옥시메틸렌(Acetal(POM)), 폴리아미드(Polyamide(PA),Polyamide(PA)-GR), 폴리카보네이트(Polycarbonate(PC),Polycarbonate(PC)-GR) 폴리에스테르(Polyester(PET,PBT),Polyester-GR), 폴리페닐렌옥사이드(Polyphenyleneoxide(PPO)), 폴리페닐렌설파이드(Polyphenylenesulfhide(PPS)) 및 폴리테트라플루오로에틸렌(Polytetrafluoroethylene(PTFE)) 중 선택된 어느 하나를 사용하는 것이 바람직하다.

상기의 소정의 발포율을 조절하여 제조할 때 사용하는 폴리머들('제2 폴리머 그룹'이라고도 함)은 각각의 비중(밀도)이 1.05 를 초과한다. 따라서, 서로 다른 비중을 갖도록 제1 및 제2 비드를 제조할 때, 발포율을 조절하여 비중이 소정 값 이하를 갖도록 조절할 수 있다.

일 예로, 전술한 압축비를 조절하여 압축하는 경우, 일반적으로 사용하는 압축 성형, 사출 성형 등의 방법을 이용할 수 있으며 스크류의 속도나 프레스의 압력을 제어하여 비중(밀도)를 조절할 수 있다.

상기와 같이 비중이 조절된 제1 비드(100)와 제2 비드(200)를 튜브(300)에 넣고 원심분리할 때, 튜브 내에서 제1 비드(100)와 제2 비드(200)는 층 분리될 수 있다.

여기서, 상기 제1 비중은 1.04 내지 1.077 일 수 있고, 제2 비중은 1.078 내지 1.12 일 수 있다.

즉, 제1 비드(100)의 비중은 1.04 내지 1.077 일 수 있고, 제2 비드(200)의 비중은 1.078 내지 1.12 일 수 있다.

다시 말하면, 제1 비드(100)의 밀도는 1.04 g/ml 내지 1.077 g/ml일 수 있고, 제2 비드의 밀도는 1.078 g/ml 내지 1.12 g/ml 일 수 있다.

즉, 상기 제1 비드(100)와 제2 비드(200)가 원심분리 시 층 분리되도록, 제1 비드(100)와 제2 비드(200)는 서로 다른 비중을 갖도록 마련될 수 있다.

상기 제1 비드(100)는, 사람의 혈액 중 PBMC의 성분에 대응하며, PBMC에 포함된 림프구와 단핵구를 모사할 수 있다.

즉, 제1 비드(100)는 1.06 내지 1.077 미만 의 비중(또는 1.06 내지 1.077g/ml 미만 의 밀도)을 갖는 림프구에 대응하는 모사 성분('모사 림프구' 라고도 함) 및 1.04 내지 1.07의 비중(또는 1.04 내지 1.07g/ml 의 밀도)을 갖는 단핵구에 대응하는 모사 성분(' 모사 단핵구' 라고도 함)을 포함한다.

다시 말하면, 제1 비드(100)는, 사람의 혈액 중 림프구에 대응하는 비중 범위를 갖는 제조된 림프구와 단핵구에 대응하는 비중 범위를 갖는 제조된 단핵구를 포함한다.

이에 더하여, 상기 제2 비드(200)는, 사람의 혈액 중 다형핵 백혈구(Polymorphonuclear cells) 및 적혈구의 성분에 대응하며, 특히 다형핵 백혈구에 포함된 호산구와 호중구를 모사할 수 있다.

즉, 상기 제2 비드(200)는, 1.088 내지 1.097의 비중(또는 1.088 내지 1.097 g/ml의 밀도)을 갖는 호산구에 대응하는 모사 성분('모사 호산구' 라고도 함)과 1.08 내지 1.010의 비중(또는 1.08 내지 1.010 g/ml 의 밀도)을 갖는 호중구에 대응하는 모사 성분('모사 호중구' 라고도 함) 및 1.085 내지 1.12의 비중(또는 1.085 내지 1.12g/ml 의 밀도)을 갖는 적혈구에 대응하는 모사 성분('모사 적혈구' 라고도 함)을 포함한다.

다시 말하면, 제2 비드(100)는, 사람의 혈액 중 호산구에 대응하는 비중 범위를 갖는 제조된 호산구와 호중구에 대응하는 비중 범위를 갖는 제조된 호중구 및 적혈구에 대응하는 비중 범위를 갖는 제조된 적혈구를 포함한다.

한편, 상기 제1 및 제2 비드(100 및 200)는, 2 내지 30μm의 크기를 갖도록 각각 분쇄된 형태를 가질 수 있다.

즉, 제1 및 제2 폴리머(제1 폴리머 그룹 및 제2 폴리머 그룹)를 소정의 압축비로 압축하거나, 충진재를 첨가하거나, 소정의 발포율로 발포 후, 2 내지 30μm의 크기를 갖도록 분쇄할 수 있다.

일 예로, 상기 제1 비드(100)는 2 내지 25μm 의 크기를 갖도록 분쇄될 수 있으며, 제2 비드(200)는, 6 내지 14μm의 크기를 갖도록 마련될 수 있다.

상기 제1 비드(100)에 포함된 제조된 림프구는 대략 5 내지 10μm 또는 10 내지 18μm의 크기를 갖도록 분쇄된 형태를 가질 수 있다.

여기서, 사람의 혈액 내에는 작은 림프구와 큰 림프구가 존재할 수 있는데, 이러한 크기를 각각 모사할 수 있도록 제조된 림프구는, 제조된 작은 림프구('모사 작은 림프구' 라고도 함)는 대략 5 내지 10 μm 또는 7 내지 8 μm의 크기를 갖도록 분쇄될 수 있고, 제조된 큰 림프구('모사 큰 림프구'라고도 함)는 대략 10 내지 18 μm 또는 12 내지 15 μm의 크기를 갖도록 분쇄될 수 있다.

또한, 제1 비드(100)에 포함된 제조된 단핵구는 대략 15 내지 30μm 또는 16 내지 25μm의 크기를 갖도록 분쇄된 형태를 가질 수 있다.

즉, 제1 비드는, 실제 혈액 내 존재하는 림프구 및 단핵구의 크기를 갖도록 제조될 수 있다.

이에 더하여, 일 예로, 상기 제2 비드(200)에 포함된 제조된 호산구는 대략 10 내지 14μm 또는 10 내지 12μm의 크기를 갖도록 분쇄된 형태를 가질 수 있다.

또한, 제2 비드(200)에 포함된 제조된 호중구는 대략 10 내지 14μm 또는 10 내지 12μm의 크기를 갖도록 분쇄된 형태를 가질 수 있다.

또한, 제2 비드(200)에 포함된 제조된 적혈구는 대략 6 내지 9μm 또는 6.8 내지 8.2μm 또는 7 내지 8μm 의 크기를 갖도록 분쇄된 형태를 가질 수 있다.

즉, 제2 비드는, 실제 혈액 내 존재하는 호산구, 호중구 및 적혈구의 크기를 갖도록 제조될 수 있다.

상기 제1 및 제2 비드를 분쇄할 때, 마이크로제트밀(Micro jet mill) 또는 에어제트밀(Air jet mill)을 이용할 수 있으며, 마이크로제트밀 또는 에어제트밀은 분쇄 공정에서 열이 발생하지 않으므로, 제1 및 제2 비드의 비중에 영향을 미치지 않는다.

특히, 상기 마이크로제트밀 또는 에어제트밀은 0.5 내지 45 μm 까지 원하는 크기로 분쇄가 가능하며, 분쇄기 내부의 표준망체(Seive)를 통과하여 일정한 크기의 비드(제1 및 제2 비드)를 얻을 수 있는 효과가 있다.

한편, 본 발명의 PBMC 분리 키트(10)는, 초급자를 위한 초급자 키트 및 상급자(숙련자)를 위한 상급자 키트를 각각 포함할 수 있다.

구체적으로, 초급자 키트에 각각 포함된 제1 비드의 제1 비중과 제2 비드의 제2 비중은 제1 비중 차이를 갖도록 마련되고, 상급자 키트에 각각 포함된 제1 비드의 제1 비중과 제2 비드의 제2 비중은 제1 비중 차이보다 작은 제2 비중 차이를 갖도록 마련될 수 있다.

예를 들어, 초급자 키트에 포함된 제1 비드의 제1 비중은 1.06을 갖도록 제조되고, 제2 비드의 제2 비중은 1.10을 갖도록 제조될 수 있다.

또한, 상급자 키트에 포함된 제1 비드의 제1 비중은 1.070을 갖도록 제조되고, 제2 비드의 제2 비중은 1.079를 갖도록 제조될 수 있다.

즉, 초급자 키트에서의 제1 비드와 제2 비드의 비중 차이 값(제1 비중 차이)은 0.04를 갖게 되고, 상급자 키트에서의 제1 비드와 제2 비드의 비중 차이 값(제2 비중 차이)은 0.009를 갖게 된다.

따라서, 초급자 키트는 상대적으로 비중 차이 값이 많이 나도록 제조함으로써, 초급자 키트를 통해 PBMC 분리를 많이 해보지 않은 사용자가 숙련도를 높일 수 있도록 할 수 있고, 상급자 키트는 상대적으로 비중 차이 값이 적게 나도록 제조함으로써, 상급자 키트를 통해 PBMC 숙련도를 보다 향상 시킬 수 있는 효과가 있다.

즉, 상기와 같이 단계별로 제1 비드와 제2 비드의 비중 차이 값을 조절하여, 분리 키트(10)를 각각 생산하여, 사용자의 숙련도에 따라 키트를 선택하여 PBMC 분리를 수행할 수 있게 함으로써 숙련도를 보다 향상 시킬 수 있는 효과가 있다.

여기서, 상기 제1 비드(100) 및 제2 비드(200)는 소정의 색으로 착색 가능할 수 있다.

예를 들어, 적혈구에 대응하는 성분을 모사하는 제조된 적혈구는 적색으로 착색할 수 있고, 림프구에 대응하는 성분을 모사하는 제조된 림프구는 흰색으로 착색할 수 있다.

일 예로, 상기 제2 비드(200)는 적색으로 착색하여 제1 비드(100)와 혼합된 상태에서 실제 혈액과 유사한 색을 나타내도록 제조될 수 있다.

한편, 본 발명의 PBMC 분리 키트(10)는, 제1 및 제2 비드(100 및 200)가 혼합되도록 마련된 용매(400)를 추가로 포함한다.

상기 용매(400)는, 수용성 용매를 포함한다.

또한, 상기 용매(400)는 수용성 용매로 비중이 1.04 이하일 수 있다.

여기서, 상기 수용성 용매는 사람의 혈액 중 혈장에 대응하는 성분을 모사('모사 혈장' 이라고도 함)할 수 있다.

또한, 상기 용매(400)는 소정의 색으로 착색 가능할 수 있다. 특히, 용매(400)에 노란색의 색소를 첨가하여 노란색으로 착색 가능하게 마련될 수 있다.

사람의 혈액 중 혈장은 비중(밀도)이 1.04(g/ml) 이하로서, 상기와 같이 용매(400)는 사람의 혈액 중 혈장에 대응하는 성분을 모사('모사 혈장' 이라고도 함)할 수 있으며, 혈장의 성상을 모사하기 위해 노란색의 색소를 첨가하여 착색되도록 제조할 수 있다.

상기 수용성 용매는 생리식염수(0.9% NaCl) 또는 인산완충액(phosphate buffer) 등을 포함할 수 있다.

이에 더하여, 상기 용매에는 다양한 혈액의 성상을 모사할 수 있도록 증점제(500)를 첨가할 수 있다.

상기 증점제는 진탄검 및 아라비아 검 등을 사용할 수 있으며, 증점제의 함량을 조절하여 예를 들어, 묽은 혈액 성상, 끈적한 혈액 성상 등을 재현할 수 있다.

즉, 증점제는, 함량을 조절하여 용매에 첨가될 수 있다.

이에 더하여, 본 발명의 분리 키트(10)에서는, 피콜(ficoll)을 추가로 사용할 수 있으며, 상기 피콜은, 혈액 분리 등에 일반적으로 사용되는 제품 예를 들어, Pharmacia 社의 ficoll 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 PBMC 분리 키트를 원심분리한 상태를 나타낸 도면이다.

도 2를 참조하면 전술한 바와 같이, 상기 튜브(300)에 피콜(Ficoll)을 일정량 적량하고, 용매(400)에 제1 비드(100) 및 제2 비드(200)를 첨가하여 혼합시킨 후, 원심분리기를 통해 원심분리하면, 최상층에는 혈장을 모사하는 용매의 적어도 일부가 층('모사 혈장 층' 이라고도 함, 401)을 이루며, 그 하부에는 제1 비드를 포함하는 버피코트(101)가 층을 이루고, 그 하부에는 피콜이 층('피콜 층' 이라고도 함, 600)을 이루며, 그 하부에는 제2 비드(200)가 층을 이루게 된다.

따라서, 상기와 같이 분리가 실시된 상태에서, 사용자는 버피코트에 속한 PBMC를 회수하는 훈련을 통해 PBMC 분리 숙련도를 향상시킬 수 있게 된다.

특히 상기 피콜은, 버피코트(101) 층과 그 하부의 제2 비드(적혈구)층과의 층간 거리를 벌려주어 적혈구 없이 PBMC 만을 쉽게 분리할 수 있도록 하는 역할을 한다.

여기서, 상기 버피코트(buffy coat)란 혈액을 원심분리시키면 최상층의 혈장부분과 최하층의 적혈구층의 경계에 혈소판과 백혈구로 형성된 흰색의 얇은 층으로 구분되는 경계층을 의미하며, 상기 버피코트는 PBMC를 포함한다.

상기 버피코트(buffy coat) 층 중에서 상부에는 혈소판, 하부에는 백혈구로 이루어질 수 있고, 백혈구 층에는 비중이 작은 적혈구도 섞여 있을 수 있어 다소 붉은 색을 띠기도 한다.

본 발명의 PBMC 분리 키트(10)는 사람의 혈액과 성상이 거의 일치하도록 용매, 제1 비드 및 제2 비드를 각각 형성함으로써, 상기와 같은 층 분리가 일어날 수 있게 되어 PBMC 분리 키트를 사용하는 사용자가, 버피코트(101)에서 PBMC를 분리하는 연습을 통해 숙련도를 향상시킬 수 있게 된다.

이에 더하여, 본 발명은, 튜브(300); 튜브(300) 내에 수용되도록 마련된 용매(400); 제1 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 폴리머의 비중과 다른 제1 비중을 갖는 제1 비드(100); 제2 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 비중과 다른 제2 비중을 갖는 제2 비드(200); 및 용매, 제1 비드 및 제2 비드를 튜브에 넣고 원심분리할 때, 튜브 내에서 제1 비드와 제2 비드는 층 분리되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트를 포함할 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명의 분리 키트(10)는, 제1 비드와 제2 비드를 사용 직전에 사용자가 직접 혼합하는 형태로 패키징 할 수 있고, 제1 비드와 제2 비드가 혼합된 형태로 패키징 할 수 있다.

100: 제1 비드
200: 제2 비드
300: 튜브
400: 용매
500: 증점제
600: 피콜(Ficoll)

Claims (12)

1. 제1 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 폴리머의 비중과는 다른 제1 비중을 갖는 제1 비드;
   제2 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 비중과 다른 제2 비중을 갖는 제2 비드; 를 포함하고,
   제1 비드와 제2 비드를 튜브에 넣고 원심분리할 때, 튜브 내에서 제1 비드와 제2 비드는 층 분리되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
2. 제 1항에 있어서,
   제1 비드는, 제1 폴리머를 소정의 압축비로 압축하여 제조되고,
   제2 비드는, 제2 폴리머를 제1 비드와 다른 압축비로 압축하여 제조되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
3. 제 1항에 있어서,
   제1 비드는, 제1 폴리머에 충진재를 제1 중량으로 첨가하여 제조되고,
   제2 비드는, 제2 폴리머에 제1 비드에 첨가된 충진재와 다른 충진재 또는 충진재를 제2 중량으로 첨가하여 제조되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
4. 제 1항에 있어서,
   제1 비드는, 제1 폴리머에 소정의 발포율로 발포하여 제조되고,
   제2 비드는, 제2 폴리머에 제1 비드와 다른 발포율로 발포하여 제조되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
5. 제 1항에 있어서,
   제1 비중은, 1.04 내지 1.077 미만 이고,
   제2 비중은, 1.078 내지 1.12 인 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
6. 제 1항에 있어서,
   제1 및 제2 비드는, 2 내지 30μm의 크기를 갖도록 각각 분쇄하여 제조되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
7. 제 1항에 있어서,
   폴리머는, 열가소성 수지를 포함하며,
   열가소성 수지는, 아크릴로니트릴-부타디엔-스티렌(ABS), 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 아세탈폴리옥시메틸렌, 폴리아미드, 폴리카보네이트, 폴리에스테르, 폴리페닐렌옥사이드, 폴리페닐렌설파이드 및 폴리테트라플루오로에틸렌으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
8. 제 1항에 있어서,
   PBMC 분리 키트는, 제1 및 제2 비드가 혼합되도록 마련된 용매를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
9. 제 1항에 있어서,
   용매는, 수용성 용매 및 비수용성 용매를 포함하는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
10. 제 9항에 있어서,
    용매는 소정의 색으로 착색 가능한 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
11. 제 1항에 있어서,
    제1 비드 및 제2 비드는, 서로 다른 소정의 색으로 각각 착색 가능한 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
12. 튜브;
    튜브 내에 수용되도록 마련된 용매;
    제1 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 폴리머의 비중과는 다른 제1 비중을 갖는 제1 비드;
    제2 폴리머의 비중을 조절하여 제조된, 제1 비중과 다른 제2 비중을 갖는 제2 비드; 및
    용매, 제1 비드 및 제2 비드를 튜브에 넣고 원심분리할 때, 튜브 내에서 제1 비드와 제2 비드는 층 분리되는 것을 특징으로 하는 PBMC 분리 키트.
    

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