JP2018090642A - Ｈｔｌｖ−１関連脊髄症患者の治療方法および治療剤 - Google Patents

Abstract

【課題】本発明は、既存の治療薬とは異なる、新しいヒトＴ細胞白血病ウイルス−１関連脊髄症（ＨＡＭ）患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーの治療方法および治療剤を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、抗ヒトＣＣ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４（ＣＣＲ４）抗体を用いてＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを特徴とするヒトＴ細胞白血病ウイルス−１（ＨＴＬＶ−１）関連脊髄症（ＨＡＭ）患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）の治療方法および治療剤に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、抗ヒトＣＣ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４（ＣＣＲ４）抗体を用いてＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを特徴とするヒトＴ細胞白血病ウイルス−１（ＨＴＬＶ−１）関連脊髄症（ＨＡＭ）患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）の治療方法および治療剤に関する。

ヒトＴ細胞白血病ウイルス−１（ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ−１；ＨＴＬＶ−１、以下ＨＴＬＶ−１と略記する）は、ヒトＴ細胞に慢性的に感染するレトロウイルスである。ＨＴＬＶ−１感染患者のほとんどは、無症候性で健康に生活することができるが、感染者の約３−５％は、成人Ｔ細胞白血病（Ａｄｕｌｔ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ；ＡＴＬ、以下ＡＴＬと略記する）と呼ばれる進行性のＴ細胞性悪性腫瘍を発症し、一方、感染者の０．２５−３％はＨＴＬＶ−１関連脊髄症（ＨＴＬＶ−１ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｙｅｌｏｐａｔｈｙ；ＨＡＭ、以下ＨＡＭと略記する）／熱帯性痙性不全対麻痺症（ｔｒｏｐｉｃａｌ ｓｐａｓｔｉｃ ｐａｒａｐａｒｅｓｉｓ；ＴＳＰ、以下ＴＳＰと略記する）を発症することが知られている（非特許文献１−４）。

また、ＨＡＭ／ＴＳＰ患者の一部では、多臓器リンパ球浸潤によって特徴付けられる自己免疫疾患として、ブドウ膜炎、関節炎、多発性筋炎、シェーグレン症候群、感染性皮膚炎および肺胞炎などを発症する場合もある（非特許文献５）。

ＨＡＭ患者の末梢血液のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞は、健常人と比べてｆｏｒｋｈｅａｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ（Ｆｏｘｐ３）発現量が低下しており、通常ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞（制御性Ｔ細胞、Ｔｒｅｇと略記する）が有するＴ細胞増殖を制御する機能が低下していること、およびＨＴＬＶ−１ Ｔａｘ遺伝子によってＴｒｅｇ機能の低下が引き起こされていることが報告されている（非特許文献６）。

ＡＴＬ患者の末梢血液中には、健常人と比べてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４（ＣＣＲ４）＋Ｆｏｘｐ３ ｈｉｇｈのＴ細胞が増加している一方で、ＨＡＭ患者の末梢血液中には、健常人と比べてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ ｌｏｗのＴ細胞が増加していることが報告されている（特許文献１、非特許文献２）。また、末梢血中のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ ｌｏｗのＴ細胞数、ＨＴＬＶ−１プロウイルス量とＨＡＭの臨床症状の重症度とが相関することが報告されている（特許文献１）。

また、ＨＡＭ患者から抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いて分離したＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ ＣＣＲ４＋細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４−細胞と比べてＨＴＬＶ−１のウイルスＤＮＡ量が増加していること、およびインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＴ細胞がＨＡＭの病因細胞（Ｔ_ＨＡＭ）であり、ＨＡＭ患者の末梢血液中に該細胞が増加していることが報告されている（特許文献２、非特許文献７、８）。

臨床ＨＡＭ患者の治療においては、慢性炎症反応に対する治療として、プレドニゾロンなどのステロイド剤、抗ウイルス療法としてインターフェロンαを用いた治療が実施されている。

一方、ＣＣ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４（ＣＣＲ４）は、ＣＤ４＋Ｔ細胞に発現している７回膜貫通型の膜タンパク質であり、ｔｈｙｍｕｓ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（ＴＡＲＣ）／ＣＣＬ１７とｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（ＭＤＣ）／ＣＣＬ２２がリガンドとして知られている。ＣＣＲ４は、Ｔｈ２、Ｔｈ１７およびＴｒｅｇ細胞に発現していることが知られている。

抗ヒトＣＣＲ４抗体としては、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体（非特許文献９）、抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体（非特許文献１０）が知られており、抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体［一般名：Ｍｏｇａｍｕｌｉｚｕｍａｂ、商品名：Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）］は、難治性および再燃ＡＴＬ患者に対して認可されている。

日本国特開２０１０−１７１３０号公報 日本国特開２０１０−１００５７８号公報

Ｕｃｈｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，１９７７；５０：４８１−４９２． Ｇｅｓｓａｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｌａｎｃｅｔ，１９８５；２：４０７−４１０． Ｏｓａｍｅ ｅｔ ａｌ，Ｌａｎｃｅｔ，１９８６；１；１０３１−１０３２． Ｋａｐｌａｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｑｕｉｒ．Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉ．Ｓｙｎｄｒｏ．，１９９０；３：１０９６−１１０１． Ｎａｋａｇａｗａｗａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌ．，１９９５；１：５０−６１． Ｙａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，２００５；１１５：１３６１−１３６８． Ｙａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９；４：ｅ６５１７． Ａｒａｙａ ｅｔ ａｌ，Ｖｉｒｕｓｅｓ，２０１１；３：１５３２−１５４８． Ｎｉｗａ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００４；．６４：２１２７−２１３３． Ｉｓｈｉｉ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２０１０；１６：１５２０−１５３１．

前記したように、臨床ＨＡＭ患者の治療においては、慢性炎症反応に対する治療としてステロイド剤、抗ウイルス療法としてインターフェロンαを用いた治療が実施されているが、これら薬剤は効果が不十分で、また肥満、糖尿病、骨粗しょう症、緑内障、感染症、うつ状態などの有害事象が生じるため長期の治療が難しいという問題があり、ＨＡＭ患者の機能予後は極めて不良であるのが現状で、より効果や長期忍容性に優れ、患者の長期予後の改善に結びつく新規治療法開発の要望が強い。従って、本発明は、新しいＨＡＭの治療方法および治療剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、抗ヒトＣＣＲ４抗体がＨＡＭ患者およびＡＣのＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本願発明は、以下の（１）〜（１３）に関する。
（１）ヒトＴ細胞白血病ウイルス−１（ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ−１；ＨＴＬＶ−１、以下ＨＴＬＶ−１と略記する）関連脊髄症（ＨＴＬＶ−１ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｙｅｌｏｐａｔｈｙ；ＨＡＭ、以下、ＨＡＭと略記する）患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ａｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｃａｒｒｉｅｒｓ；ＡＣ、以下ＡＣと略記する）において、抗ヒトＣＣ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４（ＣＣＲ４）抗体を用いてＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを含む治療方法。
（２）ＨＡＭ患者のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることを含む、（１）に記載の治療方法。
（３）ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の細胞増殖を減少させることを含む、（１）または（２）に記載の治療方法。
（４）ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞がＣＣＲ４＋Ｔ細胞である、（１）〜（３）のいずれか１つに記載の治療方法。
（５）ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞が産生するサイトカインの発現量を減少させることを含む、（１）〜（４）のいずれか１つに記載の治療方法。
（６）サイトカインが、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン（ＩＬ）−２（ＩＬ−２）、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１７から選ばれるいずれか１つである、（５）に記載の治療方法。
（７）免疫抑制剤および抗ウイルス剤の少なくとも１つを併用することを含む（１）〜（６）のいずれか１つに記載の治療方法。
（８）免疫抑制剤がプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメサゾン、ベタメサゾン、アザチオプリン、シクロスポリン、タクロリムス、ＪＡＫ阻害剤およびＮＦκＢ阻害剤から選ばれるいずれか１つの免疫抑制剤である、（７）に記載の治療方法。
（９）低用量の免疫抑制剤を併用することを含む（１）〜（８）のいずれか１つに記載の治療方法。
（１０）ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体を有効成分として含むＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤。
（１１）ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体および副腎皮質ステロイドを有効成分として含むＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤。
（１２）低用量の副腎皮質ステロイドを長期に同時又は連続的に使用することを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体および副腎皮質ステロイドを有効成分として含むＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤。
（１３）抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いた下記（ｉ）〜（ｉｖ）から選ばれるいずれか１つの方法
（ｉ）ＨＡＭ患者およびＡＣのＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させる方法
（ｉｉ）ＨＡＭ患者およびＡＣのＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の細胞増殖を低下させる方法
（ｉｉｉ）ＨＡＭ患者およびＡＣのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させる方法
（ｉｖ）抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いたＨＡＭ患者のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞が産生するサイトカイン産生を抑制する方法

本発明によれば、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いてＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを含むＨＴＬＶ−１関連脊髄症（ＨＡＭ）の治療方法、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いてＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることを含むＨＡＭの治療方法、ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを特徴とする抗ヒトＣＣＲ４抗体を含むＨＡＭの治療剤、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることを特徴とする抗ヒトＣＣＲ４抗体を含むＨＡＭの治療剤を提供することができる。

本発明の治療方法および治療剤は、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いることにより、ＨＡＭ患者の末梢血単核球（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ；ＰＢＭＣ）、ＡＣのＰＢＭＣの自発的細胞増殖能を阻害すると共に、自発的な実細胞増殖を阻害し、実細胞数を減少させることが可能である。

また、本発明の治療方法および治療剤は、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いることにより、ＨＡＭ患者およびＡＣのＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させＰＢＭＣ中の細胞当たりのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることで、ＨＡＭ患者を治療することが出来るだけでなく、無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアについても同様にしてＨＡＭ発症前の積極的治療や予防に有用である。

本発明の治療方法および治療剤は、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いることにより、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣが産生する炎症性サイトカンの産生を抑制して、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞（Ｔ_ＨＡＭ）を阻害し、かつＴａｘ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を抑制することで慢性的炎症を阻害することができる。

本発明の治療方法および治療剤は、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いることにより、ＨＡＭ患者において慢性炎症所見が認められる脊髄領域において、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させた結果、髄液細胞の感染率を低下させ、かつＴｈ１サイトカインであるＩＦＮ−γの産生を抑制することで、細胞傷害性免疫反応を抑制することができる。

さらに、本発明の治療方法および治療剤は、低用量ステロイド剤との併用が可能であり、Ｔｈ１サイトカインであるＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−２の産生をより効果的に阻害して、ＨＡＭ患者の原因細胞であるＴ_ＨＡＭを阻害し、かつＴａｘ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を抑制することができる。

また、低用量ステロイド剤との併用により、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣによる炎症性サイトカンの産生を抑制することにより、より高い治療効果を得ることができる。低用量ステロイド剤の使用は、これまでよりもより長期的なステロイド剤を用いた治療に適用できる可能性があり、かつステロイド剤使用に伴う有害事象の発現頻度を減らすことができる。

図１Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる、ＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）由来ＰＢＭＣの自発的細胞増殖阻害効果を示す。縦軸に薬剤非添加の細胞増殖を１００％とした時の細胞増殖（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。縦軸は、各患者サンプルの細胞の^３Ｈ−チミジンの取り込みによる細胞増殖能を示す。 図１Ｂは、図１ＡのうちＨＡＭ患者９名のＰＢＭＣの^３Ｈ−チミジンの取り込みによる細胞増殖能を示す。縦軸に薬剤非添加の細胞増殖を１００％とした時の細胞増殖（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。 図１Ｃは、図１ＡのうちＨＡＭ患者９名のＰＢＭＣの実細胞数の細胞増殖（％）を示す。縦軸に薬剤非添加の実細胞数を１００％とした時の実細胞数（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。 図２Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる、ＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）由来ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果を示す。縦軸には、薬剤非添加時のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を１００％とした時の、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。各患者サンプルのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を示す。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図２Ｂは、図２ＡのうちＨＡＭ患者 ９名のＰＢＭＣ由来のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の平均値を示す。縦軸には、薬剤非添加時のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を１００％とした時の、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図２Ｃは、図２Ａの各患者サンプルのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を示す。縦軸には、各サンプルウェルのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を示し、横軸に添加した薬剤を示す。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図２Ｄは、図２ＣのＨＡＭ患者９名のＰＢＭＣ由来のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の平均値を示す。縦軸には、各サンプルウェルのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を示し、横軸に添加した薬剤を示す。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図２Ｅは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる、ＨＡＭ患者由来ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果を示す。縦軸には、薬剤非添加時のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を１００％とした時の、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。ＨＡＭ患者７名のＰＢＭＣ由来のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の平均値を示す。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図２Ｆは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）８名由来のＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果を示す。縦軸にＨＴＶＬ−１プロウイルスＤＮＡ量（コピー／１００細胞）、横軸に添加した薬剤を示す。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図３Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用による、ＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）由来ＰＢＭＣの自発的細胞増殖阻害効果を示す。各患者サンプルの自発的細胞増殖を示す。縦軸に、薬剤非添加の細胞増殖を１００％とした時の細胞増殖能（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。 図３Ｂは、図３ＡのＨＡＭ患者９名のサンプルの自発的細胞増殖の平均値を示す。抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用による、ＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）由来ＰＢＭＣの自発的細胞増殖阻害効果を示す。縦軸に、薬剤非添加の細胞増殖を１００％とした時の細胞増殖能（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。 図３Ｃは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用による、ＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）由来ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果を示す。各患者サンプルのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量、を示す。縦軸に、薬剤非添加のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を１００％とした時のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。 図３Ｄは、図３ＣのＨＡＭ患者９名のサンプルの平均値を示す。縦軸に、薬剤非添加のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を１００％とした時のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量（％）を示し、横軸に添加した薬剤を示す。 図３Ｅは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用による、ＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）由来ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果を示す。各患者サンプルの各ウェル当たりのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を示す。縦軸に、１ｗｅｌｌ当たりのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を示し、横軸に添加した薬剤を示す。 図３Ｆは、図３ＥのうちＨＡＭ患者９名のサンプルの平均値を示す。縦軸に、１ｗｅｌｌ当たりのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を示し、横軸に添加した薬剤を示す。 図４Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる、ＨＡＭ患者７名のＰＢＭＣのＩＦＮ−γ産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０単独の効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＩＦＮ−γ産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図４Ｂは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０、プレドニゾロンおよび該併用による、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣのＩＦＮ−γ産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＩＦＮ−γ産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図５Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる、ＨＡＭ患者５名のＰＢＭＣのＴＮＦ−α産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０単独の効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＴＮＦ−α産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図５Ｂは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０、プレドニゾロンおよび該併用による、ＨＡＭ患者９名のＰＢＭＣのＴＮＦ−α産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＴＮＦ−α産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図６Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる、ＨＡＭ患者７名のＰＢＭＣのＩＬ−６産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０単独の効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＩＬ−６産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図６Ｂは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０、プレドニゾロンおよび該併用による、ＨＡＭ患者９名のＰＢＭＣのＩＬ−６産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＩＬ−６産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図７Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる、ＨＡＭ患者５名のＰＢＭＣのＩＬ−２産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０単独の効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＩＬ−２産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図７Ｂは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０、プレドニゾロンおよび該併用による、ＨＡＭ患者７名のＰＢＭＣのＩＬ−２産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＩＬ−２産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図８Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンによる、ＨＡＭ患者７名のＰＢＭＣのＩＬ−１０産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０単独の効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＩＬ−１０産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図８Ｂは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０、プレドニゾロンおよび該併用による、ＨＡＭ患者９名のＰＢＭＣのＩＬ−１０産生抑制効果を示す。ＫＭ２７６０およびプレドニゾロンの併用効果を示す。縦軸に、薬剤非添加時の産生量を１００％とした時のＩＬ−１０産生量（％）、横軸に添加した薬剤および該濃度を示す。 図９Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０による、ＨＡＭ患者の髄液細胞のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果を示す。縦軸にＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量（コピー数／１００細胞）を、横軸に抗体濃度を示す。 図９Ｂは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０による、ＨＡＭ患者の髄液細胞からのＩＦＮ−γ産生抑制効果を示す。縦軸にＩＦＮ−γ産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸に抗体濃度を示す。実線−は、各群の平均値を示す。 図１０Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０および抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）によるＨＡＭ患者ＰＢＭＣの自発的細胞増殖阻害効果（Ｎ＝１２）を示す。縦軸に各患者由来ＰＢＭＣの^３Ｈ−チミジンの取り込みによる細胞増殖能（ｃｐｍ）を示し、横軸に抗体濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。抗体なしとの比較：ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ ＡＮＯＶＡ事後検定Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔ、同濃度の抗体間の比較：ｐａｉｒｅｄ ｔ−ｔｅｓｔにより有意差検定を実施した。１μｇ／ｍＬ プレドニゾロン（ＰＳＬ）をポジティブコントロールとした。 図１０Ｂは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０および抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）によるＨＡＭ患者ＰＢＭＣのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量阻害効果（Ｎ＝５）を示す。縦軸にＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量（コピー数／１００細胞）を、横軸に抗体濃度を示す。抗体なしとの比較：ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ ＡＮＯＶＡ事後検定Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔ、同濃度の抗体間の比較：ｐａｉｒｅｄ ｔ−ｔｅｓｔにより有意差検定を実施した。１μｇ／ｍＬ プレドニゾロン（ＰＳＬ）をポジティブコントロールとした。 図１１Ａは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０および抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）による、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣのＩＦＮ−γの産生抑制効果を示す。縦軸に、ＩＦＮ−γの産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸に抗体濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。１μｇ／ｍＬ プレドニゾロン（ＰＳＬ）をポジティブコントロールとした。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔ、同濃度の抗体間の比較：Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｍａｔｃｈｅｄ ｐａｉｒｓ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図１１Ｂは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０および抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）による、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣのＩＬ−６の産生抑制効果を示す。縦軸に、ＩＬ−６の産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸に抗体濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。１μｇ／ｍＬ プレドニゾロン（ＰＳＬ）をポジティブコントロールとした。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔ、同濃度の抗体間の比較：Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｍａｔｃｈｅｄ ｐａｉｒｓ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図１１Ｃは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０および抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）による、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣのＩＬ−２の産生抑制効果を示す。縦軸に、ＩＬ−２の産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸に抗体濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。１μｇ／ｍＬ プレドニゾロン（ＰＳＬ）をポジティブコントロールとした。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔ、同濃度の抗体間の比較：Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｍａｔｃｈｅｄ ｐａｉｒｓ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図１１Ｄは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０および抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）によるＩＬ−１０の産生抑制効果を示す。縦軸に、ＩＬ−１０の産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸に抗体濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。１μｇ／ｍＬ プレドニゾロン（ＰＳＬ）をポジティブコントロールとした。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔ、同濃度の抗体間の比較：Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｍａｔｃｈｅｄ ｐａｉｒｓ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。 図１１Ｅは、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０および抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）によるＴＮＦ−αの産生抑制効果を示す。縦軸に、ＴＮＦ−αの産生量（ｐｇ／ｍＬ）を、横軸に抗体濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。１μｇ／ｍＬ プレドニゾロン（ＰＳＬ）をポジティブコントロールとした。抗体なしとの比較：Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｔｅｓｔ事後検定Ｄｕｎｎ ｔｅｓｔ、同濃度の抗体間の比較：Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｍａｔｃｈｅｄ ｐａｉｒｓ ｔｅｓｔの有意差検定を実施した。

本発明は、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いてＨＴＬＶ−１関連脊髄症（以下、ＨＡＭと略記する）患者、および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（以下、ＡＣと略記することもある）のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを含む治療方法に関する。

ヒトＴ細胞白血病ウイルス−１（ＨＴＬＶ−１）は、ヒトＴ細胞に慢性的に感染するレトロウイルスである。ＨＴＬＶ−１感染患者のほとんどは無症候性で健康に生活することができるが、感染者の０．２５−３％はＨＴＬＶ−１関連脊髄症（ＨＡＭ）／熱帯性痙性不全対麻痺症（ＴＳＰ）を発症することが知られている。

ＨＡＭとは、末梢血ＨＴＬＶ−１感染Ｔ細胞が脊髄中へ浸潤することによって惹起される慢性脊髄炎の病理像を呈する難治性神経疾患である。ＨＴＬＶ−１の感染ルートとしては、母子間の母子垂直感染、並びに輸血および性交渉による水平感染が知られている。ＨＡＭの症状としては、胸髄の側索を走行する錐体路が犯されることによる歩行障害および排尿障害などが挙げられる。

本発明において、ＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（以下ＨＴＬＶ−１不顕性感染者とも言う）は、ＨＴＬＶ−１ウイルスに感染しており、健康正常人（健常人）と比べて末梢血液中または脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ； ＣＳＦ、以下、単に髄液、Ｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄともいう）に抗ＨＴＬＶ−１抗体が検出される。
本発明においてＨＡＭ患者は、ＡＣおよび健康正常人（健常人）と比べて、末梢血液中またはＣＳＦ中の抗ＨＴＬＶ−１抗体価の上昇、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量、ＨＴＬＶ−１ Ｔａｘ ｍＲＮＡ量の増加および活性化ＣＤ４＋細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞）の増加および、脊髄領域の炎症所見に伴う髄液中のｎｅｏｐｔｅｒｉｎ濃度の増加などが認められる。よって、無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーおよび健常人と区別される。

ＨＡＭ患者の重症度は、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量のＣＳＦ／末梢血液細胞比とＨＡＭ重症度が相関していることが知られている（Ｍａｔｓｕｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１０；５：３１０−３２５）ことから、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量のＣＳＦ／末梢血液細胞比によりＨＡＭ患者の重症度を診断することもできる。

更に、ＨＴＬＶ−１ Ｔａｘ ｍＲＮＡ量やＨＴＬＶ−１ Ｔａｘ ｍＲＮＡ量／ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量比が相関することからも重症度を確認することができる（Ｙａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００２；９９：８８−９４）。
本発明において無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーとは、ＨＴＬＶ−１ウイルス感染は成立しているが、臨床症状を認めない患者をいう。ＨＴＬＶ−１ウイルス感染は、患者の末梢血液中の抗ＨＴＬＶ−１抗体価の有無により判定することができる。

本発明の治療方法および治療剤のＨＴＬＶ−１感染細胞としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＣＲ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＴ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＴ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞などが挙げられる。

好ましくは、ＣＣＲ４＋Ｔ細胞であるＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＴ細胞およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞から選ばれるいずれか１つの細胞が挙げられ、より好ましくはＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞（Ｔ_ＨＡＭ）が挙げられる。

ＨＡＭ患者末梢血液中には、無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーおよび健常人に比べて、ＨＴＬＶ−１の転写活性化タンパク質Ｔａｘ特異的な細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞が増加した結果、ＨＴＬＶ−１感染組織の慢性的な炎症を引き起こしている（Ｙａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００２；９９：８８−９４）。このため、本発明の治療方法および治療剤の標的細胞としてＣＤ８＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞が挙げられる。

また、本発明の治療方法および治療剤が標的とするＨＴＬＶ−１感染細胞としては、ＨＡＭ患者末梢血液中のＨＴＬＶ−１感染細胞のうち、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞が挙げられる（Ｙａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２００４；１９９；１３６７−１３７７）。

ＨＴＬＶ−１感染者の末梢血細胞のうち、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞がＨＴＬＶ−１のリザーバー細胞であり、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞画分含まれる、ｆｏｒｋｈｅａｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ３（Ｆｏｘｐ３）の発現によって制御されている制御性Ｔ細胞（以下、Ｔｒｅｇと略記する）は、ＨＴＬＶ−１に感染するとＴａｘ依存的にＦｏｘｐ３の発現量が低下し、Ｔ細胞の制御機能が低下または欠損している（Ｙａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ、Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．，２００５；１１５：１３６１−１３６８）。従って、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＴ細胞も本発明の治療方法および治療剤の標的細胞として含まれる。

本発明の治療方法および治療剤が標的とするＨＴＬＶ−１感染細胞としては、ＨＡＭ患者末梢血液中のＨＴＬＶ−１感染細胞のうち、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量が増加しているＣＣＲ４＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞が挙げられる。

また、ＨＴＬＶ−１が感染しているＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞特異的にＦｏｘｐ３の発現が低下し、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）の発現が増加し、インターロイキン（ＩＬ）−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１７の発現が低下していることから（Ｙａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９；４；ｅ６５１７）、ＣＣＲ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＴ細胞も本発明の治療方法および治療剤の標的細胞として含まれる。

また、ＨＡＭ患者の末梢血単核球（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ；ＰＢＭＣ）中のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋ＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞比率と、ＨＡＭ患者の脊髄領域の炎症所見と相関するｎｅｏｐｔｅｒｉｎ量またはＨＡＭ重症度とが正の相関を示す。一方で、ＨＡＭ患者末梢血液中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量とｎｅｏｐｔｅｒｉｎ量またはＨＡＭ重症度との相関性が低いことから、患者末梢血液中のＨＴＬＶ−１感染Ｔ細胞の絶対量よりも、むしろＩＦＮ−γ産生量が増加する等の機能的に変化したＨＴＬＶ−１感染Ｔ細胞数の増加が、ＨＡＭ重症度とより関連する。

従って、本発明の治療方法および治療剤の標的細胞になり得るＨＴＬＶ−１感染細胞としては、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＩＦＮ−γ＋という特徴的な表現型を示すＴ細胞、即ちＨＡＭの病因細胞（以下、Ｔ_ＨＡＭと略記する場合もある）が挙げられる（Ａｒａｙａ ｅｔ ａｌ，Ｖｉｒｕｓｅｓ，２０１１；３：１５３２−１５４８．）。

本発明において、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ２５＋、ＣＣＲ４＋またはＩＦＮ−γ＋細胞とは、各分子に特異的に結合する抗体を用いたフローサイトメーター（以下、ＦＣＭと略記することもある）解析を行った場合に、ネガティブコントロール抗体による蛍光強度と比べて、実質的に高い蛍光強度を示す細胞集団をいう。

具体的には、細胞膜タンパク質の場合は、各抗原分子に特異的な抗体を用いて細胞を直接染色することができるし、分泌タンパク質の場合は、細胞を適当な界面活性剤等を用いて膜透過処理およびタンパク質固定化処理を行うことで染色することができる。

本発明において、Ｆｏｘｐ３ｌｏｗ細胞とは、Ｆｏｘｐ３発現が低下している細胞を示す。Ｆｏｘｐ３発現が低下している細胞とは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ４５ＲＯ−細胞におけるＦｏｘｐ３発現量と同程度のＦｏｘｐ３発現量のことを示し、該細胞集団のＦｏｘｐ３発現量と比較することで、選択することができる。また、Ｆｏｘｐ３ｌｏｗ細胞には、実質的にＦｏｘｐ３の発現が確認されない細胞も含まれる。

本発明において、上述の細胞集団は、以下の抗体を単独または組み合わせて用いることにより選択することができる。

抗ＣＤ４抗体（ＯＫＴ４；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、抗ＣＤ２５抗体（Ｍ−Ａ２５１；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、抗ヒトＣＣＲ４抗体（１Ｇ１；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ヒトＣＣＲ４マウスモノクローナル抗体（ＫＭ２１６０、Ｎｉｗａ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００４；．６４：２１２７−２１３３）、抗Ｆｏｘｐ３抗体（ＰＣＨ１０１；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗ＩＦＮ−γ抗体（Ｂ２７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。

本発明の治療方法としては、抗ヒトＣＣＲ４抗体をＨＡＭ患者またはＡＣの生体内に投与することで、ＨＡＭ患者の末梢血液中または髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させることを含む治療方法が挙げられる。

本発明の治療方法としては、具体的にはＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＣＲ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＴ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＴ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋ＣＣＲ４＋Ｔ細胞などの標的細胞を、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いて阻害または除去することにより、かつＨＡＭ患者の末梢血液中または髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させることを含む治療方法が挙げられる。

本発明において、ＨＡＭ患者の末梢血液中または髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させるとは、以下をいう。通常健常人ＰＢＭＣはｉｎ ｖｉｔｒｏ下で抗体、サイトカイン、化学物質等による刺激無しには自発的な増殖はほとんどしないが、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣは、特別な刺激無しに自発的に増殖する。従って、本発明において、ＨＡＭ患者の末梢血液中また髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させるとは、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いて本ＨＡＭ患者のＰＢＭＣの自発的増殖を阻害した結果、ＨＴＬＶ−１感染細胞数を減少させることも含まれる。

また、抗ヒトＣＣＲ４抗体によるＨＴＬＶ−１感染細胞特異的な細胞増殖阻害、抗ヒトＣＣＲ４抗体のエフェクター活性によるＨＴＬＶ−１感染細胞の傷害および除去等によるＨＴＬＶ−１感染細胞数を減少させることも含まれる。

本発明において、ＨＡＭ患者の末梢血液中のＨＴＬＶ−１感染細胞の細胞増殖を抑制するとは、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣを抗ヒトＣＣＲ４抗体で処理した際に、ＰＢＭＣの自発的な細胞増殖を減少または阻害することをいう。

自発的な細胞増殖を減少または阻害しているか否かは、ＰＢＭＣの細胞増殖能を測定することで測定可能であり、例えば、^３Ｈ−チミジン、ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）などの取り込み、ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ（ＰＣＮＡ）染色、Ｋｉ−６７染色およびテロラゾリウム塩などによる発色試薬を用いて解析することができる。

また、本発明の治療方法としては、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いてＨＡＭ患者の末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることを含む治療方法が挙げられる。

本発明において、ＨＡＭ患者の末梢血液中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させるとは、以下のことをいう。ＨＡＭ患者のＰＢＭＣに含まれるＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることをいい、ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１感染細胞自体が減少すること、ＰＢＭＣ中の細胞の新たな感染が減少していること（感染率の減少）を示す。

ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量は、公知の方法（Ｎａｇａｉ ｅｔ ａｌ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ；２００１；１８３；１９７−２０５）に基づいて測定することができる。即ち、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣ由来ｃＤＮＡを鋳型として、ＨＴＬＶ−１ ｐＸ遺伝子の部分断片を特異的なプライマーで増幅することで、ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡのコピー数を測定することができる。

したがって本発明は、ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の細胞増殖を減少させることを含む治療方法が挙げられる。

本発明の治療方法としては、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いてＨＡＭ患者の末梢血液中のＰＢＭＣおよび髄液中の細胞が産生するサイトカイン産生を抑制することを含む治療方法が挙げられる。

本発明において、抗ヒトＣＣＲ４抗体はＨＡＭ患者のＰＢＭＣおよび髄液中細胞が産生するＩＦＮ−γ、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１７から選ばれる少なくとも１つのサイトカインの産生を抑制することができる。

本発明において、ＨＡＭ患者の末梢血液中のＨＴＬＶ−１感染細胞が産生するサイトカインの産生を抑制するとは、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣを抗ヒトＣＣＲ４抗体で処理した時に、サイトカインの産生を抑制または阻害できることをいう。

サイトカインの産生を阻害できるか否かは、ＨＡＭ患者から採血した血漿または血清中のサイトカイン濃度を測定することや、ＨＡＭ患者の末梢血液から採取したＰＢＭＣの自発的細胞増殖時に産生される培養上清中のサイトカイン濃度を測定することで確認することができる。

サイトカイン濃度を測定する方法としては、各サイトカイン特異的な抗体を用いたｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）法、ｓａｎｄｗｉｃｈ−ＥＬＩＳＡ法、ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏ ａｓｓａｙ（ＲＩＡ）法、ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（ＦＣＭ）法などを利用して測定することができる。具体的には、ＢＤ^ＴＭ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｂｅａｄ Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）（ＢＤバイオサイエンス）のキットを用いてサイトカイン濃度を測定することができる。

本発明に用いられる抗ヒトＣＣＲ４抗体および本発明の治療剤に含まれる抗ヒトＣＣＲ４抗体としては、ＣＣＲ４に特異的に結合すればいかなる抗ヒトＣＣＲ４抗体および該抗体断片であってもよいが、好ましくは、ＣＣＲ４の細胞外領域に特異的に結合する抗体、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７またはＭＤＣ／ＣＣＬ２２のＣＣＲ４への結合を阻害する抗体、エフェクター活性を有する抗体、ＣＣＲ４の細胞外領域に結合しかつエフェクター活性を有する抗体、ＣＣＲ４の細胞外領域に結合しかつ血小板に結合しない抗体、ＣＣＲ４の細胞外領域に結合し、血小板に結合せずかつエフェクター活性を有する抗体などが挙げられる。

ヒトＣＣＲ４は、ヒト未熟好塩基球細胞株ＫＵ−８１２からＫ５−５としてクローニングされた、Ｇ蛋白質共役型の７回膜貫通型受容体であり、配列番号９で示されるアミノ酸配列を有する。ＣＣＲ４の細胞外領域は、アミノ酸配列の１〜３９番目、９９〜１１１番目、１７６〜２０６番目および２６８〜２８４番目であり、細胞内領域は６８〜７７番目、１３４〜１５０番目、２２７〜２４２番目および３０９〜３６０番目である（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＩＤ：Ｐ５１６７９）。

また、胸腺細胞から産生されるＴＡＲＣ（ｔｈｙｍｕｓ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，２１５１４、１９９６）およびマクロファージから単離されたＭＤＣ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８５，１５９５、１９９７）、別名 ＳＴＣＰ−１（ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ−１）（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，２５２２９、１９９７）がＣＣＲ４に特異的に結合することが知られている。

従って本発明に用いられる抗ヒトＣＣＲ４抗体は、ＣＣＲ４タンパク質の１〜３９番目、９９〜１１１番目、１７６〜２０６番目および２６８〜２８４番目のアミノ酸配列からなる細胞外領域に含まれるエピトープに結合する抗体、好ましくは、ＣＣＲ４タンパク質のＮ末端領域の１〜３９番目のアミノ酸配列に含まれるエピトープに結合する抗体、より好ましくはＣＣＲ４タンパク質の２〜２９番目のアミノ酸配列に含まれるエピトープに結合する抗体が挙げられる。

本発明に用いられる抗ヒトＣＣＲ４抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体のいずれであってもよいが、好ましくは単一のエピトープに結合するモノクローナル抗体が挙げられる。

モノクローナル抗体は、ハイブリドーマから生産されるモノクローナル抗体であってもよいし、遺伝子組換え技術によって作製された遺伝子組換え抗体であってもいずれのモノクローナル抗体でもよい。

ヒトにおいて免疫原性を低下させるために、ヒト型キメラ抗体（以下、単にキメラ抗体ともいう）、ヒト化抗体［ヒト型ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ；（ＣＤＲ）移植抗体ともいう］およびヒト抗体を用いることが好ましい。

キメラ抗体は、ヒト以外の動物の抗体の重鎖可変領域（以下、ＶＨと略記する）および軽鎖可変領域（以下、ＶＬと略記する）と、ヒト抗体の重鎖定常領域（以下、ＣＨと略記する）および軽鎖定常領域（以下、ＣＬと略記する）とからなる抗体である。可変領域についての動物の種類は、マウスやラット、ハムスター、ウサギなどのハイブリドーマを作製しうる動物であれば特に限定されない。

ヒト型キメラ抗体は、ヒトＣＣＲ４に特異的に結合するヒト以外の動物の抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードする遺伝子を有する発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築し、動物細胞へ導入して発現させることで作製できる。

ヒト型キメラ抗体のＣＨは、ヒトイムノグロブリン（以下、ｈＩｇと略記する）であれば特に限定されないが、ｈＩｇＧクラスのものが好ましい。ヒト型キメラ抗体のＣＬは、ｈＩｇＧに属すれば特に限定されない。

ヒト化抗体は、ヒト以外の動物の抗体のＶＨおよびＶＬの相補性決定領域（以下、ＣＤＲと略記する）をヒト抗体のＶＨおよびＶＬの適切な位置に移植した抗体である。ヒト型ＣＤＲ移植抗体は、ＣＣＲ４に特異的に結合するヒト以外の動物の抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲを任意のヒト抗体のＶＨおよびＶＬのフレームワーク（以下、ＦＲと略記する）に移植した可変領域（以下、Ｖ領域と略記する）をコードするｃＤＮＡを構築し、ヒト抗体のＣＨおよびＣＬをコードするＤＮＡを有する発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト化抗体発現ベクターを構築し、動物細胞へ導入して発現させることで、作製されうる。ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列は、ヒト抗体由来のアミノ酸配列であれば特に限定されない。

ヒト化抗体のＣＨは、ｈＩｇであれば特に限定されないが、ｈＩｇＧクラスのものが好ましい。ヒト化抗体のＣＬは、ｈＩｇに属すれば特に限定されない。

本発明の治療剤に含まれる抗ヒトＣＣＲ４抗体断片としては、上記各抗体断片が含まれる。抗体断片の種類は特に限定されず、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ、ｄｉａｂｏｄｙ、ｄｓＦｖ、ＣＤＲを含むペプチドなどが挙げられる。

Ｆａｂは、ＩｇＧをパパイン（タンパク質分解酵素）で処理して得られる断片のうち、分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。抗ヒトＣＣＲ４抗体のＦａｂは、抗ヒトＣＣＲ４抗体をパパインで処理するか、前記抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入し、このベクターを原核生物あるいは真核生物へ導入して発現させることで、作製されうる。

Ｆ（ａｂ’）_２は、ＩｇＧをペプシン（タンパク質分解酵素）で処理して得られる断片のうち、分子量約１０万の抗原結合活性を有する抗体断片である。抗ヒトＣＣＲ４抗体のＦ（ａｂ’）_２は、抗ヒトＣＣＲ４抗体をペプシンで処理するか、Ｆａｂ’（後述）をチオエーテル結合またはジスルフィド結合で結合させることで、作製されうる。

Ｆａｂ’は、Ｆ（ａｂ’）_２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断した分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。抗ヒトＣＣＲ４抗体のＦａｂ’は、抗ヒトＣＣＲ４抗体のＦ（ａｂ’）_２をジチオスレイトールで処理するか、前記抗体のＦａｂ’をコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入し、このベクターを原核生物または真核生物へ導入して発現させることで、作製されうる。

ｓｃＦｖは、１本のＶＨと１本のＶＬとを適当なペプチドリンカーを用いて連結した抗原結合活性を有する抗体断片である。抗ヒトＣＣＲ４抗体のｓｃＦｖは、抗ヒトＣＣＲ４抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築し、このＤＮＡを発現ベクターに挿入し、この発現ベクターを原核生物または真核生物へ導入して発現させることで、作製されうる。

ｄｉａｂｏｄｙは、ｓｃＦｖが二量体化した抗体断片で、二価の抗原結合活性を有する抗体断片である。抗ヒトＣＣＲ４抗体のｄｉａｂｏｄｙは、抗ヒトＣＣＲ４抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｄｉａｂｏｄｙをコードするＤＮＡを構築し、このＤＮＡを発現ベクターに挿入し、この発現ベクターを原核生物または真核生物へ導入して発現させることで、作製されうる。

ｄｓＦｖは、ＶＨおよびＶＬ中のそれぞれ１アミノ酸残基をシステイン残基に置換したポリペプチドを、システイン残基間のジスルフィド結合を介して結合させた抗体断片である。抗ヒトＣＣＲ４抗体のｄｓＦｖは、抗ヒトＣＣＲ４抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ｄｓＦｖをコードするＤＮＡを構築し、このＤＮＡを発現ベクターに挿入し、この発現ベクターを原核生物または真核生物へ導入して発現させることで、作製されうる。

ＣＤＲを含むペプチドは、ＶＨまたはＶＬのＣＤＲの少なくとも１領域以上を含むペプチドである。抗ヒトＣＣＲ４抗体のＣＤＲを含むペプチドは、抗ヒトＣＣＲ４抗体のＶＨおよびＶＬのＣＤＲをコードするＤＮＡを構築し、このＤＮＡを発現ベクターに挿入し、この発現ベクターを原核生物または真核生物へ導入して発現させることで、作製されうる。また、抗ヒトＣＣＲ４抗体のＣＤＲを含むペプチドは、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、（ｔ−ブチルオキシカルボニル法）などの化学合成法によっても作製することができる。

本発明においてエフェクター活性とは、抗体のＦｃ領域を介して引き起こされる活性をいい、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ活性）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ活性）や、マクロファージや樹状細胞などの食細胞による抗体依存性ファゴサイトーシス（Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ，ＡＤＰ活性）などが知られている。

エフェクター活性を制御する方法としては、抗体のＦｃ領域のＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔｓ，５^ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１）２９７番目のアスパラギン（Ａｓｎ）に結合するＮ結合複合型糖鎖の還元末端に存在するＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）にα１−６結合するフコース（コアフコースともいう）の量を制御する方法（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００２／３１１４０号、国際公開第００／６１７３９号）や、抗体のＦｃ領域のアミノ酸残基を改変することで制御する方法などが知られている。

抗体のＦｃに結合しているＮ結合複合型糖鎖のコアフコースの含量を制御することで、抗体のエフェクター活性を増加または低下させることができる。抗体のＦｃに結合しているＮ結合複合型糖鎖に結合するフコースの含量を低下させる方法としては、α１，６−フコース転移酵素遺伝子（ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−８，ＦＵＴ８）が欠損したＣＨＯ細胞を用いて抗体を発現させることで、フコースが結合していない抗体を取得することができる。

フコースが結合していない抗体は高いＡＤＣＣ活性を有する。一方、抗体のＦｃに結合しているＮ結合複合型糖鎖に結合するフコースの含量を増加させる方法としては、α１，６−フコース転移酵素遺伝子を導入した宿主細胞を用いて抗体を発現させることで、フコースが結合している抗体を取得できる。フコースが結合している抗体は、フコースが結合していない抗体よりも低いＡＤＣＣ活性を有する。

また、抗体のＦｃ領域のアミノ酸残基を改変することでＡＤＣＣ活性若しくはＣＤＣ活性を増加または低下させることができる。Ｆｃ領域のアミノ酸残基改変を行うことで、ＦｃγＲへの結合活性を増加させるまたは低下させることによりＡＤＣＣ活性を制御することができるし、Ｆｃ領域のアミノ酸残基改変を行うことで、補体の結合活性を増加させるあるいは低下させることによりＣＤＣ活性を制御することができる。

例えば、米国特許出願公開第２００７／０１４８１６５号明細書に記載のＦｃ領域のアミノ酸配列を用いることで、抗体のＣＤＣ活性を増加させることができる。また、米国特許第６，７３７，０５６号明細書、米国特許第７，２９７，７７５号明細書、米国特許第７，３１７，０９１号明細書および国際公開第２００５／０７０９６３号に記載のアミノ酸残基改変を行うことで、ＡＤＣＣ活性またはＣＤＣ活性を、増加させることも低下させることもできる。

本発明の治療方法および治療剤に用いられる抗ヒトＣＣＲ４抗体としては、ＣＣＲ４タンパク質のＮ末端から２〜２９番目に含まれるエピトープに結合する抗ヒトＣＣＲ４抗体、該エピトープに結合してＡＤＣＣ活性を有する抗ヒトＣＣＲ４抗体、配列番号１〜３のそれぞれに表されるアミノ酸配列を含む重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ１〜３および配列番号４〜６のそれぞれに表されるアミノ酸配列を含む軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ１〜３を含む抗ヒトＣＣＲ４抗体、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ヒトＣＣＲ４抗体が挙げられる。また、上述の抗体のＦｃの２９７番目に結合するコアフコースが、低下または欠損している抗体が好ましい。更により具体的には、抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体［Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）、一般名：Ｍｏｇａｍｕｌｉｚｕｍａｂ］が挙げられる。

本発明の治療方法には、抗ヒトＣＣＲ４抗体とその他の治療剤を併用して治療する併用療法も含まれる。

本発明の併用療法としては、抗ヒトＣＣＲ４抗体と、免疫抑制剤および抗ウイルス剤から選ばれる少なくとも１つの併用薬とを併用することができる。本発明の併用療法は、抗ヒトＣＣＲ４抗体と併用される薬剤が同時に投与されても良いし、連続的に投与されてもよい。

免疫抑制剤としては、例えば、ＨＡＭの過剰な免疫反応を抑える薬剤であるプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメサゾン、ベタメザソンなどの副腎皮質ステロイド剤、アザチオプリンなどの代謝拮抗剤、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）などのカルシニューリン阻害剤、トファソチニブ、タソシチニブなどのＪａｎｕｓ ｋｉｎａｓｅ（ＪＡＫ）阻害剤、アバタセプトなどのｃｙｔｏｌｙｔｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ−４（ＣＴＬＡ−４）と抗体Ｆｃ領域を融合させたＣＴＬＡ４−Ｉｇ製剤およびＮＦκＢ阻害剤などが挙げられるまた、各薬剤が標的とする分子に対して同様に作用する上述薬剤の誘導体も用いることができる。

抗ウイルス剤としては、例えば、ＩＦＮ−αなどの抗ウイルス性サイトカイン、アジドチミジンなどの逆転写酵素阻害剤などが挙げられる。

ＨＡＭ患者の慢性的炎症症状に対して通常１０〜６０ｍｇのプレドニゾロンを使用するが、プレドニゾロンの長期投与は肥満、糖尿病、骨粗しょう症、緑内障、感染症などの有害事象を発現してしまうことから、ＨＡＭ患者の炎症症状に合わせた使用量の調節が必要になる。

本発明の併用療法は、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いることで、比較的低用量の副腎皮質ステロイドでより強力な抗炎症効果を発揮することができる。従って、本発明の併用療法としては、抗ヒトＣＣＲ４抗体と低用量の副腎皮質ステロイドとを、同時または連続的に併用する治療方法が挙げられる。また、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いることで、低用量の副腎皮質ステロイドを長期間使用する方法も含まれる。また、本発明の併用療法により長期の副腎皮質ステロイド剤の使用に伴う有害事象の発現を低下または予防することを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体と低用量の副腎皮質ステロイドとを、同時または連続的に併用する治療方法も含まれる。本発明の併用療法は、抗ヒトＣＣＲ４抗体と副腎皮質ステロイドとが、同時に投与されても良いし、連続的に投与されてもよい。

本発明において、低用量の副腎皮質ステロイドとは、例えばプレドニゾロンとして、１〜１０ｍｇの投与量が、好ましくは９ｍｇ、８ｍｇ、７ｍｇ、６ｍｇ、５ｍｇ、４ｍｇ、３ｍｇ、２ｍｇおよび１ｍｇが挙げられる。

また、本発明のＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤としては、ＨＡＭ患者の末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させることを特徴とする抗ヒトＣＣＲ４抗体を含むＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤、ＨＡＭ患者の末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることを特徴とする抗ヒトＣＣＲ４抗体を含むＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤、ＨＡＭ患者の末梢血液中および髄液中に存在するＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞から選ばれる少なくとも１つの細胞を標的することを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体を含むＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤が挙げられる。

本発明のＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤としては、上述の活性を有する抗ヒトＣＣＲ４抗体を有効成分として含む治療剤であればいかなるものでもよいが、通常は薬理学的に許容される一つあるいはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られる任意の方法により製造した医薬製剤として提供するのが望ましい。

好ましくは水、あるいは食塩、グリシン、グルコース、ヒトアルブミン等の水溶液等の水性担体に溶解した無菌的な溶液が用いられる。また、製剤溶液を生理的条件に近づけるための緩衝化剤や等張化剤のような、薬理学的に許容される添加剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム等を添加することもできる。また、凍結乾燥して貯蔵し、使用時に適当な溶媒に溶解させて用いることもできる。

本発明の治療剤の投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが好ましく、経口投与、あるいは口腔内、気道内、直腸内、皮下、筋肉内、髄腔内および静脈内等の非経口投与を挙げることができるが、髄腔内投与または静脈内投与が好ましい。

経口投与に適当な製剤としては、例えば、乳剤、シロップ剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤等が挙げられる。例えば、乳剤およびシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油などの油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類等を添加剤として用いて製造できる。

カプセル剤、錠剤、散剤または顆粒剤等は、乳糖、ブドウ糖、ショ糖若しくはマンニトール等の賦形剤、デンプン若しくはアルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース若しくはゼラチン等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、またはグリセリン等の可塑剤等を添加剤として用いて製造できる。

非経口投与に適当な製剤としては、例えば、注射剤、座剤、噴霧剤等が挙げられる。例えば、注射剤は、塩溶液、ブドウ糖溶液、あるいは両者の混合物からなる担体等を用いて調製する。座剤はカカオ脂、水素化脂肪またはカルボン酸等の担体を用いて調製される。また、噴霧剤は該抗体そのもの、ないしは受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ該抗体を微細な粒子として分散させ吸収を容易にさせる担体等を用いて調製する。

担体として具体的には乳糖、グリセリン等が例示される。該抗体および用いる担体の性質により、エアロゾル、ドライパウダー等の製剤が可能である。また、これらの非経口剤においても経口剤で添加剤として例示した成分を添加することもできる。

本発明の治療剤の投与量または投与回数は、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、年齢、体重等により異なるが、通常成人１日当たり１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。

更に本発明のＨＡＭ患者およびＡＣの治療剤としては、抗ヒトＣＣＲ４抗体と低用量の副腎皮質ステロイドとを含むＨＡＭの治療剤、低用量の副腎皮質ステロイドと併用することを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体と副腎皮質ステロイドとを含むＨＡＭの治療剤、低用量の副腎皮質ステロイドと同時または逐次的に併用することを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体と副腎皮質ステロイドとを含むＨＡＭの治療剤、低用量の副腎皮質ステロイドを長期間使用することを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体と低用量の副腎皮質ステロイドとを含む治療剤および低用量の副腎皮質ステロイドを同時または逐次的に長期間使用することを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体と低用量の副腎皮質ステロイドとを含む治療剤が挙げられる。

本発明の抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いたＨＡＭの治療方法および抗ヒトＣＣＲ４抗体を含むＨＡＭの治療剤は、無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーまたは非活動期のＨＡＭ患者の積極的治療にも応用できる。ＡＣの積極的治療は、慢性的な炎症症状の発症前に治療できるため、神経障害、組織障害の発生を抑えることができる。

また、非活動期のＨＡＭ患者の積極的治療は、慢性的な炎症反応を抑えることで、ＨＡＭ活動期に生じた神経障害や組織障害の修復期間を患者へもたらすことができるため、症状およびＱｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ（ＱＯＬ）改善においても重要である。

即ち、末梢血液中または髄液中に、抗ＨＴＬＶ−１抗体、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量などが確認されるが無症候状態であるＨＡＭハイリスクＨＴＬＶ−１キャリアーにおいて、抗ヒトＣＣＲ４抗体を投与することで患者末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させることによってＨＡＭ発症のリスクを低下させる方法、患者末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることによってＨＡＭ発症のリスクを低下させる方法、および患者末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞由来サイトカンの産生を抑制することによってＨＡＭ発症のリスクを低下させる方法も本発明に含まれる。
また、無症候状態であるＨＡＭハイリスクＨＴＬＶ−１キャリアーにおいて、患者末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させることによってＨＡＭ発症のリスクを低下させることを特徴とする、抗ヒトＣＣＲ４抗体を含むＨＡＭの予防剤も本発明に含まれる。

ＨＡＭ発症のハイリスクＨＴＬＶ−１キャリアーは、末梢血液中または髄液中の抗ＨＴＬＶ−１抗体価、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量、ＨＴＬＶ−１ Ｔａｘ ｍＲＮＡ量、ＨＴＬＶ−１ Ｔａｘ ｍＲＮＡ／ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量比、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞数、髄液中のｎｅｏｐｔｅｒｉｎ濃度、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量 ＣＳＦ／ＰＢＭＣ比、可溶性ＩＬ−２受容体（ｓＩＬ−２Ｒ）、ＣＸＣＬ１０濃度およびＨＡＭ／ＡＴＬの家族歴などから選ばれる診断マーカーにより、判別することができる。

ＨＡＭ患者において、具体的には末梢血血液中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量高値、血清ｓＩＬ−２Ｒ濃度高値、血清ＣＸＣＬ１０濃度高値、ＨＡＭ／ＡＴＬの家族歴有り、髄液中のウイルス量高値、ＨＴＬＶ−１抗体価の増加、ネオプテリン濃度、およびＣＸＣＬ１０濃度高値から選ばれる少なくとも１つのリスクファクターが認められるＨＡＭ患者が、積極的治療の対象となり得る。各診断マーカーの値が高値であるとは、ＨＡＭ患者間において相対的に高い値を示すことを意味する。

また、ＡＣにおいては、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量高値、血清ｓＩＬ−２Ｒ濃度高値、血清ＣＸＣＬ１０濃度高値およびＨＡＭ／ＡＴＬの家族歴有りから選ばれる少なくとも１つのリスクファクターが認められるＡＣが、ハイリスクＡＣとなり得る。

一方、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量低値、血清ｓＩＬ−２Ｒ濃度低値、血清ＣＸＣＬ１０濃度低値およびＨＡＭ／ＡＴＬの家族歴無しなどが、ローリスクＡＣになり得る。各診断マーカーの値が高値であるとは、ＡＣ間において相対的に高い値を示すことを意味しており、ＨＡＭ診断値より高い場合も含まれる。

また、運動障害度が高くない非活動期のＨＡＭ患者において、抗ヒトＣＣＲ４抗体を投与することで被験者末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させることによってＨＡＭ重症度を低下させる方法、被験者末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることによってＨＡＭ重症度を低下させる方法、および被験者末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞由来サイトカインの産生を抑制することによってＨＡＭ重症度を低下させる方法も本発明に含まれる。

また、本発明は、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いてＨＡＭ患者の末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させる方法、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いてＨＡＭ患者の末梢血液中および髄液中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させる方法、抗ヒトＣＣＲ４抗体を用いてＨＡＭ患者の末梢血液中および髄液中のサイトカインおよび／またはケモカイン産生を減少させる方法も含まれる。

以下に本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれら実施例によって限定されない。

［実施例１］抗ヒトＣＣＲ４抗体によるＨＡＭ患者のＰＢＭＣの自発的増殖抑制効果
ＨＡＭ患者末梢血液中の末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）の自発的細胞増殖に対する抗ヒトＣＣＲ４抗体の効果を確認するために、ＨＡＭ患者より分離したＰＢＭＣに抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０（日本国特許第３９２６１５３号公報）（以下、ＫＭ２７６０とも略記する）を添加して培養を行った。

以下、実施例で使用するＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーの末梢血液は、聖マリアンナ医科大学倫理委員会によって審査および承認を受けた臨床プロトコールに含まれるヘルシンキ宣言に基づいた、各被験者のインフォームドコンセントが得られているサンプルを使用した。

ＨＡＭ患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）のＰＢＭＣは、採血されたＨＡＭ患者９名および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー８名の末梢血液から、フィコール遠心比重法により分離し、アッセイまで液体窒素内で凍結保存した。分離したＰＢＭＣは、増殖刺激無しで１０％ウシ胎児血清（以下、ＦＢＳと略記する）、１％ペニシリンおよび１％ストレプトマイシン（Ｗａｋｏ純薬社製）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（以下、ＲＰＭＩ培地と略記する）に懸濁し、１×１０^５ｃｅｌｌｓ／１００μＬ／ｗｅｌｌで９６ウェルラウンドボトムプレートに播種した。ポジティブコントロールとして、１μｇ／ｍＬプレドニゾロン（ＰＳＬ）を添加したウェルを、また被験抗体として０〜１０μｇ／ｍＬ抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０を添加したウェルを調製し、３７℃、５％ ＣＯ_２条件下で、６日間培養を行った。

培養後、１μＣｉ ^３Ｈ−チミジンを各ウェルに添加して、更に１６時間培養を続けた。培養後、細胞を回収し、液体シンチレーションカウンター（マイクロベータ）を用いて、比放射活性を測定し細胞増殖率（％）を測定した（図１Ａ、１Ｂ）。薬剤非添加ウェルの^３Ｈ−チミジン取込みのカウントを１００％とした時の、比率を示した。

その結果、ポジティブコントロールのＰＳＬは、薬剤非添加と比べて約５０％まで細胞増殖を阻害した。一方、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０は、抗体濃度依存的に細胞増殖を阻害し、０．０１μｇ／ｍＬではコントロールと比べて約８０％まで細胞増殖を阻害し、１０μｇ／ｍＬの濃度でＰＳＬと同等に細胞増殖を阻害した（図１Ｂ）。

また、ＫＭ２７６０は、１名の無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー由来のＰＢＭＣも同様に、自発的細胞増殖を阻害した（図１Ａ）。

従って、抗ヒトＣＣＲ４抗体がＨＡＭ患者由来および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー由来ＰＢＭＣの自発的細胞増殖能を阻害することが明らかになった。

同様に、１×１０^−６μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ ＫＭ２７６０を添加してＨＡＭ患者由来のＰＢＭＣを培養し、培養７日後の実細胞数を測定した（図１Ｃ）。

その結果、１μｇ／ｍＬ ＰＳＬは、薬剤非添加の細胞数と比べて約５０％まで細胞数を減少させた。また、ＫＭ２７６０は、抗体濃度依存的に細胞数を減少させ、１ｐｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍＬの非常に低濃度域でも薬剤非添加の細胞数と比べて約８０％程度まで細胞数を減少させ、１０μｇ／ｍＬでは１μｇ／ｍＬ ＰＳＬと同等まで細胞数を減少させた。

以上の結果より、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体は、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣの自発的細胞増殖能を阻害するだけでなく、自発的な実細胞増殖も阻害し、実細胞数を減少させることが明らかになった。

［実施例２］抗ヒトＣＣＲ４抗体によるＨＡＭ患者ＰＢＭＣのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果
抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０によるＨＡＭ患者のＰＢＭＣのＨＴＬＶ−１プロウイルス量に対する効果を確認するために、上述実施例１と同様にＨＡＭ患者由来ＰＢＭＣの培養下にＫＭ２７６０を添加して培養を行った。

ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量は、Ｙａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ（Ｂｌｏｏｄ，２００２；９９：８８−９４）およびＮａｇａｉ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ；２００１；１８３：１９７−２０５）に記載の方法に基づき定量した。

培養７日後、各ウェルの細胞を回収し、回収した細胞を５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２０ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１Ｍ ＮａＣｌおよび１％ ＳＤＳを含むバッファー（以下、ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒと記す）に懸濁後、１５０μｇ／ｍＬ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋ（Ｗａｋｏ純薬社製）を加えて、５５℃で一晩振盪し、フェノール／クロロホルムを用いてＨＡＭ患者のＰＢＭＣのゲノムＤＮＡを抽出した。

抽出したゲノムＤＮＡを鋳型にＨＴＬＶ−１のｐＸ領域およびヒトβ−ａｃｔｉｎに対するＴａｑＭａｎプローブおよび各遺伝子のプライマーセットを用いて、ｒｅａｌ ｔｉｍｅ−ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（以下、ＰＣＲと略記する）を行った。

ＨＴＬＶ−１ ｐＸの標準検体として、ＨＴＬＶ−１ ｐＸ領域が１ ｃｏｐｙ／ｃｅｌｌ でインテグレートしているＨＴＬＶ−１感染ラットＴＡＲＬ２細胞株由来ゲノムＤＮＡ、およびβ−ａｃｔｉｎの標準検体として、健常者ＰＢＭＣ由来ゲノムＤＮＡを用いて、同時にＰＣＲを行い検量線を作成した。作成した検量線から各検体のｐＸおよびβ−ａｃｔｉｎのコピー数を算出し、下記式によりＨＴＬＶ−１のプロウイルスＤＮＡ量を決定した（図２Ａおよび２Ｂ）。

ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量：ＨＴＬＶ−１（ｐＸ）コピー数／１００ ＰＢＭＣ ｃｅｌｌｓ＝（ｐＸコピー数）／（β−ａｃｔｉｎコピー数／２）×１００

その結果、１μｇ／ｍＬ ＰＳＬは、薬剤非添加と比べてＨＡＭ患者由来ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量をほとんど減少させる効果は認められなかったが、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０は、抗体濃度依存的にＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を顕著に減少させた。０．０１μｇ／ｍＬ ＫＭ２７６０は、薬剤非添加と比べてＨＡＭ患者由来ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を４０％まで減少させ、１μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ ＫＭ２７６０は、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を約３０％まで減少させた（図２Ｂ）。

また、ＫＭ２７６０は、ＨＡＭ患者と同様に無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーのＰＢＭＣのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量も減少させた（図２Ａ）。

同様な培養を行い、各ウェル当たりのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ絶対量を測定した（図２Ｃおよび２Ｄ）。その結果、１μｇ／ｍＬ ＰＳＬは、薬剤非添加のウェルと比べてＨＡＭ患者由来ＰＢＭＣ中のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ絶対量を１／３まで減少させたのに対して、ＫＭ２７６０は、抗体濃度依存的にＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ絶対量を減少させ、１０μｇ／ｍＬではＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ絶対量を約１／６まで減少させた。

また、上述と同様に、１×１０^−６μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ ＫＭ２７６０を添加してＨＡＭ患者由来のＰＢＭＣを培養し、培養７日後のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を測定した（図２Ｅ）。

その結果、１μｇ／ｍＬ ＰＳＬはほとんどプロウイルスＤＮＡ量を減少させなかったが、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０は、０．０１μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬの濃度で、薬剤非添加と比べてＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を５０％〜３０％に減少させた。

一方、無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ＡＣ）についても、上述と同様にして、１×１０^−２μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ ＫＭ２７６０を添加してＡＣ由来のＰＢＭＣ（Ｎ＝８）を培養し、培養７日後のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を測定した（図２Ｆ）。

その結果、１μｇ／ｍＬ ＰＳＬはほとんどプロウイルスＤＮＡ量を減少させなかったが、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０は、０．０１μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬの濃度で、薬剤非添加と比べてＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を１／４〜１／５に減少させた。

以上の結果から、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体は、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣ、ＡＣのＰＢＭＣの細胞増殖を阻害するだけでなく、ＰＢＭＣ中の細胞当たりのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量も減少させ、更にＨＴＬＶ−１ プロウイルスＤＮＡの絶対量を減少させることが明らかになった。またそのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果は、１μｇ／ｍＬ ＰＳＬの効果よりも優位に高いことが示唆された。

従って、抗ヒトＣＣＲ４抗体は、ＨＡＭ患者およびＡＣのＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させかつＨＴＬＶ−１感染率を減少させることが明らかになった。このことは、抗ヒトＣＣＲ４抗体が、ＨＴＬＶ−１感染細胞を減少させ、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることで、ＨＡＭ患者を治療することができるだけでなく、無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアについても同様にしてＨＡＭ発症前の積極的治療や予防に有用であることを示唆している。

［実施例３］抗ヒトＣＣＲ４抗体の併用効果
抗ヒトＣＣＲ４抗体によってＨＡＭ患者由来ＰＢＭＣの細胞増殖阻害効果およびＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の減少効果が確認されたことから、臨床で使用されている副腎皮質ステロイド剤との併用効果を確認した。

通常、臨床患者に５０ｍｇプレドニゾロンを経口投与すると、約１μｇ／ｍＬの血中濃度が得られ、低用量の５ｍｇプレドニゾロンを経口投与した場合は、約０．１μｇ／ｍＬの血中濃度が得られる。そこで、本試験では、低用量プレドニゾロンの経口投与を想定して、０．１μｇ／ｍＬプレドニゾロンとの併用効果を確認した。

上述実施例１と同様にして、ＨＡＭ患者末梢血から分離したＰＢＭＣを、９６ウェルプレートに播種し、０．１または１μｇ／ｍＬプレドニゾロンを添加したウェル、０．１μｇ／ｍＬプレドニゾロン＋０．０１〜１０μｇ／ｍＬ 抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０を添加したウェルを調製し、培養を行った。

細胞増殖は、^３Ｈ−チミジンの取込みによる解析を行うため、実施例１と同様にして培養６日後に、^３Ｈ−チミジンを添加して１６時間培養を継続した。また、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の測定は、培養７日後に実施例２と同様にして実施した。

いずれのアッセイも薬剤非添加のウェルを１００％とした時の、各薬剤添加ウェルでの増殖率（図３Ａおよび３Ｂ）またはＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を％で示した（図３Ｃおよび３Ｄ）。

その結果、０．１または１μｇ／ｍＬプレドニゾロンは、薬剤非添加と比べてそれぞれ７０％、５０％程度まで細胞増殖を阻害した。また、０．１μｇ／ｍＬ ＰＳＬにＫＭ２７６０を添加した場合は、薬剤非添加と比べて抗体濃度依存的に細胞増殖を阻害し、０．１μｇ／ｍＬ ＰＳＬ＋１０μｇ／ｍＬ ＫＭ２７６０は、薬剤非添加と比べて２０％まで細胞増殖を阻害した（図３Ａおよび３Ｂ）。

従って、低用量ＰＳＬと抗ヒトＣＣＲ４抗体との併用によりＨＡＭ患者のＰＢＭＣの細胞増殖をより強く阻害することが明らかになった。

また、無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーにおいても同様に、ＫＭ２７６０とＰＳＬとの併用効果が確認された（図３Ａ）。

一方、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量については、０．１または１μｇ／ｍＬプレドニゾロンは、薬剤非添加と比べて、ほとんどＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させなかった。

しかしながら、０．１μｇ／ｍＬ ＰＳＬとＫＭ２７６０との併用は、薬剤非添加と比べて抗体濃度依存的にＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を顕著に減少させ、０．１μｇ／ｍＬ ＰＳＬ＋１０μｇ／ｍＬ ＫＭ２７６０では、薬剤非添加と比べて約２０％までＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させた（図３Ｄ）。

また、無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアーにおいても同様に、ＫＭ２７６０とＰＳＬとの併用効果が確認された（図３Ｃ）。

また、各ウェル当たりのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ絶対量を測定した結果（図３Ｅおよび３Ｆ）、１μｇ／ｍＬ ＰＳＬは、薬剤非添加ウェルと比べて約５０％までＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ絶対量を減少させたが、ＰＳＬ＋ＫＭ２７６０は、いずれの濃度のウェルにおいても、それ以下にＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ絶対量を減少させた。

よって、低用量ＰＳＬと抗ヒトＣＣＲ４抗体との併用は、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量をより強く減少させることが明らかになった。即ち、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣのＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量に対しては、副腎皮質ステロイドと抗ヒトＣＣＲ４抗体との相乗効果が確認された。

以上の結果から、低用量副腎皮質ステロイド剤と抗ヒトＣＣＲ４抗体とを併用することにより、高い治療効果が得られる可能性が示唆された。

更に、低用量副腎皮質ステロイド剤の使用は、これまでよりもより長期的な副腎皮質ステロイド治療に適用できる可能性があり、かつ副腎皮質ステロイド剤使用に伴う有害事象の発現頻度を減らすことができる。

［実施例４］抗ヒトＣＣＲ４抗体および副腎皮質ステロイド剤によるサイトカン産生抑制効果
ＨＡＭ患者のＰＢＭＣによる炎症性サイトカンの産生に対する抗ヒトＣＣＲ４抗体および副腎皮質ステロイド剤の抑制効果を確認するため、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣ培養後の培養上清中のＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−６およびＩＬ−１０の濃度を測定した。

ＨＡＭ患者のＰＢＭＣは上述実施例２と同様にして７日間培養し、培養後の培養上清を回収し、ＢＤ^ＴＭ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｂｅａｄ Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）法を利用した各サイトカイン濃度測定キット（いずれもＢＤバイオサイエンス社製）、Ｈｕｍａｎ ＩＦＮγ Ｆｌｅｘ ｋｉｔ（ｃａｔ．５６０１１１）、Ｈｕｍａｎ ＴＮＦα Ｆｌｅｘ ｋｉｔ（ｃａｔ．５６０１２２）、Ｈｕｍａｎ ＩＬ−６ Ｆｌｅｘ ｋｉｔ（ｃａｔ．５５８２７６）、Ｈｕｍａｎ ＩＬ−２ Ｆｌｅｘ ｋｉｔ（ｃａｔ．５５８２７０）およびＨｕｍａｎ ＩＬ−１０ Ｆｌｅｘ ｋｉｔ（ｃａｔ．５５８２７４）を用いて、各サイトカイン濃度を測定した（図４Ａ、４Ｂ、５Ａ、５Ｂ、６Ａ、６Ｂ、７Ａ、７Ｂ、８Ａおよび８Ｂ）。

その結果、ＫＭ２７６０は、薬剤非添加と比べてＩＦＮ−γの産生を約５０％まで阻害したが（図４Ａ）、ＫＭ２７６０＋ＰＳＬ併用は、１０〜２０％まで阻害した（図４Ｂ）。

ＫＭ２７６０は、薬剤非添加と比べてＴＮＦ−αの産生を約３０％まで阻害したが（図５Ａ）、ＫＭ２７６０＋ＰＳＬ併用は、１０％以下に阻害した（図５Ｂ）。

ＫＭ２７６０は、薬剤非添加と比べてＩＬ−６の産生を約２０％まで阻害したが（図６Ａ）、ＫＭ２７６０＋ＰＳＬ併用は、１０〜２０％まで阻害した（図６Ｂ）。

ＫＭ２７６０は、薬剤非添加と比べてＩＬ−２の産生を約６０〜７０％まで阻害したが（図７Ａ）、ＫＭ２７６０＋ＰＳＬ併用は、３０〜６０％まで阻害した（図７Ｂ）。

ＫＭ２７６０は、薬剤非添加と比べてＩＬ−１０の産生を約５０％まで阻害したが（図８Ａ）、ＫＭ２７６０＋ＰＳＬ併用も同程度の阻害であった（図８Ｂ）。

以上の結果、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０は、ＨＡＭ患者由来ＰＢＭＣが産生するＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−６およびＩＬ−１０いずれのサイトカインの産生も、抗体濃度依存的に阻害した一方、プレドニゾロンは、ＩＬ−１０以外のＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２およびＩＬ−６のすべてのサイトカインの産生を阻害した。

また、０．１μｇ／ｍＬ ＰＳＬ＋０．０１μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ ＫＭ２７６０の併用は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−２の産生をＫＭ２７６０単独と比べてより強く阻害し、ＩＬ−６の産生はＫＭ２７６０単独と比べてわずかに強く阻害した程度であった。また、ＰＳＬ＋ＫＭ２７６０の併用は、ＩＬ−１０の産生には影響が無かった。

従って、抗ヒトＣＣＲ４抗体は、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣが産生する炎症性サイトカンの産生を抑制するため、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＣＲ４＋Ｆｏｘｐ３ｌｏｗＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞（Ｔ_ＨＡＭ）を阻害し、かつＴａｘ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を抑制することで慢性的炎症を阻害できる可能性が示唆された。

また、低用量副腎皮質ステロイド剤との併用により、Ｔｈ１サイトカインであるＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−２の産生をより効果的に阻害できることから、ＨＡＭ患者の原因細胞であるＴ_ＨＡＭを阻害し、かつＴａｘ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を抑制できる可能性が示唆された。

［実施例５］抗ヒトＣＣＲ４抗体によるＨＡＭ患者髄液細胞の抑制効果
抗ヒトＣＣＲ４抗体による、ＨＡＭ患者のＰＢＭＣの細胞増殖阻害効果、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の抑制効果およびサイトカイン産生抑制効果が確認されたことから、ＨＡＭ患者の髄液由来細胞に対する抗ヒトＣＣＲ４抗体の効果を検討した。

ＨＡＭ患者５名より採取した脳脊髄液（以下、ＣＳＦと略記する）より、髄液細胞を分離し、上述実施例１〜３の方法と同様にして、髄液細胞を１μｇ／ｍＬ 抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０存在下または非存在下で７日間培養を行い、培養後のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量（図９Ａ）および培養上清中のＩＦＮ−γ産生量（図９Ｂ）を測定した。

その結果、ＫＭ２７６０を添加したＨＡＭ患者由来髄液細胞では、いずれも薬剤非添加の髄液細胞と比べて、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量が１／４に減少しており、ＩＦＮ−γ産生量も１／２に減少していた。従って、抗ヒトＣＣＲ４抗体がＨＡＭ患者の髄液細胞のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させかつＩＦＮ−γの産生を阻害することが明らかになった。

この結果は、ＨＡＭ患者において慢性炎症所見が認められる脊髄領域において、ＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させた結果、髄液細胞の感染率を低下させ、かつＴｈ１サイトカインであるＩＦＮ−γの産生を抑制することで、細胞傷害性免疫反応を抑制できることを示唆している。

［実施例６］抗ヒトＣＣＲ４抗体によるＨＡＭ患者ＰＢＭＣの治療効果
上述実施例１、２及び４と同様にして、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０及び抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）（協和発酵キリン製）を用いてＨＡＭ患者ＰＢＭＣ（Ｎ＝１１）の自発的細胞増殖抑制効果、ＨＴＬＶ−１プロウイルス量抑制効果及びサイトカイン産生抑制効果を確認した。

その結果、抗ヒトＣＣＲ４キメラ抗体ＫＭ２７６０及び抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）は、ほぼ同様にＨＡＭ患者ＰＢＭＣの自発的細胞増殖（図１０Ａ）、ＨＴＬＶ−１プロウイルス量（図１０Ｂ）及びサイトカイン産生を阻害した（図１１Ａ−１１Ｅ）。

よって、既に上市されている抗ヒトＣＣＲ４ヒト化抗体Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）がＨＡＭ患者及びＡＣの治療薬となることが示唆された。

配列番号７：人工配列の記載；ヒト化抗体Ｈ鎖の可変領域
配列番号８：人工配列の記載；ヒト化抗体Ｌ鎖の可変領域

本発明を特定の態様を用いて詳細に説明したが、本発明の意図と範囲を離れることなく様々な変更および変形が可能であることは、当業者にとって明らかである。なお、本出願は、２０１２年７月６日付けで出願された米国仮出願（６１／６６８、６８６号）に基づいており、その全体が引用により援用される。

Claims (9)

1. 抗ＣＣ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４（ＣＣＲ４）抗体を含み、ヒトＴ細胞白血病ウイルス−１（ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ−１；ＨＴＬＶ−１、以下ＨＴＬＶ−１と略記する）関連脊髄症（ＨＴＬＶ−１ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｙｅｌｏｐａｔｈｙ；ＨＡＭ、以下、ＨＡＭと略記する）患者および無症候性ＨＴＬＶ−１キャリアー（ａｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｃａｒｒｉｅｒｓ；ＡＣ、以下ＡＣと略記する）において、ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞が産生するサイトカインの発現量を減少させるための治療剤。
2. ＨＡＭ患者のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを含む、請求項１に記載の治療剤。
3. ＨＡＭ患者のＨＴＬＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を減少させることを含む、請求項１または２に記載の治療剤。
4. ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の細胞増殖を減少させることを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の治療剤。
5. ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞がＣＣＲ４＋Ｔ細胞である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の治療剤。
6. サイトカインが、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン（ＩＬ）−２（ＩＬ−２）、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１７から選ばれるいずれか１つである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の治療剤。
7. 免疫抑制剤および抗ウイルス剤の少なくとも１つを併用することを含む請求項１〜６のいずれか１項に記載の治療剤。
8. 免疫抑制剤がプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメサゾン、ベタメサゾン、アザチオプリン、シクロスポリン、タクロリムス、ＪＡＫ阻害剤およびＮＦκＢ阻害剤から選ばれるいずれか１つの免疫抑制剤である、請求項７に記載の治療剤。
9. 低用量の免疫抑制剤を併用することを含む請求項１〜８のいずれか１項に記載の治療剤。

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