JP2017533221A - ユビキチン活性化酵素阻害物質及び放射線の投与 - Google Patents

Abstract

癌の治療を必要とする患者における癌の治療のための方法が開示される。本方法は、そのような患者に、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）または薬学的に許容される塩などのユビキチン活性化酵素（ＵＡＥ）阻害物質を、放射線と組み合わせて投与することを含む。癌の治療における使用のための薬も開示される。

Description

本開示は、腫瘍学及び癌の治療のための方法に関する。具体的には、本開示は、ユビキチン活性化酵素（ＵＡＥ）阻害物質を放射線と組み合わせて投与することによる様々な癌の治療のための方法を提供する。

癌は、米国では２番目に多い死因であり、世界的には死亡原因の８分の１を占める（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｆｉｇｕｒｅｓ，２０１４）。米国癌協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ）は、２０１４年には米国で少なくとも１，６６５，５４０人が新たに癌と診断されると予測しており、５８５，７２０人のアメリカ人、つまり１日およそ１，６００人が癌で亡くなることが予測される。固形腫瘍を治療するための現在利用可能なパラダイムは、化学療法、ホルモン療法、標的薬剤及び生物学的薬剤の単一の薬剤としてまたは組み合わせのいずれかでの使用など、全身治療を含み得る。これらの治療は、外科手術または放射線療法などの局所的治療と組み合わせて行われ得る。これらの抗癌パラダイムは、治癒的状況においてはアジュバント若しくはネオアジュバント治療として、または転移状況においては生存期間の延長のための緩和ケースとして、ならびに症状及び副作用を管理するのに役立てるために使用され得る。血液癌の場合、化学療法及び／または放射線と同様に、幹細胞移植も特定の癌においては選択肢であり得る。医学の進歩が癌生存率を改善してきたが、新規かつより効果的な治療の継続的な必要性が依然としてある。

ユビキチンは、ユビキチン様タンパク質（Ｕｂｌ）として知られる翻訳後修飾因子のファミリーの創始メンバー（ｆｏｕｎｄｉｎｇ ｍｅｍｂｅｒ）である小さな７６−アミノ酸タンパク質である。Ｕｂｌは、細胞分裂、細胞シグナル伝達、及び免疫反応を含む多くの生物学的プロセスを制御することにおいて重要な役割を担う。既知のヒトＵｂｌ活性化酵素（Ｅ１として知られる）は８つある（Ｓｃｈｕｌｍａｎ，Ｂ．Ａ．，ａｎｄ Ｊ．Ｗ．Ｈａｒｐｅｒ，２００９，Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ Ｅ１ ｅｎｚｙｍｅｓ：ｔｈｅ ａｐｅｘ ｆｏｒ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １０：３１９−３３１）。ユビキチン及び他のＵｂｌは、ＵｂｌのＣ末端グリシンとのアシルアデニル酸中間体の形成を触媒する特定のＥ１酵素によって活性化される。次いで、活性化されたＵｂｌ分子は、チオエーテル結合中間体の形成を通して、Ｅ１酵素内の触媒システイン残基へ転移される。Ｅ１−Ｕｂｌ中間体及びＥ２酵素が相互作用して、ＵｂｌがＥ１からＥ２の活性部位システインへ転移されるチオエステル交換が生じる。次いで、Ｕｂｌは、標的タンパク質内のリジン側鎖のアミノ基とのイソペプチド結合形成を通して、直接的またはＥ３リガーゼ酵素との抱合のいずれかで、標的タンパク質に抱合される、即ち転移される。真核細胞は、約３５のユビキチンＥ２酵素及び５００超のユビキチンＥ３酵素を保有する。Ｅ３酵素は、特定の細胞基質タンパク質の選択的標的化を仲介するユビキチン経路の特異性因子である（Ｄｅｓｈａｉｅｓ，Ｒ．Ｊ．，ａｎｄ Ｃ．Ａ．Ｊｏａｚｅｉｒｏ，２００９，ＲＩＮＧ ｄｏｍａｉｎ Ｅ３ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｌｉｇａｓｅｓ，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ７８：３９９−４３４；Ｌｉｐｋｏｗｉｔｚ，Ｓ．，ａｎｄ Ａ．Ｍ．Ｗｅｉｓｓｍａｎ，２０１１，ＲＩＮＧｓ ｏｆ ｇｏｏｄ ａｎｄ ｅｖｉｌ：ＲＩＮＧ ｆｉｎｇｅｒ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｌｉｇａｓｅｓ ａｔ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓｒｏａｄｓ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １１：６２９−６４３；Ｒｏｔｉｎ，Ｄ．，ａｎｄ Ｓ．Ｋｕｍａｒ，２００９，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＥＣＴ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｌｉｇａｓｅｓ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １０：３９８−４０９）。

ユビキチン、ＵＡＥ（ユビキチン活性化酵素）、及びＵＢＡ６については２つのＥ１酵素が確認されている（Ｊｉｎ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｄｕａｌ Ｅ１ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅ Ｅ２ ｅｎｚｙｍｅ ｃｈａｒｇｉｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ ４４７：１１３５−１１３８）。ＵＡＥは、細胞内のユビキチン流束（ｆｌｕｘ）の大部分（＞９９％）を担うＥ１である。ＵＡＥは、ＵＢＡ６と排他的に働くことで知られる唯一のＥ２であるＵｓｅ１を除いて、およそ３５のＥ２酵素のそれぞれに命じることができる（Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００７）。ＵＡＥの阻害は、ユビキチン依存性の細胞プロセスの大部分を劇的に損なうのに十分である（Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｍｕｔａｎｔ ｔｓ８５，Ｃｅｌｌ ３７：５７−６６；Ｆｉｎｌｅｙ，Ｄ．，Ａ．ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｔｈｅｒｍｏｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｍｕｔａｎｔ ｔｓ８５，Ｃｅｌｌ ３７：４３−５５）。

ユビキチンにより生成される細胞シグナルは様々である。ユビキチンは、単一体として、または１つのユビキチンのＣ末端と第２のユビキチンの多くのリジンのうちの１つとの間のイソペプチド結合を通して生成されるポリユビキチンポリマーとして、基質に付着され得る。これらの多様な修飾が、様々な細胞シグナルへと翻訳される。例えば、リジン４８結合型ポリユビキチン鎖の基質タンパク質への抱合は、２６Ｓプロテアソームによる除去のためのタンパク質を標的とすることと主に関連付けられる。単一のユビキチン修飾、つまりモノユビキネーションは、一般的には、タンパク質の局在化及び／または機能に影響を与える。例えば、モノユビキチン化は、以下を調節し、１）ヒストン２ａ及び２ｂの機能（Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒａｎ，Ｍ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｈｉｓｔｏｎｅ Ｈ２Ｂ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ：Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓ−ｈｉｓｔｏｎｅ Ｈ３ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ，Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ ５：４６０−４６８）、２）ＰＴＥＮ（Ｔｒｏｔｍａｎ，Ｌ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，２００７，３）ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＰＴＥＮ ｎｕｃｌｅａｒ ｉｍｐｏｒｔ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｃｅｌｌ １２８：１４１−１５６）の核原形質シャトリングを制御し、４）ＤＮＡ損傷の部位へのＦＡＮＣＤ２タンパク質の局在化を促し（Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆａｎｃｏｎｉ ａｎｅｍｉａ ｐａｔｈｗａｙ ｂｙ ｍｏｎｏｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ，Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ １３：７７−８２）、５）ＥＧＦＲのようないくつかの細胞表面受容体の内在化及びエンドソーム／リソソームターンオーバーを促進する（Ｍｏｓｅｓｓｏｎ，Ｙ．，ａｎｄ Ｙ．Ｙａｒｄｅｎ，２００６，Ｍｏｎｏｕｂｉｑｕｉｔｙｌａｔｉｏｎ：ａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｔｈｅｍｅ ｉｎ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ．Ｉｓｒ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ Ｊ ８：２３３−２３７）。ポリユビキチン化鎖の他の形態は、１１位、２９位、及び６３位リジンに発生し、細胞周期、ＤＮＡ修復、及びオートファジーを含む細胞の様々な役割に影響を与える（Ｂｅｈｒｅｎｄｓ，Ｃ．，ａｎｄ Ｊ．Ｗ．Ｈａｒｐｅｒ，２０１１，Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｃｏｄｉｎｇ ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｃｈａｉｎｓ，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １８：５２０−５２８；Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｅ．Ｊ．，ａｎｄ Ｊ．Ｗ．Ｈａｒｐｅｒ，２００８，ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ：ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｍａｒｋｓ ｔｈｅ ｓｐｏｔ，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １５：２０−２２；Ｋｏｍａｎｄｅｒ，Ｄ．，２００９，Ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ ３７：９３７−９５３）。

ＵＡＥによって開始されるユビキチン抱合は、タンパク質恒常性、細胞表面受容体トラフィッキング、転写因子ターンオーバー、及び細胞周期進行において重要な役割を担う。これらのプロセスの多くは癌細胞生存にとって重要であるため、腫瘍細胞が、それらの早い成長率、増加された代謝要求、及び癌遺伝子によって加速されたタンパク質ストレスの結果として、ＵＡＥ阻害感受性を増加させた可能性があると考えられる。ＵＡＥ阻害物質であるＰＹＺＤ−４４０９を用いた前臨床研究は、この化合物が、白血病及び骨髄腫の両方の細胞株内で細胞死を誘発したこと、ならびに急性骨髄性白血病マウス（ＡＭＬモデル）内で抗腫瘍活性を誘発したことを実証した。（Ｘｕ，Ｗ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｔｈｅ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ Ｅ１ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ，Ｂｌｏｏｄ，１１５：２２５１−５９）。したがって、ＵＡＥは、癌の治療のためのタンパク質恒常性標的機会を与える。

質の高い生活を維持しながら患者の寿命を延ばすために、癌の治療において薬効をもたらす療法剤の新しい組み合わせが望ましい。さらには、新しい併用療法は、一つ一つの薬剤が個別に使用される場合と比較して、増大した効果を提供し得る。これは、癌が現在利用可能な治療レジメンに対して抵抗性または耐性があり得る場合に特に当てはまる。

Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｆｉｇｕｒｅｓ，２０１４ Ｓｃｈｕｌｍａｎ，Ｂ．Ａ．，ａｎｄ Ｊ．Ｗ．Ｈａｒｐｅｒ，２００９，Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ Ｅ１ ｅｎｚｙｍｅｓ：ｔｈｅ ａｐｅｘ ｆｏｒ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １０：３１９−３３１ Ｄｅｓｈａｉｅｓ，Ｒ．Ｊ．，ａｎｄ Ｃ．Ａ．Ｊｏａｚｅｉｒｏ，２００９，ＲＩＮＧ ｄｏｍａｉｎ Ｅ３ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｌｉｇａｓｅｓ，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ７８：３９９−４３４ Ｌｉｐｋｏｗｉｔｚ，Ｓ．，ａｎｄ Ａ．Ｍ．Ｗｅｉｓｓｍａｎ，２０１１，ＲＩＮＧｓ ｏｆ ｇｏｏｄ ａｎｄ ｅｖｉｌ：ＲＩＮＧ ｆｉｎｇｅｒ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｌｉｇａｓｅｓ ａｔ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓｒｏａｄｓ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １１：６２９−６４３ Ｒｏｔｉｎ，Ｄ．，ａｎｄ Ｓ．Ｋｕｍａｒ，２００９，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＥＣＴ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｌｉｇａｓｅｓ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １０：３９８−４０９ Ｊｉｎ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｄｕａｌ Ｅ１ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅ Ｅ２ ｅｎｚｙｍｅ ｃｈａｒｇｉｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ ４４７：１１３５−１１３８ Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｍｕｔａｎｔ ｔｓ８５，Ｃｅｌｌ ３７：５７−６６ Ｆｉｎｌｅｙ，Ｄ．，Ａ．ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｔｈｅｒｍｏｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｍｕｔａｎｔ ｔｓ８５，Ｃｅｌｌ ３７：４３−５５ Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒａｎ，Ｍ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｈｉｓｔｏｎｅ Ｈ２Ｂ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ：Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓ−ｈｉｓｔｏｎｅ Ｈ３ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ，Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ ５：４６０−４６８ Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆａｎｃｏｎｉ ａｎｅｍｉａ ｐａｔｈｗａｙ ｂｙ ｍｏｎｏｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ，Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ １３：７７−８２ Ｍｏｓｅｓｓｏｎ，Ｙ．，ａｎｄ Ｙ．Ｙａｒｄｅｎ，２００６，Ｍｏｎｏｕｂｉｑｕｉｔｙｌａｔｉｏｎ：ａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｔｈｅｍｅ ｉｎ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ．Ｉｓｒ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ Ｊ ８：２３３−２３７ Ｂｅｈｒｅｎｄｓ，Ｃ．，ａｎｄ Ｊ．Ｗ．Ｈａｒｐｅｒ，２０１１，Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｃｏｄｉｎｇ ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｃｈａｉｎｓ，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １８：５２０−５２８ Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｅ．Ｊ．，ａｎｄ Ｊ．Ｗ．Ｈａｒｐｅｒ，２００８，ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ：ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｍａｒｋｓ ｔｈｅ ｓｐｏｔ，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １５：２０−２２ Ｋｏｍａｎｄｅｒ，Ｄ．，２００９，Ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ ３７：９３７−９５３ Ｘｕ，Ｗ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｔｈｅ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ Ｅ１ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ，Ｂｌｏｏｄ，１１５：２２５１−５９

一態様において、本開示は、癌を治療する方法であって、そのような治療を必要とする対象にＵＡＥ阻害物質及び放射線を組み合わせて投与することを含む方法に関する。

一態様において、本開示は、癌を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩及び放射線を組み合わせて投与することを含む方法に関する。

いくつかの実施形態において、癌は固形腫瘍癌である。

いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、または胃食道接合部癌である。

いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、または頭頸部癌である。

いくつかの実施形態において、癌は、胃癌、食道癌、または胃食道接合部癌である。

いくつかの実施形態において、癌は血液癌である。

いくつかの実施形態において、癌は、多発性骨髄腫または非ホジキンリンパ腫である。

いくつかの実施形態において、放射線は粒子放射線である。

いくつかの実施形態において、放射線は、対外照射によって投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、２〜８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、２〜８週間繰り返される各週の１日目に投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、２〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、放射線は、２〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、放射線は、５〜８週間繰り返される各週の１〜５日目のうちのいずれか２日に投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、約４ｍｇ〜約６５ｍｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、約１５ｍｇ〜約５５ｍｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、約１８ｍｇ〜約４３ｍｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態において、投与される放射線の総線量は、約２０Ｇｙ〜約８０Ｇｙである。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与され、かつ放射線は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１日目に投与され、かつ放射線は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与され、かつ放射線は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない。

いくつかの実施形態において、放射線は、６〜８週の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない。

一態様において、本開示は、癌の治療を必要とする対象における癌の治療での使用のための薬に関し、本薬は、ＵＡＥ阻害物質及び放射線を含む。

図１ａ及び１ｂは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＨＮ−１３−００１４異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図１ａ及び１ｂは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＨＮ−１３−００１４異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図２ａ、２ｂ、及び２ｃは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＬＵ−０１−００３０異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図２ａ、２ｂ、及び２ｃは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＬＵ−０１−００３０異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図２ａ、２ｂ、及び２ｃは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＬＵ−０１−００３０異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図３ａ及び３ｂは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＬＵ−０１−０２６６異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図３ａ及び３ｂは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＬＵ−０１−０２６６異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図４ａ及び４ｂは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＳＴ−０２−０００４異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図４ａ及び４ｂは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＳＴ−０２−０００４異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図５ａ及び５ｂは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＨＮ−１３−０００７異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 図５ａ及び５ｂは、マウスへの化合物１及び放射線の投与後のＨＮ−１３−０００７異種移植モデルにおける時間の関数としての腫瘍体積のプロットをそれぞれ示す。 化合物１及び放射線での治療開始後のＨＣＴ−１１６コロニーのパーセント生存率を示す。

定義及び略語。

本明細書で使用される場合、「癌」という用語は、無制御若しくは調節不全の細胞増殖、減少した細胞分化、周囲の組織を侵す不適切な能力、及び／または異所での新規成長を確立する能力を特徴とする細胞障害を指す。「癌」という用語は、固形腫瘍及び血液腫瘍を含む。「癌」という用語は、皮膚、組織、器官、骨、軟骨、血液、及び脈管の疾病を包含する。「癌」という用語は、原発性癌及び転移性癌をさらに包含する。

本明細書で使用される場合、「臨床上有効な量」とは、患者への適切な投与時に、（ａ）治療されている障害若しくは疾病状態の重症度における検出可能な減少を引き起こす、（ｂ）疾病若しくは障害の患者の症状を緩和若しくは軽減する、または（ｃ）治療されている障害若しくは疾病状態の進行を遅延若しくは防止するか、さもなければ治療されている障害若しくは疾病状態を安定化するか、若しくはその安定化を延長する（例えば、癌のさらなる腫瘍成長を防止する）のに十分である治療用物質の量を意味する。

１つを超える治療用物質が投与されているとき、「臨床上有効な総量」とは、たとえ任意の数の個々の治療用物質の個々の量が「臨床上有効な量」の定義を満たさなくとも、各治療用物質の個々の量の総和が、「臨床上有効な量」の定義を満たすことを意味する。例えば、１０ｍｇのＡが臨床上有効な量ではなく、かつ２０ｍｇのＢが臨床上有効な量ではないが、Ａ１０ｍｇ＋Ｂ２０ｍｇの投与が、「臨床上有効な量」の定義について列挙された結果のうちの少なくとも１つをもたらす場合、Ａ１０ｍｇ＋Ｂ２０ｍｇの総和は、「臨床上有効な総量」と見なされることになる。

任意の形態または組成で、投与用量または臨床上有効な（総）量は、（ｉ）ＢＳＡ、例えばｍｇ／ｍ^２として、または（ｉｉ）量、例えばｍｇとしてのいずれかに基づいて、患者ごとの治療用物質の量として表現され得る。

本明細書で使用される場合、「患者」とは、ある疾病、障害、または病態と診断された人間、それらの症状を呈する人間、あるいはそれらに苦しめられていると考えられる人間を意味する。

本明細書で使用される場合、「体表面積」（ＢＳＡ）は、標準ノモグラム、例えば、
を使用して算出される。

本明細書で使用される場合、「放射線」という用語は、癌治療に使用されるような電離放射線を意味する。

本明細書で使用される場合、「ｉｎｃｌｕｄｅ」「ｓｕｃｈ ａｓ」「ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ」など（ならびにそれらのバリエーション、例えば、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」、「ｅｘａｍｐｌｅｓ」）という例示の用語は、別段の指定がない限り、非限定的であることが意図される。即ち、明示的に別段の記載がない限り、そのような用語は、「ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ」を暗示することが意図され、例えば、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」は、含むがそれに限定されないことを意味する。

別段の記載がない限り、本明細書に描写される構造体は、１つ以上の同位体濃縮原子の存在下でのみ異なる化学物質を含むことが意味される。例えば、ジュウテリウム若しくはトリチウムによる水素原子の置換、または^１３Ｃ若しくは^１４Ｃ濃縮炭素による炭素原子の置換を除く、本構造体を有する化学物質は、本発明の範囲内にある。

立体化学的配置が示されない限り、本明細書に描写される構造体は、構造体のすべての立体化学形態、即ち、各不斉中心に対してＲ配置及びＳ配置を含むことを意味する。したがって、別段の指示がない限り、本発明の化学物質の単一の立体化学異性体、ならびにエナンチオマー、ラセミ、及びジアステレオマーの混合物は、本発明の範囲内にある。化合物について立体学的配置が示されるとき、その化合物のジアステレオ異性体または鏡像体過剰率は、少なくとも９９．０％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、または９９．９％である。

一態様において、本開示は、ＵＡＥ阻害物質またはその薬学的に許容される塩と放射線との組み合わせを患者に投与することによって、患者における癌を治療する方法に関する。

ＵＡＥ阻害物質は、特許出願公開ＷＯ２０１３／１２３１６９及びＵＳ２０１４／００８８０９６に開示される。一実施形態において、ＵＡＥ阻害物質は、以下の構造体（化合物１）
またはその薬学的に許容される塩を有する化合物である。化合物１は、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメートと命名される。

一態様において、本開示は、化合物１またはその薬学的に許容される塩と放射線との組み合わせを患者に投与することによって、患者における癌を治療する方法に関する。

いくつかの実施形態において、本開示は、化合物１と放射線との組み合わせを患者に投与することによって、患者における癌を治療する方法に関する。

別の態様において、本開示は、癌の治療のために放射線と組み合わせて化合物１または薬学的に許容される塩を使用することに関する。

別の態様において、本開示は、癌の治療での使用のための薬の製造において放射線と組み合わせて化合物１または薬学的に許容される塩を使用することに関する。

別の態様において、本開示は、癌の治療のための薬の製造において化合物１または薬学的に許容される塩を使用することに関し、ここで化合物１またはその薬学的に許容される塩は放射線と共に投与される。

いくつかの実施形態において、放射線は光子放射線（ｘ線及びガンマ線）である。そのような実施形態において、光子は、コバルトまたは直線加速器などの放射能源から高エネルギー光子ビームとして生成される。

いくつかの実施形態において、放射線は、粒子放射線（電子、陽子、中性子、炭素イオン、アルファ粒子、及びベータ粒子など）である。粒子放射線は、直線加速器によって産出され得る。いくつかの実施形態において、放射線は電子ビームである。いくつかの実施形態において、放射線は陽子ビームである。いくつかの実施形態において、放射線は中性子ビームである。

いくつかの実施形態において、放射線は対外照射によって行われる。いくつかの実施形態において、対外照射は、三次元原体放射線療法（３Ｄ−ＣＲＴ）である。いくつかの実施形態において、対外照射は、強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）である。いくつかの実施形態において、対外照射は、画像誘導放射線療法（ＩＧＲＴ）である。いくつかの実施形態において、対外照射は、強度変調陽子線療法（ＩＭＰＴ）である。いくつかの実施形態において、対外照射は、定位放射線手術（ＳＲＳ）である。いくつかの実施形態において、対外照射療法は、分割定位放射線療法である。いくつかの実施形態において、対外照射は、体幹部定位放射線療法（ＳＢＲＴ）である。ＳＢＲＴを行う機械の例は、Ｇａｍｍａ Ｋｎｉｆｅ（商標登録）、Ｘ−Ｋｎｉｆｅ（登録商標）、ＣｙｂｅｒＫｎｉｆｅ（登録商標）、及びＣｌｉｎａｃ（登録商標）である。

いくつかの実施形態において、放射線は、内部放射線療法（小線源療法）によって行われる。そのような実施形態において、内部放射線療法は、例えば、癌または腫瘍部位の近くに置かれた小さなペレット、シード、ワイヤ、またはチューブを使用した組織内照射である。そのような実施形態において、内部放射線療法は、例えば、体腔内に置かれる放射性物質の容器を使用した腔内照射である。

いくつかの実施形態において、化合物１または薬学的に許容される塩は、静脈内（ＩＶ）に投与される。化合物１または薬学的に許容されるＩＶ投与に好適な薬学的組成物は、特許出願公開ＷＯ２０１３／１２３１６９及びＵＳ２０１３／０２１７６８２に記載される。

本明細書で使用される場合、当業者によって理解されるように、化合物１及び放射線の「組み合わせ」での投与は、２つの薬剤の同時または逐次投与のみを指すのではなく、単一の治療周期の間における両方の化合物の投与も指す。いくつかの実施形態において、放射線は、化合物１の投与の前に投与され得る。いくつかの実施形態において、放射線は、化合物１の投与と同時に投与され得る。いくつかの実施形態において、放射線は、化合物１の投与の後に投与され得る。

いくつかの実施形態において、癌は固形腫瘍癌である。固形腫瘍の非限定的な例としては、膵臓癌、湿潤性膀胱癌を含む膀胱癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、胃癌、転移性乳癌を含む乳癌、アンドロゲン依存性及びアンドロゲン非依存性前立腺癌を含む前立腺癌、例えば転移性腎臓細胞癌を含む腎臓癌、例えば肝細胞癌及び肝内胆管を含む肝臓癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮肺癌、細気管支肺胞癌（ＢＡＣ）、肺の腺癌、及び小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む肺及び気管支癌、例えば進行性の上皮性及び原発性腹膜癌を含む卵巣癌、子宮頸癌、例えば子宮体部及び子宮頸部を含む子宮癌、子宮内膜癌、食道癌、胃食道（ＧＥ）接合部癌、例えば頭頸部の扁平上皮癌、鼻咽頭癌、口腔及び咽頭を含む頭頸部癌、例えば扁平上皮皮膚癌、基底細胞皮膚癌、メルケル細胞癌、及び黒色腫を含む皮膚癌、転移性神経内分泌腫瘍を含む神経内分泌癌、例えば膠腫／膠芽腫、退形成乏突起膠腫、成人多形成神経膠芽腫、及び成人未分化星細胞腫を含む脳癌、転移性神経内分泌腫瘍を含む神経内分泌癌、骨癌、陰茎癌、肛門癌、ならびに軟部組織肉腫が挙げられる。

いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、肺癌、胃癌、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、食道癌、黒色腫、軟部組織肉腫、または頭頸部癌である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、または胃食道接合部癌である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、または頭頸部癌である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、または肺癌である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、または非小細胞肺癌である。いくつかの実施形態において、癌は、胃癌、食道癌、または胃食道接合部癌である。

いくつかの実施形態において、癌は肺癌である。肺癌は、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、扁平上皮ＮＳＣＬＣを含む非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、細気管支肺胞癌（ＢＡＣ）、及び腺癌などの異なるサブタイプを含む。いくつかの実施形態において、癌は小細胞肺癌である。いくつかの実施形態において、癌は非小細胞肺癌である。

いくつかの実施形態において、癌は乳癌である。乳癌は、ルミナルＡ、ルミナルＢ、トリプルネガティブ（基底様）、及びＨＥＲ−２タイプなどの異なるサブタイプを含む。いくつかの実施形態において、癌はトリプルネガティブ乳癌である。

いくつかの実施形態において、癌は卵巣癌である。卵巣癌は、上皮性、生殖細胞、及び性索間質性などの異なるサブタイプを含む。原発性腹膜癌は、骨盤及び腹部の内側で始まる関連癌である。いくつかの実施形態において、癌は上皮性卵巣癌である。

いくつかの実施形態において、癌は前立腺癌である。前立腺癌は、アンドロゲン依存性及びアンドロゲン非依存性前立腺癌ならびに腺癌を含む。

いくつかの実施形態において、癌は結腸直腸癌である。腺癌は、最も一般的な種類の結腸直腸癌である。他の結腸直腸癌は、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、及び扁平上皮癌を含み得る。いくつかの実施形態において、癌は直腸癌である。

いくつかの実施形態において、癌は頭頸部癌である。頭頸部癌は、頭頸部領域に発生するものであり、この癌は、鼻腔、副鼻腔、口唇、口、唾液腺、咽頭、または喉頭などの区域で見られ得る。頭頸部癌の９０％は、これらの領域の粘膜内壁（上皮）から生じる扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）である。

いくつかの実施形態において、癌は胃癌である。腺癌は、最も一般的な種類の胃癌である。他の胃癌は、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、及びリンパ腫を含み得る。

いくつかの実施形態において、癌は食道癌である。食道癌の最も一般的な種類は、扁平上皮癌及び腺癌である。胃食道癌は、食道が胃に接する部分で発生する関連癌である。

いくつかの実施形態において、癌は血液癌である。血液悪性腫瘍の非限定的な例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、加速期のＣＭＬ及びＣＭＬの急性転化期（ＣＭＬ−ＢＰ）を含む慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、ホジキン病（ＨＤ）、濾胞性リンパ腫及びマントル細胞リンパ腫を含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含むＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、アミロイドーシス、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、不応性貧血（ＲＡ）、鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）、（過剰な芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢ）、及び移行期ＲＡＥＢ（ＲＡＥＢ−Ｔ）を含む骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、ならびに真性多血症、本態性血小板血症、及び原発性または特発性骨髄線維症を含む骨髄増殖性症候群が挙げられる。

いくつかの実施形態において、癌は、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、または非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態において、癌は、多発性骨髄腫または非ホジキンリンパ腫である。

いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、２〜８週間繰り返される週２回のスケジュールで投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、２〜８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、２週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、３週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、４週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、５週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、７週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、２〜８週間繰り返される週１回のスケジュールで投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、２〜８週間繰り返される各週の１日目に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１日目に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、２週間繰り返される各週の１日目に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、３週間繰り返される各週の１日目に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、４週間繰り返される各週の１日目に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、５週間繰り返される各週の１日目に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６週間繰り返される各週の１日目に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、７週間繰り返される各週の１日目に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、８週間繰り返される各週の１日目に投与される。

いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、２〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、２週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、３週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、４週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、５週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、７週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、投薬の各日に投与される化合物１またはその薬学的に許容される塩の量は、約４ｍｇ〜約６５ｍｇである。いくつかの実施形態において、投薬の各日に投与される化合物１またはその薬学的に許容される塩の量は、約５ｍｇ〜約６５ｍｇである。いくつかの実施形態において、投薬の各日に投与される化合物１またはその薬学的に許容される塩の量は、約１５ｍｇ〜約５５ｍｇである。いくつかの実施形態において、投薬の各日に投与される化合物１またはその薬学的に許容される塩の量は、約１８ｍｇ〜約４３ｍｇの間である。いくつかの実施形態において、投薬の各日に投与される化合物１またはその薬学的に許容される塩の量は、約１８ｍｇ、約２４ｍｇ、約３０ｍｇ、約３６ｍｇ、約４３ｍｇ、約５１ｍｇ、または約６１ｍｇである。すべての投薬量は、投与される化合物１の量を指し、いかなる薬学的に許容される塩の重量も含まない。

いくつかの実施形態において、放射線は、２〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、２週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、３週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、４週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、５週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、６週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、７週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。

いくつかの実施形態において、放射線は、５〜８週間繰り返される各週の１〜５日目のうちのいずれか２日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目のうちのいずれか２日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、５週間繰り返される各週の１〜５日目のうちのいずれか２日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、６週間繰り返される各週の１〜５日目のうちのいずれか２日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、７週間繰り返される各週の１〜５日目のうちのいずれか２日に投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、８週間繰り返される各週の１〜５日目のうちのいずれか２日に投与される。

放射線の量は、グレイ（Ｇｙ）で測定される。いくつかの実施形態において、放射線の総量は、約２０Ｇｙ〜約８０Ｇｙである。いくつかの実施形態において、放射線の総量は、約２０Ｇｙ〜約４０Ｇｙである。いくつかの実施形態において、放射線の総量は、約４０〜約６０Ｇｙである。いくつかの実施形態において、放射線の総量は、約４０〜約８０Ｇｙである。放射線量は、一般的には、分割される。いくつかの実施形態において、放射線は、１日当たり約１．８Ｇｙ〜約２Ｇｙの線量で投与される。いくつかの実施形態において、放射線は、１日当たり約２．６７Ｇｙ〜約２．７５Ｇｙの線量で投与される。いくつかの実施形態において、１日当たり１線量が提供される。いくつかの実施形態において、放射線は、１日当たり１線量超が提供され得る（多分割放射線療法）。いくつかの実施形態において、一日当たり２線量が提供される。いくつかの実施形態において、２線量の間を最低６時間空けて、１日当たり２線量が提供される。いくつかの実施形態において、１日当たり３線量が提供される。

いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与され、かつ放射線は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与され、かつ放射線は、６週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、７週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与され、かつ放射線は、７週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与され、かつ放射線は、８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない。いくつかの実施形態において、放射線は、６〜８週間の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない。

いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１日目に投与され、かつ放射線は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６週間繰り返される各週の１日目に投与され、かつ放射線は、６週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、７週間繰り返される各週の１日目に投与され、かつ放射線は、７週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、８週間繰り返される各週の１日目に投与され、かつ放射線は、８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない。いくつかの実施形態において、放射線は、６〜８週間の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない。

いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与され、かつ放射線は、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与され、かつ放射線は、６週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、７週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与され、かつ放射線は、７週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与され、かつ放射線は、８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、６〜８週間の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない。いくつかの実施形態において、放射線は、６〜８週間の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない。

治療用物質、薬学的組成物。
本明細書に記載される療法剤はいずれも、薬学的に許容される塩の形態を取り得る。いくつかの実施形態において、そのような塩は、無機または有機の酸または塩基に由来する。好適な塩の概観については、例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．，１９７７，６６，１−１９ ａｎｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄ．，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）を参照されたい。

好適な酸付加塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオナート、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、ルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３−フェニル−プロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカノアートが挙げられる。

好適な塩基付加塩の例としては、アンモニウム塩、ナトリウム及びカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンなどの有機塩基を有する塩、ならびにアルギニン、リジン、及び同類のものなどのアミノ酸を有する塩が挙げられる。

例えば、Ｂｅｒｇｅは、以下のＦＤＡに認可された市販の塩を列挙している。アニオンであるアセテート、ベシル酸塩（ベンゼンスルホン酸塩）、安息香酸塩、重炭酸塩、重酒石酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム（エチレンジアミンテトラアセテート）、カンシル酸塩（樟脳スルホン酸塩）、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸（エチレンジアミンテトラアセテート）、エジシル酸塩（１，２−エタンジスルホン酸塩）、エストレート（ラウリル硫酸塩）、エシレート（エタンスルホン酸塩）、フマル酸塩、グルセプト酸塩（グルコヘプトン酸塩）、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩（グリコールアミドフェニルアルソネート）、ヘキシルレゾルシン酸塩（ｈｅｘｙｌｒｅｓｏｒｃｉｎａｔｅ）、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ’−ジ（デヒドロアビエチル）エチレンジアミン）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、ヨウ化物、イセチオン酸塩（２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシレート（メタンスルホン酸塩）、臭化メチル、硝酸メチル、硫酸メチル、ムケート（ｍｕｃａｔｅ）、ナプシル酸塩（２−ナフタレンスルホン酸塩）、硝酸塩、パモ酸塩（エンボ酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩（８−クロロテオフィリネート）、及びトリエチオジド、有機カチオンであるベンザチン（Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン）、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、及びプロカイン、ならびに金属カチオンであるアルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、及び亜鉛。

Ｂｅｒｇｅは、追加で、以下のＦＤＡ非認可の市販の（アメリカ国外）塩を列挙している。アニオンであるアジピン酸塩、アルギン酸塩、アミノサリチル酸塩、アンヒドロメチレンクエン酸塩、アレコリン、アスパラギン酸塩、重硫酸塩、臭化ブチル、樟脳酸塩、ジグルコン酸塩、二臭化水素酸塩、ジコハク酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、フッ化水素、ヨウ化水素酸塩、メチレンビス（サリチル酸塩）、ナパジシル酸塩（１，５−ナフタレンジスルホン酸塩）、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルエチルバルビツール酸塩、ピクリン酸塩、プロピオン酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカノアート、有機カチオンであるベネタミン（ｂｅｎｅｔｈａｍｉｎｅ）（Ｎ−ベンジルフェネチルアミン）、クレミゾール（１−ｐ−クロロベンジル−２−ピロリジン−１’−イルメチルベンズイミダゾール）、ジエチルアミン、ピペラジン、及びトロメタミン（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ならびに金属カチオンであるバリウム及びビスマス。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、レシピエント対象（ヒト）に適合し、かつ活性薬剤をその薬剤の活性を終結することなく対象部位に送達するのに好適である物質を指す。担体に関係する毒性または有害作用は、もしあるとすれば、好ましくは、活性薬剤の意図される使用のリスク対効果比に見合うものである。

本開示の方法における使用のための薬学的組成物は、とりわけ、従来の造粒、混合、溶解、カプセル化、凍結乾燥、または乳化プロセスなどの当該技術分野において周知の方法によって製造され得る。組成物は、顆粒剤、沈殿物、若しくは微粒子、凍結乾燥された、回転乾燥された、若しくは噴霧乾燥された粉末を含む粉末、無定形粉末、錠剤、カプセル、シロップ剤、坐剤、注射、乳剤、エリキシル剤、懸濁剤、または溶液を含む、様々な形態で産生され得る。製剤は、安定剤、ｐＨ調節剤、界面活性剤、可溶化剤、生物学的利用能調節剤、及びこれらの組み合わせを含有し得る。

これらの組成物に使用され得る薬学的に許容される担体は、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩または炭酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、プロタミン硫酸塩などの、飽和植物脂肪酸、水、塩、または電解質の部分グリセリド混合物、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂を含む。

これらの薬学的組成物は、ヒトに対する薬学的投与のために製剤化される。そのような組成物は、経口的、非経口、吸入スプレー、局所、直腸、経鼻、口腔、経膣で、または移植リザーバーを介して投与され得る。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語は、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内、及び頭蓋内注射または注入技術を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、経口的、静脈内、または皮下に投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、経口的に投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、静脈内に投与される。これらの製剤は、短時間作用型、高速放出型、または長時間作用型であるように設計され得る。さらに、組成物は、全身的な方法よりもむしろ、腫瘍部位での投与（例えば注射による）など、局所的な方法で投与され得る。

薬学的製剤は、油、水、アルコール、及びそれらの組み合わせなどの液体を使用した液体懸濁液または溶液として調製され得る。シクロデキストリンなどの可溶化剤が含まれ得る。薬学的に好適な界面活性剤、懸濁化剤、または乳化剤が、経口または非経口投与のために添加され得る。懸濁液は、ピーナッツ油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、及びオリーブ油などの油を含み得る。懸濁液調製物はまた、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、脂肪酸グリセリド、及びアセチル化脂肪酸グリセリドなどの脂肪酸のエステルを含有し得る。懸濁液製剤は、エタノール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール、グリセロール、及びプロピレングリコールなどのアルコール、ポリ（エチレングリコール）などのエーテル、鉱物油及び鉱油などの石油系炭化水素、ならびに水を含み得る。

これらの薬学的組成物の無菌注射可能な形態は、水溶性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、好適な分散または湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、当該技術分野で既知の技術に従って製剤化され得る。無菌注射可能な調製物はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、無菌注射可能な溶液または懸濁液であり得る。用いられ得る許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌の固定油が、溶媒または懸濁媒として慣習的に用いられる。この目的のため、合成モノ−またはジ−グリセリドを含む、任意の無刺激の固定油が用いられ得る。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、注射可能物の調製に有用であり、同様に、オリーブ油またはひまし油などの天然の薬学的に許容される油は、特にそれらのポリオキシエチル化バージョンにおいて、有用である。これらの油溶液または懸濁液はまた、カルボキシメチルセルロース、または乳剤及び懸濁液を含む薬学的に許容される剤形の製剤化によく使用される同様の分散剤など、長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含有し得る。例えばＴｗｅｅｎまたはＳｐａｎといったソルビタンアルキルエステルなどの他のよく使用される界面活性剤、及び薬学的に許容される固体、液体、または他の剤形の製造によく使用される他の乳化剤または生物学的利用能エンハンサーも、製剤化の目的のために使用され得る。化合物は、ボーラス注射または継続的注入によるなど、注射による非経口投与用に製剤化され得る。注射用の単位剤形は、アンプルまたは多用量容器内にあり得る。

これらの薬学的組成物は、カプセル、錠剤、水溶性懸濁液または溶液を含む任意の経口的に許容される剤形で経口投与され得る。水溶性懸濁液が経口使用のために要求されるとき、活性成分は、乳化剤及び懸濁化剤と組み合わされる。所望の場合、特定の甘味、香味、または着色剤も添加され得る。カプセル形態での経口投与では、有用な希釈剤は、乳糖及び乾燥コーンスターチを含む。経口使用のための錠剤の場合、よく使用される担体は、乳糖及びコーンスターチを含む。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も、一般的には添加される。コーティングは、様々な目的のため、例えば、味を消すため、溶解若しくは吸収の部位に影響を与えるため、または薬の作用を延長するために使用され得る。コーティングは、錠剤に、またはカプセル内での使用のための造粒粒子に適用され得る。

代替的に、これらの薬学的組成物は、直腸投与用の坐薬の形態で投与され得る。これらは、薬剤を、室温では固体であるが、直腸温度では液体であり、それにより直腸内で溶けて薬物を放出する好適な非刺激性賦形剤と混合することにより調製され得る。そのような物質は、ココアバター、みつろう、及びポリエチレングリコールを含む。

これらの薬学的組成物はまた、特に治療の標的が、目、皮膚、または下部腸管の疾病など、局所適用により容易に到達可能な区域または器官を含むとき、局所的に投与され得る。好適な局所製剤は、これらの区域または器官のそれぞれのために容易に調製される。

下部腸管のための局所適用は、直腸坐薬製剤（上を参照されたい）または好適な浣腸製剤で達成され得る。局所的経皮パッチも使用され得る。局所適用の場合、薬学的組成物は、１つ以上の担体に懸濁または溶解された有効成分を含有する好適な軟膏に製剤化され得る。本開示の化合物の局所投与のための担体は、鉱物油、液体鉱油、白色鉱油、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、及び水を含む。代替的に、薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体に懸濁または溶解された有効成分を含有する好適なローションまたはクリームに製剤化され得る。好適な担体は、鉱物油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セツリエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水を含む。

眼用の場合、薬学的組成物は、等張のｐＨ調節された無菌食塩水中の微粉化懸濁液として、または好ましくは、等張のｐＨ調節された無菌食塩水中の溶液として、塩化ベンジルアルコニウムなどの保存剤入りまたは無しのいずれかで製剤化され得る。代替的に、眼用の場合、薬学的組成物は、鉱油などの軟膏に製剤化され得る。

薬学的組成物はまた、経鼻エアロゾルまたは吸入によって投与され得る。そのような組成物は、医薬製剤の分野で周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコール若しくは他の好適な保存剤、生物学的利用能を高めるための吸収促進剤、フッ化炭素、及び／または他の従来の可溶化剤若しくは分散剤を用いて、食塩水中の溶液として調製され得る。

本開示の方法は、ＵＡＥ酵素活性の阻害が、疾病細胞若しくは組織の生存及び／または拡大に害を及ぼす（例えば、細胞がＵＡＥ阻害に対して感受性がある、ＵＡＥ活性の阻害が疾病機序を妨害する、ＵＡＥ活性の減少が、疾病機序の阻害物質であるタンパク質を安定化する、ＵＡＥ活性の減少が、疾病機序の活性化因子であるタンパク質の阻害をもたらす）疾病、障害、病態を治療することを対象とする。疾病、障害、及び病態はまた、効果的なカリン及び／またはユビキチン化活性を必要とするものを含むことが意図され、この活性は、ＮＡＥ酵素活性を減らすことによって制御され得る。

いくつかの実施形態において、本開示の方法は、抗癌剤を投与することをさらに含む。本明細書で使用される場合、「抗癌剤」という用語は、癌を治療する目的のために癌を有する対象に投与される任意の薬剤を指す。さらなる抗癌剤の投与は、本開示の組み合わせと同時または順次の投与を含む。代替的に、さらなる抗癌剤は、患者に投与される本開示の組み合わせと合わせて１つの組成物にまとめられ得る。

抗癌剤の非限定的な例としては、トポイソメラーゼＩ阻害物質（例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、及びそれらの類似体または代謝物）などのＤＮＡ損傷化学療法剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害物質（例えば、エトポシド及びテニポシド）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、及びイダルビシン）アルキル化剤（例えば、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、イホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、デカルバシン、メトトレキサート、ペメトレキセド、マイトマイシンＣ、及びシクロホスファミド）、ＤＮＡインターカレータ、ブレオマイシンなどのＤＮＡインターカレータ及び遊離ラジカル発生剤、ならびにヌクレオチド模倣体（例えば、５−フルオロウラシル、カペシチビン（ｃａｐｅｃｉｔｉｂｉｎｅ）、フルダラビン、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、及びヒドロキシウレア）が挙げられる。細胞複製を妨害する化学療法剤としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、及び関連する類似体と、サリドマイド、レナリドマイド、及び関連する類似体（例えば、ＣＣ−５０１３及びＣＣ−４０４７）と、タンパク質チロシンキナーゼ阻害物質（例えば、メシル酸イマチニブ、エルロトニブ（ｅｒｌｏｔｏｎｉｂ）、クロズチニブ（ｃｒｏｚｔｉｎｉｂ）、及びゲフィチニブ）と、プロテアソーム阻害物質（例えば、ボルテゾミブ）と、ＩκＢキナーゼの阻害物質などのＮＦ−κＢ阻害物質と、癌内で過剰発現したタンパク質に結合し、それにより細胞複製を減少させる抗体（例えば、トラスツズマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、及びベバシズマブ）と、癌内で増加、過剰発現、または活性化されることで知られるタンパク質または酵素の他の阻害物質であり、その阻害が細胞複製を減少させる阻害物質とが挙げられる。

本開示がより完全に理解されるように、以下の実施例が説明される。これらの実施例は、例示的のみであり、本開示の範囲をいかようにも限定することは意図されない。

合成の方法
別の態様において、本開示は、化合物１またはその薬学的に許容される塩を作製するためのプロセスを提供する。化合物１または薬学的に許容される塩の大規模生産のための好適なプロセスが本明細書に開示される。

いくつかの実施形態において、本開示は、化合物１
またはその薬学的に許容される塩を作製するためのプロセスを提供し、本プロセスは、
ａ）化合物９、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を、
２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（メルドラム酸）と結合条件下で接触させて、化合物８、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を提供するステップと、
ｂ）化合物８、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を、環化条件に供して、化合物７、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を提供するステップと、
ｃ）化合物７、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を、ベンゾトリアゾールと塩素化／置換条件下で接触させて、化合物５、またはそれらの塩、複合物、溶媒和物、若しくは水和物を提供するステップと、
ｄ）化合物５、またはそれらの塩、複合物、溶媒和物、若しくは水和物を、化合物６、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物と
置換反応条件下で接触させて、化合物３、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を提供するステップと、
ｅ）化合物３、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を、化合物４と
スルファモイル化反応条件下で接触させて、化合物２、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を提供するステップと、
ｆ）化合物２、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を、酸とスルファモイル化条件下で接触させて、化合物１またはその薬学的に許容される塩を提供するステップと、
ｇ）化合物１または薬学的に許容される塩を、再結晶化条件下で任意に再結晶化させるステップと、を含む。

いくつかの実施形態において、本開示は、再結晶化条件を使用して化合物１または薬学的に許容される塩を提供するために、化合物１またはその薬学的に許容される塩を再結晶化させるプロセスを提供する。再結晶化は、不純物を除去するために行われ得る。

いくつかの実施形態において、化合物１またはそれらの薬学的塩は、化合物１形態１、つまり特許出願ＷＯ２０１３／１２３１６９及びＵＳ２０１３／０２１７６８２に記載される無水結晶形態である。いくつかの実施形態において、化合物１またはそれらの薬学的塩は、化合物１形態２、つまり特許出願ＷＯ２０１３／１２３１６９及びＵＳ２０１３／０２１７６８２に記載される一水和物結晶形態である。

一実施形態において、本開示の再結晶化条件は、水性溶媒混合物を含む。いくつかの実施形態において、溶媒は、アセトニトリル、エチルアセテート、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、またはジメチルスルホキシドである。いくつかの実施形態において、溶媒はアセトニトリルである。いくつかの実施形態において、水性溶媒混合物中の水の量は、約５％〜約７０％である。いくつかの実施形態において、水性溶媒混合物中の水の量は、約４５％〜約６５％である。

いくつかの実施形態において、本開示は、化合物１
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を作製するためのプロセスであって、化合物２またはその薬学的に許容される塩を、酸と
脱保護反応条件下で接触させて、化合物１またはその薬学的に許容される塩を提供することを含むプロセスを提供する。

一実施形態において、本開示の脱保護反応条件は、水性酸を含む。様々な酸は、化合物２中の保護基を脱保護するのに好適であり得る。好適な酸の非限定的な例としては、リン酸、硫酸、トリフルオル酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏｒａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）、酢酸、及び塩酸が挙げられる。いくつかの実施形態において、酸はリン酸である。いくつかの実施形態において、酸は硫酸である。

一実施形態において、脱保護温度は、約０℃〜約２５℃である。他の実施形態において、脱保護温度は、約０℃〜室温である。

一実施形態において、脱保護反応条件は溶媒を含む。好適な溶媒の非限定的な例としては、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、アセトニトリル、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシド、水、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、またはそれらの混合物が挙げられる。いくつかの実施形態において、溶媒はアセトニトリルである。

いくつかの実施形態において、本開示は、化合物２
またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を作製するためのプロセスであって、化合物３、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を、化合物４と
スルファモイル化反応条件下で接触させて、化合物２またはその薬学的に許容される塩を提供することを含むプロセスを提供する。

一実施形態において、本開示のスルファモイル化反応条件は、弱酸または弱塩基を含む。いくつかの実施形態において、弱酸は、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム、トシル酸、クエン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、ｎｏｓｉｃ酸、またはｍｅｓｉｃ酸である。いくつかの実施形態において、弱酸は、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウムである。いくつかの実施形態において、弱塩基は、ピリジン、ジメチルアミノピリジン、テトラメチルピリジン、または２，６−ルチジンである。

化合物４は、Ａｒｍｉｔａｇｅ，Ｉ．ｅｔ ａｌ，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．；２０１２，１４，２６２６−２６２９、及びＡｒｍｉｔａｇｅ，ｅｔ ａｌ，米国特許出願公開２００９／００３６６７８に記載されるものなどの方法によって調製され得る。いくつかの実施形態において、約１モル当量〜約５モル当量の化合物４（化合物３に対して）が使用される。いくつかの実施形態において、約２．５モル当量〜約３モル当量の化合物４（化合物３に対して）が使用される。

一実施形態において、本開示のスルファモイル化反応条件は溶媒を含む。好適な溶媒の非限定的な例としては、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、トルエン、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物が挙げられる。いくつかの実施形態において、溶媒はアセトニトリルである。

いくつかの実施形態において、本開示は、化合物３
またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を作製するためのプロセスであって、化合物５、またはそれらの塩、複合物、溶媒和物、若しくは水和物を、化合物６、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物と
置換反応条件下で接触させることを含むプロセスを提供する。

一実施形態において、本開示の置換反応条件は、未希釈の塩基を含む。置換反応のために未希釈で使用され得る塩基の非限定的な例としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリイソプロピルアミン（ｔｒｉｉｓｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｅ）、トリブチルアミン、ピリジン、及びピロリジンが挙げられる。いくつかの実施形態において、未希釈の塩基はトリエチルアミンである。

一実施形態において、本開示の置換反応条件は、塩基及び溶媒を含む。いくつかの実施形態において、塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリイソプロピルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、ピロリジン、トリエチレンジアミン（ＤＡＢＣＯ）、及びジアザビシクロウンデンセン（ＤＢＵ）である。いくつかの実施形態において、溶媒は、イソプロパノール、エタノール、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジン、及びトルエンである。いくつかの実施形態において、塩基及び溶媒は、トリエチルアミン及びイソプロパノールである。

一実施形態において、本開示の置換反応条件は、高温度を含む。いくつかの実施形態において、高温度は約５０℃〜約１１０℃である。いくつかの実施形態において、高温度は約７０℃〜約９０℃である。

一実施形態において、化合物６は塩酸塩である。化合物６は、科学文献で既知の方法によって調製され得る［例えば、Ａ）Ｓａｋｓｅｎａ，Ａ．Ｋ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，１９８０，２１，１３３−１３６．Ｂ）Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｊ．；Ｔａｙｌｏｒ，Ｂ．Ｆ．；Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，Ｇ．Ｍ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９７，１８５９−１８６０．Ｃ）Ｔｏｋｏｒｏ，Ｙ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ，１９９９，８０７−８０９．Ｄ）Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ，Ｂ．Ｍ．；Ｃｕｌｌｉｓ，Ｐ．Ｍ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９９，４０，５７８３−５７８６を参照されたい］。化合物６塩酸塩は、Ａｒｍｉｔａｇｅ，Ｉ．ｅｔ ａｌ，米国特許出願公開２００９／００３６６７８に記載されるものに類似の方法で調製され得る。

別の実施形態において、本開示は、化合物５、
またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を提供する。一実施形態において、化合物５は、化合物５−塩酸塩−三級アミン複合物である。いくつかの実施形態において、三級アミンはトリエチルアミンである。いくつかの実施形態において、複合物中に存在する塩酸塩−トリエチルアミンの量は、複合物中に存在する化合物５の量に基づいて約０％〜約２００％である。いくつかの実施形態において、複合物中に存在する塩酸塩−トリエチルアミンの量は、複合物中に存在する化合物５の量に基づいて約０％〜約１３０％である。

いくつかの実施形態において、本開示は、化合物５
またはそれらの塩、複合物、溶媒和物、若しくは水和物を作製するためのプロセスであって、化合物７、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を、ベンゾトリアゾールと
塩素化／置換条件下で接触させることを含むプロセスを提供する。

一実施形態において、本開示の塩素化／置換反応条件は、塩素化試薬を含む。いくつかの実施形態において、塩素化試薬は、塩化チオニルまたは塩化ホスホリルである。いくつかの実施形態において、塩素化試薬は塩化ホスホリルである。

一実施形態において、本開示の塩素化／置換反応条件は、溶媒を含む。いくつかの実施形態において、溶媒は、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、トルエン、またはジクロロエタンである。いくつかの実施形態において、溶媒はアセトニトリルである。

一実施形態において、本開示の塩素化／置換反応条件は、塩基を含む。いくつかの実施形態において、塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリイソプロピルアミン、トリブチルアミン、またはトリプロピルアミンである。いくつかの実施形態において、塩基はトリエチルアミンである。

一実施形態において、本開示の塩素化／置換反応条件は、高温度を含む。いくつかの実施形態において、高温度は約５０℃〜約１１０℃である。いくつかの実施形態において、高温度は約７０℃〜約９０℃である。

別の実施形態において、本開示は、化合物７
またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を提供する。

いくつかの実施形態において、本開示は、化合物７、
またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を作製するためのプロセスであって、化合物８、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を
環化条件に供することを含むプロセスを提供する。

一実施形態において、本開示の環化反応条件は、溶媒を含む。好適な溶媒は、１，２−ジクロロベンゼン、クロロベンゼン、ニトロベンゼン、キヌクリジン、及びＮ−メチルピロリドンを含む。いくつかの実施形態において、溶媒は、ビフェニル及びジフェニルオキシドの共融混合物である伝熱流体である（ＤＯＷＴＨＥＲＭ Ａ）。いくつかの実施形態において、溶媒は１，２−ジクロロベンゼンである。

一実施形態において、本開示の環化反応条件は、高温度を含む。いくつかの実施形態において、高温度は約１４０℃〜約１８０℃である。いくつかの実施形態において、高温度は約１４５℃〜約１６５℃である。

一実施形態において、本開示の環化反応条件は、代替の位置異性体（化合物１０）の形成を防ぐ選択的環化を提供する。

別の実施形態において、本開示は、化合物８、
またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を提供する。

いくつかの実施形態において、本開示は、化合物８、
またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を作製するためのプロセスであって、化合物９、またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を、２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（メルドラム酸）と
結合反応条件下で接触させることを含むプロセスを提供する。

一実施形態において、本開示の結合反応条件は、溶媒を含む。好適な溶媒は、イソプロパノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、及びジクロロメタンを含む。

一実施形態において、本開示の結合反応条件は、オルトエステルを含む。いくつかの実施形態において、オルトエステルは、オルトギ酸メチルエステルまたはオルトギ酸トリエチルである。いくつかの実施形態において、オルトエステルはオルトギ酸メチルエステルである。一実施形態において、本開示の結合反応条件は、ジメチルホルムアミドジメチルアセタールを含む。

一実施形態において、結合温度は約室温〜約２５℃である。他の実施形態において、結合温度は約７０℃〜約９０℃である。

別の実施形態において、本開示は、化合物９、
またはそれらの塩、溶媒和物、若しくは水和物を提供する。

本開示がより完全に理解されるように、以下の実施例が説明される。これらの実施例は、例示的のみであり、本開示の範囲をいかようにも限定することは意図されない。

（実施例）
略語

一般的な分析方法
別段の記載のない限り、１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ ３００ＭＨｚを使用して得た。別段の記載のない限り、ＨＰＬＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ上で得、ＵＰＬＣは、Ｗａｔｅｒ Ａｃｕｉｔｙ Ｓｙｓｔｅｍｓにより得た。

実施例１：３−｛３−［（トリフルオロメチル）スルファニル］フェニル｝−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの合成
ステップＡ：３−（（トリフルオロメチル）チオ）ベンゾエート
ジメチル炭酸塩（６８ｍＬ）に、３−（（トリフルオロメチル）チオ）安息香酸（１００ｇ、Ｂｅｔａ Ｐｈａｒｍａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び触媒量の硫酸（２．４ｍＬ）を添加した。次いでこの混合物を５時間９０℃に加熱した。次いで反応物を室温まで冷まし、重炭酸ナトリウム（１．０Ｌ）でクエンチした。水層まではエチルアセテート（１．０Ｌ）を有した。相を分離し、このプロセスをエチルアセテート（１．０Ｌ）を使用して繰り返した。有機層を１つに合わせ、ロトバップ（ｒｏｔｏｖａｐ）で濃縮して淡橙色の油を得た。メチル３−（（トリフルオロメチル）チオ）ベンゾエート（１０５ｇ、９９％）を粗で次の反応に進めた。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， クロロホルム−ｄ） δ ｐｐｍ ３．９９ （ｓ， ３ Ｈ） ７．４９ − ７．５８ （ｍ， １ Ｈ） ７．８５ （ｄ， Ｊ＝７．６２ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．１７ （ｄｔ， Ｊ＝７．６９， １．４３ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．３２ − ８．４４ （ｍ， １ Ｈ）。

ステップＢ：３−オキソ−３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）プロパンニトリル
テトラヒドロフラン（１．０Ｌ）中のメチル３−（（トリフルオロメチル）チオ）ベンゾエート（１００．０ｇ）に、アセトニトリル（４４．２ｍＬ、８４７ｍｍｏｌ）及び１Ｍ（ＴＨＦ中）カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（９５．０１ｇ）を添加した。反応は、ＨＰＬＣ分析により１０分で完了した。この反応物を１Ｍ ＨＣｌ（１．０Ｌ）でクエンチし、次いで（１．０Ｌ）のエチルアセテートで３回抽出した。次いで、３−オキソ−３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）プロパンニトリルを有する有機層を乾燥するまで濃縮した。この物質（１００．０ｇ、９６．３％）を、粗でさらなる精製に進めた。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， クロロホルム−ｄ） δ ｐｐｍ ４．１２ （ｓ， ２ Ｈ） ７．５１ − ７．７５ （ｍ， １ Ｈ） ７．８９ − ８．０１ （ｍ， １ Ｈ） ８．０１ − ８．１０ （ｍ， １ Ｈ） ８．２０ （ｓ， １ Ｈ）

ステップＣ：３−｛３−［（トリフルオロメチル）スルファニル］フェニル｝−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン
エタノール（１０００．０ｍＬ）中の３−オキソ−３−｛３−［（トリフルオロメチル）スルファニル］フェニル｝プロパンニトリル（１００．０ｇ）に、ヒドラジン水和物（５９．５２ｍＬ）を添加した。この反応物を１時間１００℃に加熱し、その時点でＨＰＬＣ分析は、反応が完了したことを示した。この反応物をロトバップ上で乾燥するまで濃縮して、茶色の油を得た。油をエチルアセテート（１．０Ｌ）中に取り入れ、水（１．０Ｌ）で抽出した。相を分離し、有機相を濃縮した。濃縮時に３−｛３−［（トリフルオロメチル）スルファニル］フェニル｝−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを得た（８０．８ｇ、収率＝７６．４％）。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， クロロホルム−ｄ） δ ｐｐｍ ５．９５ （ｓ， １ Ｈ） ６．７３ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ） ７．１３ − ７．３４ （ｍ， ２ Ｈ） ７．４２ − ７．７４ （ｍ， ３ Ｈ） ７．８５ （ｓ， １ Ｈ）。

実施例２：（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート
ステップ１：（２，２−ジメチル−５−（（（３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）メチレン）−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン）
オルトギ酸トリメチル（２．０Ｌ）に、２０℃及び窒素ブランケット下で、２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（３６１．３５ｇ）を添加した。結果として生じた白色懸濁液は数分以内に透明になり、これを１５分かけて８５℃に加熱した。この反応物を１２０分間８５℃に保持した。反応物を加熱及び撹拌している間、別の溶液３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（５００．０ｇ）を作製した。４Ｌ ＲＢＦに３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（５００．０ｇ）を添加し、次いでオルトギ酸トリメチル（１．４Ｌ）をこの固体に添加した。この溶液を混合して固体を溶解すると、暗褐色の溶液が生じた。３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（オルトギ酸トリメチル中約１．８Ｌ）の溶液を、反応温度を８５℃に維持したまま３０分かけて反応器に添加した。次いで反応物を２０分間撹拌すると、溶液中に白色固体を形成した。２０分後、反応物の試料採取をすると、ＵＰＬＣは、３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの２，２−ジメチル−５−（（（３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）メチレン）−１，３−ジオキサン−４，６−ジオンへの完全な変換を示した。この反応物を２０分かけて２０℃まで冷まし、さらに２０分間その温度に維持した。この時点で、高粘度の白色スラリーが形成されており、この反応物をＮｕｔｃｈｅフィルタを使用して１５分かけてろ過した。反応器を１Ｌのエチルアセテートで洗浄し、次いでこの溶液をろ過ケークと混合し、ろ過により除去した。ケークを約４０分間フィルタ上で乾燥させ、次いで真空オーブンへ移して、完全真空下で一晩（１６時間）４０℃で加熱した。次いでこの反応物をＨＰＬＣ及びＮＭＲにより分析し、２，２−ジメチル−５−（（（３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）メチレン）−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（６３５．３ｇ、７９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ｐｐｍ １．６８ （ｓ， ６ Ｈ） ７．０５ （ｄ， Ｊ＝２．０５ Ｈｚ， １ Ｈ） ７．６４ − ７．７７ （ｍ， ２ Ｈ） ７．７７ − ８．０３ （ｍ， １ Ｈ） ８．１２ （ｓ， １ Ｈ） ８．７２ （ｄ， Ｊ＝１４．３６ Ｈｚ， １ Ｈ） １１．３５ （ｄ， Ｊ＝１４．６６ Ｈｚ， １ Ｈ） １３．４７ （ｓ， １ Ｈ）。

ステップ２：２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オル
１，２−ジクロロベンゼン（６．３Ｌ）中の２，２−ジメチル−５−（（（３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）メチレン）−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（６１５．００ｇ）の溶液を１０分間周囲温度で撹拌した。次いでこの溶液を７５分かけて１５０℃に加熱した。反応物をこの温度に１６時間維持した。１６時間後に試料を採取し、ＵＰＬＣ分析は、２，２−ジメチル−５−（（（３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）メチレン）−１，３−ジオキサン−４，６−ジオンの２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オルへの完全な変換を示した。反応物を１３０分かけて２０℃まで冷ました。この時点で、高粘度の白色スラリーが形成されており、この反応物をＮｕｔｃｈｅフィルタを使用して１５分かけてろ過した。反応器を１．８Ｌのアセトニトリルで洗浄し、次いでこの溶液をろ過ケークと混合し、次いで溶媒をろ過により除去した。ケークを約４０分間フィルタ上で乾燥させ、次いで真空オーブンへ移して、完全真空下で一晩（１６時間）４０℃で加熱した。次いでこの反応物をＨＰＬＣ及びＮＭＲにより分析し、２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オル（３３１．２ｇ、７２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， メタノール−ｄ_４） δ ｐｐｍ ６．５５ （ｄ， Ｊ＝７．３３ Ｈｚ， １ Ｈ） ７．５９ （ｓ， １ Ｈ） ８．４０ − ８．５２ （ｍ， １ Ｈ） ８．５３ − ８．６４ （ｍ， １ Ｈ） ８．６９ （ｄ， Ｊ＝７．６２ Ｈｚ， １ Ｈ） ９．０１ （ｄｔ， Ｊ＝７．７７， １．３９ Ｈｚ， １ Ｈ） ９．１２ （ｓ， １ Ｈ） １３．３４ （ｓ， １ Ｈ）。

ステップ３：１−（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール：トリエチルアミン：塩酸塩複合物（１：１．２５：１．２５モル：モル：モル）
０℃のアセトニトリル（３０００ｍＬ）及びトリエチルアミン（４０３．００ｍＬ）中の２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オル（３０．００ｇ）、ベンゾトリアゾール（２８７．０２ｇ）の溶液に、塩化ホスホリル（１０８ｍＬ）を窒素ブランケット下で＜１０℃を維持しながら緩徐に添加した。次いで反応物を４５分かけて８０℃まで温め、２４０分間撹拌した。ＨＰＬＣは、出発物質の完全な消費を示した。温度を８０℃に維持しながらこの反応混合物にアセトニトリル（３０００ｍＬ）を添加した。次いで反応物を８０分かけて２０℃まで冷ました。次いで反応物を１４時間周囲温度で撹拌した。この時点で、高粘度のスラリーが形成されており、この反応物をＮｕｔｃｈｅフィルタを使用して１５分かけてろ過した。反応器を９００ｍＬのアセトニトリルで２回洗浄し、次いでこの溶液をろ過ケークと混合し、次いで溶媒をろ過により除去した。ケークを約４０分間フィルタ上で乾燥させ、次いで真空オーブンへ移して、完全真空下で一晩（１６時間）４０℃で加熱した。次いで反応物をＨＰＬＣ及びＮＭＲにより分析し、１−（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール：トリエチルアミン：塩酸塩複合物（１：１．２５：１．２５モル：モル：モル）（４３８．１ｇ、８３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ｐｐｍ １．１９ （ｔ， Ｊ＝７．３３ Ｈｚ， １２ Ｈ） ３．０７ （ｑｄ， Ｊ＝７．２８， ４．８４ Ｈｚ， ８ Ｈ） ７．６０ − ７．７８ （ｍ， ６ Ｈ） ７．８０ − ７．８７ （ｍ， １ Ｈ） ８．１５ （ｄｔ， Ｊ＝７．９９， １．２８ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．２４ （ｓ， １ Ｈ） ８．３３ （ｄｔ， Ｊ＝８．１４， ０．９２ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．８５ （ｄ， Ｊ＝４．６９ Ｈｚ， １ Ｈ）。

ステップ４：（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール
反応器に１−（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール：トリエチルアミン：塩酸塩複合物（１：１．２５：１．２５モル：モル：モル）（４３０．０ｇ）及び（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−６−アミノ−２，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール塩酸塩（２０９．０ｇ）を添加し、次いでトリエチルアミン（２１０３ｍＬ）を添加した。次いで反応物を窒素ブランケット下で８０℃に加熱した。３６０分後、ＨＰＬＣ分析は、反応混合物が＜１％の出発物質を含有することを示し、反応物を６０分かけて２０℃まで冷ました。反応物にエチルアセテート（３．５Ｌ）及び水（３．５Ｌ）を添加した。１０分間撹拌した後、相を分離し、水層をエチルアセテート（３．５Ｌ）で抽出した。有機層を１つに合わせ、濃縮して暗褐色の油を形成した。アセトニトリル（４．５Ｌ）を添加し、この溶液を乾燥するまで濃縮して橙色の固体を得た。固体を水（４．３Ｌ）と共に反応物へと戻し、５０℃に加熱し、２０分間撹拌した。白色の固体がこの熱溶液中に形成され、それをＮｕｔｃｈｅフィルタを使用して１５分かけてろ過により単離した。固体を真空下で１５分間、フィルタ上で乾燥させ、次いで５０℃でアセトニトリル（４．０Ｌ）中に溶解した。この溶液を１５分間撹拌した。次いで溶液をフリット漏斗に通してろ過して加水分解固体副産物を除去し、この溶液を乾燥するまで濃縮した。固体を完全真空の真空オーブン内で一晩乾燥させた（４０℃、１６時間）。次いで反応物をＨＰＬＣ及びＮＭＲにより分析して、（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール（３４９．２ｇ、８８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ｐｐｍ １．２５ （ｓ， ３ Ｈ） １．４７ （ｓ， ３ Ｈ） １．７６ − １．９０ （ｍ， １ Ｈ） ２．２５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝３．２２ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．３３ − ２．４７ （ｍ， １ Ｈ） ３．４６ − ３．６７ （ｍ， ２ Ｈ） ４．０８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．５７ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．４８ − ４．６４ （ｍ， ２ Ｈ） ５．１９ （ｔ， Ｊ＝４．４０ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．２８ （ｄ， Ｊ＝５．２８ Ｈｚ， １ Ｈ） ７．０６ （ｓ， １ Ｈ） ７．５８ − ７．７１ （ｍ， １ Ｈ） ７．７２ − ７．８０ （ｍ， １ Ｈ） ８．１２ − ８．２４ （ｍ， ２ Ｈ） ８．３１ （ｄ， Ｊ＝７．６２ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．４２ （ｓ， １ Ｈ）。

ステップ５：（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルスルファメート
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール（６．０ｇ）を、２−メチルテトラヘドラフラン（６０．０ｍＬ）中に溶解し、この溶液にｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（５．９ｇ）を添加した。これが沈殿物を形成し、この白色スラリーに（４−アザ−１−アゾニアビシクロ［２．２．２］オクト−１−イルスルホニル）（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アザニド−１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（１：１）塩酸塩^ｉ（１７．０ｇ）を添加した。ＨＰＬＣが＜１％の（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール残留出発物質を示すまで（約３００分）、混合物を周囲温度で撹拌した。反応物を水（６０ｍＬ）でクエンチし、相を分離した。有機層にアセトニトリル（６０ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃でロトバップを使用して約６０ｍＬまで濃縮した。混合物を室温まで冷まし、一晩撹拌した。この間、白色スラリーが形成された。白色固体を中型フリットフィルタを使用して濾過した。固体を完全真空の真空オーブン内で一晩乾燥させた（４０℃）。次いで反応物をＨＰＬＣ及びＮＭＲにより分析して、（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルスルファメート（５．０３ｇ、６８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ｐｐｍ １．２６ （ｓ， ３ Ｈ） １．４２ （ｓ， ９ Ｈ） １．５１ （ｓ， ３ Ｈ） ２．３３ − ２．４８ （ｍ， ２ Ｈ） ３．３０ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ） ４．０６ − ４．２１ （ｍ， １ Ｈ） ４．２９ （ｄ， Ｊ＝５．２８ Ｈｚ， ２ Ｈ） ４．５２ （ｄｄ， Ｊ＝７．１８， ５．１３ Ｈｚ， １ Ｈ） ４．７６ （ｄｄ， Ｊ＝７．１８， ４．５４ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．３５ （ｄ， Ｊ＝５．５７ Ｈｚ， １ Ｈ） ７．０８ （ｓ， １ Ｈ） ７．６３ − ７．７２ （ｍ， １ Ｈ） ７．７４ − ７．８２ （ｍ， １ Ｈ） ８．０１ （ｄ， Ｊ＝７．９２ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．２１ （ｄ， Ｊ＝５．２８ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．３１ （ｄｔ， Ｊ＝７．８４， １．３６ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．４８ （ｓ， １ Ｈ） １１．９２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）

ステップ６：（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート
０℃のアセトニトリル（１１ｍＬ）中の（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルスルファメート（２．０ｇ）の溶液に、温度を１０℃未満に維持しながらリン酸（１１ｍＬ）を添加した。この混合物を周囲温度まで温め、４時間撹拌した。この時、ＨＰＬＣ分析は、＜１％の（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルスルファメート出発物質または反応中間体が残留することを示した。反応物に、エチルアセテート（１１ｍＬ）及び水（１１ｍＬ）及び飽和Ｎａ_２ＣＯ_３（１０ｍＬ）を滴加した。この添加が完了した後、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３をｐＨが６〜７の間になるまで添加した。相を分離し、有機層にアセトニトリル（３０ｍＬ）を添加し、混合物をロトバップ上で約１６ｍＬまで濃縮した。混合物を一晩攪拌した。この間、白色スラリーが形成された。白色固体を中型フリットフィルタを使用して濾過した。固体を完全真空の真空オーブン内で一晩乾燥させた（４０℃）。次いで反応物をＨＰＬＣ及びＮＭＲにより分析して、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（１．５ｇ、８４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ｐｐｍ １．４４ − １．６１ （ｍ， １ Ｈ） ２．２０ − ２．４２ （ｍ， ２ Ｈ） ３．７８ （ｑ， Ｊ＝４．５０ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９０ − ４．０９ （ｍ， ３ Ｈ） ４．０９ − ４．２２ （ｍ， １ Ｈ） ４．８０ （ｄ， Ｊ＝５．２８ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．０３ （ｄ， Ｊ＝５．２８ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．３１ （ｄ， Ｊ＝５．５７ Ｈｚ， １ Ｈ） ７．０５ （ｓ， １ Ｈ） ７．４８ （ｓ， ２ Ｈ） ７．６２ − ７．７２ （ｍ， １ Ｈ） ７．７７ （ｄ， Ｊ＝７．９２ Ｈｚ， ２ Ｈ） ８．１７ （ｄ， Ｊ＝５．２８ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．３１ （ｄｔ， Ｊ＝７．７０， １．４３ Ｈｚ， １ Ｈ） ８．４７ （ｓ， １ Ｈ）。

実施例３：（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート
ステップ１：（２，２−ジメチル−５−（（（３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）メチレン）−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン）
２０℃の窒素ブランケット下で、メルドラム酸（１８．６Ｋｇ）及びイソプロパノール（３３Ｌ）を１００Ｌグラスライニング反応器に入れた。オルトギ酸トリメチル（１５．５Ｋｇ（１６．０Ｌ））及びイソプロパノール（１１Ｌ）を添加し、混合物を４０分間８０℃に加熱し、それにより少量のメタノールを留去した（＜０．５Ｌ）。混合物を２時間８０℃で撹拌した。別個の１６０Ｌグラスライニング反応器中、窒素下、２０℃で、３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（上記の様式で調製した）を、イソプロパノール（１０．９ｋｇ、４２．０ｍｍｏｌ）と混合し、６０分以内に８０℃まで加熱した。１００Ｌ反応器の内容物を１６０Ｌ反応器中の反応混合物内へ８０℃で移し、それは３分後に完了した。反応混合物を３０分間７８℃で撹拌し、次いでこの反応物を６０℃まで冷ました。ＨＰＬＣ分析は、反応が９９．５６％完了したことを示した（生成物％／（生成物％＋出発物質％）。反応混合物を１００分以内に２０℃まで冷まし、次いでこの混合物を２０℃でさらに１００分間撹拌した。次いで、懸濁液を圧力フィルタ上に移した。１．２バール窒素で、固体をフィルタ上に収集した。ろ過ケークをエチルアセテートで４回洗浄した（各回１８Ｌ）。湿潤ケークを、窒素／真空（２００〜１００ｍｂａｒ）の微流を使用して、フィルタ上で２０℃で１７時間乾燥させた。湿潤生成物（１４．７ｋｇ）をロータバップでおよそ２４時間４０〜５０℃でさらに乾燥させた。１１．７５ｋｇの粗表題化合物を得た（収率６８％）。ＮＭＲスペクトルは、実施例２で上に記載したものと一致した。

ステップ２：２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オル
窒素下２０℃で、（２，２−ジメチル−５−（（（３−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）メチレン）−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン）を反応器に入れた。１，２−ジクロロベンゼン（１１７Ｌ）を添加した。懸濁液を９０分間１４７℃に加熱して溶液を得、次いでそれを１８時間１４７℃で撹拌した。試料採取の前に、反応物を６０℃まで冷ました。ＨＰＬＣ分析は、反応が９２．２８％完了したことを示した（生成物％／（生成物％＋出発物質％）。混合物を１４７℃まで再度加熱し、この温度でさらに５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、反応が９６．５１％完了したことを示した（生成物％／（生成物％＋出発物質％）。次いで、混合物を２０℃で４８時間撹拌し、次いでそれを１４７℃に再度加熱し、この温度で５時間撹拌した。試料採取の前に、反応物を６０℃まで冷ました。ＨＰＬＣ分析は、反応が９８．４７％完了したことを示した（生成物％／（生成物％＋出発物質％）。混合物を１４６℃まで再度加熱し、この温度でさらに５時間撹拌した。試料採取の前に、反応物を６０℃まで冷ました。ＨＰＬＣ分析は、反応が９９．３５％完了したことを示した（生成物％／（生成物％＋出発物質％）。反応物を２０℃まで冷まし、懸濁液を圧力フィルタ内へ移した。固体を、１０時間を超える期間にわたって１．８〜３バールのＮ_２でフィルタ上に収集した。ろ過ケークをアセトニトリル（１７Ｌ）で４回洗浄し、次いでそれをフィルタ上で、Ｎ_２の微流を使用して、２０℃／２００〜１００ｍｂａｒで１８時間乾燥させた。この物質を５０Ｌフラスコへ移し、５０〜６０℃／２４〜１４ｍｂａｒのロータバップで２日間乾燥させた。６．１１８ｋｇの粗表題化合物を得た（収率７０％）。ＮＭＲスペクトルは、実施例２で上に記載したものと一致した。

ステップ３：１−（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール：トリエチルアミン：塩酸塩複合物（１：０．２１：０．２１モル：モル：モル）
Ｎ_２下、２０℃で、アセトニトリル（３０Ｌ）を反応器に入れ、２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オル（６．００ｋｇ）及び１Ｈ−ベンゾトリアゾール（５．８３ｋｇ）を添加した。さらなるアセトニトリル（３０Ｌ）を添加し、次いで混合物を２０℃で撹拌した。撹拌は一晩続行した。トリエチルアミン（８．１６Ｌ）を６分かけて２０℃で添加した。黄色の懸濁液を４０分間４５℃まで加熱した。１５０ｒｐｍで撹拌しながら、塩化ホスホリル（４．５６２ｋｇ）を４５分間緩徐に添加した。添加を制御することにより、試薬を混合物内に直接滴下して塊の形成を防いだ。添加は発熱性であり、５３℃の最大温度が観察された。茶色の懸濁液を１時間かけて８０℃まで加熱し、次いで反応混合物をこの温度で５時間撹拌した。内部温度を７５〜８０℃の間に維持しながらアセトニトリル（３０Ｌ）を２０分かけて添加した。ＨＰＬＣ分析は、反応が９８．３１％完了したことを示した（生成物％／（生成物％＋出発物質％）。混合物（茶色の懸濁液）を８０℃で７０分間さらに撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、反応が９９．４８％完了したことを示した（生成物％／（生成物％＋出発物質％）。温度を７５〜８０℃の間に維持しながらアセトニトリル（６１Ｌ）を３０分かけて添加した。薄茶色の懸濁液を８０℃で９０分間撹拌し、次いでそれを２．５時間かけて２０℃まで冷ました。混合物を２０℃で１２時間加熱した。混合物を圧力フィルタ内に移した。ろ過ケークをアセトニトリル（１８Ｌ）で２回洗浄した。両方の洗浄ステップは、３．５〜４バールのＮ_２で行った。これらのろ過のそれぞれは、完了までに一晩かかった。ろ過ケークをフィルタ上で７．５時間乾燥させた。この物質を５０Ｌフラスコ内に移し、Ｔａ４０〜５０℃／５０〜１１ｍｂａｒのロータバップで３日間乾燥させて９９．８８％の乾燥質量を得た。１−（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール：トリエチルアミン：塩酸塩複合物（１：０．２１：０．２１モル：モル：モル）の収量は、７．９４８ｋｇ（７５％）であった。ＮＭＲスペクトルは、実施例２で上に記載したものと一致した。

ステップ４：（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール
Ｎ_２下、１６０Ｌグラスライニング反応器中、１−（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール（２１％）塩酸塩（７．８６ｋｇ）を有するトリエチルアミン（２１％）化合物を２０℃でトリエチルアミン（２３．３Ｌ）中に溶解した。（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−６−アミノ−２，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール塩酸塩（４．４９ｋｇ）、続いてトリエチルアミン（２３Ｌ）を添加した。反応混合物を１時間かけて８０℃まで加熱し、次いで混合物を８０℃で８時間撹拌した。次いで混合物を２０℃まで冷ました。ＨＰＬＣ分析は、反応が９９．９７％完了したことを示した（生成物％／（生成物％＋出発物質％）。次いで、水（６６Ｌ）を２０〜２５℃で３０分かけて添加し（発熱性）、それにより茶色の懸濁液を得た。混合物を６０℃、１５０〜９５ｍｂａｒで、４２Ｌ溶媒が留去するまで濃縮した。懸濁液を５０℃に加熱し、固体を９０Ｌ圧力フィルタ（１．２バールのＮ_２）上で収集し、これには４０分かかった。このプロセスの間、フィルタ上の物質を能動的に加熱することはなかった。反応器中の残留固体を１５Ｌの母液で洗い流した。湿潤ろ過ケークを反応器中に戻した。水（６４Ｌ）を添加した。混合物を３０分かけて５０℃まで加熱した。洗浄した固体を９０Ｌ圧力フィルタ上に収集した。ろ過ケーク中の残留母液を５０分間１．２バールのＮ_２で押し出した（反応器を洗い流すために５０Ｌの母液を使用した）。ろ過ケークを、２０℃でＮ_２／真空の微流を適用して、圧力フィルタ上で１３．５時間乾燥させ、１０．２４７ｋｇの粗（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノールを得た。湿潤ろ過ケークを分離した。湿潤ろ過ケークを反応器内へ充填した。アセトニトリル（６５Ｌ）、続いて活性炭（６．５９ｋｇ）を添加した。混合物を３０分間５０℃に加熱し、５０℃で２時間撹拌した。それと同時に、調節のためにアセトニトリル（２０Ｌ）を使用してセライト（４．２５ｋｇ）の床を９０Ｌ圧力フィルタ内に調製した。床を５０℃で加熱した。黒色の懸濁液をフィルタ上に移し、２バールでセライトプラグに押し通した。ろ液を耐熱チューブ及び０．４５μｍインラインフィルタを介して２００Ｌ撹拌槽へ移した。この動作は完了に１８分を要した。洗浄のため、反応器中で５０℃まで温められ、温めたろ過ケーク上に移し、２バールで押し通したアセトニトリル（５０Ｌ）。再び、ろ液を耐熱チューブ及び０．４５μｍインラインフィルタを介して２００Ｌ撹拌槽に移した。この動作は完了に１０分を要した。反応器を洗浄して付着した炭を除去した（ＮａＣｌ／アセトンを使用した研磨洗浄）。撹拌槽中のろ液を反応器に移し、６３Ｌが留去するまで５０℃／１２０ｍｂａｒで濃縮した。十分に撹拌しながら（３００ｒｐｍ）及び５０℃、水（１１０Ｌ）を２時間かけて緩徐に添加した。淡黄色の懸濁液が形成された。濃縮物を３時間２０℃まで冷まし、次いでこの温度で１３時間撹拌した。ろ液を押し出すために１．２バールのＮ_２を使用して、固体を５０Ｌフィルタ上に収集した。ろ過ケークを水（１８Ｌ）で２回洗浄し、次いでＮ_２の微流を使用して、フィルタ上で２４時間２００〜１００ｍｂａｒで乾燥させた。４．５６３ｋｇの表題化合物を収率５５％で得た。ＮＭＲスペクトルは、実施例２で上に記載したものと一致した。

ステップ５：（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルスルファメート
Ｎ_２下、２０℃で、（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール（４．０１９ｋｇ）を、１６０Ｌグラスライニング反応器に入れ、次いで２−メチル−テトラヒドロフラン（４０Ｌ）を添加した。混合物を１５０ｒｐｍで２０℃で３０分間撹拌し、それにより透明溶液が形成された。ＫＦ測定を行うと、含水率が０．０３６％Ｈ_２Ｏであることを示した。この溶液を２０℃で一晩撹拌した。翌朝、ＰＰＴＳ（２．２ｋｇ）を反応器内へ充填した。２０℃で、（４−アザ−１−アゾニアビシクロ［２．２．２］オクト−１−イルスルホニル）（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アザニド−１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（１：１）塩酸塩（１０．２ｋｇ）を添加した。不均一混合物の撹拌は１３０ｒｐｍで開始した。反応物を２００ｒｐｍで２０℃で１時間、次いで増加した速度２５０ｒｐｍでさらに１時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、変換が８７．３％であることを示した。反応生成量を３００ｒｐｍで２０℃で２時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、変換が９５．６％であることを示した。反応生成量を３００ｒｐｍで２０℃で２時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、変換が９７．７％であることを示した。ＮａＨＣＯ_３３．７％（４０Ｌ）を２０℃で混合物に添加し、反応物を３００ｒｐｍで１０分間撹拌した。反応混合物からの固体の大部分は溶液となった。反応器の上部に付着した残留物質を溶解するため、二重層混合物を底からのＮ_２流によって短時間撹拌した。層が分離され、それは１３分後に完了した。水層を排出すると、有機層が反応器内に残った。有機層は茶色の溶液であり、水層は無色不透明であった。水層のｐＨは、およそ８であった（ｐＨスティック）。ＮａＨＣＯ_３３．７％（４０Ｌ）を２０℃で混合物に添加し、それを３００ｒｐｍで１０分間撹拌した。層が分離され、それは２７分後に完了した。水層を排出すると、有機層が反応器内に残った。有機層は茶色の溶液であり、水層は無色不透明であった。水層のｐＨは、およそ８〜９であり（ｐＨスティック）、有機層のｐＨは、およそ８であった（ｐＨスティック、湿潤）。有機層内の生成物を供給槽に移し、一時的に（およそ３０分）２０℃で保管した。２−メチルテトラヒドロフラン（３０Ｌ）及びＨ_２Ｏ（２０Ｌ）の混合物を使用して、反応器を任意に洗浄した。有機層を反応器に入れ、−２０℃で１４．５時間保管した。１５０ｒｐｍで撹拌しながら、有機層（懸濁液）をアセトニトリル（１６Ｌ）及び水（１５Ｌ）で希釈し、５℃まで温めた。５℃で、酢酸（０．１７２ｋｇ）を５分かけてｐＨ６まで添加すると、薄茶色の溶液である混合物が生じた。（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルスルファメート（２．０ｇ；上の実施例２、ステップ５に記載されるものと同様の様式で調製された）をシードとして添加した。５℃で、酢酸（０．５１５ｋｇ）を１５分かけてｐＨ４〜５まで添加すると、懸濁液が形成された。供給槽を水（１．６Ｌ）で洗い流した。混合物を５℃で９０ｒｐｍで１．５時間撹拌し、次いでそれを５０Ｌフィルタに移し、１．２バールのＮ_２でわずか４分ろ過した。ろ過ケークを冷たいアセトニトリル（８Ｌ、０〜５℃）で４回洗浄し、次いでそれをフィルタ上で、Ｎ_２の微流を使用して、２０℃、２００ｍｂａｒで、８時間乾燥させた。表題化合物の収量は３．５９４ｋｇ（６２％）であった。ＮＭＲスペクトルは、実施例２で上に記載したものと一致した。

ステップ６：（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート化合物１
３．５３８ｋｇの（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルスルファメートを、１３．５ｋｇのアセトニトリル中に懸濁させ、５℃まで冷ました。この混合物に２７．３ｋｇのＨ_３ＰＯ_４を１時間５０分かけて添加した。反応物を５０分かけて２０℃まで温め、次いで８時間２２℃で撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、反応物が９９．６９％完了したことを示した。第１の部分（反応混合物の５０％）に８．９ｋｇの水及び７．９５ｋｇのエチルアセテートを添加した。次いで、４８Ｌの飽和炭酸ナトリウムでｐＨを６．５に調節した。７．７ｋｇのエチルアセテートを添加すると、相が分離した。第２の部分（反応混合物の５０％）に８．９ｋｇの水及び７．９５ｋｇのエチルアセテートを添加した。次いで、４８Ｌの飽和炭酸ナトリウムでｐＨを６．１５に調節した。７．７ｋｇのエチルアセテートを添加すると、相が分離した。有機相を容器内に１つに合わせて（１．８ｋｇのエチルアセテートで洗い流した）、１７．８ｋｇの水で洗浄した。相が分離し、１７．８ｋｇの水及び０．２３７ｋｇのＮａＣｌを添加すると、相が分離した。１７．８ｋｇの水及び０．２３７ｋｇのＮａＣｌでの洗浄の繰り返しを追加すると、相が分離した。次いで有機層を１つに合わせると、混合物の温度は４０℃に上昇し、圧力は３００〜１４２ｍｂａｒまで減少した。２７Ｌの液体を４時間かけて留去した。次いで、３１．７ｋｇのアセトニトリルを溶液に添加すると、混合物の温度は３８℃に上昇し、圧力は３２０〜１５３ｍｂａｒまで減少した。２６Ｌの液体を３時間かけて留去した。次いで、３１．７ｋｇのアセトニトリルを溶液に添加すると、混合物の温度は３７℃に上昇し、圧力は３２０〜１５３ｍｂａｒまで減少した。３４Ｌの液体を２時間かけて留去した。懸濁液を５０℃で１時間撹拌し、次いで３時間かけて２０〜２５℃まで冷ました。反応物を一晩撹拌し、生成物をろ過し、８．９ｋｇのアセトニトリルで２回洗浄した。ケークを２０℃（３３ｍｂａｒ）、次いで４０〜４５℃（１ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、２．０８ｋｇ（７５．８％）の表題化合物を得た。２．０６６ｋｇの（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）シクロペンチル）メチルスルファメートを、９．７６ｋｇのアセトロニトリル及び４．１２ｋｇの水と一緒に反応器内に充填し、溶解するまで５６℃の温度で１時間１０分加熱した。溶液を研磨ろ過し、フィルタをアセトニトリル３．１６ｋｇ及び１．３７ｋｇの水で洗い流した。結果として生じた溶液に、反応温度を５２〜５５℃の間に維持しながら、１１．０ｋｇの水を４５分かけて添加した。０．００９ｋｇの（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（（２−（３−（（トリフルオロメチル）チオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）アミノ）シクロペンチル）メチルスルファメートをシードとして添加した（上の実施例２、ステップ５に記載されるものと同様の様式で調製した）。懸濁液は、１０分の撹拌後に目に見えた。溶液に、反応温度を５０〜５５℃の間に維持しながら、９．６２ｋｇの水を３時間かけて添加した。次いで、懸濁液を３時間かけて２０℃まで冷まし、２２〜２３℃で１２時間撹拌した。次いで、懸濁液をろ過し、１３．７ｋｇの水で２回洗浄した。生成物を４０℃で乾燥させた。１．６０５ｋｇの表題化合物を収率７８％で得た。ＮＭＲスペクトルは、実施例２で上に記載したものと一致した。

実施例４：インビボ腫瘍効果モデル
ＨＮ−１３−００１４異種移植モデルは、ヒト頭頸部原発腫瘍モデルである。およそ生後９週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌード（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｉｎｏ−Ｂｒｉｔｉｓｈ ＳＩＰＰＲ／ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ．）マウスに対して、およそ３０ｍｍ^３のＨＮ−１３−００１４腫瘍片を右歯面に皮下移植した。平均腫瘍体積がおよそ１６２ｍｍ^３に達したとき、本動物を１０つの治療群（ｎ＝８／群）に無作為に分けた。

ＬＵ−０１−００３０異種移植モデルは、ヒト原発非小細胞肺癌モデルである。ＬＵ−０１−００３０モデルを用いた第１の研究では、生後およそ９週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌード（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｉｎｏ−Ｂｒｉｔｉｓｈ ＳＩＰＰＲ／ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ．）マウスに対して、およそ３０ｍｍ^３のＬＵ−０１−００３０腫瘍片を右歯面に皮下移植した。平均腫瘍体積がおよそ１５９ｍｍ^３に達したとき、本動物を１０つの治療群（ｎ＝８／群）に無作為に分けた。

ＬＵ−０１−００３０異種移植モデルを用いた第２の研究では、生後６〜８週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌード（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｉｎｏ−Ｂｒｉｔｉｓｈ ＳＩＰＰＲ／ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ．）マウスに対して、およそ２０〜３０ｍｍ^３のＬＵ−０１−００３０腫瘍片を右歯面に皮下移植した。平均腫瘍体積がおよそ１８２ｍｍ^３に達したとき、本動物を６つの治療群（ｎ＝８／群）に無作為に分けた。

ＬＵ−０１−０２６６異種移植モデルは、ヒト原発非小細胞肺腫瘍モデルである。およそ生後９週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌード（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｉｎｏ−Ｂｒｉｔｉｓｈ ＳＩＰＰＲ／ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ．）マウスに対して、およそ３０ｍｍ^３のＬＵ−０１−０２６６腫瘍片を右歯面に皮下移植した。平均腫瘍体積がおよそ１７３ｍｍ^３に達したとき、本動物を１０つの治療群（ｎ＝８／群）に無作為に分けた。

ＳＴ−０２−０００４異種移植モデルは、ヒト原発胃癌モデルである。およそ生後９週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌード（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｉｎｏ−Ｂｒｉｔｉｓｈ ＳＩＰＰＲ／ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ．）マウスに対して、およそ３０ｍｍ^３のＳＴ−０２−０００４腫瘍片を右歯面に皮下移植した。平均腫瘍体積がおよそ１６２ｍｍ^３に達した時、本動物を６つの治療群（ｎ＝８／群）に無作為に分けた。

ＨＮ−１３−０００７異種移植モデルは、ヒト原発頭頸部肺癌モデルである。およそ生後９週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌード（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｉｎｏ−Ｂｒｉｔｉｓｈ ＳＩＰＰＲ／ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ．）マウスに対して、およそ３０ｍｍ^３のＨＮ−１３−０００７腫瘍片を右歯面に皮下移植した。平均腫瘍体積がおよそ１３０ｍｍ^３に達したとき、本動物を１０つの治療群（ｎ＝８／群）に無作為に分けた。

検査薬
検査薬は、以下に概説されるように投与された。

化合物１［（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート］を、滅菌水中の１０％ＨＰｂＣＤに製剤化し、ＨＮ−１３−００１４及びＬＵ−０１−００３０（第１の研究）モデルに、３週間ＢＩＷ（週２回のスケジュール、月曜日及び木曜日、即ち、０、３、７、１０、１４、１７日目）で静脈内に投与した。化合物１製剤は、毎週調製し、暗所に室温で保管した。

化合物１［（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート］を、滅菌水中の１０％ＨＰｂＣＤに製剤化し、ＬＵ−０１−０２６６及びＨＮ−１３−０００７モデルにおいては０、３、７、１０、１４、１７日目、ならびにＳＴ−０２−０００４モデルにおいて、及びＬＵ−０１−００３０モデルを用いた第２の研究においては０、３、８、１１、１５、１８日目に静脈内に投与した。化合物１製剤は、毎週調製し、暗所に室温で保管した。

ビーム集束された放射線を、ＨＮ−１３−００１４及びＬＵ−０１−００３０（第１の研究）モデルにおいて、０、１、７、及び８日目、若しくは０、３、７、及び１０日目に投薬される１または２Ｇｒａｙのいずれかを使用して照射した。Ｒａｄ Ｓｏｕｒｃｅ ＲＳ−２０００Ｘ線照射器を療法に使用した（Ｒａｄ Ｓｏｕｒｃｅ）。放射線の前に、８０ｍｇ／ｋｇで１．０％ペントバルビタールナトリウムを使用した腹腔内注射により動物に麻酔をかけた（販売元：Ｓｉｇｍａ）。集束された放射線を各マウスに１Ｇｙ／分で適用した。

ビーム集束された放射線を、ＬＵ−０１−０２６６及びＨＮ−１３−０００７モデルにおいて、０、１、７、及び８日目、または０、３、７、及び１０日目に投薬される２Ｇｒａｙを使用して照射した。ＳＴ−０２−０００４モデルにおいては、２Ｇｒａｙの放射線を０、１、３、及び８日目に照射した。Ｒａｄ Ｓｏｕｒｃｅ ＲＳ−２０００Ｘ線照射器を療法に使用した（Ｒａｄ Ｓｏｕｒｃｅ）。放射線の前に、８０ｍｇ／ｋｇで１．０％ペントバルビタールナトリウムを使用した腹腔内注射により動物に麻酔をかけた（販売元：Ｓｉｇｍａ）。集束された放射線を各マウスに１Ｇｙ／分で適用した。

ビーム集束された放射線を、ＬＵ−０１−００３０モデルのための第２の研究において、０日目に投薬される４Ｇｒａｙを使用して照射した。

腫瘍測定：
腫瘍は、ノギスを使用して週に２回測定した。腫瘍体積は、以下の式を使用して算出した。（０．５×［長さ×幅^２］）治療群及び投薬／治療スケジュールを以下の表１ａ、２ａ、３ａ、４ａ、及び５ａに示す。腫瘍サイズ及び体重は、研究が継続している間、およそ週に２回測定する。マウスは、腫瘍体積がおよそ１０００ｍｍ^３に達したときに安楽死させた。いくつかの研究においては、投薬期間後に腫瘍成長を継続して監視した。表１ａ、２ａ、３ａ、４ａ、及び５ａには、ＨＮ−１３−００１４（２１日目）、ＬＵ−０１−００３０（２１日目）、第２のＬＵ−０１−００３０研究（２０日目）、ＬＵ−０１−０２６６（２０日目）、ＳＴ−０２−０００４（２１日目）、及びＨＮ−１３−０００７（２４日目）についてそれぞれ腫瘍体積が示される。平均腫瘍体積は、選択した研究の選択した群について時間の関数として報告される。

皮下異種移植モデルにおける腫瘍成長の組み合わせ効果の統計的分析
以下の表に指定されるように、０日目から２０日目、２１日目、または２４日目までの測定が分析される。すべての腫瘍体積は、ｌｏｇ_１０形質転換前に１の値がそれらに追加される。各動物について、０日目のｌｏｇ腫瘍体積を、後続日のｌｏｇ腫瘍体積から差し引く。時間に対するこの差異は、台形公式を使用して各動物について曲線下面積（ＡＵＣ）を算出するために使用される。治療群の動物が早期に研究から取り除かれる場合において、最後に観察された腫瘍値が、すべての後続時点で繰り返される。薬剤ＡとＢとの組み合わせの相乗効果スコアは、
１００^＊（平均（ＡＵＣ_ＡＢ）−平均（ＡＵＣ_Ａ）−平均（ＡＵＣ_Ｂ）＋平均（ＡＵＣ_ｃｔｌ））／平均（ＡＵＣ_ｃｔｌ）
と定義され、式中、ＡＵＣ_ＡＢ、ＡＵＣ_Ａ、ＡＵＣ_Ｂ、及びＡＵＣ_ｃｔｌは、それぞれ組み合わせ群、Ａ群、Ｂ群、及び対照群の動物のＡＵＣ値である。相乗効果スコアの標準誤差は、動物間のＡＵＣ値におけるばらつきを基に計算される。両側ｔ検定を使用して相乗効果スコアがゼロから著しく異なるかどうかを判定する。Ｐ値が０．０５を上回る場合、その組み合わせは相加的であると見なされる。Ｐ値が０．０５を下回り、かつ相乗効果スコアがゼロ未満の場合、その組み合わせは相乗的と見なされる。Ｐ値が０．０５を下回り、かつ相乗効果スコアがゼロを超えるが、組み合わせの平均ＡＵＣが２つの単一薬剤治療間の最低平均ＡＵＣよりも低い場合、その組み合わせは準相加的である。Ｐ値が０．０５を下回り、かつ相乗効果スコアがゼロを超え、かつ組み合わせの平均ＡＵＣが単一薬剤治療のうちの少なくとも１つの平均ＡＵＣよりも大きい場合、その組み合わせは拮抗的である。

結果
上の一般的な方法で記載されるように実施されたマウス異種移植モデルを、放射線と組み合わされる化合物１のインビボでの組み合わせ効果を査定するために使用した。各研究の詳細は、下の表１ａ、２ａ、３ａ、４ａ、及び５ａに示される。結果は、上記の統計分析を使用して分析し、組み合わせの分類は、下の表１ｂ、２ｂ、３ｂ、４ｂ、及び５ｂに示される。

ＨＮ−１３−００１４異種移植モデル
ＨＮ−１３−００１４モデルでは、単一の薬剤化合物１（３週間、６．２５及び１５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷでＩＶ）または放射線（研究０、１、７、８日目、または０、３、７、１０日目に２Ｇｙ）の投薬が、ビヒクル対照と比較してわずかな抗腫瘍活性を生み出した。化合物１を２Ｇｙ放射線と組み合わせることが、相加的組み合わせ効果を生み出した。本研究のすべての治療群は表１ａに示される。この組み合わせの組み合わせ分類は表１ｂに示される。治療期間中の腫瘍成長曲線が示される（図１ａ及び１ｂ）。研究群治療群１、２、３、４、６、及び８の平均腫瘍成長曲線は図１ａに示され、治療群１、２、３、５、７、及び９は図１ｂに示される。図１ａ及び１ｂに示されるエラーバーは、平均（ＳＥＭ）の標準誤差を示す。
表１ａ：ＨＮ−１３−００１４異種移植モデルにおける放射線と化合物１との組み合わせ
表１ｂ：ＨＮ−１３−００１４異種移植モデルにおける放射線及び化合物１のインビボ組み合わせの分類

ＬＵ−０１−００３０異種移植モデル
ＬＵ−０１−００３０モデルを使用した第１の研究では、６．２５ｍｇ／ｋｇ化合物１を単一の薬剤として投与することは、ビヒクル対照と比較して、抗腫瘍活性をもたらさなかった。１５ｍｇ／ｋｇで単一の薬剤化合物１または放射線（研究０、１、７、８日目または０、３、７、１０日目に２Ｇｙ）を投薬することが腫瘍停滞を生み出した。化合物１を２Ｇｙ放射線と組み合わせることが、相加的‐相乗的組み合わせ効果を生み出した。本研究のすべての研究群は表２ａに示される。この組み合わせの組み合わせ効果は表２ｂに示される。治療期間中の腫瘍成長曲線が示される（図２ａ、２ｂ、及び２ｃ）。研究群治療群１、３、４、及び８の平均腫瘍成長曲線は図２ａに示され、治療群１、２、３、４、６、及び８は図２ｂに示され、治療群１、２、３、５、７、及び９は図２ｃに示される。図２ａ、２ｂ、及び２ｃに示されるエラーバーは、標準誤差測定（ＳＥＭ）を示す。
表２ａ：ＬＵ−０１−００３０異種移植モデルにおける放射線と化合物１との組み合わせ
表２ｂ：ＬＵ−０１−００３０異種移植モデルにおける放射線及び化合物１のインビボ組み合わせの分類

モデルを使用した第２のＬＵ−０１−００３０研究では、化合物１を４Ｇｙ放射線と組み合わせることが相加的組み合わせ効果を生み出した。第２のＬＵ−０１−００３０研究のすべての研究群は表２ｃに示される。この組み合わせの組み合わせ効果は表２ｄに示される。
表２ｃ：第２のＬＵ−０１−００３０異種移植研究における放射線と化合物１との組み合わせ
表２ｄ：第２のＬＵ−０１−００３０異種移植研究における放射線及び化合物１のインビボ組み合わせの分類

ＬＵ−０１−０２６６異種移植モデル
ＬＵ−０１−０２６６モデルでは、化合物１（３週間、０、３、７、１０、１４、１７日目に６．２５及び１５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷでＩＶ）の投薬は、ビヒクル対照と比較して弱い抗腫瘍活性を生み出した。放射線（研究０、１、７、８日目、または０、３、７、１０日目に２Ｇｙ）の投薬は、ビヒクル対照と比較して強い抗腫瘍活性を生み出した。化合物１を２Ｇｙ放射線と組み合わせることが、相加的組み合わせ効果を生み出した。本研究のすべての治療群は表３ａに示される。この組み合わせの組み合わせ分類は表３ｂに示される。平均腫瘍成長曲線は図３ａ及び３ｂに示される。治療期間中の腫瘍成長曲線が示される。研究群治療群１、２、３、４、６、及び８は図３ａに示され、治療群１、２ ３、５、７、及び９は図３ｂに示される。図３ａ及び３ｂに示されるエラーバーは、平均（ＳＥＭ）の標準誤差を示す。
表３ａ：ＬＵ−０１−０２６６異種移植モデルにおける放射線と化合物１との組み合わせ
表３ｂ：２０日目までのＬＵ−０１−０２６６異種移植モデルにおける放射線及び化合物１のインビボ組み合わせの分類

ＳＴ−０２−０００４異種移植モデル
ＳＴ−０２−０００４モデルでは、化合物１（３週間、０、３、８、１１、１５、及び１８日目に６．２５及び１５ｍｇ／ｋｇでＩＶ）の投薬は、ビヒクル対照と比較して著しい抗腫瘍活性をもたらさなかった。放射線（０、１、３、８日目に２Ｇｙ）の投薬は、ビヒクル対照と比較して強い腫瘍成長阻害を生み出した。６．２５ｍｇ／ｋｇの化合物１と２Ｇｙの放射線を組み合わせることが、相加的組み合わせ効果を生み出した。対照的に、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１と２Ｇｙの放射線を組み合わせることは、相乗的組み合わせ効果を生み出した。本研究のすべての研究群は表４ａに示される。この組み合わせの組み合わせ効果は表４ｂに示される。治療期間中の腫瘍成長曲線が示される（図４ａ及び４ｂ）。研究群治療群１、２、４、及び６は図４ａに示され、治療群１、２ ３、及び５は図４ｂに示される。図４ａ及び４ｂに示されるエラーバーは、平均（ＳＥＭ）の標準誤差を示す。
表４ａ：ＳＴ−０２−０００４異種移植モデルにおける放射線と化合物１との組み合わせ
表４ｂ：２１日目までのＳＴ−０２−０００４異種移植モデルにおける放射線及び化合物１のインビボ組み合わせの分類

ＨＮ−１３−０００７異種移植モデル
ＨＮ−１３−０００７モデルでは、化合物１（３週間、０、３、７、１０、１４、１７日目に６．２５ｍｇ／ｋｇでＩＶ）の投薬は、ビヒクル対照と比較して抗腫瘍活性をもたらさなかった。１５ｍｇ／ｋｇの単一の薬剤化合物１または放射線（研究０、１、７、８日目、または０、３、７、１０日目に２Ｇｙ）の投薬は、極小の腫瘍成長阻害を生み出した。化合物１を２Ｇｙ放射線と組み合わせることが、相加的組み合わせ効果を生み出した。本研究のすべての研究群は表５ａに示される。この組み合わせの組み合わせ効果は表５ｂに示される。治療期間中の平均腫瘍成長曲線が示される（図５ａ及び５ｂ）。研究群治療群１、２、３、４、６、及び８は図５ａに示され、治療群１、２、３、５、７、及び９は図５ｂに示される。図５ａ及び５ｂに示されるエラーバーは、平均（ＳＥＭ）の標準誤差を示す。
表５ａ：ＨＮ−１３−０００７異種移植モデルにおける放射線と化合物１との組み合わせ
表５ｂ：２４日目までのＨＮ−１３−０００７異種移植モデルにおける放射線及び化合物１のインビボ組み合わせの分類

実施例５：インビトロコロニー形成アッセイ
一般的方法：ＨＣＴ−１１６細胞を、１０％ウシ胎仔血清を補充したマッコイ５Ａ培地中で増殖させた。細胞を１２ウェルプレート上に播種した（２００／ウェル）。翌日、細胞を化合物１（培地中）の濃度増大で処理し、２時間後に０、２、または４グレイで照射した。さらに６時間後、培地を、化合物１あり及びなし（ウォッシュアウト条件）で、置き換える。１０日後、コロニーの数を数えて記録する。使用されるラジエータはＸ線照射器（ＭＢＲ−１５２０Ｒ−３，Ｈｉｔａｃｈｉ Ｐｏｗｅｒ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）である。

結果：
治療開始から１０日目、ウェルごとのＨＣＴ−１１６コロニーの数を、ＧｅｌＣｏｕｎｔ（商標）（Ｏｘｆｏｒｄ Ｏｐｔｒｏｎｉｘ Ｌｔｄ．）を使用して数え、生データ結果を表６に示す。ウェルごとのＨＣＴ−１１６コロニーの数は、治療を制御するために正規化し、このデータを生存率％として図６に表す。
表６：ウェルごとに数えたＨＣＴ−１１６コロニーの数

Claims (23)

1. 癌の治療方法であって、そのような治療を必要とする患者に対して、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩と放射線との組み合わせを投与することを含む、前記方法。
2. 前記癌が固形腫瘍である、請求項１に記載の方法。
3. 前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、または胃食道接合部癌である、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、または頭頸部癌である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記癌が、胃癌、食道癌、または胃食道接合部癌である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
6. 前記癌が血液癌である、請求項１に記載の方法。
7. 前記癌が、多発性骨髄腫または非ホジキンリンパ腫である、請求項１または６に記載の方法。
8. 前記放射線が粒子放射線である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記放射線が対外照射によって投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
10. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、２〜８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
11. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、２〜８週間繰り返される各週の１日目に投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
12. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、２〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
13. 前記放射線が、２〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記放射線が、５〜８週間繰り返される各週の１〜５日目のいずれか２日に投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
15. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、約４ｍｇ〜約６５ｍｇの用量で投与される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
16. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、約１５ｍｇ〜約５５ｍｇの用量で投与される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
17. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、約１８ｍｇ〜約４３ｍｇの用量で投与される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
18. 投与される放射線の総線量が、約２０Ｇｙ〜約８０Ｇｙである、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
19. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、６〜８週間繰り返される各週の１日目及び４日目の各日に投与され、かつ前記放射線が、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
20. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、６〜８週間繰り返される各週の１日目に投与され、かつ前記放射線が、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
21. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与され、かつ前記放射線が、６〜８週間繰り返される各週の１〜５日目の各日に投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
22. （（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−（３−（トリフルオロメチルチオ）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イルアミノ）シクロペンチル）メチルスルファメート（化合物１）またはその薬学的に許容される塩が、６〜８週の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の方法。
23. 前記放射線が、６〜８週の期間のうちのいずれか１または２週間は投与されない、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。