TWI806043B - 作為hpk1抑制劑之氮雜內醯胺化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於通式I之化合物
Figure 110115720-A0101-11-0001-1
及其醫藥學上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3a 、R3b 及R4 如本文所定義；包含此類化合物及鹽之醫藥組合物；及使用此類化合物、鹽及組合物治療包括癌症之異常細胞生長之方法。

Description

作為HPK1抑制劑之氮雜內醯胺化合物
本發明係關於式I化合物及其醫藥學上可接受之鹽，係關於包含此類化合物及鹽之醫藥組合物，及係關於其用途。本發明化合物、鹽及組合物為HPK1抑制劑，且因此可用於在治療或改善諸如癌症之異常細胞增殖性病症及改善疫苗療法中增強免疫系統之活化。
造血祖細胞激酶1 (Hematopoietic progenitor kinase 1，HPK1)亦稱為有絲分裂誘致劑活化之蛋白質激酶激酶激酶激酶1 (mitogen activated protein kinase kinase kinase kinase 1，MAP4K1)，為經由JNK及ERK信號傳導路徑操作之絲胺酸/蘇胺酸激酶之哺乳動物類Ste20家族之成員。HPK1主要表現於造血器官及細胞(例如T細胞、B細胞及樹突狀細胞)中，表明HPK1可能參與調節造血譜系(包括淋巴細胞)中之信號傳導。(Shui等人, 「Hematoppietic progenitor kinase 1 negatively regulates T cell receptor signaling and T cel-mediated immune responses」, Nature Immunology 8, 84-91 (2006))。
舉例而言，T細胞受體(TCR)之刺激誘導HPK1酪胺酸379磷酸化且再定位至質膜。HPK1之酶活化伴隨著HPK1激酶活化環中之調節位點的磷酸化。HPK1之完全活化取決於蘇胺酸165之自體磷酸化及絲胺酸171之蛋白激酶D (PKD)的磷酸化(Arnold等人, 「Activation of Hematopoietic Progenitor Kinase 1 Involves Relocation, Autophosphorylation, and Transphosphorylation by Protein Kinase D1.」, Mol Cell Biol 25 (6), 2364-83 (2005))。轉接蛋白SLP76之HPK1介導之磷酸化最終致使TCR信號傳導複合物不穩定，此阻礙及削弱T細胞活化及增生所需之下游有絲分裂誘致劑活化之蛋白質(MAP)激酶信號傳導事件。(Hernandez等人, 「The kinase activity of hematopoietic progenitor kinase 1 is esential for the regulation of T cell function」, Cell Reports 25, (1), 80-94, (2018))。HPK1激酶亦展示藉由PGE2 受體以PKA依賴性方式負向調節T細胞信號傳導。此外，已報導HPK1激酶在以下中具有作用：i)活化誘發之細胞死亡(activation-induced cell death，AICD)及JNK活化；ii)藉由與促進黏著及脫粒的轉接蛋白(ADAP)直接競爭結合SLP76 SH2域來調節T細胞上與白血球功能相關之抗原-1 (LFA-1)整合素活化；及iii)藉由與IKK-α及IKK-β相互作用而經由核因子кB (nuclear factor кB，NF-κB)信號傳導調節活化。研究亦展示HPK1負向調節T細胞中之MAP激酶路徑信號傳導及Ap-1轉錄。(於Hernandez等人 2018中綜述)。
迄今為止對HPK1激酶進行之研究表明HPK1抑制在增強樹突狀細胞及T細胞反應方面起作用，且藉此增強抗腫瘤免疫、病毒清除及對疫苗療法之反應。
本發明部分提供式I化合物及其醫藥學上可接受之鹽。此類化合物可抑制HPK1激酶之活性，因而影響生物學功能。亦提供醫藥組合物及藥劑，其包含單獨之本發明化合物或鹽或與額外抗癌治療劑或緩解劑組合之本發明化合物或鹽。
本發明亦部分提供製備本發明化合物、醫藥學上可接受之鹽及組合物之方法及使用前述之方法。
在一個實施例中，本發明提供一種式I化合物：
Figure 02_image006
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R1 為(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、鹵基(C1 -C6 )烷氧基、-N(R5 )(R6 )或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基及(C3 -C6 )環烷基經0或1個為羥基、氰基、(C1 -C6 )烷基或(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代，其中： R5 及R6 各自獨立地為氫或經0、1或2個獨立地選自由鹵素、(C1 -C6 )烷氧基、氰基及羥基組成之群的取代基取代的(C1 -C6 )烷基，或 R5 及R6 與其所連接之氮一起形成(4員至8員)雜環烷基，該(4員至8員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自由以下組成之群的取代基取代：鹵素、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及鹵基(C1 -C6 )烷氧基； R2 為N(R7 )(R8 )，其中： R7 及R8 各自獨立地為氫或經0或1個為鹵素、(C1 -C6 )烷氧基、氰基或羥基之取代基取代的(C1 -C6 )烷基；或 R7 為氫或經0或1個為鹵素、(C1 -C6 )烷氧基、氰基或羥基之取代基取代的(C1 -C6 )烷基；且R8 與其所連接之氮一起以及與R3a 及其所連接之碳一起形成(4員至6員)雜環烷基，該(4員至6員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自鹵素、羥基、(C1 -C3 )烷基、鹵基(C1 -C3 )烷基、(C1 -C3 )烷氧基及鹵基(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代；或 R7 及R8 與其所連接之氮一起形成(4員至6員)雜環烷基，該(4員至6員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自由以下組成之群的取代基取代：鹵素、羥基、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及鹵基(C1 -C6 )烷氧基； R3a 為氫或經0或1個為羥基或(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代的(C1 -C3 )烷基； R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基，其限制條件為當R4 為(R4 -i)時，R3a 及R3b 皆不為H； R4 為(R4 -i)或(R4 -ii)：
Figure 02_image008
其中： R4N 為(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基之取代基取代； R4C 為氫、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、鹵基(C1 -C6 )烷氧基或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C1 -C6 )烷基及鹵基(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基、氰基或(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代； R4D 為氫、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、鹵基(C1 -C6 )烷氧基或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C1 -C6 )烷基及鹵基(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基、氰基或(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代； R4E 為氫、鹵素、氰基、羥基或(C1 -C6 )烷基；及 R4F 為氫、鹵素、氰基、羥基、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、鹵基(C1 -C6 )烷氧基或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C1 -C6 )烷基及鹵基(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基、氰基或(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代。
本發明亦提供治療方法及用途，其包含投與本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要個體之異常細胞生長，尤其癌症之方法，其包含向個體投與治療有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本發明化合物可以單一藥劑投與，或可與其他抗癌治療劑，尤其適合於尤其癌症之護理劑標準物組合投與。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要個體之異常細胞生長，尤其癌症之方法，其包含向個體投與一定量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽組合一定量之額外抗癌治療劑，該等量合在一起有效治療該異常細胞生長。
在另一實施例中，本發明係關於一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用作藥劑，尤其用於治療癌症之藥劑。
在另一實施例中，本發明係關於一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於治療個體之異常細胞生長，尤其癌症。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其係用於治療個體之異常細胞生長，尤其癌症。
在另一實施例中，本發明係關於一種醫藥組合物，其係用於治療有需要個體之異常細胞生長，該組合物包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
在又一實施例中，本發明提供如本文中所描述的式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製備用於治療個體之異常細胞或病原體生長的藥劑。
在前述化合物、方法及用途之常見實施例中，異常細胞生長係癌症。
在一些實施例中，所提供之方法及用途引起以下效應中之一或多者：(1)抑制癌細胞增殖；(2)抑制癌細胞侵襲性；(3)誘導癌細胞之細胞凋亡；(4)抑制癌細胞癌轉移；(5)抑制血管新生；(6)增強T細胞反應；或(7)增強樹突狀及B細胞反應；(8)提高抗腫瘤活性；(9)增強疫苗治療；及(10)增強免疫系統介導之病原體之移除，諸如病毒、細菌或寄生蟲(例如，腸內寄生蟲)。
在另一實施例中，本發明提供一種用於治療HPK1依賴性病症及增強個體之免疫反應之方法，其包含向個體投與一定量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該量有效治療該病症或增強該免疫反應。
在一些實施例中，本文所描述之方法及用途進一步包含向個體投與一定量之額外抗癌治療劑、疫苗、抗細菌劑、抗病毒劑或姑息性試劑，該量一起有效治療該異常細胞生長或病原體。下文所述之本發明化合物之各實施例可與本文所述本發明化合物之一或多種其他實施例組合，該一或多種其他實施例與其所組合之實施例不矛盾。
如所主張的，應理解前文一般描述及以下詳細描述兩者皆僅為例示性及解釋性的，且並不限制本發明。
另外，下面描述本發明之各實施例設想本發明化合物之醫藥學上可接受之鹽在其範疇內。因此，短語「或其醫藥學上可接受之鹽」隱含於本文所述之所有化合物之描述中。
定義及例證
參考本發明之較佳實施例的以下詳細描述及本文中所包括之實例可更易於理解本發明。應理解，本文中所使用之術語係出於僅描述具體實施例之目的，且並非意欲為限制性的。應進一步理解，除非在本文中加以特定限制，否則本文所用之術語具有其在相關技術中所知的傳統含義。
如本文所用，除非另外指明，否則單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個提及物。舉例而言，「一」取代基包括一或多個取代基。
術語「約」係指表示其指的標稱值加或減10%之近似值的相對術語，在一個實施例中係指加或減5%，在另一實施例中係指加或減2%。在本發明之領域中，此近似值水準為適當的，除非具體陳述該值需要較緊密的範圍。
在本說明書中各個位置處，本發明化合物的取代基以群組或範圍形式揭示。特別期望本發明包括該等群及範圍之成員中的每個個別子組合。舉例而言，術語「C1-6 烷基」特定地意欲包括C1 烷基(甲基)、C2 烷基(乙基)、C3 烷基、C4 烷基、C5 烷基及C6 烷基。
如本文所用，「HPK1拮抗劑」或「HPK1抑制劑」係降低、抑制或以其他方式減少HPK1之一或多種生物活性(例如絲胺酸/蘇胺酸激酶活性、在TCR活化時募集至TCR複合物、與蛋白質結合搭配物(諸如SLP76)相互相用)之分子。使用HPK1拮抗劑之拮抗作用未必指示完全消除HPK1活性。實際上，活性可降低統計學上顯著之量。舉例而言，與適當對照相比，本發明化合物可降低HPK1活性至少約2.5%至約100%、約10%至約90%、約20%至約70%、約30%至約60%、約40%至約50%。在一些實施例中，HPK1拮抗劑降低、抑制或以其他方式減少HPK1之絲胺酸/蘇胺酸激酶活性。在一些此等實施例中，HPK1拮抗劑降低、抑制或以其他方式減少HPK1介導之SLP76及/或Gads之磷酸化。本發明所揭示之化合物直接結合至HPK1且抑制其激酶活性。
本文所述之發明可適當地在沒有任何本文未特定揭示之要素之情況下加以實施。因此，舉例而言，在本文之各情況下，術語「包含(comprising)」、「基本上由……組成(consisting essentially of)」及「由……組成(consisting of)」中之任一者可經另兩個術語中之任一者置換。
如本文所用，術語「(Cx -Cy )烷基」係指含有x至y個碳原子之飽和、分支鏈或直鏈烷基。舉例而言，「(C1 -C6 )烷基」係含有1至6個碳原子之烷基且包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、丁基、異丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、新戊基及正己基。術語「(C1 -C3 )烷基」含有1至3個碳原子且包括於「(C1 -C6 )烷基」內。
如本文所用，術語「鹵基(Cx -Cy )烷基」係指如上文所定義之(Cx -Cy )烷基，其中烷基經一或多個鹵素原子取代。鹵素取代基之代表性數目為1至3個取代基。鹵基(Cx -Cy )烷基之代表性實例包括(但不限於)氟甲基、氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基及三氟乙基。
如本文所用，術語「(Cx -Cy )烷氧基」係指如上文所定義之(Cx -Cy )烷基，其經由氧原子連接於母分子部分。(C1 -C6 )烷氧基之代表性實例包括(但不限於)甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、三級丁氧基、戊氧基及己氧基。
如本文所用，術語「鹵基(Cx -Cy )烷氧基」係指如上文所定義之(Cx -Cy )烷氧基，其中烷氧基經一或多個鹵素原子取代。鹵素取代基之代表性數目為1至3個取代基。鹵基(Cx -Cy )烷氧基之代表性實例包括(但不限於)氟甲氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基、二氟乙氧基及三氟甲氧基、三氟乙氧基。
如本文所用，術語「環烷基」意謂含有至少三個碳原子之式-Cn H(2n-1 )的環單價烴基。「(C3 -Cy )環烷基」係指具有3至y個碳原子之環烷基。「(C3 -C6 )環烷基」可為單環，其實例包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。
如本文所用，「雜環烷基」係指如上文所定義之環烷基，其中至少一個環碳原子經選自氮、氧或硫之雜原子置換。如本文所用，其中n為整數之術語「n員」通常描述部分中成環原子之數量，其中成環原子之數量為n。術語「(4員至6員)雜環烷基」意謂含有總共4至6個環原子之雜環烷基取代基，其中該等環原子中之至少一者為雜原子。術語「(4員至8員)雜環烷基」意謂含有總共4至8個環原子之雜環烷基取代基，其中該等環原子中之至少一者為雜原子。「(6員)雜環烷基」意謂含有總共6個環原子之雜環烷基取代基，其中該等環原子中之至少一者為雜原子。「(5員)雜環烷基」意謂含有總共5個環原子之雜環烷基取代基，其中該等環原子中之至少一者為雜原子。雜環烷基取代基可經由具有適當價態之氮原子或經由任何環碳原子連接。雜環烷基部分可視情況經一或多個取代基在具有適當價態之氮原子處或在任何可用碳原子處取代，諸如(C1 -C6 )烷基。
雜環烷基環之實例包括(但不限於)氮雜環丁基、四氫呋喃基、四氫吡唑基、四氫㗁𠯤基、咪唑啶基、吡咯啶基、哌啶基、哌𠯤基、㗁唑啶基、四氫哌喃基、四氫-㗁唑基、𠰌啉基及環氧丙烷基。
如本文所用，「鹵基」或「鹵素」係指氯、氟、溴或碘原子。
如本文所用，「羥基(hydroxy/hydroxyl)」意謂-OH基團。
如本文所用，「氰基」意謂-CN基團，其亦可描繪成：
Figure 02_image010
。
「患者」或「個體」係指溫血動物，諸如豬、牛、雞、馬、天竺鼠、小鼠、大鼠、沙鼠、貓、兔、狗、猴、黑猩猩及人類。
「醫藥學上可接受」指示物質或組成必須與包含調配物之其他成分及/或正用其治療之哺乳動物化學上及/或毒理學上相容。
如本文中所用，術語「治療有效量」係指將在一定程度上減輕所治療之病症之一或多種症狀的所投與化合物之量。參看HPK1激酶介導之病症(例如癌症)之治療，治療有效量係指具有在一定程度上減輕(或例如消除)與HPK1激酶介導之病症相關之一或多種症狀作用之量。舉例而言，治療有效量係指具有如下作用之量：(1)減小腫瘤尺寸，(2)抑制(亦即在一定程度上減緩，較佳終止)腫瘤轉移，(3)在一定程度上抑制(亦即在一定程度上減緩，較佳終止)腫瘤生長或腫瘤侵襲，及/或(4)在一定程度上減輕(或較佳消除)一或多種與癌症相關之病徵或症狀。
除非另外指示，否則如本文中所使用，術語「治療」意謂逆轉、減輕、抑制該術語所應用之病症或病狀或該病症或病狀之一或多種症狀的發展，或預防該病症或病狀或該病症或病狀之一或多種症狀。除非另外指示，否則如本文中所使用，術語「治療(treatment)」係指如本文中所定義之「治療(treating)」的治療行為。術語「治療」亦包括對個體之輔助治療及新輔助治療。
「異構體」意謂如下所定義之「立體異構體」及「幾何異構體」。
「立體異構體」係指具有一或多個對掌性中心之化合物，其可各以R或S構型存在。立體異構體包括所有非對映異構形式、對映異構形式及差向異構形式以及其外消旋體及混合物。
「幾何異構體」係指可以順式、反式、反側、異側(E)及同側(Z)形式以及其混合物存在的化合物。
本說明書可互換地使用術語「取代基」、「基團(radical)」及「基團(group)」。
若取代基描述為「獨立地選擇」自一個群，則取代基之各實例係獨立於其他取代基而選擇。因此各取代基可與其他取代基相同或不同。化合物
如本文所描述，式I化合物含有氮雜內醯胺(2,3-二氫-1-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮)核心，其中吡咯并環經由其氮原子連接至經R4 取代之吡啶。
在另一實施例中，本發明提供一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 為(R4 -i)； R4N 為(C1 -C6 )烷基或(C3 -C6 )環烷基；及 R4C 為氫或(C1 -C3 )烷基；其中R1 、R2 、R3a 及R3b 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 為(R4 -i)，其中R1 為-N(R5 )(R6 )或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C3 -C6 )環烷基為環丙基且經0或1個為(C1 -C6 )烷基之取代基取代，其中該(C1 -C6 )烷基為甲基； R5 及R6 各自獨立地為氫或(C1 -C3 )烷基，或 R5 及R6 與其所連接之氮一起形成經0或1個為(C1 -C6 )烷基之取代基取代的(5員)雜環烷基； R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自獨立地為氫或為甲基之(C1 -C6 )烷基； R3a 為經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代之(C1 -C3 )烷基；及 R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基。
在另一實施例中，本發明提供一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 為(R4 -ii)； R4D 為氫、(C1 -C6 )烷基或鹵基(C1 -C6 )烷基，其中該(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基之取代基取代； R4E 為氫；及 R4F 為氫、(C1 -C6 )烷基或鹵基(C1 -C6 )烷基，其中該(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基之取代基取代；且其中R1 、R2 、R3a 及 R3b 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 為(R4 -ii)，且其中R1 為-N(R5 )(R6 )或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C3 -C6 )環烷基為環丙基且經0或1個為(C1 -C6 )烷基之取代基取代，其中該(C1 -C6 )烷基為甲基； R5 及R6 各自獨立地為氫或(C1 -C3 )烷基，或 R5 及R6 與其所連接之氮一起形成經0或1個為(C1 -C6 )烷基之取代基取代的(5員)雜環烷基； R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自獨立地為氫或為甲基之(C1 -C6 )烷基； R3a 為氫或經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代之(C1 -C3 )烷基；及 R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1 為2-甲基-吡咯啶-1-基或2(R )-甲基-吡咯啶-1-基；且其中R2 、R3a 、R3b 及R4 如本文中所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自為氫，且其中R1 、R3a 、R3b 及R4 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3a 為經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代的(C1 -C3 )烷基；且其中R1 、R2 、R3b 及R4 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3b 為(C1 -C3 )烷基；且R1 、R2 、R3a 及R4 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自為氫；且其中R1 、R3a 、R3b 及R4 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 為氫；且R8 為(C1 -C3 )烷基；且其中R1 、R3a 、R3b 及R4 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I-A化合物(式I化合物，其中R4 為(R4 -i)：
Figure 02_image012
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R1 為-N(R5 )(R6 )或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C3 -C6 )環烷基為環丙基且經0或1個為(C1 -C6 )烷基之取代基取代，其中該(C1 -C6 )烷基為甲基； R5 及R6 各自獨立地為氫或(C1 -C3 )烷基，或 R5 及R6 與其所連接之氮一起形成經0或1個為(C1 -C6 )烷基之取代基取代的(5員)雜環烷基； R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自獨立地為氫或為甲基之(C1 -C6 )烷基； R3a 為經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代之(C1 -C3 )烷基； R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基； R4N 為(C1 -C6 )烷基或(C3 -C6 )環烷基；及 R4C 為氫或(C1 -C3 )烷基。
在另一實施例中，本發明提供式I-A化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3a 為經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代之(C1 -C3 )烷基；及 R3b 為(C1 -C3 )烷基。
在一些實施例中，當R4 為(R4 -i)時，式I-A化合物具有如式I-A-i或I-A-ii所示之絕對立體化學： 式I-A-i                                    式I-A-ii
Figure 02_image014
或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3a 、R3b 及R4C 在任何實施例中相對於式I-A定義。
在另一實施例中，本發明提供式I-B化合物(式I化合物，其中R4 為(R4 -ii)：
Figure 02_image016
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R1 為(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、鹵基(C1 -C6 )烷氧基、-N(R5 )(R6 )或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基及(C3 -C6 )環烷基經0或1個為羥基、氰基、(C1 -C6 )烷基或(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代，其中： R5 及R6 各自獨立地為氫或經0、1或2個獨立地選自由鹵素、(C1 -C6 )烷氧基、氰基及羥基組成之群的取代基取代的(C1 -C6 )烷基，或 R5 及R6 與其所連接之氮一起形成(4員至8員)雜環烷基，該(4員至8員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自由以下組成之群的取代基取代：鹵素、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及鹵基(C1 -C6 )烷氧基； R2 為N(R7 )(R8 )，其中： R7 及R8 各自獨立地為氫或經0或1個為鹵素、(C1 -C6 )烷氧基、氰基或羥基之取代基取代的(C1 -C6 )烷基；或 R7 為氫或經0或1個為鹵素、(C1 -C6 )烷氧基、氰基或羥基之取代基取代的(C1 -C6 )烷基；且R8 與其所連接之氮一起以及與R3a 及其所連接之碳一起形成(4員至6員)雜環烷基，該(4員至6員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自鹵素、羥基、(C1 -C3 )烷基、鹵基(C1 -C3 )烷基、(C1 -C3 )烷氧基或鹵基(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代；或 R7 及R8 與其所連接之氮一起形成(4員至6員)雜環烷基，該(4員至6員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自由以下組成之群的取代基取代：鹵素、羥基、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及鹵基(C1 -C6 )烷氧基； R3a 為氫或經0或1個為羥基或(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代的(C1 -C3 )烷基； R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基； R4D 為氫、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、鹵基(C1 -C6 )烷氧基或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C1 -C6 )烷基及鹵基(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基、氰基或(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代； R4E 為氫、鹵素、氰基、羥基或(C1 -C6 )烷基；及 R4F 為氫、鹵素、氰基、羥基、(C1 -C6 )烷基、鹵基(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、鹵基(C1 -C6 )烷氧基或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C1 -C6 )烷基及鹵基(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基、氰基或(C1 -C6 )烷氧基之取代基取代；且其中R2 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供一種式I-B化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R1 為-N(R5 )(R6 )或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C3 -C6 )環烷基經0或1個為(C1 -C3 )烷基之取代基取代，其中： R5 及R6 各自獨立地為氫或(C1 -C6 )烷基或 R5 及R6 與其所連接之氮一起形成經0、1或2個為(C1 -C6 )烷基之取代基取代之(4員至8員)雜環烷基； R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自獨立地為氫或(C1 -C6 )烷基； R3a 為氫，經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代之(C1 -C3 )烷基； R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基； R4D 為氫、(C1 -C3 )烷基或鹵基(C1 -C3 )烷基，其中該(C1 -C3 )烷基經羥基、氰基或(C1 -C3 )烷氧基之0或1個取代基取代； R4E 為氫；及 R4F 為氫、(C1 -C3 )烷基或鹵基(C1 -C3 )烷基，其中該(C1 -C3 )烷基經0或1個為羥基之取代基取代。
在另一實施例中，本發明提供式I-B化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基。
在另一實施例中，本發明提供式I-B化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4D 為氫、(C1 -C3 )烷基或鹵基(C1 -C3 )烷基，其中該(C1 -C3 )烷基經0或1個為羥基之取代基取代；且其中R1 、R3a 、R3b 、R4E 及R4F 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I-B化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3a 為經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代之(C1 -C3 )烷基；及 R3b 為(C1 -C3 )烷基；且其中R1 、R2 、R4D 、R4E 及R4F 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供一種式I-B化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R1 為-N(R5 )(R6 )或(C3 -C6 )環烷基，其中該(C3 -C6 )環烷基經0或1(C1 -C3 )烷基取代； R5 及R6 各自獨立地選自由(C1 -C6 )烷基組成之群，或R5 及R6 與其所連接之氮一起形成經0或1個(C1 -C6 )烷基取代之(5員)雜環烷基； R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自為氫； R3a 為氫或(C1 -C3 )烷基，其中該(C1 -C3 )烷基經0或1個(C1 -C3 )烷氧基取代； R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基； R4D 為氫或(C1 -C3 )烷基，其中(C1 -C3 )烷基經0至1個選自OH及F之取代基取代； R4E 為氫；及 R4F 為氫或(C1 -C3 )烷基。
在另一實施例中，本發明提供一種式I-B化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R1 為-N(R5 )(R6 )，或經0或1個為甲基之取代基取代之環丙基； R5 及R6 各自獨立地為氫或(C1 -C3 )烷基，或 R5 及R6 與其所連接之氮一起形成(5員)雜環烷基，該(5員)雜環烷基經0或1個為甲基之取代基取代； R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自獨立地為氫或甲基； R3a 為經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代之(C1 -C3 )烷基；及 R3b 為氫或(C1 -C3 )烷基；且其中R4D 、R4E 及R4F 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明係關於一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 為(R4 -ii)； R4D 為氫、(C1 -C6 )烷基或鹵基(C1 -C6 )烷基，其中該(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基之取代基取代； R4E 為氫；及 R4F 為氫、(C1 -C6 )烷基或鹵基(C1 -C6 )烷基，其中該(C1 -C6 )烷基經0或1個為羥基之取代基取代；且其中R1 、R2 、R3a 及 R3b 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明係關於一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 為(R4 -ii)； R4D 為氫、甲基、氟甲基、羥基甲基或乙基； R4E 為氫；及 R4F 為氫；且其中R1 、R2 、R3a 及R3b 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明係關於式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，當R3a 不同於R3b 時，其在R2 、R3a 及R3b 之方向方面具有特定立體化學。舉例而言，當R3b 為氫(R3b 不存在)時，式I化合物將呈現為如下： 式I(R )                                               式I(S )
Figure 02_image018
其中R1 、R3a 及R4 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供一種式I(R )或I(S )化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R1 為-N(R5 )(R6 )，或經1個為甲基之取代基取代之環丙基； R5 及R6 各自獨立地為氫或(C1 -C3 )烷基，或 R5 及R6 與其所連接之氮一起形成(5員)雜環烷基，該(5員)雜環烷基經0或1個為甲基之取代基取代； R2 為N(R7 )(R8 )，其中R7 及R8 各自獨立地為氫或甲基； R3a 為經0或1個為(C1 -C3 )烷氧基之取代基取代之(C1 -C3 )烷基； R3b 為氫； R4 為(R4 -ii)； R4D 為氫、甲基、氟甲基、羥基甲基或乙基； R4E 為氫；及 R4F 為氫或甲基。
在另一實施例中，本發明係關於式I(R )化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3b 為氫(R3b 不存在)：
Figure 02_image020
式I(R ) 且其中R1 、R3a 及R4 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明係關於式I(S )化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3b 為氫(R3b 不存在)：
Figure 02_image022
其中R1 、R3a 及R4 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I-B化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 為5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基、(5R )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基、(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基、5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基、(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基或(5R )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基，其中該甲基經0或1個為F或OH之取代基取代，且其中R1 、R2 、R3a 及R3b 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
在另一實施例中，本發明提供式I-B化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4 為(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基或(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基，其中該甲基經0或1個為F或OH之取代基取代，且其中R1 、R2 、R3a 及R3b 如本文所述實施例中之任一者中所定義。
本文相對於式II所述之各實施例亦適用於式I-A-i、I-A-ii、I-B-i及I-B-ii之化合物。
在另一實施例中，本發明提供一種化合物，其中該化合物為：4-[1-胺基丙基]-2-{6-[5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[1-胺基乙基]-2-{6-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[1-胺基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[1-胺基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[1-胺基丙基]-2-{3-[5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮；或 4-[1-胺基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。
舉例而言，本發明化合物為一種化合物，其為4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[(1S )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{3-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮； 4-[(1R )-1-胺基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮；或 4-[(1S )-1-胺基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明係關於式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該等化合物為式I(R )化合物或式I(S )化合物，當R3a 不同於R3b 時，其在R2 、R3a 及R3b 之取向方面具有特定立體化學。
在另一實施例中，本發明係關於一種化合物，其為4-[(1R)-1-胺基丙基]-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受。
在另一實施例中，本發明係關於一種化合物，其為4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]吡啶-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受。
在另一實施例中，本發明係關於一種化合物，其為4-[(1S )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受。
在另一態樣中，本發明提供選自由本文所例示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽組成之群的化合物。
本發明化合物對HPK1激酶具有選擇性。
「醫藥組合物」係指作為活性成分之本文所述化合物中之一或多者或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、水合物或前藥及至少一種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑的混合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含兩種或更多種醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含至少一種額外抗癌治療劑或緩解劑。在一些此等實施例中，至少一種額外藥劑包含如下文所述之抗癌治療劑。在一些此等實施例中，組合提供累加抗癌作用，超過累加的抗癌作用或協同抗癌作用。
在一個實施例中，本發明提供一種治療有需要個體之異常細胞生長之方法，其包含向個體投與治療有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要個體之異常細胞生長之方法，其包含向個體投與一定量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽組合一定量之額外治療劑(例如抗癌治療劑)，該等量合在一起有效治療該異常細胞生長。
在本文所提供之方法的常見實施例中，異常細胞生長為癌症。本發明化合物可以單一藥劑投與，或可與其他抗癌治療劑，尤其適合於尤其癌症之護理劑標準物組合投與。
在一些實施例中，所提供之方法引起以下效應中之一或多者：(1)抑制癌細胞增殖；(2)抑制癌細胞侵襲性；(3)誘導癌細胞之細胞凋亡；(4)抑制癌細胞癌轉移；(5)抑制血管新生；(6)增強T細胞反應；(7)增強樹突狀及B細胞反應；(8)提高抗腫瘤活性；(9)增強疫苗治療；及(10)增強免疫系統介導之病原體之移除，諸如病毒、細菌、寄生蟲。
在另一態樣中，本發明提供一種治療個體之HPK1激酶活性介導之病症(諸如某些癌症)之方法，其包含向個體投與一定量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該量有效治療該病症。
除非另外指明，否則本文所有提及本發明化合物或其鹽，包括提及其鹽、溶劑合物、水合物及複合物，及其鹽之溶劑合物、水合物及複合物，包括其多晶型物、立體異構體及經同位素標記之形式。
本發明化合物可呈醫藥學上可接受之鹽的形式，諸如本文提供之式I化合物的酸加成鹽及鹼加成鹽。如本文中所使用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指保留親本化合物之生物有效性及特性的鹽。如本文所用，除非另外指明，否則片語「醫藥學上可接受之鹽」包括可存在於本文所揭示之式I化合物中的酸性或鹼性基團之鹽。
舉例而言，本質上呈鹼性之本發明化合物能夠與各種無機及有機酸形成多種鹽。儘管此類鹽在向動物投與時必須為醫藥學上可接受的，但在實踐中常常需要首先自反應混合物以醫藥學上不可接受之鹽的形式分離本發明化合物，且接著藉由用鹼性試劑處理來簡單地將後者(該醫藥學上不可接受之鹽)重新轉化為游離鹼化合物，且隨後將後一游離鹼轉化為醫藥學上可接受之酸加成鹽。本發明之鹼性化合物之酸加成鹽可藉由在水性溶劑介質中或在諸如甲醇或乙醇之適合的有機溶劑中，用大體上等量之所選無機或有機酸處理鹼性化合物來製備。在蒸發溶劑之後，獲得所需固體鹽。所需酸之鹽亦可藉由向溶液中添加適當之無機或有機酸而自游離鹼於有機溶劑中之溶液沈澱。
可用於製備此類鹼性化合物之醫藥學上可接受之酸加成鹽的酸為形成無毒酸加成鹽的彼等酸，此等無毒酸加成鹽亦即含有藥理學上可接受之陰離子的鹽，諸如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、柳酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、葡糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽[亦即1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)]。
鹽之實例包括(但不限於)乙酸鹽、丙烯酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽(諸如氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽及甲氧基苯甲酸鹽)、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、丁炔-1,4-二酸鹽、乙二胺四乙酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、己酸鹽、辛酸鹽、棒酸鹽、檸檬酸鹽、癸酸鹽、二氫氯化物、二氫磷酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、依地斯酸鹽(edislyate)、依託酸鹽、乙磺酸鹽、丁二酸乙鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、麩胺酸鹽、乙醇酸鹽、乙內醯胺苯胂酸鹽、庚酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、己基間苯二酚酸鹽、海卓胺、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、碘化物、異丁酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、偏磷酸鹽、甲烷磺酸鹽、甲基硫酸鹽、單氫磷酸鹽、半乳糖二酸鹽、萘磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、乙二酸鹽、雙羥萘酸鹽(恩波酸鹽(embonate))、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、苯乙酸鹽、苯丁酸鹽、苯基丙酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙磺酸鹽、丙酸鹽、丙炔酸鹽、焦磷酸鹽、焦硫酸鹽、柳酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、辛二酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽、亞硫酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙碘化物及戊酸鹽。
適合的鹽之說明性實例包括衍生自諸如甘胺酸及精胺酸之胺基酸、氨、一級、二級及三級胺及諸如哌啶、嗎啉及哌𠯤之環狀胺之有機鹽，及衍生自鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁及鋰之無機鹽。
包括鹼基部分((諸如胺基)之本發明化合物可與除上文所提及之酸以外的各種胺基酸形成醫藥學上可接受之鹽。
本質上為酸性之該等本發明化合物能夠與各種藥理學上可接受之陽離子形成鹼鹽。該等鹽之實例包括鹼金屬或鹼土金屬鹽，且尤其鈉及鉀鹽。此等鹽全部藉由習知技術來製備。用作製備本發明之醫藥學上可接受之鹼鹽之試劑的化學鹼係與本文中之酸性化合物形成無毒鹼鹽的鹼。此等鹽可藉由任何適合之方法來製備，例如用無機或有機鹼來處理游離酸，該等鹼諸如胺(一級、二級或三級胺)、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化物、或其類似物。此等鹽亦可藉由用含有所需藥理學上可接受之陽離子的水溶液處理相應酸性化合物，且接著較佳在減壓下將所得溶液蒸發至乾燥來製備。替代地，其亦可藉由將酸性化合物之較低碳數烷醇溶液與所需鹼金屬醇鹽混合在一起，且隨後以與之前相同之方式將所得溶液蒸發至乾燥來製備。在任一情況下，較佳使用化學計量之試劑以確保反應完成且所需最終產物之產率最大。
可用作製備本發明之本質上為酸性的化合物之醫藥學上可接受之鹼鹽之試劑的化學鹼係與此類化合物形成無毒鹼鹽的鹼。此類無毒鹼鹽包括(但不限於)衍生自此類藥理學上可接受之陽離子(諸如鹼金屬陽離子(例如鉀及鈉)及鹼土金屬陽離子(例如鈣及鎂))的彼等鹼鹽、銨或水溶性胺加成鹽(諸如N-甲基葡糖胺(葡甲胺))及低碳烷醇銨，及醫藥學上可接受之有機胺之其他鹼鹽。
亦可形成酸及鹼之半鹽，例如半硫酸鹽及半鈣鹽。
欲回顧適合鹽，參見Stahl及Wermuth之Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use (Wiley-VCH, 2002)。製備本發明化合物之醫藥學上可接受之鹽的方法為熟習此項技術者所知。
本發明之鹽可根據熟習此項技術者已知之方法來製備。本發明化合物之醫藥學上可接受之鹽可容易藉由將化合物之溶液及所需酸或鹼(適當時)混合在一起來製備。鹽可自溶液沈澱且藉由過濾來收集或可藉由溶劑蒸發來回收。鹽之離子化程度可在完全離子化至幾乎不離子化之範圍內變化。
熟習此項技術者應理解，具有鹼基官能基之呈游離鹼形式之本發明化合物可藉由用化學計量過量之適當酸處理而轉化為酸加成鹽。本發明化合物之酸加成鹽可藉由通常在水性溶劑存在下及在約0℃與100℃之間的溫度下用化學計量過量之適合鹼，諸如碳酸鉀或氫氧化鈉處理再轉化為相應游離鹼。游離鹼形式可藉由習知方式，諸如用有機溶劑萃取來分離。另外，本發明化合物之酸加成鹽可利用鹽之不同溶解度、酸之揮發性或酸性或藉由用適當裝載之離子交換樹脂處理來進行互換。舉例而言，交換可由本發明化合物之鹽與微小化學計量過量之比起始鹽之酸組分之pK低之酸的反應實現。此轉化通常在約0℃與用作程序用介質之溶劑的沸點之間的溫度下進行。類似交換可能由鹼加成鹽，通常經由自由鹼形式之中間性實現。
本發明化合物可以非溶劑化及溶劑化形式兩者存在。當緊密地結合溶劑或水時，複合物將具有與濕度無關之明確化學計量。然而當溶劑或水弱結合時(如在通道溶劑合物及吸濕化合物中)，水/溶劑含量將取決於濕度及乾燥條件。在此等情況下，非化學計量將為標準。術語『溶劑合物』在本文中用以描述包含本發明化合物及一或多種醫藥學上可接受之溶劑分子(例如乙醇)之分子複合物。當溶劑為水時，採用術語『水合物』。根據本發明之醫藥學上可接受之溶劑合物包括其中結晶之溶劑可經同位素取代之彼等溶劑合物，例如D2 O、d6 -丙酮、d6 -DMSO。
本發明之範疇內亦包括複合物，諸如籠形物，包括藥物-主體之複合物，其中與上述溶劑合物相比，藥物及主體以化學計量或非化學計量量存在。亦包括含有兩種或更多種有機及/或無機組分之藥物的複合物，該等組分可為化學計量或非化學計量量。所得複合物可為離子化、部分離子化或非離子化的。對於此類複合物之綜述，參見Haleblian之J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288 (1975年8月)，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
本發明亦關於本文中所提供之式I化合物之前驅藥。因此，可具有少量藥理學活性或本身無藥理學活性之本發明化合物之某些衍生物向患者投與時可例如藉由水解裂解轉化為本發明化合物。此類衍生物稱為「 前藥」。關於前藥用途之其他資訊可見於『Pro-drugs as Novel Delivery Systems, 第14卷, ACS Symposium Series (T Higuchi及W Stella)及『Bioreversible Carriers in Drug Design』, Pergamon Press, 1987 (E B Roche編, American Pharmaceutical Association)中，其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。
本發明之前藥可例如藉由用熟習此項技術者已知之某些部分作為『前部分』置換本發明化合物中存在之適當官能基產生，如例如H Bundgaard之『Design of Prodrugs』(Elsevier, 1985)中所描述，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
根據本發明之前藥之一些非限制性實例包括： (i)其中化合物含有甲酸官能基(-COOH)、其酯，例如用(C1 -C8 )烷基置換氫； (ii)其中化合物含有醇官能基(-OH)、其醚，例如用(C1 -C6 )烷醯氧基甲基或用磷酸酯醚基置換氫；及 (iii)其中化合物含有一級或二級胺基官能基(-NH2 或-NHR，其中R ≠ H)、其醯胺，例如用適當代謝不穩定的基團，諸如醯胺、胺基甲酸酯、脲、膦酸酯、磺酸酯等置換一個或兩個氫。
根據前述實例之置換基團之其他實例及其他前藥類型之實例可見於前述參考文獻中。
最後，某些本發明化合物自身可充當其他本發明化合物之前藥。
本發明之範疇內亦包括本文所述式I化合物之代謝物，亦即投與藥物時在活體內形成之化合物。
本文提供之式I化合物可具有不對稱碳原子。在本文中，本發明化合物之碳-碳鍵可使用實線(
Figure 02_image024
)、實線楔(
Figure 02_image026
)或虛線楔(
Figure 02_image028
)描繪。使用實線來描繪與不對稱碳原子之鍵意謂指示，包括該碳原子處之所有可能立體異構體(例如，特定對映異構體、外消旋混合物等)。使用實心或虛線楔形描繪連接至不對稱碳原子之鍵意欲指示僅意欲包括所示之立體異構體。本發明化合物可能含有多於一個不對稱碳原子。在彼等化合物中，使用實線描繪與不對稱碳原子之鍵意謂指示意欲包括所有可能的立體異構體及所連接之立體異構中心。舉例而言，除非另外說明，否則本發明化合物意欲可以對映異構體及非對映異構體形式或以外消旋體形式及其混合物形式存在。使用實線描繪與本發明化合物中之一或多個不對稱碳原子之鍵且使用實心或點線楔形描繪與同一化合物中之其他不對稱碳原子之鍵意謂指示存在非對映異構體之混合物。
具有對掌性中心之本發明化合物以立體異構體，諸如外消旋體、對映異構體或非對映異構體之形式存在。
本文中式I化合物之立體異構體可包括本發明化合物之順式及反式異構體、光學異構體(諸如(R)及(S)對映異構體)、非對映異構體、幾何異構體、旋轉異構體、滯轉異構體、構形異構體及互變異構體，包括展現超過一個異構類型之化合物；及其混合物(諸如外消旋體及非對映異構體對)。
亦包括酸加成鹽或鹼加成鹽，其中相對離子具光學活性，例如d-乳酸鹽或l-離胺酸，或具外消旋性，例如dl-酒石酸鹽或dl-精胺酸。
當任一種外消旋物結晶時，可能有兩種不同類型之晶體。第一種類型為上文所提及之外消旋化合物(真實外消旋體)，其中產生含有等莫耳量之兩種對映異構體的一種均質形式晶體。第二類型為外消旋混合物或聚結物，其中產生等莫耳量的各自包含單一對映異構體的兩種形式之晶體。
本發明化合物可展現互變異構及結構異構之現象。舉例而言，化合物可以若干互變異構形式存在，包括烯醇與亞胺形式、及酮與烯胺形式、以及幾何異構體及其混合物。所有此類互變異構形式包括於本發明化合物之範疇內。互變異構體以溶液中互變異構體集合之混合物形式存在。在固體形式中，通常以一種互變異構體佔主導。即使可描述一種互變異構體，本發明包括所提供之式I化合物之所有互變異構體。
另外，一些本發明化合物可形成滯轉異構體(例如經取代之聯芳基)。滯轉異構體係當圍繞分子中之單鍵之旋轉得以阻止或大大減緩時由於與分子之其他部分之空間相互作用及單鍵兩端之取代基不對稱存在之構形立體異構體。滯轉異構體之互變足夠緩慢以使得在預定條件下分開並分離。熱外消旋化之能量障壁可藉由形成對掌性軸線之一或多個鍵之自由旋轉的位阻來測定。
製備/分離個別對映異構體之習知技術包括自適合的光學純前驅體對掌性合成或使用例如對掌性高壓液相層析(HPLC)或超流體關鍵層析(SFC)解析外消旋體(或鹽或衍生物之外消旋體)。
或者，外消旋體(或外消旋前驅體)可與適合的光學活性化合物(例如醇)反應，或在化合物含有酸性或鹼性部分之情況下與酸或鹼(諸如酒石酸或1-苯乙胺)反應。所得非對映異構混合物可藉由層析及/或分步結晶來分離，且藉由熟習此項技術者熟知之手段將非對映異構體中之一者或兩者轉化為相應純對映異構體。
本發明之對掌性化合物(及其對掌性前驅體)可使用層析(通常HPLC)在不對稱樹脂上用移動相來以對映異構性增濃形式獲得，該移動相由烴(通常庚烷或己烷)組成且含有0%至50% (通常2%至20%)異丙醇及0%至5%烷基胺(通常0.1%二乙胺)。濃縮溶離液得到增濃混合物。
立體異構聚結可藉由熟習此項技術者已知之習知技術分離；參見例如E L Eliel之「Stereochemistry of Organic Compounds」 (Wiley, New York, 1994),其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
本文所述之化合物之對映異構體純度可以對映異構過量(ee)描述，其指示樣品含有一種對映異構體之量大於另一種的程度。外消旋混合物之ee為0%，而單個完全純對映異構體之ee為100%。類似地，非對映異構體純度可以非對映異構過量(de)描述。
本發明亦包括經同位素標記之化合物，其與所提供式I中之一者所述之化合物相同，但事實係一或多個原子經原子質量或質量數與自然界中所常見之原子質量或質量數不同之原子置換。
本發明之同位素標記化合物一般可藉由熟習此項技術者已知之習知技術或藉由類似於本文所述之方法，使用經適當同位素標記之試劑代替原本使用之未標記試劑來製備。
可併入本發明化合物中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，諸如(但不限於)2 H、3 H、13 C、14 C、15 N、18 O、17 O、31 P、32 P、35 S、18 F及36 Cl。某些經同位素標記之本發明化合物(例如其中併有諸如3 H及14 C之放射性同位素者)適用於藥物及/或受質組織分佈分析。氚化(亦即3 H)及碳-14(亦即14 C)同位素因其製備簡易性及可偵測性而尤其較佳。此外，經諸如氘(亦即2 H)之較重同位素取代可獲得由更大代謝穩定性產生之某些治療優勢，例如增加之活體內半衰期或降低之劑量需求，且因此在某些情況下可為較佳的。經同位素標記之本發明化合物一般可藉由實施下文流程及/或實例及製備中所揭示之程序，藉由用經同位素標記之試劑取代未經同位素標記之試劑來製備。
預期用於醫藥用途之本發明化合物可作為結晶或非晶形產物或其混合物投與。其可藉由諸如沈澱、結晶、冷凍乾燥、噴霧乾燥或蒸發乾燥之方法以例如固體塞、粉末或薄膜形式獲得。微波或射頻乾燥可用於此目的。本發明化合物可以自完全非晶形至完全結晶之範圍內的連續固態形式存在。術語「非晶形」係指其中材料在分子層級上缺乏長程有序且可視溫度而定展現固體或液體之物理性質的狀態。此類材料通常不產生獨特X射線繞射圖案，且雖然展現固體特性，但更正式地描述為液體。在加熱時，發生固體性質至液體性質之變化，其特徵在於狀態之變化，典型地為二級(『玻璃轉移』)。術語「結晶」係指其中材料在分子層級上具有規則排序之內部結構且產生具有規定峰值之獨特的X射線繞射圖案的固相。此類材料在充分加熱時亦將展現液體之性質，但固體至液體之變化的特徵在於相位變化，典型地為一級(「熔點」)。
式I化合物亦可在經受適合條件時以介晶態(介相或液晶)形式存在。介晶態為真正結晶狀態與真正液態(熔體或溶液)之間的中間態。因溫度變化而出現之介晶現象描述為「熱致性的」，而因添加第二組分(諸如水或另一溶劑)而產生之介晶現象描述為「溶致性的」。能夠形成溶致性介相之化合物描述為「兩親媒性」的，且由具有離子極性頭基(諸如-COO- Na+ 、-COO- K+ 或-SO3 - Na+ )或非離子極性頭基(諸如-N- N+ (CH3 )3 )之分子組成。對於更多資訊，參見N. H. Hartshorne及A. Stuart之Crystals and the Polarizing Microscope, 第4版(Edward Arnold, 1970)。
式I化合物可展現多形現象及/或一或多種異構(例如光學異構、幾何異構或互變異構)。式I化合物亦可經同位素標記。此類變化對於式I化合物為隱含的，該化合物參看其結構特徵而定義，且因此在本發明之範疇內。治療方法及用途
本發明進一步提供治療方法及用途，其包含將本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽單獨或與其他治療劑或姑息性藥劑組合投與。
在一個實施例中，本發明提供一種治療個體之異常細胞生長之方法，其包含向個體投與治療有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在常見實施例中，異常細胞生長為癌症。
在另一實施例中，本發明提供一種治療個體之癌症之方法，其包含向個體投與一定量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽組合一定量之額外抗癌治療劑，該等量合在一起有效治療該癌症。
本發明化合物包括本文所述之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在再一實施例中，本發明提供一種抑制個體之癌細胞增殖之方法，其包含向個體投與一定量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種抑制個體之癌細胞侵襲性之方法，其包含向個體投與一定量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種引起個體之癌細胞死亡之方法，其包含向個體投與有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在再一實施例中，本發明提供一種增強哺乳動物中之疫苗療法之方法，其包含向哺乳動物投與治療有效量之疫苗，且進一步包含向哺乳動物投與治療有效量之如技術方案1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在再一實施例中，本發明提供一種改良個體之免疫系統清除病毒感染、細菌感染或病原體(包括寄生蟲)之能力的方法，其包含向個體投與有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本發明提供一種增強免疫系統介導之病原體之移除的方法，其包含向哺乳動物投與治療有效量之如技術方案1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。該方法包括將本發明化合物作為單一療法或與其他試劑組合投與以治療感染或病原體。
本發明所揭示之化合物可用於抑制HPK1激酶之活性。HPK1，亦稱為有絲分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶1或MAP4K1，為Ste20相關絲胺酸/蘇胺酸激酶之生發中心激酶子族之成員。HPK1藉由磷酸化及活化MAP3K蛋白質(包括MEKK1、MLK3及TAK1)，引起MAPK Jnk之活化來發揮MAP4K之功能。
HPK1聚核苷酸及多肽在此項技術中已知(Hu等人 (1996) Genes Dev. 10: 2251-2264，其以全文引用之方式併入本文中)。HPK1多肽包含多種保守性結構基元。HPK1多肽包含胺基端類Ste20激酶域，其涵括胺基酸殘基17-293，其包括來自胺基酸殘基23-46之ATP結合位點。激酶域之後為四個富含脯胺酸(PR)之基元，其充當含有SH3之蛋白質(諸如CrkL、Grb2、HIP-55、Gads、Nek及Crk)之結合位點。四個PR基元分別涵括胺基酸殘基308-407、394-402、432-443及468-477。HPK1響應於TCR或BCR刺激而磷酸化及活化。TCR及BCR誘導之位於PR1與PR2之間的位置381處之酪胺酸殘基之磷酸化介導與T細胞中之SLP-76或B細胞中之BLNK之經由SLP-76或BLNK SH2域之結合，且為激酶活化所需。見於HPK1之C端的大致涵括殘基495-800之香櫞同源性域可充當調節域且可涉及大分子相互作用。
本發明所揭示之化合物直接結合至HPK1且抑制其激酶活性。在一些實施例中，本發明所揭示之化合物降低、抑制或以其他方式減少HPK1介導之SLP76及/或Gads之磷酸化。本發明所揭示之化合物可為或可不為特異性HPK1抑制劑。特異性HPK1抑制劑使HPK1之生物活性降低達以統計方式大於該抑制劑對任何其他蛋白質(例如其他絲胺酸/蘇胺酸激酶)之抑制作用之量。在某些實施例中，本發明所揭示之化合物特異性抑制HPK1之絲胺酸/蘇胺酸激酶活性。
本發明所揭示之化合物可用於抑制HPK1之方法中。此類方法包含使HPK1與有效量之本發明化合物接觸。術語「接觸」意欲使化合物與經分離之HPK1酶或表現HPK1之細胞(例如T細胞、B細胞、樹突狀細胞)足夠鄰近，使得化合物能夠結合於HPK1且抑制其活性。可經由向個體投與化合物來活體外或活體內使化合物與HPK1接觸。
可使用此項技術中已知之任何用於量測HPK1之激酶活性之方法來測定是否已抑制HPK1，包括活體外激酶分析法、用對HPK1之磷酸化目標(諸如SLP76及Gads)具有特異性之抗體進行之免疫墨點法，或HPK1激酶活性之下游生物作用之量測，諸如14-3-3蛋白質募集至磷酸化SLP7及Gads、SLP76-Gads-14-3-3複合物自含有LAT之微叢集之釋放，或T或B細胞活化。
本發明所揭示之化合物可用於治療HPK1依賴性病症。如本文中所使用，「HPK1依賴性病症」為其中HPK1活性為病理學病狀之成因或維持所需之病理學病狀。
本發明所揭示之化合物亦可用於增強有需要之個體之免疫反應。此類方法包含投與有效量之本發明所揭示之化合物(亦即式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物中之任一者)。術語「增強免疫反應」係指對抗原之任何免疫原性反應之改良。對抗原之免疫原性反應之改良之非限制性實例包括樹突狀細胞之成熟或遷移增強、T細胞(例如CD4 T細胞、CD8 T細胞)之活化增強、T細胞(例如CD4 T細胞、CD8 T細胞)增殖增強、B細胞增殖增強、T細胞及/或B細胞之存活率增加、抗原呈現細胞(例如樹突狀細胞)之抗原呈現改良、抗原清除率改良、T細胞之細胞因子(例如介白素-2)之產量增加、對前列腺素E2-或腺苷誘導之免疫抑制之抗性增加及CD8 T細胞之激活及/或溶胞活性增強。在一些實施例中，個體中之CD8 T細胞相對於投與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物之前具有激活增強、活化增強、增生增強及/或溶胞活性增強。在一些實施例中，CD8 T細胞激活之特徵在於CD8 T細胞中之CD44表現增加及/或溶胞活性增強。在一些實施例中，CD8 T細胞活化之特徵在於IFNy+ CD8 T細胞之頻率升高。在一些實施例中，CD8 T細胞為抗原特異性T細胞。
在一些實施例中，個體中之抗原呈現細胞相對於投與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物之前具有成熟及活化增強。在一些實施例中，抗原呈現細胞係樹突狀細胞。在一些實施例中，抗原呈現細胞成熟之特徵在於CD83+ 樹突狀細胞之出現率增加。在一些實施例中，抗原呈現細胞活化之特徵在於樹突狀細胞上CD80及CD86之表現增加。
TCR之接合可引起HPK1活化，其充當TCR誘導之AP-1反應路徑之負調節劑。咸信HPK1借助於磷酸化Ser376處之SLP76 (Di Bartolo等人 (2007) JEM 204:681-691)及Thr254處之Gads，藉由降低信號傳導微叢集之持久性來負向調節T細胞活化，其引起結合於磷酸化SLP76及Gads之14-3-3蛋白質之募集，自含有LAT之微叢集釋放SLP76-Gads-14-3-3複合物，其引起T細胞功能障礙，包括能力缺失及耗竭(Lasserre等人 (2011) J Cell Biol 195(5):839-853)。術語「功能障礙」在免疫功能障礙之情形下係指對抗原刺激之免疫反應降低的狀態。該術語包括其中可發生抗原識別之耗竭及/或能力缺失之共同成分，但隨後的免疫反應對控制感染或腫瘤生長無效。
如本文所用，術語「功能障礙性」亦包括對抗原識別具有頑抗性或不起反應，特定言之，將抗原識別轉譯成下游T細胞效應功能(諸如增生、細胞介素產生(例如IL-2、γ-IFN)及/或目標細胞殺傷)之能力減弱。
術語「能力缺失」係指由經由T細胞受體遞送之信號不完全或不充分引起的對抗原刺激不起反應之狀態{例如在不存在ras活化之情況下細胞內Ca升高)。在不存在共刺激之情況下，T細胞能力缺失亦可由抗原刺激引起，引起細胞變成即使在共刺激情形下仍對後續抗原活化具有抗性。無反應狀態通常可由存在介白素-2解決。能力缺失T細胞不進行純系擴增及/或獲得效應功能。
術語「耗竭」係指T細胞耗竭，作為在多種慢性感染及癌症期間發生之由持續TCR信號傳導引起的T細胞功能障礙狀態。其與能力缺失之區別在於其並非由信號傳導不完全或不足引起，而係由持續信號傳導引起。其由不良效應子功能、抑制性受體之持續表現及與功能性效應子或記憶體T細胞不同之轉錄狀態定義。耗竭阻礙對感染及腫瘤之最佳控制。耗竭可由外源性陰性調節路徑(例如免疫調節細胞激素)以及細胞內源性陰性調節(共刺激)路徑(PD-1、B7-H3、B7-H4等)引起。
「增強T細胞功能」意謂誘導、引起或刺激T細胞以具有持續或擴增之生物功能，或更新或再活化耗竭或非活性T細胞。增強T細胞功能之實例包括：細胞介素(例如γ-干擾素、IL-2、IL-12及TNFa)之分泌增加、增生增加、抗原反應性(例如病毒、病原體或腫瘤清除率)相對於此類介入前之水準增加及由CD8 T細胞實現之效應子顆粒產生(諸如顆粒酶B)增加。
因此，本發明所揭示之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物適用於治療T細胞功能障礙性病症。「T細胞功能障礙性病症」係特徵為對抗原刺激之反應降低的T細胞病症或病狀。在特定實施例中，T細胞功能障礙性病症係與HPK1之激酶活性增加特定相關之病症。在另一實施例中，T細胞功能障礙病症為其中T細胞能力缺失或分泌細胞介素、增殖或進行溶胞活性之能力降低之病症。在特定態樣中，反應降低可引起對表現免疫原之病原體或腫瘤之控制無效。特徵為T細胞功能障礙之T細胞功能障礙性病症之實例包括起因不明的急性感染、慢性感染及腫瘤免疫性。
因此，本發明所揭示之化合物可用於治療其中需要增強免疫原性之病狀，諸如提高腫瘤免疫原性以用於治療癌症。「免疫原性」係指特定物質引起免疫反應之能力。在由免疫反應進行之腫瘤細胞之清除中，腫瘤為免疫原性且增強腫瘤免疫原性輔助物。
「腫瘤免疫性」係指其中腫瘤躲避免疫識別及清除之過程。因此，作為治療概念，腫瘤免疫性在此類逃避作用減弱且腫瘤由免疫系統識別及攻擊時得以「治療」。腫瘤識別之實例包括腫瘤結合、腫瘤縮小及腫瘤清除。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療有需要個體之癌症之方法，其包含向個體投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物。在一些實施例中，個體患有黑色素瘤。黑色素瘤可處於早期或晚期。在一些實施例中，個體患有大腸直腸癌。大腸直腸癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，個體患有非小細胞肺癌。非小細胞肺癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，個體患有胰臟癌。胰臟癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，個體患有血液科惡性病。血液科惡性病可處於早期或晚期。在一些實施例中，個體患有卵巢癌。卵巢癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，個體患有乳癌。乳癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，個體患有腎細胞癌。腎細胞癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，癌症具有升高之T細胞浸潤量。
在一些實施例中，在停止治療之後，治療引起個體中之持續反應。「持續反應」係指在停止處理之後，對降低腫瘤生長之持續作用。舉例而言，與投與階段開始時之尺寸相比，腫瘤尺寸可保持相同或較小。
本文中揭示之治療方法可引起部分或完全反應。如本文所用，「完全反應」或「CR」係指所有目標病變消失；「部分反應」或「PR」係指目標病變之最長直徑之總和(SLD)降低至少30%，以基線SLD作為參比；且「穩定疾病」或「SD」係指目標病變縮小不足以適合PR，或其增大不足以適合PD，以自開始治療起之最小SLD作為參比。如本文所用，「總反應率」(ORR)係指完全反應(CR)率與部分反應(PR)率之總和。
本文中揭示之治療方法可引起接受HPKl拮抗劑投與之個體之無進展存活期及總存活期增加。如本文所用，「無進展存活期」(PFS)係指在治療期間及治療之後，所治療之疾病(例如癌症)不會惡化之時間長度。無進展存活期可包括患者經歷完全反應或部分反應之時間量，以及患者經歷穩定疾病之時間量。
如本文所用，「總存活期」係指可能在特定持續時間之後存活之組中個體之百分比。
在本文所提供之方法之一些實施例中，異常細胞生長係癌症，其中癌症係選自由以下組成之群：乳癌、卵巢癌、膀胱癌、子宮癌、前列腺癌、肺癌(包括NSCLC、SCLC、鱗狀細胞癌或腺癌)、食道癌、頭頸癌、大腸直腸癌、腎癌(包括RCC)、肝癌(包括HCC)、胰臟癌、胃(stomach)(例如胃(gastric))癌症及甲狀腺癌。在本文所提供之方法之其他實施例中，癌症係選自由以下組成之群：乳癌、卵巢癌、膀胱癌、子宮癌、前列腺癌、肺癌、食道癌、肝癌、胰臟癌及胃癌。
在一些實施例中，癌症選自由乳癌及卵巢癌組成之群。
在一些實施例中，癌症為卵巢癌。
在其他實施例中，癌症為乳癌，包括例如ER陽性/HR陽性乳癌、HER2陰性乳癌；ER陽性/HR陽性乳癌、HER2陽性乳癌；三陰性乳癌(TNBC)；或炎性乳癌。在一些實施例中，乳癌為耐內分泌性乳癌、耐曲妥珠單抗乳癌或表明對CDK4/CDK6抑制有先天或後天耐受性之乳癌。在一些實施例中，乳癌為晚期或轉移性乳癌。
在一些實施例中，本發明化合物係作為第一線療法投與。在其他實施例中，本發明化合物係作為第二(或後續)線療法投與。在一些實施例中，本發明化合物係在用內分泌治療劑及/或CDK4/CDK6抑制劑治療後作為第二(或後續)線療法投與。在一些實施例中，本發明化合物係在用內分泌治療劑治療後作為第二(或後續)線療法投與。在一些實施例中，本發明化合物係在用CDK4/CDK6抑制劑治療後作為第二(或後續)線療法投與。在一些實施例中，本發明化合物係在用一或多種化學療法(例如包括紫杉烷或鉑藥劑)治療後作為第二(或後續)線療法投與。在一些實施例中，本發明化合物係在用HER2靶向劑(例如曲妥珠單抗)治療後作為第二(或後續)線療法投與。
術語「異常細胞生長」及「過度增殖性病症」在本申請案中可互換使用。
除非另外指明，否則如本文所使用，「異常細胞生長」係指不依賴於正常調節機制的細胞生長(例如接觸抑制喪失)。異常細胞生長可為良性(非癌性)或惡性(癌性)的。
異常細胞生長包括對內分泌療法、HER2拮抗劑或CDK4/6抑制具有抗性之腫瘤的異常生長。
如本文所使，術語「額外抗癌治療劑」意謂除本發明化合物之外的用於或可用於治療癌症之任一種或多種治療劑，諸如衍生自以下類別之試劑：有絲分裂抑制劑、烷基化劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、拓樸異構酶I及II抑制劑、植物鹼、激素劑及拮抗劑、生長因子抑制劑、輻射、蛋白質酪胺酸激酶及/或絲胺酸/蘇胺酸激酶之抑制劑、細胞週期抑制劑、生物反應調節劑、酶抑制劑、反義寡核苷酸或寡核苷酸衍生物、細胞毒性劑及免疫腫瘤學試劑(免疫腫瘤學試劑包括單克隆抗體、雙特異性抗體、細胞激素、CAR-t細胞)。
如本文所用，「癌症」係指異常細胞生長引起的任何惡性及/或侵襲性生長或腫瘤。癌症包括針對形成實體腫瘤之細胞的類型命名之實體腫瘤、血液癌症、骨髓癌症或淋巴系統癌症。實體腫瘤之實例包括肉瘤及癌瘤。血液癌症包括但不限於白血病、淋巴瘤及骨髓瘤。癌症亦包括源自身體特定部位之原發性癌症、自開始之位置擴散至身體其他部分之轉移性癌症、初始原發性癌症在緩解後之復發及作為個人之新穎原發性癌症之第二原發性癌症，該個人之先前癌症病史與後一癌症之類型不同。
在本文所提供之方法之一些實施例中，癌症係選自由以下組成之群：乳癌、卵巢癌、膀胱癌、子宮癌、前列腺癌、肺癌、食道癌、肝癌、胰臟癌及胃癌。劑型及療法
本發明化合物之投與可由使得能夠將化合物輸送至作用部位之任何方法來實現。此等方法包括經口途徑、十二指腸內途徑、非經腸注射(包括靜脈內、皮下、肌肉內、血管內或輸注)、局部及直腸投與。
可調節劑量方案以提供最佳所需反應。舉例而言，可投與單次推注，可隨時間分若干次投與多次劑量，或可如治療情況之緊急需要所指示而按比例減少或增加劑量。就投與簡易性及劑量均一性而言，以單位劑型調配非經腸組合物尤其有利。如本文所使用，單位劑型係指適合以單位劑量用於待治療之哺乳動物個體的實體不連續單元；各單元均含有經計算可產生所需治療效果的預定量之活性化合物與所需醫藥學載劑。本發明之單位劑型之規格係由下列情況指定且直接取決於下列情況：(a)化學治療劑之獨特特徵及待實現之特定治療或預防作用，及(b)混合此類用於治療個體敏感性之活性化合物之技術中的固有限制。
因此，熟習此項技術者應瞭解，基於本文提供之揭露內容，根據治療技術中熟知之方法調整劑量及給藥方案。亦即，可容易地確定最大可耐受劑量，且亦可測定向患者提供可偵測治療益處之有效量，亦可測定投與各藥劑以向患者提供可偵測治療益處的時間需求。因此，儘管本文舉例說明某些劑量及投與方案，但此等實例決不限制在實施本發明時可向患者提供之劑量及投與方案。
應注意，劑量值可隨待減輕之病狀的類型及嚴重程度而變化，且可包括單次或多次給藥。應進一步瞭解，對於任何特定受試者而言，特定劑量方案應根據個體需要及投與組合物或監督組合物投與之人員的專業判斷而隨時間調整，且本文所闡述之劑量範圍僅具例示性且不意欲限制所主張之組合物的範疇或實務。舉例而言，可基於藥物動力學或藥效學參數來調整劑量，該等參數可包括臨床效果，諸如毒性效果及/或實驗值。因此，本發明涵蓋如熟習此項技術者所確定之患者內劑量遞增。確定用於投與化學治療劑之適當劑量及方案在相關技術中熟知，且一旦提供本文中所揭示之教示，則熟習此項技術者應理解該確定涵蓋於該等教示中。
所投與之本發明化合物的量將視所治療之個體、病症或病狀之嚴重程度、投與之頻率、化合物之配置及處方醫師之判斷而定。然而，有效劑量在每天約0.001至約100 mg/kg體重、較佳每天約1至約35 mg/kg範圍內，呈單次或分次劑量。對於70 kg人類而言，此將相當於每天約0.05至約7 g、較佳地每天約0.1至約2.5 g。在一些情況下，低於前述範圍之下限的劑量水準可能已完全足夠，而在其他情況下，在不引起任何有害副作用之情況下仍可採用較大劑量，其限制條件為首先將該等較大劑量分成若干較小劑量以在一整天中投與。調配物及投與途徑
如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑」係指不會對生物體造成顯著的刺激且不消除所投與化合物之生物活性及特性之載劑或稀釋劑。
醫藥學上可接受之載劑可包含任何習知醫藥學載劑或賦形劑。載劑及/或賦形劑之選擇在很大程度上將視以下因素而定，諸如特定投與模式、載劑或賦形劑對溶解性及穩定性之效果及劑型性質。
適合的醫藥載劑包括惰性稀釋劑或填充劑、水及各種有機溶劑(諸如水合物及溶劑合物)。視需要，醫藥組合物可含有額外成分，諸如調味劑、黏合劑、賦形劑及其類似物。因此，對於經口投與而言，含有各種賦形劑(諸如檸檬酸)之錠劑可與各種崩解劑(諸如澱粉、褐藻酸及某些複合矽酸鹽)以及黏合劑(諸如蔗糖、明膠及阿拉伯膠)一起使用。賦形劑之實例包括(但不限於)碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖及各種類型之澱粉、纖維素衍生物、明膠、植物油及聚乙二醇。另外，潤滑劑(諸如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉及滑石)常可用於製錠之目的。類似類型之固體組合物亦可以軟及硬之填充明膠膠囊形式採用。因此，材料之非限制性實例包括乳糖或牛奶糖及高分子量聚乙二醇。當需要經口投與水性懸浮液或酏劑時，可將其中之活性化合物與各種甜味劑或調味劑、著色物質或染料及(視需要)乳化劑或懸浮劑以及稀釋劑(諸如水、乙醇、丙二醇、甘油或其組合)組合。
醫藥組合物可例如呈適用於經口投與之形式(如錠劑、膠囊、丸劑、散劑、持續釋放調配物、溶液、懸浮液)，適用於非經腸注射之形式(如無菌溶液、懸浮液或乳液)；適用於局部投與之形式(如軟膏或乳膏)，或適用於直腸投與之形式(如栓劑)。
例示性非經腸投與形式包括在無菌水溶液(例如，丙二醇或右旋糖水溶液)中之活性化合物的溶液或懸浮液。必要時，此類劑型可適當地緩衝。
醫藥組合物可呈適用於單一投與精確劑量之單位劑型。
適用於遞送本發明化合物之醫藥組合物及其製備方法對熟習此項技術者而言將為顯而易見的。此類組合物及其製備方法可見於例如「Remington's Pharmaceutical Sciences」, 第19版(Mack Publishing Company, 1995)中，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
本發明化合物可以經口投與。經口投與可包括吞咽，使得化合物進入胃腸道，或可使用頰內或舌下投與，藉此使得化合物直接自口腔進入血流中。
適用於經口投與之調配物包括固體調配物，諸如錠劑、含有顆粒、液體或粉末之膠囊、口含錠(包括液體填充口含錠)、咀嚼片、多顆粒及奈米顆粒、凝膠、固溶體、脂質體、膜(包括黏性黏著膜)、珠劑、噴霧劑及液體調配物。
液體調配物包括懸浮液、溶液、糖漿及酏劑。此類調配物可作為填充劑用於軟或硬膠囊中，且通常包括例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纖維素或適合之油之載劑、及一或多種乳化劑及/或懸浮劑。液體調配物亦可藉由將固體(例如來自藥囊的固體)復原來製備。
本發明化合物亦可用於快速溶解、快速崩解劑型，諸如Liang及Chen之Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981-986 (2001)中所述之劑型，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
對於錠劑劑型而言，視劑量而定，藥物可佔劑型之1 wt%至80 wt%，更通常佔劑型之5 wt%至60 wt%。除藥物之外，錠劑一般含有崩解劑。崩解劑之實例包括羥基乙酸澱粉鈉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、交聯羧甲纖維素鈉、交聯普維酮(crospovidone)、聚乙烯吡咯啶酮、甲基纖維素、微晶纖維素、經低碳烷基取代之羥丙基纖維素、澱粉、預膠凝化澱粉及褐藻酸鈉。一般而言，崩解劑將佔劑型之1 wt%至25 wt%，較佳5 wt%至20 wt%。
黏合劑一般用於向錠劑調配物賦予黏結品質。適合的黏合劑包括微晶纖維素、明膠、糖、聚乙二醇、天然及合成膠、聚乙烯吡咯啶酮、預膠凝化澱粉、羥丙基纖維素及羥丙基甲基纖維素。錠劑亦可含有稀釋劑，諸如乳糖(單水合物、噴霧乾燥之單水合物、無水物及其類似物)、甘露糖醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、微晶纖維素、澱粉及二水合磷酸氫鈣。
錠劑亦可視情況包括界面活性劑，諸如月桂基硫酸鈉及聚山梨醇酯80；及滑動劑，諸如二氧化矽及滑石。若存在，界面活性劑通常佔錠劑之0.2 wt%至5 wt%，且滑動劑通常為錠劑之0.2 wt%至1 wt%。
錠劑一般亦含有潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂醯反丁烯二酸鈉、及硬脂酸鎂與月桂基硫酸鈉之混合物。潤滑劑一般佔錠劑之0.25 wt%至10 wt%，較佳0.5 wt%至3 wt%。
其他習知成分包括抗氧化劑、著色劑、調味劑、防腐劑及遮味劑。
例示性錠劑含有至多約80 wt%藥物、約10 wt%至約90 wt%黏合劑、約0 wt%至約85 wt%稀釋劑、約2 wt%至約10 wt%崩解劑及約0.25 wt%至約10 wt%潤滑劑。
錠劑摻合物可直接或藉由滾筒壓縮以形成錠劑。錠劑摻合物或摻合物之一部分可在製錠之前交替地進行濕式、乾式或熔融粒化、熔融聚結或擠出。最終調配物可包括一或多個層，且可經包覆包衣或未包覆包衣；或經囊封。
錠劑之調配詳細論述於由H. Lieberman及L. Lachman所著之「Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, 第1卷」, Marcel Dekker, N.Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X)中，該文獻之揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
用於經口投藥之固體調配物可調配為立即釋放及/或調節釋放。調節釋放調配物包括延遲釋放型、持續釋放型、脈衝釋放型、受控釋放型、靶向釋放型及程控釋放型。
適合的調節釋放調配物描述於美國專利第6,106,864號中。其他適合的釋放技術(諸如高能分散體、及滲透且塗佈之粒子)之細節可見於Verma等人, Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001)。用以達成受控釋放之口嚼錠的使用描述於WO 00/35298中。此等參考之揭示內容以全文引用的方式併入本文中。非經腸投與
本發明化合物亦可經直接投與至血流中、肌肉中或內部器官中。適用於非經腸投藥之方式包括靜脈內、動脈內、腹膜內、鞘內、心室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌肉內及皮下。適用於非經腸投與之裝置包括針(包括微針)注射器、無針注射器及輸注技術。
非經腸調配物典型地為水溶液，其可含有賦形劑，諸如鹽、碳水化合物及緩衝劑(較佳至3至9之pH)，但對於一些應用，其更適合調配為無菌非水性溶液或調配為待與合適的媒劑(諸如無菌無熱原質水)結合使用的乾燥形式。
在無菌條件下例如藉由凍乾來製備非經腸調配物可易於使用熟習此項技術者所熟知之標準醫藥技術來實現。
用於製備非經腸溶液之本發明化合物之溶解度可藉由使用諸如併入溶解度增強劑之適當的調配技術來增加。
用於非經腸投與之調配物可調配為立即釋放及/或調節釋放。調節釋放調配物包括延遲釋放型、持續釋放型、脈衝釋放型、受控釋放型、靶向釋放型及程控釋放型。因此，本發明化合物可調配為固體、半固體或搖溶性液體以作為植入式儲槽形式投與，從而提供活性化合物之調節釋放。此類調配物之實例包括經藥物塗覆之血管內支架及PGLA微球粒。
本發明化合物亦可局部投與至皮膚或黏膜，亦即經真皮或經皮。典型調配物出於此目的包括凝膠、水凝膠、洗劑、溶液、乳膏、軟膏、敷粉、敷料、泡沫劑、薄膜、皮膚貼片、糯米紙囊劑、植入劑、海綿、纖維、繃帶及微乳液。亦可使用脂質體。典型載劑包括乙醇、水、礦物油、液體石蠟脂、白石蠟脂、甘油、聚乙二醇及丙二醇。可併入滲透增強劑；參見例如Finnin及Morgan之J Pharm Sci, 88 (10), 955-958, (1999年10月)。局部投與之其他手段包括藉由電穿孔、離子導入療法、超音波藥物透入療法、超音波電滲法及微針或無針(例如Powderject™、Bioject™等)注射來遞送。此等參考之揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
用於局部投與之調配物可調配為立即釋放及/或調節釋放。調節釋放調配物包括延遲釋放型、持續釋放型、脈衝釋放型、受控釋放型、靶向釋放型及程控釋放型。
本發明化合物亦可以鼻內或藉由吸入投與，通常以乾粉形式(單獨，或作為混合物，例如與乳糖乾燥摻合，或作為混合組分粒子，例如與磷脂(諸如磷脂醯膽鹼)混合)、自乾粉吸入器投與，或以氣溶膠噴霧形式、自使用或不使用適合推進劑(諸如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)的加壓容器、泵、噴霧器、霧化器(較佳為利用電流體動力學產生細霧之霧化器)或噴霧器投與。對於鼻內用途，散劑可包括生物黏著劑，例如聚葡萄胺糖或環糊精。
加壓容器、泵、噴霧器(spray)、霧化器或噴霧器(nebulizer)含有本發明化合物的溶液或懸浮液，該溶液或懸浮液包含例如乙醇、乙醇水溶液或適用於分散、溶解活性物質或延長活性物質之釋放的替代劑、作為溶劑之推進劑及視情況選用之界面活性劑(諸如脫水山梨糖醇、三油酸酯、油酸或寡聚乳酸。
在於乾粉或懸浮液調配物中使用之前，藥品經微米尺寸化至適合於藉由吸入來遞送之尺寸(通常小於5微米)。此可藉由任何適當之粉碎方法來達成，諸如螺旋形噴射研磨、流化床噴射研磨、形成奈米粒子之超臨界流體加工、高壓均質化或噴霧乾燥。
用於吸入器或吹入器中的膠囊(由例如明膠或HPMC製得)、泡殼及藥筒可經調配而含有本發明化合物、適合的粉末基質(諸如乳糖或澱粉)及效能調節劑(諸如l-白胺酸、甘露糖醇或硬脂酸鎂)之粉末混合物。乳糖可為無水乳糖或呈單水合物形式，較佳為後者。其他合適的賦形劑包括聚葡萄糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖醇、木糖醇、果糖、蔗糖及海藻糖。
適用於使用電流體動力學產生細霧之霧化器的溶液調配物每次致動可含有1 μg至20 mg本發明化合物，且致動體積可在1 μL至100 μL範圍內變化。典型調配物包括本發明化合物、丙二醇、無菌水、乙醇及氯化鈉。可代替丙二醇使用之替代性溶劑包括丙三醇及聚乙二醇。
可將適合的調味劑(諸如薄荷醇及左薄荷腦)或甜味劑(諸如糖精或糖精鈉)添加至欲用於吸入/鼻內投與的本發明之彼等調配物中。
用於吸入/鼻內投與之調配物可使用例如聚(DL-乳酸-共-乙醇酸)(PGLA)調配為立即釋放及/或調節釋放型。調節釋放調配物包括延遲釋放型、持續釋放型、脈衝釋放型、受控釋放型、靶向釋放型及程控釋放型。
在乾粉吸入器及氣霧劑之情況下，藉助於傳遞定量之閥門來確定劑量單位。本發明之單元通常經配置以投與含有所需量之本發明化合物的計量劑量或「撲(puff)」。總日劑量可以單次劑量，或更通常在一整天中以分次劑量投與。
本發明化合物可例如以栓劑、子宮托或灌腸形式經直腸或經陰道投與。可可脂為傳統的栓劑基質，但適當時可使用各種替代物。
用於經直腸/經陰道投與之調配物可調配為立即釋放及/或調節釋放。調節釋放調配物包括延遲釋放型、持續釋放型、脈衝釋放型、受控釋放型、靶向釋放型及程控釋放型。
本發明化合物亦可直接向眼睛或耳朵投與，通常呈等滲、pH值經調節之無菌生理鹽水中的微米尺寸化懸浮液或溶液之滴劑形式。適合於經眼及經耳投與之其他調配物包括軟膏、可生物降解(例如可吸收凝膠海綿體、膠原蛋白)及不可生物降解(例如聚矽氧)植入物、晶圓、透鏡及粒狀或囊狀系統，諸如非離子界面活性劑囊泡(niosome)或脂質體。諸如交聯聚丙烯酸、聚乙烯醇、玻尿酸、纖維素聚合物(例如羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素或甲基纖維素)之聚合物或雜多糖聚合物(例如結冷膠)可與防腐劑(諸如苯紮氯銨)一起併入。此類調配物亦可藉由離子導入療法來遞送。
用於經眼/耳投與之調配物可調配為立即釋放及/或調節釋放。調節釋放調配物包括延遲釋放、持續釋放、脈衝釋放、受控釋放、靶向釋放或程控釋放調配物。 其他技術
本發明化合物可與可溶性大分子實體(諸如環糊精及其適合的衍生物或含聚乙二醇之聚合物)組合，以便改良用於前述投與模式中之任一者中之其溶解度、溶解速率、味覺遮蔽、生物可用性及/或穩定性。
舉例而言，發現藥物-環糊精複合物一般適用於大部分劑型及投與途徑。可使用包合複合物與非包合複合物兩者。作為與藥物直接複合之替代方案，環糊精可用作輔助添加劑，亦即用作載劑、稀釋劑或增溶劑。最常用用於此等目的的是α-環糊精、β-環糊精及γ-環糊精，其實例可見於PCT公開案第WO 91/11172、WO 94/02518及WO 98/55148號中，其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。劑量
所投與之活性化合物的量將視所治療之個體、病症或病狀之嚴重程度、投與速率、化合物之配置及處方醫師之判斷而定。然而，有效劑量通常呈單次或分次劑量在每天每公斤體重約0.001至約100 mg，較佳地約1至約35 mg/kg/天之範圍內。對於70 kg人類而言，此將相當於每天約0.05至約7000 g、較佳地每天約0.1至約2500 g。在一些情況下，低於前述範圍下限之劑量濃度可更適合，而在其他情況下，可在不產生任何有害副作用的情況下使用再更大劑量，其中此類較大劑量通常分為用於在一整天中投與之若干較小劑量。分裝式套組
因為需要投與活性化合物之組合，例如，為達到治療特定疾病或病狀之目的，在本發明之範疇內，其中至少一者含有根據本發明化合物之兩種或更多種醫藥組合物宜呈適合於組合物共投與之套組形式組合。因此，本發明之套組包括兩種或更多種獨立醫藥組合物，其中之至少一者含有本發明化合物，及用於分別保持該等組合物之構件，諸如容器、分次瓶或分次箔包。此套組之一實例為常用於錠劑、膠囊及其類似者之封裝的泡殼封裝。
本發明之套組尤其適用於投與不同劑型(例如經口及非經腸)，用於以不同給藥時間間隔投與各別組合物，或用於針對彼此滴定各別組合物。為有助於遵從性，套組通常包括投與指導，且可具備記憶輔助。組合療法
如本文所用，術語「組合療法」係指依序或同時投與本發明化合物以及至少一種額外醫藥劑或藥劑(例如抗癌劑、疫苗、抗細菌劑、抗病毒劑或抗寄生蟲劑)。
如上所指出，本發明化合物可與一或多種額外抗癌劑，諸如抗癌劑組合使用。本發明化合物在某些腫瘤中之功效可藉由與其他經批准的或實驗癌症療法(例如輻射、手術、化學治療劑、靶向療法、抑制腫瘤中失調之其他信號傳導路徑的藥劑及其他免疫增強劑(諸如PD-1拮抗劑及其類似物))組合來增強。
當使用組合療法時，一或多種額外藥劑可與本發明化合物相繼或同時投與。在一個實施例中，在投與本發明化合物之前，向哺乳動物(例如人類)投與額外藥劑。在另一實施例中，在投與本發明化合物之後，向哺乳動物(例如人類)投與額外試劑。在另一實施例中，在投與本發明化合物之同時向哺乳動物(例如人類)投與額外試劑。
本發明亦關於一種用於在哺乳動物(包括人類)中治療異常細胞生長之醫藥組合物，其包含一定量之如上文所定義之本發明化合物(包括該化合物或其醫藥學上可接受之鹽之水合物、溶劑合物、多晶型物、異構體、前藥及/或代謝物)以及一或多種(較佳地一至三種)抗癌治療劑。
在特定實施例中，本發明化合物可與一或多種以下組合投與：靶向劑，諸如PI3激酶、mTOR、PARP、Kras、IDO、TDO、ALK、ROS、MEK、VEGF、FLT3、AXL、ROR2、EGFR、FGFR、Src/Abl、RTK/Ras、Myc、Raf、PDGF、AKT、c-套組、erbB、CDK2、CDK4、CDK4/CDK6、CDK5、CDK7、CDK9、SMO、CXCR4、HER2、GLS1、EZH2或Hsp90之抑制劑，或免疫調節劑，諸如PD-1拮抗劑或PD-L1拮抗劑、CTLA -4拮抗劑、OX40促效劑、4-1BB促效劑或CD80促效劑。
在其他實施例中，本發明化合物可與護理劑標準物組合投與，該護理劑標準物諸如他莫昔芬(tamoxifen)、多烯紫杉醇(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、順鉑(cisplatin)、卡培他濱(capecitabine)、吉西他濱(gemcitabine)、長春瑞賓(vinorelbine)、依西美坦(exemestane)、來曲唑(letrozole)、氟維司群(fulvestrant)、阿那曲唑(anastrozole)或曲妥珠單抗(trastuzumab)。合成方法
式I化合物可藉由下述方法，連同有機化學技術中已知之合成方法或一般技術者所熟悉之修飾及轉化來製備。本文所用之起始物質可購得或可藉由此項技術中已知之常規方法[諸如標準參考書(諸如Compendium of Organic Synthetic Methods, 第I-XII卷(Wiley-Interscience出版))中所揭示的彼等方法]製備。較佳方法包括但不限於以下所描述之方法。
在以下合成序列中之任一者期間，可能必需及/或需要保護任何有關分子上之敏感性或反應性基團。此可藉助於習知保護基團達成，諸如以下文獻中所述之保護基：T. W. Greene, Protective Groups in Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 198；T. W. Greene及P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 1991；及T. W. Greene及P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 1999，其特此以引用之方式併入。
式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可根據下文所論述之反應流程製備。除非另有指示，否則流程中之取代基如上文所定義。
產物之分離及純化係藉由一般技能化學工作者已知的標準程序實現。
熟習此項技術者應瞭解，流程、方法及實例中使用之不同符號、上標及下標係出於說明便利性及/或反映流程中引入其之次序而使用，且不意欲必須對應於隨附申請專利範圍中之符號、上標或下標。此外，熟習此項技術者將認識到在許多情況下，此等化合物將為混合物及對映異構體，其可在合成流程之不同階段使用習知技術分離，諸如(但不限於)結晶、正相層析、逆相層析及對掌性層析，從而得到單一對映異構體。流程表示適用於合成本發明化合物之方法。其不以任何方式限制本發明之範疇。
本發明化合物根據本文提供之例示性程序及熟習此項技術者已知之其變化來製備。
在整個實例中使用以下縮寫：「Ac」」意謂乙醯基；「ACN」」意謂乙腈；「BOC」、「Boc」或「boc」意謂N-三級丁氧基羰基；「Bu」」意謂丁基；「tBu」意謂三級丁基；「DCM」 (CH2 Cl2 )意謂二氯甲烷；「de」意謂非對映體過量；「DMF」意謂N ,N -二甲基甲醯胺；「DMSO」意謂二甲基甲醯胺；「ee」意謂對映異構體過量；「Et」意謂乙基；「EtOAc」意謂乙酸乙酯；「EtOH」意謂醇；「i-Pr」或「i Pr」意謂異丙基；「Me」意謂甲基；「MeOH」意謂甲醇；「MS」意謂質譜；「MTBE」意謂甲基三級丁基醚；「Ph」意謂苯基；「THF」意謂四氫呋喃；「SFC」意謂超臨界流體層析；「TLC」意謂薄層層析法；「Rf」意謂保留因子；「~」意謂大約；「RT」意謂包括環境溫度之室溫(通常為20℃至25℃)；「h」意謂小時；「min」意謂分鐘；「equiv」意謂當量；「sat.」意謂飽和。
式 I 化合物可藉由下文呈現之通用方法中所描述之程序製備或藉由其常規變型來製備。除非另有指示，否則方法中之取代基如本文所定義。儘管R4 在式 I 化合物中，但無論R4 係R4 -i還係R4 -ii，對應合成途徑內使用之中間物將為明顯的。本發明亦涵蓋用於製備式 I 化合物(除其中所用的任何新穎中間物之外)的任何一或多種此等方法。熟習此項技術者將瞭解，以下反應可經冷卻、加熱、在微波照射下加熱或在流動化學條件下操作。應進一步理解，可能需要或期望以與方法中所描述之次序不同的次序來進行轉化，或修改一或多種轉化，以提供本發明之所需化合物。
方法 A
Figure 02_image030
方法A提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為氫。在方法A中，使必需偶合搭配物或胺之間交叉偶合或親核芳族取代，提供如式 I (或其經保護形式)中之R1 ，得到A-2 。對於式A-1 之二氯吡啶，V為N(CH3 )2 、OH、哌啶、𠰌啉、OMe、OEt或OiPr。使A-2 甲醯化接著得到醛A-3 。隨後與愛耳門式亞磺醯胺(Ellman's sulfinamide)縮合得到式A-4 化合物。式A-4 化合物之還原及鹼介導之環化得到式A-5 化合物。或者，式I化合物，其中R1 為環丙基甲基，式A-5 化合物可使用本文所描述之製造中間物15c 之合成途徑來製備。在下一步驟中，式A-5 之氯吡啶與式A-6 之羧酸之間的銥及鎳介導之去羧基光氧化還原偶合得到式A-7 化合物。在此步驟中，A-6 之R3a 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。另外，R7 及R8 取代基可為H、Boc、替代性保護基或烷基；或者，R3a 及R8 取代基可為如最終產物式 I 中所需之環狀系統之一部分。在鈀或銅催化下使式A-7 化合物與溴吡啶三唑A-8 偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，得到式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，A-8 之R4N 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。
Figure 02_image032
使溴吡啶酯A-9 有機物肼分解(J. Med. Chem., 60(2), 722-748; 2017)，接著使相應醯肼A-10 與二甲基甲醯胺二甲基縮醛反應，得到甲脒A-11 。甲脒A-11 與胺之縮合產生三唑A-8 。
方法 B
Figure 02_image034
方法 B 提供式 I 化合物之製備，其中R3a 及R3b 為氫。在方法B之第一步中，自式A-3 (V=N(CH3 )2 、OH、哌啶、𠰌啉、OMe、OEt或OiPr)之化合物，與必需之胺基烷基鋅酸鹽之根岸交叉偶合(Negishi cross coupling)得到式B-1 化合物。在此步驟中，R7 及R8 取代基為H、如式 I 中所示之烷基或Boc或替代性保護基。隨後與愛耳門式亞磺醯胺之縮合、還原且鹼介導之環化得到式B-2 化合物。在鈀或銅催化存在下與溴吡啶三唑B-3 偶合及隨後在標準條件下裂解任何保護基產生式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，B-3 之R4D 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。
Figure 02_image036
式B-4 之內醯胺轉化為式B-5 之O-烷基亞胺酸酯。在此步驟中，式B-4 之R4D 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。式B-5 之O-烷基亞胺酸酯與式A-10 之醯基肼的環化得到式B-3 化合物。
方法 C
Figure 02_image038
方法C提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為甲基。在方法C之第一步中，使式A-5 化合物與式C-1 之
Figure 110115720-A0101-12-01
酸酯之間進行鈀介導之交叉偶合，接著使烯烴或烯屬烴進行鐵介導之氫化疊氮化，還原及視情況存在之保護所得胺，得到式C-2 化合物。在此步驟中，式C-1 之R3a 取代基及A-5 之R1 取代基應由所需產物式I或其受保護之變體表示。在鈀或銅催化下使式C-2 化合物與溴吡啶三唑A-8 交叉偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，得到式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，A-8 之R4N 取代基應由與最終產物式 I 之R4 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。
方法 D
Figure 02_image040
方法D提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為甲基。在方法D之第一步中，在銅或鈀催化下使式C-2 化合物與溴吡啶D-1 偶合，得到式D-2 化合物。在此步驟中，C-2 之R1 、R7 、R8 及R3a 取代基及式D-1 之R4C 取代基應由與最終產物D-3 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。R7 及/或R8 亦可視情況由此步驟中之保護基表示。式D-2 化合物與必需的胺之反應得到式D-3 化合物。在此步驟中，R4N 取代基應由與最終產物D-3 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。式D-3 化合物中任何保護基之裂解最終得到式 I-A 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。
Figure 02_image042
為獲得式D-1 化合物，式A-10 化合物與適當醯基氯化物進行反應，得到式D-4 化合物。在此步驟中，醯基氯化物之R4C 取代基由最終產物式 I 或其受保護之變體表示。式D-4 化合物之環化提供式D-1 化合物。
方法 E
Figure 02_image044
方法E提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為氫。在方法E之第一步中，不係 i.使式A-5 化合物與三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫之間進行鈀介導之交叉偶合，接著水解乙烯醚，得到式E-1 之酮，其中R3a 取代基應由與最終產物式 I 中所需之相同部分表示；就係 ii.使式A-5 化合物與氰化鋅之間進行鈀介導之交叉偶合，接著與烷基格林納試劑反應，得到式E-1 之酮，其中R3a 取代基應由與最終產物式 I 中所需之相同部分表示。
在此步驟中，A-5 之R1 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。
自式E-1 化合物，不係 i.還原酮，接著以甲磺酸鹽或氯化物形式活化，用疊氮化合物置換及還原及視情況選用之保護，得到式A-7 化合物(R7 及R8 均為H或R7 為H且R8 為Boc或替代性保護基)；就係 ii.還原酮，接著以甲磺酸鹽或氯化物形式活化，用烷基胺置換及還原及視情況選用之保護，得到式A-7 化合物(R7 及/或R8 均為H、烷基、Boc或替代性保護基)；就係 iii.與亞磺醯胺縮合，接著還原，得到式A-7 化合物(R7 為H且R8 為SOtBu)。
在鈀或銅催化下使式A-7 化合物與溴吡啶三唑A-8 偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，得到式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，A-8 之R4N 取代基在R4 內應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。
方法 F
Figure 02_image046
方法F提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為氫。在方法F 中，在鈀或銅催化下使式A-7 化合物與溴吡啶三唑B-3 偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，得到式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，B-3 之R4C 取代基及式A-7 之R1 、R7 、R8 及R3a 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。在此步驟中，式A-7 之R7 及/或R8 取代基亦可由Boc或另一保護基表示。
方法 G
Figure 02_image048
方法G提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為氫。在方法G之第一步中，式D-1 之溴吡啶與必需之胺進行反應以得到式G-1 化合物。在此步驟中，R4C 及R4N 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。在鈀或銅催化下使式G-1 化合物與A-7 偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，得到式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，式A-7 之R1 、R7 、R8 及R3a 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。在此步驟中，式A-7 之R7 及/或R8 取代基亦可由Boc或另一保護基表示。
方法 H
Figure 02_image050
方法H提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為甲基。在方法H之第一步中，在鈀或銅催化下使式C-2 化合物與溴吡啶三唑B-3偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，得到式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，C-2 之R1 、R7 、R8 及R3a 取代基及式B-3 之R4D 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。式C-2 之R7 及/或R8 亦可視情況由此步驟中之保護基表示。
方法 I
Figure 02_image052
方法I提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為甲基。在方法I之第一步中，在鈀或銅催化下使式C-2 化合物與溴吡啶三唑G-1 偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，得到式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮，其中R3b 為甲基。在此步驟中，C-2 之R1 、R7 、R8 及R3a 取代基及式G-1 之R4C 及R4 N 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。式C-2 之R7 及/或R8 亦可視情況由此步驟中之保護基表示。
方法 J
Figure 02_image054
方法J提供式 I 化合物之製備，其中R3b 為氫。在方法J之第一步中，保護式J-1 之醇以得到式J-2 化合物(例如X= OTBDMS)。式J-2 化合物轉化為式J-3 之O-烷基亞胺酸酯。式J-3 之O-烷基亞胺酸酯與式A-10 之醯基肼的環化得到式J-4 化合物。式J-4 化合物經歷在鈀或銅催化下與A-7 化合物偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，得到式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，A-7 之R1 、R7 、R8 及R3a 取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。在此步驟中，式A-7 之R7 及/或R8 取代基亦可視情況由此步驟中之保護基表示。
或者，為獲得式 I 化合物(其中R4 為R4 -ii且R4D 為經F原子(X=氟)取代之烷基)，自式J-4 化合物(X為受保護之羥基)裂解保護基，提供式J-4 化合物，其中X為羥基。接著可將醇轉化成烷基氟，以得到式J-4 化合物，其中X為氟。
方法 K
Figure 02_image056
方法K提供式 I 化合物之製備，其中R3a 及R3b 為氫。在方法K中，式J-4 化合物(X為氟)經歷在鈀或銅催化下與式B-2 化合物偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，產生式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，B-2 之R1 、R7 及R8 取代基及式J-4 之X取代基應由與最終產物式 I 或其受保護之變體中所需之相同部分表示。式B-2 之R7 及/或R8 亦可視情況由此步驟中之保護基表示。
方法 L
Figure 02_image058
在方法L之第一步中，式L-1 化合物經歷威悌稀化作用(Wittig olefination)，以得到式L-2 化合物。式L-2 化合物之還原及後續皂化得到式L-3 化合物。在此等步驟中，L-1 之R4D 取代基及L-2 及L-3 之R4D 及R4F 取代基及後續中間物由最終產物式 I (在R4 內)或其受保護之變體表示。或者，一些式L-3 化合物可商購。在下一步驟中，式L-3 化合物經歷與式A-10 化合物反應，以得到式L-4 化合物。環化式L-4 化合物，得到式L-5 之㗁二唑。先前進行式L-5 化合物之熱或酸介導之脫保護，隨後環化，得到式L-6 化合物。式L-6 化合物經歷在鈀或銅下與式A-7 、B-2 或C-2 化合物偶合，接著在標準條件下裂解任何保護基，產生式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。式 I 之R1 、R2 、R3a 及R3b 取代基視其在A-7 、B-2 或C-2 或其受保護之變體的先前方法中之定義而定。
方法 M
Figure 02_image060
方法M提供式 I 化合物之製備，其中R3a 及R3b 為氫。在方法M中，在鈀或銅催化下使式B-2 化合物與溴吡啶三唑A-8 偶合，得到式 I 之受保護之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。在此步驟中，式B-2 之R1 、R7 及R8 取代基及式A-8 之R4N 取代基應由與最終產物式 I 中所需之相同部分表示，或由其受保護之變體表示或由保護基(例如，R7 =Boc)表示。在標準條件下裂解任何保護基產生式 I 之吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮。製備合成中間物
對於本文中所製備之中間物及實例，在已知立體化學之情況下，立體化學如所繪製，且名稱指定特定立體化學，如(R )或(S )。已知如本文中所指定之立體化學，因為化合物係自已知、對掌性起始物質或外消旋混合物合成，且某些實例或中間物之立體化學係使用X射線結晶證實。在後者之情況下，其他實例或中間物之立體化學將隨後基於上述實例或中間物之已知對掌性及合成途徑來推斷。在已知立體化學但分離對映異構體之情況下，「或1」或「或2」為處於對掌性碳原子。在名稱中，具有解析但未證實之立體化學中心之碳係以符號「ξ」識別。在該碳處繪製之鍵表示立體化學；意謂，該碳將具有繪製之鍵組態(實心楔狀物)或相反組態(散列楔狀物)。參見例如實例 6a 及實例 6b 。外消旋化合物由標註「&1」指示，且鍵經繪製為成分確定之立體化學含義，碳將具有繪製之鍵組態(實心楔狀物)或相反組態(散列楔狀物)。參見例如中間物15。
中間物 1 ： 2-溴-6-(4-乙基-4H -1,2,4-三唑-3-基)吡啶
Figure 02_image062
步驟1：6-溴吡啶-2-碳醯肼(1a)
Figure 02_image064
向6-溴-2-吡啶甲酸甲酯(16.0 g，74.0 mmol)於MeOH (120 mL)中之溶液中添加肼單水合物(5.23 g，88.8 mmol，85%)且在室溫下攪拌混合物16小時。將所得溶液濃縮至大約一半體積，且接著藉由添加40 mL甲基三級丁基醚且攪拌10分鐘來濕磨。過濾所得白色固體且在真空下乾燥，得到標題化合物(1a) (15 g，94%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.82 (br. s, 1H), 8.13 (dd,J = 0.9, 7.5 Hz, 1H), 7.76 - 7.71 (m, 1H), 7.64 (dd,J = 0.9, 8.0 Hz, 1H), 4.08 (br. s, 2H)。(C6 H6 BrN3 O)之m/z (ESI)為217.5 (M+H)+ 。
步驟2：N' -[(6-溴吡啶-2-基)羰基]-N ,N -二甲基亞肼基甲醯胺(1b )
Figure 02_image066
在80℃下攪拌6-溴吡啶-2-碳醯肼(1a) (15.0 g，69.4 mmol)於二甲基甲醯胺二甲基縮醛(80 mL)中之溶液16小時。減壓濃縮所得混合物，得到殘餘物。向此殘餘物中添加甲基三級丁基醚(60 mL)且攪拌40分鐘。過濾所得黃色固體且乾燥，得到標題化合物(1b) (16 g，85%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.74 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.01 - 7.97 (m, 1H), 7.91 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 7.80 (dd,J = 1.0, 7.8 Hz, 1H), 2.84 (s, 6H)。(C9 H11 BrN4 O)之m/z (ESI)為272.7 (M+H)+ 。
步驟3：中間物 1
向燒瓶中裝入N' -[(6-溴吡啶-2-基)羰基]-N ,N -二甲基亞肼基甲醯胺(1b) (2.0 g，7.4 mmol)、乙胺(0.5 mL，333 mg，7.4 mmol)、乙酸(3 mL)及MeCN(15 mL，0.5 M)。在95℃下加熱溶液16小時。添加EtOAc (10 mL)及H2 O (10 mL)。添加固體K2 CO3 直至水層之pH為約pH 8。分離各層，且用EtOAc (3×30 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥。殘餘物用EtOAc(0.3 mL)及石油醚(3 mL)漿化5分鐘。藉由過濾收集固體，得到呈淡黃色固體之中間物1 (1.5 g，80%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.75 (s, 1H), 8.19 (dd,J = 7.7, 0.9 Hz, 1H), 7.99 - 7.90 (m, 1H), 7.79 (dd,J = 8.0, 0.9 Hz, 1H), 4.47 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 1.38 (t,J = 7.2 Hz, 3H)；(C9 H9 BrN4 )之m/z (APCI+)為252.7 (M+H)+ 。
中間物 2 ：(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑
Figure 02_image068
步驟1：{(2S )-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-5-側氧基戊-2-基}胺基甲酸三級甲酯(2a )
Figure 02_image070
將(4S )-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]戊酸(600 mg，2.76 mmol)於THF (13.8 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(於EtOAc中之50%溶液，3.62 mL，6.08 mmol)，隨後移除浴且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。接著，添加N ,N -二異丙基乙胺(2.89 mL，16.6 mmol)及6-溴吡啶甲醯肼(656 mg，3.04 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物22小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。反應物用水(15 mL)淬滅且用EtOAc (20 mL)轉移至分液漏斗中。分離各層，且依次用20%檸檬酸(20 mL)、NaHCO3 飽和溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌有機相。有機萃取物接著經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈灰白色固體之標題化合物(2a) (1.07 g，93%產率)，其不經進一步純化即進行。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.76 (br. s, 1H), 9.36 (br. s, 1H), 8.15 (dd,J = 0.9, 7.5 Hz, 1H), 7.77 - 7.71 (m, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 1H), 4.45 (br. d,J =  1.0 Hz, 1H), 3.91 (br. s, 1H), 2.47 - 2.35 (m, 2H), 2.00 - 1.89 (m, 1H), 1.75 - 1.66 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.22 (d,J =  6.6 Hz, 3H)。(C11 H15 BrN4 O2 )之LCMSm/z (APCI)為315.0 (M+H-Boc)+ 。
步驟2：{(2S )-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]丁-2-基}胺基甲酸三級丁酯(2b )
Figure 02_image072
向{(2S )-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-5-側氧基戊-2-基}胺基甲酸三級甲酯(2a ) (290 mg，0.698 mmol)於DCM(2.8 mL，0.25 M)中之溶液中添加三乙胺(0.292 mL，2.09 mmol)及對甲苯磺醯氯(160 mg，0.838 mmol)。在室溫下攪拌混合物16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。添加乙二胺(0.047 mL，0.698 mmol)以清除過量之對甲苯磺醯氯；在添加期間，立即形成沈澱。在室溫下攪拌30分鐘之後，用20%檸檬酸(5 mL)洗滌反應物且分離各層。用DCM(5 mL)萃取水層，接著用鹽水(10 mL)洗滌合併之有機層，經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈淡黃色固體之標題化合物(2b ) (274 mg，98%產率)，其不經進一步純化即使用。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.21 (dd,J = 0.9, 7.6 Hz, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.68 - 7.65 (m, 1H), 4.39 (br. s, 1H), 3.85 (br. s, 1H), 3.08 - 3.01 (m, 2H), 2.17 - 2.03 (m, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.22 (d,J = 6.6 Hz, 3H)。(C11 H13 BrN4 O)之LCMSm/z (APCI)為297.0 (M+H-Boc)+ 。
步驟3：中間物 2
向微波小瓶中裝入{(2S )-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]丁烷-2-基}胺基甲酸三級甲酯(2b ) (150 mg，0.378 mmol)及三氟乙醇(1.89 mL，0.2 M)，且密封，隨後在微波中加熱至180℃持續30分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。濃縮反應混合物，且殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至1:10 MeOH/EtOAc)純化，得到呈褐色膠質固體之中間物 2 (74.3 mg，71%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.38 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 7.74 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 5.22 - 5.08 (m, 1H), 3.21 - 3.16 (m, 1H), 3.16 - 3.02 (m, 2H), 2.55 - 2.44 (m, 1H), 1.60 (d,J = 6.6 Hz, 3H)。(C11 H11 BrN4 )之LCMSm/z (APCI)為279.1 (M+H)+ 。藉由SFC (10至60%甲醇(0.5% NH3 )在400至450巴下之二氧化碳中測定為單一對映異構體，梯度時間=2分鐘，流動速率=4 mL/分鐘，Chiralpack IC-U 50mm×3mm×1.6 µm管柱)。中間物 2 之立體化學係基於步驟1中使用(4S )-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]戊酸來指定。
藉由小分子X射線結晶學明確建立中間物 2 之絕對組態。在裝備有Mo Kα 輻射(λ=0.71073)之Bruker APEX II Ultra CCD繞射儀上執行單晶X射線繞射研究。晶體按原樣使用(藉由自二氯甲烷之蒸氣擴散生長)，將0.200×0.075×0.060 mm無色晶體安裝於具有帕拉頓油(paratone oil)之冷凍環上。使用Φ及ω掃描在100(2)K下在氮氣流中收集資料。使用暴露時間1s(視2 θ範圍而定)，結晶偵測器距離為45 mm，掃描寬度為0.80°。100.0%完成對θ之25.242°的資料收集。將資料使用Bruker SAINT軟體程式整合且使用SADABS軟體程式縮放。藉由直接方法(SHELXS)之溶液產生與所提出結構完全相符的定相模型。藉由全矩陣最小平方(SHELXL-2014)各向異性地改進所有非氫原子。使用騎乘模型置放所有碳結合氫原子。使用SHELXL-2014中之適當HFIX命令相對於其母原子限定其位置。已使用適當HFIX命令改進C-H、N-H及O-H氫原子之位置。結晶資料概述於表1中。 表1 分子式                               C11 H11 Br N4 分子量                               279.15 溫度                                  100.15 K 波長                                  0.71073 Å 晶體系統                            單斜晶 空間群                               P21 單位晶胞尺寸                     a = 7.772(2) Å        α = 90°。 b = 13.571(4) Å      β = 96.191(6)°。 c = 10.676(3) Å      γ = 90°。 體積                                  1119.5(5) Å3 Z                                      4 密度(計算值)                      1.656 Mg/m3 吸收係數                            3.649 mm-1 F(000)                               560 晶體大小                            0.2×0.075×0.06 mm3 晶體顏色，習性                  無色嵌段 資料收集之θ範圍                 1.919至26.755°. 指數範圍                            -9＜=h＜=9、-17＜=k＜=17、-13＜=l＜=13 收集之反射                         19401 獨立反射                            4760 [Rint = 0.0524] 相對於θ=25.242°之完整性    100.0 % 吸收校正                            來自等效物之半實驗校正 最大及最小傳輸                  0.4910及0.3848 改進方法                            針對F2 之全矩陣最小平方 資料/限定/參數                   4760/1/291 F2 上擬合優度                     1.013 最終R指數[I ＞ 2 δ (I)] R1 = 0.0243，wR2 = 0.0582 R指數(所有資料) R1 = 0.0258，wR2 = 0.0589 絕對結構參數                     -0.012(6) 最大繞射峰及谷                  0.300及-0.219 e.Å-3
中間物 3 ：(5S )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑
Figure 02_image074
步驟1：{(2S )-1-[甲氧基(甲基)胺基]-1-側氧基丁烷-2-基}胺基甲酸三級丁酯(3a )
Figure 02_image076
將(2S )-2-[(三級丁氧基羰基)胺基]丁酸(2.0 g，9.84 mmol)於THF (49.2 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(於EtOAc中之50%溶液，12.9 mL，21.6 mmol)，隨後移除浴且使反應混合物升溫至室溫且攪拌30分鐘。接著，添加N ,N -二異丙基乙胺(10.3 mL，59.0 mmol)及甲氧基(甲基)胺鹽酸鹽(1.06 g，10.8 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物18小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。反應物用水(40 mL)淬滅且用EtOAc (40 mL)轉移至分液漏斗中。分離各層，且依次用20%檸檬酸(40 mL)、NaHCO3 飽和溶液(40 mL)及鹽水(40 mL)洗滌有機相。有機萃取物接著經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈黃色油狀物之標題化合物(3a ) (1.29 g，53%產率)，其不經進一步純化即進行。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.28 - 5.12 (m, 1H), 4.74 - 4.52 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 1.85 - 1.73 (m, 1H), 1.64 - 1.54 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 0.96 (t,J = 7.5 Hz, 3H)。(C11 H22 N2 O4 )之LCMSm/z (APCI)為247.1 (M+H)+ 。
步驟2：(S )-(1-側氧基丁烷-2-基)胺基甲酸三級丁酯(3b )
Figure 02_image078
將{(2S )-1-[甲氧基(甲基)胺基]-1-側氧基丁烷-2-基}胺基甲酸三級丁酯(3a) (1.29 g，5.25 mmol)於THF(26.2 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃下將氫化鋰鋁(於2-MeTHF中之2.3 M溶液，2.51 mL，5.77 mmol)逐滴添加至溶液中。在0℃下攪拌反應混合物40分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。反應物用EtOAc (10 mL)及1 M HCl (10 mL)淬滅且轉移至分液漏斗中。分離各層且用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。合併之有機萃取物接著經MgSO4 乾燥，過濾，且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈白色固體之標題化合物(3b ) (0.575 g，59%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.60 (s, 1H), 5.09 (br. s, 1H), 4.22 (br. s, 1H), 2.04 - 1.90 (m, 1H), 1.73 - 1.64 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 0.99 (t,J = 7.5 Hz, 3H)。
步驟3：(2E ，4S )-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己-2-烯酸乙酯(3c )
Figure 02_image080
向(S )-(1-側氧基丁烷-2-基)胺基甲酸三級丁酯(3b ) (575 mg，3.07 mmol)於DCM(6.14 mL，0.5 M)中之溶液中添加(乙氧基羰基亞甲基)三苯基磷烷(1.60 g，4.61 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物17小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。在添加異丙醇(8.5 mL，0.36 M)及氯化鋅(1.26 g，9.21 mmol)以沈澱三苯基氧化膦之前，將反應濃縮至乾燥。在室溫下攪拌30分鐘之後，過濾反應混合物且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈無色油狀物之標題化合物(3c ) (653 mg，83%產率，E/Z異構體之比率＞20:1)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 6.86 (dd,J = 5.4, 15.6 Hz, 1H), 5.94 (dd,J = 1.7, 15.7 Hz, 1H), 4.50 (br. s, 1H), 4.31 - 4.16 (m, 3H), 1.65 - 1.63 (m, 1H), 1.60 - 1.51 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.32 - 1.30 (m, 3H), 0.99 - 0.95 (m, 3H)。(C8 H15 NO2 )之LCMSm/z (APCI)為158.2 (M+H-Boc)+ 。
步驟4：(4S )-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己酸乙酯(3d )
Figure 02_image082
向(2E ,4S )-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己-2-烯酸乙酯(3c ) (653 mg，2.54 mmol)於甲醇(12.7 mL，0.2 M)中之溶液中添加鈀/碳(10% w/w，270 mg，0.254 mmol)。將反應小瓶抽成真空且在動態真空下用H2 再填充10秒。接著在室溫下在1 atm H2 下攪拌反應混合物18小時。在室溫下攪拌混合物17小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。經Celite® 過濾反應物且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈無色油狀物之標題化合物(3d ) (589 mg，90%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.37 - 4.23 (m, 1H), 4.20 - 4.11 (m, 2H), 3.61 - 3.46 (m, 1H), 2.42 - 2.33 (m, 2H), 1.93 - 1.82 (m, 1H), 1.71 - 1.62 (m, 1H), 1.57 - 1.51 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.44 - 1.38 (m, 1H), 1.30 - 1.26 (m, 3H), 0.94 (t,J =  7.4 Hz, 3H)。
步驟5：(4S )-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己酸(3e )
Figure 02_image084
向(4S )-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己酸乙酯(3d ) (589 mg，2.27 mmol)於THF (11.4 mL，0.2 M)及MeOH (5.7 mL，0.4 M)中之溶液中添加LiOH (544 mg，22.7 mmol)於水(2.84 mL，0.8 M)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物24小時。在添加水及1 M HCl之前濃縮反應物直至達至pH 5。用EtOAc (3×20 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈淺黃色油狀物之標題化合物(3e ) (260 mg，50%產率)，其不經進一步純化即使用。
步驟6：{(3S )-6-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-6-側氧基己烷-3-基}胺基甲酸三級丁酯(3f )
Figure 02_image086
將(4S )-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己酸(3e ) (260 mg，1.12 mmol)於THF (5.6 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(於EtOAc中之50%溶液，1.47 mL，2.47 mmol)，隨後移除浴且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。接著，添加N ,N -二異丙基乙胺(1.17 mL，6.74 mmol)及6-溴吡啶甲醯肼(267 mg，1.24 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物18小時。反應物用水(15 mL)淬滅且用EtOAc (20 mL)轉移至分液漏斗中。分離各層，且依次用20%檸檬酸(20 mL)、NaHCO3 飽和溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌有機相。有機萃取物接著經MgSO4 乾燥，過濾，且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈白色固體之標題化合物(3f ) (241 g，50%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.76 (br. s, 1H), 9.29 (br. s, 1H), 8.15 (d,J =  6.8 Hz, 1H), 7.76 - 7.71 (m, 1H), 7.68 - 7.64 (m, 1H), 4.45 - 4.31 (m, 1H), 3.69 (br. s, 1H), 2.45 - 2.37 (m, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.69 - 1.62 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.45 (br. d,J =  7.3 Hz, 2H), 0.99 (t,J =  7.5 Hz, 3H)。(C12 H17 BrN4 O2 )之LCMSm/z (APCI)為329.0 (M+H-Boc)+ 。
步驟7：{(3S )-1-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]戊烷-3-基}胺基甲酸三級丁酯(3g )
Figure 02_image088
向{(3S )-6-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-6-側氧基己烷-3-基}胺基甲酸三級丁酯(3f ) (241 mg, 0.561 mmol)於DCM (2.2 mL，0.25 M)中之溶液中添加三乙胺(0.235 mL，1.68 mmol)及對甲苯磺醯氯(128 mg，0.673 mmol)。在室溫下攪拌混合物16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。添加乙二胺(0.038 mL，0.561 mmol)以清除過量之對甲苯磺醯氯；在添加期間，立即形成沈澱。在室溫下攪拌30分鐘之後，用20%檸檬酸(5 mL)洗滌反應物且分離各層。用DCM(5 mL)萃取水層，接著用鹽水(10 mL)洗滌合併之有機層，經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈白色固體之標題化合物(3g ) (178 g，77%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.22 (dd,J =  0.7, 7.6 Hz, 1H), 7.77 - 7.72 (m, 1H), 7.68 - 7.65 (m, 1H), 4.35 (br. d,J =  8.2 Hz, 1H), 3.65 (br. s, 1H), 3.07 (dt,J =  6.1, 10.0 Hz, 2H), 2.21 - 2.11 (m, 1H), 1.93 - 1.83 (m, 1H), 1.65 - 1.61 (m, 1H), 1.53 - 1.48 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 0.98 (t,J =  7.4 Hz, 3H)。(C12 H15 BrN4 O)之LCMSm/z (APCI)為311.0 (M+H-Boc)+ 。
步驟8：中間物 3
向微波小瓶中裝入{(3S )-1-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]戊烷-3-基}胺基甲酸三級丁酯(3g ) (178 mg，0.431 mmol)及三氟乙醇(2.16 mL，0.2 M)，且密封，隨後在微波中加熱至180℃持續60分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。濃縮反應混合物，且殘餘物藉由急驟層析(SiO2，100%庚烷至1:10 MeOH/EtOAc)純化，得到呈無色油狀物之中間物 3 (116 mg，91%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.26 (dd,J =  0.7, 7.7 Hz, 1H), 7.67 (t,J =  7.9 Hz, 1H), 7.49 (dd,J =  0.7, 7.8 Hz, 1H), 4.90 - 4.83 (m, 1H), 3.07 - 2.89 (m, 3H), 2.58 - 2.49 (m, 1H), 2.04 - 1.97 (m, 1H), 1.83 - 1.70 (m, 1H), 0.96 (t,J =  7.5 Hz, 3H)。(C12 H13 BrN4 )之LCMSm/z (APCI)為293.0 (M+H)+ 。藉由SFC(10至60%甲醇(0.5% NH3 )在400至450巴之二氧化碳中測定為97.4% ee，梯度時間=2分鐘，流動速率=4 mL/分鐘，Kromasil (R,R)Whelk-O 50 mm×3 mm×1.8 µm管柱)。立體化學係基於在第一步中使用(2S )-2-[(三級丁氧基羰基)胺基]丁酸來指定。藉由小分子X射線結晶學明確建立中間物 3 之絕對組態。
表2提供在裝備有Mo Kα 輻射(λ=0.71073)之Bruker APEX II Ultra CCD繞射儀上執行之單晶X射線繞射研究。晶體按原樣使用(藉由自乙酸乙酯:甲醇(10:1)之蒸氣擴散生長)。將0.180×0.065×0.055 mm無色晶體安裝於具有帕拉頓油之冷凍環上。使用Φ及ω掃描在100(2)K下在氮氣流中收集資料。使用曝露時間2s(視2 θ範圍而定)，結晶偵測器距離為45 mm，掃描寬度為0.80°。100.0%完成對θ之25.242°的資料收集。將資料使用Bruker SAINT軟體程式整合且使用SADABS軟體程式縮放。藉由直接方法(SHELXS)之溶液產生與所提出結構完全相符的定相模型。藉由全矩陣最小平方(SHELXL-2014)各向異性地改進所有非氫原子。使用騎乘模型置放所有碳結合氫原子。使用SHELXL-2014中之適當HFIX命令相對於其母原子限定其位置。已使用適當HFIX命令改進C-H、N-H及O-H氫原子之位置。 表2 分子式                               C12 H13 Br N4 分子量                               293.17 溫度                                  100.15 K 波長                                  0.71073 Å 晶體系統                            斜方晶 空間群                               P2 1 2 1 2 1 單位晶胞尺寸                     a = 7.1319(2) Å      α = 90°。 b = 11.2187(3) Å     β = 90°。 c = 15.5538(5) Å     γ = 90°。 體積                                  1244.47(6) Å3 Z                                      4 密度(計算值) 1.565 Mg/m3 吸收係數                            3.286 mm-1 F(000)                               592 晶體大小                            0.18×0.065×0.055 mm3 晶體顏色，習性                  無色不規則 資料收集之θ範圍                 2.238至27.108°. 指數範圍                            -9＜=h＜=9、-14＜=k＜=14、-19＜=l＜=19 收集之反射                         19687 獨立反射                            2740 [Rint = 0.0697] 相對於θ=25.242°之完整性    100.0 % 吸收校正                            來自等效物之半實驗校正 最大及最小傳輸                  0.4851及0.4153 改進方法                            針對F2 之全矩陣最小平方 資料/限定/參數                   2740/0/155 F2 上擬合優度                     1.047 最終R指數[I ＞ 2 δ (I)] R1 = 0.0237，wR2 = 0.0570 R指數(所有資料) R1 = 0.0261，wR2 = 0.0581 絕對結構參數                     -0.003(7) 最大繞射峰及谷                  0.307及-0.255 e.Å-3
中間物 4 ：(S ,S )-2-甲基-N-[(1R )-1-{6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image090
步驟1：{2-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]吡啶-4-基}(哌啶-1-基)甲酮(4a )
Figure 02_image092
在100℃下攪拌(2,6-二氯吡啶-4-基)(哌啶-1-基)甲酮(600 mg，2.32 mmol)及(2R )-2-甲基吡咯啶(591 mg，6.95 mmol)於DMF (1.5 mL)中之溶液16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物冷卻至室溫，添加H2 O (40 mL)，且用DCM (3×40 mL)萃取反應物。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(24 g SiO2 ，0至20% EtOAc/庚烷)純化，得到標題化合物(4a ) (664 mg，93%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 6.44 (d,J = 1.0 Hz, 1H), 6.21 (d,J = 1.0 Hz, 1H), 4.12 (q,J = 7.1 Hz, 1H), 3.72 - 3.62 (m, 2H), 3.54 (ddd,J = 10.5, 7.6, 2.9 Hz, 1H), 3.40 - 3.28 (m, 2H), 2.10 - 2.04 (m, 2H), 1.75 - 1.62 (m, 4H), 1.26 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 1.21 (d,J = 6.3 Hz, 2H；(C16 H22 ClN3 O)之m/z (APCI+)為308.2 (M+H)+ 。
步驟2：2-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛(4b )
Figure 02_image094
向DMF (473 mg，6.47 mmol)於DCM (3.0 mL)中之溶液中添加POCl3 (992 mg，6.47 mmol)。攪拌混合物10分鐘，且接著添加{2-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]吡啶-4-基}(哌啶-1-基)甲酮(4a ) (664 mg，2.16 mmol)於DCM (3.0 mL)中之溶液。在回流下攪拌混合物15小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物濃縮至乾燥且緩慢傾入NaHCO3 飽和溶液(30 mL)中。用DCM (3×30 mL)萃取混合物。合併之有機物經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(24 g SiO2 ，0至40% EtOAc/庚烷)純化，得到標題化合物(4b) (568 mg，78%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 10.07 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 4.13 - 4.65 (m, 1H), 3.68 - 3.83 (m, 1H), 3.55 - 3.68 (m, 2H), 3.35 - 3.55 (m, 1H), 2.98 - 3.20 (m, 2H), 1.88 - 2.17 (m, 3H), 1.71 - 1.83 (m, 2H), 1.55 - 1.67 (m, 3H), 1.46 - 1.55 (m, 1H), 1.31 - 1.42 (m, 1H), 1.17 - 1.26 (m, 3H)；(C17 H22 ClN3 O2 )之m/z (APCI+)為336.1 (M+H)+ 。
步驟3：N -[(E )-{2-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-基}亞甲基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(4c )
Figure 02_image096
在45℃下攪拌2-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛(4b ) (432 mg，1.29 mmol)、(R )-(+)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(187 mg，1.54 mmol)及Ti(OEt)4 (880 mg，3.86 mmol)於THF (10.0 mL)中之混合物16小時。LCMS分析顯示約25%剩餘起始物質。再分批添加(R )-(+)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(62.4 mg，0.515 mmol)及Ti(OEt)4 (293 mg，1.29 mmol)且在50℃下攪拌混合物16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應冷卻至室溫。用DCM (50 mL)稀釋混合物，且用飽和NaHCO3 溶液(35 ml)及鹽水(35 mL)洗滌。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈白色膠狀物之標題化合物(4c ) (495 mg，88%產率)，其不經進一步純化即使用。(C21 H31 ClN4 O2 S)之m/z (APCI+)為440.2 (M+H)+ 。
步驟4：4-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(4d )
Figure 02_image098
將N -[(E )-{2-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-基}亞甲基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(4c ) (495 mg，1.13 mmol)於THF (15.0 mL)中之溶液冷卻至0℃，且接著添加LiBH4 (2.0 M於THF中，620 mL，1.24 mmol)溶液。在0℃下攪拌混合物2小時且接著添加NaOMe之溶液(25%之MeOH溶液，2.5 mL，10.1 mmol)。使反應升溫至室溫且接著攪拌16小時。用DCM (60 mL)稀釋反應物且用NH4 Cl飽和水溶液(60 mL)及鹽水(60 mL)洗滌。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，50至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈無色泡沫狀之標題化合物(4d ) (199 mg，產率70%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 6.68 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.21 - 4.14 (m, 1H), 3.58 (ddd,J = 10.5, 7.6, 2.8 Hz, 1H), 3.39 (q,J = 8.9 Hz, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 2H), 1.75 (dt,J = 5.2, 2.6 Hz, 1H), 1.23 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。假定一個氫原子藉由水峰遮蔽；(C12 H14 ClN3 O)之m/z (APCI+)為252.3 (M+H)+ 。
步驟5：6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲腈(4e )
Figure 02_image100
在微波中將4-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(4d ) (438 mg，1.74 mmol)、Zn(CN)2 (306 mg，2.6 mmol)、DMF (15 mL)及Pd(PPh3 )4 (100 mg，0.09 mmol)之混合物加熱至140℃持續30分鐘。用DCM稀釋反應物且過濾。用DCM洗滌濾餅。真空濃縮濾液且藉由急驟層析(SiO2 ，0至100% 1:1 EtOAc:DCM/庚烷)純化粗化合物，得到呈黃色固體之標題化合物(4e ) (375 mg，89%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.00 - 6.94 (m, 1H), 6.46 - 6.32 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.29 - 4.19 (m, 1H), 3.61 (ddd,J = 2.6, 7.6, 10.3 Hz, 1H), 3.46 - 3.34 (m, 1H), 2.22 - 2.02 (m, 3H), 1.86 - 1.72 (m, 1H), 1.25 (d,J = 6.4 Hz, 3H)；(C13 H14 N4 O)之m/z (APCI+)為243.1 (M+H)+ 。
步驟6：4-乙醯基-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(4f )
Figure 02_image102
在冰/水浴下向6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲腈(4e ) (355 mg，1.47 mmol)於THF (15 mL)中之溶液中添加MeMgBr (4.88 mL，14.7 mmol，3.0 M於THF中)。在此溫度下攪拌所得混合物10分鐘，接著升溫至室溫且允許攪拌2小時。在0℃下用2 N HCl (6 mL)淬滅混合物且在室溫下攪拌15分鐘。混合物用飽和NaHCO3 溶液中和且用DCM (3×40 mL)萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。粗化合物藉由急驟層析(SiO2 ，20%至50% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色固體之標題化合物(4f ) (190 mg，50%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) 6.98 (s, 1H), 6.59 (br. s, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.28 (br. t,J = 5.7 Hz, 1H), 3.64 (ddd,J = 2.6, 7.5, 10.1 Hz, 1H), 3.48 - 3.38 (m, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.19 - 2.10 (m, 2H), 2.08 - 2.01 (m, 1H), 1.79 (td,J = 2.6, 5.0 Hz, 1H), 1.30 (d,J = 6.2 Hz, 3H)；(C14 H17 N3 O2)之m/z (APCI+)為260.2 (M+H)+ 。
步驟7：中間物 4
向40 mL小瓶中添加4-乙醯基-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(4f ) (200 mg，0.77 mmol)、(S )-三級-丁基亞磺醯胺(187 mg，1.54 mmol)、THF (1.54 mL)及Ti(OEt)4 (1.54 mmol，0.323 mL)。將小瓶加蓋且加熱至80℃持續48小時。接著將反應物冷卻至-78℃ (乾冰/丙酮浴)且逐滴冷卻三二級丁基硼氫化鋰(1.54 mmol，1.54 mL，1.0 M於THF中)。在-78℃下攪拌所得混合物3小時。使混合物升溫至室溫且逐滴用飽和NH4 Cl (2 mL)淬滅，接著添加DCM (20 mL)及鹽水(20 mL)。經由Celite® 過濾混合物，且用DCM (40 mL)洗滌。收集有機層，且用DCM (20 mL)萃取水層。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。粗物質藉由急驟層析(SiO2 ，溶劑0至10% MeOH/EtOAc)純化，得到呈黃色泡沫狀之中間物 4 (127 mg，45%產率)。(C18 H28 N4 O2 S)之m/z (APCI+)為365.3 (M+H)+ 。立體化學基於步驟1中使用(2R )-2-甲基吡咯啶及步驟7中使用(S )-三級-丁基亞磺醯胺來指定。
中間物 5 ：(S ,R )-2-甲基-N -[(1R )-1-{6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image104
步驟1：6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-丙醯基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(5a )
Figure 02_image106
將6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲腈(4e ) (808 mg，3.33 mmol)於THF (8.0 mL)中之溶液冷卻至0℃，且接著用溴化乙基鎂溶液(3.0 M於Et2 O中，11.1 mL，33.3 mmol)處理。在室溫下攪拌混合物1小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應冷卻至0℃且藉由添加2 N HCl淬滅。在室溫下攪拌混合物10分鐘，藉由添加NaHCO3 飽和溶液中和，接著用DCM (2×30 mL)萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(24 g SiO2 ，0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色油狀物之標題化合物(5a ) (646 mg，71%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.01 (s, 1H), 6.41 (br. s, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.39 - 4.22 (m, 1H), 3.66 (ddd, J = 2.6, 7.4, 10.1 Hz, 1H), 3.52 - 3.38 (m, 1H), 3.30 - 3.14 (m, 2H), 2.26 - 2.10 (m, 2H), 2.06 - 2.01 (m, 1H), 1.81 (td,J = 2.5, 5.1 Hz, 1H), 1.31 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 1.24 (t,J = 7.3 Hz, 3H)；(C15 H19 N3 O2 )之m/z (APCI+)為274.2 (M+H)+ 。
步驟2：(S ,S )-2-甲基-N -[(1E )-1-{6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}亞丙基]丙烷-2-亞磺醯胺(5b )
Figure 02_image108
向6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-丙醯基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(5a ) (640 mg，2.34 mmol)於THF(2.0 mL)中之溶液中添加(S )-(−)-2-甲基l-2-丙烷亞磺醯胺(568 mg，4.68 mmol)及Ti(OEt)4 (2.14 g，9.37 mmol)。在90℃下攪拌混合物23小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。使混合物冷卻至室溫且接著添加鹽水(40 mL)及DCM (30 mL)。攪拌混合物10分鐘且接著經由Celite® 過濾。分離各層。用DCM (30 mL)萃取水層。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈白色泡沫狀之標題化合物(5b ) (779 mg，88%產率)，其直接用於下一步驟中。(C19 H28 N4 O2 S)之m/z (APCI+)為377.2 (M+H)+ 。
步驟3：中間物 5
將(S ,S )-2-甲基-N -[(1E )-1-{6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}亞丙基]丙烷-2-亞磺醯胺(5b ) (654 mg，1.40 mmol)於THF(12.0 mL)中之溶液冷卻至-78℃，且接著用三二級丁基硼氫化鋰(1.0 M於THF中，2.5 mL，2.5 mmol)逐滴處理。在-78℃下攪拌混合物1.5小時。添加額外之三二級丁基硼氫化鋰(1.0 M，0.417 mL，0.417 mmol)且在-78℃下再攪拌混合物1.5小時。混合物用MeOH淬滅，用鹽水(50 mL)稀釋，且用DCM (2×50 mL)萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(12 g SiO2 ，0至10% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色膠狀物之中間物 5 (300 mg，57%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.66 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.14 (d,J = 6.6 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.27 - 4.14 (m, 2H), 3.59 - 3.44 (m, 1H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 2.14 - 2.01 (m, 2H), 1.98 - 1.81 (m, 3H), 1.73 - 1.60 (m, 1H), 1.20 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.86 - 0.73 (m, 3H)；(C19 H30 N4 O2 S)之m/z (APCI+)為379.2 (M+H)+ 。
立體化學係基於在合成中間物 4 之步驟1中使用(2R )-2-甲基吡咯啶及步驟2中之(S )-(−)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺來指定。藉由小分子X射線結晶學明確建立中間物 5 之絕對組態。
表3提供確認中間物 5 之立體化學的X射線繞射資料。在裝備有Cu Kα 輻射(λ=1.54178 Å)之Bruker Microstar APEX II CCD繞射儀上執行單晶X射線繞射研究。明確指定絕對立體化學(Flack=0.003(12))。在4℃下自醚/戊烷生長中間物 5 之晶體。將0.12×0.04×0.02 mm片無色晶體安裝於具有帕拉頓油之冷凍環上。使用Φ及ω掃描在100(2)K下在氮氣流中收集資料。取決於使用1.25°之掃描寬度之每訊框之2θ範圍，結晶偵測器距離為45 mm且暴露時間為4、6、8、10、14或20秒。97.0%完成對θ之67.500°的資料收集。將資料使用Bruker SAINT軟體程式整合且使用SADABS軟體程式縮放。藉由直接方法(SHELXS)之溶液產生與所提出結構完全相符的定相模型。藉由全矩陣最小平方(SHELXL-2014)各向異性地改進所有非氫原子。使用騎乘模型置放所有碳結合氫原子。使用SHELXL-2014中之適當HFIX命令相對於其母原子限定其位置。 表3 經驗式：                            C19 H30 N4 O2 S 分子量                               378.53 溫度                                  100.0 K 波長                                  1.54178 Å 晶體系統                            三斜晶 空間群                               P1 單位晶胞尺寸：                  a = 8.3400(3) Å      α= 92.724(2)°。 b = 9.4731(3) Å      β= 104.495(2)°。 c = 15.3569(5) Å     γ = 115.416(2)°。 體積                                  1044.18(6) Å3 Z                                      2 密度(計算值)                      1.204 Mg/m3 吸收係數                            1.532 mm-1 F(000)                               408 晶體大小                            0.12×0.04×0.02 mm3 晶體顏色，習性                  無色板材 資料收集之θ範圍                 3.020至68.664°。 指數範圍                            -10＜=h＜=10、-11＜=k＜=11、-18＜=l＜=18 收集之反射                         21109 獨立反射                            7199 [R(int) = 0.0654] 相對於θ=67.500°之完整性    97.0 % 吸收校正                            來自等效物之半實驗校正 最大及最小傳輸                  0.5210及0.4220 改進方法                            針對F2 之全矩陣最小平方 資料/限定/參數                   7199/3/479 F2 上擬合優度                     1.038 最終R指數[I ＞ 2 δ (I)]         R1 = 0.0626，wR2 = 0.1561 R指數(所有資料)                 R1 = 0.0774，wR2 = 0.1686 絕對結構參數                     0.003(12) 消光係數                            n/a 最大繞射峰及谷                  0.593及-0.326 e.Å-3
中間物 6 ：4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image110
在室溫下向6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲腈(4e ) (213 mg，0.88 mmol)於THF (9 mL)中之懸浮液中添加氯化鑭(III)雙(氯化鋰)錯合物(1.76 mmol，2.93 mL，0.6 M)。在室溫下攪拌所得混合物30分鐘，接著冷卻至-78℃ (乾冰/丙酮浴)且逐滴添加甲基鋰(3.52 mmol，2.20 mL，1.6 M)。在-78℃下攪拌所得混合物1小時，接著使其升溫至室溫。用飽和NH4 Cl (20 mL)淬滅混合物，且接著添加鹽水(20 mL)及DCM (20 mL)。在室溫下攪拌混合物5分鐘，且經由Celite® 過濾。收集有機層，且用DCM (20 mL)萃取水層。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，溶劑0至10% MeOH/DCM)純化，得到呈淡棕色固體之中間物 6 (157 mg，65%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.60 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 4.17 (br. t,J = 5.7 Hz, 1H), 3.50 (ddd,J = 2.4, 7.2, 9.8 Hz, 1H), 3.30 - 3.22 (m, 1H), 2.07 - 2.02 (m, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 2H), 1.68 (td,J = 2.4, 4.9 Hz, 1H), 1.41 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.20 (d,J = 6.2 Hz, 3H)；(C15 H22 N4 O)之m/z (APCI+)為275.2 (M+H)+ 。
中間物 7 ：(5R )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑
Figure 02_image112
步驟1：(5R )-5-(氟甲基)吡咯啶-2-酮(7a )
Figure 02_image114
用鋁箔覆蓋(5R )-5-(溴甲基)吡咯啶-2-酮(600 mg，3.37 mmol)於CH3 CN (6.74 mL, 0.5 M)中之溶液以排除光。向此溶液中一次性添加AgF (1.07 g，8.43 mmol)於CH3 CN (12.5 mL，0.27 M)中之懸浮液。在室溫下在黑暗中攪拌反應物36小時。反應物經Celite® 過濾，且濃縮至乾燥。粗殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100% EtOAc至1:1 EtOAc/丙酮)純化，得到呈無色油狀物之標題化合物(7a ) (173 mg，44%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.17 (br. s, 1H), 4.49 - 4.17 (m, 2H), 4.01 - 3.84 (m, 1H), 2.44 - 2.28 (m, 2H), 2.27 - 2.16 (m, 1H), 1.88 - 1.75 (m, 1H)。19 F NMR (376 MHz，CDCl3 ) δ -224.58 (s, 1F)。
步驟2：(2R -2-(氟甲基)-5-側氧基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(7b )
Figure 02_image116
向(5R )-5-(氟甲基)吡咯啶-2-酮(7a ) (170 mg，1.45 mmol)於CH3 CN (6.74 mL，0.5 M)中之溶液中添加Boc2 O (348 mg，1.60 mmol)及4-(二甲基胺基)吡啶(17.7 mg，0.145 mmol)。在室溫下攪拌混合物2小時。TLC分析(2:1 EtOAc:丙酮)顯示起始物質耗盡。濃縮反應混合物且藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈無色油狀物之標題化合物(7b ) (277 mg，88%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.78 - 4.42 (m, 2H), 4.40 - 4.25 (m, 1H), 2.76 - 2.62 (m, 1H), 2.50 - 2.39 (m, 1H), 2.29 - 2.14 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 1.56 (s, 9H).19 F NMR (376 MHz, CDCl3 ) δ -233.52 (s, 1F)。
步驟3：[(2R )-1-氟-5-肼基-5-側氧基戊-2-基]胺基甲酸三級丁酯(7c )
Figure 02_image118
經由注射器向(2R )-2-(氟甲基)-5-側氧基吡咯啶-1-甲酸三級乙酯(7b ) (1.78 g，8.19 mmol)於THF (41.0 mL，0.2 M)中之溶液中添加單水合肼(1.3 mL，41.0 mmol)。在室溫下攪拌混合物30分鐘。TLC分析(1:1庚烷:EtOAc)顯示起始物質耗盡。濃縮反應混合物，且接著添加EtOAc (50 mL)及NH4 Cl飽和水溶液(50 mL)。分離各層，且用EtOAc (3×50 mL)萃取水層。合併之有機層經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈白色固體之標題化合物(7c ) (1.6 g，78%產率)，其不經進一步純化即獲得。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 5.15 - 5.00 (m, 1H), 4.52 - 4.44 (m, 1H), 4.39 - 4.33 (m, 1H), 3.93 - 3.75 (m, 1H), 2.40 (br. s, 2H), 2.00 - 1.81 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).19 F NMR (376 MHz, CDCl3 ) δ -232.02 (s, 1F)。
步驟4：{(2R )-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-1-氟-5-側氧基戊烷-2-基}胺基甲酸三級丁酯(7d )
Figure 02_image120
使6-溴吡啶-2-甲酸(1.4 g，6.93 mmol)於THF (34.7 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(於EtOAc中之50%溶液，9.1 mL，15.2 mmol)，隨後移除浴且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。接著，添加N ,N -二異丙基乙胺(7.24 mL，41.6 mmol)及[(2R )-1-氟-5-肼基-5-側氧基戊烷-2-基]胺基甲酸三級丁酯(7c ) (1.90 g，7.62 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物17小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。用水(30 mL)淬滅反應物且用EtOAc (50 mL)轉移至分液漏斗中。分離各層，且依次用20%檸檬酸(30 mL)、NaHCO3 飽和溶液(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌有機相。有機萃取物接著經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈黃色固體之標題化合物(7d ) (2.37 g，78%產率)，其不經進一步純化即進行。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.74 (br. s, 1H), 9.15 (br. s, 1H), 8.14 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.77 - 7.71 (m, 1H), 7.70 - 7.65 (m, 1H), 4.95 (br. d,J = 9.2 Hz, 1H), 4.62 - 4.36 (m, 2H), 4.12 - 3.98 (m, 1H), 2.49 - 2.37 (m, 2H), 2.03 - 1.95 (m, 2H), 1.49 (s, 9H)。19 F NMR (376 MHz, CDCl3 ) δ -232.01 (s, 1F)。(C11 H14 BrFN4 O2 )之LCMSm/z (APCI)為333.1 (M+H-Boc)+ 。
步驟5：{(2R )-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]-1-氟丁烷-2-基}胺基甲酸三級丁酯(7e )
Figure 02_image122
向{(2R )-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-1-氟基-5-側氧基戊烷-2-基}胺基甲酸三級丁酯(7d ) (2.3 g，5.3 mmol)於DCM (21.2 mL，0.25 M)中之溶液中添加三乙胺(2.22 mL，15.9 mmol)及對甲苯磺醯氯(1.21 g，6.37 mmol)。在室溫下攪拌反應物1.5小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。添加乙二胺(0.355 mL，5.31 mmol)以清除過量之對甲苯磺醯氯，在添加期間，立即形成沈澱。在室溫下攪拌30分鐘之後，用20%檸檬酸(20 mL)洗滌反應物且分離各層。用DCM(40 mL)萃取水層，接著合併之有機層用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈淡黃色固體之標題化合物(7e ) (2.07 mg，94%產率)，其不經進一步純化即使用。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.21 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.90 - 4.69 (m, 1H), 4.55 (br. d,J = 2.8 Hz, 1H), 4.43 (br. s, 1H), 4.08 - 3.84 (m, 1H), 3.15 - 3.05 (m, 2H), 2.29 - 2.06 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).19 F NMR (376 MHz, CDCl3 ) δ -231.82 (s, 1F)。(C11 H12 BrFN4 O)之LCMSm/z (APCI)為315.0 (M+H-Boc)+ 。
步驟6：中間物 7
向微波小瓶中裝入{(2R )-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]-1-氟丁烷-2-基}胺基甲酸三級甲酯(7e ) (1.00 mg，2.41 mmol)及三氟乙醇(10.4 mL，0.17 M)，且密封，隨後在微波中加熱至180℃持續30分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。濃縮反應混合物，且殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至1:10 MeOH/EtOAc)純化，得到呈黃色油狀物之中間物 7 (564 mg，78%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.40 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.79 - 7.73 (m, 1H), 7.58 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 5.26 - 5.01 (m, 2H), 4.89 - 4.71 (m, 1H), 3.25 - 3.08 (m, 3H), 2.96 - 2.85 (m, 1H).19 F NMR (376 MHz, CDCl3 ) δ -235.95 (s, 1F)。(C11 H10 BrFN4 )之LCMSm/z (APCI)為297.0 (M+H)+ 。立體化學基於步驟1中使用之(5R )-5-(溴甲基)吡咯啶-2-酮來指定。
中間物 8 ：甲基({6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}甲基)胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image124
步驟1：({3-甲醯基-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-2-基}甲基)甲基胺基甲酸三級丁酯(8a )
Figure 02_image126
2-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛(4b ) (600 mg，1.79 mmol)及PdCl2 (dppf) (261 mg，0.357 mmol)於1,4-二㗁烷(25.0 mL)中之溶液經N2 鼓泡5分鐘且接著加熱至80℃。在80℃下添加{[(三級丁氧基羰基)(甲基)胺基]甲基}(氯)鋅* (0.158 M於THF中，39.6 mL)之溶液且在相同溫度下再攪拌混合物35分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將混合物冷卻至30℃且經由Celite® 過濾。用DCM (5×10 mL)洗滌濾餅且濾液濃縮至乾燥。將殘餘物與自平行反應運行獲得之粗物質以相同方式與100 mg之2-氯-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛組合。混合物藉由急驟層析(SiO2 ，1:1 EtOAc/石油醚)純化，得到呈黃色膠狀物之標題化合物(8a ) (900 mg，97%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.84 (s, 1H), 6.40 - 6.06 (m, 1H), 4.91 - 4.45 (m, 2H), 4.52 - 3.92 (m, 1H), 3.69 - 3.47 (m, 3H), 3.21 - 3.00 (m, 2H), 2.98 - 2.84 (m, 3H), 2.22 - 1.82 (m, 3H), 1.83 - 1.66 (m, 1H), 1.59 (s, 4H), 1.41 (s, 7H), 1.19 (d,J = 18.2 Hz, 8H)。(C24 H36 N4 O4 )之m/z (ESI+)為445.4 (M+H)+ 。 *如Angew. Chem. Int. Ed .2014 , 53, 2678中所製備。
步驟2：甲基{[3-{(E )-[(2-甲基丙烷-2-亞磺醯基)亞胺基]甲基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-2-基]甲基}胺基甲酸三級丁酯(8b )
Figure 02_image128
在50℃下攪拌({3-甲醯基-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-2-基}甲基)甲基胺基甲酸三級丁酯(8a) (1.40 g，3.15 mmol)、Ti(OEt)4 (1.44 g，6.30 mmol)及(S )-(−)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(573 mg，4.72 mmol)於THF (50.0 mL)中之混合物18小時。再分批添加Ti(OEt)4 (359 mg，1.57 mmol)及(S )-(−)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(115 mg，0.945 mmol)且在50℃下再攪拌混合物20小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。用Na2 CO3 飽和溶液(150 mL)淬滅反應物且添加DCM (100 mL)。混合物經由Celite®過濾且分離各層。用DCM (100 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體之標題化合物(8b ) (1.7 g，＞99%產率)。(C28 H45 N5 O4 S)之m/z (ESI+)為548.5 (M+H)+ 。
步驟5：中間物 8
在0℃下向甲基{[3-{(E )-[(2-甲基丙烷-2-亞磺醯基)亞胺基]甲基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-2-基]甲基}胺基甲酸三級丁酯(8b ) (1.72 g，3.41 mmol)於THF (20.0 mL)中之溶液中添加LiBH4 (68.6 mg，3.15 mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時。TLC分析顯示起始物質耗盡。使混合物升溫至室溫且添加NaOMe (30%之MeOH溶液，6.24 g，34.6 mmol)之溶液。攪拌混合物16小時。LCMS分析顯示形成所需產物物質。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於EtOAc (40 mL)中且用H2 O (40 mL)洗滌。用EtOAc (30 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水(60 mL)洗滌且經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，EtOAc)純化，得到呈白色固體之中間物 8 (750 mg，66%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.04 - 6.79 (m, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.56 - 4.43 (m, 2H), 4.43 - 4.33 (m, 2H), 4.27 - 4.16 (m, 1H), 3.58 (ddd,J = 2.5, 7.3, 10.0 Hz, 1H), 3.45 - 3.30 (m, 1H), 3.01 - 2.91 (m, 3H), 2.17 - 1.96 (m, 3H), 1.80 - 1.72 (m, 1H), 1.53 - 1.37 (m, 9H), 1.26 - 1.23 (m, 3H)；(C19 H28 N4 O3 )之m/z (ESI+)為361.2 (M+H)+ 。
立體化學係基於在合成中間物 4 之步驟1中使用(2R )-2-甲基吡咯啶來指定。
中間物 9 ：甲基({6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}甲基)胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image130
步驟1：2-氯-N ,N -二甲基-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]吡啶-4-甲醯胺(9a )
Figure 02_image132
將2,6-二氯-N ,N -二甲基吡啶-4-甲醯胺(30.0 g，137 mmol)及N -甲基丙烷-2-胺(50.1 g，685 mmol)於MeCN (120 mL)中之混合物分配於三個密封反應容器中且各自在100℃下攪拌60小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。合併反應混合物且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，1:1 EtOAc/石油醚)純化，得到呈黃色固體之標題化合物(9a ) (30.5 g，87%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 6.45 (d,J = 0.9 Hz, 1H), 6.31 (d,J = 1.0 Hz, 1H), 4.82 (p,J = 6.8 Hz, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 1.16 (d,J = 6.7 Hz, 6H)；(C12 H18 ClN3 O)之m/z (ESI+)為255.9 (M+H)+ 。
步驟2：2-氯-3-甲醯基-N ,N -二甲基-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]吡啶-4-甲醯胺(9b )
Figure 02_image134
在5至15℃下向DMF(21.9 g，299 mmol)於DCE(120 mL)中之溶液中逐滴添加POCl3 (45.9 g，299 mmol)。在室溫下攪拌混合物15分鐘且添加2-氯-N ,N -二甲基-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]吡啶-4-甲醯胺(9a ) (25.5 g，99.7 mmol)。在65℃下攪拌混合物16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物冷卻至室溫且逐滴添加至Na2 CO3 飽和水溶液(900 mL)中。用DCM (2×300 mL)萃取混合物。合併之有機層用鹽水洗滌(5×500 mL)且經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，1:1 EtOAc/石油醚)純化，得到呈棕色固體之標題化合物(9b ) (23.7 g，84%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 10.19 (s, 1H), 6.25 (br. s, 1H), 3.12 (s, 3H), 3.02 - 2.85 (m, 3H), 2.77 (s, 3H), 1.22 (br. d,J = 6.5 Hz, 6H)；(C13 H18 ClN3 O2 )之m/z (ESI+)為283.9 (M+H)+ 。
步驟3：2-氯-N ,N -二甲基-3-{(E )-[(2-甲基丙烷-2-亞磺醯基)亞胺基]甲基}-6-[甲基(丙基-2-基)胺基]吡啶-4-甲醯胺(9c )
Figure 02_image136
在50℃下攪拌2-氯-3-甲醯基-N ,N -二甲基-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]吡啶-4-甲醯胺(9b ) (23.7 g，83.5 mmol)、(R )-(+)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(12.1 g，100 mmol)及Ti(OEt)4 (38.1 g，167 mmol)於THF(250 mL)中之混合物20小時。LMCS分析顯示起始物質之耗盡。將反應物濃縮至乾燥。殘餘物用NaHCO3 飽和溶液(300 mL)攪拌30分鐘。過濾該混合物。用H2 O (3×80 mL)及石油醚(3×50 mL)沖洗濾餅且在真空下乾燥，得到呈黃色固體之標題化合物(9c ) (32.3 g，99%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.07 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 5.36 - 5.10 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 1.54 (d,J = 6.7 Hz, 6H), 1.49 (s, 9H)；(C17 H27 ClN4 O2 S)之m/z (ESI+)為387.2 (M+H)+ 。
步驟4：4-氯-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(9d )
Figure 02_image138
將2-氯-N ,N -二甲基-3-{(E )-[(2-甲基丙烷-2-亞磺醯基)亞胺基]甲基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]吡啶-4-甲醯胺(9c ) (32.3 g，83.5 mmol)於THF(200 mL)中之溶液冷卻至0℃且添加LiBH4 (1.82 g，83.5 mmol)。在室溫下攪拌混合物1小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。添加NaOMe(165 g，919 mmol)且在室溫下攪拌混合物16小時。過濾反應混合物且用EtOAc (3×200 mL)洗滌濾餅。將合併之濾液濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於DCM (300 mL)中且用H2 O (500 mL)洗滌。用DCM (2×300 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水(500 mL)洗滌且經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。在DCM(50 mL)及石油醚(120 mL)之混合物中漿化固體30分鐘。藉由過濾收集固體。在真空下乾燥濾餅，得到呈灰白色固體之標題化合物(9d ) (11.3 g，56%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.19 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.82 (p,J = 6.7 Hz, 1H), 4.35 (d,J = 1.2 Hz, 2H), 2.88 (s, 3H), 1.18 (d,J = 6.7 Hz, 6H)；(C11 H14 ClN3 O)之m/z (ESI+)為239.9 (M+H)+ 。
步驟5：6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲酸甲酯(9e )
Figure 02_image140
在80℃下在50 psi之CO氛圍下攪拌4-氯-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(9d) (11.3 g，47.1 mmol)、PdCl2 (dppf)(2.16 g，2.95 mmol)及TEA (14.3 g，141 mmol)於MeOH(200 mL)中之混合物40小時。TLC分析(1:1 EtOAc/石油醚)顯示起始物質耗盡。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於H2 O (200 mL)中且用DCM (2×150 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌且經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。用DCM (50 mL)漿化殘餘物30分鐘且藉由過濾收集固體。濾餅用石油醚(3×5 mL)洗滌且真空乾燥。濾液藉由急驟層析(SiO2 ，40%至70% EtOAc/DCM)純化。將含產物之溶離份濃縮至乾燥且與以上濾餅合併，得到呈黃色固體之標題化合物(9e ) (12.3 g，99%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.12 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.89 (p,J = 6.6 Hz, 1H), 4.68 (d,J = 1.1 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 1.21 (d,J = 6.7 Hz, 6H)；(C13 H17 N3 O3 )之m/z (ESI+)為263.9 (M+H)+ 。
步驟6：4-(羥基甲基)-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(9f )
Figure 02_image142
在0℃下向6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲酸甲酯(9e ) (1.0 g，3.80 mmol)於THF(60 mL)中之混合物中逐滴添加LiAlH4 (2.5 M於THF中，1.67 mL，4.18 mmol)之溶液。在0℃下攪拌混合物1小時且接著在20℃下攪拌16小時。TLC分析(1:1 EtOAc/石油醚)展示起始物質耗盡。藉由添加20% NaOH水溶液(0.5 mL)淬滅混合物。向混合物中添加Na2 SO4 (4 g)。攪拌混合物30分鐘且接著過濾。將濾液濃縮至乾燥，得到呈黃色固體之標題化合物(9f ) (890 mg，99%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.04 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.85 (p,J = 6.6 Hz, 1H), 4.67 (d,J = 4.7 Hz, 2H), 4.33 (s, 2H), 4.09 (t,J = 4.6 Hz, 1H), 2.92 (s, 3H), 1.20 (d,J = 6.7 Hz, 6H)；(C12 H17 N3 O2 )之m/z (ESI+)為236.0 (M+H)+ 。
步驟7：{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}甲基甲磺酸鹽(9g )
Figure 02_image144
在0℃下在N2 氛圍下向4-(羥基甲基)-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(9f ) (890 mg，3.78 mmol)及TEA(957 mg，9.46 mmol)於THF (20.0 mL)中之混合物中逐滴添加MsCl (953 mg，8.23 mmol)。在0℃下攪拌混合物。LCMS分析顯示起始物質耗盡。用Na2 CO3 飽和水溶液(30 mL)稀釋反應物且用EtOAc (2×20 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體之標題化合物(9g ) (1.2 g，99%產率)，其不經進一步純化即使用。(C13 H19 N3 O4 S)之m/z (ESI+)為314.0 (M+H)+ 。
步驟8：4-[(甲基胺基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(9h )
Figure 02_image146
向{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}甲基甲磺酸鹽(9g ) (1.18 g，3.78 mmol)於THF(20.0 mL)中之混合物中添加甲胺(2.0 M於THF中，37.8 mL，75.6 mmol)溶液。攪拌混合物1小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將混合物濃縮至乾燥，得到呈棕色固體之標題化合物(9h ) (940 mg，99%產率)，其不經進一步純化即使用。(C13 H20 N4 O)之m/z (ESI+)為249.0 (M+H)+ 。
步驟9：中間物 9
向4-[(甲基胺基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(9h ) (940 mg，11.4 mmol)及TEA (1.15 g，11.4 mmol)於DCM (20.0 mL)中之溶液中添加Boc2 O (1.65 mg，7.57 mmol)。攪拌混合物30分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，EtOAc)純化，得到呈黃色固體之中間物 9 (600 mg，46%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 6.81 (s, 1H), 6.57 - 6.42 (m, 1H), 4.91 (p,J = 6.6 Hz, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.35 (d,J = 12.4 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 1.48 (s, 5H), 1.41 (s, 4H), 1.17 (d,J = 6.7 Hz, 6H)；(C18 H28 N4 O3 )之m/z (ESI+)為349.2 (M+H)+ 。
中間物 10 ：(S,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image148
步驟1：6-[甲基(丙基-2-基)胺基]-1-側氧基2,3-二氫-1-吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲腈
Figure 02_image150
在微波中將4-氯-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(9d ) (706 mg，2.95 mmol)、Zn(CN)2 (519 mg，4.42 mmol)、DMF (10 mL)及Pd(PPh3 )4 (170 mg，0.147 mmol)之混合物加熱至140℃持續30分鐘。反應物用DCM稀釋且過濾。用DCM洗滌濾餅。真空濃縮濾液，以得到呈黃色固體之標題化合物(10a ) (544 mg，80%產率)，其無需進一步純化即使用。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) 9.01 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.80 (td,J = 6.7, 13.4 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H), 2.89 (s, 3H), 1.15 (d,J = 6.7 Hz, 6H)；(C12 H14 N4 O)之m/z (APCI+)為231.2 (M+H)+ 。
步驟2：6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-4-丙醯基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(10b )
Figure 02_image152
將6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲腈(10a ) (511 mg，2.22 mmol)於THF (20.0 mL)中之懸浮液冷卻至0℃，且接著用溴化乙基鎂溶液(3.0 M於Et2 O中，7.40 mL，22.2 mmol)處理。在室溫下攪拌混合物1小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物冷卻至0℃且藉由添加飽和NH4 Cl (60 mL)淬滅，接著用DCM(2×80 mL)萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(24 g SiO2 ，0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色泡沫狀之標題化合物(10b ) (125 mg，22%產率)。(C14 H19 N3 O2 )之m/z (APCI+)為262.2 (M+H)+ 。
步驟3：中間物 10
向6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-4-丙醯基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(10b ) (124 mg，0.475 mmol)於THF (6.0 mL)中之溶液中添加(S )-(−)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(92 mg，0.759 mmol)及Ti(OEt)4 (433 mg，1.90 mmol)。在回流下攪拌混合物42小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。使混合物冷卻至-78℃且接著用三二級丁基硼氫化鋰(1.0 M於THF中，1.9 mL，1.90 mmol)溶液逐滴處理。在-78℃下攪拌混合物4小時。混合物用MeOH淬滅，用鹽水(30 mL)稀釋，且用DCM (20×2 mL)萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(12 g SiO2 ，0至10% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色固體之中間物 10 (72 mg，41%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.67 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.25 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 4.94 (quin,J = 6.7 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.21 (q,J = 6.7 Hz, 1H), 2.84 (s, 3H), 1.98 - 1.80 (m, 2H), 1.13 (dd,J = 3.6, 6.7 Hz, 6H), 1.06 (s, 9H), 0.83 (t,J = 7.3 Hz, 3H)。(C18 H30 N4 O2 S)之m/z (APCI+)為367.2 (M+H)+ 。立體化學係基於步驟2中使用之(S )-(−)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺來指定。
中間物 11 ：{[6-(二甲基胺基)-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基]甲基}甲基胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image154
步驟1：2-氯-6-(二甲基胺基)-N ,N -二甲基吡啶-4-甲醯胺(11a )
Figure 02_image156
在0至10℃下在N2 氛圍下向裝有2,6-二氯吡啶-4-甲酸甲酯(58.0 g，281 mmol)之3.0 L圓底燒瓶中添加N ,N -二甲胺(38.1 g，845 mmol)。添加THF (200 mL)。經3小時添加i-PrMgCl之溶液(2.0 M之THF溶液，352 mL，704 mmol)，使反應溫度維持在0至10℃下。在0℃下再攪拌反應物10分鐘，且隨後在25℃下攪拌18小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。反應物在冰浴中冷卻且藉由添加冷NH4 Cl飽和水溶液(500 mL)淬滅，維持反應溫度＜ 20℃。添加EtOAc (500 mL)且分離各層。用EtOAc (500 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水洗滌且經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將所得油狀物溶解於庚烷(200 mL)中且經旋轉蒸發器濃縮直至固體形成。攪拌懸浮液0.5小時且藉由過濾收集固體。用己烷(3×50 mL)洗滌濾餅。將濾餅於1:20之EtOAc/石油醚(100 mL)中漿化且藉由過濾收集固體。濾餅用1:20 EtOAc/石油醚(3×30 mL)洗滌且接著在真空下乾燥，得到呈淺黃色固體之標題化合物(11a ) (51 g，80%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 6.49 (d,J = 0.7 Hz, 1H), 6.35 (d,J = 0.9 Hz, 1H), 3.13 - 3.09 (m, 9H), 2.98 (s, 3H)；(C10 H14 ClN3 O)之m/z (ESI+)為227.9 (M+H)+ 。
步驟2：2-氯-6-(二甲基胺基)-3-甲醯基-N ,N -二甲基吡啶-4-甲醯胺(11b )
Figure 02_image158
兩組反應平行運行。在15至25℃下，在攪拌下，向含有DMF (250 mL)之圓底燒瓶中添加POCl3 (85.9 g，560 mmol)。在15至25℃下攪拌混合物15分鐘且接著添加2-氯-6-(二甲基胺基)-N ,N -二甲基吡啶-4-甲醯胺(11a ) (25.5 g，112 mmol)。在50℃下攪拌混合物16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將兩種反應物合併，且接著藉由緩慢傾倒於冷Na2 CO3 飽和水溶液中淬滅，維持pH值約9。用EtOAc (4×1.0 L)萃取混合物。合併之有機物用鹽水(5×600 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物與兩個額外反應運行以相同方式與7.5 g及5.0 g之2-氯-6-(二甲基胺基)-N ,N -二甲基吡啶-4-甲醯胺組合。將物質溶解於EtOAc (200 mL)中且漿化20分鐘。過濾懸浮液。用EtOAc (2×50 mL)洗滌濾餅。在1:1之石油醚/EtOAc(80 mL)中將濾餅漿化20分鐘。過濾懸浮液且用1:1之石油醚/EtOAc (60 mL)洗滌濾餅。將濾餅真空乾燥。將合併之濾液濃縮至乾燥。殘餘物用1:1之石油醚/EtOAc (100 mL)漿化30分鐘。過濾懸浮液且濾餅用1:1之石油醚/EtOAc (2×50 mL)洗滌且真空乾燥。合併之乾燥固體於石油醚(200 mL)中漿化10分鐘且藉由過濾收集固體。濾餅用石油醚(100 mL)洗滌且真空濃縮。合併之濾液真空濃縮至約50 mL且接著靜置2天。藉由過濾收集所得固體且濾餅用3:2之石油醚/EtOAc (2×50 mL)洗滌。將固體合併為呈黃色固體之標題化合物(11b ) (52 g，經合併之反應組產率為73%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 10.21 (d,J = 0.6 Hz, 1H), 6.28 (d,J = 0.6 Hz, 1H), 3.19 (s, 6H), 3.13 (s, 3H), 2.77 (s, 3H)；(C11 H14 ClN3 O2 )之m/z (ESI+)為255.9 (M+H)+ 。
步驟3：{[6-(二甲基胺基)-4-(二甲基胺甲醯基)-3-甲醯基吡啶-2-基]甲基l}甲基胺基甲酸三級丁酯(11c )
Figure 02_image160
在N2 氛圍下使二甲基胺基甲酸三級丁酯(3.41 g，23.5 mmol)及N ,N ,N ,N -四亞甲基二胺(3.27 g，28.2 mmol)於135 mL THF中之混合物冷卻至-55℃。緩慢添加s-BuLi (1.4 M之環己烷溶液，20.1 mL，28.2 mmoL)之溶液，維持溶液溫度小於-52℃ (內部)。在-55℃下再攪拌混合物30分鐘，且接著用ZnCl2 之溶液(1.9 M之2-甲基四氫呋喃溶液，14.8 mL，28.2 mmol)處理，維持反應溫度小於-52℃。在-55℃下再攪拌溶液40分鐘且接著升溫至室溫以提供{[(三級丁氧基羰基)(甲基)胺基]甲基}(氯)鋅(c=0.195 M)之溶液。一部分預成型鋅酸酯溶液(90.2 mL，17.6 mmoL)在N2 氛圍下轉移至烘乾的250 mL圓底燒瓶中，且濃縮至乾燥，得到白色泡沫。燒瓶用N2 回填。向獨立燒瓶中裝入2-氯-6-(二甲基胺基)-3-甲醯基-N ,N -二甲基吡啶-4-甲醯胺(11b ) (3.0 g，10 mmol)、PdCl2 (dppf) (0.858 g，1.17 mmol)、1,4-二㗁烷(50 mL)及H2 O (0.159 g，8.8 mmol)。經由套管插入將懸浮液轉移至含有鋅酸鹽之燒瓶中，且接著在80℃下攪拌混合物80分鐘。LCMS顯示用一些剩餘起始物質形成產物物質。添加{[(三級丁氧基羰基)(甲基)胺基]甲基}(氯)鋅溶液(2.0 mL)之額外等分試樣且在80℃下攪拌混合物20分鐘。未觀測到額外轉化。使反應物冷卻至0℃且藉由添加NH4 Cl飽和水溶液(10 mL)及H2 O (20 mL)淬滅。在0℃下攪拌混合物20分鐘，且接著經由Celite® 襯墊過濾。用EtOAc萃取濾液(4次)。合併之有機物經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(80 g SiO2 ，0%至100%之EtOAc/庚烷純化。所得白色泡沫用MTBE濕磨且在真空下濃縮，得到呈淺黃色固體之標題化合物(11c ) (3.8 g，95%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.84 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.15 (s, 6H), 2.99 (s, 3H), 2.90 (s, 3H), 2.75 (s, 3H), 1.33 (d,J = 69.8 Hz, 9H)；(C18 H28 N4 O4 )之m/z (ESI+)為365.3 (M+H)+ 。
步驟4：{[6-(二甲基胺基)-4-(二甲基胺甲醯基)-3-{(E )-[(2-甲基丙烷-2-亞磺醯基)亞胺基]甲基}吡啶-2-基]甲基}甲基胺基甲酸三級丁酯(11d )
Figure 02_image162
向{[6-(二甲基胺基)-4-(二甲基胺甲醯基)-3-甲醯基吡啶-2-基]甲基l}甲基胺基甲酸三級丁酯(11c ) (3.0 g，8.0 mmol)及(R )-(+)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(1.2 g，9.88 mmol)於THF (40 mL)中之溶液中添加Ti(OEt)4 (5.63 g，24.7 mmol)。在50℃攪拌混合物隔夜。使反應物冷卻至室溫，用DCM (50 mL)稀釋，且藉由添加NaHCO3 飽和溶液(20 mL)淬滅。劇烈攪拌溶液20分鐘，且接著經由Celite® 襯墊過濾。用DCM洗滌Celite® (3次)。合併之濾液經Na2 SO4 乾燥，過濾，且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(80 g SiO2 ，0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈無色泡沫狀之標題化合物(11d ) (3.89 g，97%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.39 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 4.77 - 4.55 (m, 2H), 3.12 (s, 6H), 2.95 (s, 3H), 2.93 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 1.41 (s, 4H), 1.20 (s, 5H), 1.12 (s, 9H)；(C22 H37 N5 O4 S)之m/z (ESI+)為468.4 (M+H)+ 。
步驟5：中間物 11
在N2 氛圍下向裝入{[6-(二甲基胺基)-4-(二甲基胺甲醯基)-3-{(E )-[(2-甲基丙烷-2-亞磺醯基)亞胺基]甲基}吡啶-2-基]甲基}甲基胺基甲酸三級丁酯(11d ) (3.89，8.32 mmol)之圓底燒瓶中添加THF (42 mL)。使混合物冷卻至0℃且接著用LiBH4 之溶液(2.0 M THF溶液，4.37 mL，8.73 mmol)處理。在0℃下攪拌混合物1小時且接著添加NaOMe之溶液(25%之MeOH溶液，17.1 mL，74.9 mmol)。使反應物緩慢升溫至室溫且攪拌16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。混合物用EtOAc稀釋且用NH4 Cl飽和水溶液及鹽水洗滌。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(80 g SiO2 ，0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈無色泡沫狀之中間物 11 (1.7 g，64%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.68 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 3.06 (s, 6H), 2.86 (s, 3H), 1.36 (m, 9H)；(C16 H24 N4 O3 )之LCMSm/z (ESI+)為321.2 (M+H)+ 。
中間物 12 ：2-溴-6-(4-丙基-4H -1,2,4-三唑-3-基)吡啶
Figure 02_image164
在95℃下攪拌N' -[(6-溴吡啶-2-基)羰基]-N ,N -二甲基亞肼基甲醯胺(1b ) (29.0 g, 106.8 mmol)及丙烷-1-胺(31.6 g,534 mmoL)於MeCN(440 mL)及乙酸(110 mL)中之混合物16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於H2 O (50 mL)中且用1 N NaOH(約500 mL)鹼化至pH值約9。用EtOAc (3×150 mL)萃取混合物。合併之有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物用EtOAc (50 mL)漿化10分鐘且藉由過濾收集固體。用石油醚(2×50 mL)洗滌濾餅且真空乾燥，得到呈黃色固體狀之標題化合物(中間物 12 ) (21.0 g，74%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.74 (s, 1H), 8.20 (dd,J = 0.7, 7.8 Hz, 1H), 7.98 - 7.91 (m, 1H), 7.78 (dd,J = 0.7, 8.0 Hz, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 2H), 1.77 (sxt,J = 7.4 Hz, 2H), 0.87 (t,J = 7.4 Hz, 3H)；(C10 H11 BrN4 )之m/z (ESI+)為266.7 (M+H)+ 。
中間物13：(S,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image166
步驟1：4-乙醯基-6-(異丙基(甲基)胺基)-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure 02_image168
在0℃下將甲基溴化鎂(9.11 g，76.4 mmol，25.9 mL，3.0 M)添加至6-(異丙基(甲基)胺基)-1-側氧基-2,3-二氫-1-吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-甲腈(中間物 10a ) (1.76 g，7.64 mmol)於THF(70 mL，c=0.11 M)中之溶液中。在此溫度下攪拌混合物10分鐘且接著升溫至室溫且攪拌3小時。接著在室溫下用2 M HCl (7 mL)逐滴淬滅混合物且攪拌30分鐘。添加NaHCO3 飽和溶液(70 mL)以中和溶液且用DCM (3×100 mL)萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且真空濃縮。所得殘餘物藉由急驟層析(40 g SiO2 ，10至40% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色固體之標題化合物(13a ) (553 mg，29%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ  8.82 (s, 1H) 7.06 (s, 1H) 4.88 (br. d,J = 6.72 Hz, 1H) 4.49 (s, 2H) 2.94 (s, 3H) 2.61 (s, 3H) 1.19 (d,J = 6.60 Hz, 6H)；(C13 H17 N3 O2 )之m/z (APCI+)為248.2 (M+H)+ 。
步驟2：中間物 13
在90℃下在N2 下加熱加熱4-乙醯基-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(13a ) (8.10 g，32.75 mmol)、(S )-三級丁基亞磺醯胺(7.94 g，65.5 mmol)於Ti(OEt)4 (29.9 g，131 mmol)中之於THF (100 mL)中之混合物72小時，且藉由LCMS監測反應物。隨後將反應物冷卻至0℃且在0℃下逐滴添加三二級丁基硼氫化鋰(1 M於THF中，131 mmol，131 mL)。在0℃下攪拌混合物3小時。在0至5℃下用飽和NH4 Cl (200 mL)及鹽水(200 mL)淬滅混合物。經由Celite® 襯墊過濾懸浮液，且用DCM (500 mL)洗滌濾餅。分離濾液層且用DCM (2×100 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水(250 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，0至10% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色固體之中間物 13 (10 g，87%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 6.83 (br. s, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.89 - 4.76 (m, 1H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 3H), 2.83 (s, 3H), 1.55 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.19 - 1.07 (m, 15H)。(C17 H28 N4 O2 S)之m/z (APCI+)為353.2 (M+H)+ 。立體化學係基於步驟1中使用之(S )-三級丁基亞磺醯胺來指定。
中間物 14 ：(S ,R )-2-甲基-N -[(1S )-1-{6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image170
在N2 下，在100℃下4-乙醯基-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(4f ) (4000 mg，15.43 mmol)、(R )-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(2240 mg，18.5 mmol)於Ti(OEt)4 (20 mL)中之混合物20小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將黃色溶液冷卻至0℃且用THF(50 mL)稀釋。在0℃下逐滴添加三二級丁基硼氫化鋰(38.6 mmol，38.6 mL，1M於THF中)。接著在10℃下攪拌混合物20小時。LCMS顯示起始物質剩餘。在0℃下再逐滴添加三二級丁基硼氫化鋰(38.6 mmol，38.6 mL 1M於THF中)且在10℃下再攪拌混合物2小時。TLC分析展示起始物質耗盡。在0至5℃下用NH4 Cl飽和水溶液(200 mL)淬滅混合物。經由Celite® 襯墊過濾懸浮液，且用EtOAc (2×50 mL)洗滌濾餅。分離濾液層且用EtOAc (2×20 mL)萃取水層。用鹽水(30 mL)洗滌合併之有機層，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。殘餘物首先藉由急驟層析(SiO2 ，EtOAc/MeOH=10:1)純化且隨後藉由製備型HPLC (ACSSH-CA；方法管柱：YMC Triart C18 250×50 mm×7 µm列；水(0.05%氫氧化銨v/v)-ACN，得到呈灰白色固體之中間物 14 (2.5 g，44%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 6.70 (s, 1H), 6.47 (br. s, 1H), 4.57 - 4.34 (m, 4H), 4.20 (br. t,J = 5.9 Hz, 1H), 3.64 - 3.53 (m, 1H), 3.47 - 3.35 (m, 1H), 2.20 - 1.99 (m, 3H), 1.77 (br. dd,J = 2.5, 4.7 Hz, 1H), 1.64 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 1.28 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 1.22 (s, 9H)。(C18 H28 N4 O2 S)之m/z (ESI)為365.1 (M+H)+ 。立體化學係基於使用(R )-三級丁基亞磺醯胺來指定。
中間物 15 ：{2-甲氧基-1-[6-(1-甲基環丙基)-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基]乙基}胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image172
步驟1：3-氰基-2-羥基-6-(1-甲基環丙基)吡啶-4-甲酸乙酯(15a )
Figure 02_image174
將2-氰基乙醯胺(10.0 g，119 mmol)及TEA (12.0 g，119 mmol)於EtOH (50 mL)中之混合物加熱至65℃(內部溫度)，直至固體溶解為止，且接著添加3-(1-甲基環丙基)-3-側氧基丙酸乙酯(24.6 g，124 mmol)。在65℃下攪拌混合物2小時。LCMS分析(1:10 EtOAc/石油醚)顯示起始物質耗盡。將反應物冷卻至10℃。藉由過濾收集所得沈澱。濾餅用MTBE (3×10 mL)洗滌且真空乾燥。將濾液濃縮至乾燥。添加EtOH (10 mL)且接著添加MTBE (30 mL)。藉由過濾收集所得固體。濾餅用EtOH (5 mL)及MTBE (2×10 mL)洗滌且真空乾燥。合併固體，得到呈黃色固體之標題化合物(15a ) (25.0 g，85%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.74 (br. s, 1H), 6.63 (br. s, 1H), 4.36 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 1.45 - 1.27 (m, 6H), 1.16 - 1.06 (m, 2H), 0.92 - 0.75 (m, 2H)。
步驟2：2-氯-3-氰基-6-(1-甲基環丙基)吡啶-4-甲酸乙酯(15b )
Figure 02_image176
在30℃下向3-氰基-2-羥基-6-(1-甲基環丙基)吡啶-4-甲酸乙酯(15a ) (24.0 g，97.5 mmol)於MeCN (487 mL)中之溶液中逐滴添加POCl3 (74.7 g，487 mmol)。在65℃下攪拌混合物60小時。TLC分析(EtOAc)顯示起始物質耗盡。將溶液濃縮以移除剩餘POCl3 。將殘餘物傾至冰上且用NaHCO3 飽和溶液鹼化至pH約8。用EtOAc (2×100 mL)萃取混合物。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(1:10 EtOAc/石油醚)純化，得到呈淡黃色固體之標題化合物(15b ) (21.9 g，85%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.79 (s, 1H), 4.50 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 1.55 (s, 3H), 1.50 - 1.40 (m, 5H), 1.03 (q,J = 3.9 Hz, 2H)；(C13 H13 ClN2 O2 )之m/z (ESI+)為264.9 (M+H)+ 。
步驟3：4-氯-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(15c )
Figure 02_image178
向2-氯-3-氰基-6-(1-甲基環丙基)吡啶-4-甲酸乙酯(15b ) (2.5 g，9.44 mmol)於EtOH (500 mL)中之溶液中添加阮尼鎳(Raney Ni) (2.0 g 34.1 mmol)。在30℃下在30 psi之H2 氛圍下攪拌黑色混合物48小時。TLC分析(1:10 EtOAc/石油醚)顯示起始物質耗盡。混合物經由Celite® 襯墊過濾。濾餅用MeOH (250 mL)洗滌。將合併之濾液濃縮至乾燥。殘餘物於EtOAc (5 mL)中漿化20分鐘且過濾懸浮液。濾餅用EtOAc (2 mL)洗滌，且在真空下乾燥，得到呈灰色固體之標題化合物(15c ) (1.1 g，52%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.66 (br. s, 1H), 7.23 - 7.05 (m, 1H), 4.56 - 4.34 (m, 2H), 1.55 (br. s, 3H), 1.39 - 1.11 (m, 2H), 0.99 - 0.66 (m, 2H)；(C11 H11 ClN2 O)之m/z (ESI+)為222.8 (M+H)+ 。
步驟4：中間物 15
向40 mL小瓶中裝入4-氯-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(15c ) (200 mg，0.898 mmol)、Cs2 CO3 (644 mg，1.98 mmol)、N -(三級丁氧基羰基)-O -甲基絲胺酸(394 mg，1.80 mmol)、NiCl2 ·乙二醇二甲醚(39.5 mg，0.18 mmol)、吡啶-2-基-N -氰基脒(26.3 mg，0.180 mmol)、雙[2-(2,4-二氟苯基)-5-甲基吡啶]-4,40-二-三級丁基-2,20-聯吡啶六氟磷酸銥(III)(18.2 mg，0.018 mmol)及無水DMF (27 mL)。混合物經N2 鼓氣2分鐘且在15至25℃下用365 nm光照射18小時(風扇速度5200 r/分鐘，攪拌速率1200 r/分鐘，100% LED)。將混合物濃縮且藉由急驟層析(SiO2 ，10至20% [0% MeOH/EtOAc]於石油醚中)純化，得到黃色固體。藉由製備型HPLC(管柱：YMC Triart C18 150×25 µm×5 µm，水(0.05%氫氧化銨v/v)-CAN)之純化，提供呈白色固體之中間物 15 (315 mg，32%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.65 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 5.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.94 (d,J = 6.3 Hz, 1H), 4.63 - 4.48 (m, 2H), 3.77 (dd,J = 8.9, 5.0 Hz, 1H), 3.58 - 3.44 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.45 (s, 9H), 1.30 (q,J = 3.6 Hz, 2H), 0.88 (q,J = 3.4 Hz, 2H)；(C19 H27 N3 O4 )之m/z (ESI+)為362.3 (M+H)+ 。實例：
本文中製備之實例具有基於使用具有確認立體化學之中間物(例如實例 1 及2 )或基於使用由立體特異性起始物質製備之中間物(例如實例 3 及4 )指定之立體化學。
實例 1 ：4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image180
步驟1：(S ,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-(2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image182
在40 mL小瓶(加蓋)在100℃(阻斷溫度)加熱(S ,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-{6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亞磺醯胺(中間物5) (63.0 mg，0.17 mmol)、(5S )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中間物2) (147 mg，0.528 mmol)、K3 PO4 (336 mg，1.59 mmol)、Pd2 (dba)3 (30.4 mg，0.0528 mmol)及XantPhos (61.1 mg，0.106 mmol)於1,4-二㗁烷(4.5 mL，c=0.1 M)中之混合物18小時。經由Celite® 過濾混合物，用DCM洗滌。真空濃縮濾液且藉由急驟層析(SiO2 ，0至10% MeOH/DCM)純化粗化合物，得到呈淺黃色泡沫狀之標題化合物(194 mg，64%產率)。(C29 H40 N8 O2 S)之m/z (APCI+)為577.3 (M+H)+ 。
步驟2：實例 1
將4 N HCl於1,4-二㗁烷(1.01 mmol，0.252 mL，4 M)中之溶液添加至(S ,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-(2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亞磺醯胺(194 mg，0.336 mmol)於MeOH (12 mL)中之懸浮液中。在室溫下攪拌所得混合物2小時。在減壓下移除揮發物。粗產物藉由對掌性SFC(Phenomenex Lux Cellulose-1 4.6×100mm 3 µm管柱，含30% MeOH+10 mM NH3 之CO2 ，在120巴下，4 mL/分鐘)純化，得到呈淡黃色固體之實例 1 (146 mg，92%產率，＞99% de)。1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.48 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.01 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.91 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.22 - 5.03 (m, 3H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 3.60 - 3.50 (m, 1H), 3.41 - 3.32 (m, 1H), 3.06 - 2.98 (m, 1H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.88 - 2.76 (m, 1H), 2.37 - 2.27 (m, 1H), 2.09 - 1.86 (m, 5H), 1.69 - 1.62 (m, 1H), 1.44 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.15 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.86 (t,J = 7.4 Hz, 3H)；(C26 H32 N8 O)之m/z (APCI+)為473.2 (M+H)+ ；[α]D22 = +37.0° (c=0.1 M，MeOH)。
表4提供確認實例 1 之立體化學的單晶X射線繞射資料。在裝備有Cu Kα 輻射(λ=1.54178 Å)之Bruker Microstar APEX II CCD繞射儀上執行單晶X射線繞射研究。實例 1 之晶體自乙腈/戊烷生長。將0.25×0.2×0.15 mm片無色晶體安裝於具有帕拉頓油之冷凍環上。使用Φ及ω掃描在100(2)K下在氮氣流中收集資料。取決於使用1.00°之掃描寬度之每訊框之2θ範圍，結晶偵測器距離為40 mm且暴露時間為2或10秒。99.4%完成對θ之67.679°的資料收集。將資料使用Bruker SAINT軟體程式整合且使用SADABS軟體程式縮放。藉由直接方法(SHELXS)之溶液產生與所提出結構完全相符的定相模型。藉由全矩陣最小平方(SHELXL-2014)各向異性地改進所有非氫原子。使用騎乘模型置放所有碳結合氫原子。使用SHELXL-2014中之適當HFIX命令相對於其母原子限定其位置。 表4 經驗式：                            C31 H45 N8 O2 分子量                               561.75 溫度                                  100.0 K 波長                                  1.54178 Å 晶體系統                            斜方晶 空間群                               P21 21 21 單位晶胞尺寸：                  a = 6.7104(13) Å       α= 90°。 b = 15.482(3) Å         β= 90°。 c = 30.288(6) Å         γ = 90°。 體積                                  3146.6(11) Å3 Z                                      4 密度(計算值)                      1.186 Mg/m3 吸收係數                            0.611 mm-1 F(000)                               1212 晶體大小                            0.25×0.2×0.15 mm3 資料收集之θ範圍                 2.918至68.067°。 指數範圍                            -7＜=h＜=7、-18＜=k＜=18、-36＜=l＜=36 收集之反射                         27016 獨立反射                            5698 [R(int) = 0.0296] 相對於θ=67.679°之完整性    99.4 % 吸收校正                            來自等效物之半實驗校正 最大及最小傳輸                  0.5201及0.4162 改進方法                            針對F2 之全矩陣最小平方 資料/限定/參數                   5698 / 1 / 389 F2 上擬合優度                     1.067 最終R指數[I ＞ 2 δ (I)]         R1 = 0.0726，wR2 = 0.2035 R指數(所有資料)                 R1 = 0.0768，wR2 = 0.2088 絕對結構參數                     -0.10(10) 最大繞射峰及谷                  0.630及-0.318 e.Å-3
實例 2 ：4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image184
步驟1：(S,S )-N -[(1R )-1-(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image186
在N2 下，向(S,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-{6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺(中間物 4 ) (50 mg，0.14 mmol)、(5S )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑(中間物3) (42.2 mg，0.144 mmol)及K3 PO4 (87.4 mg，0.412 mmol)於1,4-二㗁烷(3 mL)中之混合物中添加Pd2 (dba)3 (12.6 mg，0.014 mmol)及XantPhos (15.9 mg，0.027 mmol)。在添加之後，混合物經N2 鼓泡2分鐘。將所得混合物密封且在85℃下攪拌18小時。真空濃縮反應混合物，且殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，10% EtOAc/MeOH)純化，得到呈黃色固體之標題化合物(60 mg，76%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.70 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 8.18 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.93 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.11 - 5.02 (m, 2H), 4.99 - 4.93 (m, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 2H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 3.67 - 3.57 (m, 1H), 3.46 - 3.35 (m, 1H), 3.11 - 3.01 (m, 3H), 2.65 (td,J = 3.7, 7.9 Hz, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 3H), 2.07 (s, 1H), 1.86 - 1.79 (m, 1H), 1.79 (br. d,J = 2.3 Hz, 1H), 1.69 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.31 - 1.28 (m, 3H), 1.22 (s, 9H), 1.02 (t,J = 7.5 Hz, 3H)；(C30 H40 N8 O2 S)之m/z (ESI+)為577.5 (M+H)+ ；[α] D22 = +85.3° (c=0.1 M, MeOH)。
步驟2：實例 2
在0℃下，向(S,S )-N -[(1R )-1-(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(60 mg, 0.10 mmol)於EtOAc (5 mL)中之溶液中逐滴添加於EtOAc (3 mL)中之4 M HCl。在20℃下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮反應混合物。向殘餘物中添加EtOAc(10 mL)及水(10 mL)。水層用飽和NaHCO3 鹼化且用DCM (10 mL×3)萃取。用鹽水(20 mL)洗滌合併之有機層，經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮。凍乾殘餘物16小時，得到呈淺黃色固體之實例 2 (47 mg，95%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.59 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.09 - 8.02 (m, 1H), 8.02 - 7.97 (m, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.33 (d,J = 17.1 Hz, 1H), 5.10 (d,J = 17.1 Hz, 1H), 4.99 (br. t,J = 6.1 Hz, 1H), 4.29 - 4.19 (m, 1H), 4.12 (q,J = 6.9 Hz, 1H), 3.55 (br. t,J = 8.0 Hz, 1H), 3.04 - 2.85 (m, 3H), 2.58 - 2.55 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 4H), 1.79 - 1.66 (m, 2H), 1.36 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 1.24 - 1.20 (m, 3H), 0.93 (t,J = 7.4 Hz, 3H)；(C26 H32 N8 O)之m/z (ESI+)為473.4 (M+H)+ 。
實例 3 ：4-[(1S )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image188
步驟1：(S,R )-N -[(1S )-1-(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image190
在N2 下向(S,R )-2-甲基-N -[(1S )-1-{6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺(中間物 14 ) (2000 mg，5.487 mmol)、(5S )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑(中間物 3 ) (1610 mg，5.49 mmol)及K3 PO4 (3490 mg，16.5 mmol)於1,4-二㗁烷(30 mL)中之懸浮液中添加Pd2 (dba)3 (502 mg，0.549 mmol)及XantPhos (635 mg，1.10 mmol)。在添加之後，混合物用氬氣鼓泡2分鐘。將所得混合物密封且在85℃下攪拌18小時。TLC分析顯示起始物質耗盡。在攪拌下用H2 O (100 mL)稀釋混合物且過濾所得懸浮液。分離水性濾液。用DCM (100 mL)洗滌固體。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到黃色殘餘物(3 g)，藉由急驟層析(SiO2 ，0至10% MeOH/EtOAc)純化，得到黃色固體。將固體溶解於DCM(50 mL)中且添加矽-SH(4 g)。使黃色混合物回流20分鐘。過濾混合物，且用DCM/MeOH (10:1)洗滌濾餅。濃縮濾液。再重複用矽-SH處理三次，得到呈黃色固體之標題化合物(2.3 g，72.7%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.71 (dd,J = 0.7, 8.4 Hz, 1H), 8.18 (dd,J = 0.7, 7.6 Hz, 1H), 7.97 - 7.87 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.19 - 5.11 (m, 1H), 5.03 - 4.94 (m, 2H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.57 - 4.51 (m, 1H), 4.24 (br t,J = 6.1 Hz, 1H), 3.66 - 3.56 (m, 1H), 3.48 - 3.39 (m, 1H), 3.13 - 2.98 (m, 3H), 2.71 - 2.59 (m, 1H), 2.21 - 2.03 (m, 4H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.68 (d,J = 6.5 Hz, 4H), 1.30 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 1.24 (s, 9H), 1.02 (t,J = 7.5 Hz, 3H)。(C30 H40 N8 O2 S)之m/z (ESI)為577.5 (M+H)+ 。
步驟2：實例 3
在0℃下向(S,R )-N -[(1S )-1-(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(2300 mg，3.988 mmol)於EtOAc (10 mL)中之溶液中添加於EtOAc (20 mL)中之4M HCl。在添加之後，在15℃下攪拌混合物1小時。藉由LCMS監測反應。濃縮所得黃色懸浮液，得到殘餘物，將其溶解於H2 O (30 mL)中且用EtOAc (25 mL)萃取。用飽和NaHCO3 溶液將水層鹼化至pH約8，且用DCM (3×35 mL)萃取水層。用鹽水(20 mL)洗滌合併之有機層，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到固體，向其中添加DCM (50 mL)。溶液經由玻璃微纖維過濾器GF/F (~0.7 µm)過濾四次。濃縮濾液，得到黃色固體，藉由製備型HPLC(管柱：Agela DuraShell C18 150×40 mm×5 µm，水(0.05%氫氧化銨v/v)-CAN，梯度時間12分鐘，流動速率25 mL/分鐘)。此提供呈黃色固體之實例 3 (1.5 g，79.6%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.55 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.90 (m, 2H), 6.51 (s, 1H), 5.26 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.92 (m, 2H), 4.23 (br. t,J = 5.8 Hz, 1H), 4.09 (q,J = 6.5 Hz, 1H), 3.53 (br. t,J = 7.5 Hz, 1H), 3.30 - 3.23 (m, 1H), 3.07 - 2.83 (m, 3H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.16 - 1.85 (m, 6H), 1.77 - 1.64 (m, 2H), 1.33 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 1.21 (d,J = 6.0 Hz, 3H), 0.93 (t,J = 7.3 Hz, 3H)。(C26 H32 N8 O)之m/z (ESI)為473.4 (M+H)+ 。
實例 4 ：4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image192
步驟1：(S,S )-N -[(1R )-1-(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image194
在具有冷凝器之100 mL燒瓶中，在N2 下在100℃下加熱(S,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺(中間物 13) (627 mg，1.78 mmol)、(5S )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑(中間物 3 ) (521 mg，1.78 mmol)、K3 PO4 (1.13 g，5.34 mmol)、Pd2 (dba)3 (102 mg，0.178 mmol)及XantPhos (206 mg，0.356 mmol)於1,4-二㗁烷(17.8 mL，c=0.1 M)中之溶液18小時。將混合物冷卻至室溫，過濾且用DCM (20 mL)洗滌。在減壓下濃縮濾液。殘餘物藉由急驟層析(24 g，SiO2 ，0至10% MeOH/DCM)純化，得到呈乳黃色固體之標題化合物(808 mg，80%)。(C29 H40 N8 O2 S)之m/z (APCI+)為565.3 (M+H)+ 。
步驟2：實例 4
將HCl於1,4-二㗁烷(1.07 mL，4.29 mmol)中之4 N溶液添加至(S,S )-N -[(1R )-1-(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(808 mg，1.43 mmol)於MeOH (14.3 mL，c=0.1 M)中之溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。在減壓下移除揮發性物質。粗產物藉由對掌性SFC (Phenomenex Lux Cellulose-1 21×250 mm管柱，含30% MeOH+10 mM NH3 之CO2 保持在120巴，100 mL/分鐘下)純化，得到呈淡黃色固體之實例 4 (345 mg，52%產率，＞99% de，＞99%純)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.56 (dd,J = 1.0, 8.1 Hz, 1H), 8.07 - 8.01 (m, 1H), 8.00 - 7.93 (m, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.34 - 5.28 (m, 1H), 5.17 - 5.10 (m, 1H), 5.02 - 4.95 (m, 1H), 4.89 (td,J = 6.7, 13.4 Hz, 1H), 4.18 (q,J = 6.7 Hz, 1H), 3.01 - 2.94 (m, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.62 - 2.54 (m, 2H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.84 - 1.72 (m, 1H), 1.41 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.20 (d,J = 6.6 Hz, 6H), 0.92 (t,J = 7.5 Hz, 3H)；(C25 H32 N8 O)之m/z (APCI+)為461.3 (M+H)+ 。[α]D22 = +120.5° (c=0.1 M，MeOH)。
實例 5 ：4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{3-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image196
步驟1：(S,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-(2-{3-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亞磺醯胺
Figure 02_image198
在40 mL小瓶(加蓋)中，在100℃加熱(S,S )-2-甲基-N -(1-{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}丙基)丙烷-2-亞磺醯胺(中間物 10 ) (63 mg，0.17 mmol)、(5S )-3-(3-溴苯基)-5-甲基l-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑(中間物 2 ) (48 mg，0.172 mmol)、K3 PO4 (109 mg，0.516 mmol)、Pd2 (dba)3 (9.88 mg，0.0172 mmol)及XantPhos (19.9 mg，0.0344 mmol)於1,4-二㗁烷(4.5 mL，c=0.1 M)中之混合物18小時。在減壓下移除揮發物。殘餘物藉由急驟層析(12 g，SiO2 ，0至10% MeOH/DCM)純化，得到呈乳黃色泡沫狀之標題化合物(74.0 mg，76%)。(C29 H40 N8 O2 S)之m/z (APCI+)為565.3 (M+H)+ 。
步驟2：實例 5
將HCl於1,4-二㗁烷(0.164 mL，0.655 mmol)中之4 N溶液添加至(S,S )-2-甲基-N -[(1R )-1-(2-{3-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亞磺醯胺(74 mg，0.13 mmol)於MeOH (5.0 mL，c=0.026 M)中之溶液。在室溫下攪拌混合物2小時。在減壓下移除揮發物。粗產物藉由對掌性SFC(Phenomenex Lux Cellulose-1 4.6×100mm 3 µm管柱，含5至60% MeOH+10 mM NH3 之CO2 經3.0分鐘緩慢升溫，在120巴下，4 mL/分鐘)純化，得到呈淡黃色固體之實例 5 (11.6 mg，19%產率，＞99% de，＞95%純)。1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.54 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.35 (br. s, 2H), 8.07 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 8.00 - 7.90 (m, 1H), 6.91 (d,J = 0.9 Hz, 1H), 5.27 - 5.07 (m, 3H), 5.01 (br. s, 1H), 4.37 (br. s, 1H), 3.14 - 2.97 (m, 2H), 2.94 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 2.92 - 2.85 (m, 1H), 2.42 - 2.35 (m, 1H), 2.06 - 1.91 (m, 2H), 1.50 (d,J = 6.1 Hz, 3H), 1.19 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.15 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 0.92 (t,J = 7.3 Hz, 3H)；(C25 H32 N8 O)之m/z (APCI+)為461.3 (M+H)+ 。[α]D22 = +75.9° (c=0.2 M，MeOH)。
實例 6 ：4-[(1ξ)-1-胺基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮實例 6(a) 實例 6(b)
Figure 02_image200
6a及6b之立體化學係以理解兩種異構體為分離的(參見前述中間物部分之描述)任意描繪。
步驟1：{2-甲氧基-1-[6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基]乙基}胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image202
用氮氣鼓泡{2-甲氧基-1-[6-(1-甲基環丙基)-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基]乙基}胺基甲酸三級丁酯(中間物 15 ) (136 mg，0.376 mmol)、(5S )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑(中間物 2 ) (105 mg，0.376 mmol)、K3 PO4 (240 mg，1.13 mmol)及1,4-二㗁烷(12 mL)之溶液2分鐘。向此混合物中添加Pd2 (dba)3 (34.5 mg，0.038 mmol)及XantPhos (43.5 mg，0.075 mmol)。將反應物加熱至85℃且使其在此溫度下攪拌18小時。使反應物冷卻且與在43 mg規模上進行之相同反應組合(中間物 15 )。濃縮經合併之混合物且經由急驟層析(SiO2 ，10:1 EtOAc/MeOH)純化，接著製備型TLC(SiO2 ，10:1 EtOAc/MeOH)得到呈黃色固體之標題化合物(170 mg，61%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.67 (dd,J = 12.2, 8.3 Hz, 1H), 8.20 - 8.10 (m, 1H), 8.01 - 7.84 (m, 1H), 5.66 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 5.35 - 5.11 (m, 3H), 5.03 (d,J = 11.7 Hz, 1H), 3.60 - 3.46 (m, 2H), 3.27 (d,J = 8.5 Hz, 3H), 3.16 - 2.94 (m, 4H), 2.50 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 2.39 (s, 2H), 1.71 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.33 (q,J = 2.3 Hz, 2H), 0.92 (t,J = 2.6 Hz, 2H)。(C30 H37 N7 O4 )之m/z (ESI)為460.2 (M+H)+ 。
步驟2：實例 6
在0℃下向{2-甲氧基-1-[6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基]乙基}胺基甲酸三級丁酯(170 mg，0.304 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加於EtOAc (3 mL)中之4 M HCl溶液。在20℃下攪拌反應物1小時且接著濃縮。所得殘餘物用H2 O (15 mL)稀釋且用飽和NaHCO3 溶液鹼化至pH約8。用DCM (3×8 mL)萃取混合物，且用鹽水(20 mL)洗滌經合併之有機層，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到黃色固體。所得固體經由製備型SFC(管柱：Daicel Chiralpak 250 mm×30 mm×10 µm，0.1% NH3 ·H2 O EtOH)純化，得到：
如實例 6a 之第一溶離異構體(30 mg，21%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.56 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.08 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.99 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 5.48 (d,J = 18.1 Hz, 1H), 5.30 (d,J = 18.1 Hz, 1H), 5.12 (br. t,J = 6.5 Hz, 1H), 4.30 (t,J = 6.3 Hz, 1H), 3.65 - 3.52 (m, 2H), 3.30 - 3.26 (m, 3H), 3.13 - 2.86 (m, 3H), 2.40 (br. dd,J = 8.4, 11.9 Hz, 3H), 1.59 - 1.52 (m, 6H), 1.31 - 1.24 (m, 2H), 0.89 (d,J = 2.9 Hz, 2H)。(C25 H29 N7 O)之m/z (ESI)為560.3 (M+H)+ 。[α] D22 = +66.1° (c=0.1 M，MeOH)。
如實例 6b 之第二溶離異構體(33 mg，23%)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.58 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.07 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 7.99 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 5.44 (d,J = 18.1 Hz, 1H), 5.31 (d,J = 18.1 Hz, 1H), 5.16 (br. t,J = 6.6 Hz, 1H), 4.29 (t,J = 6.4 Hz, 1H), 3.55 (d,J = 6.4 Hz, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.13 - 2.86 (m, 3H), 2.40 (br. dd,J = 8.2, 11.6 Hz, 1H), 2.12 (br. s, 2H), 1.59 - 1.48 (m, 6H), 1.30 - 1.23 (m, 2H), 0.88 (d, J=3.1 Hz, 2H)。(C25 H29 N7 O)之m/z (ESI)為560.2 (M+H)+ 。[α] D22 = +41.5°。
額外本發明化合物係藉由修改本文中例示之方法來製備且呈現於表5、表6及表7中。除非另外指明，否則所有具有對掌性碳之化合物製備及/或分離為如結構中所描繪之單一對映異構體。對掌性由化合物名稱進一步表示，該名稱將每個對掌性碳之特定立體化學指定為(R )或(S )。當所有對掌性碳如此稱為已知立體化學時，該立體化學係基於使用已知對掌性起始物質及/或經由X射線結晶學確認經解析對映異構體。一些化合物由外消旋中間物製備且藉由適當對掌性製備型SFC方法解析成單一對映異構體。在已知立體化學但分離對映異構體之情況下，「或1」或「或2」為處於對掌性碳原子。在名稱中，具有解析但未證實之立體化學中心之碳係以符號「ξ」識別。在該碳處繪製之鍵表示立體化學；意謂，該碳將具有繪製之鍵組態(實心楔狀物)或相反組態(散列楔狀物)。參見例如實例101及102。獲得時，在IUPAC名稱之後提供旋光度(αD22 或αD20 )，簡單地提供為α。 表5
實例編號 架構 IUPAC 名稱及旋光度 LRMS (m/z) (M+H)+^ 1 H NMR
7    (F)*
Figure 02_image204
 4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5R )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮    α = -144.8° 473.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (dd,J = 0.9, 8.2 Hz, 1H), 8.07 - 8.01 (m, 1H), 8.00 - 7.96 (m, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.30 (d,J = 16.9 Hz, 1H), 5.06 (d,J = 16.9 Hz, 1H), 5.00 (br. t,J = 6.1 Hz, 1H), 4.23 (br. t, J= 5.9 Hz, 1H), 4.11 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 3.54 (br. dd, J= 7.5, 9.7 Hz, 1H), 3.02 - 2.89 (m, 3H), 2.57 (br. d,J = 11.4 Hz, 1H), 2.15 - 1.89 (m, 5H), 1.77 - 1.66 (m, 2H), 1.33 (d,J = 6.7 Hz, 3H), 1.22 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.93 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
8    (F)*
Figure 02_image206
 4-[(1S )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5R )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮    α = -99.9° 473.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 8.10 - 8.02 (m, 1H), 8.01 - 7.95 (m, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.31 (d,J = 17.1 Hz, 1H), 5.09 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 4.98 (br. s, 1H), 4.24 (br. t,J = 6.0 Hz, 1H), 4.11 (q,J = 6.7 Hz, 1H), 3.60 - 3.52 (m, 1H), 3.03 - 2.86 (m, 3H), 2.57 (br. d,J = 11.5 Hz, 1H), 2.17 - 1.89 (m, 5H), 1.80 - 1.66 (m, 2H), 1.36 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.21 (d,J = 6.3 Hz, 3H), 0.93 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
9    (F)*
Figure 02_image208
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5R )-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮       α = -125.4° 473.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.51 (dd,J = 0.7, 8.3 Hz, 1H), 8.08 - 7.96 (m, 1H), 7.93 - 7.84 (m, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.35 - 5.00 (m, 3H), 4.18 (quin,J = 6.3 Hz, 1H), 3.93 (br. s, 1H), 3.49 (ddd,J = 2.4, 7.3, 9.8 Hz, 1H), 3.10 - 2.78 (m, 4H), 2.37 - 2.30 (m, 1H), 2.04 - 1.87 (m, 3H), 1.74 (dt,J = 7.0, 13.8 Hz, 1H), 1.67 - 1.56 (m, 2H), 1.44 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.15 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.84 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
10    (F)*  
Figure 02_image210
 4-[(1S )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5ξ)-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮    α = +28.8° 473.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.52 - 8.43 (m, 1H), 8.04 - 7.97 (m, 1H), 7.90 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.70 - 6.60 (m, 1H), 5.22 - 5.13 (m, 1H), 5.11 - 5.00 (m, 2H), 4.31 - 4.19 (m, 2H), 3.57 - 3.51 (m, 2H), 3.09 - 2.89 (m, 2H), 2.87 - 2.74 (m, 1H), 2.38 - 2.21 (m, 1H), 2.11 - 1.87 (m, 5H), 1.73 - 1.61 (m, 1H), 1.44 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.20 - 1.11 (m, 3H), 0.86 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
11    (F)*  
Figure 02_image212
 4-[(1S )-1-胺基丙基]-2-{6-[(ξ)-5-甲基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮    α = -117.6° 473.7    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.47 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.06 - 7.93 (m, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.30 - 5.13 (m, 1H), 5.09 - 5.02 (m, 2H), 4.22 (br. s, 1H), 4.03 - 3.89 (m, 1H), 3.54 - 3.49 (m, 2H), 3.07 - 2.97 (m, 2H), 2.93 (qd,J = 8.8, 12.2 Hz, 2H), 2.83 (dd,J = 8.9, 15.1 Hz, 1H), 2.38 - 2.29 (m, 1H), 2.06 - 1.95 (m, 2H), 1.94 - 1.88 (m, 1H), 1.87 - 1.79 (m, 1H), 1.74 (td,J = 6.7, 13.5 Hz, 1H), 1.65 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 1.45 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.13 (d,J = 6.2 Hz, 2H), 0.83 (t,J = 7.3 Hz, 2H).
12    (F)*
Figure 02_image214
 4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5R )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮    α = -86.9° 461.2    1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.74 (s, 1 H) 8.62 (d,J = 8.25 Hz, 1 H) 8.10 (t,J = 8.17 Hz, 1 H) 8.01 (d,J = 7.70 Hz, 1 H) 6.71 (s, 1 H) 5.17 (s, 2 H) 4.49 - 4.61 (m, 4 H) 4.34 (br. s, 1 H) 3.61 - 3.63 (m, 2 H) 2.55 (br. s, 1 H) 2.02 - 2.13 (m, 2 H) 1.95 - 2.02 (m, 1 H) 1.82 - 1.93 (m, 2 H) 1.64 - 1.80 (m, 1 H) 1.52 (br. d,J = 6.05 Hz, 3 H) 1.29 - 1.40 (m, 1 H) 1.11 - 1.28 (m, 4 H) 0.88 - 0.98 (m, 3 H).
13    (F)*  
Figure 02_image216
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5ξ)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮    α = +48.1° 487.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.62 - 8.52 (m, 1H), 8.10 - 8.02 (m, 1H), 8.01 - 7.89 (m, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.29 (d,J = 16.6 Hz, 1H), 5.08 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.04 - 4.89 (m, 1H), 4.33 - 4.20 (m, 1H), 4.06 - 3.92 (m, 1H), 3.65 - 3.52 (m, 1H), 3.47 - 3.36 (m, 1H), 3.00 - 2.92 (m, 3H), 2.66 - 2.55 (m, 1H), 2.17 - 2.07 (m, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 2H), 1.92 - 1.71 (m, 4H), 1.26 (d,J = 6.1 Hz, 3H), 0.98 - 0.88 (m, 6H).
14    (F)*  
Figure 02_image218
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5ξ)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮    α = -108.8° 487.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.62 - 8.52 (m, 1H), 8.10 - 8.02 (m, 1H), 8.01 - 7.89 (m, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.29 (d,J = 16.6 Hz, 1H), 5.08 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.04 - 4.89 (m, 1H), 4.33 - 4.20 (m, 1H), 4.06 - 3.92 (m, 1H), 3.65 - 3.52 (m, 1H), 3.47 - 3.36 (m, 1H), 3.00 - 2.92 (m, 3H), 2.66 - 2.55 (m, 1H), 2.17 - 2.07 (m, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 2H), 1.92 - 1.71 (m, 4H), 1.26 (d,J = 6.1 Hz, 3H), 0.98 - 0.88 (m, 6H).
15    (F)*  
Figure 02_image220
 4-[(1S )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5ξ)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -139.5° 487.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.54 - 8.46 (m, 1H), 8.02 - 7.95 (m, 1H), 7.93 - 7.83 (m, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.24 - 5.12 (m, 1H), 4.98 (d,J = 16.5 Hz, 1H), 4.88 (br. s, 1H), 4.18 (br. s, 1H), 3.48 (br. s, 1H), 2.99 - 2.77 (m, 4H), 2.57 - 2.46 (m, 1H), 2.08 - 1.87 (m, 4H), 1.80 - 1.72 (m, 1H), 1.72 - 1.53 (m, 3H), 1.21 - 1.11 (m, 4H), 0.90 - 0.78 (m, 6H).
16    (F)*  
Figure 02_image222
 4-[(1S )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5ξ)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +52.4° 487.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.56 - 8.46 (m, 1H), 8.04 - 7.95 (m, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.31 - 5.13 (m, 1H), 4.93 (d,J = 15.4 Hz, 2H), 4.19 (br. s, 1H), 3.48 (br. s, 2H), 2.97 - 2.78 (m, 4H), 2.50 (d,J = 11.0 Hz, 1H), 2.09 - 1.86 (m, 4H), 1.78 - 1.69 (m, 1H), 1.68 - 1.50 (m, 3H), 1.17 - 1.10 (m, 4H), 0.86 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 0.81 (t,J = 6.4 Hz, 3H).
17    (H)*
Figure 02_image224
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮       473.1    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.62 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 8.41 (br. s, 3H), 8.14 - 8.07 (m, 1H), 8.07 - 8.02 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.45 (d,J = 16.3 Hz, 1H), 5.27 - 5.16 (m, 2H), 4.39 (br. d,J = 2.0 Hz, 1H), 3.72 - 3.61 (m, 1H), 3.18 - 3.08 (m, 1H), 3.07 - 2.91 (m, 2H), 2.42 (br. d,J = 6.4 Hz, 1H), 2.13 - 1.98 (m, 3H), 1.76 - 1.67 (m, 7H), 1.53 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 1.20 (d,J = 6.2 Hz, 3H);
18    (J)*  
Figure 02_image226
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +23.8° 477.4    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.43 - 8.33 (m, 3H), 8.11 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 8.02 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.42 - 5.31 (m, 1H), 5.24 (d,J = 16.5 Hz, 1H), 5.11 - 4.99 (m, 2H), 4.92 - 4.86 (m, 1H), 4.63 - 4.55 (m, 1H), 4.40 - 4.33 (m, 1H), 3.66 - 3.60 (m, 1H), 3.11 - 2.91 (m, 3H), 2.78 - 2.69 (m, 1H), 2.53 - 2.52 (m, 1H), 2.15 - 1.96 (m, 3H), 1.78 - 1.70 (m, 1H), 1.56 (d,J = 6.7 Hz, 3H), 1.22 (d,J = 6.1 Hz, 3H).
19    (J)*  
Figure 02_image228
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5R)-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -3.1° 477.0    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.56 - 8.43 (m, 3H), 8.15 - 8.04 (m, 2H), 6.73 (s, 1H), 5.53 - 5.36 (m, 1H), 5.08 - 5.00 (m, 2H), 4.97 - 4.88 (m, 1H), 4.69 - 4.61 (m, 1H), 4.37 (br. s, 1H), 3.67 - 3.62 (m, 1H), 3.45 - 3.37 (m, 1H), 3.13 - 2.95 (m, 3H), 2.79 - 2.72 (m, 1H), 2.14 - 1.96 (m, 3H), 1.79 - 1.70 (m, 1H), 1.56 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 1.20 (d,J = 6.3 Hz, 3H).
20    (J)*
Figure 02_image230
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5R )-5-(羥基甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 477.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.57 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.06 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 5.28 (d,J = 17.1 Hz, 1H), 5.07 (d,J = 17.1 Hz, 1H), 5.04 - 4.98 (m, 1H), 4.98 - 4.89 (m, 1H), 3.91 - 3.83 (m, 3H), 3.02 - 2.82 (m, 6H), 2.77 - 2.69 (m, 1H), 1.77 (br. d,J = 7.2 Hz, 1H), 1.71 - 1.59 (m, 1H), 1.15 (d,J = 6.6 Hz, 6H), 0.89 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
21    (F)*   
Figure 02_image232
 4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 446.6    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.44 - 8.51 (m, 1H) 7.96 (t,J = 8.20 Hz, 1H) 7.88 (br. d,J = 6.60 Hz, 1H) 6.64 (br. s, 1H) 5.28 (br. d,J = 16.69 Hz, 1H) 5.10 (br. d,J = 16.32 Hz, 1H) 5.04 (br. s, 1H) 4.84 (br. s, 2H) 2.97 - 3.04 (m, 2H) 2.87 - 2.95 (m, 2H) 2.80 - 2.83 (m, 3H) 2.27 - 2.37 (m, 2H) 1.42 - 1.56 (m, 3H) 1.26 - 1.42 (m, 3H) 1.09 (br. d,J = 4.77 Hz, 6H).
22    (H)*     
Figure 02_image234
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-(二甲基胺基)-2-{6-[(5ξ)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +80.7° 433.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.50 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 - 7.93 (m, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.47 - 5.24 (m, 2H), 5.12 - 5.01 (m, 1H), 3.03 (s, 6H), 3.01 - 2.96 (m, 1H), 2.95 - 2.86 (m, 1H), 2.85 - 2.78 (m, 1H), 2.31 (dd,J = 8.3, 12.3 Hz, 1H), 1.44 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.42 (s, 3H), 1.40 (s, 3H).
23       (H)*  
Figure 02_image236
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-(二甲基胺基)-2-{6-[(5ξ)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -64.6° 433.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.50 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 - 7.94 (m, 1H), 7.90 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.69 (s, 1H), 5.49 - 5.23 (m, 2H), 5.06 (quin,J = 6.5 Hz, 1H), 3.03 (s, 6H), 3.02 - 2.97 (m, 1H), 2.91 (qd,J = 8.8, 12.4 Hz, 1H), 2.85 - 2.79 (m, 1H), 2.31 (dd,J = 8.3, 11.9 Hz, 1H), 1.44 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.41 (s, 3H).
24    (F)*   
Figure 02_image238
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5ξ)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = 140.8° 459.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.57 (dd,J = 0.7, 8.3 Hz, 1H), 8.10 - 8.03 (m, 1H), 7.97 (dd,J = 0.7, 7.6 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.35 (d,J = 17.1 Hz, 1H), 5.22 - 5.10 (m, 2H), 4.56 (s, 1H), 4.29 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 4.11 (m, 1H), 3.61 - 3.50 (m, 1H), 3.16 - 2.81 (m, 4H), 2.44 - 2.31 (m, 2H), 2.11 - 2.01 (m, 2H), 1.99 - 1.93 (m, 1H), 1.74 - 1.67 (m, 1H), 1.53 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.40 (br. d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.25 - 1.18 (m, 3H).
25    (F)*   
Figure 02_image240
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5ξ)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +46.6° 459.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.56 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.05 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.97 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.38 - 5.29 (m, 1H), 5.22 - 5.07 (m, 2H), 4.55 (s, 1H), 4.29 - 4.13 (m, 2H), 3.54 (br. d,J = 2.4 Hz, 2H), 3.13 - 2.79 (m, 4H), 2.43 - 2.30 (m, 1H), 2.11 - 2.02 (m, 2H), 1.98 - 1.93 (m, 1H), 1.73 - 1.63 (m, 1H), 1.51 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.39 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.20 (d,J = 6.1 Hz, 3H).
26    (F)*   
Figure 02_image242
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5ξ)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -94.9° 459.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (dd,J = 0.7, 8.3 Hz, 1H), 8.09 - 8.02 (m, 1H), 8.00 - 7.96 (m, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.39 - 5.30 (m, 1H), 5.23 - 5.11 (m, 2H), 4.56 (s, 1H), 4.24 (br. d,J = 5.4 Hz, 2H), 3.64 - 3.50 (m, 1H), 3.14 - 2.84 (m, 4H), 2.43 - 2.28 (m, 2H), 2.13 - 2.03 (m, 2H), 1.97 (br. s, 1H), 1.71 (br. d,J = 2.2 Hz, 1H), 1.52 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.39 (br. d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.22 (d,J = 6.1 Hz, 3H).
27    (F)*   
Figure 02_image244
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5ξ)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +17.4° 459.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 8.09 - 8.03 (m, 1H), 7.99 - 7.95 (m, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.37 - 5.29 (m, 1H), 5.23 - 5.10 (m, 2H), 4.56 (s, 1H), 4.25 (br. s, 1H), 4.19 - 4.13 (m, 1H), 3.56 (br. d,J = 2.0 Hz, 1H), 3.15 - 2.84 (m, 4H), 2.42 - 2.30 (m, 2H), 2.12 - 2.01 (m, 2H), 1.96 (br. s, 1H), 1.74 - 1.66 (m, 1H), 1.52 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.37 (br. d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.21 (d,J = 6.1 Hz, 3H).
28    (F)*   
Figure 02_image246
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-6-(二甲基胺基)-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +99.9° 433.3    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.47 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.05 - 7.97 (m, 1H), 7.92 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 5.19 - 5.02 (m, 3H), 4.21 (br. t,J = 6.2 Hz, 1H), 3.10 (s, 6H), 3.07 - 2.93 (m, 3H), 2.90 - 2.80 (m, 1H), 2.41 - 2.30 (m, 1H), 2.01 - 1.82 (m, 2H), 1.46 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 0.87 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
29    (J)*   
Figure 02_image248
 4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 465.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.58 (d,J = 8.19 Hz, 1H), 8.07 - 8.13 (m, 1H), 8.00 - 8.06 (m, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.29 - 5.38 (m, 1H), 5.18 - 5.26 (m, 1H), 4.96 - 5.05 (m, 3H), 4.85 - 4.90 (m, 1H), 4.48 - 4.60 (m, 1H), 3.00 - 3.07 (m, 2H), 2.93 - 2.96 (m, 3H), 2.69 - 2.81 (m, 3H), 2.20 - 2.34 (m, 1H), 1.55 (d,J = 6.72 Hz, 3H), 1.15 - 1.19 (m, 6H).
30    (J)*   
Figure 02_image250
 4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-{6-[(5R )-5-(羥基甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +50.8° 475.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ  8.55 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.08 - 8.01 (m, 1H), 7.99 - 7.95 (m, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.27 (d,J = 16.9 Hz, 1H), 5.09 (d,J = 16.9 Hz, 1H), 5.04 - 4.99 (m, 1H), 4.29 - 4.21 (m, 1H), 4.18 (q,J = 6.3 Hz, 1H), 3.89 - 3.81 (m, 2H), 3.57 - 3.52 (m, 1H), 3.05 - 2.81 (m, 4H), 2.71 (br. dd,J = 9.4, 11.5 Hz, 1H), 2.55 - 2.51 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 2H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.70 (br. dd,J = 2.4, 5.0 Hz, 1H), 1.38 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.21 (d,J = 6.2 Hz, 3H).
31    (J)*   
Figure 02_image252
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5R )-5-(羥基甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 489.4    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.67 - 8.59 (m, 1H), 8.42 (br. s, 3H), 8.17 - 8.10 (m, 1H), 8.04 (dd,J = 0.8, 7.6 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 5.25 - 5.10 (m, 3H), 4.42 (br. d,J = 5.8 Hz, 1H), 4.33 (br. s, 1H), 3.93 (br. d,J = 2.8 Hz, 1H), 3.91 (br. d,J = 2.5 Hz, 1H), 3.63 - 3.57 (m, 1H), 3.43 (br. d,J = 9.0 Hz, 1H), 3.18 - 3.06 (m, 1H), 3.03 - 2.91 (m, 2H), 2.82 - 2.72 (m, 1H), 2.14 - 1.92 (m, 5H), 1.74 (br. d,J = 6.6 Hz, 1H), 1.22 (d,J = 6.1 Hz, 3H), 0.92 (t,J = 7.4 Hz, 3H);
32    (J)*      
Figure 02_image254
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 491.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.57 (d,J = 8.31 Hz, 1H), 8.05 - 8.14 (m, 1H), 7.97 - 8.04 (m, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.33 - 5.39 (m, 1H), 5.26 - 5.33 (m, 1H), 5.14 - 5.23 (m, 1H), 5.03 - 5.12 (m, 1H), 4.96 - 5.04 (m, 1H), 4.83 - 4.92 (m, 1H), 4.29 (br. d,J = 5.87 Hz, 2H), 3.60 (br. t,J = 7.83 Hz, 1H), 3.36 - 3.46 (m, 2H), 2.89 - 3.10 (m, 3H), 2.67 - 2.77 (m, 1H), 1.85 - 2.17 (m, 5H), 1.72 (br. s, 1H), 1.21 (br. d,J = 6.11 Hz, 3H), 0.91 (br. t,J = 7.27 Hz, 3H).
33    (J)*      
Figure 02_image256
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-6-(二甲基胺基)-2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +58.7° 451.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.16 - 8.06 (m, 1H), 8.04 - 7.97 (m, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.44 - 5.27 (m, 1H), 5.24 - 5.07 (m, 2H), 5.05 - 4.96 (m, 1H), 4.94 - 4.82 (m, 1H), 4.33 - 4.19 (m, 1H), 3.16 (s, 6H), 3.13 - 2.93 (m, 3H), 2.79 - 2.62 (m, 1H), 2.07 - 1.79 (m, 2H), 0.90 (br. t,J = 7.3 Hz, 3H).
34    (J)*      
Figure 02_image258
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 479.4    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )  δ 8.59 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.43 (br. s, 3H), 8.15 - 8.08 (m, 1H), 8.03 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.44 - 5.28 (m, 1H), 5.21 - 5.06 (m, 2H), 5.05 - 4.93 (m, 2H), 4.93 - 4.83 (m, 1H), 4.35 (br. d,J = 6.3 Hz, 1H), 3.13 - 2.96 (m, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.77 - 2.70 (m, 1H), 2.05 - 1.91 (m, 2H), 1.17 (dd, J= 6.7, 15.4 Hz, 6H), 0.90 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
35    (J)*      
Figure 02_image260
 4-[(1ξ)-1-胺基-2-甲氧基乙基]-2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +91.2° 478.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.70 (dd,J = 0.7, 8.4 Hz, 1H), 8.20 (dd,J = 0.7, 7.6 Hz, 1H), 8.01 - 7.90 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 5.32 - 5.16 (m, 2H), 5.16 - 5.05 (m, 1H), 5.02 - 4.73 (m, 2H), 4.34 (t,J = 6.5 Hz, 1H), 3.69 - 3.58 (m, 2H), 3.43 - 3.35 (m, 3H), 3.22 - 3.03 (m, 3H), 2.96 - 2.86 (m, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.41 - 1.31 (m, 2H), 0.91 (q,J = 3.1 Hz, 2H).
36    (F)*      
Figure 02_image262
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-2-{6-[(5R )-5-(羥基甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +152.9° [M+Na]+ 482.1    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.59 - 8.52 (m, 1H), 8.10 - 8.03 (m, 1H), 8.01 - 7.96 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 5.39 (d,J = 18.0 Hz, 1H), 5.18 (d,J = 18.0 Hz, 1H), 5.06 - 4.97 (m, 1H), 4.00 (t,J = 6.6 Hz, 1H), 3.87 (d,J = 3.6 Hz, 2H), 3.07 - 2.81 (m, 3H), 2.77 - 2.69 (m, 1H), 1.85 - 1.73 (m, 1H), 1.71 - 1.61 (m, 1H), 1.56 (s, 3H), 1.31 - 1.22 (m, 2H), 0.92 - 0.81 (m, 5H).
37    (F)*      
Figure 02_image264
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +92.8° 444.1    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.56 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.10 - 8.02 (m, 1H), 8.00 - 7.94 (m, 1H), 7.52 (s, 1H), 5.46 (d,J = 18.1 Hz, 1H), 5.26 (d,J = 18.1 Hz, 1H), 5.12 (quin,J = 6.4 Hz, 1H), 3.98 (t,J = 6.5 Hz, 1H), 3.14 - 2.84 (m, 3H), 2.40 (br. dd,J = 8.4, 11.7 Hz, 1H), 1.80 (quind,J = 6.9, 13.9 Hz, 1H), 1.72 - 1.61 (m, 1H), 1.59 - 1.47 (m, 6H), 1.30 - 1.21 (m, 2H), 0.93 - 0.81 (m, 5H).
38    (F)*      
Figure 02_image266
 4-[(1ξ)-1-胺基-2-甲氧基乙基]-2-{6-[(5R )-5-(羥基甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +82.7° 476.3    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.60 - 8.51 (m, 1H), 8.13 - 8.05 (m, 1H), 8.00 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 5.39 (br. d,J = 17.8 Hz, 1H), 5.22 (br. d,J = 17.8 Hz, 1H), 5.03 (br. d,J = 3.1 Hz, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 1H), 3.94 - 3.82 (m, 2H), 3.66 - 3.52 (m, 2H), 3.28 (br. s, 3H), 3.04 - 2.89 (m, 2H), 2.85 (dd, J = 9.2, 14.1 Hz, 1H), 2.74 - 2.67 (m, 1H), 1.57 (s, 3H), 1.28 - 1.23 (m, 3H), 0.91 - 0.86 (m, 2H).
*圓括號內之字母為製備實例之方法。 ^除非另外指明，否則為[M+H]+ 。
實例 100 ：4-(2-胺基丙烷-2-基)-2-[6-(4-乙基-4H -1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image268
在120℃下用微波輻射加熱4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮(中間物 6 ) (63.0 mg，0.23 mmol)、2-溴-6-(4-乙基-4H -1,2,4-三唑-3-基)吡啶(中間物 1 ) (58.1 mg，0.230 mmol)、K2 CO3 (69.8 mg，0.505 mmol)、CuI (10.9 mg, 0.058 mmol)及N ,N -二甲基伸乙基二胺(0.115 mmol，0.0125 mL)於CH3 CN (3.0 mL)中之混合物30分鐘。移除揮發性物質，且藉由急驟層析(SiO2 ，0至10% MeOH/DCM)純化殘餘物。產物藉由HPLC (Phenemonex Gemini NX C18管柱，150×21.2 mm，5 µm. 移動A：水10 mM乙酸銨，移動B：乙腈)進一步純化，提供呈淡黃色固體之實例 100 (49.3 mg，49%產率)。1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.74 (s, 1H), 8.62 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.11 - 8.04 (m, 1H), 8.03 - 7.90 (m, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.65 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 4.24 - 4.19 (m, 1H), 3.29 - 3.33 (m, 2H, 假定；由水峰部分遮擋), 2.16 - 2.03 (m, 2H), 1.98 - 1.89 (m, 1H), 1.71 - 1.69 (m, 1H), 1.50 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.47 (d,J = 5.9 Hz, 6H), 1.22 (d,J = 6.2 Hz, 3H)；(C24 H30 N8 O)之m/z (APCI+)為447.3 (M+H)+ 。 表6
實例編號 結構，分離方法 IUPAC 名稱，旋光度 LRMS (m/z) (M+H)+ ^ 1 H NMR
101    (E)*   
Figure 02_image270
      峰1 (藉由Phenomenex Lux Cell-1上之SFC分離，40%甲醇與10 mM NH3 )		 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 447.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.72 (s, 1H), 8.60 (td,J = 2.3, 8.3 Hz, 1H), 8.09 - 8.02 (m, 1H), 7.99 (br. d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.17 (br. s, 2H), 4.59 - 4.53 (m, 3H), 4.29 - 4.18 (m, 2H), 3.22 - 3.18 (m, 1H), 2.10 - 2.01 (m, 2H), 1.96 (br. s, 1H), 1.91 - 1.82 (m, 2H), 1.70 (br. s, 1H), 1.39 (br. d,J = 4.2 Hz, 3H), 1.35 - 1.31 (m, 1H), 1.21 (br. d,J = 5.7 Hz, 4H), 0.94 (br. t,J = 7.2 Hz, 3H).
102    (E)*      
Figure 02_image272
   峰2 (藉由Phenomenex Lux Cell-1上之SFC分離，40%甲醇與10 mM NH3 )		 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 447.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.74 (s, 1H), 8.62 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.12 - 8.07 (m, 1H), 8.00 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.58 - 4.52 (m, 4H), 4.33 (br. s, 1H), 3.64 - 3.60 (m, 2H), 2.12 - 2.02 (m, 2H), 1.98 (br. d,J = 4.2 Hz, 1H), 1.90 - 1.83 (m, 2H), 1.75 - 1.70 (m, 1H), 1.52 (br. d,J = 6.1 Hz, 3H), 1.23 - 1.18 (m, 4H), 0.93 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
103    (A)*      
Figure 02_image274
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-[6-(4-環丁基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +8.4° 430.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.75 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.14 - 8.07 (m, 1H), 8.02 - 7.91 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 5.78 (quin,J = 8.4 Hz, 1H), 5.28 (d,J = 2.8 Hz, 2H), 4.33 (q,J = 6.6 Hz, 1H), 2.73 - 2.58 (m, 2H), 2.52 - 2.35 (m, 2H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.97 - 1.84 (m, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.49 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.37 (br. d,J = 3.5 Hz, 2H), 0.91 (d,J = 2.8 Hz, 2H).
104    (A)*      
Figure 02_image276
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-[6-(4-環丁基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +1.5° 430.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.75 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.10 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 8.01 - 7.91 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 5.78 (quin,J = 8.5 Hz, 1H), 5.28 (d,J = 2.8 Hz, 2H), 4.33 (q,J = 6.6 Hz, 1H), 2.72 - 2.60 (m, 2H), 2.51 - 2.36 (m, 2H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.97 - 1.86 (m, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.49 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 1.41 - 1.33 (m, 2H), 0.91 (d,J = 2.8 Hz, 2H).
105    (A)*      
Figure 02_image278
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-2-[6-(4-環丁基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -1.9° 444.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.75 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.10 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 8.02 - 7.92 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 5.78 (quin,J = 8.4 Hz, 1H), 5.33 - 5.18 (m, 2H), 4.06 (t,J = 6.7 Hz, 1H), 2.73 - 2.59 (m, 2H), 2.43 (quin,J = 10.4 Hz, 2H), 2.04 (q,J = 9.6 Hz, 1H), 1.97 - 1.84 (m, 2H), 1.84 - 1.74 (m, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.37 (q,J = 3.2 Hz, 2H), 0.95 (t,J = 7.4 Hz, 3H), 0.91 (q,J = 3.4 Hz, 2H).
106    (A)*      
Figure 02_image280
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-2-[6-(4-環丁基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +22.4° 441.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.75 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.10 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 8.02 - 7.92 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 5.78 (quin,J = 8.5 Hz, 1H), 5.34 - 5.18 (m, 2H), 4.06 (t,J = 6.7 Hz, 1H), 2.72 - 2.59 (m, 2H), 2.52 - 2.35 (m, 2H), 2.04 (q,J = 10.0 Hz, 1H), 1.98 - 1.85 (m, 2H), 1.78 (dd,J = 7.0, 14.1 Hz, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.37 (q,J = 3.1 Hz, 2H), 0.95 (t,J = 7.5 Hz, 3H), 0.91 (q,J = 3.3 Hz, 2H).
107    (G)*      
Figure 02_image282
 2-[6-(4-乙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-4-[(1ξ)-1-(甲基胺基)乙基]-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +2.1° 461.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.74 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 8.14 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.93 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 5.11 (d,J = 2.0 Hz, 2H), 4.61 (q,J = 7.3 Hz, 2H), 4.29 (br. t,J = 6.0 Hz, 1H), 3.79 (q,J = 6.6 Hz, 1H), 3.66 - 3.60 (m, 1H), 3.45 - 3.38 (m, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 2.21 - 2.00 (m, 3H), 1.55 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.43 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.28 (d,J = 6.3 Hz, 3H).
108    (G)*      
Figure 02_image284
 2-[6-(4-乙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-4-[(1ξ)-1-(甲基胺基)乙基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -80.5° 461.2    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.73 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 8.13 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.93 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.61 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 4.30 - 4.22 (m, 1H), 3.76 (q,J = 6.7 Hz, 1H), 3.62 (br. t,J = 7.3 Hz, 1H), 3.47 - 3.38 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 2.20 - 2.01 (m, 3H), 1.55 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.44 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.29 (br. d,J = 6.3 Hz, 3H).
109    (E)*      
Figure 02_image286
 2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-4-[(1ξ)-1-(甲基胺基)乙基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -1.5° 447.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.67 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.08 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.86 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.02 (d,J = 1.6 Hz, 2H), 4.63 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 4.23 - 4.16 (m, 1H), 3.71 (q,J = 6.8 Hz, 1H), 3.57 - 3.50 (m, 1H), 3.42 - 3.29 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.07 - 1.92 (m, 3H), 1.69 (br. d,J = 3.0 Hz, 1H), 1.55 - 1.50 (m, 3H), 1.35 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.19 (d,J = 6.3 Hz, 3H).
110    (E)*      
Figure 02_image288
 2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-4-[(1ξ)-1-(甲基胺基)乙基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -88.2° 447.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.66 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.08 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.86 (t,J = 8.1 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.05 - 4.97 (m, 2H), 4.62 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 4.22 - 4.13 (m, 1H), 3.68 (q,J = 6.5 Hz, 1H), 3.58 - 3.47 (m, 1H), 3.38 - 3.28 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.08 - 1.92 (m, 3H), 1.74 - 1.69 (m, 1H), 1.53 (t,J = 7.3 Hz, 3H), 1.35 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.20 (d,J = 6.3 Hz, 3H).
111    (A)*      
Figure 02_image290
 2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-4-[(1R )-1-(甲基胺基)乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +16.2° 418.2    1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.77 (s, 1H), 8.63 (dd, J = 0.7, 8.3 Hz, 1H),  8.11 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.71 - 4.61 (m, 2H), 4.05 - 3.87 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.53 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.36 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.32 - 1.23 (m, 2H), 0.92 - 0.85 (m, 2H).
112    (A)*      
Figure 02_image292
 2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-4-[(1S )-1-(甲基胺基)乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -19.7° 418.2    1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.77 (s, 1H), 8.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.11 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.65 (quind,J = 6.7, 13.6 Hz, 2H), 4.14 - 3.94 (m, 1H), 2.37 - 2.26 (m, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.52 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.38 (br. d,J = 6.7 Hz, 3H), 1.34 - 1.25 (m, 2H), 0.89 (d,J = 2.7 Hz, 2H).
113    (A)*      
Figure 02_image294
 4-[(1S )-1-(甲基胺基)乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -18.3° 432.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.75 (s, 1H), 8.63 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.10 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 8.02 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 5.29 (s, 2H), 4.65 - 4.54 (m, 2H), 3.87 - 3.85 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.95 - 1.83 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.32 (br. d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.28 - 1.22 (m, 2H), 0.93 (t,J = 7.3 Hz, 3H), 0.88 (s, 2H).
114    (C)*      
Figure 02_image296
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 418.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.71 - 8.80 (m, 1H), 8.61 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.07 - 8.17 (m, 1H), 7.93 - 8.05 (m, 1H), 7.57 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.64 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.47 - 1.54 (m, 9H), 1.32 (br. s, 2H), 0.86 - 0.95 (m, 2H).
115    (A)*      
Figure 02_image298
 4-[(1R )-1-胺基乙基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +10.1° 404.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.69 (s, 1H), 8.55 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.05 - 7.99 (m, 1H), 7.99 - 7.93 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 5.36 - 5.24 (m, 2H), 4.57 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 4.15 (q,J = 6.6 Hz, 1H), 1.49 (s, 3H), 1.45 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.28 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.24 - 1.18 (m, 2H), 0.80 (d,J = 3.1 Hz, 2H).
116    (A)*      
Figure 02_image300
 4-[(1S)-1-胺基乙基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -10.4° 404.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.61 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.12 - 8.05 (m, 1H), 8.05 - 8.00 (m, 1H), 7.52 (s, 1H), 5.37 (d,J = 4.5 Hz, 2H), 4.64 (q,J = 7.3 Hz, 2H), 4.22 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 1.55 (s, 3H), 1.52 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.35 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.28 - 1.23 (m, 2H), 0.87 (d,J = 3.0 Hz, 2H).
117    (A)*      
Figure 02_image302
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +4.6° 418.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.75 (s, 1H), 8.63 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 8.10 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.58 (br. t,J = 7.2 Hz, 2H), 4.21 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.34 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.30 - 1.25 (m, 2H), 0.94 (t,J = 7.3 Hz, 3H), 0.87 (d,J = 3.2 Hz, 2H).
118    (A)*      
Figure 02_image304
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +3.5° 418.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.75 (s, 1H), 8.63 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.10 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 8.02 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.41 - 5.28 (m, 2H), 4.65 - 4.52 (m, 2H), 4.21 (q,J = 6.6 Hz, 1H), 1.99 - 1.82 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.34 (d,J = 6.7 Hz, 3H), 1.30 - 1.22 (m, 2H), 0.94 (t,J = 7.4 Hz, 3H), 0.87 (d,J = 3.1 Hz, 2H).
119    (A)*      
Figure 02_image306
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -1.6° 418.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.62 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.11 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 5.39 - 5.28 (m, 2H), 4.64 (dq,J = 2.6, 7.0 Hz, 2H), 3.99 (t,J = 6.5 Hz, 1H), 1.85 - 1.72 (m, 1H), 1.66 (td,J = 7.1, 13.8 Hz, 1H), 1.31 - 1.23 (m, 2H), 0.92 - 0.82 (m, 5H).
120    (A)*      
Figure 02_image308
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-(1-甲基環丙基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -2.4° 418.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.62 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 8.10 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.39 - 5.28 (m, 2H), 4.64 (dq,J = 2.1, 7.0 Hz, 2H), 3.97 (t,J = 6.5 Hz, 1H), 2.31 - 1.89 (m, 2H), 1.84 - 1.73 (m, 1H), 1.70 - 1.60 (m, 1H), 1.56 (s, 3H), 1.52 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.31 - 1.23 (m, 2H), 0.90 - 0.82 (m, 5H).
121    (A)*      
Figure 02_image310
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +7.9° 432.1    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.75 (s, 1H), 8.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 - 8.06 (m, 1H), 8.06 - 8.01 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.58 (q,J = 6.8 Hz, 2H), 3.97 (t,J = 6.7 Hz, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 2H), 1.83 - 1.72 (m, 1H), 1.70 - 1.60 (m, 1H), 1.56 (s, 3H), 1.32 - 1.21 (m, 2H), 0.95 (t,J = 7.3 Hz, 3H), 0.91 - 0.83 (m, 5H).
122    (A)*      
Figure 02_image312
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -101.4° 432.1    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.64 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 8.12 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 8.03 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 5.36 - 5.25 (m, 2H), 4.64 - 4.52 (m, 2H), 4.17 (br. t,J = 6.4 Hz, 1H), 1.94 - 1.81 (m, 3H), 1.79 - 1.70 (m, 1H), 1.58 (s, 3H), 1.41 - 1.27 (m, 2H), 0.94 (t,J = 7.4 Hz, 3H), 0.90 (br. d,J = 2.5 Hz, 2H), 0.89 - 0.84 (m, 3H).
123    (D)*      
Figure 02_image314
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-[乙基(甲基)胺基]-2-[6-(4-乙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 435.3    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.53 (d,J = 8.25 Hz, 1H), 7.93 - 8.04 (m, 1H), 7.90 (d,J = 7.70 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.48 (q,J = 6.97 Hz, 2H), 3.54 - 3.58 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 1.35 - 1.43 (m, 9H), 1.03 (t,J = 6.97 Hz, 3H).
124    (C)*      
Figure 02_image316
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-[乙基(甲基)胺基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 421.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.74 (s, 1H), 8.63 (dd,J = 8.19, 0.86 Hz, 1H), 8.05 - 8.18 (m, 1H), 7.98 - 8.04 (m, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.41 (s, 2H), 4.65 (q,J = 7.09 Hz, 2H), 3.64 (q,J = 6.97 Hz, 2H), 3.06 (s, 3H), 1.51 (t,J = 7.15 Hz, 3H), 1.46 (s, 6H), 1.11 (t,J = 6.97 Hz, 3H).
125    (A)*      
Figure 02_image318
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[4-(戊-3-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -7.9° 446.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.92 (s, 1H), 8.64 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.11 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.50 - 5.27 (m, 3H), 4.20 (br. d,J = 6.4 Hz, 1H), 1.97 - 1.84 (m, 4H), 1.56 (s, 3H), 1.34 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.31 - 1.23 (m, 2H), 0.87 (br. d,J = 2.9 Hz, 2H), 0.84 - 0.73 (m, 6H).
126    (A)*      
Figure 02_image320
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[4-(戊-3-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +0.32° 446.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.93 (s, 1H), 8.64 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 5.46 - 5.28 (m, 3H), 4.23 (q,J = 6.4 Hz, 1H), 1.99 - 1.82 (m, 4H), 1.56 (s, 3H), 1.35 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.31 - 1.25 (m, 2H), 0.87 (d,J = 2.8 Hz, 2H), 0.82 - 0.75 (m, 6H).
127    (G)*      
Figure 02_image322
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-[乙基(甲基)胺基]-2-[6-(4-乙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -18.6° 421.4    1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.66 (br. d,J = 8.2 Hz, 1H), 8.05 - 7.89 (m, 2H), 6.84 - 6.73 (m, 1H), 5.12 (br. s, 2H), 4.65 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 4.14 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.71 (br. d,J = 6.7 Hz, 2H), 3.16 - 3.07 (m, 3H), 2.60 (s, 3H), 1.56 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.49 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.20 (t,J = 7.0 Hz, 3H).
128    (G)*      
Figure 02_image324
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-[乙基(甲基)胺基]-2-[6-(4-乙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +24.1° 421.2    1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.73 - 8.59 (m, 1H), 8.06 - 7.86 (m, 2H), 6.86 - 6.69 (m, 1H), 5.12 (br. s, 2H), 4.65 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 4.13 (br. d,J = 6.6 Hz, 1H), 3.71 (br. d, J = 6.7 Hz, 2H), 3.11 (br. d,J = 1.6 Hz, 3H), 2.60 (s, 3H), 1.56 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.49 (d,J = 6.7 Hz, 3H), 1.20 (t,J = 6.9 Hz, 3H).
129    (E)*      
Figure 02_image326
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-[乙基(甲基)胺基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +8.4° 407.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.74 (s, 1H), 8.61 (dd,J = 0.9, 8.3 Hz, 1H), 8.13 - 8.05 (m, 1H), 8.03 - 7.97 (m, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.32 - 5.17 (m, 2H), 4.63 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 4.10 (q,J = 6.7 Hz, 1H), 3.64 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.11 (br. s, 2H), 1.50 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.35 (d,J = 6.7 Hz, 3H), 1.10 (t,J = 7.0 Hz, 3H).
130    (E)*      
Figure 02_image328
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-[乙基(甲基)胺基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -16.0° 407.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.62 (dd,J = 0.7, 8.3 Hz, 1H), 8.32 (br. s, 2H), 8.15 - 8.08 (m, 1H), 8.00 (dd,J = 0.7, 7.6 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.26 - 5.13 (m, 2H), 4.69 - 4.56 (m, 3H), 3.71 (sxt,J = 7.3 Hz, 2H), 3.12 (s, 3H), 1.55 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.48 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.12 (t,J = 7.0 Hz, 3H).
131    (C)*      
Figure 02_image330
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 421.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.73 (s, 1H), 8.63 (dd,J = 0.9, 8.3 Hz, 1H), 8.15 - 8.05 (m, 1H), 8.02 - 7.95 (m, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.59 (t,J = 7.0 Hz, 2H), 3.11 (s, 6H), 1.93 - 1.83 (m, 2H), 1.47 (s, 6H), 0.90 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
132    (C)*      
Figure 02_image332
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 407.3    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.67 (s, 1H), 8.54 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 8.04 - 7.96 (m, 1H), 7.95 - 7.85 (m, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.57 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 3.02 (s, 6H), 1.43 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.39 (s, 6H).
133    (I)*      
Figure 02_image334
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-2-[6-(5-甲基-4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 475.3    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.60 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.05 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.94 (dd,J = 0.8, 7.6 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.51 - 5.26 (m, 2H), 4.50 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 4.22 (t,J = 5.8 Hz, 1H), 3.30 - 3.32 (m, 2H 假定；由水峰部分遮擋) 2.48 (s, 3H), 2.15 - 2.02 (m, 2H), 1.97 (br. s, 1H), 1.77 (qd,J = 7.4, 14.6 Hz, 2H), 1.69 - 1.71 (m, 1H) 1.47 (s, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.22 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.92 - 0.85 (m, 3H).
134    (I)*      
Figure 02_image336
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-2-[6-(4-乙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 461.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.55 (dd,J = 0.9, 8.3 Hz, 1H), 8.09 - 7.96 (m, 1H), 7.93 - 7.80 (m, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.49 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 4.19 - 4.08 (m, 1H), 3.58 - 3.42 (m, 1H), 3.23 - 3.25 (m, 1H, 假定；由水峰部分遮擋), 2.42 (br. s, 3H), 2.09 - 1.85 (m, 3H), 1.65 - 1.55 (m, 1H), 1.44 - 1.36 (m, 9H), 1.15 (d,J = 6.2 Hz, 3H).
135    (I)*      
Figure 02_image338
   峰2 (使用Phenomenex Lux Cellulose-1，21×250 mm，5 μm管柱，在35℃下分離，用含20% MeOH+10 mM乙酸銨之CO2 溶離。壓力保持在120巴下，流動速率為100 mL/分鐘。)		 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-[6-(5-甲基-4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 461.8    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.63 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.07 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 7.98 - 7.90 (m, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.53 - 4.41 (m, 2H), 4.31 - 4.22 (m, 1H), 4.10 - 4.06 (m, 2H), 3.59 - 3.54 (m, 1H), 2.50 - 2.49 (m, 3H), 2.11 - 2.03 (m, 2H), 1.99 - 1.91 (m, 1H), 1.86 - 1.78 (m, 2H), 1.73 - 1.69 (m, 1H), 1.35 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.22 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.96 (t,J = 7.5 Hz, 3H).
136    (C)*      
Figure 02_image340
   峰1 (使用Phenomenex Lux Cellulose-1，21×250 mm，5 μm管柱，在35℃下分離，用含20% MeOH+10 mM乙酸銨之CO2 溶離。壓力保持在120巴下，流動速率為100 mL/分鐘。)		 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-[6-(5-甲基-4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 461.8    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.61 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.06 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.53 - 4.43 (m, 2H), 4.29 - 4.18 (m, 1H), 4.13 - 4.03 (m, 1H), 3.62 - 3.52 (m, 1H), 2.49 (br. s, 3H), 2.09 - 2.03 (m, 2H), 1.96 (br. d,J = 2.9 Hz, 1H), 1.84 - 1.77 (m, 2H), 1.70 (br. d,J = 2.7 Hz, 1H), 1.34 (br. d,J = 6.1 Hz, 3H), 1.22 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 0.95 (t,J = 7.3 Hz, 3H), 0.90 - 0.89 (m, 1H).
137    (C)*      
Figure 02_image342
 4-[(1S )-1-胺基乙基]-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -4.5° 406.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.72 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 8.63 - 8.56 (m, 1H), 8.10 - 8.02 (m, 1H), 8.01 - 7.97 (m, 1H), 6.85 - 6.61 (m, 1H), 5.18 (br. s, 2H), 4.56 (br. t,J = 7.2 Hz, 2H), 4.10 (br. s, 1H), 3.09 (d,J = 3.1 Hz, 6H), 1.97 - 1.84 (m, 2H), 1.34 (br. d,J = 5.9 Hz, 3H), 1.00 - 0.85 (m, 3H).
138    (C)*      
Figure 02_image344
 4-[(1R )-1-胺基乙基]-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +4.9° 406.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.72 (s, 1H), 8.59 (br. d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.07 - 8.01 (m, 1H), 7.98 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.17 (br. d,J = 2.2 Hz, 2H), 4.64 - 4.49 (m, 2H), 4.09 (br. d,J = 4.8 Hz, 1H), 3.08 (s, 6H), 1.95 - 1.84 (m, 2H), 1.34 (br. d,J = 6.6 Hz, 3H), 0.94 (br. t,J = 7.2 Hz, 3H).
139    (I)*      
Figure 02_image346
 4-(2-胺基丙烷-2-基)-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2-[6-(5-甲基-4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 463.5    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.72 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.59 (br. s, 3H), 8.19 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.97 (br. s, 1H), 4.60 (br. t,J = 7.3 Hz, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 1.92 - 1.78 (m, 2H), 1.72 (s, 6H), 1.17 (d,J = 6.5 Hz, 6H), 0.91 (t,J = 7.3 Hz, 3H).
140    (E)*      
Figure 02_image348
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 447.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.73 - 8.62 (m, 1H), 8.55 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.08 - 7.98 (m, 1H), 7.93 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.14 (d,J = 1.7 Hz, 2H), 4.57 (dq,J = 3.4, 7.0 Hz, 2H), 4.22 - 4.08 (m, 1H), 3.77 (br. t,J = 6.1 Hz, 1H), 3.55 - 3.41 (m, 1H), 3.30 - 3.25 (m, 1H,  假定；由水峰部分遮擋), 2.00 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 1.92 - 1.87 (m, 1H), 1.76 - 1.51 (m, 4H), 1.44 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.15 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.82 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
141    (E)*      
Figure 02_image350
 4-[(1S )-1-胺基丙基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 447.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.67 (s, 1H), 8.55 (dd,J = 0.7, 8.4 Hz, 1H), 8.11 - 7.99 (m, 1H), 7.93 (dd,J = 0.7, 7.6 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.66 - 4.50 (m, 2H), 4.26 - 4.07 (m, 1H), 3.87 - 3.71 (m, 1H), 3.56 - 3.45 (m, 1H), 3.27-3.29 (m 1H, 假定；由水峰部分遮擋, ) 2.05 - 1.95 (m, 2H), 1.93 - 1.86 (m, 1H), 1.79 - 1.68 (m, 1H), 1.65 - 1.51 (m, 2H), 1.44 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.14 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.82 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
142    (E)*      
Figure 02_image352
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -3.8° 421.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.75 (s, 1H), 8.62 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.10 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 8.01 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.92 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 5.24 - 5.05 (m, 2H), 4.68 - 4.57 (m, 1H), 4.56 - 4.46 (m, 1H), 4.34 (br. s, 1H), 3.17 (s, 6H), 2.07 - 1.81 (m, 4H), 0.92 (td,J = 7.3, 15.0 Hz, 6H).
143    (E)*      
Figure 02_image354
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-丙基-4I-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1I-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +5.6° 421.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.65 (s, 1H), 8.52 (dd,J = 2.9, 8.3 Hz, 1H), 7.98 (dt,J = 2.1, 7.8 Hz, 1H), 7.92 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.66 (d,J = 3.7 Hz, 1H), 5.08 (br. s, 2H), 4.60 - 4.41 (m, 2H), 3.87 - 3.67 (m, 1H), 3.02 (s, 6H), 1.81 (sxt,J = 7.0 Hz, 2H), 1.75 - 1.65 (m, 1H), 1.57 (br. s, 1H), 0.88 (t,J = 7.3 Hz, 3H), 0.82 (t,J = 6.3 Hz, 3H).
144    (E)*      
Figure 02_image356
 4-[(1R )-1-胺基丙基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 461.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.66 (s, 1H), 8.56 (dd,J = 0.7, 8.3 Hz, 1H), 8.07 - 7.98 (m, 1H), 7.96 - 7.84 (m, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.62 - 4.41 (m, 2H), 4.15 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.77 (br. s, 1H), 3.56 - 3.42 (m, 1H), 3.30-3.27 (m, 1H,  假定；由水峰部分遮擋), 2.08 - 1.92 (m, 3H), 1.86 - 1.76 (m, 2H), 1.75 - 1.46 (m, 3H), 1.15 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.88 (t,J = 7.4 Hz, 3H), 0.82 (t,J = 7.3 Hz, 3H).
145    (E)*      
Figure 02_image358
 4-[(1S )-1-胺基丙基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 461.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.66 (s, 1H), 8.56 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.10 - 7.98 (m, 1H), 7.96 - 7.88 (m, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.17 - 5.00 (m, 2H), 4.62 - 4.39 (m, 2H), 4.27 - 4.06 (m, 1H), 3.87 - 3.71 (m, 1H), 3.56 - 3.43 (m, 1H), 3.30-3.29 (m 1H,  假定；由水峰部分遮擋) 2.07 - 1.95 (m, 2H), 1.92 - 1.70 (m, 4H), 1.66 - 1.51 (m, 2H), 1.14 (d,J = 6.1 Hz, 3H), 0.88 (t,J = 7.4 Hz, 3H), 0.81 (t,J = 7.3 Hz, 3H).
146    (E)*   
Figure 02_image360
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +1.2° 407.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.71 (s, 1H), 8.54 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.50 - 8.40 (m, 2H), 8.04 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.93 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.29 - 4.99 (m, 2H), 4.70 - 4.49 (m, 2H), 4.39 - 4.24 (m, 1H), 3.10 (s, 6H), 2.07 - 1.82 (m, 2H), 1.42 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 0.82 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
147    (E)*      
Figure 02_image362
 4-[(1ξ)-1-胺基丙基]-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -0.4° 407.2    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.69 (s, 1H), 8.53 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.18 (br. s, 2H), 8.02 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 - 7.85 (m, 1H), 6.91 - 6.76 (m, 1H), 5.22 - 4.97 (m, 2H), 4.70 - 4.47 (m, 2H), 4.45 - 4.27 (m, 1H), 3.10 (s, 6H), 2.04 - 1.75 (m, 2H), 1.42 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 0.84 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
148    (G)*      
Figure 02_image364
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2-[6-(5-甲基-4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +3.8° 449.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.02 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.94 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.96 - 4.85 (m, 1H), 4.45 (br. dd,J = 6.3, 8.8 Hz, 2H), 4.07 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 2.86 (s, 3H), 2.48 - 2.43 (m, 3H), 1.88 - 1.76 (m, 2H), 1.33 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 1.15 (d,J = 6.5 Hz, 6H), 0.94 (t,J = 7.3 Hz, 3H).
149    (G)*      
Figure 02_image366
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2-[6-(5-甲基-4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -10.6° 449.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.62 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.06 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.93 (s, 1H), 4.47 (br. dd,J = 6.0, 8.5 Hz, 2H), 4.11 (d,J = 6.5 Hz, 1H), 2.89 (s, 3H), 2.50 - 2.48 (m, 3H), 1.90 - 1.76 (m, 2H), 1.35 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.17 (d,J = 6.8 Hz, 6H), 0.96 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
150    (E)*      
Figure 02_image368
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -29.3° 433.1    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.73 (s, 1H), 8.59 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.09 - 8.04 (m, 1H), 7.99 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.21 (br. s, 2H), 4.63 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 4.55 (s, 1H), 4.23 (br. s, 2H), 3.51 (br. s, 3H), 2.09 - 2.02 (m, 2H), 1.96 (br. d,J = 2.4 Hz, 1H), 1.70 (br. dd,J = 2.4, 4.8 Hz, 1H), 1.50 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.39 (br. d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.23 - 1.18 (m, 3H).
151    (E)*      
Figure 02_image370
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -49.4° 433.1    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.59 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.36 - 8.32 (m, 2H), 8.12 - 8.05 (m, 1H), 7.98 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 5.16 (br. d,J = 2.8 Hz, 2H), 4.67 - 4.55 (m, 3H), 4.39 - 4.31 (m, 1H), 3.68 - 3.54 (m, 2H), 2.07 (br. s, 2H), 2.01 - 1.94 (m, 1H), 1.76 - 1.67 (m, 1H), 1.56 (d,J = 6.6 Hz, 3H), 1.48 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.19 (d,J = 6.2 Hz, 3H).
152    (E)*      
Figure 02_image372
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +13.7° 393.3    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.73 (s, 1H), 8.62 - 8.56 (m, 1H), 8.10 - 8.01 (m, 1H), 7.98 (br. d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.32 - 5.13 (m, 2H), 4.62 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 4.27 - 4.06 (m, 1H), 3.12 - 3.03 (m, 6H), 1.49 (br. t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.41 - 1.19 (m, 3H).
153    (E)*      
Figure 02_image374
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-6-(二甲基胺基)-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -10.9° 393.3    1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.60 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.09 (t,J = 8.1 Hz, 1H), 7.99 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.90 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 5.24 - 5.08 (m, 2H), 4.73 - 4.54 (m, 3H), 3.16 (d,J = 1.8 Hz, 6H), 1.54 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.47 (t,J = 7.2 Hz, 3H).
154    (G)*      
Figure 02_image376
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-[6-(4-乙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -48.5° 447.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.62 - 8.57 (m, 1H), 8.31 (br. s, 2H), 8.08 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.73 - 6.70 (m, 1H), 5.18 (br. s, 2H), 4.60 - 4.47 (m, 3H), 4.39 - 4.31 (m, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 1H), 3.36 - 3.35 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.11 - 2.03 (m, 2H), 2.00 - 1.96 (m, 1H), 1.76 - 1.71 (m, 1H), 1.56 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.43 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 1.19 (d,J = 6.2 Hz, 3H).
155    (G)*      
Figure 02_image378
 4-[(1ξ)-1-胺基乙基]-2-[6-(4-乙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -35.6° 447.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (br. d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.04 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 7.95 (br. d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.22 (br. d,J = 8.8 Hz, 2H), 4.60 - 4.48 (m, 3H), 4.21 (br. s, 1H), 3.58 - 3.50 (m, 3H), 3.17 (br. s, 1H), 2.49 - 2.47 (m, 3H), 2.08 - 2.00 (m, 2H), 1.95 (br. s, 1H), 1.69 (br. d,J = 2.2 Hz, 1H), 1.45 (br. t,J = 6.5 Hz, 3H), 1.43 - 1.29 (m, 3H), 1.20 (br. d,J = 5.5 Hz, 3H).
*圓括號內之字母為製備實例之方法。 ^ 除非另外指明，否則為[M+H]+ 。
實例 200 ：2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image380
步驟1：[(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)甲基]甲基胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image382
在具有冷凝器之100 mL燒瓶中，在N2 下在100℃下加熱甲基({6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}甲基)胺基甲酸三級丁酯(中間物 8 ) (752 mg，2.09 mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑(中間物 3 ) (612 mg，2.09 mmol)、K3 PO4 (1.33 g, 6.26 mmol)、Pd2 (dba)3 (120 mg, 0.209 mmol)及XantPhos (241 mg，0.417 mmol)於1,4-二㗁烷(20.9 mL，c=0.1 M)中之混合物18小時。將混合物冷卻至室溫，過濾且用DCM (20 mL)洗滌。在減壓下濃縮濾液。殘餘物藉由急驟層析(24 g，SiO2 ，0至10% MeOH/DCM)純化，得到呈乳黃色固體之標題化合物(1.13 mg，85%)。(C31 H40 N8 O3 )之m/z (APCI+)為573.30 (M+H)+ 。
步驟2：實例 200
將HCl於1,4-二㗁烷(4.42 mL，17.7 mmol)中之4 N溶液添加至[(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)甲基]甲基胺基甲酸三級丁酯(1.01 g，1.77 mmol)於DCM (22.1 mL，c=0.08 M)中之溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。在減壓下移除揮發性物質。粗產物藉由SFC (具有甲醇及10 mM NH3 之ZymorSPHER HADP管柱)純化，得到呈乳黃色固體之實例 200 (640 mg，77%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.97 (br. s, 1H), 8.60 (dd,J = 0.9, 8.3 Hz, 1H), 8.17 - 8.06 (m, 1H), 8.04 - 7.95 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.28 (d,J = 16.6 Hz, 1H), 5.09 - 4.91 (m, 2H), 4.45 - 4.19 (m, 3H), 3.73 - 3.61 (m, 1H), 3.49 - 3.37 (m, 1H), 3.09 - 2.87 (m, 3H), 2.76 (s, 3H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.15 - 1.96 (m, 4H), 1.80 - 1.64 (m, 2H), 1.21 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 0.93 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。(C26 H32 N8 O)之m/z (APCI+)為473.3 (M+H)+ 。[α]D22 = +76.0° (c=0.1 M，MeOH)。
實例 201 ：2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image384
步驟1：[(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)甲基]甲基胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image386
向配備有磁性攪拌棒之螺帽燒瓶中添加甲基({6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}甲基)胺基甲酸三級丁酯(中間物 9 ) (294 mg，0.84 mmol)、(5S )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑(中間物3) (260 mg，0.88 mmol)、K3 PO4 (537 mg，2.53 mmol)、Pd2 (dba)3 (78.0 mg，0.084 mmol)、XantPhos (97.6 mg，0.17 mmol)及1,4-二㗁烷(16.9 mL，0.05 M)。混合物用N2 鼓泡5分鐘，隨後密封燒瓶且加熱至85℃持續22小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。濃縮反應混合物，且殘餘物藉由急驟層析(SiO2 ，100%庚烷至1:10 MeOH/EtOAc)純化，得到呈黃色固體之標題化合物(344 mg，73%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ = 8.72 - 8.65 (m, 1H), 8.13 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.91 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.13 - 4.85 (m, 4H), 4.25 - 4.08 (m, 1H), 3.10 - 2.96 (m, 6H), 2.96 - 2.93 (m, 3H), 2.66 - 2.58 (m, 1H), 2.07 - 1.94 (m, 1H), 1.87 - 1.74 (m, 1H), 1.53 (s, 1H), 1.50 - 1.35 (m, 9H), 1.23 (dd,J = 2.8, 6.6 Hz, 6H), 1.00 - 0.87 (m, 3H)；(C30 H40 N8 O3 )之LCMSm/z (APCI)為561.3 (M+H)+ 。
步驟2：實例 201
向裝備有磁性攪拌棒且含有[(2-{6-[(5S )-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)甲基]甲基胺基甲酸三級丁酯(344 mg，0.62 mmol)及CH2 Cl2 (12.3 mL，0.05 M)之燒瓶中添加HCl (4 M於1,4-二㗁烷中，1.53 mL，6.2 mmol)。在室溫下攪拌20小時之後，LCMS分析顯示起始物質耗盡。將甲苯(5 mL)添加至反應燒瓶中且濃縮反應混合物。使粗殘餘物通過強離子交換(SCX)管以移除殘餘HCl且濃縮，得到呈黃色固體之實例 201 (278 mg，98%產率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ = 8.59 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 8.11 - 8.03 (m, 1H), 8.00 - 7.96 (m, 1H), 6.77 (s, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.25 (s, 1H), 5.08 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.01 - 2.88 (m, 6H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.05 - 1.93 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 1H), 1.16 (d,J = 6.7 Hz, 6H), 0.92 (t,J = 7.4 Hz, 3H)；(C25 H32 N8 O)之LCMSm/z (APCI)為461.3 (M+H)+ 。
實例 202 ：2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲胺基)甲基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image388
步驟1：[(2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)甲基]甲基胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image390
在N2 下向甲基({6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}甲基)胺基甲酸三級丁酯(中間物8) (90 mg，0.25 mmol)、(5S )-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑(中間物7) (74.2 mg，0.250 mmol)及K3 PO4 (159 mg，0.749 mmol)於1,4-二㗁烷(8 mL)中之混合物中添加Pd2 (dba)3 (22.9 mg，0.025 mmol)及XantPhos (28.9 mg，0.0499 mmol)。在添加之後，混合物用N2 鼓泡2分鐘。將所得混合物密封且在85℃下攪拌18小時。向反應混合物中添加鹽水(30 mL)。用EtOAc (20 mL×2)萃取混合物。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且真空濃縮，得到棕色固體(250 mg)。物質藉由急驟層析(SiO2 ，DCM/EtOAc=1:1)純化，得到呈黃色固體之標題化合物(120 mg，83%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.69 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.16 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.96 - 7.86 (m, 1H), 6.72 (s, 1H), 5.40 (d,J = 30.1 Hz, 1H), 5.01 (dd,J = 48.3, 16.6 Hz, 4H), 4.71 (d,J = 14.5 Hz, 1H), 4.26 - 4.05 (m, 1H), 3.59 (t,J = 8.7 Hz, 1H), 3.39 (q,J = 9.0, 8.4 Hz, 1H), 3.22 - 3.05 (m, 3H), 3.02 (s, 3H), 2.92 - 2.82 (m, 1H), 2.19 - 1.96 (m, 4H), 1.77 - 1.71 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.26 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。(C30 H37 FN8 O3 )之LCMSm/z (ESI)為577.2 (M+H)+ 。
步驟2：實例 202
在0℃下向[(2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H -吡咯并[2,1-c ][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基)甲基]甲基胺基甲酸三級丁酯(120 mg，0.208 mmol)於DCM (8 mL)中之懸浮液中逐滴添加於EtOAc (4 mL，4 M)中之HCl。在室溫下攪拌混合物2小時且藉由LCMS監測。隨後將反應混合物冷卻至0℃且添加於EtOAc (5.0 mL，4 M)中之HCl。在室溫下攪拌混合物30分鐘。真空濃縮混合物，得到黃色固體(100 mg)。向殘餘物中添加水(10 mL)且用EtOAc (10 mL)洗滌。凍乾水層16小時，得到呈黃色固體之實例 202 (94 mg，88%，HCl鹽)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.21 - 9.00 (m, 2H), 8.61 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.14 - 8.08 (m, 1H), 8.06 - 8.02 (m, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.43 - 5.29 (m, 1H), 5.23 (d,J = 16.6 Hz, 1H), 5.09 - 4.91 (m, 3H), 4.40 - 4.29 (m, 3H), 3.70 - 3.59 (m, 1H), 3.13 - 2.92 (m, 3H), 2.79 - 2.71 (m, 4H), 2.15 - 1.96 (m, 3H), 1.77 - 1.70 (m, 1H), 1.21 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。(C25 H29 FN8 O)之LCMSm/z (ESI)為477.4 (M+H)+ 。 表7
實例編號 結構 IUPAC 名稱，旋光度 LRMS (m/z) (M+H)+ ^ 1 H NMR
203    (B)*      
Figure 02_image392
 2-{6-[(5R )-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-6-[(2R )-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -155.8° 473.3    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.59 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 8.11 - 8.03 (m, 1H), 8.00 - 7.96 (m, 1H), 6.77 (s, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.25 (s, 1H), 5.08 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.01 - 2.88 (m, 6H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.05 - 1.93 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 1H), 1.16 (d,J = 6.7 Hz, 6H), 0.92 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
204    (B)*      
Figure 02_image394
 2-{6-[(5R )-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +210.0° 461.1    1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.70 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.15 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.91 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.14 - 5.03 (m, 2H), 4.98 - 4.91 (m, 2H), 3.94 - 3.85 (m, 2H), 3.09 - 2.98 (m, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.64 - 2.58 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.10 (ddd,J = 3.4, 7.5, 13.7 Hz, 1H), 1.78 - 1.74 (m, 1H), 1.23 (d,J = 6.7 Hz, 6H), 1.01 (t,J = 7.5 Hz, 3H).
205    (K)*      
Figure 02_image396
 2-{6-[(5R )-5-(氟甲基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 465.4    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.26 (br. s, 2H), 8.59 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.10 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 8.03 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.42 (br. d,J = 8.0 Hz, 1H), 5.25 (d,J = 16.6 Hz, 1H), 5.09 - 4.93 (m, 4H), 4.40 - 4.27 (m, 2H), 3.12 - 2.95 (m, 3H), 2.93 (s, 3H), 2.77 - 2.70 (m, 4H), 1.17 (d,J = 6.5 Hz, 6H).
206    (B)*      
Figure 02_image398
 6-(二甲基胺基)-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +70.7° 433.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.10 - 8.03 (m, 1H), 7.99 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.27 (d,J = 17.1 Hz, 1H), 5.08 - 4.94 (m, 2H), 4.06 - 3.94 (m, 2H), 3.15 (br. s, 6H), 3.05 - 2.87 (m, 4H), 2.81 (s, 1H), 2.49 - 2.47 (m, 3H), 2.04 - 1.89 (m, 1H), 1.79 - 1.67 (m, 1H), 0.91 (t,J = 7.3 Hz, 3H).
207    (B)*      
Figure 02_image400
 6-(二甲基胺基)-2-{6-[(5R )-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -71.8° 433.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 8.09 - 8.01 (m, 1H), 8.00 - 7.95 (m, 1H), 6.80 (s, 1H), 5.27 (d,J = 17.1 Hz, 1H), 5.10 - 4.95 (m, 2H), 3.85 (br. s, 2H), 3.11 (s, 6H), 3.03 - 2.87 (m, 4H), 2.81 (s, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.06 - 1.92 (m, 1H), 1.74 (br. d,J = 8.1 Hz, 1H), 0.91 (t,J = 7.3 Hz, 3H).
208    (B)*      
Figure 02_image402
 6-(二甲基胺基)-4-[(甲基胺基)甲基]-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = +58.5° 419.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (dd,J = 3.2, 8.1 Hz, 1H), 8.09 - 8.03 (m, 1H), 7.97 (dd,J = 5.3, 7.0 Hz, 1H), 6.81 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 5.34 - 5.23 (m, 1H), 5.19 - 4.96 (m, 2H), 3.90 (br. d,J = 8.6 Hz, 2H), 3.28 - 3.26 (m, 3H), 3.14 - 3.08 (m, 6H), 3.08 - 2.86 (m, 4H), 2.85 - 2.79 (m, 1H), 2.45 - 2.36 (m, 3H).
209    (B)*      
Figure 02_image404
 6-(二甲基胺基)-4-[(甲基胺基)甲基]-2-{6-[(5R )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮    α = -91.8° 419.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.58 (ddd,J = 0.7, 3.2, 8.3 Hz, 1H), 8.11 - 8.00 (m, 1H), 8.01 - 7.93 (m, 1H), 6.79 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 5.34 - 5.24 (m, 1H), 5.20 - 4.95 (m, 2H), 3.93 - 3.73 (m, 2H), 3.28 - 3.25 (m, 3H), 3.13 - 3.08 (m, 6H), 3.06 - 2.77 (m, 4H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.41 - 2.35 (m, 3H).
210    (B)*      
Figure 02_image406
 4-[(甲基胺基)甲基]-2-{6-[(5S )-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 447.4    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.57 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 8.05 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.31 - 5.21 (m, 1H), 5.20 - 5.07 (m, 2H), 4.95 (td,J = 6.8, 13.4 Hz, 1H), 3.92 - 3.79 (m, 2H), 3.17 - 2.89 (m, 4H), 2.88 (s, 3H), 2.41 - 2.39 (m, 3H), 1.52 (br. d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.15 (d,J = 6.8 Hz, 6H).
211    (L)*      
Figure 02_image408
 2-{6-[(5S ,7S )-5,7-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 461.3    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.58 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 8.10 - 8.05 (m, 1H), 8.01 - 7.97 (m, 1H), 7.48 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.11 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.30 - 5.22 (m, 1H), 5.15 - 5.04 (m, 2H), 5.02 - 4.95 (m, 1H), 4.11 (br. s, 2H), 3.50 (s, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.64 - 2.56 (m, 4H), 2.29 (s, 1H), 1.53 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 1.38 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.16 (d,J = 6.7 Hz, 6H).
212    (L)*      
Figure 02_image410
 2-{6-[(5S ,7R )-5,7-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基胺基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮 461.2    1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.57 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 8.07 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 - 7.44 (m, 1H), 7.10 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.21 (s, 1H), 5.11 - 4.93 (m, 3H), 4.11 (br. s, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.57 (br. s, 2H), 2.29 (s, 1H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 1.55 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.43 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.16 (d,J = 6.6 Hz, 6H)。缺失4個質子，咸信所有質子均在水或DMSO峰下。
*圓括號內之字母為製備實例之方法。 ^ 除非另外指明，否則為[M+H]+ 。
實例 300 ：6-(二甲基胺基)-4-[(甲基胺基)甲基]-2-[6-(4-丙基l-4H -1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-1-酮
Figure 02_image412
步驟1：({6-(二甲基胺基)-1-側氧基-2-[6-(4-丙基-4H -1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基}甲基)甲基胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image414
用N2 脫氣{[6-(二甲基胺基)-1-側氧基-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c ]吡啶-4-基]甲基}甲基胺基甲酸三級丁酯(中間物 11 ) (1.33 g，4.15 mmol)、2-溴-6-(4-丙基l-4H -1,2,4-三唑-3-基)吡啶(中間物12) (1.16 g，4.36 mmol)、Pd2 (dba)3 (380 mg，0.415 mmol)、XantPhos (480 g，0.830 mmol)及K3 PO4 (2.64 g，12.5 mmoL)於1,4-二㗁烷(46 mL)中之混合物5分鐘，且接著在85℃下攪拌16小時。藉由LCMS分析反應物，其顯示起始物質耗盡。將混合物冷卻至室溫，經由Celite® 襯墊過濾，且在真空下濃縮。用EtOAc (15 mL)將殘餘物漿化10分鐘且藉由過濾收集固體。用EtOAc(4×)洗滌濾餅，且接著在真空下乾燥。殘餘物藉由急驟層析法(40 g SiO2 ，0-100% EtOAc/庚烷，接著10% MeOH/EtOAc)純化，得到淡黃色固體。將物質溶解於1:9 EtOH/DCM中且用超純Si-硫基SiO2 (1.59 g)處理。攪拌混合物2小時且過濾。用1:9 EtOH/DCM洗滌濾餅且在真空下濃縮經組合之濾液。將殘餘物溶解於1:9 EtOH/DCM中且用超純Si-硫基SiO2 (1.32 g)處理。攪拌混合物3小時且接著過濾。用1:9 EtOH/DCM洗滌濾餅且濃縮經組合之濾液。將殘餘物溶解於1:9 EtOH中且用超純Si-硫基SiO2 (1.22 g)處理。攪拌混合物16小時且接著過濾。用1:9 EtOH/DCM洗滌濾餅。將合併之濾液濃縮至乾燥，得到呈淡黃色固體之標題化合物(2.08 g，95%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.74 (s, 1H), 8.61 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.09 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.97 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 5.05 (d,J = 11.7 Hz, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.52 - 4.46 (m, 2H), 3.09 (s, 6H), 2.92 (s, 3H), 1.88 - 1.76 (m, 2H), 1.40 - 1.19 (m, 9H), 0.87 (t,J = 7.4 Hz, 3H)；(C26 H34 N8 O3 )之LCMSm/z (ESI+)為507.4 (M+H)+ 。
步驟2：實例 300
在0℃下向({6-(二甲基胺基)-1-側氧基-2-[6-(4-丙基-4H -1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氫-1H -吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基)甲基胺基甲酸三級丁酯(1.96 g，3.87 mmol)於MeOH (20 mL)中之懸浮液中緩慢添加HCl (4.0 M，於1,4-二㗁烷中，19.3 mL，77.4 mmol)。在0℃下攪拌混合物3小時且接著使其緩慢升溫至室溫。在室溫下攪拌混合物16小時。將反應物濃縮至乾燥。將固體溶解於1:9 MeOH/DCM (80 mL)中，冷卻至0℃，且隨後用飽和Na2 CO3 溶液(25 mL)攪拌20分鐘。分離混合物。用1:19 MeOH/DCM(3×50 mL)萃取水層。合併之有機層用H2 O (2×30 mL)洗滌且經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。在40℃下在EtOAc中將固體漿化40分鐘。藉由過濾收集固體。濾餅用EtOAc洗滌且接著在真空烘箱中在30℃下乾燥16小時以提供呈黃色固體之實例 300 (1.42 g，90%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.73 (s, 1H), 8.62 (dd,J = 8.4, 1.0 Hz, 1H), 8.11 - 8.04 (m, 1H), 8.00 (dd,J = 7.7, 1.0 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.57 (dd,J = 7.9, 6.5 Hz, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.09 (s, 6H), 2.35 (s, 3H), 1.88 (h,J = 7.4 Hz, 2H), 0.93 (t,J = 7.4 Hz, 3H)；(C21 H26 N8 O)之LCMSm/z (ESI+)為407.3 (M+H)+ 。生物分析及資料
HPK1 生物化學酶分析
HPK1酶抑制藉由使用基於螢光之螯合增強螢光(CHEF)方法(1)及藉由使用專用螢光肽受質來量測，其中半胱胺酸殘基用基於磺醯胺基-咢辛之衍生物烷基化，得到稱為C-Sox (CSx)之胺基酸。反應在96孔盤中之50個µL體積中進行，且含有0.5 nM人類全長自體磷酸化重組HPK1 (參見以下用於生產方法)、3 µM磷酸受體肽受質(Ac-[CSx]HSLPRFNR-胺肽受質，亦稱為AQT0178，AssayQuant Technologies Inc., Hopkinton, MA)、測試化合物(11劑量，3倍連續稀釋，最終2%DMSO)；或僅DMSO、0.002%Tween-20、1 mM DTT及2.5 mM MgCl2 於50 mM MOPS (3-(N-𠰌啉基)丙磺酸)緩衝液，pH 7.8，且藉由添加45 µM ATP啟動，然後開始20分鐘之預培育。最初反應速度藉由用Tecan M1000盤讀取器(Tecan Group Ltd., Männedorf, Zürich, Switzerland)在30℃下跟蹤肽螢光(λex = 360 nm，λem = 500 nm) 15分鐘來確定。抑制常數(K i )值藉由使用非線性回歸方法及實驗量測之明顯ATPK m (19 µM)，針對緊密結合競爭性抑制，藉由將初始反應速度擬合至莫里森等式(Morrisone quation) (2)來計算。由動力學及結晶學研究顯示抑制劑為ATP競爭性的。
產生自體磷酸化全長重組 HPK1
編碼全長人類HPK1(Genbank NM_001042600.2)之DNA序列在GenScript處合成且含有有限數目之沉默鹼基變化以消除某些限制性核酸內切酶識別位點，並融合至編碼菸草蝕刻病毒(Tobacco Etch Virus；TEV)可裂解N端聚組胺酸純化標籤之DNA序列。重組桿狀病毒藉由使用Bac-to-Bac方法(InVitrogen)製備且用於感染9 LSf 21昆蟲細胞。所有純化步驟均在4℃下進行。將含有重組HPK1之細胞在每75 mL含有以下各者之緩衝液中裂解：50 mM HEPES-NaOH，pH 7.5；250 mM NaCl；1 mM參(2-羧基乙基)膦(TCEP)；10 µM亮肽素(leupeptin)(Sigma)；10 µM E-64蛋白(Sigma)及一錠「不含EDTA」之蛋白酶抑制劑錠劑(Roche)，以15,000×g 離心1小時，且使上清液通過5 mL之ProBond IMAC樹脂(InVitrogen)。在洗滌之後，HPK1用12.5 mL之50 mM HEPES-NaOH，pH 7.5；400 mM NaCl；250 mM咪唑-HCl pH 7.5；1 mM TCEP；2 µM亮肽素及2 µM E-64溶離。相對於0.8 L之50 mM HEPES-NaOH，pH 7.5；400 mM NaCl；20 mM咪唑-HCl pH 7.5；1 mM TCEP；2 uM亮肽素；2 uM E-64；2 mM ATP-NaOH pH 7.3；5 mM MgCl2 及1 mg TEV將溶離HPK1透析隔夜(此步驟同時允許降低咪唑濃度，為後續之反向IMAC層析步驟做準備，藉由TEV蛋白酶移除聚組胺酸純化標籤，以及在MgATP存在下HPK1之自體磷酸化)。將去標籤及自體磷酸化HPK1調節至40 mM咪唑-HCl，pH 7.5，且通過類似平衡之10 mL ProBond樹脂管柱。將通過管柱之去標籤HPK1濃縮至大約7 mL，且進一步藉由凝膠過濾經Superdex 26/60尺寸排阻管柱(GE Healthcare)純化，平衡且在41.7 mM HEPES-NaOH緩衝液(pH 7.5，含有417 mM NaCl及0.417 mM TCEP)中處理。合併含有HPK1之峰值溶離份且藉由使用離心濃縮器(Millipore)濃縮至大約2.5 mL。藉由添加50% (v/v)甘油將濃縮HPK1調節至20% (v/v)甘油，產生25 mM HEPES-NaOH，pH 7.5；250 mM NaCl；0.25 mM TCEP及20% (v/v)甘油之最終調配物。如藉由布拉福分析(Bradford assay) (Pierce試劑)及使用牛血清白蛋白(Pierce 2 mg/mL標準品)作為蛋白質標準品所測定，最終蛋白質濃度為大約1 mg/mL。質譜分析指示自體磷酸化HPK1每單體平均含有15個磷酸酯。在液氮中急驟冷凍酶之等分試樣且在-80℃下儲存。由於選殖策略，最終產物在全長蛋白質之N端處含有甘胺酸-絲胺酸延伸序列。
N端加標籤之全長HPK1 (SEQ ID NO. 1)之最終DNA序列包含在移除純化標籤之後的固相線之後的序列(加下劃線)，其編碼全長HPK1及額外5'-GGATCCBam H I選殖位點序列(SEQ ID NO. 3)：
Figure 02_image416
此提供(SEQ ID NO. 1)：
Figure 02_image418
Figure 02_image420
N端加標籤之全長HPK1(SEQ ID NO. 2)之最終蛋白質序列包含在移除純化標籤之後的固相線之後的序列(加下劃線)，其中自Bam H I選殖位點序列(SEQ ID NO. 4)編碼額外N端GlySer序列：
Figure 02_image422
此產生(SEQ ID NO. 2)：
Figure 02_image424
基於細胞之分析
磷酸化 -SLP-76 (Ser376) 均相時差式 螢光 (HTRF) 分析
Jurkat細胞以90,000個細胞/孔接種於90 μL之含有10% FBS之RPMI1640生長培養基中，且在37℃下在有5% CO2 下培育隔夜。第二天，化合物用DMSO自11點3倍稀釋曲線之10mM之最高劑量連續稀釋。化合物在中間1:100稀釋至生長培養基中，之後用0.1% DMSO 1:10稀釋於細胞上，使最終濃度為10 μM至0.1 nM。在用化合物預處理30分鐘之後，在37℃下在有5% CO2 下使用200 µg/mL之F(ab)2複合抗CD3(純系UCTH1)刺激細胞15分鐘。用冰冷PBS中止刺激且藉由離心收集細胞，之後溶解於Cisbio溶解緩衝劑(Cisbio, Bedford, MA)中。將溶胞物轉移至含有抗磷酸化-SLP-76-穴狀化合物加抗磷酸化-SLP-76-d2 HTRF抗體之白色低容量盤中，且根據製造商之方案(Cisbio, Bedford, MA)在室溫下避光培育隔夜。HTRF經Perkin Elmer Envision來量測且IC50值藉由濃度-反應曲線擬合利用四參數非線性回歸分析來計算。
化合物之生物活性資料提供於表8中。HPK1 CHEF之資料提供於表8中，具有列標題HPK1 Ki (µM)。細胞磷酸化SLP-76 (Ser376)均相時差式螢光(HTRF)分析之資料提供於表8中，具有列標題pSLP76 IC50 (µM)。對於此等兩種分析中之每一者，對應相鄰列提供分析中測試化合物之次數。生物化學選擇性激酶分析 .
PRKD2 (PKD2)及RPS6KA2 (RSK3)激酶分析基於磷酸化及非磷酸化肽對蛋白水解裂解之差異敏感性，使用其Invitrogen™SelectScreen™螢光共振能量轉移(FRET)Z'-LYTE™技術，在賽默飛世爾科技公司(威斯康星州麥迪遜(Madison, WI)之ATP之Km-含量下進行。人類重組全長GST加標籤之PRKD2 (PKD2)及RPS6KA2(RSK3)由賽默飛世爾科技公司(威斯康星州麥迪遜)生產。在10 μL反應中進行激酶分析。PRKD2(PKD2)反應含有含0.64至5.84 ng酶、25 μM ATP(約Km)、2 μM Ser/Thr 17(Z'-LYTE™肽受質)、10 mM MgCl2 、0.01% BRIJ-35、1 mM EGTA之50 mM HEPES，pH 7.5。類似地進行RPS6KA2 (RSK3)反應，且含有0.5至9 ng酶，或10 μM ATP(約Km)及2 μM Ser/Thr 06肽。在1小時激酶反應培育之後，將5 μL之1:256及1:4096稀釋之Z'-LYTE™顯色試劑A分別添加至PRKD2 (PKD2)及RPS6KA2 (RSK3)反應。量測激酶反應之程度，導致肽受質之FRET信號變化，且相對於DMSO對照量測針對各激酶之抑制且報告為重複量測之平均值。各50%抑制濃度(IC50 )測定係基於10劑量重複量測，使用來自IDBS (Guildford, United Kingdom)之XLfit軟體擬合標準四參數IC50 方程式。將劑量反應曲線擬合至模型編號205(S形劑量反應模型)。PRKD2 IC50 與HPK1 Ki之比率及RSK3 IC50 與HPK1 Ki之比率提供於靠近PRKD2 IC50 及RSK3 IC50 之列之各別列中。
其中R3a 及R3b 中之至少一者不為氫之α分支鏈胺類似物相對於其他激酶(包括PRKD2及RSK3)相對於非α分支鏈胺化合物(例如實例300)大大改良了對HPK1之選擇性。相對於非環狀化合物，例如實例300，在R4 為(R4 -ii)之情況下，環狀、稠合三唑，例如式I-B化合物提供生物化學及細胞效能改良。 表8
實例編號 HPK1 Ki (µM)    HPK1 Ki 輪次之編號 pSLP76 IC50 (µM) pSLP76 輪次之編號 PRKD2 IC50 (nM)    PRKD2 IC50 / HPK1 Ki RSK3 IC50 (nM)    RSK3 IC50 /HPK1 Ki
1 ＜0.00005 8 0.017 6 155 ＞3100 47.0 ＞940
2 ＜0.00005 3 0.03 3 116 ＞2320 21.3 ＞420
3 ＜0.00005 2 0.034 1 6.54 ＞130 3.33 ＞66
4 ＜0.00005 2 0.036 1 217 ＞4304 25.8 ＞520
5 ＜0.00005 2 0.031 1 251 ＞5020 53.5 ＞1080
6a 0.00019 1 0.069 2 942 4958 48.6 256
6b 0.0061 1 0.641 1            
7 0.0028 1                  
8 0.0056 2                  
9 0.00049 2 0.115 1            
10 0.00013 1 0.147 1            
11 0.00972 1                  
12 0.00198 1                  
13 ＜0.00007 3 0.036 2            
14 0.00093 3 0.34 1            
15 0.00847 1                  
16 0.000093 1 0.487 1            
17 ＜0.00005 1 0.023 2            
18 ＜0.00005 2 0.042 3            
19 0.00015 1                  
20 ＜0.00005 2 0.023 2            
21 0.000064 1 0.046 1            
22 0.00008 2 0.133 2            
23 0.005 3 0.329 2            
24 0.00176 1                  
25 ＜0.00005 2 0.053 5            
26 0.00072 1 0.133 1            
27 ＜0.00005 2 0.056 2            
28 ＜0.000045 2 0.064 1            
29 0.0002 3 0.072 2            
30 ＜0.00005 1 0.062 2            
31 ＜0.00005 1 0.042 1            
32 0.00006 1 0.046 1            
33 0.00021 1 0.179 1            
34 0.00015 1 0.026 2            
35 0.0003 1 0.181 2            
36 0.000074 1 0.110 2            
37 ＜0.00005 1 0.049 1            
38 0.00018 1 0.197 2            
100 ＜0.00005 4 0.039 4 51.2 ＞1020 15.5 ＞320
101 0.00017 3 0.118 1            
102 0.00011 3 0.107 1            
103 0.00138 2                  
104 0.00236 2                  
105 0.00201 2                  
106 0.0105 1                  
107 0.00102 2 0.140 1            
108 0.00061 2 0.084 1            
109 0.00031 1 0.061 1            
110 0.00009 2 0.042 2            
111 0.00342 1 0.470 1            
112 0.00077 1 0.421 1            
113 0.00067 1 0.133 2            
114 0.00041 2 0.148 3            
115 0.00056 2 0.216 4            
116 0.00064 1 0.214 1            
117 0.00102 1 0.270 1            
118 0.00150 1 0.324 1            
119 0.00090 1 0.165 2            
120 0.00297 1 0.531 1            
121 0.00412 2 0.553 2            
122 0.00078 1 0.354 1            
123 0.00097 1 0.243 1            
124 0.00037 2 0.098 2            
125 0.00142 1                  
126 0.00178 1                  
127 0.00141 1                  
128 0.00103 1 0.194 1            
129 0.00028 1 0.097 2            
130 0.0004 1 0.077 2            
131 0.00102 3 0.094 1            
132 0.00038 1 0.148 1            
133 0.00012 1 0.095 2            
134 0.00022 2 0.106 2            
135 0.00037 1 0.143 2            
136 0.00022 1 0.09 2            
137 0.00075 1 0.189 2            
138 0.00096 1 0.332 1            
139 0.00027 1 0.104 2            
140 ＜0.00007 3 0.053 3            
141 0.00044 1                  
142 0.00154 1                  
143 0.00373 1                  
144 0.00011 1 0.090 3            
145 0.00046 1                  
146 0.00314 1                  
147 0.001 1                  
148 0.0004 1 0.096 2            
149 0.0006 1 0.171 2            
150 0.00011 1 0.059 1            
151 0.00012 1 0.033 1            
152 0.00153 1 0.191 1            
153 0.00125 1                  
154 0.00025 1 0.120 1            
155 0.00024 1 0.113 2            
200 ＜0.00005 2 0.016 4 7.97 ＞160 10.1 ＞200
201 ＜0.00005 1 0.037 1 5.43 ＞108 6.73 ＞134
202 0.00006 1 0.025 2 6.54 108 40.1 667
203 0.00104 1 0.182 3            
204 0.00129 1                  
205 ＜0.00005 2 0.052 2            
206 0.00012 1 0.078 2            
207 0.00268 1                  
208 0.0006 2 0.085 2            
209 0.00211 1                  
210 ＜0.00005 2 0.047 3            
211 ＜0.00005 1 0.078 2            
212 0.00032 1 0.159 1            
300 0.00014 1 0.094 4 1.93 14 6.26 23
表8中之空白框意謂未獲得之資料。
本說明書中所引用之所有公開案及專利申請案均以全文引用的方式併入本文中。一般熟習此項技術者將顯而易見，可在不脫離所附申請專利範圍之精神或範疇的情況下對其作出某些改變及修改。
Figure 110115720-A0101-11-0002-3

Claims (22)

  1. 一種式I化合物，
    Figure 110115720-A0305-02-0196-1
     或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中：R1為(C1-C6)烷基、鹵基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵基(C1-C6)烷氧基、-N(R5)(R6)或(C3-C6)環烷基，其中該(C1-C6)烷基、鹵基(C1-C6)烷基及(C3-C6)環烷基經0或1個為羥基、氰基、(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷氧基之取代基取代，其中：R5及R6各自獨立地為氫或經0、1或2個獨立地選自由鹵素、(C1-C6)烷氧基、氰基及羥基組成之群的取代基取代的(C1-C6)烷基，或R5及R6與其所連接之氮一起形成(4員至8員)雜環烷基，該(4員至8員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自由以下組成之群的取代基取代：鹵素、(C1-C6)烷基、鹵基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基及鹵基(C1-C6)烷氧基；R2為N(R7)(R8)，其中：R7及R8各自獨立地為氫或經0或1個為鹵素、(C1-C6)烷氧基、氰基或羥基之取代基取代的(C1-C6)烷基；或R7為氫或經0或1個為鹵素、(C1-C6)烷氧基、氰基或羥基之取代基取代的(C1-C6)烷基；且R8與其所連接之氮一起以及與R3a及其所連接 之碳一起形成(4員至6員)雜環烷基，該(4員至6員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自鹵素、羥基、(C1-C3)烷基、鹵基(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基及鹵基(C1-C6)烷氧基之取代基取代；或R7及R8與其所連接之氮一起形成(4員至6員)雜環烷基，該(4員至6員)雜環烷基經0、1或2個獨立地選自由以下組成之群的取代基取代：鹵素、羥基、(C1-C6)烷基、鹵基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基及鹵基(C1-C6)烷氧基；R3a為氫或經0或1個為羥基或(C1-C3)烷氧基之取代基取代的(C1-C3)烷基；R3b為氫或(C1-C3)烷基，其限制條件為當R4為(R4-i)時，R3a及R3b皆不為H；R4為(R4-i)或(R4-ii)：
    Figure 110115720-A0305-02-0197-3
    Figure 110115720-A0305-02-0197-4
     其中：R4N為(C1-C6)烷基、鹵基(C1-C6)烷基或(C3-C6)環烷基，其中該(C1-C6)烷基經0或1個為羥基之取代基取代； R4C為氫、(C1-C6)烷基、鹵基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵基(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)環烷基，其中該(C1-C6)烷基及鹵基(C1-C6)烷基經0或1個為羥基、氰基或(C1-C6)烷氧基之取代基取代；R4D為氫、(C1-C6)烷基、鹵基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵基(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)環烷基，其中該(C1-C6)烷基及鹵基(C1-C6)烷基經0或1個為羥基、氰基或(C1-C6)烷氧基之取代基取代；R4E為氫、鹵素、氰基、羥基或(C1-C6)烷基；及R4F為氫、鹵素、氰基、羥基、(C1-C6)烷基、鹵基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵基(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)環烷基，其中該(C1-C6)烷基及鹵基(C1-C6)烷基經0或1個為羥基、氰基或(C1-C6)烷氧基之取代基取代。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R4為(R4-i)；R4N為(C1-C6)烷基或(C3-C6)環烷基；及R4C為氫或(C1-C3)烷基。
  3. 如請求項1或請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R1為-N(R5)(R6)或(C3-C6)環烷基，其中該(C3-C6)環烷基為環丙基且經0或1個為(C1-C6)烷基之取代基取代，其中該(C1-C6)烷基為甲基；R5及R6各自獨立地為氫或(C1-C3)烷基，或R5及R6與其所連接之氮一起形成經0或1個為(C1-C6)烷基之取代基取 代的(5員)雜環烷基；R2為N(R7)(R8)，其中R7及R8各自獨立地為氫或為甲基之(C1-C6)烷基；R3a為經0或1個為(C1-C3)烷氧基之取代基取代之(C1-C3)烷基；及R3b為氫或(C1-C3)烷基。
  4. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R4為(R4-ii)；R4D為氫、(C1-C6)烷基或鹵基(C1-C6)烷基，其中該(C1-C6)烷基經0或1個為羥基之取代基取代；R4E為氫；及R4F為氫、(C1-C6)烷基或鹵基(C1-C6)烷基，其中該(C1-C6)烷基經0或1個為羥基之取代基取代。
  5. 如請求項1或請求項4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R1為-N(R5)(R6)或(C3-C6)環烷基，其中該(C3-C6)環烷基為環丙基且經0或1個為(C1-C6)烷基之取代基取代，其中該(C1-C6)烷基為甲基；R5及R6各自獨立地為氫或(C1-C3)烷基，或R5及R6與其所連接之氮一起形成經0或1個為(C1-C6)烷基之取代基取代的(5員)雜環烷基；R2為N(R7)(R8)，其中R7及R8各自獨立地為氫或為甲基之(C1-C6)烷基； R3a為氫或經0或1個為(C1-C3)烷氧基之取代基取代之(C1-C3)烷基；及R3b為氫或(C1-C3)烷基。
  6. 如請求項1、2或4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R1為2-甲基-吡咯啶-1-基或2(R)-甲基-吡咯啶-1-基。
  7. 如請求項1、2或4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R7及R8各自為氫。
  8. 如請求項1、2或4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R7為氫；且R8為(C1-C3)烷基。
  9. 如請求項1、2或4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R3b為氫，且其中R2、R3a及R3b之取向提供式I(R)或式I(S)化合物：
    Figure 110115720-A0305-02-0200-5
  10. 如請求項1、2或4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R4為5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5R)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基或(5R)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基，其中該甲基經0或1個為F或OH之取代基取代。
  11. 如請求項10之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物，其中R4為(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基或(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基，其中該甲基經0或1個為F或OH之取代基取代。
  12. 一種化合物，其為：4-[1-胺基丙基]-2-{6-[5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[1-胺基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[1-胺基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1s,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[1-胺基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑 -3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[1-胺基丙基]-2-{3-[5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或4-[1-胺基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物。
  13. 如請求項12之化合物，其中該化合物為4-[(1R)-1-胺基丙基]-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[(1R)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[(1S)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[(1R)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[(1R)-1-胺基丙基]-2-{3-[(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；4-[(1R)-1-胺基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或4-[(1S)-1-胺基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基環丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物。
  14. 一種化合物，其具有以下結構：
    Figure 110115720-A0305-02-0203-6
  15. 一種化合物，其為4-[(1R)-1-胺基丙基]-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物。
  16. 一種化合物，其為4-[(1R)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽、立 體異構體或水合物。
  17. 一種化合物，其為4-[(1S)-1-胺基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物。
  18. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
  19. 一種如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物之用途，其用於製造用於治療哺乳動物之異常細胞生長的藥劑。
  20. 如請求項19之用途，其中該異常細胞生長為癌症。
  21. 一種如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、立體異構體或水合物之用途，其用於製造用於治療哺乳動物之異常細胞生長的藥劑，其中該化合物或其醫藥學上可接受之鹽與額外抗癌治療劑一起投與。
  22. 如請求項20之用途，其中該癌症係選自由以下組成之群：乳癌、卵 巢癌、膀胱癌、子宮癌、前列腺癌、肺癌、食道癌、頭頸癌、大腸直腸癌、腎癌、肝癌、胰臟癌、胃癌及甲狀腺癌。
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