JP2018024595A - 化粧品、医薬用組成物、およびそれらの製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
また本発明によれば、ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する抗アレルギー治療用組成物、発毛または育毛用組成物、抗炎症治療用組成物および皮膚代謝促進用組成物が提供される。
採取工程では、提供動物から細胞を採取する。本方法では特に、現役の競走馬または競技馬から細胞を採取するとよい。
選別工程では、採取された細胞から間葉系幹細胞を選別する。
培養工程では、無血清培地を用いて上記の間葉系幹細胞を培養する。本方法に用いられる無血清培地は、メタバナジン酸アンモニウム、フェノールレッドおよびメルカプトエタノールをいずれも含有しないことを特徴とする。
回収工程では、上記の培養工程で生成された培養上清を、無血清培地および間葉系幹細胞から分離して回収する。
本方法の採取工程では、提供動物であるウマから細胞を採取する。ウマから幹細胞を採取する方法は特に限定されず、動物における任意の組織から幹細胞のみを採取する方法、または幹細胞以外の任意の他の生体成分とともに幹細胞を採取する方法を含み、公知の採取方法を適宜採用することができる。一例として、提供動物を殺傷せずに間葉系幹細胞を採取するため、臀部の皮下脂肪を採取することが好ましい。特に競走馬は体脂肪が少ないが、臀部の皮膚を切除して皮下脂肪を採取することで、1頭あたり数グラムの脂肪細胞を採取することができる。その後、脂肪細胞の採取患部に皮膚を移植することで、提供動物が生体のまま本方法の採取工程を行なうことができる。また、提供動物が牝馬である場合は、出産時に臍帯等から間葉系幹細胞を採取してもよい。これにより、出産時に特段の外科的行為を必要とせずに間葉系幹細胞を入手することができる。
選別工程では、上記の採取工程で採取された脂肪細胞や臍帯等の試料細胞を細かく裁断する。一方で、コラゲナーゼを含む酵素溶液を調製しておく。試料細胞を恒温槽中にて酵素溶液で処理したのち、遠心分離を行なうことで、間葉系幹細胞を含む間質血管画分(Stromal Vascular Fraction)を得る。これにより、提供動物から採取された細胞より間葉系幹細胞が選別される。以下、間葉系幹細胞を「幹細胞」と略記する場合がある。
培養工程では、選別工程で試料細胞された幹細胞、または凍結保存された後に解凍された幹細胞を用いて、培地で初代培養および必要により継代培養する。継代培養の世代間に凍結保存および解凍工程を行なってもよい。
回収工程では、培養工程で生成された培養上清を無血清培地および間葉系幹細胞から分離して回収する。培養上清は培地の上澄み液として生成されるため、市販の吸引装置を用いて培養上清を吸引して回収することができる。培養上清を回収するタイミングは特に限定されないが、例えば培地を交換するタイミングで行なうとよい。
本方法により得られる化粧品は、皮膚や毛髪に対して各種の美容効果(スキンケア効果、ヘアケア効果)を与える。毛髪としては、頭髪、体毛、睫毛、眉毛を挙げることができる。
具体的な美容効果としては、皮膚に関しては、肌に潤いを与え水分を保つ、肌の乾燥を防ぐ、肌荒れを防ぐ、肌にハリを与える、毛穴の目立ちを抑える、肌にツヤを与える、肌の肌理(きめ)を整える、目の下のクマや弛みを抑える、肌のくすみを抑える、頭皮の痒みや頭垢(ふけ)を抑える、などの効果が挙げられる。毛髪に関しては、毛髪にハリやこしを与える、毛髪にうるおいを与える、毛髪をしなやかにする、櫛どおりをよくする、毛髪にツヤを与える、などの効果が挙げられる。また、本発明にいう化粧品とはヒトの皮膚や毛髪に塗布や散布されて美容に用いられるものであれば特に限定されるものではなく、化粧水、クリーム、乳液、美容液、洗顔料などの基礎化粧品;化粧下地やチークなどのメイクアップ化粧品;シャンプー、コンディショナー、整髪料などのヘアケア製品;洗口液などのオーラルケア製品;香水、美白剤、脱毛剤などのその他化粧料を広く例示することができる。また、本発明にいう化粧品は、下記に例示するような薬効を示す薬用化粧品を含む。
より具体的には、抗アレルギー作用としては、アレルギー性鼻炎(花粉症)の改善、アレルギー性結膜炎の改善、気管支喘息の症状抑制および喘息無症状状態の長時間維持、が確認されている。
発毛および育毛作用としては、産毛の発毛、頭髪の発毛、抜け毛の低減、睫毛の伸長、睫毛の発毛、が確認されている。
抗炎症作用としては、アトピー性皮膚炎などの内因性湿疹の改善および治癒、皮膚炎(脂漏性湿疹)の治癒、虫刺されなどの接触性皮膚炎(かぶれ)の痒みおよび腫れの治癒、乾皮症(皮脂欠乏性湿疹)の治癒、その他の尋常性湿疹の治癒、が確認されている。
皮膚代謝とは、皮膚の既存の角質の代謝を意味し、外傷(傷口)の止血や治癒などの真皮の再生はこれに含まれない。具体的な皮膚代謝の促進作用としては、肌のツヤや滑らかさの向上など肌の美容効果を得ることのほか、限局性角質の増殖を低減したり、皮膚の色素細胞の異常増殖を低減したり、または外傷痕や術後痕等に過剰産生された線維組織を代謝低減させたりすることが挙げられる。そして本方法により得られる医薬用組成物による皮膚代謝の促進作用としては、中足骨胼胝腫(ウオノメおよびタコ)等の限局性角質の低減および消失、色素細胞の異常増殖に伴う痣の軽減および消失、外傷痕や術後痕の軽減、火傷や打撲痕の治癒などが確認されている。
(i)塩基性繊維芽細胞増殖因子:本発明の培養上清は皮膚内の毛細血管の血管新生を促進し、コラーゲンを分泌する繊維芽細胞の増殖を促進するため皮膚代謝促進効果を発揮し、また組織修復や神経保護の作用を有するため抗アレルギー作用や抗炎症作用を発揮すると考えられる。
(ii)上皮細胞成長因子:本発明の培養上清は、新しい皮膚細胞の創生によりシワを予防および解消し、肌をなめらかにし、また新しい皮膚細胞を再生することで、皮膚代謝促進効果を発揮すると考えられる。
(iii)トランスフォーミング効果:本発明の培養上清は、コラーゲンとエラスチンの構造を強化することで肌の弾力性を増し、肌の成長や傷の治癒を促進し、新しい細胞を生産することで、シワを防止および改善すると考えられる。
(iv)血小板由来成長因子:本発明の培養上清は、皮膚細胞の再生を促進し、コラーゲン合成を促進することで、シワを防止および改善し、毛髪の育毛を促進すると考えられる。
(v)インスリン様成長因子:本発明の培養上清は、新しい皮膚細胞の創生によりシワを予防および解消し、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸を増やすことで皮膚感触を良くし、毛根を刺激することで毛髪の育毛を促進すると考えられる。
(vi)血管内皮細胞増殖因子:本発明の培養上清は、毛根へ栄養を運ぶことで毛髪の発毛を促進し、新しい細胞を生産することでシワを防止および改善し、そして肌にエネルギーを与えることで肌ツヤを改善すると考えられる。
現役の競走馬を提供動物とし、その臀部を切開し脂肪細胞を約5g採取し幹細胞採取用の試料とした。上記試料を、1mm角程度に裁断した後、コラゲナーゼ溶液を用いて37℃で1時間処理した。次いで、処理後の当該試料を約10分間、400×gの遠心力で遠心分離し、100μmのメッシュを備えたセルストレイナーで未消化の脂肪組織片を除去した後、脂肪由来の間葉系幹細胞を含む間質血管画分を得た。
ヒト血清アルブミン、インスリン、リノール酸およびトランスフェリンを含有するとともに、メタバナジン酸アンモニウム、フェノールレッドおよびメルカプトエタノールをいずれも含有しないオリジナルの無血清培地を調製し、フラスコに収容した。上記フラスコに上述で得た分画物を播種し、37℃/5%CO2条件下で液体静置培養を行った。2日おきに培地の上澄み液(培養上清)を全量収集するとともに、フレッシュな培地に交換した。そして、位相差顕微鏡にてフラスコの底面の全面積に対し80%以上90%以下の面積に細胞が付着したことが確認された段階で培養を終了し、それまでに生成された培養上清を収集した。
提供動物を競走馬からイヌに変更して皮下脂肪を採取し、その他は上記実施例と同様の手法で幹細胞を培養した。
提供動物を競走馬からヒトに変更して皮下脂肪を採取し、その他は上記実施例と同様の手法で幹細胞を培養した。
被検体動物は、皮膚が細菌感染したイヌであり、図1(a)に示すように皮膚に炎症が見られた。この被検体動物の炎症患部に約1日間隔で実施例組成物を噴霧したところ、噴霧開始から1週間後には図1(b)に示すように炎症患部の腫れや赤味が消失した。
このほか、同一犬種のイヌ15頭をサンプルとして実施例組成物を約1日間隔で2週間に亘って体表や口腔内に噴霧したところ、以下が確認された。
・産毛の発毛
・雲脂(ふけ)が出なくなった
・体毛がしっとりした
・口臭が抑えられた
・上顎に発生して鼻まで貫通していた重度の口腔内顎腫症が改善した
・湿疹が完治した
以上、本実施例によれば、本発明の発毛効果および抗炎症治療効果が確認された。
被検体動物(被験者)は、頭髪が薄くなった中年男性(ヒト)である。図2(a)に示すように頭頂部の頭髪が薄くなっていたところ、頭部に実施例組成物を約1日間隔で塗布したところ、塗布開始から約8ヶ月後には図2(b)に示すように顕著な発毛が見られ頭頂部の頭髪の本数密度が劇的に増大した。
本実施例によれば、本発明の発毛効果および育毛効果が確認された。
被検体動物(被験者)は、抜け毛に悩む成人女性(ヒト)である。頭部に実施例組成物を毎日塗布して抜け毛の本数を確認した。図3は、シャンプー時、ドライヤー時およびこれらの合計の抜け毛本数の経時推移を示すグラフである。塗布開始から3日目の2月3日において抜け毛の本数はシャンプー時:75本、ドライヤー時:50本であったところ、塗布開始から5日目の2月5日には抜け毛の本数はシャンプー時:70本、ドライヤー時:48本となり、塗布開始から13日目の2月13日において抜け毛の本数はシャンプー時:60本、ドライヤー時:38本と減少した。更に塗布開始から21日目の2月21日においては、抜け毛の本数はシャンプー時:32本、ドライヤー時:30本と顕著に減少した。
本実施例によれば、本発明の育毛効果(抜け毛の低減)が確認された。
被検体動物(被験者)は、睫毛が短いことに悩む成人女性(ヒト)である。目周りに実施例組成物を毎日塗布した。図4(a)は塗布開始時(2016年1月29日)の状態である。図4(b)は塗布4日目(2016年2月2日)の状態であり、図4(c)は塗布7日目(2016年2月5日)の状態であり、図4(d)は塗布11日目(2016年2月8日)の状態である。このように、塗布開始から4日目には一部の睫毛が伸長したことが確認され(図4(b))、7日目には睫毛が全体的に長く伸長したことが確認された。
また、睫毛が長くなっただけでなく本数密度も向上し、更に睫毛には根元から先端にかけてハリとコシが増えたため、図4(c)や図4(d)に示すように、睫毛が上向きにピンと立ち上がるように生えるようになったことが確認された。
更に、睫毛の育毛効果だけでなく、実施例組成物の塗布前後で比較して、瞳がよりくっきりし、二重瞼がよりくっきりとしたことが確認された。
本実施例によれば、本発明の育毛効果(睫毛の伸長)および瞼(肌)のハリの増大効果が確認された。
被検体動物(被験者)は30代の男性(ヒト)である。図5(a)に示すように頭部に目立って発生していた術後痕に対して実施例組成物を毎日噴霧したところ、噴霧開始より14日目には図5(b)に示すように術後痕は周囲の皮膚と色が同化するとともに痕自体も小さくなり、目立ちが低下した。
本実施例によれば、術後痕の軽減すなわち皮膚代謝促進効果が確認された。
被検体動物(被験者)は40代の女性(ヒト)である。図6(a)に示すように足の小指横に発生していたウオノメに対して実施例組成物を毎日噴霧したところ、噴霧開始より6日目に痛みが消えるとともにウオノメが消失していた(図6(b)参照)。その後、8ヶ月間が経過してもウオノメの再発はなく正常な状態を維持していた(図6(c)参照)。
本実施例によれば、限局性角質の低減すなわち皮膚代謝促進効果が確認された。
被検体動物(被験者)は、アトピー性皮膚炎を発症している男子児童(ヒト)である。図7(a)に示すように、実施例組成物を噴霧する前の2016年1月14日には、ただれを伴う広範囲の炎症部が腋の下に確認された。実施例組成物を毎日噴霧したところ、10日目の同年1月25日にはただれが鎮静化しはじめ(図7(b)参照)、65日目の同年3月20日には炎症が顕著に低下し(図7(c)参照)、そして94日目の同年4月18日には炎症がほぼ見られず顕著な治癒が見られた。
以上より、本実施例によれば、本発明の抗炎症作用が確認された。
被検体動物(被験者)は零歳児(ヒト)である。図9(a)に示すように、本発明の適用前は胸の広範囲に脂漏性湿疹が見られていた。かかる被検体に対し、実施例組成物を毎日朝と夕方に各1回噴霧したところ、噴霧1日目において図9(b)に示すように湿疹の赤味が低減し、そして驚くべきことに噴霧2日目には図9(c)に示すように消失した。
本実施例によれば、本発明の抗炎症作用が確認された。
被検体動物(被験者)は、花粉症を発症している、男女比を6:4とする20人の成人(ヒト)であり、以下の条件で実施例組成物を噴霧した。被験者の平均年齢は45.9歳であり、平均花粉症歴は7.8年であった。すなわち、花粉症に長年悩んでいる被験者を対象とした。モニター期間中は他の薬剤の服用(併用)は行わなかった。
(2)被験者は、右目および左鼻の周り(順不同)にそれぞれ1回〜2回の噴霧を行なった。
(3)被験者は、噴霧後、各々の箇所および周辺を指で軽くマッサージして馴染ませた。
(4)噴霧する日数は3日以上、23日以下とし、症状の改善状態に応じて被験者ごとの任意とした。
(1)ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する化粧品。
(2)前記間葉系幹細胞が、競走馬または競技馬から採取された幹細胞または前記幹細胞を継代培養して得られた継代幹細胞である上記(1)に記載の化粧品。
(3)メタバナジン酸アンモニウム、フェノールレッドおよびメルカプトエタノールをいずれも含有しないことを特徴とする上記(1)または(2)に記載の化粧品。
(4)ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する抗アレルギー治療用組成物。
(5)ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する発毛または育毛用組成物。
(6)ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する抗炎症治療用組成物。
(7)ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する皮膚代謝促進用組成物。
(8)競走馬または競技馬から細胞を採取する採取工程;採取された前記細胞から間葉系幹細胞を選別する選別工程;メタバナジン酸アンモニウム、フェノールレッドおよびメルカプトエタノールをいずれも含有しない無血清培地を用いて前記間葉系幹細胞を培養する培養工程;および前記培養工程で生成された培養上清を前記無血清培地および前記間葉系幹細胞から分離して回収する回収工程;を含む、化粧品または医薬用組成物の製造方法。
また本発明によれば、競走馬の脂肪由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する抗アレルギー治療用組成物、発毛または育毛用組成物、抗炎症治療用組成物および皮膚代謝促進用組成物が提供される。
Claims (8)
- ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する化粧品。
- 前記間葉系幹細胞が、競走馬または競技馬から採取された幹細胞または前記幹細胞を継代培養して得られた継代幹細胞である請求項1に記載の化粧品。
- メタバナジン酸アンモニウム、フェノールレッドおよびメルカプトエタノールをいずれも含有しないことを特徴とする請求項1または2に記載の化粧品。
- ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する抗アレルギー治療用組成物。
- ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する発毛または育毛用組成物。
- ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する抗炎症治療用組成物。
- ウマ由来の間葉系幹細胞を培養して得られた培養上清を含有する皮膚代謝促進用組成物。
- 競走馬または競技馬から細胞を採取する採取工程;
採取された前記細胞から間葉系幹細胞を選別する選別工程;
メタバナジン酸アンモニウム、フェノールレッドおよびメルカプトエタノールをいずれも含有しない無血清培地を用いて前記間葉系幹細胞を培養する培養工程;および
前記培養工程で生成された培養上清を前記無血清培地および前記間葉系幹細胞から分離して回収する回収工程;
を含む、化粧品または医薬用組成物の製造方法。
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