JP2018023325A - 培養方法 - Google Patents

Abstract

【課題】培養装置を大型化させることなく処理液の流路の無菌化を実現できる培養方法を提供する。【解決手段】培養方法は、細胞の培養に用いられる第１の処理液９を、流路２２を介してフラスコ５に供給する第１供給工程と、細胞の培養に用いられ、第１の処理液９とは異なる第２の処理液９を、流路２２を介してフラスコ５に供給する第２供給工程と、を備え、第１供給工程と第２供給工程との間に流路２２を交換する。【選択図】図２

Description

本発明は、フラスコ内で細胞を培養するための培養方法に関する。

近年、拡張型心筋症等の心疾患を治療するための新たな方法として、筋芽細胞シートを用いた治療方法が医薬品医療機器等法で承認された。筋芽細胞シートは、患者自身の大腿部等から採取した筋肉組織に含まれる筋芽細胞を培養して作製される。この筋芽細胞シートを疾患の心臓に貼り付けると、筋芽細胞シートから心臓にサイトカイン等の治療促進物質が供給され、この治療促進物質の作用により、心臓の治癒機能を高めることができる。このとき、筋芽細胞シートは患者自身の細胞（自家細胞）から作製されていることから、心臓に貼り付けても拒絶反応を起こすことがないという点でも優れた治療方法であるといえる。

一般に、動物細胞のほとんどは、培養容器内の培養液中で静置培養すると培養容器の内壁面に接着する。このような接着性を有する細胞を接着性細胞と呼ぶ。この接着性細胞から、上述の細胞シートを作製するためには大量の細胞が必要となる。そのため、細胞シートは、一例として、以下のようにして作製される。まず、患者から目的の細胞を含む組織を採取する。次に、細胞の培養を行うセルプロセッシングセンター（ＣＰＣ）において、その組織を前処理して、目的の細胞を得た後、この細胞の培養を行う。培養された細胞は、細胞シート形成までは凍結状態で保存し、必要に応じて輸送をする。細胞シートを形成する際には、細胞を融解し、所定の培養容器（例えば細胞培養用フラスコや温度応答性培養容器など）で培養する。次いで、培養容器の底部に接着した細胞を所定の手段（例えば低温化や酵素法）で剥離することにより細胞シートが作製される。その後、作製された細胞シートは、患者の患部に貼り付けられる。

ここで、接着性細胞の培養は以下のようにして行われる。なお、大量に細胞が必要な場合はフラスコを使用することが多い。まず、接着性培養容器となるフラスコに接着性細胞を含んだ細胞液及び培養液（培地）を注入し、接着性細胞が培養液中に均一に分散するよう均一化処理を行う（播種操作）。その後、所定の温度及び二酸化炭素濃度の環境において培養する。このとき、培養された接着性細胞はフラスコ内で沈殿し、フラスコの内面に接着する。培養中には、培養液中の老廃物を除去し新たな栄養分を導入するため、所定の日数（例えば３日）ごとに培養液の交換が行われる（培地交換操作）。この培地交換操作は、まず、フラスコを傾けて培養液をフラスコから排出するデカンテーションや、ピペット等を用いた吸引により、フラスコ内から培養液を除去する。その後、フラスコ内に新たな培養液を注入する。その後、再度所定の温度及び二酸化炭素濃度の環境において培養する。上記の操作を繰り返すことにより、接着性細胞が培養される。ここで、細胞が増殖しすぎて細胞の濃度が密になると、細胞の形状、形態、性能の変化や、変異が起こり、細胞の正常性が低下することがある。したがって、接着性細胞を定期的に顕微鏡で観察し、接着性細胞の濃度が密になっていれば、継代培養を行う。

継代培養では、まず、デカンテーション又は吸引により、フラスコ内から培養液を除去する。次に、洗浄液をフラスコ内に注入し均一化処理を行い、その後、デカンテーション又は吸引により、フラスコから洗浄液を除去する（洗浄操作）。この洗浄操作は、必要に応じて複数回繰り返される。その後、剥離液をフラスコ内に注入し、所定の温度で所定の時間保持することで、剥離液に含まれる酵素の反応によりフラスコの内面に接着していた接着性細胞が剥離される（剥離操作）。その後、フラスコ内に反応停止液を注入して剥離液の酵素の反応を停止し、培養された細胞を回収する（回収操作）。回収された細胞は、その濃度が調整されて、培養液とともにフラスコに注入され、さらに培養される。

以上で説明した接着性細胞の培養における各操作は、全て作業者の手により行われていることから、各操作に時間がかかるという問題がある。操作の種類や操作すべきフラスコの数にもよるが、一つの操作を行うために数時間から半日程度を要することもある。この場合、最初に操作が行われたフラスコと最後に操作が行われたフラスコとでは、当該操作前及び操作後の工程の経過時間に数時間から半日程度の差が生じることになり、各フラスコ間での培養条件を同一にすることができなくなる。この場合、各フラスコで培養された接着性細胞の間に、形状、形態、性能等において差が生じてしまう虞がある。また、各操作に時間がかかると、作業者の人件費がかかり接着性細胞シートの製造コストが上昇するという問題もある。さらに、各操作が作業者の手で行われる場合、何らかのヒューマンエラーが生じる可能性が排除できない。

ところで、細胞の培養のための操作の一部を、装置を用いて自動で行うことが提案されている。特許文献１は、ターンテーブル上でシャーレを移動させる機能、溶液注入機能、吸引方式での排液機能、剥離機能、インキュベータ機能、制御機能を有し、細胞の継代を逐次自動で行う装置を開示している。特許文献２は、インキュベータ内に上下一組の円板を水平に配置し、下側の円板に細胞と培養液を入れたシャーレを保持し、上側円板に上蓋を保持した培養装置を開示している。この装置では、シャーレを、上蓋がかぶせられた状態と、上蓋をずらされてシャーレ内が一部露出した状態と、にすることができ、シャーレ内に培養液交換手段を挿入して培養液を交換して細胞培養を継続することができるようになっている。

特公平３−５７７４４号公報 特許第５６４８７６５号公報

細胞の培養に用いられる装置においては、培養されるべき細胞に細菌や他の種類の細胞が混入することを防止するために、細胞の培養に用いられる各種処理液を供給するための流路を無菌化しておくことが必要である。そして、特許文献１、特許文献２に開示された装置では、細胞の培養に用いられる各種処理液の供給の流路の無菌化手段については開示されていない。一般に、無菌化は、蒸気滅菌、薬剤滅菌、ガンマ線滅菌、ガス滅菌等の方法により行われる。これらの方法により滅菌を行う場合、蒸気発生装置、薬剤供給装置、ガンマ線照射装置、ガス発生装置等の大掛かりな装置が必要である。したがって、細胞の培養装置に滅菌装置を付加しようとすると、培養装置そのものが大型化及び複雑化する課題がある。また、これにともなって、培養装置のコストも上昇する。

本発明は、以上の点を考慮してなされたものであり、培養装置を大型化させることなく処理液の流路の無菌化を実現できる細胞の培養方法を提供することを目的とする。

本発明による培養方法は、
フラスコ内で細胞を培養する培養方法であって、
前記細胞の培養に用いられる第１の処理液を、流路を介して前記フラスコに供給する第１供給工程と、
前記細胞の培養に用いられ、前記第１の処理液とは異なる第２の処理液を、流路を介して前記フラスコに供給する第２供給工程と、を備え、
前記第１供給工程と前記第２供給工程との間に前記流路を交換する。

本発明による培養方法は、
フラスコ内で細胞を培養する培養方法であって、
前記細胞の培養に用いられる処理液を、流路を介して前記フラスコに供給する供給工程を備え、
前記細胞の培養の終了後に前記流路を交換する。

本発明によれば、培養装置を大型化させることなく処理液の流路の無菌化を実現できる培養方法を提供することができる。

図１は、本発明の一実施の形態を説明するための図であって、クリーンベンチ又は安全キャビネット内に配置された培養装置を示す斜視図である。 図２は、フラスコ及び各処理液源が組み込まれた状態で培養装置を示す図である。 図３Ａは、培養装置におけるフラスコの向きの変更動作を説明するための図である。 図３Ｂは、培養装置におけるフラスコの向きの変更動作を説明するための図である。 図３Ｃは、培養装置におけるフラスコの向きの変更動作を説明するための図である。 図４は、培養装置における均一化処理動作を説明するための図である。 図５は、培養装置におけるデカンテーション動作を説明するための図である。 図６は、培養装置の一変形例を示す図である。

以下、図面を参照して本発明の一実施の形態について説明する。なお、本明細書に添付する図面においては、図示と理解のしやすさの便宜上、適宜縮尺及び縦横の寸法比等を、実物のそれらから変更し誇張してある。

本明細書において用いる、形状や幾何学的条件並びにそれらの程度を特定する、例えば、「平行」、「直交」、「同一」等の用語や長さや角度の値等については、厳密な意味に縛られることなく、同様の機能を期待し得る程度の範囲を含めて解釈することとする。

図１〜図６は、本発明による一実施の形態を説明するための図である。このうち図１は、クリーンベンチ又は安全キャビネット内に配置された培養装置を示す図であり、図２は、フラスコ及び各処理液源が組み込まれた状態で培養装置を示す図である。

培養装置１０は、フラスコ５内で動物（例えばヒト）の細胞を培養するための装置である。培養装置１０は、一例として、ヒトの接着性細胞を培養するために用いることができる。本実施の形態の培養装置１０は、フラスコ５へのキャップの着脱、接着性細胞の培養に用いられる各種の処理液９のフラスコ内への注入、処理液９をフラスコ５内で均一に分散させる均一化処理、処理液９をフラスコから排出するデカンテーション処理を、図示しない制御部により制御することができるように構成されている。これにより、接着性細胞の培養のための操作の一部を、培養装置１０により自動で行うことができる。

フラスコ５は、その内部に接着性細胞及び処理液９を収容可能に構成されている。図２に示された例では、フラスコ５は、例えば、透明なプラスチックやガラス等で形成されており、全体として扁平形状を有した容器である。フラスコ５の内面には、コロナ処理、プラズマ処理等の親水性を向上させる処理を行っておくことが好ましい。フラスコ５は、開口部６を有しており、この開口部６を介して、細胞液や処理液９を注入及び排出することができる。フラスコ５の開口部６はキャップにより閉塞可能に構成されている。とりわけ、本実施の形態のフラスコ５では、開口部６は、スクリューキャップにより閉塞可能となるように、その外周面に図示しないネジ部が形成されている。そして、スクリューキャップの内周面に設けられたネジが、開口部６の外周面に設けられたネジと螺合することにより、スクリューキャップがフラスコ５の開口部６を閉塞する。なお、フラスコ５の開口部６を閉塞するキャップは、スクリューキャップに限られず、他の適宜のキャップを用いることもできる。

本実施の形態の培養装置１０は、クリーンベンチ又は安全キャビネット１内に配置されて使用される。クリーンベンチ又は安全キャビネット１は、当該クリーンベンチ又は安全キャビネット１内に外部の塵埃、細菌、ウィルス等が侵入すること（コンタミネーション）を防止し、また、当該クリーンベンチ又は安全キャビネット１内で保管、操作される細菌、ウィルス等が外部に流出すること（バイオハザード）を防止する箱状の設備である。クリーンベンチ又は安全キャビネット１は、当該クリーンベンチ又は安全キャビネット１内の雰囲気（例えば空気）を所定の清浄度に維持する機能を有する。このため、クリーンベンチ又は安全キャビネット１には、清浄化された雰囲気を導入するための雰囲気導入口が設けられ、雰囲気導入口には、導入される雰囲気を清浄化するためのフィルターが設けられている。フィルターとしては、例えばＨＥＰＡ（High Efficiency Particulate Air）フィルターや、ＵＰＬＡ（Ultra Low Penetration Air）フィルター等を用いることができる。クリーンベンチ又は安全キャビネット１には、ガラス板等の透明板で形成された閉鎖部材３が設けられている。クリーンベンチ又は安全キャビネット１内の装置等を操作する場合には、この閉鎖部材３を上方にスライドさせ、これにより形成された隙間から作業者がクリーンベンチ又は安全キャビネット１内に手を挿入して操作を行う。

図２に示された例では、培養装置１０は、フラスコ５を保持する保持装置１２と、接着性細胞の培養に用いられる処理液９を保持した処理液源８から処理液９を計量してフラスコ５に供給する分注機構２０と、を備えている。また、図示された例では、培養装置１０は、フラスコ５の開口部６に対するキャップの開閉を行うキャップ開閉装置１４も有している。

図示された例において、処理液源８は、接着性細胞の培養に用いられる処理液９を保持する容器である。一例として、処理液源８は、処理液９が収容されたボトルである。処理液９としては、例えば、接着性細胞が成長するための栄養分を含んだ培養液（培地）、継代培養を行う際に培養液の成分を除去するための洗浄液、フラスコ５の底面に接着した細胞を当該底面から剥離するための酵素を含んだ剥離液、剥離液に含まれる酵素の反応を停止させる反応停止液等を挙げることができる。図２に示された例では、培養装置１０は、二つの処理液源８を組み込むことができるように構成されている。後述するように、本実施の形態の培養装置１０において、一つの工程で使用される処理液９は最大で２種類である。したがって、培養装置１０に、２つの処理液源８を組み込むことができるように構成することで、各工程において必要とされる処理液９を使用可能にしつつ、培養装置１０を小型化及び簡略化することができる。なお、これに限られず、培養装置１０は、三つ以上の処理液源８を組み込み可能に構成されていてもよい。また、培養装置１０は、処理液源８内の処理液９の残量を検知するセンサを有していてもよい。例えば、処理液源８が透明なボトルである場合、光電管を用いた液面センサを設けておき、この液面センサを用いて処理液源８内の処理液９の残量が少なくなったことを検知するようにしてもよい。

保持装置１２は、フラスコ５を、その向きを可変に保持する機能を有している。そのため、保持装置１２は、フラスコ５を、少なくとも直交する２軸の周りにそれぞれ回転することができる図示しない駆動装置を有している。保持装置１２は、フラスコ５の向きを変化させることにより、少なくとも、後述する均一化処理及びデカンテーション処理を行うことができるように構成されている。なお、フラスコ５の具体的な向きの変更操作については後述する。

分注機構２０は、接着性細胞の培養に用いられる処理液９を保持した処理液源８から処理液９を計量してフラスコ５に供給する機構である。そのため、分注機構２０は、処理液源８からフラスコ５まで延びる流路２２と、処理液９を計量する計量装置２４と、を有している。上述のように、図２に示された例では、培養装置１０は、二つの処理液源８を組み込むことができるように構成されている。そのため、図示された培養装置１０は、各処理液源８に対応して、第１の分注機構２０１と第２の分注機構２０２とを有している。また、第１の分注機構２０１は、第１の流路２２１及び第１の計量装置２４１を有し、第２の分注機構２０２は、第２の流路２２２及び第２の計量装置２４２を有している。図示された例では、第１の分注機構２０１と第２の分注機構２０２とは同一に構成されている。したがって、以下の説明では、特に断りがない限り、分注機構２０として説明した内容は、第１の分注機構２０１及び第２の分注機構２０２のいずれにも当てはまるものとし、流路２２として説明した内容は、第１の流路２２１及び第２の流路２２２のいずれにも当てはまるものとし、計量装置２４として説明した内容は、第１の計量装置２４１及び第２の計量装置２４２のいずれにも当てはまるものとする。

流路２２は、処理液源８からフラスコ５へ延びるチューブ状の部材であり、当該流路内を通って処理液９が流れることができる。本実施の形態の流路２２は、分岐点２３で分岐するように構成されており、処理液源８及び分岐点２３の間に配置された第１部分２２ａと、分岐点２３及びフラスコ５の間に配置された第２部分２２ｂと、分岐点２３及び計量装置２４の間に配置された第３部分２２ｃと、有している。言い換えると、処理液源８及び分岐点２３の間に配置された第１部分２２ａと、分岐点２３及びフラスコ５の間に配置された第２部分２２ｂと、分岐点２３及び計量装置２４の間に配置された第３部分２２ｃと、が分岐点２３で接続されることにより、第１部分２２ａ、第２部分２２ｂ及び第３部分２２ｃを含む流路２２が形成されている。また、流路２２の第１部分２２ａ、第２部分２２ｂ及び第３部分２２ｃは、分岐点２３で互いに連通している。流路２２は、例えば、樹脂やゴム等の材料で形成されている。一例として、使い捨て可能な流路２２の材料として、ガス滅菌、放射線滅菌等が可能な樹脂製材料を用いることができる。

本実施の形態の流路２２は、使用後に廃棄される使い捨てとされている。言い換えると、流路２２は、使用後に洗浄、滅菌等が行われて再使用されることがない。一例として、流路２２は、製造段階で滅菌されパッケージ内に密封された状態で供給され、このパッケージを開封して流路２２を培養装置１０に組み込む。培養装置１０において、フラスコ５内で培養される接着性細胞の種類が変わるごとに、及び／又は、処理液９の種類が変わるごとに、流路２２は培養装置１０から取り外され廃棄される。すなわち、流路２２は使い捨てられる。その後、新たな流路２２がパッケージから取り出され、培養装置１０に組み込まれる。これにより、培養装置１０の流路２２が交換される。なお、フラスコ５内で培養される接着性細胞の種類が変わることは、一つの接着性細胞の培養が終了することでもある。したがって、フラスコ５内で培養される接着性細胞の種類が変わるごとに流路が交換されることは、接着性細胞の培養の終了後に流路２２を交換することをも意味する。

流路を、フラスコ内で培養される細胞の種類が変わるごとに、及び／又は、処理液の種類が変わるごとに、蒸気滅菌、薬剤滅菌、ガンマ線滅菌、ガス滅菌等の公知の方法により滅菌し再使用するものとすると、培養装置は、蒸気発生装置、薬剤供給装置、ガンマ線照射装置、ガス発生装置等の大掛かりな滅菌装置を備える必要がある。これにより培養装置が大型化及び複雑化する。これに対して、本実施の形態の培養装置１０では、処理液９の流路２２として、使い捨ての無菌化された流路２２を用いることにより、使用後に流路２２を滅菌する必要がないので、培養装置１０から大掛かりな滅菌装置を省くことができる。したがって、簡単な構成により処理液９の流路２２を無菌化することができる。これにより、培養装置１０を小型化、簡略化することができる。また、このことは、培養装置１０のコストダウンにも貢献する。

なお、接着性細胞の種類が変わるとは、細胞を採取された持ち主の患者が変わるとき、細胞を採取した部位が変わるとき、及び、培養装置１０で新たに接着性細胞の培養を始めるとき、を含む。

計量装置２４は、流路２２を介して処理液源８からフラスコ５へ供給される処理液９を計量する装置である。図２に示された例では、計量装置２４は、シリンジ２５と、シリンジ２５内にシリンジ２５に対して摺動可能に挿入されるピストン２６と、を有している。シリンジ２５は、先端側開口２５ａ及び後端側開口２５ｂを有している。シリンジ２５の先端側開口２５ａは、流路２２の第３部分２２ｃに接続されて第３部分２２ｃと連通している。また、ピストン２６は、シリンジ２５の後端側開口２５ｂを介してシリンジ２５内に挿入される。図示された例では、シリンジ２５の内面とピストン２６により、処理液９を計量するシリンジ室２７が画成される。また、計量装置２４は、ピストン２６をシリンジ２５に対して摺動移動させる図示しない駆動装置を有している。

図２に示された例では、計量装置２４のシリンジ２５及びピストン２６は、いずれも使い捨てとされている。言い換えると、シリンジ２５及びピストン２６は、使用後に洗浄、滅菌等が行われて再使用されることがない。一例として、シリンジ２５及びピストン２６は、製造段階で滅菌されパッケージ内に密封された状態で供給され、このパッケージを開封してシリンジ２５及びピストン２６を培養装置１０に組み込む。培養装置１０において、フラスコ５内で培養される細胞の種類が変わるごとに、及び／又は、処理液９の種類が変わるごとに、シリンジ２５及びピストン２６は培養装置１０から取り外され廃棄される。すなわち、シリンジ２５及びピストン２６は使い捨てられる。その後、新たなシリンジ２５及びピストン２６がパッケージから取り出され、培養装置１０に組み込まれる。これにより、培養装置１０のシリンジ２５及びピストン２６が交換される。とりわけ図示された例では、シリンジ２５及びピストン２６は、流路２２とともに使い捨てられる。すなわち、シリンジ２５及びピストン２６は、流路２２が使い捨てられるタイミングで、流路２２とともに使い捨てられる。

図２に示された分注機構２０は、流路２２の第１部分２２ａの途中で第１部分２２ａを閉塞可能な第１ピンチバルブ２８ａと、第２部分２２ｂの途中で第２部分２２ｂを閉塞可能な第２ピンチバルブ２８ｂと、を有している。ピンチバルブ２８ａ，２８ｂは、閉じた状態において流路２２の部分２２ａ，２２ｂを閉塞し、開いた状態において流路２２の部分２２ａ，２２ｂを開放する。

このような分注機構２０を用いて処理液源８から処理液９を計量してフラスコ５へ供給するには、まず、計量装置２４の駆動装置によりピストン２６をシリンジ２５内に押し込んでシリンジ室２７の容積を最小にし、第１ピンチバルブ２８ａが開いた状態で第２ピンチバルブ２８ｂを閉じて流路２２の第２部分２２ｂを閉塞する。次に、計量装置２４の駆動装置によりピストン２６をシリンジ２５内で所定量分引き出すと、流路２２の第１部分２２ａ及び第３部分２２ｃを介して、処理液源８からシリンジ室２７内へ所定量の処理液９が流入する。次に、第１ピンチバルブ２８ａを閉じて流路２２の第１部分２２ａを閉塞し、第２ピンチバルブ２８ｂを開いて流路２２の第２部分２２ｂを開放する。その後、計量装置２４の駆動装置によりピストン２６をシリンジ室２７の容積が最小になるまでシリンジ２５内に押し込むと、流路２２の第３部分２２ｃ及び第２部分２２ｂを介して、シリンジ室２７からフラスコ５内へ所定量の処理液９を注入することができる。

キャップ開閉装置１４は、フラスコ５の開口部６に対するキャップの開閉を行うものである。図２に示された例では、キャップはスクリューキャップとして構成されており、スクリューキャップの内周面に設けられたネジが、開口部６の外周面に設けられたネジと螺合することにより、スクリューキャップがフラスコ５の開口部６を閉塞する。このため、図示された例では、キャップ開閉装置１４は、キャップを把持し、当該キャップを開方向及び閉方向のいずれにも回転させることができるように構成されている。また、キャップ開閉装置１４は、フラスコ５からキャップを取外した後に退避できるよう、上下方向に移動可能に構成されている。

次に、上述した培養装置１０を用いた細胞の培養方法について説明する。

（播種工程）
まず、培養装置１０に、フラスコ５、培養液が収容されたボトル（処理液源８）、流路２２、計量装置２４のシリンジ２５及びピストン２６、を培養装置１０に組み込む。フラスコ５は、開口部６を有しており、この開口部６を介して、細胞液や処理液９を注入及び排出することができる。本実施の形態では、フラスコ５の開口部６はスクリューキャップにより閉塞されている。培養液は、本実施の形態における接着性細胞の培養に用いられる処理液９の一例であり、接着性細胞が成長するための栄養分を含んでいる。流路２２は、プラスチックやゴム等の材料で形成されたチューブ状の部材である。流路２２は、分岐点２３で分岐するように構成されており、処理液源８及び分岐点２３の間に配置される第１部分２２ａと、分岐点２３及びフラスコ５の間に配置される第２部分２２ｂと、分岐点２３及び計量装置２４の間に配置される第３部分２２ｃと、有している。流路２２の第１部分２２ａ、第２部分２２ｂ及び第３部分２２ｃは、分岐点２３で互いに連通している。シリンジ２５は先端側開口２５ａを有しており、先端側開口２５ａは、流路２２の第３部分２２ｃに接続されて第３部分２２ｃと連通している。本実施の形態では、流路２２、シリンジ２５及びピストン２６は、いずれも使い捨てとされている。流路２２、シリンジ２５及びピストン２６は、製造段階で滅菌されパッケージ内に密封された状態で供給され、このパッケージを開封して培養装置１０に取り付けられる。図２に示された例では、流路２２の第１部分２２ａの分岐点２３と反対側の端部が処理液源８内の培養液中に配置される。

培養装置１０は、キャップ開閉装置１４により、フラスコ５の開口部６を閉塞しているスクリューキャップをフラスコ５から取り外す。具体的には、培養装置１０が、キャップ開閉装置１４を下降させ、キャップ開閉装置１４でスクリューキャップを把持する。培養装置１０が、キャップ開閉装置１４のキャップ把持部を回転させてスクリューキャップをフラスコ５から取り外す。その後、培養装置１０は、キャップ開閉装置１４を上昇させ、フラスコ５からキャップ開閉装置１４を退避させる。その後、培養装置１０は、流路２２の第２部分２２ｂの分岐点２３と反対側の端部を、フラスコ５の開口部６内に配置する。

培養装置１０は、フラスコ５に接着性細胞液及び培養液を供給する。培養液は、分注機構２０を用いてフラスコ５に供給される。培養装置１０は、まず、計量装置２４の駆動装置によりピストン２６をシリンジ２５内に押し込んでシリンジ室２７の容積を最小にしておき、第１ピンチバルブ２８ａが開いた状態で第２ピンチバルブ２８ｂを閉じて流路２２の第２部分２２ｂを閉塞する。次に、培養装置１０が、計量装置２４の駆動装置によりピストン２６をシリンジ２５内で所定量分引き出すと、流路２２の第１部分２２ａ及び第３部分２２ｃを介して、処理液源８からシリンジ室２７内へ所定量の培養液が流入する。次に、培養装置１０が、第１ピンチバルブ２８ａを閉じて流路２２の第１部分２２ａを閉塞し、第２ピンチバルブ２８ｂを開いて流路２２の第２部分２２ｂを開放する。その後、培養装置１０が、計量装置２４の駆動装置によりピストン２６をシリンジ室２７の容積が最小になるまでシリンジ２５内に押し込むと、流路２２の第３部分２２ｃ及び第２部分２２ｂを介して、シリンジ室２７からフラスコ５内へ所定量の培養液を注入することができる。

細胞液は、培養すべき接着性細胞を含んだ懸濁液である。接着性細胞液は、ピペット等の器具を用いて作業者が注入することができる。また、これに限られず、培養液と同様に分注機構２０を用いてフラスコ５に供給されてもよい。接着性細胞液を作業者がフラスコ５に注入する場合、播種工程では、一つの分注機構のみを用いる。したがって、培養装置１０には、流路２２及び計量装置２４として、第１の流路２２１及び第１の計量装置２４１、又は、第２の流路２２２及び第２の計量装置２４２のいずれかのみを取り付けるだけで良い。また、接着性細胞液を分注機構２０を用いて注入する場合、播種工程では、二つの分注機構を用いる。したがって、培養装置１０には、流路２２及び計量装置２４として、第１の流路２２１及び第１の計量装置２４１、並びに、第２の流路２２２及び第２の計量装置２４２の両方を取り付ける。

その後、培養装置１０は、流路２２の第２部分２２ｂの分岐点２３と反対側の端部を、フラスコ５の開口部６から退避させ、キャップ開閉装置１４により、フラスコ５の開口部６をスクリューキャップで閉塞する。具体的には、培養装置１０は、キャップ開閉装置１４を下降させ、キャップ把持部を回転させてスクリューキャップでフラスコ５の開口部６を閉塞する。その後、培養装置１０は、スクリューキャップの把持を解除し、キャップ開閉装置１４を上昇させて、フラスコ５からキャップ開閉装置１４を退避させる。

次に、培養装置１０は、細胞液と培養液とを混合し、細胞液中に含まれる細胞を培養液中に均一に分散させるために、均一化処理を行う。図３Ａ〜図４を参照して、この均一化処理について説明する。本実施の形態では、均一化処理及び後述のデカンテーション処理におけるフラスコ５の向きの変更は保持装置１２により行われるが、図３Ａ〜図５では保持装置１２の図示は省略している。また、図３Ａ〜図４では、フラスコ５の開口部６はキャップで閉塞されている。

図３Ａに示された例では、フラスコ５は、キャップで閉塞された開口部６が上方を向くように位置している。図３Ａ〜図５において、斜線部は、フラスコ５内の細胞液と培養液との混合液を示している。ここで、培養装置１０は、駆動装置により保持装置１２を駆動して、保持装置１２で保持されたフラスコ５を図３Ａの矢印に沿って回転させ、フラスコ５の向きを変更する。これにより、フラスコ５は、図３Ｂに示されているように、キャップで閉塞された開口部６が側方を向くようにして位置する。次に、培養装置１０は、駆動装置により保持装置１２を駆動して、保持装置１２で保持されたフラスコ５を図３Ｂの矢印に沿って回転させ、フラスコ５の向きを変更する。これにより、フラスコ５は、図３Ｃに示されているように、キャップで閉塞された開口部６が側方を向き、フラスコ５を構成する面のうちの最も大きな面積を有する一対の面が上方及び下方を向くようにして位置する。

次に、培養装置１０は、図４に示すように、駆動装置により保持装置１２を駆動して、水平方向と平行をなす軸を中心としてフラスコ５を揺動させる。これにより、細胞液中に含まれる細胞を培養液中に均一に分散させることができる。

均一化処理がされたフラスコ５は、インキュベータ等の保管庫に移され、所定の温度及び所定の二酸化炭素濃度に保たれて接着性細胞の培養が行われる。一例として、インキュベータ内で、温度３７℃、二酸化炭素濃度５％に保たれるようにすることができる。細胞の培養中に、細胞は培養液中で沈殿し、フラスコ５の底面に接着する。

以上のようにして、播種工程では、フラスコ５からのキャップの取外し、フラスコ５内への培養液の供給、フラスコ５へのキャップの取付け及び均一化処理が、培養装置１０により、自動で行われる。

（培地交換工程）
培養にともなって、培養液中には接着性細胞から排出される老廃物が蓄積される。そこで、必要に応じて、所定期間ごと（例えば３日ごと）に培養液を交換する。まず、フラスコ５を、保管庫から培養装置１０に移し、培養装置１０の保持装置１２で保持する。次に、培養装置１０は、キャップ開閉装置１４により、スクリューキャップをフラスコ５から取り外す。その後、培養装置１０は、デカンテーション処理により、フラスコ５中の培養液をフラスコ５から排出する。図５に示すように、培養装置１０は、駆動装置により保持装置１２を駆動して、フラスコ５の開口部６が下方を向くようにフラスコ５の向きを変更する。これにより、フラスコ５中の培養液をフラスコ５から排出することができる。このとき、細胞は、フラスコ５の内面に接着しており、デカンテーション処理によってもフラスコ５から排出されない。なお、培養液のフラスコ５からの排出は、デカンテーション処理によるものに限られない。例えば、培養液を、ピペット等を用いてフラスコ５から吸引して排出するようにしてもよい。

培養装置１０は、駆動装置により保持装置１２を駆動して、フラスコ５の向きを、その開口部６が上方を向くように変更し、分注機構２０を用いてフラスコ５内に所定量の新たな培養液を供給する（図２参照）。培養装置１０が、キャップ開閉装置１４により、フラスコ５の開口部６をスクリューキャップで閉塞し、均一化処理を行った後、フラスコ５は、保管庫に移され接着性細胞の培養が継続される。

以上のようにして、培地交換工程では、フラスコ５からのキャップの取外し、培養液の排出、フラスコ５内への新たな培養液の供給、フラスコ５へのキャップの取付け及び均一化処理が、培養装置１０により、自動で行われる。

（継代培養工程）
接着性細胞が増殖しすぎてフラスコ５内の細胞の濃度が密になると、細胞の形状、形態、性能の変化や、変異が起こり、細胞の正常性が低下することがある。このため、培養されている接着性細胞を定期的に顕微鏡で観察し、細胞の濃度が密になっていれば、継代培養を行う。継代培養は、洗浄工程、剥離工程及び細胞濃度調整工程の３工程で行われる。

（洗浄工程）
洗浄工程では、細胞の培養に用いられる処理液９として、洗浄液が用いられる。洗浄液は、フラスコ５内に残留した培養液を洗浄するものである。洗浄液としては、例えば、リン酸バッファ等の緩衝液を用いることができる。ここで、細胞の培養に用いられる処理液９の種類が、培養液から洗浄液に変更される。本実施の形態では、培養液の供給に用いられた流路２２、シリンジ２５及びピストン２６を廃棄し、新たな流路２２、シリンジ２５及びピストン２６を培養装置１０に取り付ける。

次に、継代培養を行うフラスコ５を培養装置１０の保持装置１２に保持させる。また、処理液源８として、洗浄液を収容したボトルを組み込む。培養装置１０は、キャップ開閉装置１４により、スクリューキャップをフラスコ５から取外した後、フラスコ５内から培養液を除去する。培養液の除去は、例えばデカンテーション処理により行うことができる。このとき、細胞は、フラスコ５の内面に接着しており、デカンテーション処理によってもフラスコ５から排出されない。培養装置１０は、フラスコ５の向きを図２に示すように開口部６が上方を向くように変更し、分注機構２０を用いて洗浄液をフラスコ５内に供給する。分注機構２０の具体的な動作は播種工程における培養液のフラスコ５内への供給動作と同じであるので、詳細な説明は省略する。培養装置１０は、キャップ開閉装置１４により、フラスコ５の開口部６をスクリューキャップで閉塞した後、均一化処理を行い、フラスコ５内から洗浄液を除去する。洗浄液の除去は、例えばデカンテーション処理により行うことができる。必要に応じて、洗浄液の供給、均一化処理及び洗浄液の除去を繰り返す。これにより、フラスコ５内から培養液の成分を除去する。

以上のようにして、洗浄工程では、フラスコ５からのキャップの取外し、培養液の排出、フラスコ５内への洗浄液の供給、フラスコ５へのキャップの取付け及び均一化処理が、培養装置１０により、自動で行われる。

（剥離工程）
剥離工程では、細胞の培養に用いられる処理液９として、剥離液及び反応停止液の２種類の処理液９が用いられる。剥離液としては、例えば、トリプシン等の酵素を含む溶液を用いることができる。また、反応停止液としては、緩衝液や培養液を用いることができる。ここで、細胞の培養に用いられる処理液９の種類が、洗浄液から剥離液及び反応停止液に変更される。本実施の形態では、洗浄液の供給に用いられた流路２２、シリンジ２５及びピストン２６を廃棄し、新たな流路２２、シリンジ２５及びピストン２６を培養装置１０に取り付ける。また、剥離工程では、剥離液及び反応停止液の２種類の処理液９が用いられることから、第１の分注機構２０１及び第２の分注機構２０２の二つの分注機構２０を用いる。したがって、培養装置１０に、流路２２及び計量装置２４として、第１の分注機構２０１用の第１の流路２２１及び第１の計量装置２４１、並びに、第２の分注機構２０２用の第２の流路２２２及び第２の計量装置２４２の両方を取り付ける。

培養装置１０に、処理液源８として、剥離液を収容したボトル及び反応停止液を収容したボトルを組み込む。例えば、第１の分注機構２０１に対応して、剥離液を収容したボトルを組み込み、第２の分注機構２０２に対応して、反応停止液を収容したボトルを組み込む。

培養装置１０は、キャップ開閉装置１４により、スクリューキャップをフラスコ５から取外した後、フラスコ５内から洗浄液を除去する。洗浄液の除去は、例えばデカンテーション処理により行うことができる。培養装置１０は、フラスコ５の向きを図２に示すように開口部６が上方を向くように変更し、第１の分注機構２０１を用いて剥離液をフラスコ５内に供給する。第１の分注機構２０１の具体的な動作は播種工程における培養液のフラスコ５内への供給動作と同じであるので、詳細な説明は省略する。培養装置１０は、キャップ開閉装置１４により、フラスコ５の開口部６をスクリューキャップで閉塞した後、均一化処理を行い、所定温度で所定時間保持する。例えば温度３７℃で５分間保持する。この間に、剥離液に含まれる酵素の反応により、フラスコ５の内面に接着していた細胞がフラスコ５から剥離される。

所定時間の経過後、培養装置１０は、フラスコ５の向きを開口部６が上方を向くように変更し、キャップ開閉装置１４により、スクリューキャップをフラスコ５から取外す。その後、培養装置１０は、第２の分注機構２０２を用いて反応停止液をフラスコ５内に供給する。第２の分注機構２０２の具体的な動作は播種工程における培養液のフラスコ５内への供給動作と同じであるので、詳細な説明は省略する。培養装置１０は、キャップ開閉装置１４により、フラスコ５の開口部６をスクリューキャップで閉塞した後、均一化処理を行う。これにより、剥離液に含まれる酵素の反応を停止させることができる。その後、培養装置１０は、スクリューキャップをフラスコ５から取外し、フラスコ５内の細胞を含む懸濁液を回収する。懸濁液の回収は、デカンテーション処理やピペットによる吸引処理により行うことができる。また、懸濁液の回収は、培養装置１０を用いて自動で行ってもよいし、作業者が手動で行ってもよい。

（細胞濃度調整工程）
回収された懸濁液は、遠心分離器により遠心分離される。これにより懸濁液中の細胞が沈殿するので、この上澄み液を廃棄したのち所定量の培養液を添加することで、所定濃度の細胞懸濁液を得ることができる。添加する培養液が少量の場合は高濃度の細胞懸濁液を得ることができ、添加する培養液が大量の場合は低濃度の細胞懸濁液が得られ、さらに継代培養を行うことができる。

以上のようにして、剥離工程では、フラスコ５からのキャップの取外し、洗浄液の排出、フラスコ５内への剥離液の供給、フラスコ５へのキャップの取付け、均一化処理、所定温度及び所定時間での保持、フラスコ５からのキャップの取外し、フラスコ５内への反応停止液の供給、フラスコ５へのキャップの取付け及び均一化処理が、培養装置１０により、自動で行われる。

一つの種類の接着性細胞の培養の終了後に、さらに他の種類の接着性細胞の培養を行う場合には、各種類の接着性細胞の培養の終了後に、流路２２、シリンジ２５及びピストン２６を交換する。すなわち、使用された流路２２、シリンジ２５及びピストン２６を廃棄し、新たな流路２２、シリンジ２５及びピストン２６を培養装置１０に取り付ける。

本実施の形態の培養方法は、細胞の培養に用いられる第１の処理液９を、流路２２を介してフラスコ５に供給する第１供給工程と、細胞の培養に用いられ、第１の処理液９とは異なる第２の処理液９を、流路２２を介してフラスコ５に供給する第２供給工程と、を備え、第１供給工程と第２供給工程との間に流路２２を交換する。

ここで、第１の処理液９が培養液である場合には、第２の処理液９は洗浄液であってよく、第１の処理液９が洗浄液である場合には、第２の処理液９は剥離液であってよい。

また、本実施の形態の培養方法は、細胞の培養に用いられる処理液９を、流路２２を介してフラスコ５に供給する供給工程を備え、細胞の培養の終了後に流路２２を交換する。

本実施の形態の培養装置１０は、フラスコ５を、その向きを可変に保持する保持装置１２と、細胞の培養に用いられる処理液９を保持した処理液源８から処理液９を計量してフラスコ５に供給する分注機構２０と、を備え、分注機構２０は、処理液源８からフラスコ５まで延びる流路２２と、処理液９を計量する計量装置２４と、を有し、少なくとも流路２２は使い捨てである。

また、流路２２は、フラスコ５内で培養される細胞の種類が変わるごとに、及び／又は、処理液９の種類が変わるごとに、使い捨てられる。

培養装置における処理液源からフラスコへ延びる処理液の流路を、例えば、フラスコ内で培養される細胞の種類が変わるごとに、及び／又は、処理液の種類が変わるごとに、蒸気滅菌、薬剤滅菌、ガンマ線滅菌、ガス滅菌等の公知の方法により滅菌し再使用するものとすると、培養装置は、蒸気発生装置、薬剤供給装置、ガンマ線照射装置、ガス発生装置等の大掛かりな滅菌装置を備える必要がある。これにより培養装置が大型化及び複雑化する。

これに対して、本実施の形態の培養方法では、流路２２として、使い捨ての無菌化された流路２２を用いることが可能となる。これにより、本実施の形態の培養装置１０では、細胞の培養に用いられる処理液９の流路２２として、使い捨ての無菌化された流路２２を用いることにより、フラスコ内で培養される接着性細胞の種類が変わるごとに、及び／又は、処理液の種類が変わるごとに、流路２２を滅菌する必要がないので、培養装置１０から大掛かりな滅菌装置を省くことができる。したがって、培養装置を大型化させることなく処理液９の流路２２の無菌化を実現することができる。これにより、培養装置１０を小型化、簡略化することができる。また、このことは、培養装置１０のコストダウンにも貢献する。

また、従来、細胞の培養における各操作は、全て作業者の手により行われていることから、各操作に時間がかかるという問題があった。操作の種類や操作すべきフラスコの数にもよるが、多数のフラスコを用いて接着性細胞を培養しようとする場合、一つの操作を行うために数時間から半日程度を要することもある。この場合、最初に操作が行われたフラスコと最後に操作が行われたフラスコとでは、当該操作前及び操作後の工程の経過時間に数時間から半日程度の差が生じることになり、各フラスコ間での培養条件を同一にすることができなくなる。この場合、各フラスコで培養された細胞の間に、形状、形態、性能等において差が生じてしまう虞がある。また、各操作に時間がかかると、作業者の人件費がかかり細胞の培養コストが上昇するという問題もある。さらに、各操作が作業者の手で行われる場合、何らかのヒューマンエラーが生じる可能性が排除できない。

これに対して、本実施の形態の培養装置１０では、各工程における操作の大部分を自動化することが可能であるため、多数のフラスコを用いて接着性細胞を培養しようとする場合であっても、一つの工程を行うためにかかる時間を大幅に短縮することができる。これにより、最初に操作が行われたフラスコと最後に操作が行われたフラスコとの間での、当該操作前及び操作後の工程の経過時間の差を大きく減少させることができ、各フラスコ間での培養条件の差を効果的に減少させることが可能となる。したがって、多数のフラスコを用いて均質な細胞を得ることができる。さらに、作業者の手間が大幅に減少することから、作業者の人件費を低減させることができ、細胞の培養コストを効果的に低減させることができる。また、各工程における操作の大部分を自動化することにより、ヒューマンエラーが生じる可能性を低くすることができる。

本実施の形態の培養装置１０では、計量装置２４は、使い捨てのシリンジ２５及びピストン２６を含み、シリンジ２５及びピストン２６は流路２２とともに使い捨てられる。

このような培養装置１０によれば、簡単な構成によりシリンジ２５及びピストン２６をも無菌化することができる。とりわけシリンジ２５及びピストン２６を流路２２とともに使い捨てるようにしているので、流路２２、シリンジ２５及びピストン２６を一度に交換することができ、交換にかかる時間及び手間を最小化することができる。

本実施の形態の培養装置１０は、２つの分注機構２０を有している。

本実施の形態の培養装置１０において、一つの工程で使用される処理液９は最大で２種類である。したがって、２つの処理液源８を組み込むことができるよう、培養装置１０に２つの分注機構２０を設けることで、各工程において必要とされる処理液９を使用可能にしつつ、培養装置１０を効果的に小型化及び簡略化することができる。

なお、上述した実施の形態に対して様々な変更を加えることが可能である。以下、図面を適宜参照しながら、変形例について説明する。以下の説明および以下の説明で用いる図面では、上述した実施の形態と同様に構成され得る部分について、上述の実施の形態における対応する部分に対して用いた符号と同一の符号を用いることとし、重複する説明を省略する。

図６は、培養装置１０の一変形例を示す図である。図６は、培養装置１０が組み込まれた培養システム３０を概略的に示す断面図である。図６に示された例では、筐体３１内に、培養装置１０と、フラスコ５を保管する保管庫３２と、培養装置１０と保管庫３２との間でフラスコ５を移送する移送装置３４と、が設けられ、培養装置１０、保管庫３２及び移送装置３４により培養システム３０が構成されている。言い換えると、培養システム３０は、培養装置１０と、フラスコ５を保管する保管庫３２と、培養装置１０と保管庫３２との間でフラスコ５を移送する移送装置３４と、を有している。

筐体３１は、上述のクリーンベンチ又は安全キャビネット１と同様に、当該筐体３１内に外部の塵埃、細菌、ウィルス等が侵入すること（コンタミネーション）を防止し、また、当該筐体３１内で保管、操作される細胞が外部に流出することを防止する箱状の設備である。筐体３１は、当該筐体３１内の雰囲気（例えば空気）を所定の清浄度に維持する機能を有する。このため、筐体３１には、清浄化された雰囲気を導入するための雰囲気導入口が設けられ、雰囲気導入口には、導入される雰囲気を清浄化するためのフィルターが設けられている。フィルターとしては、例えばＨＥＰＡフィルターや、ＵＰＬＡフィルター等を用いることができる。また、筐体３１は、当該筐体３１内、とりわけ培養装置１０及び保管庫３２、を所定の温度に保つ機能を有している。さらに、筐体３１は、当該筐体３１内の二酸化炭素濃度を所定の濃度に保つ機能を有していることが好ましい。一例として、筐体３１は、当該筐体３１内を温度３７℃、二酸化炭素濃度５％に保つことができるように設定される。また、筐体３１には、図示しないフラスコ搬出入口が設けられており、このフラスコ搬出入口を介して保管庫３２内へのフラスコ５の搬入及び保管庫３２からのフラスコ５の搬出を行う。なお、フラスコ５の搬入口と搬出口とを別に設けるようにしてもよい。さらに、筐体３１には、外部から筐体３１内を視認するための窓や、作業者が作業を行うための開閉可能な扉等が設けられていてもよい。このような筐体３１は、一例として、ステンレス等の金属材料等で構成される。

保管庫３２は、複数のフラスコ５を保管できることが好ましい。図６に示された例では、保管庫３２は、培養装置１０の下方に配置されている。具体的には、保管庫３２は、培養装置１０が設置された筐体３１の下段内に配置されている。このような培養システム３０によれば、培養装置１０の下方の空間を有効に利用して保管庫３２を設置することでできるので、培養システム３０を小型化し、培養システム３０の設置スペースを効果的に減少させることができる。

移送装置３４は、例えば搬送ロボットであり、保管庫３２からフラスコ５を取り出し、当該フラスコ５を培養装置１０の保持装置１２へ搬送する。また、培養装置１０での処理が終了したフラスコ５を培養装置１０の保持装置１２から取り出し、当該フラスコ５を保管庫３２へ搬送する。移送装置３４に用いられる搬送ロボットは特に限られない。図６に示された例では、移送装置３４は、雰囲気が所定の清浄度、温度及び二酸化炭素濃度に保たれた筐体３１内に設けられ、当該筐体３１内において培養装置１０と保管庫３２との間でフラスコ５を移送する。したがって、培養装置１０と保管庫３２との間でフラスコ５を移送する際にフラスコ５が外気に接触せず、これにより、フラスコ５内の細胞にコンタミネーションが生じたり、温度や二酸化炭素濃度の変化が生じたりすることを効果的に防止することができる。

本変形例に係る培養システム３０は、培養装置１０と、フラスコ５を保管する保管庫３２と、培養装置１０と保管庫３２との間でフラスコ５を移送する移送装置３４と、を有する。

このような培養システム３０によれば、フラスコ５を保管庫３２から取り出して培養装置１０へ移送し、フラスコ５を培養装置１０へ組み込み、培養装置１０において、播種工程、培地交換工程、継代培養工程等の各工程を行い、各工程が終了したフラスコ５を保管庫３２へ移送する一連の操作を、培養システム３０により自動で行うことができる。したがって、一つの工程を行うためにかかる時間をさらに短縮することができる。これにより、最初に操作が行われたフラスコと最後に操作が行われたフラスコとの間での、当該操作前及び操作後の工程の経過時間の差をさらに大きく減少させることができ、各フラスコ間での培養条件の差を効果的に減少させることが可能となる。したがって、多数のフラスコを用いて均質な接着性細胞を得ることができる。また、作業者の手間が大幅に減少することから、作業者の人件費を低減させることができ、細胞の培養コストをさらに効果的に低減させることができる。また、本変形例に係る培養システム３０では、細胞の培養のための各工程を完全に自動化することもでき、これにより、培養システム３０の無人運転、夜間運転も可能になる。

他の変形例として、上述の実施の形態では、計量装置２４がシリンジ２５及びピストン２６を有して、シリンジ室２７において処理液９を計量する例を示したが、これに限られず、流路２２の途中にペリスタポンプと流量計を設け、処理液源８内の処理液９を流路２２を介して処理液源８からフラスコ５内へ供給するようにしてもよい。あるいはフラスコ５を重量計上に設置してもよい。さらには、流路２２の途中に流量計を設け、処理液源８内の処理液９を加圧して、処理液源８内の処理液９を流路２２を介して処理液源８からフラスコ５内へ供給するようにしてもよい。

なお、以上において上述した実施の形態に対するいくつかの変形例を説明してきたが、当然に、複数の変形例を適宜組み合わせて適用することも可能である。

１ クリーンベンチ又は安全キャビネット
５ フラスコ
６ 開口部
８ 処理液源
９ 処理液
１０ 培養装置
１２ 保持装置
１４ キャップ開閉装置
２０ 分注機構
２２ 流路
２２ａ 第１部分
２２ｂ 第２部分
２２ｃ 第３部分
２３ 分岐点
２４ 計量装置
２５ シリンジ
２６ ピストン
２７ シリンジ室
２８ａ ピンチバルブ
２８ｂ ピンチバルブ
３０ 培養システム
３１ 筐体
３２ 保管庫
３４ 移送装置

Claims (2)

1. フラスコ内で細胞を培養する培養方法であって、
   前記細胞の培養に用いられる第１の処理液を、流路を介して前記フラスコに供給する第１供給工程と、
   前記細胞の培養に用いられ、前記第１の処理液とは異なる第２の処理液を、流路を介して前記フラスコに供給する第２供給工程と、を備え、
   前記第１供給工程と前記第２供給工程との間に前記流路を交換する、培養方法。
2. フラスコ内で細胞を培養する培養方法であって、
   前記細胞の培養に用いられる処理液を、流路を介して前記フラスコに供給する供給工程を備え、
   前記細胞の培養の終了後に前記流路を交換する、培養方法。

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