JP2018203748A - 眼血管形成（ｏｃｕｌａｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｎ）を治療するのに有用な化合物 - Google Patents

Abstract

【課題】加齢黄斑変性症のような新生血管形成（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｓａｔｉｏｎ）によって特徴付けられる状態の、抗血管新生（ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｎｅｎｉｃ）治療および抗血管新生治療剤の提供。
【解決手段】式１の化合物。

式中、Ｒ^１は置換／非置換のＣ_１−６アルキル基等、Ｒ^２はＨ等、Ｒ^３は置換／非置換のＣ_６−１０アリール基、置換／非置換の含窒素複素環等、Ｒ^４はＨ、ハロゲン、Ｑは−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−等、Ｗは置換／非置換の１−ピペラジニル基を表す。
【選択図】図１

Description

発明の分野 本発明は、特に、例えば加齢黄斑変性症のような新生血管形成（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｓａｔｉｏｎ）によって特徴付けられる状態の、抗血管新生（ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｎｅｎｉｃ）治療および抗血管新生治療において使用するための化合物に関する。

本発明はまた、透過性亢進障害（ｈｙｐｅｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の治療、および透過性亢進障害の治療において使用するための化合物に関する。

本発明はまた、例えばアルツハイマー病のような、神経障害（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ）および神経変性（ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ）障害の治療、ならびに神経障害および神経変性障害の治療において使用するための化合物に関する。

本発明はまた、疼痛の治療、および疼痛の治療において使用するための化合物に関する。

本発明はまた、子癇前症（ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ）のリスクを低下させる方法、およびそのような方法における使用のための化合物に関する。

発明の背景 黄斑の中央領域に影響を与え視力喪失を引き起こす疾患である加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）は、５０歳を超える人々における失明の主な原因である（Ｂｒｅｓｓｌｅｒ， ２００４）。滲出性ＡＭＤ（Ｅｘｕｄａｔｉｖｅ ＡＭＤ）はＡＭＤの中で最も重篤な型であり（Ｆｅｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．， １９８４）、主に黄斑の下の脈絡膜循環（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）に起因し、脈絡膜新生血管形成（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ、ＣＮＶ）によって特徴づけられる。脈絡膜から網膜色素上皮（ＲＰＥ）への新しい血管の異常増殖であるＣＮＶは（Ｐａｔｚ ｅｔ ａｌ．， １９７７）、最終的に光受容体の喪失、網膜剥離および密な黄斑瘢痕化につながるＲＰＥの下での血液および体液の漏れによる視力喪失につながると考えられている（Ｆｉｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２０００； Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏ ｅｔ ａｌ．， ２００６）。血管新生および血管漏出における重要な因子である（Ｄｖｏｒａｋ ｅｔ ａｌ．， １９９５）血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、ＣＮＶの進行中にアップレギュレートされ（Ｄ’Ａｍｏｒｅ， １９９４年； Ｓｐｉｌｓｂｕｒｙ ｅｔ ａｌ．， ２０００； Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２００２ ； Ｄａｓ ｅｔ ａｌ．， ２００３）、滲出性ＡＭＤの治療のための最先の治療標的になっている。

ＶＥＧＦは複雑な遺伝子であり、複数のアイソフォームのファミリーを形成するように選択的スプライシングされ（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９８９； Ｊｉｎｇｊｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９９）、各アイソフォームは生物学的特性、活性および機能が異なる（Ｈｏｕｃｋ ｅｔ ａｌ．， １９９１）。ほとんどの細胞が、一般的に、ＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１６５およびＶＥＧＦ_１８９アイソフォームを発現するのに対し、ＶＥＧＦ_１４５およびＶＥＧＦ_２０６は比較的稀である。ＶＥＧＦアイソフォームの大部分はエキソン１〜５を含むが（例外はＶＥＧＦ_１１１である（Ｍｉｎｅｕｒ ｅｔ ａｌ．， ２００７））、ヘパリン硫酸（ＨＳ）結合ドメインをコードするエキソン６および７の部分において異なる。これらのエキソンの使用における変化は、細胞表面ヘパラン硫酸プロテオグリカンへ結合したり、血管新生因子を放出したりするそれらの能力のような選択的スプライシングされたアイソフォームの生物学的特性を変化させる（Ｔｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９１； Ｎｅｕｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．， １９９９）。

２００２年に、第８エキソンの異なるスプライシング（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｐｒｉｃｉｎｇ）が、近位スプライス部位（ＰＳＳ）から遠位スプライス部位（ＤＳＳ）６６塩基下流に証明された（Ｂａｔｅｓ ｅｔ ａｌ．， ２００２； Ｗｏｏｌａｒｄ ｅｔ ａｌ．， ２００４）。この領域の選択的スプライシングは、アイソフォームの第２のファミリー（ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ）を生み出し、それらの抗血管新生特性が指摘される（Ｐｅｒｒｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２００５）。その全体が参照により本明細書に組み込まれているＷＯ０３／１０２１０５には、選択的スプライシングアイソフォームおよびそれらの治療的意義が記載されている。

病的血管新生の間、血管新生促進（ｐｒｏ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ）アイソフォームが選択的にアップレギュレートされる（Ｂａｔｅｓ ｅｔ ａｌ．， ２００２； Ｖａｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， ２００８； Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ−Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， ２００７）。このことは、ＶＥＧＦ_ＸＸＸおよびＶＥＧＦ_ＸＸＸｂが独立した制御経路を有し得ることを示唆している。ＶＥＧＦ_１６５ｂおよびＶＥＧＦ_１２１ｂのようなこれらの抗血管新生（ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ）アイソフォームは、網膜および脈絡膜新生血管形成の動物モデルの眼内注射の後において（Ｈｕａ ｅｔ ａｌ．， ２００８）、ならびに内皮および網膜上皮細胞の両方の細胞保護の結果（Ｍａｇｎｕｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１０）において、強力な抗血管新生性が示されている。

２００４年１２月に新生血管ＡＭＤの治療のためにＦＤＡ承認された最初の治療は、ＶＥＧＦ_１６５、ＶＥＧＦ_１８９およびＶＥＧＦ_２０６特異的なアプタマー、ペガプタニブナトリウム（マクジェン）であった。臨床試験中に、ペガプタニブは用量依存的に深刻な視力喪失のリスクを低下させ血管新生ＡＭＤの進行を遅くしたが（Ｇｒａｇｏｕｄａｓ ｅｔ ａｌ．， ２００４）、視力の有意な改善をもたらさなかった。２００６年に、新規ヒト化抗ＶＥＧＦ抗体フラグメントであるラニビズマブ（ルセンティス）が、新生血管ＡＭＤの治療のためにＦＤＡ承認された。その承認は、偽対照処理群における１１％と比較して、１年で、ルセンティス０．５ｍｇで毎月治療された患者の約９５％が視力を維持し（＜１５文字の損失（ｔｈｅ ｌｏｓｓ ｏｆ ＜１５ ｌｅｔｔｅｒｓ）として定義される）、≦４０％が視覚を改善した（≧１５文字の獲得として定義される）３つの臨床試験の結果に基づく（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．， ２００６； Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．， ２００６； Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．， ２００９）。現在の治療計画は、毎月の頻度で、眼内注射によるルセンティス投与を必要とする（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．， ２００９； Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｅｒｆｕｔｈ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）。このような眼内注射は、眼圧の上昇（Ｇｏｏｄ ｅｔ ａｌ．， ２０１０）、および、大規模ではないとはいえ、眼内炎やその他の重篤な副作用のリスクをもたらす（Ｊａｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００４）。さらに、ルセンティスが由来する抗ＶＥＧＦ抗体であるベビシズマブ（ｂｅｖｉｃｉｚｕｍａｂ）（アバスチン）は、ＶＥＧＦ_１６５に等しい効力でＶＥＧＦ_１６５ｂに結合することが示され、したがって、促進（ｐｒｏ）と抗血管新生との両方のＶＥＧＦアイソフォームを標的とする（Ｖａｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， ２００８）。

ＶＥＧＦの抗血管新生および血管新生アイソフォームの両方が同じ遺伝子に由来しているため、アイソフォームファミリーの制御は選択的スプライシングの制御の結果である。我々は最近、近位スプライス部位でのＶＥＧＦのスプライシングを制御する経路をいくつか同定した。このことから、近位スプライス部位を使用してＶＥＧＦの血管新生促進アイソフォームを生成するという細胞による決定に重要な要件として（Ｎｏｗａｋ ｅｔ ａｌ．， ２００８； Ｎｏｗａｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１０）、ＲＮＡ結合タンパク質ＳＲＳＦ１（Ｎｏｗａｋ ｅｔ ａｌ．， ２００８； Ａｍｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）およびそのキナーゼＳＲＰＫ１（Ｓａｎｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．， ２００５）が関与している。ＳＲＰＫ１のノックダウンは腫瘍におけるインビボでのＶＥＧＦ媒介性血管新生を強力に低下させ、ならびにＳＲＰＫ１および２の阻害はインビボでの血管新生を低下させた（Ａｍｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）。

その開示が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００８／１１０７７、ＷＯ２００９／１０６８５５、ＷＯ２０１０／０５８２２７、ＷＯ２０１１／０３６４２９、およびＷＯ２０１１／１４８２００には、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォーム優位に発現を管理する治療および他の生理学的な薬剤の使用について記載されている。ＳＲＰＫ阻害剤は、原理上、そのような薬剤を構成することができる。

ＷＯ２００５／０６３２９３は、ＳＲＰＩＮ３４０および誘導体ならびにそれらの類似体を含むＳＲＰＫ阻害剤のクラスを記載している。

ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォームの発現を管理するための新しい薬剤の開発は、例えば新生血管ＡＭＤだけでなく、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂが関与する全ての他の疾患の治療において、新時代を描く。

本発明は、特に、抗血管新生剤、神経保護剤（ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ）、透過性亢進障害を予防または治療するための薬剤として、疼痛を治療するための薬剤として、および子癇前症のリスクを低下させるまたは治療のための薬剤としての使用のための、ＳＲＰＫ１を標的とする新たな小分子阻害剤に、一部は基づいている。

本発明はまた、ＳＲＰＫ１を阻害することが知られている低分子量化合物（例えば、ＳＲＰＩＮ３４０および誘導体、ならびにそれらの類似体）が、ＣＮＶの進行を阻害するために局所的または用量依存的手段で使用され得るという驚くべき発見に、少なくとも一部は基づいている。

発明の概要
第一の側面において、本発明は、眼新生血管形成の用量依存治療または予防における使用のための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグを提供する。

ここで：Ｒ^１は水素原子、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_２−６アルケニル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_２−６アルキニル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_６−１０アリール基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アジド基、ヒドロキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルチオ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルスルホニル基、カルボキシル基、ホルミル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシカルボニル基、アシル基、アシルアミノ基、またはスルファモイル基を表し；Ｒ^２は水素原子、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基、または１つ以上の置換基を有していてもよいアリール基を表し；Ｒ^３は１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_２−６アルケニル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_６−１０アリール基、１つ以上の置換基を有していてもよい含窒素複素環、１つ以上の置換基を有していてもよい含酸素複素環、または１つ以上の置換基を有していてもよい縮合芳香族複素環を表し；Ｒ^４は水素原子またはハロゲン原子を表し；Ｑは−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−ＳＯ_２− −Ｃ（Ｓ）ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｏ）−、またはＣ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｓ）−を表し；ならびにＷは水素原子、アミノ、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_６−１０アリール基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルチオ基、１つ以上の置換基を有していてもよい含窒素複素環、１つ以上の置換基を有していてもよい縮合芳香族複素環、または下記式（ＩＩ）で表される基を表す：

ここで、Ｒ^５およびＲ^６は同一または異なって、それぞれ水素原子、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基、１つ以上の置換基を有していてもよい含窒素複素環、１つ以上の置換基を有していてもよい縮合芳香族複素環、アシル基、もしくはアシルアミノ基；もしくは上記Ｒ^５およびＲ^６は隣接する窒素原子と一緒になって、１つ以上の置換基を有していてもよい複素環を形成してもよく、前記複素環は１つ以上の置換基を有していてもよい縮合芳香族複素環であってもよく；もしくは上記Ｒ^５およびＲ^６は１つ以上の置換基を有していてもよいシクロアルキリデンアミノ基、または１つ以上の置換基を有していてもよい芳香族縮合シクロアルキリデン基であってもよい。

用量依存性は、好ましくはＳ字状の効能／用量の関係であり、例えば、添付図面の図４（左側のパネル）に例証されるタイプのものである。表現「眼新生血管形成」は、例えば加齢黄斑変性症のような脈絡膜新生血管形成を含む、眼新生血管形成によって特徴づけられる疾患および障害（ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）をその範囲内に含む。用語「眼新生血管形成」は、また、網膜新生血管形成によって特徴づけられる疾患および障害をその範囲内に含む。

第二の側面において、本発明は、眼新生血管形成の局所治療または予防における使用のための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグを提供する。

本発明の第一および第二の側面はまた、用量依存的治療としておよび／または局所治療として、そのような治療を必要とする対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）に式（Ｉ）の化合物を投与することによる眼新生血管形成の治療または予防のそれぞれの方法、ならびに眼新生血管形成の治療または予防のための薬剤（ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ）の調製における式（Ｉ）の化合物のそれぞれの使用を提供する。

本発明において使用される化合物が、眼新生血管形成の用量依存的な治療もしくは予防、または眼新生血管形成の局所的な治療もしくは予防を可能にすることは、驚くべきことであり、先行技術からは予想されない。用量依存的治療は、内在的（ｉｎｈｅｒｅｎｔｌｙ）に予測できず、それでも、効果的な治療のために非常に望ましく且つ有益である。

特定の式（Ｉ）の化合物、ならびにＷＯ２００５／０６３２９３号に記載されるような式（Ｉ）の化合物の好ましいまたは例示のサブクラス、ならびにそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物およびプロドラッグは、本発明における使用のために特に言及され得る。

本発明の方法における使用のために特に言及され得る式（Ｉ）の化合物のさらなる例は、Ｒ^３が、１つ以上の置換基を有していてもよい含酸素複素環、または１つ以上の置換基を有していてもよい２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基のものである。好ましい化合物は、Ｒ^３がフェニル基または２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基により置換された含酸素複素環が挙げられ、それら自身が本明細書に記載されるようにさらに置換されていてもよい。これらの式（Ｉ）の化合物ならびにその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物およびプロドラッグは新規であり、化合物それ自体として（眼新生血管形成の用量依存的な治療もしくは予防における、および／または眼新生血管形成の局所的な治療もしくは予防におけるそれらの使用と同様に）、それらは本発明のさらなる側面を構成する。

前記新規化合物を含む医薬組成物、ならびに、抗血管新生治療（異常または過剰な血管新生によって特徴づけられる疾患および障害の治療および予防を含む）、透過性亢進障害の治療、神経障害および神経変性障害の治療、非炎症性疼痛の治療ならびに子癇前症のリスクを低下する方法における前記新規化合物ならびにそれを含む医薬組成物の使用は、本発明のさらなる側面を構成する。

Ｒ^３が１つ以上の置換基を有していてもよい含酸素複素環である式（Ｉ）の新規化合物において、Ｒ^３基は、例えばＣ_１−６アルキル基、例えばメチル、によって任意に置換されるフラニル基、例えば５−メチル−フラン−２−イルであってもよく、または、シアノ、ハロ、ニトロ、ホルミル、２−もしくは３−もしくは４−ピリジル、もしくは１つ以上の置換基を有していてもよいフェニルによって任意に置換されるフラニル基であってもよい。

Ｒ^３が１つ以上の置換基を有していてもよい２−または３−または４−ピリジル基である式（Ｉ）の新規化合物において、１つ以上の置換基を有していてもよい前記２−または３−または４−ピリジル基は、例えば、無置換の３−ピリジル基であってもよい（すなわち、ピリジル基の窒素ヘテロ原子が、Ｑ基に対してメタである。）。

式（Ｉ）の新規化合物の好ましい例としては、Ｗがアミノ基、または１つ以上の置換基を有していてもよいモルホリニル基、より具体的には無置換のモルホリン−４−イル基であるものを挙げることができ、または、１つ以上の置換基、例えば４−メチル置換基もしくはアルキルアミノ置換基、より具体的には例えば４−（ジメチルアミノ）エチルもしくは４−（ジメチルアミノ）プロピル置換基を有していてもよい１−ピペラジニル基であるものを挙げることができる。この基において、さらにＲ^１がトリフルオロメチル、Ｒ^２およびＲ^４が両方ともＨである化合物が特に言及され得る。

本発明の第一および第二の側面における使用について、特に好ましくは、（ａ）Ｒ^３が、１つ以上の置換基、例えばフェニル置換基もしくは２−もしくは３−もしくは４−ピリジル置換基、を有していてもよい含酸素複素環、または１つ以上の置換基を有していてもよいフェニル置換基もしくは２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基である式（Ｉ）の上記化合物、（ｂ）図面の図１にその式が示されるＳＲＰＩＮ３４０、および（ｃ）それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物またはプロドラッグが挙げられる。Ｒ^３が１つ以上の置換基を有していてもよい含酸素複素環または１つ以上の置換基を有していてもよい２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基である式（Ｉ）の化合物の例としては、図面の図１にその式が示されるＭＶＲＬ０９およびＭＶＲＬ１０、ならびに表１にその式が示されるＭＶＲＬ１６、ＭＶＲＬ１７、ＳＰＨＩＮＸ９、ＳＰＨＩＮＸ１０、ＳＰＨＩＮＸ１２、ＳＰＨＩＮＸ１３およびＳＰＨＩＮＸ１４が挙げられる。誤解を避けるために、化合物ＭＶＲＬ１０、ＭＶＲＬ１６およびＭＶＲＬ１７は、それぞれＳＰＨＩＮＸ、ＳＰＨＩＮＸ６およびＳＰＨＩＮＸ７とも記載される。

式（Ｉ）の化合物、ならびにその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物およびプロドラッグは、以下の特徴の１つ以上によってさらに特徴づけられてもよく、これらは、単独でまたは任意の組み合わせで、本明細書またはＷＯ２００５／０６３２９３号に記載のいずれの例および選択（ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）とも組み合わせ可能である、化合物について：１．Ｒ^１はトリフルオロメチル基を表すことができる；２．Ｒ^３は含酸素複素環または２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基を表すことができる；３．Ｒ^３はフェニル基または２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基により置換された含酸素複素環を表すことができる；４．Ｗは、１つ以上の置換基を有していてもよい４−モルホリノ基、または１つ以上の置換基を有していてもよい１−ピペラジニル基を表すことができる；５．Ｗは１−ピペラジニル基または４−メチル−１−ピペラジニル基または４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−１−ピペラジニル基または４−（２−（ジメチルアミノ）プロピル）−１−ピペラジニル基を表すことができる；６．Ｒ^１はトリフルオロメチル基であり、Ｒ^２＝Ｒ^４＝Ｈ、Ｒ^３は４−（３−ピリジル）−フラン−２−イルであり、およびＱは−Ｃ（Ｏ）−であるとき、ＷはＲ^５またはＲ^６がアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基または置換されたアミノである式（ＩＩ）で表される基ではない；ならびに７．Ｒ^２＝Ｒ^４＝Ｈ、Ｒ^３は４−ピリジルであり、およびＷはＮ−ピペリジニルであり、およびＱは−Ｃ（Ｏ）−であるとき、Ｒ^１は水素ではない。

式（Ｉ）で表される化合物は、例えば：（１）上記のＲ^１が水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１−６アルキル基、またはハロゲン原子である化合物；（２）上記のＲ^１がトリフルオロメチル基である化合物； （３）上記のＲ^２が水素原子、またはＣ_１−６アルキル基である化合物；（４）上記のＲ^２が水素原子である化合物；（５）上記のＲ^３が１つ以上の置換基を有する含窒素５〜１０員ヘテロアリール環（ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５− ｔｏ １０−ｍｅｍｂｅｒｅｄ ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ ｒｉｎｇ）、または置換基を有していてもよい含酸素５〜１０員ヘテロアリール環である化合物；（６）上記のＲ^３が１つ以上の置換基を有していてもよいピリジル環またはフラン環である化合物；（７）上記のＲ^３が２−または３−または４−ピリジル環である化合物；（８）上記のＲ^３が１つ以上の置換基を有していてもよいフラン環である化合物；（９）上記のＲ^３がフェニル環またはピリジル環で置換されたフラン環である化合物；（１０）上記のＲ^４が水素原子である化合物；（１１）上記のＱが−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｓ）−である化合物であって、ここで、Ｃ（Ｏ）は酸素原子が二重結合を介して炭素原子に結合していることを意味し、およびＣ（Ｓ）は硫黄原子が二重結合を介して炭素原子に結合していることを意味する；（１２）上記のＱが−Ｃ（Ｏ）−である化合物；（１３）上記のＷが上記式（ＩＩ）で表され、Ｒ^５およびＲ^６は隣接する窒素原子と一緒になって、置換基を有していてもよい複素環基を形成する化合物；（１４）上記のＷが、置換基としてＣ_１−６アルキル基を有していてもよい１つの窒素原子を含む４〜８員複素環基（４− ｔｏ ８− ｍｅｍｂｅｒｅｄ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ ｇｒｏｕｐ）、置換基としてＣ_１−６アルキル基を有していてもよい１つの窒素原子および１つの酸素原子を含む４〜８員複素環基、または置換基としてＣ_１−６アルキル基を有していてもよい２つの窒素原子を含む４〜８員複素環基である化合物；（１５）上記のＷが、置換基としてＣ_１−６アルキル基を有していてもよい１つまたは２つの窒素原子を含む４〜８員複素環基である化合物；（１６）上記のＷが置換基としてＣ_１−６アルキル基を有していてもよいモルホリノ基である化合物；（１７）上記のＷが、置換基としてＣ_１−６アルキル基を有していてもよいピペリジニル基またはピペラジニル基である化合物；ならびに（１８）上記のＷが、置換基としてＣ_１−６アルキル基を有していてもよいピペラジニル基である化合物。

上述の化合物において、Ｒ^１は（１）、（２）の順で好ましく、（２）がより好ましい。Ｒ^２は（３）、（４）の順で好ましく、（４）がより好ましい。Ｒ^３は（５）〜（９）の順で好ましく、（９）がより好ましい。Ｑは（１１）、（１２）の順で好ましく、（１２）がより好ましい。Ｗは（１３）〜（１８）の順で好ましく、（１８）がより好ましい。

より好ましい化合物は、上記式（Ｉ）で表され、置換基タイプの任意の組合せを含み、Ｒ^１については（１）〜（２）から、Ｒ^２については（３）〜（４）から、Ｒ^３については（５）〜（９）から、Ｒ^４については（１０）から、Ｑについては（１１）〜（１２）から、またはＷについては（１３）〜（１８）からそれぞれが選択される。

それゆえ、特に言及される化合物は、式（Ｉ）で表されるもののうち、Ｒ^１がトリフルオロメチル基であり；Ｒ^２およびＲ^４がそれぞれ水素原子であり；Ｒ^３がピリジル環またはフラン環であり、そのそれぞれが１つ以上の置換基を有していてもよく；Ｑが−Ｃ（Ｏ）−であり；およびＷが、１つ以上の置換基を有していてもよい１つの窒素原子を含む４〜８員複素環基、１つ以上の置換基を有していてもよい１つの窒素原子および１つの酸素原子を含む４〜８員複素環基、または１つ以上の置換基を有していてもよい２つの窒素原子を含む４〜８員複素環基である。

このクラスの化合物の中で、より好ましい化合物は、式（Ｉ）で表されるもののうち、Ｒ^１がトリフルオロメチル基であり；Ｒ^２およびＲ^４がそれぞれ水素原子であり；Ｒ^３がピリジル環またはフラン環であり、そのそれぞれが１つ以上の置換基を有していてもよく；Ｑが−Ｃ（Ｏ）−であり；およびＷがモルホリノ基、ピペリジニル基、またはピペラジニル基であり、そのそれぞれが１つ以上の置換基を有していてもよい。

特に言及される化合物は、式（Ｉａ）のものである：

ここで、Ｗは１つ以上の置換基を有していてもよい１つの窒素原子を含む４〜８員複素環基、１つ以上の置換基を有していてもよい１つの窒素原子および１つの酸素原子を含む４〜８員複素環基、または１つ以上の置換基を有していてもよい２つの窒素原子を含む４〜８員複素環基であり；ならびに、Ｒ_８は水素、シアノ基、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基または２−，３−，もしくは４−ピリジル環である。Ｗによって定義された４〜８員複素環基上の置換基は、式（Ｉ）の化合物に関連して他の部分で定義されるようなものであってもよい。

図１Ａは、ＳＲＰＫ１およびＳＲＰＫ２に対する活性を示す３つの化合物の構造を示す。図１Ｂおよび図１Ｃは、ＳＲＰＫ１およびＳＲＰＫ２それぞれに対する図１Ａの化合物の活性を示す。 図２Ａは、ＡＲＰＥ−１９細胞における、チューブリン対照と比較したＳＲＳＦ１発現に対する、図１Ａの化合物の効果を示す。図２Ｂは、初代ＲＰＥ細胞における、ＧＡＰＤＨと比較したＶＥＧＦ１６５ ｍＲＮＡアイソフォームの発現に対する、図１Ａの化合物の効果を示す。図２Ｃは、総タンパク質と比較したＶＥＧＦ発現に対する、図１Ａの化合物の効果を示す。図２Ｄは、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ／総ＶＥＧＦ発現の比に対する、図１Ａの化合物の効果を示す。 図３Ａは、レーザー誘発マウスＣＮＶモデルにおける、図１Ａの化合物の効果を示す。図３Ｂは、ＶＥＧＦ抗体Ｇ６−３１と比較した、レーザー誘発ラットＣＮＶモデルにおける、ＶＥＧＦ発現に対するＳＲＰＩＮ３４０の効果を示す。図３Ｃは、ＳＲＰＩＮ３４０で処理した眼からの網膜タンパク質中のＶＥＧＦ発現に対する、ＳＲＰＩＮ３４０の効果を示す。 図４Ａは、ＳＲＰＩＮ３４０によるレーザー誘発ＣＮＶの阻害の用量依存的性質を示す。図４Ｂは、硝子体内注射後の眼における、ＳＲＰＩＮ３４０の半減期曲線を示す。 図５Ａは、ＣＮＶ病変領域上へ局所的に投与されたＳＲＰＩＮ３４０点眼薬（ｄｒｏｐｓ）の効果を示す。図５Ｂは、網膜におけるＶＥＧＦ_１６５ｍＲＮＡ発現に対する、局所的に投与されたＳＲＰＩＮ３４０の効果を示す。図５Ｃは、局所投与後の眼全体における、ＳＲＰＩＮ３４０の半減期曲線を示す。図５Ｄは、局所投与後の眼の後房（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ）における、ＳＲＰＩＮ３４０の半減期曲線を示す。 図６は、ＳＲＰＩＮ３４０処理後の網膜タンパク質における抗ＶＥＧＦアイソフォームに対する促進型（ｐｒｏ）の比を示す。 図７は、インビトロアッセイにおける、式（Ｉａ）および表１で定義されている化合物ＳＰＨＩＮＸ、ＳＰＨＩＮＸ６、ＳＰＨＩＮＸ７およびＳＰＨＩＮＸ８のＳＲＰＫ１の阻害のレベルを示す。 図８は、インビトロキナーゼアッセイにおける、式（Ｉａ）および表１で定義されている化合物ＳＰＨＩＮＸ、ＳＰＨＩＮＸ１２、ＳＰＨＩＮＸ１３およびＳＰＨＩＮＸ１４のＳＲＰＫ１阻害のレベルを示す。 図９Ａは、ＶＥＧＦ_１６５ｂＲＮＡ転写に対する、ＳＰＨＩＮＸ６および７の効果を示す。 図９Ｂは、ＶＥＧＦ_１６５ｂタンパク質発現に対する、ＳＰＨＩＮＸ６および７の効果を示す。 図１０Ａおよび１０Ｂは、ＳＰＨＩＮＸ７がＥＧＦの活性化によって誘導されるＳＲＳＦ１リン酸化を阻害することを示す。 図１０Ａおよび１０Ｂは、ＳＰＨＩＮＸ７がＥＧＦの活性化によって誘導されるＳＲＳＦ１リン酸化を阻害することを示す。 図１１は、ＳＰＨＩＮＸ７が点眼薬として眼における血管新生を阻害することを示す。ＳＲＰＩＮ３４０およびＳＰＨＩＮＸ７は、ＣＮＶ形成を有意に阻害した。ＳＰＨＩＮＸ７についてのＩＣ_５０は、２２５ｎｇ／ｍｌであった。 図１２は、ＳＰＨＩＮＸ７が点眼薬として眼における血管新生を阻害することを証明するさらなるデータを示す。 図１３は、ＳＲＰＫ１を標的にすることによる、前立腺腫瘍増殖の阻害を証明する。

発明の詳細な説明
抗血管新生治療
抗血管新生治療は、好ましくは、異常な血管新生または血管新生促進ＶＥＧＦアイソフォーム（ＶＥＧＦ_ＸＸＸ）の異常な過剰産生に関連する、任意の疾患または障害の治療または予防を含む。このような疾患または障害は、例えば、血管疾患（例えば、血管収縮および血管収縮を特徴とする障害、ならびに心血管疾患）、悪性および良性腫瘍（例えば、血管新生依存性癌、例えば腫瘍性癌（ｔｕｍｏｒｏｕｓ ｃａｎｃｅｒｓ））、腫瘍転移、炎症性障害、糖尿病、糖尿病性網膜症および糖尿病の他の合併症（例えば、糖尿病性新生血管形成）、トラコーマ、水晶体後部肥大（ｒｅｔｒｏｌｅｎｔａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、新生血管緑内障、加齢黄斑変性症、血管腫、移植角膜組織の免疫拒絶、眼外傷または感染に関連する角膜血管新生、オスラー−ウェーバー（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｂｅｒ）症候群、心筋血管新生、創部肉芽形成（ｗｏｕｎｄ ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ）、毛細血管拡張症、血友病関節（ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａｃ ｊｏｉｎｔ）、血管線維腫、毛細血管拡張症乾癬強皮症（ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、化膿性肉芽腫、冠動脈側副（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃｏｌｌａｔｅｒａｌｓ）、虚血肢血管新生、ルベオーシス、肥満、関節炎（例えば、関節リウマチ）、造血（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｅｓ）、脈管形成、歯肉炎、アテローム性動脈硬化症、子宮内膜症、新生内膜過形成、乾癬、多毛症、ならびに増殖性網膜症が挙げられる。本発明の抗血管新生治療はまた、健康な対象に対して行われる非治療的処理、例えば、化粧品の目的で血管の発達を阻害すること、を含んでもよい。異常な血管新生に関連する疾患および障害ならびに抗血管新生治療のさらなる詳細については、ＷＯ２００８／１１０７７７号を参照し、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

微小血管透過性亢進障害（ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、上皮細胞生存（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ）の障害および上皮濾過膜の開窓（ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎｓ）の障害 本発明の化合物は、ＳＲＰＫ１阻害剤として、選択的にスプライシングされたＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォームが関与している他の障害の治療において、治療剤としても使用され得る。例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１０／０５８２２７に示されるように、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂは微小血管透過性亢進障害、上皮細胞生存の障害および上皮濾過膜の開窓（ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎｓ）の障害の範囲に対して活性がある。

微小血管透過性亢進、ＶＥＧＦ_ＸＸＸアイソフォームの血管新生促進透過性促進特性（ｐｒｏ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏ−ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）の制御障害、上皮細胞生存および透過性の障害、および／または上皮濾過膜の開窓の性質（例えば数密度および／またはサイズ）における障害は、数多くの深刻な医学的症状の根底にある。

このような症状の例としては、例えば、蛋白尿、尿毒症、微量アルブミン尿、低アルブミン血症、腎過剰濾過（ｒｅｎａｌ ｈｙｐｅｒｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）、ネフローゼ症候群、腎不全、肺高血圧症、毛細血管透過性亢進、微細動脈瘤（ｍｉｃｒｏａｎｅｕｒｙｓｍｓ）、浮腫および糖尿病の血管合併症が挙げられる。

糖尿病の血管合併症の例としては、例えば、糖尿病性網膜症、増殖性および非増殖性の両方（ｂｏｔｈ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｎｄ ｎｏｎ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）、および糖尿病性腎症が挙げられる。糖尿病の血管合併症は、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病のいずれかに関連付けられることができる。

血液からのタンパク質の損失はさらなる合併症、例えば、血栓症、特に脳での血栓症、および感染症に対する脆弱性を引き起こすことがある。血液からの天然タンパク質の損失は、癌治療の有効性を重度に損なう可能性がある。

微小血管透過性亢進障害は、特に、腎障害、例えばＧＦＢの透過性障害、例えば有足細胞（ｐｏｄｏｃｙｔｅ）の透過性障害であり得る。

上皮細胞生存を支援する治療が有効である疾患の例は以下である：急性肺線維症、成人呼吸窮迫症候群、成人呼吸窮迫症候群、進行癌、アレルギー性呼吸器疾患、肺胞傷害（ａｌｖｅｏｌａｒ ｉｎｊｕｒｙ）、血管新生、関節炎、腹水症、喘息、火傷後の喘息または浮腫、アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、骨吸収、水疱性類天疱瘡を含む表皮下水疱形成と関連する水疱性疾患、心血管症状、糸球体またはメサンギウム細胞の増殖に関連する特定の腎疾患、慢性およびアレルギー性炎症、慢性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、肝硬変、角膜血管新生、角膜疾患、冠状動脈および大脳の側副血管形成、冠動脈再狭窄、心疾患後のダメージ、疱疹状皮膚炎、糖尿病、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、エンドトキシンショック、多形性紅斑、線維症、糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｏｐｈｒｉｔｉｓ）、移植片拒絶、グラム陰性敗血症、血管腫、肝硬変、肝不全、帯状疱疹（Ｈｅｒｐｅｓ Ｚｏｓｔｅｒ）、宿主対移植片反応（腎臓、肝臓、心臓、および皮膚の虚血再灌流障害および同種移植片拒絶反応）、感染症における創傷治癒不全、単純ヘルペスによる感染症、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の感染症、炎症、癌、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、炎症症状、ステント内再狭窄、ステント内狭窄、虚血、虚血性網膜静脈閉塞症、虚血性網膜症、カポジ肉腫、ケロイド、急性炎症の間の肝疾患、肺同種移植片拒絶（閉塞性気管支炎）、リンパ系悪性腫瘍、未熟児の黄斑変性網膜症、骨髄異形成症候群、心筋血管新生、新生血管緑内障、インスリン非依存性糖尿（ＮＩＤＤＭ）、閉塞性細気管支炎、眼の症状または疾患、網膜血管増殖と関連する眼疾患、Ｏｓｉｅｒ−Ｗｅｂｅｒ−Ｒｅｎｄｕ病、変形性関節症、卵巣過剰刺激症候群、パジェット病、膵炎、天疱瘡、多発性嚢胞腎疾患、ポリープ、閉経後骨粗鬆症（ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ ｏｓｔｅｏｐｅｒｏｓｉｓ）、子癇前症、乾癬、肺水腫、肺線維症、肺サルコイドーシス、再狭窄、再狭窄、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症および加齢黄斑変性症などの網膜症；リウマチ性関節炎、リウマチ性関節炎、ルベオーシス、サルコイドーシス、敗血症、脳卒中、滑膜炎、全身性エリテマトーデス、甲状腺炎（ｔｈｒｏｉｄｉｔｉｓ）、血栓細小血管症候群（ｔｈｒｏｍｂｉｃ ｍｉｃｏａｎｇｉｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、移植片拒絶反応、外傷、腫瘍関連血管新生、血管移植片再狭窄、血管移植片再狭窄、フォン・ヒッペル・リンドウ（Ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ Ｌｉｎｄａｕ）病、創傷治癒。

本発明は、黄斑ジストロフィーの治療に用いられてもよい。これは：シュタルガルト病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ ｄｉｓｅａｓｅ）／黄色斑眼底；シュタルガルト様黄斑ジストロフィー；シュタルガルト様黄斑ジストロフィー；常染色体優性ブルズアイ（ｂｕｌｌ’ｓｅｙｅ）黄斑ジストロフィー ベスト黄斑ジストロフィー；成人卵黄様ジストロフィー；パターンジストロフィー；ドイン（Ｄｏｙｎｅ）蜂巣状網膜ジストロフィー；ノースカロライナ黄斑ジストロフィー；ＭＣＤＲ１に類似した常染色体優性黄斑ジストロフィー；難聴に関連するノースカロライナ様黄斑ジストロフィー；進行性二巣状脈絡膜網膜萎縮（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｂｉｆｏｃａｌ ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎａｌ ａｔｒｏｐｈｙ）；ソーズビー（Ｓｏｒｓｂｙ’ｓ）眼底ジストロフィー；中心性輪紋状脈絡膜ジストロフィー；優性嚢胞様黄斑ジストロフィー；若年性網膜分離症；オカルト黄斑ジストロフィー（Ｏｃｃｕｌｔ Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）；非家族性オカルト黄斑ジストロフィー、を含む。

障害は、特に、地図状萎縮または加齢黄斑変性症などの、網膜上皮の障害であってもよい。

微小血管透過性亢進障害、上皮細胞生存の障害および上皮濾過膜の開窓の障害、ならびにこれらの治療のさらなる詳細については、ＷＯ２０１０／０５８２２７を参照し、その内容が参照により本明細書に組み込まれる。

神経障害および神経変性障害 本発明の化合物は、ＳＲＰＫ１阻害剤として、選択的にスプライシングされたＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォームが関与している他の障害の治療において治療剤としても使用され得る。例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００９／１０６８５５に、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂは神経保護および神経再生効果を有することが示されている。

本発明により治療されまたは予防される神経障害（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）は、神経障害性疼痛および糖尿病性および他のニューロパチーが挙げられる。

本発明により治療されまたは予防される神経変性障害は、認知および非認知タイプの神経変性、神経筋変性、運動感覚神経変性、眼神経変性が挙げられる。

ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂファミリーのタンパク質の活性は、症状および障害を、積極的に予防しおよび積極的に覆す両方が予想される。

さらに、軽度認知機能障害は多くの場合、例えば高齢者、ストレス下の人、疲れたまたは疲れ果てた人（ｔｉｒｅｄ ｏｒ ｅｘｈａｕｓｔｅｄ ｐｅｒｓｏｎｓ）のような、健康な人の特定のクラスにおける正常な状態と関係しているため、本発明はまた、思考、記憶、学習、集中および推論などのその認知機能および動作を調整しまたは正常化（ｎｏｒｍａｌｉｓｅ）するために、健康な人の非治療的処理に適用可能である。

さらに、神経再生は、精神医学的（ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ）または行動的な異常を有する対象における脳ニューラルネットワークを正常化することを助けられることから、それらが１つ以上の認識された精神医学的状態として診断可能であろうとなかろうと、本発明はまた、精神医学的障害を有する人の治療的処理に、ならびに、身体的に健康な人の認知および行動を正常な状態に向けて調整するための非治療的処理に適用され得る。

例えば、本発明は：疼痛（例えば、神経障害性疼痛）、認知症、加齢性認知障害、アルツハイマー病、アルツハイマー型の老人性認知症（ＳＤＡＴ）、レビー小体型認知症、血管性認知症、パーキンソン病、脳炎後のパーキンソニズム、うつ病、統合失調症、顔面・肩甲・上腕筋ジストロフィー（ＦＳＨ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィーおよびブルース型（Ｂｒｕｃｅ’ｓ）筋ジストロフィーを含む筋ジストロフィー、フューチ型（Ｆｕｃｈｓ’）ジストロフィー、筋硬直性ジストロフィー、角膜ジストロフィー、反射性交感神経性萎縮症（ＲＳＤＳＡ）、神経血管ジストロフィー、重症筋無力症、ランバート・イートン（Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｅａｔｏｎ）病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含む運動ニューロン疾患、多発性硬化症、起立性低血圧、例えば脳卒中後または事故後（例えば、頭部外傷または脊髄損傷）の外傷性ニューロパチーおよび神経変性、バッテン病、コケイン症候群、ダウン症候群、大脳皮質基底核神経節変性症、多系統萎縮症、脳萎縮、オリーブ橋小脳萎縮症、歯状核赤核（ｄｅｎｔａｔｏｒｕｂｒａｌ）萎縮症、淡蒼球ルイ体（ｐａｌｌｉｄｏｌｕｙｓｉａｎ）委縮症、球脊髄性萎縮症、視神経炎、硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、注意欠陥障害、ウイルス感染後脳炎、ポリオ後症候群（ｐｏｓｔ−ｐｏｌｉｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ファール症候群（Ｆａｈｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ジュベール症候群、ギラン・バレー症候群、滑脳症、モヤモヤ病、ニューロン遊走障害、自閉症症候群、ポリグルタミン病、ニーマン・ピック病、進行性多巣性白質脳症、偽脳腫瘍、レフサム病、ツェルヴェーガー症候群、核上性麻痺、フリードライヒ失調症、脊髄小脳失調症２型、レット症候群、シャイ・ドレーガー症候群、結節性硬化症、ピック病、慢性疲労症候群、遺伝性神経障害、糖尿病性神経障害および分裂性神経障害（ｍｉｔｏｔｉｃ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）を含む神経障害、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型ＣＪＤ、新変異型ＣＪＤ、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、ＧＳＳ、ＦＦＩ、クールーおよびアルパース症候群を含むプリオンベースの神経変性（ｐｒｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、ジョセフ病、急性散在性脳脊髄炎、クモ膜炎、中枢神経系の血管病変、四肢神経機能の喪失、シャルコー・マリー・トゥース病、クラッベ病、大脳白質萎縮症、心不全への脆弱性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ）、喘息、てんかん、聴覚神経変性、黄斑変性症、色素性網膜炎、ならびに緑内障誘発性視神経変性（ｇｌａｕｃｏｍａ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｐｔｉｃ ｎｅｒｖｅ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、の治療または予防を提供する。

関連する行動や思考が個人にかなりの苦悩をもたらすか、または彼もしくは彼女の日常機能（ｅｖｅｒｙｄａｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ）について破壊的でない限り、一般的に言えば、精神障害（ｍｅｎｔａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）は「精神医学的障害（ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）」と診断されない。従って、診断可能な障害と、似てはいるものの重症度または破壊性が低く（ｌｅｓｓ ｓｅｖｅｒｅ ｏｒ ｄｉｓｒｕｐｔｉｖｅ）その処理が非治療として考えられるべきである心理学的機能との間には、境界線がある（下記参照）。

本発明が関係する精神医学的障害の例としては、限定されないが、：不安障害（例えば、急性ストレス障害、パニック障害、広場恐怖症、社会恐怖症、特定恐怖症、強迫性障害、性的不安障害、心的外傷後ストレス障害、身体醜形障害および全般性不安障害）、小児期障害（例えば、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、アスペルガー障害、自閉性障害、行為障害、反抗的挑戦障害、分離不安障害、およびトゥレット障害）、摂食障害（例えば、拒食症および過食症）、気分障害（例えば、うつ病、大うつ病性障害、双極性障害（躁うつ病）、季節性情動障害（ＳＡＤ）、気分循環性障害および気分変調性障害）、睡眠障害、認知精神医学的障害（例えば、せん妄、健忘障害）、人格障害（例えば、妄想性人格障害、分裂病質人格障害、統合失調型人格障害、反社会的人格障害、境界性人格障害、演技性人格障害、自己愛性人格障害、回避性人格障害、依存性人格障害および強迫性人格障害）、精神病性障害（例えば、統合失調症、妄想性障害、短期精神病性障害（ｂｒｉｅｆ ｐｓｙｃｈｏｔｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、および共有精神病性障害）、ならびに物質関連障害（例えば、アルコール依存、アンフェタミン依存、大麻依存、コカイン依存、幻覚剤依存、吸入剤依存（ｉｎｈａｌａｎｔ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ）、ニコチン依存、オピオイド依存、フェンシクリジン依存性および鎮静剤依存）が挙げられる。

神経障害および神経変性障害、ならびにそれらの治療のさらなる詳細については、ＷＯ２００９／１０６８５５を参照し、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

疼痛の治療
本発明の化合物は、ＳＲＰＫ１阻害剤として、選択的にスプライシングされたＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォームが関与している他の障害の治療において治療剤としても使用され得る。例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１１／１４８２００に、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂは、哺乳動物においてＶＥＧＦＲ２媒介性非炎症性疼痛（ＶＥＧＦＲ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｎｏｎ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐａｉｎ）に対する鎮痛効果を有すことが示されている。

本発明により治療されまたは予防されるＶＥＧＦＲ２媒介性非炎症性疼痛は、疼痛の原因または伝達にＶＥＧＦＲ２受容体が関与する非炎症性の神経障害性および侵害受容性（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ）疼痛を含む。例えば、本発明による化合物は、非炎症性アロディニアおよび疼痛に対する活性（抗アロディニアおよび鎮痛活性）を有している。このタイプの疼痛状態は、断続的であろうと継続的形式であろうと、慢性疼痛を含む。そのような疼痛状態としては、例えば、腰痛、神経痛、非定型顔面痛などの非定型疼痛、手術後/・損傷後（例えば、神経損傷原因となる手術もしくは損傷の後）に示される、もしくは癌に関連する、もしくは細胞毒性もしくは放射線療法のような癌治療による疼痛、または糖尿病（糖尿病性神経障害、インスリン炎）もしくは他の全身性もしくは自己免疫性の疾患もしくは病変に関連する神経障害、またはそれらの治療、アルコール中毒もしくはＨＩＶ感染、加齢に関連する神経障害、または原因不明の神経障害による疼痛が挙げられる。

ＶＥＧＦＲ２アゴニストのタンパク質、例えばＶＥＧＦ_ＸＸＸｂファミリー、の活性は、ＶＥＧＦＲ２媒介性非炎症性疼痛害を、積極的に予防しおよび積極的に覆す両方が予想される。

しかしながら、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂファミリーのタンパク質の抗血管新生活性の観点から、本発明の化合物の使用は、起こりうる血管新生の阻害が患者に有害ではない背景（ｃｏｎｔｅｘｔｓ）での疼痛に制限されるであろう。完全ＶＥＧＦＲ２アゴニストの起こりえる血管新生促進活性の観点から、完全ＶＥＧＦＲ２アゴニストの使用は、起こりえる血管新生の刺激が患者に有害ではない背景（ｃｏｎｔｅｘｔｓ）での疼痛に制限されるであろう。

本発明に用いられる化合物Ｉは、１つ以上の別の疼痛治療剤と関連して、治療される（または共治療されている（ｂｅｉｎｇ ｃｏ−ｔｒｅａｔｅｄ））対象の痛みに対する感受性を正常化する目的で、前記１つ以上の別の疼痛治療剤と共に用いられ得る。用語「正常化する（ｎｏｒｍａｌｉｓｉｎｇ）」は、対象の疼痛感受性を正常レベルへと動かすことを意味し、１つ以上の別の疼痛治療剤が疼痛に対する感覚や感度の過度の低下を引き起こす場合、感度の向上を含んでもよい。１つ以上の別の疼痛治療剤は、現在知られているか、いまだ考案されていないものから選択され得る。このような選択は、十分に本技術分野における当業者の技術の範囲内であろう。このような併用治療は、対象の個別の症状や要望に応じて、対象における疼痛感度の微調整および全体的な副作用の最小化を可能にすることができる。

疼痛およびその治療のさらなる詳細については、ＷＯ２０１１／１４８２００を参照し、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

子癇前症のリスクの低下
本発明の化合物は、ＳＲＰＫ１阻害剤として、選択的にスプライシングされたＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォームが関与している他の障害の治療において治療剤としても使用され得る。例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１１／０３６４２９は、妊娠雌性哺乳類（ｐｒｅｇｎａｎｔ ｆｅｍａｌｅ ｍａｍｍａｌ）における低下したＶＥＧＦ_ＸＸＸｂレベルは、雌性哺乳類が子癇前症を発症するリスクを高めることを示している。したがって、本発明の化合物は、妊娠雌性哺乳類におけるＶＥＧＦ_ＸＸＸｂレベルを増加させ、子癇前症もしくはそれに関連する合併症を発症する雌性哺乳類のリスク、または母体の子癇前症に関連した胎児もしくは新生児の不全を発症する雌性哺乳類の胎児のリスクを低下させるために使用され得る。

ヒトにおける子癇前症は、早ければ妊娠２０週で発症し得る。妊娠約３４週間前に発症する子癇前症は、通常、「早期子癇前症（ｅａｒｌｙ ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ）」または「早発型子癇前症（ｅａｒｌｙ−ｏｎｓｅｔ ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ）」と呼ばれている。妊娠約３４週間後に発症する子癇前症は、通常、「後期子癇前症（ｌａｔｅ ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ）」または「遅発型子癇前症（ｌａｔｅ−ｏｎｓｅｔ ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ）」と呼ばれている。

加えて、子癇前症は、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ Ｒｏｙａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ ａｎｄ Ｇｙｎａｅｃｏｌｏｇｉｓｔｓによって確立された基準に従って、「重度子癇前症」として分類することができる。これらの基準の下では、「重度子癇前症」の患者は、１ｇ／２４ｈを超える蛋白尿と共に１６９ｍｍＨｇを超える収縮期血圧（ＢＰ）もしくは１０９ｍｍＨｇを超える拡張期ＢＰを有し；または、ＨＥＬＬＰ症候群（溶血、肝酵素の上昇、および低血小板数）の発生を示す。

子癇前症、および子癇前症もしくはそれに関連する合併症を発症する妊娠雌性哺乳類のリスク、または母体の子癇前症に関連した胎児もしくは新生児の不全を発症する雌性哺乳類の胎児のリスクを低下する方法のさらなる詳細については、ＷＯ２０１１／０３６４２９を参照し、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

活性化合物
本発明の化合物は、式（Ｉ）によって定義され、キナーゼＳＲＰＫ１およびＳＲＰＫ２のうち１つまたは両方の阻害剤であり、それゆえ本明細書に記載されるように治療に有用であることが示されている。

その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００５／０６３２９３には、明示的に例示した化合物と好適な位置が特に参照され、抗ウイルス剤として、公知のＳＲＰＫ阻害剤ＳＲＰＩＮ−１（本明細書ではＳＲＰＩＮ３４０とも称される）およびその類似体が記載されている。

本発明の化合物は、いずれの公知の方法によっても合成され得る。ＷＯ２００５／０６３２９３に開示されているような適切な方法が、必要に応じて適用され得る。

同時投与（Ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）
本発明の化合物は、所望により、１つ以上の追加の活性剤と同時投与されてもよく、例えば、これらに限定されないが、コリンエステラーゼ阻害剤、ドパミンアゴニスト（例えば、Ｌ−ＤＯＰＡ）、ＣＯＭＴ阻害剤、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤、抗コリン剤、アセチルコリンアゴニスト、セロトニンアゴニスト、ＡＭＰＡ受容体アゴニスト、ＧＡＢＡ受容体アゴニスト、ＮＭＤＡ受容体アゴニスト、βアドレナリン受容体アゴニスト、ジゴキシン、ドブタミン、抗炎症剤、神経栄養因子、スタチン、アデノシンＡ２ａ受容体アンタゴニスト、アルドース還元酵素阻害剤、免疫調節剤、カンナビノイドアゴニスト、インターフェロンまたは三環系抗うつ剤から、１つ以上の薬剤が選択されてもよい。

定義
本明細書の式（Ｉ）の定義は、次のとおりである： 「Ｃ_１−６アルキル基」は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖状または分岐状のアルキル基を指し、１〜６個の炭素原子からなる脂肪族炭化水素から任意の水素原子を除去することにより誘導される１価の基を意味する。具体的には、Ｃ_１−６アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、２−メチル−１−プロピル基、２−メチル２−プロピル基、１−ブチル基、２−ブチル基、１−ペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチル−１−ブチル基、３−メチル−１−ブチル基、２−メチル−２−ブチル基、３−メチル−２−ブチル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、１−ヘキシル基、２−ヘキシル基、３−ヘキシル基、２−メチル−１−ペンチル基、３−メチル−１−ペンチル基、４−メチル−１−ペンチル基、２−メチル−２−ペンチル基、３−メチル−２−ペンチル基、４−メチル−２−ペンチル基、２−メチル−３−ペンチル基、３−メチル−３−ペンチル基、２，３−ジメチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−１−ブチル基、２，２−ジメチル−１−ブチル基、２−エチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−２−ブチル基、および２，３−ジメチル−２−ブチル基が挙げられる。

「Ｃ_２−６アルケニル基」は、２〜６個の炭素を含む直鎖または分枝鎖のアルケニル基を意味する。具体的には、Ｃ_２−６アルケニル基は、例えば、ビニル基、アリル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、ペンテニル基、およびヘキセニル基が挙げられる。

「Ｃ_２−６アルキニル基」は、２〜６個の炭素を含む直鎖または分枝鎖アルキニル基を意味する。具体的には、Ｃ_２−６アルキニル基は、例えば、エチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、およびヘキシニル基が挙げられる。

「Ｃ_１−６アルコキシ基」は、前記定義の「Ｃ_１−６アルキル基」が連結されたオキシ基を意味する。具体的には、Ｃ_１−６アルコキシ基は、例えば、メトキシ基、エトキシ基、１−プロピルオキシ基、２−プロピルオキシ基、２−メチル−１−プロピルオキシ基、２−メチル−２−プロピルオキシ基、１−ブチルオキシ基、２−ブチルオキシ基、１−ペンチルオキシ基、２−ペンチルオキシ基、３−ペンチルオキシ基、２−メチル−１−ブチルオキシ基、３−メチル−１−ブチルオキシ基、２−メチル−２−ブチルオキシ基、３−メチル−２−ブチルオキシ基、２，２−ジメチル−１−プロピルオキシ基、１−ヘキシルオキシ基、２−ヘキシルオキシ基、３−ヘキシルオキシ基、２−メチル−１−ペンチルオキシ基、３−メチル−１−ペンチルオキシ基、４−メチル−１−ペンチルオキシ基、２−メチル−２−ペンチルオキシ基、３−メチル−２−ペンチルオキシ基、４−メチル−２−ペンチルオキシ基、２−メチル−３−ペンチルオキシ基、３−メチル−３−ペンチルオキシ基、２，３−ジメチル−１−ブチルオキシ基、３，３−ジメチル−１−ブチルオキシ基、２，２−ジメチル−１−ブチルオキシ基、２−エチル−１−ブチルオキシ基、３，３−ジメチル−２−ブチルオキシ基、および２，３−ジメチル−２−ブチルオキシ基が挙げられる。

「Ｃ_１−６アルキルチオ基」は、前記定義の「Ｃ_１−６アルキル基」が連結されたチオ基を意味する。具体的には、Ｃ_１−６アルキルチオ基は、例えば、メチルチオ基、エチルチオ基、１−プロピルチオ基、２−プロピルチオ基、ブチルチオ基、およびペンチルチオ基が挙げられる。

「Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基」は、前記定義の「Ｃ_１−６アルキル基」が連結されたカルボニル基を意味する。具体的には、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基は、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、１−プロピルオキシカルボニル基、および２−プロピルオキシカルボニル基が挙げられる。

「Ｃ_１−６アルキルスルホニル基」は、前記定義の「Ｃ_１−６アルキル基」が連結されたスルホニル基を意味する。具体的には、Ｃ_１−６アルキルスルホニル基は、例えば、メチルスルホニル基、エチルスルホニル基、１−プロピルスルホニル基、および２−プロピルスルホニル基が挙げられる。

「ハロゲン原子」は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味する。

「Ｃ_６−１０アリール基」は、６〜１０個の炭素を含む芳香族環状炭化水素基を意味する。具体的には、Ｃ_６−１０アリール基は、例えば、フェニル基、１−ナフチル基、および２−ナフチル基が挙げられる。

「複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」は、環を構成する原子の少なくとも１つ、例えば１つまたは２つがヘテロ原子である、環内に二重結合を含んでもよい芳香族または非芳香族環を意味する。

「含窒素複素環」は、環を構成する原子の少なくとも１つ、例えば１つまたは２つが窒素原子である、環内に二重結合を含んでもよい芳香族または非芳香族環を意味する。

「含酸素複素環」は、環を構成する原子の少なくとも１つ、例えば１つまたは２つが酸素原子である、環内に二重結合を含んでもよい芳香族または非芳香族環を意味する。

「ヘテロ原子」は、硫黄原子、酸素原子、または窒素原子を意味する。

「含窒素５〜１０員ヘテロアリール環（ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５− ｔｏ １０−ｍｅｍｂｅｒｅｄ ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ ｒｉｎｇ）」は、５〜１０原子が環を構成し、環を構成する原子の少なくとも１つが窒素原子であり、窒素原子以外の１つ以上のヘテロ原子がさらに含まれてもよい芳香環を意味する。具体的には、含窒素５〜１０員ヘテロアリール環は、例えば、ピリジン環、ピロール環、オキサゾール環、イソオキサゾール環、チアゾール環、イソチアゾール環、インドール環、イソインドール環、イミダゾール環、トリアゾール環、ピラゾール環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン環、キノリン環、イソキノリン環、およびベンゾイミダゾール環が挙げられる。「５〜１０員ヘテロアリール環」は、好ましくは、ピリジン環、ピロール環およびイミダゾール環が挙げられ、より好ましくは、ピリジン環が挙げられる。

「含窒素５および１０員ヘテロアリール基（ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５− ａｎｄ １０−ｍｅｍｂｅｒｅｄ ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ ｒｉｎｇ）」は、上記定義の「含窒素５および１０員ヘテロアリール環」から１つまたは２つの任意の水素原子を除去することにより誘導される１価または２価の基を意味する。具体的には、含窒素５および１０員ヘテロアリール基は、例えば、ピリジル基、ピロリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、インドリル基、イソインドリル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基、ピラゾリル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、およびベンゾイミダゾリル基が挙げられる。

「含酸素５〜１０員ヘテロアリール環」は、５〜１０原子が環を構成し、環を構成する原子の少なくとも１つが酸素原子であり、酸素素原子以外の１つ以上のヘテロ原子がさらに含まれてもよい芳香環を意味する。

「４〜８員複素環式環（４− ｔｏ ８− ｍｅｍｂｅｒｅｄ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ ｒｉｎｇ）」は、以下の定義を満たす非芳香族環を意味する：１．４〜８原子が環を構成する２．環を構成する原子の１つまたは２つが、ヘテロ原子である；３．１つまたは２つの二重結合が環に含まれてもよい；４．１つ〜３つのカルボニル基が環に含まれてもよい；および５．基は、単環式である。

４〜８員複素環式環は、好ましくは、ヘテロ原子として窒素原子を含む、含窒素４〜８員複素環式環である。

具体的には、４〜８員複素環式環は、例えば、アゼチジン（ａｚｅｔｉｄｎｅ）環、ピロリジン環、ピペリジン環、アゼパン環、アゾシン環、フラン環、テトラヒドロピラン環、モルホリン環、チオモルホリン環、ピペラジン環、チアゾリジン環、ジオキサン環、イミダゾリン環、およびチアゾリン環が挙げられる。「４〜８員複素環式環」は、好ましくはピロリジン環、ピペリジン環、モルホリン環、およびピペラジン環が挙げられる。

「４〜８員複素環基」は、上記定義の「４〜８員複素環式環」から１つまたは２つの任意の水素原子を除去することにより誘導される１価または２価の基を意味する。具体的には、４〜８員複素環基は、例えば、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、アゼパニル基、アゾカニル基、フリル基、テトラヒドロピラニル基、モルホリニル基、ｔｈｏｉｍｏｒｐｈｏｌｉｎｙｌ基、ピペラジニル基、チアゾリジニル基、ジオキサニル基、イミダゾリル基、およびチアゾリル基が挙げられる。

「縮合芳香族複素環」は、複素環部分がベンゼン環などの芳香環と融合（ｆｕｓｅｄ）した、例えばオルト縮合した、環構造を意味する。複素環部分は、上記定義の複素環である。

「縮合芳香族複素環基」は、複素環部分がベンゼン環などの芳香環と融合（ｆｕｓｅｄ）した、例えばオルト縮合した、環構造を意味する。複素環部分は、上記定義の複素環基である。

縮合芳香族複素環基は、例えば、インドリニル基、イソインドリニル基、および１，２，３，４−テトラヒドロキノリンが挙げられる。

本明細書において、「ハロゲン化Ｃ_１−６アルキル基」は、上記定義の「Ｃ_１−６アルキル基」における少なくとも１つの任意の水素原子が、上記定義の「ハロゲン原子」により置換された基を意味する。ハロゲン化Ｃ_１−６アルキル基は、例えば、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、およびモノフルオロメチル基が挙げられる。

本明細書において、語句「１つ以上の置換基を有していてもよい」は、特定の基または化合物が、置換可能な位置に、１つ以上の置換基の任意の選択または組み合わせを、随意に有してもよいことを意味する。具体的には、置換基は、例えば、以下の、１つ以上から選択される原子または基が挙げられる：ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、シアノ、ホルミル、カルボキシル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノ、オキソ、イミノ、Ｃ_１−６アルキル（例えば、メチル）、Ｃ_１−６アルコキシ（例えば、メトキシ）、ヘテロアリール、フェニル、またはハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、シアノ、ホルミル、カルボキシル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノ、オキソ、イミノ、Ｃ_１−６アルキル（例えば、メチル）もしくはＣ_１−６アルコキシ（例えば、メトキシ）の１つ以上で置換されたフェニルもしくはヘテロアリール。

「塩」は、本発明の化合物と形成される薬学的に許容される塩である限り、特に限定されるものではない。このような塩は、例えば、無機酸塩、有機塩、無機塩基塩、有機塩基塩、および酸性または塩基性アミノ酸塩が挙げられる。好ましい無機酸塩の例としては：塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、およびリン酸塩が挙げられる。好ましい有機塩の例としては：酢酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ステアリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、およびｐ−トルエンスルホン酸が挙げられる。

好ましい無機塩基塩の例としては：ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；およびアンモニウム塩が挙げられる。好ましい有機塩基塩の例としては：ジエチルアミン塩、ジエタノールアミン塩、メグルミン塩、およびＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩が挙げられる。

好ましい酸性アミノ酸塩の例としては：アスパラギン酸塩、およびグルタミン酸塩が挙げられる。好ましい塩基性アミノ酸塩の例としては：アルギニン塩、リジン塩、およびオルニチン塩が挙げられる。

空気中に放置すると、本発明の化合物は、時々、湿気を吸収し、および、時々、吸収された水に付着されまたは水和物に変換される。このような水和物も本発明に含まれる。

また、本発明の化合物は、時々、溶媒和物に変換され、いくつかの他の溶媒を吸収する。このような溶媒和物も本発明に含まれる。

任意の有機溶媒が、原則として、本発明の化合物の溶媒和物を調製するために使用されてもよい。

溶媒和物はまた、１つ以上の有機溶媒と一緒に、水を含むことができる。

従って、例えば、溶媒は、ケトン、アルコール、エーテル、エステル、芳香族溶媒、ならびに、可能な場合、それら互いの、他の有機溶媒との、および／または水との混合物から選択されてもよい。

式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグの形態が、本発明において使用されてもよい。「薬学的に許容されるプロドラッグ」は、健全な医学的および獣医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などなしにヒトおよび下等動物の組織と接触させて使用するのに適し、妥当な利益／リスク比に相応し、かつその意図される用途のために効果的な、可能であれば、化合物の両性イオン形態だけでない、化合物のプロドラッグを意味する。用語「プロドラッグ」は、例えば血液中での加水分解によって、インビボで急速に変換され上記式の親化合物を生じる化合物を意味する。インビボで代謝的切断（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｃｌｅａｖａｇｅ）により急速に変換され得る官能基は、カルボキシル基と反応性の基のクラスを形成する。化合物の基が代謝的に切断可能なインビボで切断されやすいことから、このような基を有する化合物は、プロドラッグとして働く。プロドラッグの徹底的な議論は、以下に提供される：Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ， Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ， ｅｄ．， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， １９８５； Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， Ｋ． Ｗｉｄｄｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｅｄ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ４２， ｐ．３０９−３９６，１９８５； Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ ａｎｄ Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ， ｅｄ．， Ｃｈａｐｔｅｒ ５； Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ｐ．１１３−１９１，１９９１； Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ， Ｈ． Ｂｕｎｄｇａｒｄ， ８， ｐ．１−３８， １９９２； Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ７７， ｐ．２８５，１９８８； Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．， Ｎ． Ｎａｋｅｙａ ｅｔ ａｌ， ３２， ｐ．６９２，１９８４； Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｔ． Ｈｉｇｕｃｈｉ ａｎｄ Ｖ． Ｓｔｅｌｌａ， Ｖｏｌ．１４ ｏｆ ｔｈｅ Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ， およびＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ， Ｅｄｗａｒｄ Ｂ． Ｒｏｃｈｅ， ｅｄ．， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｒｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ， １９８７、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

組成物および投与 本発明の化合物は、活性剤と、任意の適切な追加の成分を含む組成物の形態で投与されてもよい。組成物は、例えば、局所投与（例えば、点眼剤もしくはクリームもしくはローションとして）または非経口投与（例えば注射、移植もしくは点滴）に適切な医薬組成物（薬剤（ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ））であってもよい。組成物は、あるいは、例えば、食品、食品サプリメント、飲料または飲料サプリメントであってもよい。

本発明の文脈において、用語「医薬組成物」または「薬剤」は、活性剤を含み、さらに１つ以上の薬学的に許容される担体を追加的に含む組成物を意味する。組成物はさらに、投与の形態および剤形の性質に応じて、例えば、希釈剤、アジュバント、賦形剤、ビヒクル、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、フレーバー剤、芳香剤、抗菌剤、抗かび剤、潤滑剤および分散剤から選択された成分を含んでいてもよい。組成物は、例えば、リポソーム製剤を含む注射用液体製剤だけでなく、錠剤、糖衣錠、散剤、エリキシル剤、シロップ剤、懸濁剤を含む液状製剤、スプレー剤、吸入剤、錠剤、ロゼンジ、エマルジョン、溶液、カシェ剤、顆粒剤、カプセル剤および坐剤の形態をとってもよい。技術および製剤は、一般的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ， Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ， ｌａｔｅｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎに見出され得る。

液体形態の製剤は、溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。一例として、非経口注射または局所投与用の、水または水−プロピレングリコール溶液が挙げられ得る。液体製剤はまた、水性ポリエチレングリコール溶液中の溶液に製剤化され得る。

局所、経口または非経口投与のいずれかのための液体形態の製剤に、使用直前に変換されることが意図される、固体形態の製剤もまた含まれる。このような液体形態は、溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。これらの特定の固体形態製剤は、最も好都合には単位用量形態で提供され、単回液体投与単位を提供するように使用される。あるいは、液体形態に変換した後、注射器、ティースプーンまたは他の計量容器もしくは装置のようなものにより液体形態製剤の所定体積を測定することによって複数の個々の液体用量を得るのに十分な固体が提供され得る。液体形態に変換されることが意図された固体形態の製剤は、活性物質に加えて、香料、着色剤、安定剤、緩衝剤、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含んでもよい。液体形態製剤を調製するために利用される液体は、水、等張水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、およびそれらの混合物等であってもよい。当然、利用される液体は投与経路に関連して選択され、例えば、エタノールを大量に含む液体製剤は、局所または非経口使用には適していない。

組成物は、局所適用用に意図された製剤であってもよい。製剤は、局所適用後の放出を、ひいては活性剤のアベイラビリティを制御するためするためゲル化製剤であってもよい。製剤は、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースのような、１つ以上のゲル化剤を含有してもよい。製剤は、１つ以上の界面活性剤、例えば非イオン性液体ポリマー、その例としてはチロキサポール（Ｔｙｌｏｘａｐｏｌ）およびＢＡＳＦが提供しているＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）ｐｏｌｏｘａｍｅｒｓが挙げられる、を含んでいてもよい。製剤は、例えばデキストロースまたはソルビトールのような、１つ以上の可溶化剤を含有してもよい。製剤は、例えば塩化ベンザルコニウムのような、１つ以上の抗菌剤または防腐剤を含んでもよい。上記の名前をあげられたゲル化剤、界面活性剤、可溶化剤および抗菌剤は、単に例として列挙されており、これらの機能を果たす他の薬剤が既知であることは理解されるであろう。

用量は、患者の要件、治療されている症状の重症度、および用いられる化合物に応じて変更され得る。特定の状況についての適切な用量の決定は、当業者の技術の範囲内である。一般に、治療は化合物の最適用量より少ない小投与量で開始される。その後、その状況下での最適な効果に達するまで、用量は少しずつ増加させられる。便宜上、所望により、日々の総用量は、一日の間に部分に分けて投与され得る。

活性剤を投与するための投与計画は、例えば１〜１４日の間にわたる投与期間中、例えば最大１μｇ、例えば最大５００ｎｇ、例えば最大５０ｎｇ、例えば２０ｎｇ未満の活性剤の総用量を含んでもよい。例えば、１８ｎｇ、１７ｎｇ、１６ｎｇ、１５ｎｇ、１４ｎｇ、１３ｎｇ、１２ｎｇ、１１ｎｇまたは１０ｎｇ未満の総用量が投与され得る。

式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグは、それらの治療的に有効な量で投与されてもよい。ＣＮＶの治療のための局所投与用の式（Ｉ）の化合物の治療上の有効量は、送達ビヒクルの少なくとも約５μｇ／１０μｌであってもよい。あるいは、治療上の有効量は、少なくとも約１００μｇ／ｍＬ、例えば少なくとも約２００μｇ／ｍＬ、少なくとも約３００μｇ／ｍＬ、少なくとも約４００μｇ／ｍＬ、少なくとも約５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約６００μｇ／ｍＬ、少なくとも約７００μｇ／ｍＬ、少なくとも約８００μｇ／ｍＬ、少なくとも約９００μｇ／ｍＬ、または少なくとも約１０００μｇ／ｍＬであってもよい。あるいは、治療上の有効量は、少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、例えば少なくとも約２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬであってもよい。あるいは、治療上の有効量は、約５ｍｇ／ｍｌ未満、例えば約４ｍｇ／ｍｌ未満、約３ｍｇ／ｍｌ未満、約２ｍｇ／ｍｌ未満、約１ｍｇ／ｍｌ未満であってもよい。治療上の有効量は、例えば１〜１４日の間にわたる投与期間の間、毎日投与され得る。治療上の有効量は、例えば１日２回、１日において部分に分けて投与されてもよい、１日の総投与量であってもよい。

哺乳類対象の抗血管新生のための、または微小血管透過性亢進障害の治療もしくは予防における、もしくはＶＥＧＦ_ＸＸＸアイソフォームの血管新生促進透過性促進特性の制御における、もしくは増加した透過性の無い上皮細胞生存の支援における、もしくは上皮濾過膜の開窓の性質（例えば数密度および／もしくはサイズ）の低下における使用のための、または神経障害および神経変性障害の治療もしくは予防における使用のための、またはインビボもしくはインビトロでの神経保護もしくは神経再生剤としての使用のための、またはＶＥＧＦＲ２媒介性非炎症性疼痛の治療または予防における使用のための、または子癇前症もしくはそれに関連する合併症を発症する雌性哺乳類の、もしくは母体の子癇前症に関連した胎児もしくは新生児の不全を発症する雌性哺乳類の胎児のリスクの低下における使用のための、式（Ｉ）の化合物の治療上の有効量は、治療される対象の体重に基づいて算出されてもよく、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約６０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約７０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約９０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。あるいは、治療上の有効量は、約１００ｍｇ／ｋｇ未満、例えば約９０ｍｇ／ｋｇ未満、約８０ｍｇ／ｋｇ未満、約７０ｍｇ／ｋｇ未満、約６０ｍｇ／ｋｇ未満、約５０ｍｇ／ｋｇ未満、約４０ｍｇ／ｋｇ未満、約３０ｍｇ／ｋｇ未満、または約２０ｍｇ／ｋｇ未満、例えば、約１０ｍｇ／ｋｇ未満、約５ｍｇ／ｋｇ未満であってもよい。

「治療または予防」
本明細書で使用される表現「治療または予防」および類似の用語は、一般的な医療および精神医学的プラクティスに従った任意の利用可能なテストに従って判断されるような、障害を取り除きもしくは回避し、またはその症状を緩和することを意図した、予防的、治癒的（ｃｕｒａｔｉｖｅ）および緩和的（ｐａｌｌｉａｔｉｖｅ）等の、全ての形態の健康管理（ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を意味する。特定の結果を達成するために合理的に期待して意図するものの、常にそうするというわけではない介入（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）は、「治療または予防」という表現に含まれる。障害の進行を遅延させまたは停止させることに成功する介入は、表現「治療または予防」に含まれる。

ある種の神経的および精神医学的障害は、「スペクトル（ｓｐｅｃｔｒｕｍ）」状態とみなされ、個人が、起こりえる症状の範囲の一部または全てを示すことがあり、または障害の軽度の形態のみを示すことがある。また、多くの神経的および精神医学的状態は、進行性で、比較的軽度の異常な状態で始まりより深刻な異常な状態へと進行する。本発明は、どのようなタイプおよびステージの神経的および精神医学的状態の治療および予防も全て含む。

「感受しやすい（Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ）」 本明細書で使用される表現「感受しやすい」および類似の用語は、個体または障害について既知の危険因子を使用して評価されるような、医療もしくは精神医学的障害または人格変化を発症する正常よりも高いリスクがある個体を特に指す。そのような個体は、例えば、薬物（ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）が処方される、および／または特別な食事、生活様式もしくは同様の勧告がその個体に対して行われるであろう程度に、１つ以上の特定の障害または人格変化を発症する実質的なリスクを有すると分類され得る。

「非治療的方法」
本明細書で使用される表現「非治療的方法」は、神経的にまたは心理的に正常範囲内にある個人に対し、神経的または心理的種類の機能を正常化しまたは増強しまたは改善するために行われる介入を特に意味する。適切に非治療的に処理され得る神経的機能は、例えば、認知（思考、推論、記憶、想起、イメージングおよび学習を含む）、集中および注意、特に症状の尺度のより軽度側に向けて、ならびに軽度の異常な行動的または人格的特性が挙げられる。適切に非治療的に処理され得る心理的機能は、例えば、悲しみ、不安、抑うつ、怒りっぽさ、不機嫌、十代の気分（ｔｅｅｎａｇｅ ｍｏｏｄｓ）、乱れた睡眠パターン、鮮明な夢、悪夢、および夢遊病などの、人間の行動、気分、人格および社会的機能が挙げられる。

診断可能な神経的および精神医学的障害と、正常範囲内の（非診断可能な）神経的および心理的機能との間には、境界線がある。したがって、本発明の非治療的方法によって治療可能な上記で挙げた神経的および心理的機能の例に加えて、関連する行動や思考が個人に重大な苦痛を引き起こさないか、または彼もしくは彼女の日常の機能に破壊的ではないため非診断可能である神経的および精神医学的障害の軽度の形態もまた、本発明により非治療的に処理可能な状態と見なされる。

「正常化」
本明細書において使用される表現「正常化」および類似の用語は、正常とみなされるであろう状態に実際に達しているか否かに関わらず、一般的に正常な神経的または精神医学的健康に特徴的な状態へ向けた、生理的調整を特に指す。

哺乳動物
ヒトの治療に有用であることに加えて、本発明はまた、哺乳動物の範囲内で有用である。このような哺乳動物は、例えば動物園の非ヒト霊長類（例えば、類人猿、サルおよびキツネザル）、ネコやイヌのようなコンパニオンアニマル、イヌ、ウマおよびポニーのような作業およびスポーツ動物、ブタ、ヒツジ、ヤギ、シカ、牡牛および畜牛のような家畜、げっ歯類のような実験動物（例えば、ウサギ、ラット、マウス、ハムスター、スナネズミ、またはモルモット）が挙げられる。

治療すべき障害または機能が人間に排他的である場合は、治療される哺乳動物はヒトであると理解されるであろう。治療すべき障害または機能がある種に排他的である場合、同じことが任意の他の哺乳動物種にそれぞれ適用される。

図面の簡単な説明
本発明の実施形態が、今、純粋に例として、かつ添付の図面を参照して説明される。図１Ａは、ＳＲＰＫ１およびＳＲＰＫ２に対する活性を示す３つの化合物の構造を示す。図１Ｂおよび図１Ｃは、ＳＲＰＫ１およびＳＲＰＫ２それぞれに対する図１Ａの化合物の活性を示す。図２Ａは、ＡＲＰＥ−１９細胞における、チューブリン対照と比較したＳＲＳＦ１発現に対する、図１Ａの化合物の効果を示す。図２Ｂは、初代ＲＰＥ細胞における、ＧＡＰＤＨと比較したＶＥＧＦ１６５ ｍＲＮＡアイソフォームの発現に対する、図１Ａの化合物の効果を示す。図２Ｃは、総タンパク質と比較したＶＥＧＦ発現に対する、図１Ａの化合物の効果を示す。図２Ｄは、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ／総ＶＥＧＦ発現の比に対する、図１Ａの化合物の効果を示す。図３Ａは、レーザー誘発マウスＣＮＶモデルにおける、図１Ａの化合物の効果を示す。図３Ｂは、ＶＥＧＦ抗体Ｇ６−３１と比較した、レーザー誘発ラットＣＮＶモデルにおける、ＶＥＧＦ発現に対するＳＲＰＩＮ３４０の効果を示す。図３Ｃは、ＳＲＰＩＮ３４０で処理した眼からの網膜タンパク質中のＶＥＧＦ発現に対する、ＳＲＰＩＮ３４０の効果を示す。図４Ａは、ＳＲＰＩＮ３４０によるレーザー誘発ＣＮＶの阻害の用量依存的性質を示す。図４Ｂは、硝子体内注射後の眼における、ＳＲＰＩＮ３４０の半減期曲線を示す。図５Ａは、ＣＮＶ病変領域上へ局所的に投与されたＳＲＰＩＮ３４０点眼薬（ｄｒｏｐｓ）の効果を示す。図５Ｂは、網膜におけるＶＥＧＦ_１６５ｍＲＮＡ発現に対する、局所的に投与されたＳＲＰＩＮ３４０の効果を示す。図５Ｃは、局所投与後の眼全体における、ＳＲＰＩＮ３４０の半減期曲線を示す。図５Ｄは、局所投与後の眼の後房（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ）における、ＳＲＰＩＮ３４０の半減期曲線を示す。図６は、ＳＲＰＩＮ３４０処理後の網膜タンパク質における抗ＶＥＧＦアイソフォームに対する促進型（ｐｒｏ）の比を示す。図７は、インビトロアッセイにおける、式（Ｉａ）および表１で定義されている化合物ＳＰＨＩＮＸ、ＳＰＨＩＮＸ６、ＳＰＨＩＮＸ７およびＳＰＨＩＮＸ８のＳＲＰＫ１の阻害のレベルを示す。図８は、インビトロキナーゼアッセイにおける、式（Ｉａ）および表１で定義されている化合物ＳＰＨＩＮＸ、ＳＰＨＩＮＸ１２、ＳＰＨＩＮＸ１３およびＳＰＨＩＮＸ１４のＳＲＰＫ１の阻害のレベルを示す。図９Ａは、ＶＥＧＦ_１６５ｂＲＮＡ転写に対する、ＳＰＨＩＮＸ６および７の効果を示す。図９Ｂは、ＶＥＧＦ_１６５ｂタンパク質発現に対する、ＳＰＨＩＮＸ６および７の効果を示す。図１０Ａおよび１０Ｂは、ＳＰＨＩＮＸ７がＥＧＦの活性化によって誘導されるＳＲＳＦ１リン酸化を阻害することを示す。図１１は、ＳＰＨＩＮＸ７が点眼薬として眼における血管新生を阻害することを示す。ＳＲＰＩＮ３４０およびＳＰＨＩＮＸ７は、ＣＮＶ形成を有意に阻害した。ＳＰＨＩＮＸ７についてのＩＣ_５０は、２２５ｎｇ／ｍｌであった。図１２は、ＳＰＨＩＮＸ７が点眼薬として眼における血管新生を阻害することを証明するさらなるデータを示す。ならびに、図１３は、ＳＲＰＫ１を標的にすることによる、前立腺腫瘍増殖の阻害を証明する。

方法
細胞培養
初代ヒトＲＰＥ単離は、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｅｙｅ ｂａｎｋ （Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｅｙｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ （ＢＥＨ））から死後２４時間以内に得られたヒトドナー眼球に対して実施された。網膜は脈絡膜ＲＰＥシートと一緒にペトリ皿に移され、細かく刻まれ、０．３ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼが補充されたダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）：Ｆ１２（１：１）＋ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ）中で１５分間３７℃で消化された。消化された脈絡膜ＲＰＥシートは、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、０．５％ＰｅｎＳｔｅｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）が補充された培地（ＤＭＥＭ：Ｆ１２＋ＧｌｕｔａＭａｘ）中に懸濁され、１５００ｒｐｍ（２５１ｇ）で１０分、ペレット細胞へと回転された。ペレットは２５％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）が補充された培地中に再懸濁され、細胞培養フラスコ（Ｇｒｅｉｎｅｒ）内で増殖され、８０％コンフルエンスで分割された。ＡＲＰＥ−１９（ＡＴＣＣ）細胞は、ＤＭＥＭ：Ｆ１２＋１０％ＦＢＳ中で培養され、８０％コンフルエンスで分割された。

インビトロキナーゼアッセイ
ＭＶＲＬ０９、ＭＶＲＬ１０（ＳＰＨＩＮＸ）、ＭＶＲＬ１６（ＳＰＨＩＮＸ６）、ＭＶＲＬ１７（ＳＰＨＩＮＸ７）、ＳＰＨＩＮＸ８、ＳＰＨＩＮＸ９、ＳＰＨＩＮＸ１０、ＳＰＨＩＮＸ１２、ＳＰＨＩＮＸ１３、ＳＰＨＩＮＸ１４およびＳＲＰＩＮ３４０を含む候補化合物は、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ； Ｋｏｒｅｓａｗａ ａｎｄ Ｏｋａｂｅ， ２００４）によってスクリーニングされ、その結果が表１に示される。９．６ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７および０．２ｎＭ ＥＤＴＡ ｐＨ８を含む反応バッファーは、１０μΜ ＳＲＳＦ１ ＲＳペプチド（ＮＨ_２−ＲＳＰＳＹＧＲＳＲＳＲＳＲＳＲＳＲＳＲＳＲＳＮＳＲＳＲＳＹ−ＯＨ（配列番号：１））および０．１μｇの精製ＳＲＰＫ１キナーゼに添加された。候補化合物は、１０μΜ〜０．５ｎΜで系列希釈され、反応混合物に添加され、ＳＲＰＫ１キナーゼが省略された（ｏｍｉｔｔｅｄ）および化合物が省略されたウェルもまた対照として加えられた。すべてのウェルは、１％ＤＭＳＯを含んでいた。１マイクロモーラーのＡＴＰが添加され、ＡＴＰマイナスのウェルは、バックグラウンド対照として使用された。次いで、プレートは３０℃で１０分間インキュベートされた。等量のＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ， ２５μｌ）が各ウェルに添加され、プレートは、ＡＲＶＯ５ｘ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して発光について測定された。

薬学的阻害剤治療 − ＳＲＰＩＮ３４０、ＭＶＲＬ０９およびＭＶＲＬ１０ ＳＲタンパク質リン酸化阻害剤、ＳＲＰＩＮ３４０（Ｎ−［２−（１−ピペリジニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル］イソニコチンアミド；Ａｓｃｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）、ＭＶＲＬ０９（Ｎ−［２−（モルホリン−４−イル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ピリジン−３−カルボキサミド）、ＭＶＲＬ１０（５−メチル−Ｎ−［２−（モルホリン−４−イル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル］フラン−２−カルボ−オキサミド）が用いられた。〜６０％コンフルエントの細胞は、少なくとも１２時間血清飢餓され、５または１０μΜ化合物阻害剤で処理された。２４時間後にｍＲＮＡが抽出され、４８時間後、タンパク質がさらなる分析のために抽出された。

半定量的：ＶＥＧＦについての逆転写酵素（ＲＴ）−ＰＣＲ
定型的なＰＣＲが、ＶＥＧＦ_１６５およびＶＥＧＦ_１６５ｂ ｍＲＮＡを検出するために使用された。５−１０％のｃＤＮＡが、以下を含む反応混合物に添加された：２×ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ （Ｐｒｏｍｅｇａ）、エキソン７ｂ（５’−ＧＧＣ ＡＧＣ ＴＴＧ ＡＧＴ ＴＡＡ ＡＣＧ ＡＡＣ−３’（配列番号：２））およびエキソン８ｂの３’ＵＴＲ（５’−ＡＴＧ ＧＡＴ ＣＣＧ ＴＡＴ ＣＡＧ ＴＣＴ ＴＴＣ ＣＴＧ Ｇ−３’（配列番号：３））に相補的なプライマー（各１μΜ）、およびＤＮａｓｅ／ＲＮａｓｅフリー水。全てのサンプルは、陰性対照（逆転写酵素なしの、水およびｃＤＮＡ（−ＲＴ））、および陽性対照（プラスミド発現ベクター（ｐｃＤＮＡ）中のＶＥＧＦ_１６５およびＶＥＧＦ_１６５ｂ ｐｃＤＮＡ）と並行して測定された。反応混合物は９５℃で６０秒間変性し、５５℃で６０秒間アニーリングし、７２℃で６０秒間伸長させて、３０〜３５回、温度サイクルされた（ＰＣＲ Ｅｘｐｒｅｓｓ， Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ）。ＰＣＲ産物は、０．５μｇ／ｍｌ臭化エチジウム（ＢｉｏＲａｄ）を含む２．５％アガロースゲル上で分離され、紫外線トランスイルミネーター（ＢｉｏＲａｄ）下で可視化された。

等量のｃＤＮＡローディングは、ＧＡＰＤＨプライマー（フォワード：５’−ＣＡＣ ＣＣＡ ＣＴＣ ＣＴＣ ＣＡＣ ＣＴＴ ＴＧＡ Ｃ−３’（配列番号：４）； リバース：５’−ＧＴＣ ＣＡＣ ＣＡＣ ＣＣＴ ＧＴＴ ＧＣＴ ＧＴＡ Ｇ−３’（配列番号：５））を用いてＰＣＲによって測定された。プライマーは、９４℃で４５秒間変性し、６５℃で４５秒間アニーリングし、７２℃で６０秒間伸長させて、３０回温度サイクルさせた後、〜１１２ｂｐで１つのアンプリコンを生じた。

ＰａｎＶＥＧＦおよびＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）。

１μｇ／ｍｌのｐａｎ−ＶＥＧＦ捕捉抗体（Ｄｕｏｓｅｔ ＶＥＧＦ ＥＬＩＳＡ ＤＹ−２９３； Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）が、室温で一晩インキュベートされた。プレートはブロックされ（Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ； ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、組換えヒト（ｒｈ）ＶＥＧＦ_１６５またはｒｈＶＥＧＦ_１６５ｂスタンダードの連続希釈液（４ｎｇ／ｍｌから１６．２５ｐｇ／ｍｌまでの範囲）が添加され、サンプルライセートと一緒にインキュベートされ、典型的には１：１０で希釈された。プレートは、振とうしながら３７℃で１時間インキュベートされ、洗浄され、１００μｌ／ウェルのビオチン化ヤギ抗ヒトＶＥＧＦ（０．１μｇ／ｍｌ； Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）またはマウス抗ヒトＶＥＧＦ_１６５ｂ（０．２５μｇ／ｍｌ）の何れかと共に３７℃でさらに１時間インキュベートされた。洗浄後、１００μｌ／ウェルのホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）抱合ストレプトアビジン（１：２００； Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）が添加され、プレートは室温で２０分間放置された。

プレートは洗浄され、遮光下で２０分間、ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ａ ａｎｄ Ｂ（ＤＹ−９９９； Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて色調変化が誘導された。反応は１００μｌ／ウェルの１Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４の添加により停止され、吸光度がＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｄｙｎｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｏｐｓｙｓ ＭＲ ｓｙｓｔｅｍ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ）中で、４５０ｎｍで５７０ｎｍの対照測定と共に、直ちに読み取られた。Ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ Ｑｕｉｃｋｌｉｎｋ ４．２５ソフトウェアはまた、各サンプルについてのＶＥＧＦ濃度の推定を可能にするスタンダードの平均吸光度値から標準曲線を計算するのに使用された。

ウェスタンブロット
タンパク質サンプル（３０〜５０μｇ）は、１×ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ローディングバッファー（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、４％ＳＤＳ、２０％グリセロール、０．２％（ｗ／ｖ）ブロモフェノールブルー、および最終濃度５％２−メルカプトエタノール、 ｐＨ６．８）と混合された。タンパク質を変性させるために、サンプルは１００℃で５分間煮沸された。

サンプルは、約２．５時間、氷冷ランニングバッファー（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２５０ｍＭグリシン、０．１％ＳＤＳ、ｐＨ８．３）で９０Ｖで１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上でポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）に供された。分離されたタンパク質は、次いで、転写バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、３８ｍＭグリシン、２０％メタノール、ｐＨ８．３）中で９０Ｖで２時間湿式転写によって、メタノール活性化ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に電気泳動的にブロットされた。膜は、室温で３０分間攪拌しながらブロッキング溶液（ＰＢＳ／Ｔ中の２．５％脱脂粉乳または５％ＢＳＡ）中でインキュベートされ、次いで４℃で一晩、一次抗体でプローブ化された；２．５％脱脂粉乳ＰＢＳ／Ｔ中で１：１０００〜１：２００に希釈されたウサギポリクローナル抗ＶＥＧＦ−Ａ（Ａ２０； ｓｃ−１５２、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、５％ＢＳＡ ＰＢＳ／Ｔ中で１：１０００に希釈されたＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ特異的マウスモノクローナル５６／１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、２．５％脱脂粉乳ＰＢＳ／Ｔ中で１：１０００に希釈されたマウスモノクローナルＳＲＳＦ１（ＳＦ２／ＡＳＦ）（９６； ｓｃ−３３６５２、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、および５％ＢＳＡ ＰＢＳ／Ｔ中で１：１０００に希釈されたマウスモノクローナル抗ＳＲＰＫ１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、６１１０７２）。膜は、次いで、ＴＢＳ／０．３％Ｔで各１０分間４回洗浄された。その後、攪拌しながら室温で４５分間、二次ＨＲＰ接合抗体とともにインキュベートされた：５％ＢＳＡ ＰＢＳ／Ｔまたは２．５％脱脂粉乳ＰＢＳ／Ｔ中で１：１００００に希釈されたヤギαマウス免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、ヤギαウサギＩｇＧまたはウサギαヤギＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ）。洗浄が繰り返され、Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｏｌｕｍｉｎｉｓｃｅｎｃｅ （ＥＣＬ） ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｆｅｍｔｏ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてバンドが検出された。

薬学的阻害剤処理 − ＳＰＨＩＮＸ６およびＳＰＨＩＮＸ７ 初代ヒトＲＰＥ細胞は、記載されるように（Ｇａｍｍｏｎｓ ｅｔ ａｌ Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ５４（９） ６０５２−６０６２）、２４時間ＳＰＨＩＮＸの濃度を増加させて処理され、続いてＲＮＡ抽出され、前述されるように（Ｂａｔｅｓ ｅｔ ａｌ ２００２）、ＶＥＧＦ_１６５（２００ｂｐ）またはＶＥＧＦ_１６５ｂ（１３０ｂｐ）を検出するプライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲが行われた。細胞はＳＰＨＩＮＸ６および７で処理され、ＰＣＲが繰り返された。

ＳＰＨＩＮＸで４８時間処理されたＲＰＥ細胞からタンパク質が抽出され、前述のように（Ｇａｍｍｏｎｓ ｅｔ ａｌ Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ５４（９） ６０５２−６０６２）、抗ＶＥＧＦ_１６５ｂ抗体を用いてＶＥＧＦ_１６５ｂについてのウエスタンブロッティングに供された。

ＥＧＦ活性化によって誘導されるＳＲＳＦ１リン酸化の阻害。

ＰＣ３前立腺癌細胞は、ＤＭＳＯ（ビヒクル）、ＳＰＨＩＮＸ、ＳＲＰＩＮ３４０またはＳＰＨＩＮＸ７のいずれかの１０μΜでの存在下で、１０ｎＭ ＥＧＦで１時間処理された。細胞は溶解され、リン酸化ＳＲタンパク質に対する抗体（ＭＡＢ１０４）およびローディング対照としてのチューブリンに対する抗体を用いた免疫ブロットに供された。ＩｍａｇｅＪ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙを用いてＳＲＳＦ１およびＳＲＳＦ５バンドについての強度が測定された。リン酸化は、無処理に対するバンドの強度の増加分として、ビヒクルと一緒のＥＧＦについてのものと比較して算出される。

レーザー病変（ｌｅｓｉｏｎ）誘導プロトコール ６〜８週齢のＣ５７／Ｂ６マウス（Ｂ＆Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）およびアダルトノルウェー・ブラウンラット（Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、５０ｍｇ／ｋｇケタミンおよび０．５ｍｇ／ｋｇメデトミジンの混合物の腹腔内注射により麻酔された。２．５％塩酸フェニレフリンおよび１％トロピックアミドにより瞳孔が拡張された。４つの光凝固病変は、それぞれの眼で１〜２ディスク直径の距離で、乳頭周囲の分布で網膜血管の間に、クリプトン赤色レーザー（マウス：２５０ｍＷ，０．０１ｓ，７５μｍ、ラット：２００ｍＷ，０．０１ｓ，７５μｍ、 ＩＲＩＳ Ｍｅｄｉｃａｌ ８１０ｎｍ Ｏｃｕｌｉｇｈｔ Ｓｌｘ ｌａｓｅｒ）により届けられた（ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ）。処理時に網膜下気泡を有するレーザー病変のみが、研究に取り入れられた。レーザー光凝固後すぐに、動物は、両眼に硝子体内注射を受け（０日目および７日目）、または、片眼に１００μｇ／ｍＬ ＳＲＰＩＮ３４０もしくは異なる用量のＳＰＨＩＮＸ７（１０μｌ体積）の一日二回の局所点眼薬および他の眼に対照ビヒクルが与えられた。動物は４日目または１４日目のいずれかに間引かれ、眼は、網膜解剖およびタンパク質抽出のために外され、または、固定され摘出されイソレクチン−Ｂ４について脈絡膜染色され検査された。

局所投与の間、ＳＲＰＩＮ３４０またはＳＰＨＩＮＸ７は、眼への薬物曝露の持続を助けるため、ゲルベースの薬物送達ビヒクルへと作り上げられ（Ｄｏｕｋａｓ ｅｔ ａｌ．， ２００８）、０．０５％ＤＭＳＯがＳＲＰＩＮ３４０を溶解するために使用され、および対照ビヒクルに添加された。

インビボ前立腺腫瘍研究
１×１０^６ ＰＣ−３ ＲＦＰ（赤色蛍光タンパク質）細胞が、ヌードマウスの前立腺に外科的に投入された。腫瘍体積は、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍを用いて毎週２回測定された（総フラックス：光子／秒として表される）。腫瘍が２×ｌ０^９平均光子／秒に達すると、マウスは、２０μｇ ＳＰＨＩＮＸまたはビヒクルのいずれかのＩＰ注射で週に三回処理された。３１日後、マウスは間引きされ、さらなる分析のために腫瘍が抽出された。Ｎ＝９、ｐ＜０．０１、２要因ＡＮＯＶＡ。

質量分析
インビボでのＳＲＰＩＮ３４０の薬物動態を決定するために、質量分析ベースの戦略が採用された。初めに、ＳＲＰＩＮ３４０および分子誘導体ＭＶＲＬ０９は、１００μｇ／ｍｌから０μｇ／ｍｌまで水で系列希釈され（最初のストックはＤＭＳＯに溶解された）、分析された。クロマトグラムは、ＳＲＰＩＮ３４０（３４９．１Ｄａ）およびＭＶＲＬ０９（３５１Ｄａ）に予想された分子量で明瞭なピークを作り出した。ピーク下面積が統合され、線形応答を確認するための濃度に対するプロットが観察された。ＳＲＰＩＮ３４０は、２０ｎｇの硝子体内注射後の眼組織で、および５μｇの単回局所適用後の眼組織で調べられた。単回投与後、マウスは１、４、８、２４および４８時間の時点で安楽死させられた。サンプル、ＳＲＰＩＮ３４０（検体）および対照処理されたものは、ホモジナイズされ、等量（１００μｌ）アセトニトリルまたはアセトンでサンプルからタンパク質が沈殿させられた。

１００μｇ／ｍｌ
ＭＶＲＬ０９の内部標準が、調製中のサンプルのロスについて勘定するためにサンプルに添加された。５０％サンプルおよび５０％アセトニトリルおよび１００μｇ／ｍｌ ＭＶＲＬ０９の溶液は、タンパク質をペレット化するために４℃で１５分間遠心分離され、分析のために上清が採取された。溶液は８時間３７℃で蒸発させられ、注入およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法分析器（Ａｂｓｃｉｅｘ）の準備のために３０μｌアセトニトリルに再懸濁された。各サンプルは、５分間測定され、クロマトグラムが作成された。標準曲線は、濃度を決定するために、両方のヒト血漿水マトリックス中で作成された。半減期は、対数プロットを使用して、１時間から４８時間までのサンプル濃度に対して１つの位相指数関数的減衰をフィッティングすることにより、Ｐｒｉｓｍを用いて計算された。

統計分析
特記しない場合、データは平均±ＳＥＭとして示される。すべてのデータ、グラフおよび統計的分析は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）、およびＩｍａｇｅ Ｊにより算出された。全ての結果は、ｐ＜０．０５（^＊）、Ｐ＜０．０１（^＊＊）およびｐ＜０．００１（^＊＊＊）で統計的に有意であるとみなされた。

結果
新規ＳＲＰＫ１阻害剤の同定
新規ＳＲＰＫ１および高度に関連するＳＲＰＫ２阻害剤を同定するために、ある範囲の阻害剤がインビトロキナーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ； Ｋｏｒｅｓａｗａ ａｎｄ Ｏｋａｂｅ， ２００４）でスクリーニングされた。以前に同定されたＳＲＰＫ阻害剤ＳＲＰＩＮ３４０（Ｆｕｋｕｈａｒａ ｅｔ ａｌ．， ２００６）は、新規候補化合物ＭＶＲＬ１０（５−メチル−Ｎ−［２−（モルホリン−４−イル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル］フラン−２−カルボキサミド）およびＭＶＲＬ０９（Ｎ−［２−（モルホリン−４−イル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ピリジン−３−カルボキサミド）の同定のための陽性対照として使用された。構造的誘導体ＳＲＰＩＮ３４９は、陰性対照として使用された（図１）。ＳＲＰＩＮ３４９はＳＲＰＩＮ３４０と同様の構成を有しているが、トリフルオロメチル部分の代わりに水素原子を有する。３つ全ての阻害剤は、ＳＲＰＫ１キナーゼを阻害するいくらかの能力を示し、ＭＶＲＬ０９は１０μΜより大きいＩＣ_５０で最も低い効果である。ＳＲＰＩＮ３４０およびＭＶＲＬ１０の両方が、それぞれ０．９６μΜおよび０．８５μΜのＩＣ_５０値でＳＲＰＫ１活性を強力に阻害した（図１Ｂ）。このアッセイで得られた結果は、ＳＲＰＩＮ３４０について公表されたＩＣ_５０と一致している（０．８９μΜ； Ｆｕｋｕｈａｒａ ｅｔ ａｌ．， ２００６）。新規候補化合物ＭＶＲＬ１６（ＳＰＨＩＮＸ６）、ＭＶＲＬ１７（ＳＰＨＩＮＸ７）がまた、同じインビトロキナーゼアッセイを用いて同定され、それぞれ１７３ｎＭおよび５４ｎＭのＩＣ_５０値を示している（図７）。ピペラジン構造が欠落しているＭＶＲＬ１８（ＳＰＨＩＮＸ８）、ＳＰＨＩＮＸ９およびＳＰＨＩＮＸ１０は、インビトロアッセイでは活性を示さなかった。

その後、これらの化合物のＳＲＰＫ２活性を阻害する活性が調べられた。ＳＲＰＩＮ３４０は、７．４μΜのＩＣ_５０でＳＲＰＫ２活性を阻害した。ＭＶＲＬ０９はＳＲＰＫ２の阻害を示さず、ＭＶＲＬ１０は１０μΜでわずか１０％のキナーゼ阻害を示した（図１Ｃ）。３つ全ての化合物は、ＳＲＰＫ２より優先的にＳＲＰＫ１を標的とするが、ＭＶＲＬ１０は最も特異的で、ＳＲＰＫ１について１０倍を超える選好（ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を示した。５８キナーゼのパネルが微小熱量測定を用いてスクリーニングされ、１０μΜで２℃を超える温度シフトは、ＳＲＰＫ１（９．８２°）、ＭＳＳＫ１Ａ（７．９３℃）およびＳＲＰＫ２（３．５℃）でのみ認められた。５５の他の全てのキナーゼは、＜２℃シフトを有し、それらのうち５２は＜１℃シフトを有した。

ＳＲＰＫ阻害剤は、ＶＥＧＦアイソフォーム発現に対する処理の効果を測定するために、一連のインビトロアッセイで試験された。初めに、ＳＲＰＫ１およびＳＲＳＦ１発現に対する化合物処理の効果が測定された。先行公報は、ＳＲＰＫ１によるＳＲＳＦ１リン酸化は、スプライシングを促進するＶＥＧＦプレｍＲＮＡへのその結合を可能にするＳＲＳＦ１の核局在化に至ることを示唆していた（Ｎｏｗａｋ ｅｔ ａｌ．， ２００８； Ｎｏｗａｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１０； Ａｍｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）。我々は、ＳＲＰＩＮ３４０およびＭＶＲＬ０９の１０μΜ処置が、ＡＲＰＥ−１９細胞において、処置の６日後ですらＳＲＰＫ１発現に影響しないことを観察した。ＭＶＲＬ１０がＳＲＰＫ１発現を低下させそうなことは、キナーゼの安定性を変化させ得ることを示唆する（図２Ａ）。ＳＲＰＩＮ３４０、ＭＶＲＬ０９およびＭＶＲＬ１０によるＡＲＰＥ−１９細胞の処理は、７２時間処理時間後にチューブリン対照と比較してＳＲＳＦ１の発現を低下させ、６日まで延びている（図２Ａ）。

５μΜで２４時間の阻害剤処理は、初代ＲＰＥ細胞において、ＧＡＰＤＨと比較してＶＥＧＦ_１６５ｍＲＮＡアイソフォームの発現を変化させた。３つ全ての阻害剤はＶＥＧＦ_１６５の発現を低下させ、およびＭＶＲＬ０９はＶＥＧＦ_１６５ｂの明確な発現を誘導した（図２Ｂ）。我々は、ＶＥＧＦタンパク質発現に対するＳＲＰＫ１阻害の影響を調べ始めた。ＳＲＰＩＮ３４０およびＭＶＲＬ０９は、総タンパク質と比較してＶＥＧＦ発現を有意に低下させたが、ＭＶＲＬ１０は何の効果を誘発することもなかった（図２Ｃ）。ＭＶＲＬ１０がＶＥＧＦ血管新生促進および抗血管新生アイソフォームの比を変化させるたかどうかを測定するために、我々はｐａｎＶＥＧＦおよびＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ特異的ＥＬＩＳＡを実施した。３つ全ての阻害剤はＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ／総ＶＥＧＦの比を増加させ、ＭＶＲＬ０９およびＭＶＲＬ１０は高度に有意であり（ｐ＜０．０１）、これは、ＳＲＰＫ１阻害が血管新生促進ＶＥＧＦの発現を低下させ、抗血管新生ＶＥＧＦの発現を促進し、または両方の組み合わせを示唆している（図２Ｄ）。

従って、ＭＶＲＬ１０は、ＳＲＰＫ１に比較的特異的な阻害剤のようであった。ＳＲＰＫ１阻害が動物モデルにおいてＣＮＶを抑制することができるかどうかを測定するために、我々は、レーザー誘導マウスＣＮＶモデルにおいて、互いに並んでこれらの化合物を試験した。１０ｎｇ ＳＲＰＩＮ３４０およびＭＶＲＬ１０の２つの硝子体内注射は、同程度で注入した対照の眼と比較して、それぞれ有意に新生血管領域を低下させた（ｐ＜０．０５、図３Ａ）。ＣＮＶが低減された網膜におけるＶＥＧＦ発現をＳＲＰＩＮ３４０が変化させることができるかどうか測定する目的で、レーザー誘導ＣＮＶのラットモデルが使用された。マウスＩｇＧの潜在的検出により（これは、ＶＥＧＦについて同様に動作する）、ＶＥＧＦアイソフォームに対するマウスモノクローナル抗体がマウスの組織において容易には使用され得ないためである。ＳＲＰＩＮ３４０は、ＶＥＧＦ抗体，Ｇ６−３１（Ｒｏｃｈｅ）と一緒に試験された。ＳＲＰＩＮ３４０注射（２５ｎｇ）は、生理食塩水注射した対照と比較して、再び有意に、ＣＮＶ領域を低下させた（ｐ＜０．０５）。ＶＥＧＦ抗体Ｇ６−３１はこのラットモデルにおいてＣＮＶ領域に対して非有意な効果に終わったが（図３Ｂ）、マウスＣＮＶモデルにおいて低下を引き起こした（Ｒｅｎｎｅｌ，２０１１）。

最初の処理４日後のＳＲＰＩＮ３４０および生理食塩水処理した眼からの網膜タンパク質は、ウェスタンブロットによってＶＥＧＦ発現について評価された。ＶＥＧＦの発現の低下が、ＳＲＰＩＮ３４０処理した眼において観察された（図３Ｃ）。ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォームの発現が、マウスモノクローナル５６／１抗体（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて調べられた。この時点でのＳＲＰＩＮ３４０処理後の網膜タンパク質において、抗ＶＥＧＦアイソフォームに対する促進型の比率に差は観察されなかった（図６）。

マウスにおいてレーザー誘導ＣＮＶを阻害するときの、ＳＲＰＩＮ３４０によるＳＲＰＫ１阻害の効力を測定するため、用量漸増試験が実施された。ＳＲＰＩＮ３４０は、１．２８ｎｇ総注入用量のＥＣ_５０で、対照注射された眼と比較して用量依存的にＣＮＶ領域を低下させた（図４Ａ）。我々は、硝子体内注射後の眼におけるＳＲＰＩＮ３４０の薬物動態の測定へと進んだ。２０ｎｇの注射は、比較的長く持続可能な、２日の期間を超えて眼内に＞１０ｎｇ／ｍｌの濃度という結果となった。１、４、８ ２４および４８時間で測定された濃度に対してフィッティングした曲線は、２２時間の推定持続半減期を与えた（図４Ｂ）。

その低分子量および良好な薬物品質（ＭＷ３４９、ＬｏｇＰ ３．６８、およびリピンスキーのルールオブファイブを満たす）に基づいて、我々は、ＳＲＰＩＮ３４０および関連化合物は、点眼薬として局所的に投与された場合、ＶＥＧＦ媒介性ＣＮＶを防止することができるのではないかという仮説を立てた。我々は、ＳＲＰＩＮ３４０局所点眼薬を調査する用量反応トライアルを実施した。ＳＲＰＩＮ３４０は、以前に記載された薬物送達ビヒクル（Ｄｏｕｋａｓ ｅｔ ａｌ．，２００８）中に溶解され、１日２回投与された。レーザー傷害（ｉｎｓｕｌｔ）から１４日後、脈絡が固定され、イソレクチン染色のために平らにマウントされ（ｆｌａｔｍｏｕｎｔｅｄ）、ＲＮＡ分析のために網膜が抽出された。

局所ＳＲＰＩＮ３４０点眼薬は、６４０ｎｇ総用量のＥＣ_５０で用量依存性にＣＮＶ病変面積を低下させ、ＳＲＰＩＮ３４０硝子体内注射後に同じ効果を達成するのに要求される濃度の５００倍であった（図５Ａ）。さらに、網膜におけるＶＥＧＦ_１６５ｍＲＮＡ発現は、ＳＲＰＩＮ３４０処理後に低下した（ｐ＝０．０５８）（図５Ｂ）。局所投与後の眼でＳＲＰＩＮ３４０が検出可能であることを確認するため、質量分析が行われた。１０μｌビヒクル中５μｇのＳＲＰＩＮ３４０の一滴が、ＣＤ−１マウスの一方の眼に投与され、他方には対照ビヒクルが投与された。１、４、８、２４および４８時間後、マウスは間引きされ、眼の前房および後房からの眼組織は、別々にＳＲＰＩＮ３４０発現について分析された。ＳＲＰＩＮ３４０は、眼全体で、特に後房の両方で検出された。１時間後、総適用用量の３．５％が、眼で検出された（図５Ｃ）。網膜、強膜脈絡膜複合体および残部硝子体からなる後房において、適用用量の０．１５％が１２時間後に検出された（図５Ｄ）。ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用した指数関数的減衰分析は、後房において３５分の初期半減期を作成した。

考察
我々は、血管新生促進ＶＥＧＦアイソフォームＶＥＧＦ_１６５の発現を低下させ、インビボにおいてＣＮＶを阻害するため、ＳＲＰＫ１の小分子化合物阻害剤を使用した。我々は、阻害剤が、インビトロで、ＳＲＳＦ１ ＲＳドメインのセリン残基のＳＲＰＫ１リン酸化を防止することを同定した。ＳＲＰＫ１のＳＲＳＦ１との相互作用は、文献（Ａｕｂｏｌ ｅｔ ａｌ．， ２００３； Ｖｅｌａｚｑｕｅｚ−Ｄｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， ２００５； Ｎｇｏ ｅｔ ａｌ．， ２００５）に詳しく記載されている。ＳＲＳＦ１は、ＶＥＧＦを含む多数の遺伝子の選択的スプライシングを制御するプロトオンコジーンＳＲタンパク質である（Ｓａｎｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．， ２００５）。ここで、我々は、ＡＲＰＥ−１９細胞へのＳＲＰＫ１阻害剤の反復投与がＳＲＰＫ１発現非依存的にＳＲＳＦ１の発現を低下させたことを示し、これはＳＲＳＦ１のリン酸化がその細胞質安定性のために必要となる可能性があることを示唆している。さらに、ＳＲＰＫ１阻害剤ＳＲＰＩＮ３４０およびＭＶＲＬ０９は、ＲＮＡレベルでＶＥＧＦ_１６５発現を低下させ、タンパク質レベルでの総ＶＥＧＦ発現を有意に低下させた。ＭＶＲＬ１０はＶＥＧＦタンパク質レベルに影響を与えなかったが、促進型−および抗−血管新生ＶＥＧＦアイソフォームの発現比率についてのさらなる調査が、ＭＶＲＬ１０は抗血管新生ＶＥＧＦアイソフォームの発現を優位にする比率に有意に切り替えたことを示した。１００ｎＭでのＳＰＨＩＮＸ７は、ＲＮＡレベルでＶＥＧＦ_１６５の量を低減すること（図９Ａ）、タンパク質レベルでＶＥＧＦ_１６５ｂを増加させること（図９Ｂ）、および１０μΜでＳＲＳＦ１リン酸化を阻害すること（図１０Ａおよび１０Ｂ）が示されている。マウスレーザー誘発ＣＮＶモデルにおいてインビボで試験した場合、３つ全ての阻害剤が新生血管病変の面積を低下させ、ＳＰＨＩＮＸ７、ＳＲＰＩＮ３４０およびＭＶＲＬ１０（ＳＰＨＩＮＸ）は有意を達成した。

抗血管新生ＶＥＧＦアイソフォームへのＶＥＧＦスプライシングにおける切り替えは、ヒト初代ＲＰＥおよびＡＲＰＥ−１９細胞株においてＳＲＰＫ１阻害時に観察されたものの、マウス組織におけるＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォームの検出は断定的には示されていない。ｍＲＮＡ（定量ＰＣＲにより検出された（Ｘｕ ｅｔ ａｌ ２０１１， Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ ｅｘｐ ｅｙｅ ｒｅｓ， Ｃａｉｒｅｓ ｅｔ ａｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）およびタンパク質（ウェスタンブロットにより同定された（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ）は、両方ともにマウスにおいて記載されているが、両方の方法について、（ＩｇＧコンタミネーションおよびクロス増幅を排除する）厳格な対照を欠いていることが、ＶＥＧＦ_１６５ｂ発現に対して反論し得る（Ｈａｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ）。ＶＥＧＦ転写物の選択的スプライシングは進化の過程で増加し、ＶＥＧＦ_１６５ｂ発現は正常マウスでは非常に低く、ウサギおよびブタを経て霊長類で最も高発現となることが示唆されている（Ｘｕ ｅｔ ａｌ ２０１１）。したがって、マウスモデルにおいて、ＳＲＰＫ１阻害剤は、近位スプライス部位の使用を防止し成熟ＲＮＡの低下を生じるか、または転写もしくは翻訳の制御における間接的な変化を通じて、血管新生促進ＶＥＧＦアイソフォームの発現を低下させることによって、ＣＮＶを防止している可能性がある。現在のところ、マウスにおけるＶＥＧＦ選択的スプライシングの制御因子を同定した調査はない。レーザー誘発ラットＣＮＶモデルで試験すると、ＳＲＰＩＮ３４０（Ｆｕｋｕｈａｒａ ｅｔ ａｌ， ２００６）はＣＮＶ領域および総ＶＥＧＦタンパク質発現を低下させた。ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ発現がラット網膜において調べられ、ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂは発現したものの、生理食塩水対照と比較して、ＳＲＰＩＮ３４０処理中のＶＥＧＦ_ＸＸＸｂアイソフォームの発現について、その時点では変化が観察されなかった。このことは、げっ歯類モデルにおいて、ＳＲＰＫ１阻害が血管新生促進ＶＥＧＦ発現を低下させることによって、抗血管新生性になり得ることを示唆している。

我々は、マウスモデルにおけるＣＮＶ領域に対するＳＲＰＩＮ３４０のＥＣ_５０の測定を始めた。ＳＲＰＩＮ３４０は、１．２８ｎｇのＥＣ_５０を生じ、使用されたＳＲＰＩＮ３４０の用量範囲、０．２〜１０ｎｇ／眼は、ＣＮＶを阻害するために従来使用されたｒｈＶＥＧＦ_１６５ｂの用量と類似していた（Ｈｕａ ｅｔ ａｌ．， ２０１０）。Ｈｕａと同僚は、ラニビズマブまたはベバシズマブよりも１０００から１０倍低い３μｇ／眼のヒトでの効果的なｒｈＶＥＧＦ_１６５ｂ用量を測定した（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．， ２００６）。ヒト特異的なラニビズマブをマウスにおけるＳＲＰＩＮ３４０有効性データと直接比較することは困難であるが、ｒｈＶＥＧＦ_１６５ｂと比べると、ＳＲＰＩＮ３４０は、１６０倍効果が低かったが（Ｈｕａ ｅｔ ａｌ．， ２０１０）、げっ歯類でのペガプタニブよりも１２５倍少ない用量を必要とした（Ｉｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．， ２００３）。データは、ＳＲＰＩＮ３４０が、現在の治療である硝子体内注射後の低用量でのラニビズマブと同程度のＣＮＶにおける低下を達成する可能性を秘めていることを示唆している。

ラニビズマブの治療の欠点の１つは毎月の眼内注射が必要とされることであり、それゆえ、我々は、ＳＲＰＩＮ３４０およびＳＰＨＩＮＸ７が局所投与後にＣＮＶを強力に阻害することができるかどうかを調べた。局所ＳＲＰＩＮ３４０は、注入ＳＲＰＩＮ３４０よりも５００倍を超える３．１８７μｇ／ｍｌのＥＣ_５０で、マウスにおいてＣＮＶを有意に抑制した。薬物動態解析は、局所的に適用される用量の３．５％が１時間後に眼に検出されたことを示唆し、これは、乏しい眼のバイオアベイラビリティにより局所的に適用された薬物のわずか５％が眼に入るという以前の推定を反映している（Ｇｅｒｏｓｋｉ ａｎｄ Ｅｄｅｌｈａｕｓｅｒ， ２０００）。また、ＳＲＰＩＮ３４０は、単回局所投与後４８時間の眼において依然として検出可能であったが、全身的には検出されなかった。適用されたＳＲＰＩＮ３４０のわずか約５％が眼に浸透しそうであるにもかかわらず、局所的ＳＲＰＩＮ３４０を用いて５０％ＣＮＶ阻害を達成するのに必要な用量は、他の局所療法に匹敵する。

２００８年に、Ｄｏｕｋａと同僚らは、脱エステル化によりＴＧ１００５７２を生じる不活性なプロドラッグであるＴＧ１００８０１を同定した。ＴＧ１００８０１はＳｒｃキナーゼ、ならびにＶＥＧＦＲ−１およびＶＥＧＦＲ−２を含む選択されたチロシン受容体キナーゼをターゲットとし、０．６％ではなく１％ＴＧ１００８０１の一日二回の局所適用が、ＣＮＶ病変領域を優位に低下させた（Ｄｏｕｋａｓ ｅｔ ａｌ， ２００８）。しかしながら、同じ薬物送達ビヒクル中の０．０１％ＳＲＰＩＮ３４０溶液は、ＣＮＶ領域の有意な阻害を生じた。我々が知る限り、ＳＲＰＩＮ３４０およびＳＰＨＩＮＸ７は、血管新生促進ＶＥＧＦアイソフォームの発現を変化させる最初の局所化合物である。局所ＳＲＰＩＮ３４０処理後、ＶＥＧＦ_１６５発現について評価されたマウス網膜は、ＶＥＧＦ_１６５の近有意な低下を示した（ｐ＝０．０５８； ｎ＝３）。より強力な分裂促進（ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ）ＶＥＧＦアイソフォームであるＶＥＧＦ_１６５は（Ｋｅｙｔ ｅｔ ａｌ．， １９９６）、網膜の発達の間の生理的新生血管形成に十分である（Ｓｔａｌｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．， ２００２）。本研究ではＳＲＰＫ１阻害後のＶＥＧＦ_１６５発現を調べることに焦点を当ててきたが、しかし、我々は、ＶＥＧＦ_１２１のような他の血管新生促進ＶＥＧＦアイソフォームの発現もまたＳＲＰＫ１阻害後に低下するであろうと予想する。実際、種を超えてすべての血管新生促進ＶＥＧＦアイソフォームにより保存されたスプライス部位である、ＶＥＧＦエキソン８ＰＳＳの前３５ｎｔ領域で、ヒトＶＥＧＦプレｍＲＮＡにＳＲＳＦ１が結合することが示されている（Ａｍｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１）。

週３回３０日間の２０μｇのＳＰＨＩＮＸのＩＰ注射によるヌードマウスにおける誘発された前立腺癌の治療は、対照生理食塩水注射と比較して、腫瘍体積の有意な低下に至った（総フラックス：光子／秒として測定される）。これは、特許請求の範囲の化合物がまた、血管新生を阻害するのに有効であり、それゆえ、例えば哺乳動物対象における癌の治療など、哺乳動物対象の抗血管新生治療において使用され得ることを証明している。

本研究で提示されたデータは、ＡＭＤに関連した血管新生促進ＶＥＧＦ媒介性ＣＮＶを低下させる低分子量化合物阻害剤のための新規標的として、ＳＲＰＫ１を示唆している。さらに、我々は、本発明の化合物が、マウスにおいて局所投与後にＣＮＶを低下させ、注射した場合にマウスにおける腫瘍増殖を低下させるのに有効であることを示している。

リファレンス
Ｂｒｅｓｓｌｅｒ， Ｓ．， Ｂｒｅｓｓｌｅｒ， Ｎ．Ｍ， Ｃｌｅｍｏｎｓ， Ｔ．， Ｆｅｒｒｉｓ， Ｆ．Ｌ．， Ｍｉｌｔｏｎ， Ｒ．Ｃ， Ｋｌｉｅｎ． Ｒ．， Ｋｌｉｅｎ， Ｂ． ａｎｄ Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ Ｅｙｅ Ｄｉｓ Ｓｔｕｄｙ， Ｇ． （２００４） ’Ｏｃｕｌａｒ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ＡＭＤ ｉｎ ｔｈｅ ｆｅｌｌｏｗ ｅｙｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ＡＭＤ’， Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ４５， Ｕ９２４−Ｕ９２４．Ｆｅｒｒｉｓ， Ｆ．Ｌ．， Ｆｉｎｅ， Ｓ．Ｌ． ａｎｄ Ｈｙｍａｎ， Ｌ． （１９８４） ’Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ ｄｕｅ ｔｏ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ’， Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， １０２（１１）， １６４０− １６４２．Ｐａｔｚ， Ａ．， Ｆｉｎｅ， Ｓ．Ｌ．， Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ， Ｄ． ａｎｄ Ｙａｓｓｕｒ， Ｙ． （１９７７） ’Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｍａｃｕｌａ − ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ’， Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ， ８３（３）， ４６８−４７５．Ｆｉｎｅ， Ｓ．Ｌ．， Ｂｅｒｇｅｒ， Ｊ．Ｗ．， Ｍａｇｕｉｒｅ． Ｍ．Ｇ． ａｎｄ Ｈｏ， Ａ．Ｃ． （２０００） ’Ｄｒｕｇ ｔｈｅｒａｐｙ： Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ’， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ３４２（７）， ４８３−４９２．Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏ， Ｐ．Ａ．， Ｎｇｕｙｅｎ， Ｑ．Ｄ．， Ｓｈａｈ， Ｓ．Ｍ．， Ｋｌｅｉｎ， Ｍ．Ｌ．， Ｈｏｌｚ， Ｅ．， Ｆｒａｎｋ， Ｒ．Ｎ．， Ｓａｐｅｒｓｔｅｉｎ， Ｄ．Ａ．， Ｇｕｐｔａ， Ａ．， Ｓｔｏｕｔ． Ｊ．Ｔ．， Ｍａｃｋｏ， Ｊ．， ＤｉＢａｒｔｏｌｏｍｅｏ， Ｒ． ａｎｄ Ｗｅｉ， Ｌ．Ｌ． （２００６） ’Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ−ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ： Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｐｈａｓｅ Ｉ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ’， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ， １７（２）， １６７−１７６．Ｄｖｏｒａｋ， Ｈ．Ｆ．， Ｂｒｏｗｎ， Ｌ．Ｆ．， Ｄｅｔｍａｒ， Ｍ． ａｎｄ Ｄｖｏｒａｋ， Ａ．Ｍ． （１９９５） ’Ｖａｓｃｕｌａｒ−ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｆａｃｔｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ−ｆａｃｔｏｒ， ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ， ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ’， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， １４６（５）， １０２９−１０３９．Ｄ’Ａｍｏｒｅ， Ｐ．Ａ．， Ｓｈｉｍａ， Ｄ．Ｔ．， Ａｄａｍｉｓ， Ａ．Ｐ．， Ｙｅｏ， Ｋ．Ｔ．， Ｙｅｏ， Ｔ．Ｋ．， Ａｌｌｅｎｄｅ， Ｒ． ａｎｄ Ｆｏｌｋｍａｎ， Ｊ． （１９９４） ’ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ／ＶＰＦ ａｎｄ ｂａｓｉｃ ＦＧＦ ｂｙ ｈｙｐｏｘｉａ’， Ｆａｓｅｂ Ｊｏｕｒｎａｌ， ８（４）， Ａ１１６−Ａ１１６．Ｓｐｉｌｓｂｕｒｙ， Ｋ．， Ｇａｒｒｅｔｔ， Ｋ．Ｌ．， Ｓｈｅｎ． Ｗ．Ｙ．， Ｃｏｎｓｔａｂｌｅ， Ｉ．Ｊ． ａｎｄ Ｒａｋｏｃｚｙ， Ｐ．Ｅ． （２０００） ’Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ （ＶＥＧＦ） ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ’， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， １５７（１）， １３５−１４４．Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｄ．Ｈ．， Ｍｕｌｌｉｎｓ， Ｒ．Ｆ．， Ｈａｇｅｍａｎ， Ｇ．Ｓ． ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ． Ｌ．Ｖ． （２００２） ’Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ − Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｌｏｃａｌ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｓｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ａｇｉｎｇ ｅｙｅ’， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， １３４（３）， ４１１−４３１．Ｄａｓ， Ａ．， Ｆａｎｓｌｏｗ， Ｗ．， Ｃｅｒｒｅｔｔｉ， Ｄ．， Ｗａｒｒｅｎ， Ｅ．， Ｔａｌａｒｉｃｏ， Ｎ． ａｎｄ ＭｃＧｕｉｒｅ， Ｐ． （２００３） ’Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ／Ｔｅｋ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ＭＭＰ−９ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ’， Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ， ８３（１１）， １６３７−１６４５．Ｌｅｕｎｇ， Ｄ． Ｗ．， Ｃａｃｈｉａｎｅｓ． Ｇ．， Ｋｕａｎｇ， Ｗ．Ｊ．， Ｇｏｅｄｄｅｌ， Ｄ．Ｖ． ａｎｄ Ｆｅｒｒａｒａ， Ｎ． （１９８９） ’Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ−ｆａｃｔｏｒ ｉｓ ａ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｍｉｔｏｇｅｎ’， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４６（４９３５）， １３０６−１３０９．Ｊｉｎｇｊｉｎｇ， Ｌ，．， Ｘｕｅ， Ｙ．， Ａｇａｒｗａｌ， Ｎ． ａｎｄ Ｒｏｑｕｅ， Ｒ．Ｓ． （１９９９） ’Ｈｕｍａｎ Ｍｕｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓ ＶＥＧＦ１８３， ａ ｎｏｖｅｌ ｓｐｌｉｃｅｄ ｖａｒｉａｎｔ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ’， Ｉｏｖｓ， ４０（３）， ７５２−７５９．Ｈｏｕｃｋ， Ｋ．Ａ．， Ｆｅｒｒａｒａ， Ｎ．， Ｗｉｎｅｒ， Ｊ．， Ｃａｃｈｉａｎｅｓ， Ｇ．， Ｌｉ， Ｂ． ａｎｄ Ｌｅｕｎｇ， Ｄ．Ｗ． （１９９１） ’Ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ−ｆａｃｔｏｒ ｆａｍｉｌｙ − ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ４ｔｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｏｆ ｒｎａ’， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ， ５（１２）， １８０６−１８１４．Ｍｉｎｅｕｒ， Ｐ．， Ｃｏｌｉｇｅ， Ａ．Ｃ， Ｄｅｒｏａｎｎｅ， Ｃ．Ｆ．， Ｄｕｂａｉｌ， Ｊ．， Ｋｅｓｔｅｌｏｏｔ， Ｆ．， Ｈａｂｒａｋｅｎ， Ｙ．， Ｎｏｅｌ， Ａ．， Ｖｏｏ， Ｓ．， Ｗａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ， Ｊ．， Ｌａｐｉｅｒｅ， Ｃ．Ｍ．， Ｎｕｓｇｅｎｓ， Ｂ．Ｖ． ａｎｄ Ｌａｍｂｅｒｔ， Ｃ．Ａ． （２００７） ’Ｎｅｗｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＶＥＧＦ−Ａ ｉｓｏｆｏｒｍ ＶＥＧＦ ＩＩＩ ｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｇｅｎｏｔｏｘｉｃ ａｇｅｎｔｓ’． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ， １７９（６）， １２６１−１２７３．Ｔｉｓｃｈｅｒ， Ｅ．， Ｇｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｚ， Ｄ．， Ｍｉｔｃｈｅｌｌ， Ｒ．， Ｓｉｌｖａ， Ｍ．， Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ， Ｊ．， Ｌａｕ， Ｋ．， Ｃｒｉｓｐ， Ｔ．， Ｆｉｄｄｅｓ， Ｊ．Ｃ． ａｎｄ Ａｂｒａｈａｍ， Ｊ．Ａ． （１９８９） ’Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ−ｆａｃｔｏｒ − ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ−ｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ’， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ， １６５（３）， １１９８−１２０６．Ｎｅｕｆｅｌｄ， Ｇ．， Ｃｏｈｅｎ， Ｔ．， Ｇｅｎｇｒｉｎｏｖｉｔｃｈ， Ｓ． ａｎｄ Ｐｏｌｔｏｒａｋ， Ｚ． （１９９９） ’Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ （ＶＥＧＦ） ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ’， Ｆａｓｅｂ Ｊｏｕｒｎａｌ， １３（１）， ９−２２．Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ．， Ｃｕｉ， Ｔ．Ｇ．， Ｄｏｕｇｈｔｙ， Ｊ．Ｍ．， Ｗｉｎｋｌｅｒ， Ｍ．， Ｓｕｇｉｏｎｏ， Ｍ．， Ｓｈｉｅｌｄｓ， Ｊ．Ｄ．， Ｐｅａｔ， Ｄ．， Ｇｉｌｌａｔｔ， Ｄ． ａｎｄ Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ． （２００２） ’ＶＥＧＦ（１６５）ｂ， ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｓｐｌｉｃｅ ｖａｒｉａｎｔ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ， ｉｓ ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ’． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ６２（１４）． ４１２３−４１３１．Ｗｏｏｌａｒｄ， Ｊ．， Ｗａｎｇ． Ｗ．Ｙ．， Ｂｅｖａｎ， Ｈ．Ｓ．， Ｑｉｕ， Ｙ．． Ｍｏｒｂｉｄｅｌｌｉ， Ｌ．， Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ−Ｊｏｎｅｓ， Ｒ．Ｏ．， Ｃｕｉ， Ｔ．Ｇ．， Ｓｕｇｉｏｎｏ， Ｍ．， Ｗａｉｎｅ， Ｅ．， Ｐｅｒｒｉｎ， Ｒ．． Ｆｏｓｔｅｒ， Ｒ．， Ｄｉｇｂｙ−Ｂｅｌｌ， Ｊ．， Ｓｈｉｅｌｄｓ， Ｊ．Ｄ．， Ｗｈｉｔｔｌｅｓ， Ｃ．Ｅ．， Ｍｕｓｈｅｎｓ． Ｒ．Ｅ．， Ｇｉｌｌａｔｔ， Ｄ．Ａ．， Ｚｉｃｈｅ， Ｍ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ． ａｎｄ Ｂａｔｅｓ． Ｄ．Ｏ． （２００４） ’ ＶＥＧＦ（１６５）ｂ， ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｔｙ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｓｐｌｉｃｅ ｖａｒｉａｎｔ： Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ， ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ’． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ６４（２１）， ７８２２−７８３５．Ｐｅｒｒｉｎ， Ｒ．Ｍ．， Ｋｏｎｏｐａｔｓｋａｙａ， Ｏ．， Ｑｉｕ， Ｙ．， Ｈａｒｐｅｒ． Ｓ．， Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． ａｎｄ Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ， Ａ．Ｊ． （２００５） ’Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｓｗｉｔｃｈ ｉｎ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆｒｏｍ ａｎｔｉ− ｔｏ ｐｒｏ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ’， Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ４８（１１）， ２４２２−２４２７．Ｖａｒｅｙ， Ａ．Ｈ．Ｒ．， Ｒｅｎｎｅｌ． Ｅ．Ｓ．， Ｑｉｕ， Ｙ．， Ｂｅｖａｎ， Ｈ．Ｓ．， Ｐｅｒｒｉｎ， Ｒ．Ｍ．， Ｒａｆｆｙ， Ｓ．， Ｄｉｘｏｎ， Ａ．Ｒ．， Ｐａｒａｓｋｅｖａ， Ｃ， Ｚａｃｃｈｅｏ， Ｏ．， Ｈａｓｓａｎ， Ａ．Ｂ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ． ａｎｄ Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． （２００８） ’ＶＥＧＦ（１６５）ｂ， ａｎ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｉｉｉｃ ＶＥＧＦ−Ａ ｉｓｏｆｏｒｍ， ｂｉｎｄｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ： ｂａｌａｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏ− ａｎｄ





ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ＶＥＧＦ−Ａ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｈａｓ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ’， Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ， ９８（８）， １３６６−１３７９．Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ−Ｊｏｎｅｓ， Ｒ．Ｏ．， Ｄｕｎｎ， Ｄ．Ｂ．Ａ．， Ｑｉｕ， Ｙ．， Ｖａｒｅｙ， Ａ．Ｈ．Ｒ．， Ｏｒｌａｎｄｏ． Ａ．， Ｒｉｇｂｙ， Ｈ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ． ａｎｄ Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． （２００７） ’Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ（ｘｘｘ）ｂ， ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ＶＥＧＦ， ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ’， Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ， ９７（２）， ２２３−２３０．Ｈｕａ， Ｊ．， Ｓｐｅｅ． Ｃ．， Ｋａｓｅ， Ｓ．， Ｒｅｎｎｅｌ， Ｅ．Ｓ．， Ｍａｇｎｕｓｓｅｎ， Ａ．Ｌ．， Ｑｉｕ． Ｙ．， Ｖａｒｅｙ， Ａ．， Ｄｈａｙａｄｅ， Ｓ．， Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ， Ａ．Ｊ．， Ｈａｒｐｅｒ． Ｓ．Ｊ．． Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． ａｎｄ Ｈｉｎｔｏｎ， Ｄ．Ｒ． （２０１０） ’Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ ＶＥＧＦ（１６５）ｂ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ’， Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ５１（８）， ４２８２−４２８８．Ｍａｇｎｕｓｓｅｎ， Ａ．Ｌ．， Ｒｅｎｎｅｌ， Ｅ．Ｓ．， Ｈｕａ， Ｊ．， Ｂｅｖａｎ， Ｈ．Ｓ．， Ｌｏｎｇ， Ｎ．Ｂ．， Ｌｅｈｒｌｉｎｇ， Ｃ， Ｇａｍｍｏｎｓ， Ｍ， Ｆｌｏｅｇｅ， Ｊ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ， Ａｇｏｓｔｉｎｉ， Ｈ．Ｔ．， Ｂａｔｅｓ． Ｄ．Ｏ． ａｎｄ Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ， Ａ．Ｊ． （２０１０） ’ＶＥＧＦ−Ａ（１６５）ｂ Ｉｓ Ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｉｎ ｔｈｅ Ｒｅｔｉｎａ’， Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ５１（８）， ４２７３−４２８１．Ｇｒａｇｏｕｄａｓ， Ｅ．Ｓ． （２００４） ’ＶＥＧＦ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｏｃｕｌａｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ−１ （ＶＩＳＩＯＮ−１）： Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｐｈａｓｅ ＩＩ／ＩＩＩ Ｍａｃｕｇｅｎ （ＴＭ） （Ｐｅｇａｐｔａｎｉｂ ｓｏｄｉｕｍ） ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ’， Ｉｏｖｓ， ４５（Ｓｕｐｐｌ．１）， Ｕ９２４．Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ． Ｐ．Ｊ．， Ｒｉｃｈ， Ｒ．Ｍ． ａｎｄ Ｌａｌｗａｎｉ， Ｇ．Ａ． （２００６） ’Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ： Ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ’， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ｃｌｉｎｉｃｓ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ， １９（３）， ３６１−７２．Ｂｒｏｗｎ， Ｄ．Ｍ．． Ｋａｉｓｅｒ， Ｐ．Ｋ．， Ｍｉｃｈｅｌｓ， Ｍ．， Ｓｏｕｂｒａｎｅ， Ｇ．， Ｈｅｉｅｒ， Ｊ．Ｓ．， Ｋｉｍ， Ｒ．Ｙ．， Ｓｙ， Ｊ．Ｐ．， Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ， Ｓ． ａｎｄ Ｇｒｐ． Ａ．Ｓ． （２００６） ’Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ ｖｅｒｓｕｓ ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ ｆｏｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ’， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ３５５（１４）， １４３２−１４４４．Ｂｒｏｗｎ， Ｄ．Ｍ．， Ｍｉｃｈｅｌｓ， Ｍ， Ｋａｉｓｅｒ， Ｐ．Ｋ．， Ｈｅｉｅｒ， Ｊ．Ｓ．， Ｓｙ， Ｊ．Ｐ． ａｎｄ Ｉａｎｃｈｕｌｅｖ， Ｔ． （２００９） ’Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ ｖｅｒｓｕｓ Ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ： Ｔｗｏ−Ｙｅａｒ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＮＣＨＯＲ Ｓｔｕｄｙ’， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， １１６（１）． ５７−６５．Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｅｒｆｕｒｔｈ， Ｕ．， Ｅｌｄｅｍ， Ｂ．， Ｇｕｙｍｅｒ， Ｒ．， Ｋｏｒｏｂｅｌｎｉｋ， Ｊ．−Ｆ．， Ｓｃｈｌｉｎｇｅｍａｎｎ， Ｒ．Ｏ．， Ａｘｅｒ−Ｓｉｅｇｅｌ， Ｒ．， Ｗｉｅｄｅｍａｎｎ， Ｐ．， Ｓｉｍａｄｅｒ， Ｃ， Ｇｅｋｋｉｅｖａ， Ｍ．， Ｗｅｉｃｈｓｅｌｂｅｒｇｅｒ， Ａ． ａｎｄ Ｇｒｐ． Ｅ．Ｓ． （２０１１） ’Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｍｏｎｔｈｌｙ ｖｅｒｓｕｓ Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ： Ｔｈｅ ＥＸＣＩＴＥ Ｓｔｕｄｙ’， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， １１８（５）．Ｇｏｏｄ， Ｔ．Ｊ． ａｎｄ Ｋａｈｏｏｋ， Ｍ．Ｙ． （２０１０） ’Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｇｌａｕｃｏｍａ’， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｓ， １４（６）， ６４７−６５４．Ｊａｇｅｒ， Ｒ．Ｄ．， Ａｉｅｌｌｏ， Ｌ．Ｐ．， Ｐａｔｅｌ， Ｓ．Ｃ． ａｎｄ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ． Ｅ．Ｔ． （２００４） ’Ｒｉｓｋｓ ｏｆ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ： Ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｒｅｖｉｅｗ’， Ｒｅｔｉｎａ−ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒｅｔｉｎａｌ ａｎｄ Ｖｉｔｒｅｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ， ２４（５）， ６７６−６９８．Ｎｏｗａｋ， Ｄ．Ｇ．， Ａｍｉｎ， Ｅ．Ｍ．， Ｒｅｎｎｅｌ， Ｅ．Ｓ．， Ｈｏａｒｅａｕ−Ａｖｅｉｌｌａ， Ｃ， Ｇａｍｍｏｎｓ， Ｍ．， Ｄａｍｏｄｏｒａｎ， Ｇ．， Ｈａｇｉｗａｒａ， Ｍ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ．， Ｗｏｏｌａｒｄ， Ｊ， Ｌａｄｏｍｅｒｙ， Ｍ．Ｒ． ａｎｄ Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． （２０１０） ’Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ （ＶＥＧＦ） Ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆｒｏｍ Ｐｒｏ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｏ Ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ Ｉｓｏｆｏｒｍｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ’， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２８５（８）． ５５３２−５５４０．Ａｍｉｎ， Ｅ．Ｍ．， Ｏｌｔｅａｎ， Ｓ．， Ｈｕａ， Ｊ．， Ｇａｍｍｏｎｓ， Ｍ．Ｖ．Ｒ．， Ｈａｍｄｏｌｌａｈ−Ｚａｄｅｈ． Ｍ．， Ｗｅｌｓｈ， Ｇ．Ｉ．， Ｃｈｅｕｎｇ， Ｍ．−Ｋ．， Ｎｉ， Ｌ．， Ｋａｓｅ， Ｓ．， Ｒｅｎｎｅ， Ｅ．Ｓ．， Ｓｙｍｏｎｄｓ， Ｋ．Ｅ．， Ｎｏｗａｋ， Ｄ．Ｇ．， Ｒｏｙｅｒ−Ｐｏｋｏｒａ， Ｂ．， Ｓａｌｅｅｍ， Ｍ．Ａ．， Ｈａｇｉｗａｒａ， Ｍ．， Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ， Ｖ．Ａ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ．， Ｈｉｎｔｏｎ， Ｄ．Ｒ．， Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． ａｎｄ Ｌａｄｏｍｅｒｙ， Ｍ．Ｒ． （２０１１） ’ＷＴ１ Ｍｕｔａｎｔｓ Ｒｅｖｅａｌ ＳＲＰＫ１ ｔｏ Ｂｅ ａ Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｔａｒｇｅｔ ｂｙ Ａｌｔｅｒｉｎｇ ＶＥＧＦ Ｓｐｌｉｃｉｎｇ’， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ， ２０（６）， ７６８−７８０．Ｓａｎｆｏｒｄ， Ｊ．Ｒ．， Ｅｌｌｉｓ， Ｊ．Ｄ．， Ｃａｚａｌｌａ， Ｄ． ａｎｄ Ｃａｃｅｒｅｓ， Ｊ．Ｆ． （２００５ａ） ’Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ａｆｆｅｃｔｓ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｄ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｆｕｎｃｔｏｎｓ ｏｆ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ２／ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ’， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ， １０２（４２）， １５０４２−１５０４７．Ｎｏｗａｋ， Ｄ．Ｇ．． Ｗｏｏｌａｒｄ， Ｊ．， Ａｍｉｎ， Ｅ．Ｍ．， Ｋｏｎｏｐａｔｓｋａｙａ， Ｏ．， Ｓａｌｅｅｍ， Ｍ．Ａ．， Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ， Ａ．Ｊ．， Ｌａｄｏｍｅｒｙ， Ｍ．Ｒ．． Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ． ａｎｄ Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． （２００８） ’Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏ− ａｎｄ ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ＶＥＧＦ ｉｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ’， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， １２１（２０）， ３４８７−３４９５．Ｄｏｕｋａｓ， Ｊ．， Ｍａｈｅｓｈ， Ｓ．， Ｕｍｅｄａ， Ｎ．， Ｋａｃｈｉ， Ｓ．， Ａｋｉｙａｍａ， Ｈ．， Ｙｏｋｏｉ， Ｋ．． Ｃａｏ， Ｊ．， Ｃｈｅｎ， Ｚ．， Ｄｅｌｌａｍａｒｙ， Ｌ．， Ｔａｍ， Ｂ．， Ｒａｃａｎｅｌｌｉ−Ｌａｙｔｏｎ， Ａ．， Ｈｏｏｄ， Ｊ．， Ｍａｒｔｉｎ， Ｍ．， Ｎｏｒｏｎｈａ， Ｇ．， Ｓｏｌｌ， Ｒ． ａｎｄ Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏ， Ｐ．Ａ． （２００８） ’Ｔｏｐｉｃａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉ−ｔａｒｇｅｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｅｄｅｍａ’， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２１６（１）， ２９−３７．Ｆｕｋｕｈａｒａ， Ｔ．， Ｈｏｓｏｙａ， Ｔ．， Ｓｈｉｍｉｚｕ， Ｓ．， Ｓｕｍｉ， Ｋ．， Ｏｓｈｉｒｏ， Ｔ．， Ｙｏｓｈｉｎａｋａ， Ｙ．， Ｓｕｚｕｋｉ， Ｍ．， Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｎ．， Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ， Ｌ．Ａ． ａｎｄ Ｈａｇｉｗａｒａ， Ｍ． （２００６） ’Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｏｓｔ ＳＲ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ＲＮＡ−ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ ｄｕｒｉｎｇ ｖｉｒａｌ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ’， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ， １０３（３０）， １１３２９−１１３３３．Ｒｅｎｎｅｌ， Ｅ．Ｓ．， Ｒｅｇｕｌａ， Ｊ．Ｔ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ．， Ｔｈｏｍａｓ， Ｍ， Ｋｌｅｉｎ， Ｃ． ａｎｄ Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． （２０１１） ’Ａ Ｈｕｍａｎ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｏ Ａｎｇ−２ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｏｃｕｌａｒ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ’， Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ， １８（７）．Ａｕｂｏｌ， Ｂ．Ｅ．， Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ， Ｓ．， Ｎｇｏ， Ｊ．， Ｓｈａｆｆｅｒ， Ｊ．， Ｎｏｌｅｎ， Ｂ．， Ｆｕ， Ｘ．Ｄ．， Ｇｈｏｓｈ， Ｇ． ａｎｄ Ａｄａｍｓ， Ｊ．Ａ． （２００３） ’Ｐｒｏｃｅｓｓｉｖｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ／ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ２’， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ， １００（２２）， １２６０１−１２６０６．Ｖｅｌａｚｑｕｅｚ−Ｄｏｎｅｓ， Ａ．， Ｈａ





ｇｏｐｉａｎ， Ｊ．Ｃ， Ｍａ， Ｃ．Ｔ．， Ｚｈｏｎｇ， Ｘ．Ｙ．， Ｚｈｏｕ， Ｈ．Ｌ．， Ｇｈｏｓｈ， Ｇ．， Ｆｕ， Ｘ．Ｄ． ａｎｄ Ａｄａｍｓ， Ｊ．Ａ． （２００５） ’Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃ ａｎｄ ｋｉｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＡＳＦ／ＳＦ２ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＳＲＰＫ１ ａｎｄ Ｃｌｋ／Ｓｔｙ’， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２８０（５０）， ４１７６１−４１７６８．Ｎｇｏ， Ｊ．Ｃ．Ｋ．， Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ， Ｓ．， Ｄｉｎｇ， Ｊ．Ｈ．， Ｖｅｌａｚｑｕｅｚ−Ｄｏｎｅｓ， Ａ．， Ｎｏｌｅｎ， Ｂ．， Ａｕｂｏｌ， Ｂ．Ｅ．， Ａｄａｍｓ， Ｊ．Ａ．， Ｆｕ， Ｘ．Ｄ． ａｎｄ Ｇｈｏｓｈ， Ｇ． （２００５） ’Ｉｎｔｅｒｐｌａｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ＳＲＰＫ ａｎｄ Ｃｌｋ／Ｓｔｙ ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ＡＳＦ／ＳＦ２ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ａ ｄｏｃｋｉｎｇ ｍｏｔｉｆ ｉｎ ＳＦ／ＳＦ２’， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ， ２０（１）， ７７−８９．Ｘｕ， Ｊ．， Ｄｏｕ， Ｔ．． Ｌｉｕ， Ｃ， Ｆｕ， Ｍ．， Ｈｕａｎｇ， Ｙ．， Ｇｕ， Ｓ．， Ｚｈｏｕ， Ｙ． ａｎｄ Ｘｉｅ， Ｙ． （２０１１） ’Ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｅｘｏｎｓ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ａ’， Ｇｅｎｅ， ４８７（２）．Ｃａｉｒｅｓ， Ｋ．Ｃ， ｄｅ Ａｖｉｌａ， Ｊ．Ｍ．， Ｃｕｐｐ， Ａ．Ｓ． ａｎｄ ＭｃＬｅａｎ， Ｄ．Ｊ． （２０１２） ’ＶＥＧＦＡ Ｆａｍｉｌｙ Ｉｓｏｆｏｒｍｓ Ｒｅｇｕｌａｔｅ Ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｉｎ Ｖｉｖｏ’， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ， １５３（２）．Ｚｈａｏ， Ｍ， Ｓｈｉ， Ｘ．， Ｌｉａｎｇ， Ｊ．， Ｍｉａｏ， Ｙ．， Ｘｉｅ， Ｗ．， Ｚｈａｎｇ， Ｙ． ａｎｄ Ｌｉ， Ｘ． （２０１１） ’Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏ− ａｎｄ ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ＶＥＧＦ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｏｘｙｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ’， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ９３（６）， ９２１−９２６．Ｈａｒｒｉｓ， Ｓ．， Ｃｒａｚｅ， Ｍ．， Ｎｅｗｔｏｎ， Ｊ．， Ｆｉｓｈｅｒ， Ｍ．， Ｓｈｉｍａ， Ｄ．Ｔ．， Ｔｏｚｅｒ， Ｇ．Ｍ． ａｎｄ Ｋａｎｔｈｏｕ， Ｃ． （２０１２） ’Ｄｏ Ａｎｔｉ− Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ＶＥＧＦ （ＶＥＧＦ_ＸＸＸｂ） Ｉｓｏｆｏｒｍｓ Ｅｘｉｓｔ？ Ａ Ｃａｕｔｉｏｎａｒｙ Ｔａｌｅ’， Ｐｌｏｓ Ｏｎｅ， ７（５）．ＭｃＦｅｅ， Ｒ．Ｍ．， Ｒｏｚｅｌｌ， Ｔ．Ｇ． ａｎｄ Ｃｕｐｐ， Ａ．Ｓ． （２０１２） ’Ｔｈｅ ｂａｌａｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ＶＥＧＦＡ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ’， Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ３４９（３）．Ｉｓｈｉｄａ， Ｓ．， Ｕｓｕｉ， Ｔ．， Ｙａｍａｓｈｉｒｏ， Ｋ．， Ｋａｊｉ， Ｙ．， Ａｍａｎｏ， Ｓ．， Ｏｇｕｒａ， Ｙ．， Ｈｉｄａ， Ｔ．， Ｏｇｕｃｈｉ， Ｙ．， Ａｍｂａｔｉ， Ｊ．， Ｍｉｌｌｅｒ， Ｊ．Ｗ， Ｇｒａｇｏｕｄａｓ， Ｅ．Ｓ．， Ｎｇ， Ｙ．Ｓ．， Ｄ’Ａｍｏｒｅ， Ｐ．Ａ．， Ｓｈｉｍａ， Ｄ．Ｔ． ａｎｄ Ａｄａｍｉｓ， Ａ．Ｐ． （２００３） ’ＶＥＧＦ（_１６４）−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ， ｂｕｔ ｎｏｔ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ， ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ’， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， １９８（３）， ４８３−４８９．Ｇｅｒｏｓｋｉ， Ｄ．Ｈ． ａｎｄ Ｅｄｅｌｈａｕｓｅｒ， Ｈ．Ｆ． （２０００） ’Ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｆｏｒ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｅｙｅ ｄｉｓｅａｓｅ’， Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ４１（５）， ９６１−９６４．Ｋｅｙｔ， Ｂ．Ａ．， Ｎｇｕｙｅｎ， Ｈ．Ｖ．， Ｂｅｒｌｅａｕ， Ｌ．Ｔ．， Ｄｕａｒｔｅ， Ｃ．Ｍ．， Ｐａｒｋ， Ｊ．， Ｃｈｅｎ， Ｈ． ａｎｄ Ｆｅｒｒａｒａ， Ｎ． （１９９６） ’Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｆｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ＫＤＲ ａｎｄ ＦＬＴ−１ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ − Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＶＥＧＦ ｖａｒｉａｎｔｓ ｂｙ ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ’， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２７１（１０）， ５６３８−５６４６．Ｓｔａｌｍａｎｓ， Ｉ．， Ｎｇ， Ｙ．Ｓ．， Ｒｏｈａｎ， Ｒ．， Ｆｒｕｔｔｉｇｅｒ， Ｍ．， Ｂｏｕｃｈｅ， Ａ．， Ｙｕｃｅ， Ａ．， Ｆｕｊｉｓａｗａ， Ｈ．， Ｈｅｒｍａｎｓ， Ｂ．， Ｓｈａｎｉ， Ｍ．， Ｊａｎｓｅｎ， Ｓ．， Ｈｉｃｋｌｉｎ， Ｄ．， Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｄ．Ｊ．， Ｇａｒｄｉｎｅｒ， Ｔ．， Ｈａｍｍｅｓ， Ｈ．Ｐ．， Ｍｏｏｎｓ， Ｌ．， Ｄｅｗｅｒｃｈｉｎ， Ｍ．， Ｃｏｌｌｅｎ， Ｄ．， Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ， Ｐ． ａｎｄ Ｄ’Ａｍｏｒｅ， Ｐ．Ａ． （２００２） ’Ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ ａｎｄ ｖｅｎｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎｉｎｇ ｉｎ ｒｅｔｉｎａｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＶＥＧＦ ｉｓｏｆｏｒｍｓ’， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ， １０９（３）．Ｇａｍｍｏｎｓ， Ｍ．Ｖ．． Ｄｉｃｋ， Ａ．Ｄ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ．， Ｂａｔｅｓ， Ｄ．Ｏ． （２０１３） ＳＲＰＫ１ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ＶＥＧＦ Ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｔｏ Ｒｅｄｕｃｅ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｒａｔ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ｏｆ Ｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ｖｏｌ．５４（８） ５７９７−５８０６．Ｇａｍｍｏｎｓ， Ｍ．Ｖ．， Ｆｅｄｏｒｏｖ， Ｏ．， Ｉｖｉｓｏｎ， Ｄ．， Ｄｕ， Ｃ， Ｃｌａｒｋ， Ｔ ．， Ｈｏｐｋｉｎｓ， Ｃ， Ｈａｇｉｗａｒａ， Ｍ．， Ｄｉｃｋ， Ａ．Ｄ．， Ｃｏｘ， Ｒ．， Ｈａｒｐｅｒ， Ｓ．Ｊ．， Ｈａｎｃｏｘ， Ｊ．Ｃ． ａｎｄ Ｂａｔｅｓ． Ｄ．Ｏ． （２０１３） Ｔｏｐｉｃａｌ Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ＳＲＰＫＩ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｒｅｄｕｃｅ Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｒｏｄｅｎｔ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｅｘｕｄａｔｉｖｅ ＡＭＤ Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ． ５４（９） ６０５２−６０６２．

Claims (17)

1. 式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む眼新生血管形成の用量依存もしくは局所治療または予防剤；
   
   
   ここで：
   Ｒ^１は１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アジド基、ヒドロキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルチオ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルスルホニル基、カルボキシル基、ホルミル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシカルボニル基、アシル基、アシルアミノ基、またはスルファモイル基を表し；
   Ｒ^２は水素原子、または１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基を表し；
   Ｒ^３は１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_６−１０アリール基、１つ以上の置換基を有していてもよい含窒素複素環、１つ以上の置換基を有していてもよい含酸素複素環、または１つ以上の置換基を有していてもよい縮合芳香族複素環を表し；
   Ｒ^４は水素原子またはハロゲン原子を表し；
   Ｑは−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｏ）−、またはＣ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｓ）−を表し；ならびに
   Ｗは１つ以上の置換基を有していてもよい１−ピペラジニル基を表す。
2. 用量依存および局所治療または予防剤である、請求項１に記載の眼新生血管形成の治療または予防剤。
3. 前記眼新生血管形成が、脈絡膜新生血管形成である、請求項１または２に記載の眼新生血管形成の治療または予防剤。
4. 前記眼新生血管形成が、網膜新生血管形成である、請求項１または２に記載の眼新生血管形成の治療または予防剤。
5. 式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物；
   
   ここで：
   Ｒ^１は１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基、臭素原子、塩素原子、ニトロ基、シアノ基、アジド基、ヒドロキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルチオ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルスルホニル基、カルボキシル基、ホルミル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシカルボニル基、アシル基、アシルアミノ基、またはスルファモイル基を表し；
   Ｒ^２は水素原子、または１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基を表し；
   Ｒ^３は１つ以上の置換基を有していてもよい含酸素複素環、または１つ以上の置換基を有していてもよい２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基を表し；
   Ｒ^４は水素原子またはハロゲン原子を表し；
   Ｑは−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｏ）−、またはＣ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｓ）−を表し；ならびに
   Ｗは１つ以上の置換基を有していてもよい１−ピペラジニル基を表す。
6. 式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは水和物を含む哺乳動物対象の抗血管新生治療剤；
   
   
   ここで：
   Ｒ^１は１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アジド基、ヒドロキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルチオ基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキルスルホニル基、カルボキシル基、ホルミル基、１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルコキシカルボニル基、アシル基、アシルアミノ基、またはスルファモイル基を表し；
   Ｒ^２は水素原子、または１つ以上の置換基を有していてもよいＣ_１−６アルキル基を表し；
   Ｒ^３は１つ以上の置換基を有していてもよい含酸素複素環、または１つ以上の置換基を有していてもよい２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基を表し；
   Ｒ^４は水素原子またはハロゲン原子を表し；
   Ｑは−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｏ）−、またはＣ（Ｏ）ＮＨＣ（Ｓ）−を表し；ならびに
   Ｗは１つ以上の置換基を有していてもよい１−ピペラジニル基を表す。
7. 請求項６で規定される化合物を含む、微小血管透過性亢進障害（ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）のための、またはＶＥＧＦ_ＸＸＸアイソフォームの血管新生促進透過性促進特性（ｐｒｏ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏ−ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）の制御のための、または増加した透過性の無い（ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ）上皮細胞生存の支援における、上皮濾過膜の開窓（ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎｓ）の性質の低下のための治療または予防剤。
8. 請求項６で規定される化合物を含む、神経障害（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ）および神経変性障害（ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）のための、またはインビボもしくはインビトロでの神経保護（ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）もしくは神経再生（ｎｅｕｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ）のための治療または予防剤。
9. 請求項６で規定される化合物を含む、ＶＥＧＦＲ２媒介性非炎症性疼痛（ＶＥＧＦＲ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｎｏｎ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐａｉｎ）の治療または予防剤。
10. 請求項６で規定される化合物を含む、子癇前症もしくはそれに関連する合併症を発症する雌性哺乳類（ｆｅｍａｌｅ ｍａｍｍａｌ）のリスク、または母体の子癇前症に関連した胎児もしくは新生児の不全を発症する雌性哺乳類の胎児のリスクの低下における使用のための治療または予防剤。
11. 請求項６に記載の式（Ｉ）の化合物、任意に１つ以上の他の活性成分および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
12. 請求項５に記載の式（Ｉ）の化合物、任意に１つ以上の他の活性成分および薬学的に許
    容される担体を含む、眼内注射に適した形態の医薬組成物。
13. 請求項５に記載の式（Ｉ）の化合物、任意に１つ以上の他の活性成分および薬学的に許容される担体を含む、眼への局所投与に適した形態の医薬組成物。
14. Ｒ^１がトリフルオロメチル基を表す、請求項５に記載の化合物、または請求項１〜４もしくは６〜１０のいずれか１項に記載の治療もしくは予防剤、または請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
15. Ｒ^３が、含酸素複素環または２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基を表し、それらのそれぞれが１つ以上の置換基を有していてもよい、請求項１４に記載の化合物、治療もしくは予防剤、または医薬組成物。
16. Ｒ^３が、フェニル基または２−もしくは３−もしくは４−ピリジル基により置換された含酸素複素環を表す、請求項１５に記載の化合物、治療もしくは予防剤、または医薬組成物。
17. Ｗが、１−ピペラジニル基または４−メチル−１−ピペラジニル基または４−（ジメチルアミノ）エチル）−１−ピペラジニル基または４−（ジメチルアミノ）プロピル）−１−ピペラジニル基を表す、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の化合物、治療もしくは予防剤、または医薬組成物。