CN115698004A - 作为hpk1抑制剂的氮杂内酰胺化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通式I化合物及其药学上可接受的盐，
Figure DDA0003920000850000011
其中R1、R2、R3a、R3b和R4如本文所定义；包含此类化合物及盐的药物组合物；以及使用此类化合物、盐和组合物治疗包括癌症的异常细胞生长的方法。

Description

作为HPK1抑制剂的氮杂内酰胺化合物
技术领域
本发明涉及式I化合物及其药学上可接受的盐，涉及包含此类化合物及盐的药物组合物，以及涉及其用途。本发明的化合物、盐及组合物为HPK1抑制剂，且因此可用于在治疗或改善诸如癌症的异常细胞增殖性病症以及改善疫苗疗法中增强免疫系统的活化。
背景技术
造血祖细胞激酶1(Hematopoietic progenitor kinase 1，HPK1)亦称为丝裂原活化的蛋白质激酶激酶激酶激酶1(mitogen activated protein kinase kinase kinasekinase 1，MAP4K1)，为经由JNK及ERK信号传导路径操作之丝氨酸/苏氨酸激酶的哺乳动物Ste20样家族的成员。HPK1主要在造血器官及细胞(例如T细胞、B细胞及树突状细胞)中表达，表明HPK1可能参与调节造血谱系(包括淋巴细胞)中的信号传导(Shui等人,“Hematoppietic progenitor kinase 1negatively regulates T cell receptorsignaling and T cel-mediated immune responses”,Nature Immunology 8,84-91(2006))。
例如，T细胞受体(TCR)的刺激诱导HPK1酪氨酸379磷酸化且再定位至质膜。HPK1的酶活化伴随着HPK1激酶活化环中的调节位点的磷酸化。HPK1的完全活化取决于苏氨酸165的自体磷酸化及丝氨酸171的蛋白激酶D(PKD)的磷酸化(Arnold等人,“Activation ofHematopoietic Progenitor Kinase 1Involves Relocation,Autophosphorylation,andTransphosphorylation by Protein Kinase D1.”,Mol Cell Biol 25(6),2364-83(2005))。转接蛋白SLP76之HPK1介导的磷酸化最终致使TCR信号传导复合物不稳定，此阻碍并削弱T细胞活化以及增生所需的下游有丝分裂诱致剂活化之蛋白质(MAP)激酶信号传导事件(Hernandez等人,「The kinase activity of hematopoietic progenitor kinase1is esential for the regulation of T cell function」,Cell Reports 25,(1),80-94,(2018))。HPK1激酶亦展示通过PGE2受体以PKA依赖性方式负向调节T细胞信号传导。此外，已报导HPK1激酶在以下中具有作用：i)活化诱导的细胞死亡(activation-inducedcell death，AICD)和JNK活化；ii)通过与促进黏着和脱粒的转接蛋白(ADAP)直接竞争结合SLP76 SH2域来调节T细胞上与白细胞功能相关的抗原-1(LFA-1)整合素活化；以及iii)通过与IKK-α及IKK-β相互作用而经由核因子кB(nuclear factorкB，NF-κB)信号传导调节活化。研究亦展示HPK1负向调节T细胞中的MAP激酶路径信号传导和Ap-1转录(于Hernandez等人2018中综述)。
迄今为止对HPK1激酶进行的研究表明HPK1抑制在增强树突状细胞及T细胞反应方面起作用，且由此增强抗肿瘤免疫、病毒清除以及对疫苗疗法的反应。
发明内容
本发明部分提供式I化合物及其药学上可接受的盐。此类化合物可抑制HPK1激酶的活性，因而影响生物学功能。亦提供药物组合物及药剂，其包含单独的本发明化合物或盐或与额外抗癌治疗剂或姑息性药剂组合的本发明化合物或盐。
本发明亦部分提供制备本发明化合物、药学上可接受的盐及组合物的方法以及使用前述的方法。
在一个实施方案方案中，本发明提供一种式I化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003920000840000021
其中：
R1为(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基、-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基和(C3-C6)环烷基被0或1个为羟基、氰基、(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代，其中：
R5和R6各自独立地为氢或被0、1或2个独立地选自卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基和羟基的取代基取代的(C1-C6)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成(4至8元)杂环烷基，该(4至8元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自以下组中的取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基和卤代(C1-C6)烷氧基；
R2为N(R7)(R8)，其中：
R7和R8各自独立地为氢或被0或1个为卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基或羟基的取代基取代的(C1-C6)烷基；或
R7为氢或被0或1个为卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基或羟基的取代基取代的(C1-C6)烷基；且R8与其所连接的氮一起以及与R3a及其所连接的碳一起形成(4至6元)杂环烷基，该(4至6元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自卤素、羟基、(C1-C3)烷基、卤代(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基和卤代(C1-C6)烷氧基的取代基取代；或
R7和R8与其所连接的氮一起形成(4至6元)杂环烷基，该(4至6元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自以下组中的取代基取代：卤素、羟基、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基及卤代(C1-C6)烷氧基；
R3a为氢或被0或1个为羟基或(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；
R3b为氢或(C1-C3)烷基，其限制条件为当R4为(R4-i)时，R3a和R3b皆不为H；
R4为(R4-i)或(R4-ii)：
Figure BDA0003920000840000022
其中：
R4N为(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基被0或1个为羟基的取代基取代；
R4C为氢、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基和卤代(C1-C6)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代；
R4D为氢、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基及卤代(C1-C6)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代；
R4E为氢、卤素、氰基、羟基或(C1-C6)烷基；以及
R4F为氢、卤素、氰基、羟基、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基及卤代(C1-C6)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代。
本发明亦提供治疗方法和用途，其包括施用本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，本发明提供一种治疗有需要个体之异常细胞生长、尤其癌症的方法，其包括向个体施用治疗有效量之本发明化合物或其药学上可接受的盐。本发明化合物可以单一药剂施用，或可与其他抗癌治疗剂、尤其适合于尤其癌症之护理剂标准物组合施用。
另一实施方案中，本发明提供一种治疗有需要个体之异常细胞生长、尤其癌症的方法，其包含向个体施用一定量之本发明化合物或其药学上可接受的盐组合一定量之额外抗癌治疗剂，这些量合在一起有效治疗所述异常细胞生长。
在另一实施方案中，本发明涉及一种本发明化合物或其药学上可接受的盐，其是用作药物，尤其用于治疗癌症的药物。
在另一实施方案中，本发明涉及一种本发明化合物或其药学上可接受的盐，其是用于治疗个体的异常细胞生长，尤其癌症。
在另一实施方案中，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐的用途，其是用于治疗个体的异常细胞生长，尤其癌症。
在另一实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其是用于治疗有需要个体的异常细胞生长，该组合物包含本发明化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载剂或赋形剂。
在又一实施方案中，本发明提供如本文中所描述的式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗个体之异常细胞或病原体生长的药物中的用途。
在前述化合物、方法和用途之常见实施方案中，异常细胞生长是癌症。
在一些实施方案中，所提供的方法和用途引起以下效应中的一个或多个：(1)抑制癌细胞增殖；(2)抑制癌细胞侵袭力；(3)诱导癌细胞的细胞凋亡；(4)抑制癌细胞癌转移；(5)抑制血管生成；(6)增强T细胞反应；或(7)增强树突状及B细胞反应；(8)提高抗肿瘤活性；(9)增强疫苗治疗；以及(10)增强免疫系统介导之病原体的移除，诸如病毒、细菌或寄生虫(例如，肠内寄生虫)。
在另一实施方案中，本发明提供一种用于治疗HPK1依赖性病症及增强个体之免疫反应的方法，其包括向个体施用一定量之本发明化合物或其药学上可接受的盐，所述量有效治疗所述病症或增强所述免疫反应。
在一些实施方案中，本文所描述的方法和用途进一步包括向个体施用一定量的额外抗癌治疗剂、疫苗、抗细菌剂、抗病毒剂或缓和剂，它们的量一起有效治疗所述异常细胞生长或病原体。下文所述之本发明化合物的各实施方案可与本文所述本发明化合物之一或多种其他实施方案组合，该一或多种其他实施方案与其所组合的实施方案不矛盾。
应理解的是，前文一般描述及以下详细描述两者皆仅为例示性及解释性的，且并不限制所要求保护的本发明。
另外，下面描述本发明的各实施方案设想本发明化合物之药学上可接受的盐在其范畴内。因此，短语“或其药学上可接受的盐”隐含于本文所述之所有化合物的描述中。
具体实施方式
定义和例证
参考本发明之优选实施方案的以下详细描述及本文中所包括的实施例可更易于理解本发明。应理解，本文中所使用的术语是出于仅描述具体实施方案之目的，且并非意欲为限制性的。应进一步理解，除非在本文中加以特定限制，否则本文所用之术语具有其在相关技术中所知的传统含义。
如本文所用，除非另外指明，否则单数形式“一个(a/an)”及“该(所述)”包括复数个提及物。例如，“一个”取代基包括一或多个取代基。
术语“约”是指表示其指的标称值加或减10％之近似值的相对术语，在一个实施方案中是指加或减5％，在另一实施方案中是指加或减2％。在本发明的领域中，此近似值水平为适当的，除非具体陈述该值需要较紧密的范围。
在本说明书中各个位置处，本发明化合物的取代基以组或范围形式揭示。特别期望本发明包括所述组及范围之成员中的每个个别子组合。例如，术语“C1-6烷基”特定地意欲包括C1烷基(甲基)、C2烷基(乙基)、C3烷基、C4烷基、C5烷基及C6烷基。
如本文所用，“HPK1拮抗剂”或“HPK1抑制剂”是降低、抑制或以其他方式减少HPK1之一或多种生物活性(例如丝氨酸/苏氨酸激酶活性、在TCR活化时募集至TCR复合物、与蛋白质结合搭配物(诸如SLP76)相互作用)的分子。使用HPK1拮抗剂的拮抗作用未必指示完全消除HPK1活性。实际上，活性可降低统计学上显著的量。例如，与适当对照相比，本发明化合物可降低HPK1活性至少约2.5％至约100％、约10％至约90％、约20％至约70％、约30％至约60％、约40％至约50％。在一些实施方案中，HPK1拮抗剂降低、抑制或以其他方式减少HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在一些此等实施方案中，HPK1拮抗剂降低、抑制或以其他方式减少HPK1介导之SLP76和/或Gads的磷酸化。本发明所揭示的化合物直接结合至HPK1并抑制其激酶活性。
本文所述之发明可适当地在没有任何本文未特定揭示之要素的情况下加以实施。因此，例如，在本文之各情况下，术语“包含(包括)”、“基本上由……组成”及“由……组成”中之任一者可经另两个术语中之任一者置换。
如本文所用，术语“(Cx-Cy)烷基”是指含有x至y个碳原子的饱和、支链或直链烷基。例如，“(C1-C6)烷基”是含有1至6个碳原子的烷基且包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和正己基。术语“(C1-C3)烷基”含有1至3个碳原子且包括于“(C1-C6)烷基”内。
如本文所用，术语“卤代(Cx-Cy)烷基”是指如上文所定义的(Cx-Cy)烷基，其中烷基被一或多个卤素原子取代。卤素取代基的代表性数目为1至3个取代基。卤代(Cx-Cy)烷基的代表性实例包括但不限于氟甲基、氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基及三氟乙基。
如本文所用，术语“(Cx-Cy)烷氧基”是指经由氧原子连接于母分子部分的如上文所定义的(Cx-Cy)烷基。(C1-C6)烷氧基之代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基。
如本文所用，术语“卤代(Cx-Cy)烷氧基”是指其中烷氧基被一或多个卤素原子取代的如上文所定义的(Cx-Cy)烷氧基基。卤素取代基的代表性数目为1至3个取代基。卤代(Cx-Cy)烷氧基的代表性实例包括但不限于氟甲氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基、二氟乙氧基和三氟甲氧基、三氟乙氧基。
如本文所用，术语“环烷基”意谓含有至少三个碳原子的式-CnH(2n-1)的单价环烃基。“(C3-Cy)环烷基”是指具有3至y个碳原子的环烷基。“(C3-C6)环烷基”可为单环，其实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
如本文所用，“杂环烷基”是指如上文所定义之环烷基，其中至少一个环碳原子被选自氮、氧或硫的杂原子置换。如本文所用，其中n为整数之术语“n元”通常描述部分中成环原子的数量，其中成环原子的数量为n。术语“(4至6元)杂环烷基”意谓含有总共4至6个环原子的杂环烷基取代基，其中所述环原子中之至少一者为杂原子。术语“(4至8元)杂环烷基”是指含有总共4至8个环原子的杂环烷基取代基，其中所述环原子中之至少一者为杂原子。“(6元)杂环烷基”是指含有总共6个环原子的杂环烷基取代基，其中所述环原子中之至少一者为杂原子。“(5元)杂环烷基”是指含有总共5个环原子的杂环烷基取代基，其中所述环原子中之至少一者为杂原子。杂环烷基取代基可经由具有适当价态的氮原子或经由任何环碳原子连接。杂环烷基部分可视情况被一或多个取代基(如(C1-C6)烷基)在具有适当价态的氮原子处或在任何可用碳原子处取代。
杂环烷基环的实例包括但不限于氮杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡唑基、四氢噁嗪基(tetrahydrooxazinyl)、咪唑烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、噁唑烷基、四氢吡喃基、四氢-噁唑基、吗啉基和环氧丙烷基(oxetanyl)。
如本文所用，“卤代”或“卤素”是指氯、氟、溴或碘原子。
如本文所用，“羟基(hydroxy/hydroxyl)”是指-OH基团。
如本文所用，“氰基”意谓-CN基团，其亦可描绘成：
Figure BDA0003920000840000051
“患者”或“个体”是指温血动物，诸如猪、牛、鸡、马、豚鼠、小鼠、大鼠、沙鼠、猫、兔、狗、猴、黑猩猩及人类。
“药学上可接受的”是指物质或组成必须与包含调配物的其他成分和/或正用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上是相容的。
如本文中所用，术语“治疗有效量”是指将在一定程度上减轻所治疗之病症的一或多种症状的所施用化合物的量。参看HPK1激酶介导之病症(例如癌症)的治疗，治疗有效量是指具有在一定程度上减轻(或例如消除)与HPK1激酶介导之病症相关的一或多种症状作用的量。例如，治疗有效量是指具有如下作用的量：(1)减小肿瘤尺寸，(2)抑制(亦即在一定程度上减缓，优选终止)肿瘤转移，(3)在一定程度上抑制(亦即在一定程度上减缓，优选终止)肿瘤生长或肿瘤侵袭，和/或(4)在一定程度上减轻(或优选消除)一或多种与癌症相关的病征或症状。
除非另外指示，否则如本文中所使用，术语“治疗”意谓逆转、减轻、抑制该术语所应用之病症或病状或该病症或病状之一或多种症状的发展，或预防该病症或病状或该病症或病状之一或多种症状。除非另外指示，否则如本文中所使用，术语“治疗(treatment)”是指如本文中所定义之“治疗(treating)”的治疗行为。术语“治疗”亦包括对个体的辅助治疗和新辅助治疗。
“异构体”意谓如下所定义的“立体异构体”和“几何异构体”。
“立体异构体”是指具有一或多个手性中心的化合物，其可各以R或S构型存在。立体异构体包括所有非对映异构形式、对映异构形式及差向异构形式以及其外消旋体及混合物。
“几何异构体”是指可以顺式、反式、反侧、异侧(E)及同侧(Z)形式以及其混合物存在的化合物。
本说明书可互换地使用术语“取代基”、“基团(radical)”和“基团(group)”。
若取代基描述为“独立地选择”自一个组，则取代基的各实例是独立于其他取代基而选择。因此各取代基可与其他取代基相同或不同。
化合物
如本文所描述，式I化合物含有氮杂内酰胺(2,3-二氢-1-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮)核心，其中所述吡咯并环经由其氮原子连接至被R4取代的吡啶。
在另一实施方案中，本发明提供一种式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为(R4-i)；
R4N为(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基；以及
R4C为氢或(C1-C3)烷基；其中R1、R2、R3a和R3b如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为(R4-i)，其中R1为-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C3-C6)环烷基为环丙基且被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代，其中所述(C1-C6)烷基为甲基；
R5和R6各自独立地为氢或(C1-C3)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代的(5元)杂环烷基；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自独立地为氢或为甲基的(C1-C6)烷基；
R3a为被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；以及
R3b为氢或(C1-C3)烷基。
在另一实施方案中，本发明提供一种式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为(R4-ii)；
R4D为氢、(C1-C6)烷基或卤代(C1-C6)烷基，其中所述(C1-C6)烷基被0或1个为羟基的取代基取代；
R4E为氢；以及
R4F为氢、(C1-C6)烷基或卤代(C1-C6)烷基，其中所述(C1-C6)烷基被0或1个为羟基的取代基取代；且其中R1、R2、R3a和R3b如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为(R4-ii)，且其中R1为-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C3-C6)环烷基为环丙基且被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代，其中所述(C1-C6)烷基为甲基；
R5和R6各自独立地为氢或(C1-C3)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代的(5元)杂环烷基；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自独立地为氢或为甲基的(C1-C6)烷基；
R3a为氢或被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代之(C1-C3)烷基；以及
R3b为氢或(C1-C3)烷基。
在另一实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为2-甲基-吡咯烷-1-基或2(R)-甲基-吡咯烷-1-基；且其中R2、R3a、R3b和R4如本文中所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自为氢，且其中R1、R3a、R3b和R4如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a为被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；且其中R1、R2、R3b和R4如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R3b为(C1-C3)烷基；且R1、R2、R3a和R4如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自为氢；且其中R1、R3a、R3b和R4如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为N(R7)(R8)，其中R7为氢；且R8为(C1-C3)烷基；且其中R1、R3a、R3b和R4如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I-A化合物(式I化合物，其中R4为(R4-i)：
Figure BDA0003920000840000071
或其药学上可接受的盐，其中：
R1为-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C3-C6)环烷基为环丙基且被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代，其中所述(C1-C6)烷基为甲基；
R5和R6各自独立地为氢或(C1-C3)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代的(5元)杂环烷基；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自独立地为氢或为甲基的(C1-C6)烷基；
R3a为被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；
R3b为氢或(C1-C3)烷基；
R4N为(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基；以及
R4C为氢或(C1-C3)烷基。
在另一实施方案中，本发明提供式I-A化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a为被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；以及
R3b为(C1-C3)烷基。
在一些实施方案中，当R4为(R4-i)时，式I-A化合物具有如式I-A-i或I-A-ii所示的绝对立体化学：
Figure BDA0003920000840000072
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3a、R3b和R4C是如在任何实施方案中相对于式I-A所定义的。
在另一实施方案中，本发明提供式I-B化合物(式I化合物，其中R4为(R4-ii)：
Figure BDA0003920000840000081
或其药学上可接受的盐，其中：
R1为(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基、-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基及(C3-C6)环烷基被0或1个为羟基、氰基、(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代，其中：
R5和R6各自独立地为氢或被0、1或2个独立地选自卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基和羟基中的取代基取代的(C1-C6)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成(4至8元)杂环烷基，该(4至8元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自以下组中的取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基和卤代(C1-C6)烷氧基；
R2为N(R7)(R8)，其中：
R7和R8各自独立地为氢或被0或1个为卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基或羟基的取代基取代的(C1-C6)烷基；或
R7为氢或被0或1个为卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基或羟基的取代基取代的(C1-C6)烷基；且R8与其所连接的氮一起以及与R3a及其所连接的碳一起形成(4至6元)杂环烷基，该(4至6元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自卤素、羟基、(C1-C3)烷基、卤代(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基或卤代(C1-C6)烷氧基的取代基取代；或
R7和R8与其所连接的氮一起形成(4至6元)杂环烷基，该(4至6元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自以下组中的取代基取代：卤素、羟基、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基和卤代(C1-C6)烷氧基；
R3a为氢或被0或1个为羟基或(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；
R3b为氢或(C1-C3)烷基；
R4D为氢、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基和卤代(C1-C6)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代；
R4E为氢、卤素、氰基、羟基或(C1-C6)烷基；及
R4F为氢、卤素、氰基、羟基、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基及卤代(C1-C6)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代；且其中R2如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供一种式I-B化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1为-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C3-C6)环烷基被0或1个为(C1-C3)烷基的取代基取代，其中：
R5和R6各自独立地为氢或(C1-C6)烷基或
R5和R6与其所连接的氮一起形成被0、1或2个为(C1-C6)烷基的取代基取代的(4至8元)杂环烷基；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自独立地为氢或(C1-C6)烷基；
R3a为氢、或被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代之(C1-C3)烷基；
R3b为氢或(C1-C3)烷基；
R4D为氢、(C1-C3)烷基或卤代(C1-C3)烷基，其中所述(C1-C3)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C3)烷氧基的取代基取代；
R4E为氢；以及
R4F为氢、(C1-C3)烷基或卤代(C1-C3)烷基，其中所述(C1-C3)烷基被0或1个为羟基的取代基取代。
在另一实施方案中，本发明提供式I-B化合物或其药学上可接受的盐，其中R3b为氢或(C1-C3)烷基。
在另一实施方案中，本发明提供式I-B化合物或其药学上可接受的盐，其中R4D为氢、(C1-C3)烷基或卤代(C1-C3)烷基，其中所述(C1-C3)烷基被0或1个为羟基的取代基取代；且其中R1、R3a、R3b、R4E和R4F如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I-B化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a为被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；以及
R3b为(C1-C3)烷基；且其中R1、R2、R4D、R4E和R4F如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供一种式I-B化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1为-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C3-C6)环烷基被0或1个(C1-C3)烷基取代；
R5和R6各自独立地选自(C1-C6)烷基，或R5和R6与其所连接的氮一起形成被0或1个(C1-C6)烷基取代的(5元)杂环烷基；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自为氢；
R3a为氢或(C1-C3)烷基，其中所述(C1-C3)烷基被0或1个(C1-C3)烷氧基取代；
R3b为氢或(C1-C3)烷基；
R4D为氢或(C1-C3)烷基，其中(C1-C3)烷基被0至1个选自OH和F的取代基取代；
R4E为氢；以及
R4F为氢或(C1-C3)烷基。
在另一实施方案中，本发明提供一种式I-B化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1为-N(R5)(R6)，或被0或1个为甲基的取代基取代的环丙基；
R5和R6各自独立地为氢或(C1-C3)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成(5元)杂环烷基，该(5元)杂环烷基被0或1个为甲基的取代基取代；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自独立地为氢或甲基；
R3a为被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；以及
R3b为氢或(C1-C3)烷基；且其中R4D、R4E和R4F如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明涉及一种式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为(R4-ii)；
R4D为氢、(C1-C6)烷基或卤代(C1-C6)烷基，其中所述(C1-C6)烷基被0或1个为羟基的取代基取代；
R4E为氢；以及
R4F为氢、(C1-C6)烷基或卤代(C1-C6)烷基，其中所述(C1-C6)烷基被0或1个为羟基的取代基取代；且其中R1、R2、R3a和R3b如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明涉及一种式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为(R4-ii)；
R4D为氢、甲基、氟甲基、羟基甲基或乙基；
R4E为氢；以及
R4F为氢；且其中R1、R2、R3a和R3b如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物或其药学上可接受的盐，当R3a不同于R3b时，其在R2、R3a及R3b之方向方面具有特定立体化学。例如，当R3b为氢(R3b不存在)时，式I化合物将呈现为如下：
Figure BDA0003920000840000101
其中R1、R3a和R4如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供一种式I(R)或I(S)化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1为-N(R5)(R6)，或被1个为甲基的取代基取代的环丙基；
R5和R6各自独立地为氢或(C1-C3)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成(5元)杂环烷基，该(5元)杂环烷基被0或1个为甲基的取代基取代；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自独立地为氢或甲基；
R3a为被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；
R3b为氢；
R4为(R4-ii)；
R4D为氢、甲基、氟甲基、羟基甲基或乙基；
R4E为氢；以及
R4F为氢或甲基。
在另一实施方案中，本发明涉及式I(R)化合物或其药学上可接受的盐，其中R3b为氢(R3b不存在)：
Figure BDA0003920000840000102
且其中R1、R3a和R4如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明涉及式I(S)化合物或其药学上可接受的盐，其中R3b为氢(R3b不存在)：
Figure BDA0003920000840000111
其中R1、R3a和R4如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I-B化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基或(5R)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基，其中所述甲基被0或1个为F或OH的取代基取代，且其中R1、R2、R3a和R3b如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
在另一实施方案中，本发明提供式I-B化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基或(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基，其中所述甲基被0或1个为F或OH的取代基取代，且其中R1、R2、R3a和R3b如本文所述实施方案中之任一者中所定义。
本文相对于式II所述之各实施方案亦适用于式I-A-i、I-A-ii、I-B-i和I-B-ii之化合物。
在另一实施方案中，本发明提供一种化合物，其中所述化合物为：
4-[1-氨基丙基]-2-{6-[5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[1-氨基乙基]-2-{6-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[1-氨基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[1-氨基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[1-氨基丙基]-2-{3-[5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或
4-[1-氨基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受的盐。
例如，本发明化合物为一种化合物，其为：
4-[(1R)-1-氨基丙基]-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1R)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1S)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1R)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1R)-1-氨基丙基]-2-{3-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1R)-1-氨基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或
4-[(1S)-1-氨基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物为式I(R)化合物或式I(S)化合物，当R3a不同于R3b时，其在R2、R3a和R3b之取向方面具有特定立体化学。
在另一实施方案中，本发明涉及一种化合物，其为4-[(1R)-1-氨基丙基]-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受。
在另一实施方案中，本发明涉及一种化合物，其为4-[(1R)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]吡啶-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受。
在另一实施方案中，本发明涉及一种化合物，其为4-[(1S)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受。
在另一方面中，本发明提供选自本文所例示之化合物或其药学上可接受的盐的化合物。
本发明化合物对HPK1激酶具有选择性。
“药物组合物”是指作为活性成分的本文所述化合物中之一或多者或其药学上可接受的盐、溶剂合物、水合物或前药及至少一种药学上可接受的载剂或赋形剂的混合物。在一些实施方案中，药物组合物包含两种或更多种药学上可接受的载剂和/或赋形剂。
在一些实施方案中，药物组合物进一步包含至少一种额外抗癌治疗剂或姑息性药剂。在一些此等实施方案中，至少一种额外药剂包含如下文所述之抗癌治疗剂。在一些此等实施方案中，组合提供累加抗癌作用，超过累加的抗癌作用或协同抗癌作用。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗有需要个体之异常细胞生长的方法，其包括向个体施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，本发明提供一种治疗有需要个体之异常细胞生长的方法，其包括向个体施用一定量之本发明化合物或其药学上可接受的盐组合一定量之额外治疗剂(例如抗癌治疗剂)，这些量合在一起有效治疗该异常细胞生长。
在本文所提供的方法的常见实施方案中，所述异常细胞生长为癌症。本发明化合物可以单一药剂施用，或可与其他抗癌治疗剂，尤其适合于尤其癌症之护理剂标准物组合施用。
在一些实施方案中，所提供的方法引起以下效应中之一或多者：(1)抑制癌细胞增殖；(2)抑制癌细胞侵袭力；(3)诱导癌细胞的细胞凋亡；(4)抑制癌细胞癌转移；(5)抑制血管生成；(6)增强T细胞反应；(7)增强树突状及B细胞反应；(8)提高抗肿瘤活性；(9)增强疫苗治疗；以及(10)增强免疫系统介导之病原体(如病毒、细菌、寄生虫)的移除。
在另一方面中，本发明提供一种治疗个体之HPK1激酶活性介导的病症(诸如某些癌症)的方法，其包括向个体施用一定量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，该量有效治疗所述病症。
除非另外指明，否则本文所有提及本发明化合物或其盐，包括提及其盐、溶剂合物、水合物及复合物，及其盐的溶剂合物、水合物和复合物，包括其多晶型物、立体异构体及经同位素标记的形式。
本发明化合物可呈药学上可接受的盐的形式，诸如本文提供之式I化合物的酸加成盐和碱加成盐。如本文中所使用，术语“药学上可接受的盐”是指保留亲本化合物之生物有效性和特性的盐。如本文所用，除非另外指明，否则词组“药学上可接受的盐”包括可存在于本文所揭示之式I化合物中的酸性或碱性基团的盐。
例如，本质上呈碱性的本发明化合物能够与各种无机和有机酸形成多种盐。尽管此类盐在向动物施用时必须为药学上可接受的，但在实践中常常需要首先自反应混合物以药学上不可接受的盐的形式分离本发明化合物，然后接着通过用碱性试剂处理来简单地将后者(该药学上不可接受的盐)重新转化为游离碱化合物，并随后将后一游离碱转化为药学上可接受的酸加成盐。本发明之碱性化合物的酸加成盐可通过在水性溶剂介质中或在诸如甲醇或乙醇之适合的有机溶剂中，用大体上等量的所选无机或有机酸处理碱性化合物来制备。在蒸发溶剂之后，获得所需固体盐。所需酸的盐亦可通过向溶液中添加适当的无机或有机酸而自游离碱于有机溶剂中之溶液沉淀。
可用于制备此类碱性化合物之药学上可接受的酸加成盐的酸为形成无毒酸加成盐的那些酸，此等无毒酸加成盐亦即含有药理学上可接受之阴离子的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、丁二酸盐、顺丁烯二酸盐、龙胆酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、葡糖二酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲烷磺酸盐、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐[亦即1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐)]。
盐的实例包括但不限于乙酸盐、丙烯酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐(诸如氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐和甲氧基苯甲酸盐)、碳酸氢盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁炔-1,4-二酸盐、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、己酸盐、辛酸盐、克拉维酸盐、柠檬酸盐、癸酸盐、二氢氯化物、二氢磷酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸酸盐(edislyate)、依托酸盐、乙磺酸盐、乙基丁二酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、羟乙酰对氨基苯胂酸盐(glycollylarsanilate)、庚酸盐、己炔-1,6-二酸盐、己基间苯二酚酸盐(hexylresorcinate)、哈胺(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、γ-羟基丁酸盐、碘化物、异丁酸盐、异硫代硫酸盐(isothionate)、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、偏磷酸盐、甲烷磺酸盐、甲基硫酸盐、单氢磷酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、硝酸盐、油酸盐、乙二酸盐、双羟萘酸盐(恩波酸盐(embonate))、棕榈酸盐、泛酸盐、苯基乙酸盐、苯基丁酸盐、苯基丙酸盐、邻苯二甲酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙磺酸盐、丙酸盐、丙炔酸盐、焦磷酸盐、焦硫酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、辛二酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、磺酸盐、亚硫酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙碘化物(triethiodode)和戊酸盐。
适合的盐的说明性实例包括衍生自诸如甘氨酸和精氨酸的氨基酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及诸如哌啶、吗啉及哌嗪的环状胺的有机盐，以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。
包含碱基部分((如氨基)的本发明化合物可与除上文所提及之酸以外的各种氨基酸形成药学上可接受的盐。
本质上为酸性的本发明化合物能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱盐。所述盐的实例包括碱金属或碱土金属盐，且尤其是钠和钾盐。此等盐全部通过常规技术来制备。用作制备本发明之药学上可接受的碱盐的试剂的化学碱是与本文中的酸性化合物形成无毒碱盐的碱。此等盐可通过任何适合的方法来制备，例如用无机或有机碱来处理游离酸，所述碱诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物、或其类似物。此等盐亦可通过用含有所需药理学上可接受的阳离子的水溶液处理相应酸性化合物，然后接着优选在减压下将所得溶液蒸发至干燥来制备。替代地，其亦可如下制备：将酸性化合物的低级烷醇溶液与所需碱金属醇盐混合在一起，以及随后以与之前相同的方式将所得溶液蒸发至干燥。在任一情况下，优选使用化学计量的试剂以确保反应完成且所需最终产物的产率最大。
可用作制备本发明之本质上为酸性的化合物的药学上可接受的碱盐的试剂的化学碱是与此类化合物形成无毒碱盐的碱。此类无毒碱盐包括但不限于衍生自此类药理学上可接受的阳离子(诸如碱金属阳离子(例如钾及钠)和碱土金属阳离子(例如钙及镁))的那些碱盐、铵或水溶性胺加成盐(诸如N-甲基葡糖胺(葡甲胺))及低碳烷醇铵，以及药学上可接受的有机胺的其他碱盐。
亦可形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。
对于适合盐的综述，可参见Stahl和Wermuth的Handbook of PharmaceuticalSalts:Properties,Selection,and Use(Wiley-VCH,2002)。制备本发明化合物之药学上可接受的盐的方法对于本领域技术人员是已知的。
本发明的盐可根据本领域技术人员已知的方法来制备。本发明化合物之药学上可接受的盐可容易通过将化合物的溶液及所需酸或碱(适当时)混合在一起来制备。盐可自溶液沉淀且通过过滤来收集或可通过溶剂蒸发来回收。盐的离子化程度可在完全离子化至几乎不离子化的范围内变化。
本领域技术人员应理解，具有碱基官能团之呈游离碱形式的本发明化合物可通过用化学计量过量的适当酸处理而转化为酸加成盐。本发明化合物的酸加成盐可通过通常在水性溶剂存在下及在约0℃与100℃之间的温度下用化学计量过量的适合碱(诸如碳酸钾或氢氧化钠)处理再转化为相应游离碱。游离碱形式可通过已知方式，诸如用有机溶剂萃取来分离。另外，本发明化合物的酸加成盐可利用盐的不同溶解度、酸的挥发性或酸性或通过用适当装载的离子交换树脂处理来进行互换。例如，交换可由本发明化合物的盐与略微化学计量过量的酸反应实现，该酸的pK比起始盐的酸组分低。此转化通常在约0℃与用作程序用介质之溶剂的沸点之间的温度下进行。类似交换可能由碱加成盐，通常经由游离碱形式之中间性实现。
本发明化合物可以非溶剂化及溶剂化形式两者存在。当紧密地结合溶剂或水时，复合物将具有与湿度无关的明确化学计量。然而当溶剂或水弱结合时(如在通道溶剂合物及吸湿化合物中)，水/溶剂含量将取决于湿度和干燥条件。在此等情况下，非化学计量将为标准。术语“溶剂合物”在本文中用以描述包含本发明化合物及一或多种药学上可接受之溶剂分子(例如乙醇)之分子复合物。当溶剂为水时，采用术语“水合物”。根据本发明之药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶之溶剂可经同位素取代的那些溶剂合物，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
本发明之范畴内亦包括复合物，诸如笼形物，包括药物-主体的复合物，其中与上述溶剂合物相比，药物与主体以化学计量或非化学计量量存在。亦包括含有两种或更多种有机和/或无机组分之药物的复合物，这些组分可为化学计量或非化学计量量。所得复合物可为离子化、部分离子化或非离子化的。对于此类复合物的综述，参见Haleblian之J PharmSci,64(8),1269-1288(1975年8月)，其揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
本发明亦关于本文中所提供之式I化合物的前药。因此，可具有少量药理学活性或本身无药理学活性之本发明化合物的某些衍生物向患者施用时可例如通过水解裂解转化为本发明化合物。此类衍生物称为“前药”。关于前药用途的其他信息可见于“Pro-drugs asNovel Delivery Systems”,第14卷,ACS Symposium Series(T Higuchi及W Stella)及“Bioreversible Carriers in Drug Design”,Pergamon Press,1987(E B Roche编,American Pharmaceutical Association)中，其揭示内容以全文引用之方式并入本文中。
本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知的某些部分作为“前部分(pro-moieties)”置换本发明化合物中存在的适当官能基产生，如例如H Bundgaard的“Designof Prodrugs”(Elsevier,1985)中所描述，其揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
根据本发明的前药的一些非限制性实例包括：
(i)其中化合物含有甲酸官能基(-COOH)、其酯，例如用(C1-C8)烷基置换氢；
(ii)其中化合物含有醇官能基(-OH)、其醚，例如用(C1-C6)烷酰氧基甲基或用磷酸酯醚基置换氢；以及
(iii)其中化合物含有伯或仲氨基官能基(-NH2或-NHR，其中R≠H)、其酰胺，例如用适当代谢不稳定的基团，诸如酰胺、氨基甲酸酯、脲、膦酸酯、磺酸酯等置换一个或两个氢。
根据前述实例的置换基团的其他实例和其他前药类型的实例可见于前述参考文献中。
最后，某些本发明化合物自身可充当其他本发明化合物的前药。
本发明的范畴内亦包括本文所述式I化合物的代谢物，亦即施用药物时在活体内形成的化合物。
本文提供的式I化合物可具有不对称碳原子。在本文中，本发明化合物的碳-碳键可使用实线
Figure BDA0003920000840000151
实线楔
Figure BDA0003920000840000152
或虚线楔
Figure BDA0003920000840000153
描绘。使用实线来描绘与不对称碳原子的键意谓指示，包括该碳原子处的所有可能立体异构体(例如，特定对映异构体、外消旋混合物等)。使用实心或虚线楔形描绘连接至不对称碳原子的键意欲指示仅意欲包括所示的立体异构体。本发明化合物可能含有多于一个不对称碳原子。在这些化合物中，使用实线描绘与不对称碳原子的键意谓指示意欲包括所有可能的立体异构体和所连接的立体异构中心。例如，除非另外说明，否则本发明化合物意欲可以对映异构体和非对映异构体形式或以外消旋体形式及其混合物形式存在。使用实线描绘与本发明化合物中之一或多个不对称碳原子的键且使用实心或点线楔形描绘与同一化合物中之其他不对称碳原子的键意谓指示存在非对映异构体的混合物。
具有手性中心的本发明化合物以诸如外消旋体、对映异构体或非对映异构体的立体异构体形式存在。
本文中式I化合物的立体异构体可包括本发明化合物之顺式及反式异构体、光学异构体(如(R)及(S)对映异构体)、非对映异构体、几何异构体、旋转异构体、阻转异构体、构象异构体和互变异构体，包括展现超过一个异构类型的化合物；及其混合物(例如外消旋体和非对映异构体对)。
亦包括酸加成盐或碱加成盐，其中反离子具光学活性，例如d-乳酸盐或l-赖氨酸，或具外消旋性，例如dl-酒石酸盐或dl-精氨酸。
当任一种外消旋物结晶时，可能有两种不同类型的晶体。第一种类型为上文所提及的外消旋化合物(真实外消旋体)，其中产生含有等摩尔量之两种对映异构体的一种均质形式晶体。第二类型为外消旋混合物或聚结物，其中产生等摩尔量的各自包含单一对映异构体的两种形式的晶体。
本发明化合物可展现互变异构及结构异构的现象。例如，化合物可以若干互变异构形式存在，包括烯醇与亚胺形式、酮与烯胺形式、以及几何异构体及其混合物。所有此类互变异构形式包括于本发明化合物的范畴内。互变异构体以溶液中互变异构体集合之混合物形式存在。在固体形式中，通常以一种互变异构体占主导。即使可描述一种互变异构体，本发明包括所提供之式I化合物的所有互变异构体。
另外，一些本发明化合物可形成阻转异构体(例如经取代的联芳基)。阻转异构体是当围绕分子中之单键的旋转得以阻止或大大减缓时由于与分子之其他部分的空间相互作用以及所述单键两端的取代基不对称而存在的构象立体异构体。阻转异构体的互变足够缓慢以使得在预定条件下分开并分离。热外消旋化的能量障壁可通过形成手性轴的一或多个键的自由旋转的位阻来测定。
制备/分离单个对映异构体的常规技术包括自适合的光学纯前体手性合成或使用例如手性高压液相色谱(HPLC)或超流体临界色谱(SFC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。
或者，外消旋体(或外消旋前体)可与适合的光学活性化合物(例如醇)反应，或在化合物含有酸性或碱性部分的情况下与酸或碱(如酒石酸或1-苯乙胺)反应。所得的非对映异构混合物可通过色谱法和/或分步结晶来分离，然后通过本领域技术人员熟知的手段将非对映异构体中的一者或两者转化为相应的纯对映异构体。
本发明的手性化合物(及其手性前体)可使用色谱法(通常HPLC)在不对称树脂上用流动相来以对映异构体富集的形式获得，该流动相由烃(通常庚烷或己烷)组成且含有0％至50％(通常2％至20％)异丙醇和0％至5％烷基胺(通常0.1％二乙胺)。浓缩洗出液得到所述富集的混合物。
立体异构外消旋堆集体可通过本领域技术人员已知的常规技术分离；参见例如EL Eliel的“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley,New York,1994)，其揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
本文所述化合物的对映异构体纯度可以对映异构过量(ee)描述，其指示样品含有一种对映异构体的量大于另一种的程度。外消旋混合物的ee为0％，而单个完全纯对映异构体的ee为100％。类似地，非对映异构体纯度可以非对映异构过量(de)描述。
本发明亦包括经同位素标记的化合物，其与所提供式I中之一者所述的化合物相同，但事实是一或多个原子被原子质量或质量数与自然界中所常见的原子质量或质量数不同的原子置换。
本发明的同位素标记化合物一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于本文所述的方法，使用经适当同位素标记的试剂代替原本使用的未标记试剂来制备。
可并入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如但不限于2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。某些经同位素标记的本发明化合物(例如其中并有诸如3H和14C的放射性同位素者)适用于药物和/或基底组织分布分析。氚化(亦即3H)和碳-14(亦即14C)同位素因其制备简易性和可检测性而尤其优选。此外，经诸如氘(亦即2H)之较重同位素取代可获得由更大代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如增加的活体内半衰期或降低的剂量需求，且因此在某些情况下可为优选的。经同位素标记的本发明化合物一般可通过实施下文流程和/或实施例及制备中所揭示之程序，通过用经同位素标记的试剂取代未经同位素标记的试剂来制备。
预期用于药物用途的本发明化合物可作为结晶或非晶形产物或其混合物施用。其可通过诸如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥的方法以例如固体塞、粉末或薄膜形式获得。微波或射频干燥可用于此目的。本发明化合物可以自完全非晶形至完全结晶之范围内的连续固态形式存在。术语“非晶形”是指其中材料在分子层级上缺乏长程有序且可视温度而定展现固体或液体之物理性质的状态。此类材料通常不产生独特X射线衍射图案，且虽然展现固体特性，但更正式地描述为液体。在加热时，发生固体性质至液体性质的变化，其特征在于状态的变化，典型地为二级(“玻璃化转变”)。术语“结晶”是指其中材料在分子层级上具有规则排序的内部结构且产生具有规定峰值之独特的X射线衍射图案的固相。此类材料在充分加热时亦将展现液体的性质，但固体至液体之变化的特征在于相位变化，典型地为一级(“熔点”)。
式I化合物亦可在经受适合条件时以介晶态(中间相或液晶)形式存在。介晶态为真正结晶状态与真正液态(熔体或溶液)之间的中间态。因温度变化而出现的介晶现象描述为“热致性的”，而因添加第二组分(诸如水或另一溶剂)而产生的介晶现象描述为“溶致性的”。能够形成溶致性中间相的化合物描述为“两亲的”，且由具有离子极性头基(诸如-COO-Na+、-COO-K+或-SO3 -Na+)或非离子极性头基(诸如-N-N+(CH3)3)的分子组成。对于更多信息，参见N.H.Hartshorne和A.Stuart的Crystals and the Polarizing Microscope,第4版(Edward Arnold,1970)。
式I化合物可展现多形现象和/或一或多种异构(例如光学异构、几何异构或互变异构)。式I化合物亦可经同位素标记。此类变化对于式I化合物为隐含的，该化合物参看其结构特征而定义，且因此在本发明的范畴内。
治疗方法和用途
本发明进一步提供治疗方法和用途，其包括单独或与其他治疗剂或姑息性药剂组合施用本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗个体之异常细胞生长的方法，其包括向个体施用治疗有效量之本发明化合物或其药学上可接受的盐。在常见实施方案中，异常细胞生长为癌症。
在另一实施方案中，本发明提供一种治疗个体之癌症的方法，其包括向个体施用一定量之本发明化合物或其药学上可接受的盐组合一定量之额外抗癌治疗剂，这些量合在一起有效治疗该癌症。
本发明化合物包括本文所述之式I化合物或其药学上可接受的盐。
在再一实施方案中，本发明提供一种抑制个体之癌细胞增殖的方法，其包括向个体施用一定量之本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，本发明提供一种抑制个体之癌细胞侵袭力的方法，其包括向个体施用一定量之本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，本发明提供一种引起个体之癌细胞死亡的方法，其包括向个体施用有效量之本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在再一实施方案中，本发明提供一种增强哺乳动物中之疫苗疗法的方法，其包含向哺乳动物施用治疗有效量的疫苗，且进一步包含向哺乳动物施用治疗有效量之如权利要求1至16中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
在再一实施方案中，本发明提供一种改良个体之免疫系统清除病毒感染、细菌感染或病原体(包括寄生虫)之能力的方法，其包括向个体施用有效量之本发明化合物或其药学上可接受的盐。本发明提供一种增强免疫系统介导的移除病原体的方法，其包括向哺乳动物施用治疗有效量之如权利要求1至16中任一项之化合物或其药学上可接受的盐。该方法包括将本发明化合物作为单一疗法或与其他药剂组合施用以治疗感染或病原体。
本发明所揭示的化合物可用于抑制HPK1激酶的活性。HPK1，亦称为分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶1或MAP4K1，为Ste20相关丝氨酸/苏氨酸激酶之生发中心激酶子族的成员。HPK1通过磷酸化及活化MAP3K蛋白质(包括MEKK1、MLK3及TAK1)，引起MAPK Jnk的活化来发挥MAP4K的功能。
HPK1多核苷酸和多肽在本领域中是已知的(Hu等人(1996)Genes Dev.10:2251-2264，其以全文引用之方式并入本文中)。HPK1多肽包含多种保守性结构基序。HPK1多肽包含氨基端Ste20样激酶域，其涵括氨基酸残基17-293，其包括来自氨基酸残基23-46的ATP结合位点。该激酶域之后为四个富含脯氨酸(PR)的基序，其充当含有SH3之蛋白质(诸如CrkL、Grb2、HIP-55、Gads、Nek及Crk)的结合位点。四个PR基序分别涵括氨基酸残基308-407、394-402、432-443和468-477。HPK1响应于TCR或BCR刺激而被磷酸化和活化。TCR及BCR诱导的位于PR1与PR2之间的位置381处的酪氨酸残基的磷酸化介导与T细胞中的SLP-76或B细胞中的BLNK经由SLP-76或BLNK SH2域的结合，且为激酶活化所需。见于HPK1之C端的大致涵括残基495-800的香橼同源结构域可充当调节域且可涉及大分子相互作用。
本发明所揭示的化合物直接结合至HPK1且抑制其激酶活性。在一些实施方案中，本发明所揭示的化合物降低、抑制或以其他方式减少HPK1介导之SLP76和/或Gads的磷酸化。本发明所揭示的化合物可为或可不为特异性HPK1抑制剂。特异性HPK1抑制剂使HPK1的生物活性降低达以统计方式大于该抑制剂对任何其他蛋白质(例如其他丝氨酸/苏氨酸激酶)之抑制作用的量。在某些实施方案中，本发明所揭示的化合物特异性抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。
本发明所揭示的化合物可用于抑制HPK1的方法中。此类方法包括使HPK1与有效量的本发明化合物接触。术语“接触”意欲使化合物与经分离的HPK1酶或表达HPK1的细胞(例如T细胞、B细胞、树突状细胞)足够邻近，使得化合物能够结合于HPK1且抑制其活性。可经由向个体施用化合物来活体外或活体内使化合物与HPK1接触。
可使用本领域中已知的任何用于量测HPK1之激酶活性的方法来测定是否已抑制HPK1，包括活体外激酶分析法、用对HPK1之磷酸化目标(诸如SLP76及Gads)具有特异性的抗体进行的免疫印记法，或HPK1激酶活性之下游生物作用的量测，诸如14-3-3蛋白质募集至磷酸化的SLP7和Gads，SLP76-Gads-14-3-3复合物自含有LAT的微簇的释放，或T或B细胞的活化。
本发明所揭示的化合物可用于治疗HPK1依赖性病症。如本文中所使用，“HPK1依赖性病症”为其中HPK1活性为病理学病状之成因或维持所需的病理学病状。
本发明所揭示的化合物亦可用于增强有需要之个体的免疫反应。此类方法包括施用有效量之本发明所揭示的化合物(亦即式I化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物中之任一者)。术语“增强免疫反应”是指对抗原之任何免疫原性反应的改良。对抗原之免疫原性反应的改良的非限制性实例包括树突状细胞的成熟或迁移增强、T细胞(例如CD4 T细胞、CD8 T细胞)的活化增强、T细胞(例如CD4 T细胞、CD8 T细胞)增殖增强、B细胞增殖增强、T细胞和/或B细胞的存活率增加、抗原呈递细胞(例如树突状细胞)的抗原呈递改良、抗原清除率改良、T细胞之细胞因子(例如介白素-2)的产量增加、对前列腺素E2-或腺苷诱导之免疫抑制的抗性增加以及CD8 T细胞的激活和/或溶胞活性增强。在一些实施方案中，个体中的CD8 T细胞相对于施用式I化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前具有激活增强、活化增强、增生增强和/或溶胞活性增强。在一些实施方案中，CD8 T细胞激活之特征在于CD8 T细胞中的CD44表达增加和/或溶胞活性增强。在一些实施方案中，CD8 T细胞活化之特征在于IFNy+CD8 T细胞之升高的频率。在一些实施方案中，CD8 T细胞为抗原特异性T细胞。
在一些实施方案中，个体中的抗原呈递细胞相对于施用式I化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前具有成熟及活化增强。在一些实施方案中，抗原呈递细胞是树突状细胞。在一些实施方案中，抗原呈递细胞成熟之特征在于CD83+树突状细胞的出现率增加。在一些实施方案中，抗原呈递细胞活化之特征在于树突状细胞上CD80和CD86的表达增加。
TCR的接合可引起HPK1活化，其充当TCR诱导之AP-1反应路径的负调节剂。据信，HPK1借助于磷酸化Ser376处的SLP76(Di Bartolo等人(2007)JEM 204:681-691)及Thr254处的Gads，通过降低信号传导微簇的持久性来负向调节T细胞活化，其引起结合于磷酸化SLP76及Gads之14-3-3蛋白质的募集，自含有LAT的微簇释放SLP76-Gads-14-3-3复合物，其引起T细胞功能障碍，包括能力缺失及耗竭(Lasserre等人(2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。术语“功能障碍”在免疫功能障碍的情形下是指对抗原刺激之免疫反应降低的状态。该术语包括其中可发生抗原识别的耗竭和/或能力缺失的共同成分，但随后的免疫反应对控制感染或肿瘤生长无效。
如本文所用，术语“功能障碍性”亦包括对抗原识别具有顽抗性或不起反应，具体而言，将抗原识别转译成下游T细胞效应功能(诸如增生、细胞介素产生(例如IL-2、γ-IFN)和/或目标细胞杀伤)的能力减弱。
术语“能力缺失”是指由经由T细胞受体递送之信号不完全或不充分引起的对抗原刺激不起反应的状态{例如在不存在ras活化的情况下细胞内Ca升高)。在不存在共刺激的情况下，T细胞能力缺失亦可由抗原刺激引起，引起细胞变成即使在共刺激情形下仍对后续抗原活化具有抗性。无反应状态通常可由存在介白素-2解决。能力缺失T细胞不进行克隆扩展和/或获得效应功能。
术语“耗竭”是指T细胞耗竭，作为在多种慢性感染及癌症期间发生的由持续TCR信号传导引起的T细胞功能障碍状态。其与能力缺失的区别在于其并非由信号传导不完全或不足引起，而是由持续信号传导引起。其由不良效应子功能、抑制性受体的持续表达以及与功能性效应子或内存T细胞不同的转录状态定义。耗竭阻碍对感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可由外源性下调路径(例如免疫调节细胞激素)以及细胞内源性下调(共刺激)路径(PD-1、B7-H3、B7-H4等)引起。
“增强T细胞功能”意谓诱导、引起或刺激T细胞以具有持续或扩增的生物功能，或更新或再活化耗竭或非活性T细胞。增强T细胞功能的实例包括：细胞介素(例如γ-干扰素、IL-2、IL-12及TNFa)的分泌增加、增生增加、抗原反应性(例如病毒、病原体或肿瘤清除率)相对于此类介入前的水平增加以及由CD8 T细胞实现的效应子颗粒产生(诸如颗粒酶B)增加。
因此，本发明所揭示之式I化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物适用于治疗T细胞功能障碍性病症。“T细胞功能障碍性病症”是特征为对抗原刺激之反应降低的T细胞病症或病状。在特定实施方案中，T细胞功能障碍性病症是与HPK1之激酶活性增加特定相关的病症。在另一实施方案中，T细胞功能障碍病症为其中T细胞能力缺失或分泌细胞介素、增殖或进行溶胞活性之能力降低的病症。在特定方面中，反应降低可引起对表达免疫原之病原体或肿瘤的控制无效。特征为T细胞功能障碍之T细胞功能障碍性病症的实例包括起因不明的急性感染、慢性感染和肿瘤免疫性。
因此，本发明所揭示的化合物可用于治疗其中需要增强免疫原性的病状，诸如提高肿瘤免疫原性以用于治疗癌症。“免疫原性”是指特定物质引起免疫反应的能力。在由免疫反应进行的肿瘤细胞清除中，肿瘤为免疫原性且增强肿瘤免疫原性辅助物。
“肿瘤免疫性”是指其中肿瘤躲避免疫识别及清除的过程。因此，作为治疗概念，肿瘤免疫性在此类逃避作用减弱且肿瘤由免疫系统识别及攻击时得以“治疗”。肿瘤识别的实例包括肿瘤结合、肿瘤缩小及肿瘤清除。
在一个方面中，本文提供一种用于治疗有需要个体之癌症的方法，其包括向个体施用有效量之式I化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物。在一些实施方案中，个体患有黑色素瘤。黑色素瘤可处于早期或晚期。在一些实施方案中，个体患有结直肠癌。结直肠癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，个体患有非小细胞肺癌。非小细胞肺癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，个体患有胰腺癌。胰腺癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，个体患有血液恶性病。血液恶性病可处于早期或晚期。在一些实施方案中，个体患有卵巢癌。卵巢癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，个体患有乳腺癌。乳腺癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，个体患有肾细胞癌。肾细胞癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，癌症具有升高的T细胞浸润量。
在一些实施方案中，在停止治疗之后，治疗引起个体中的持续反应。“持续反应”是指在停止处理之后，对降低肿瘤生长的持续作用。例如，与施用阶段开始时的尺寸相比，肿瘤尺寸可保持相同或更小。
本文中揭示的治疗方法可引起部分或完全反应。如本文所用，“完全反应”或“CR”是指所有目标病变消失；“部分反应”或“PR”是指目标病变之最长直径的总和(SLD)降低至少30％，以基线SLD作为参比；而“稳定疾病”或“SD”是指目标病变缩小不足以适合PR，或其增大不足以适合PD，以自开始治疗起之最小SLD作为参比。如本文所用，“总反应率”(ORR)是指完全反应(CR)率与部分反应(PR)率之总和。
本文中揭示的治疗方法可引起接受HPKl拮抗剂施用之个体的无进展存活期及总存活期增加。如本文所用，“无进展存活期”(PFS)是指在治疗期间及治疗之后，所治疗的疾病(例如癌症)不会恶化的时间长度。无进展存活期可包括患者经历完全反应或部分反应的时间量，以及患者经历稳定疾病的时间量。
如本文所用，“总存活期”是指可能在特定持续时间之后存活的组中个体的百分比。
在本文所提供的方法之一些实施方案中，异常细胞生长是癌症，其中癌症是选自以下组中：乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌(包括NSCLC、SCLC、鳞状细胞癌或腺癌)、食道癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌(包括RCC)、肝癌(包括HCC)、胰腺癌、胃(stomach)(例如胃(gastric))癌症和甲状腺癌。在本文所提供的方法的其他实施方案中，癌症是选自以下组中：乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、食道癌、肝癌、胰腺癌和胃癌。
在一些实施方案中，癌症选自乳腺癌和卵巢癌。
在一些实施方案中，癌症为卵巢癌。
在其他实施方案中，癌症为乳腺癌，包括例如ER阳性/HR阳性乳腺癌、HER2阴性乳腺癌；ER阳性/HR阳性乳腺癌、HER2阳性乳腺癌；三阴性乳腺癌(TNBC)；或炎性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为耐内分泌性乳腺癌、耐曲妥珠单抗乳腺癌或表明对CDK4/CDK6抑制有先天或后天耐受性的乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为晚期或转移性乳腺癌。
在一些实施方案中，本发明化合物是作为一线疗法施用。在其他实施方案中，本发明化合物是作为二线(或后续)疗法施用。在一些实施方案中，本发明化合物是在用内分泌治疗剂和/或CDK4/CDK6抑制剂治疗后作为二线(或后续)疗法施用。在一些实施方案中，本发明化合物是在用内分泌治疗剂治疗后作为二线(或后续)疗法施用。在一些实施方案中，本发明化合物是在用CDK4/CDK6抑制剂治疗后作为二线(或后续)疗法施用。在一些实施方案中，本发明化合物是在用一或多种化学疗法(例如包括紫杉烷或铂药剂)治疗后作为二线(或后续)疗法施用。在一些实施方案中，本发明化合物是在用HER2靶向剂(例如曲妥珠单抗)治疗后作为二线(或后续)疗法施用。
术语“异常细胞生长”和“过度增殖性病症”在本申请案中可互换使用。
除非另外指明，否则如本文所使用，“异常细胞生长”是指不依赖于正常调节机制的细胞生长(例如接触抑制的丧失)。异常细胞生长可为良性(非癌性)或恶性(癌性)的。
异常细胞生长包括对内分泌疗法、HER2拮抗剂或CDK4/6抑制具有抗性之肿瘤的异常生长。
如本文所使，术语“额外抗癌治疗剂”意谓除本发明化合物之外的用于或可用于治疗癌症的任一种或多种治疗剂，诸如衍生自以下类别的药剂：有丝分裂抑制剂、烷基化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、拓朴异构酶I和II抑制剂、植物生物碱、激素剂和拮抗剂、生长因子抑制剂、辐射、蛋白质酪氨酸激酶和/或丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂、细胞周期抑制剂、生物反应调节剂、酶抑制剂、反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物、细胞毒性剂及免疫肿瘤学药剂(免疫肿瘤学药剂包括单克隆抗体、双特异性抗体、细胞因子、CAR-t细胞)。
如本文所用，“癌症”是指异常细胞生长引起的任何恶性和/或侵袭性生长或肿瘤。癌症包括针对形成实体肿瘤之细胞的类型命名的实体肿瘤、血液癌症、骨髓癌症或淋巴系统癌症。实体肿瘤的实例包括肉瘤和癌瘤。血液癌症包括但不限于白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。癌症亦包括源自身体特定部位的原发性癌症、自开始的位置扩散至身体其他部分的转移性癌症、初始原发性癌症在缓解后的复发、以及作为个人的新原发性癌症的第二原发性癌症，该个人之先前癌症病史与后一癌症的类型不同。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，癌症是选自以下组中：乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、食道癌、肝癌、胰腺癌和胃癌。
剂型和给药方案
本发明化合物的施用可由使得能够将化合物输送至作用部位的任何方法来实现。所述方法包括经口途径、十二指肠内途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、肌肉内、血管内或输注)、局部和直肠施用。
可调节剂量方案以提供最佳所需反应。例如，可施用单次推注，可随时间分若干次施用多次剂量，或可如治疗情况之紧急需要所指示而按比例减少或增加剂量。就施用简易性及剂量均一性而言，以单位剂型调配胃肠外组合物尤其有利。如本文所使用，单位剂型是指适合以单位剂量用于待治疗之哺乳动物个体的实体不连续单元；各单元均含有经计算可产生所需治疗效果的预定量的活性化合物与所需药物载剂。本发明之单位剂型的规格是由下列情况指定且直接取决于下列情况：(a)化学治疗剂的独特特征和待实现之特定治疗或预防作用，以及(b)混合此类用于治疗个体敏感性之活性化合物的技术中的固有限制。
因此，本领域技术人员应了解，基于本文提供的揭露内容，根据治疗技术中熟知的方法调整剂量及给药方案。亦即，可容易地确定最大可耐受剂量，且亦可测定向患者提供可检测治疗益处的有效量，亦可测定施用各药剂以向患者提供可检测治疗益处的时间需求。因此，尽管本文举例说明某些剂量及施用方案，但此等实例决不限制在实施本发明时可向患者提供的剂量和施用方案。
应注意，剂量值可随待减轻之病状的类型和严重程度而变化，且可包括单次或多次给药。应进一步了解，对于任何特定个体而言，特定剂量方案应根据个体需要及施用组合物或监督组合物施用之人员的专业判断而随时间调整，且本文所阐述的剂量范围仅具例示性且不意欲限制所要求保护之组合物的范畴或实务。例如，可基于药物动力学或药效学参数来调整剂量，这些参数可包括临床效果，例如毒性效果和/或实验值。因此，本发明涵盖如本领域技术人员所确定的患者内剂量递增。确定用于施用化学治疗剂之适当剂量和方案在相关技术中是已知的，且一旦提供本文中所揭示的教示，则本领域技术人员应理解该确定涵盖于这些教导之中。
所施用之本发明化合物的量将视所治疗之个体、病症或病状之严重程度、施用之频率、化合物之配置以及处方医师之判断而定。然而，有效剂量在每天约0.001至约100mg/kg体重、优选每天约1至约35mg/kg范围内，呈单次或分次剂量。对于70kg人类而言，此将相当于每天约0.05至约7g、优选地每天约0.1至约2.5g。在一些情况下，低于前述范围之下限的剂量水平可能已完全足够，而在其他情况下，在不引起任何有害副作用之情况下仍可采用较大剂量，其限制条件为首先将该等较大剂量分成若干较小剂量以在一整天中施用。
调配物和施用途径
如本文所用，“药学上可接受的载剂”是指不会对生物体造成显著的刺激且不消除所施用化合物之生物活性及特性的载剂或稀释剂。
药学上可接受的载剂可包括任何常规的药物载剂或赋形剂。载剂和/或赋形剂的选择在很大程度上将视以下因素而定，诸如特定施用模式、载剂或赋形剂对溶解性及稳定性的效果以及剂型性质。
适合的药物载剂包括惰性稀释剂或填充剂、水和各种有机溶剂(诸如水合物和溶剂合物)。视需要，药物组合物可含有额外成分，例如调味剂、黏合剂、赋形剂及其类似物。因此，对于经口施用而言，含有各种赋形剂(诸如柠檬酸)的片剂可与各种崩解剂(诸如淀粉、褐藻酸及某些复合硅酸盐)以及黏合剂(诸如蔗糖、明胶和阿拉伯胶)一起使用。赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖及各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。另外，润滑剂(诸如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠和滑石)常可用于片剂制造的目的。类似类型的固体组合物亦可以软和硬的填充明胶胶囊形式采用。因此，材料的非限制性实例包括乳糖或牛奶糖以及高分子量聚乙二醇。当需要经口施用水性悬浮液或酏剂时，可将其中的活性化合物与各种甜味剂或调味剂、着色物质或染料及(视需要)乳化剂或悬浮剂以及稀释剂(诸如水、乙醇、丙二醇、甘油或其组合)组合。
药物组合物可例如呈适用于经口施用的形式(如片剂、胶囊、丸剂、散剂、持续释放调配物、溶液、混悬剂)，适用于胃肠外注射的形式(如无菌溶液、混悬液或乳液)；适用于局部施用的形式(如软膏或乳膏)，或适用于直肠施用的形式(如栓剂)。
例示性胃肠外施用形式包括在无菌水溶液(例如，丙二醇或右旋糖水溶液)中的活性化合物的溶液或混悬液。必要时，此类剂型可适当地缓冲。
药物组合物可呈适用于单一施用精确剂量的单位剂型。
适用于递送本发明化合物的药物组合物及其制备方法对本领域技术人员而言将为显而易见的。此类组合物及其制备方法可见于例如“Remington's PharmaceuticalSciences”,第19版(Mack Publishing Company,1995)中，其揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
本发明化合物可以经口施用。经口施用可包括吞咽，使得化合物进入胃肠道，或可使用颊内或舌下施用，由此使得化合物直接自口腔进入血流中。
适用于经口施用的调配物包括固体调配物，诸如片剂，含有颗粒、液体或粉末的胶囊，口含锭(包括液体填充口含锭)，咀嚼片，多颗粒及纳米颗粒，凝胶，固溶体，脂质体，膜(包括黏性黏着膜)，珠剂，喷雾剂以及液体调配物。
液体调配物包括混悬液、溶液、糖浆和酏剂。此类调配物可作为填充剂用于软或硬胶囊中，且通常包括例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或适合的油的载剂、以及一或多种乳化剂和/或悬浮剂。液体调配物亦可通过将固体(例如来自小药囊的固体)复原来制备。
本发明化合物亦可用于快速溶解、快速崩解剂型，诸如Liang和Chen的ExpertOpinion in Therapeutic Patents,11(6),981-986(2001)中所述的剂型，其揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
对于片剂剂型而言，视剂量而定，药物可占剂型的1wt％至80wt％，更通常占剂型的5wt％至60wt％。除药物之外，片剂一般含有崩解剂。崩解剂的实例包括羟基乙酸淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮(crospovidone)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、微晶纤维素、经低级烷基取代的羟丙基纤维素、淀粉、预胶凝化淀粉和藻酸钠。一般而言，崩解剂将占剂型的1wt％至25wt％，优选5wt％至20wt％。
黏合剂一般用于向片剂调配物赋予黏结品质。适合的黏合剂包括微晶纤维素、明胶、糖、聚乙二醇、天然及合成胶、聚乙烯吡咯烷酮、预胶凝化淀粉、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。片剂亦可含有稀释剂，诸如乳糖(单水合物、喷雾干燥的单水合物、无水物及其类似物)、甘露糖醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、微晶纤维素、淀粉及二水合磷酸氢钙。
片剂亦可视情况包括表面活性剂，诸如月桂基硫酸钠及聚山梨醇酯80；及助流剂，例如二氧化硅和滑石。若存在，表面活性剂通常占片剂的0.2wt％至5wt％，且助流剂通常为片剂的0.2wt％至1wt％。
片剂一般亦含有润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酰反丁烯二酸钠、以及硬脂酸镁与月桂基硫酸钠的混合物。润滑剂一般占片剂的0.25wt％至10wt％，优选0.5wt％至3wt％。
其他常规成分包括抗氧化剂、着色剂、调味剂、防腐剂和遮味剂。
例示性片剂含有至多约80wt％药物、约10wt％至约90wt％黏合剂、约0wt％至约85wt％稀释剂、约2wt％至约10wt％崩解剂及约0.25wt％至约10wt％润滑剂。
片剂掺混物可直接或通过滚筒压缩以形成片剂。片剂掺混物或掺混物之一部分可在制片之前交替地进行湿式、干式或熔融制粒、熔融聚结或挤出。最终调配物可包括一或多个层，且可经包覆包衣或未包覆包衣；或经囊封。
片剂的调配详细论述于由H.Lieberman和L.Lachman所著的“PharmaceuticalDosage Forms:Tablets,第1卷”,Marcel Dekker,N.Y.,N.Y.,1980(ISBN 0-8247-6918-X)中，该文献的揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
用于经口给药的固体调配物可调配为立即释放和/或调节释放。调节释放调配物包括延迟释放型、持续释放型、脉冲释放型、受控释放型、靶向释放型和程控释放型。
适合的调节释放调配物描述于美国专利第6,106,864号中。其他适合的释放技术(诸如高能分散体、及渗透且包衣粒子)的细节可见于Verma等人,PharmaceuticalTechnology On-line,25(2),1-14(2001)。用以达成受控释放的咀嚼锭的使用描述于WO00/35298中。这些参考文献的揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
胃肠外施用
本发明化合物亦可经直接施用至血流中、肌肉中或内部器官中。适用于胃肠外给药的方式包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内和皮下。适用于胃肠外施用的装置包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输注技术。
胃肠外调配物典型地为水溶液，其可含有赋形剂，诸如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选至3至9之pH)，但对于一些应用，其更适合调配为无菌非水性溶液或调配为待与合适的媒剂(诸如无菌无热原质水)结合使用的干燥形式。
在无菌条件下例如通过冻干来制备胃肠外调配物可易于使用本领域技术人员所熟知的标准制药技术来实现。
用于制备胃肠外溶液的本发明化合物的溶解度可通过使用诸如并入溶解度增强剂的适当的调配技术来增加。
用于胃肠外施用的调配物可调配为立即释放和/或调节释放。调节释放调配物包括延迟释放型、持续释放型、脉冲释放型、受控释放型、靶向释放型及程控释放型。因此，本发明化合物可调配为固体、半固体或摇溶性液体以作为植入式储槽形式施用，从而提供活性化合物的调节释放。此类调配物的实例包括经药物涂覆的血管内支架及PGLA微球粒。
本发明化合物亦可局部施用至皮肤或黏膜，亦即经真皮或经皮。出于此目的的典型调配物包括凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、乳膏、软膏、敷粉、敷料、泡沫剂、薄膜、皮肤贴片、糯米纸囊剂、植入剂、海绵、纤维、绷带以及微乳液。亦可使用脂质体。典型载剂包括乙醇、水、矿物油、液体石蜡脂、白石蜡脂、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可并入渗透增强剂；参见例如Finnin和Morgan的J Pharm Sci,88(10),955-958,(1999年10月)。局部施用的其他手段包括通过电穿孔、离子导入疗法、超声波药物透入疗法、超声波电渗法以及微针或无针(例如PowderjectTM、BiojectTM等)注射来递送。这些参考文献的揭示内容以全文引用的方式并入本文中。
用于局部施用的调配物可调配为立即释放和/或调节释放。调节释放调配物包括延迟释放型、持续释放型、脉冲释放型、受控释放型、靶向释放型和程控释放型。
本发明化合物亦可以鼻内或通过吸入施用，通常以干粉形式(单独，或作为混合物，例如与乳糖的干燥掺混物，或作为混合组分粒子，例如与磷脂(如磷脂酰胆碱)混合)、自干粉吸入器施用，或以气溶胶喷雾形式、自使用或不使用适合推进剂(例如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)的加压容器、泵、喷雾器、雾化器(优选为利用电流体动力学产生细雾的雾化器)或喷雾器施用。对于鼻内用途，散剂可包括生物黏着剂，例如壳聚糖或环糊精。
加压容器、泵、喷雾器(spray)、雾化器或喷雾器(nebulizer)含有本发明化合物的溶液或悬浮液，该溶液或悬浮液包含例如乙醇、乙醇水溶液或适用于分散、溶解活性物质或延长活性物质之释放的替代剂、作为溶剂的推进剂以及视情况选用的表面活性剂(例如脱水山梨糖醇、三油酸酯、油酸或寡聚乳酸)。
在于干粉或悬浮液调配物中使用之前，药品经微粉化至适合于通过吸入来递送的尺寸(通常小于5微米)。此可通过任何适当的粉碎方法来达成，例如螺旋喷射研磨、流化床喷射研磨、形成纳米粒子的超临界流体加工、高压均质化或喷雾干燥。
用于吸入器或吹入器中的胶囊(由例如明胶或HPMC制得)、泡壳以及药筒可经调配而含有本发明化合物、适合的粉末基质(如乳糖或淀粉)和效能调节剂(如l-白氨酸、甘露糖醇或硬脂酸镁)的粉末混合物。乳糖可为无水乳糖或呈单水合物形式，优选为后者。其他合适的赋形剂包括聚葡萄糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。
适用于使用电流体动力学产生细雾之雾化器的溶液调配物每次致动可含有1μg至20mg本发明化合物，且致动体积可在1μL至100μL范围内变化。典型调配物包括本发明化合物、丙二醇、无菌水、乙醇和氯化钠。可代替丙二醇使用的替代性溶剂包括丙三醇和聚乙二醇。
可将适合的调味剂(如薄荷醇和左薄荷脑)或甜味剂(如糖精或糖精钠)添加至欲用于吸入/鼻内施用的本发明的那些调配物中。
用于吸入/鼻内施用的调配物可使用例如聚(DL-乳酸-共-乙醇酸)(PGLA)调配为立即释放和/或调节释放型。调节释放调配物包括延迟释放型、持续释放型、脉冲释放型、受控释放型、靶向释放型和程控释放型。
在干粉吸入器及气雾剂的情况下，借助于传递定量的阀门来确定剂量单位。本发明的单元通常经配置以施用含有所需量之本发明化合物的计量剂量或“吸入(puff)”。总日剂量可以单次剂量，或更通常在一整天中以分次剂量施用。
本发明化合物可例如以栓剂、子宫托或灌肠形式经直肠或经阴道施用。可可脂为传统的栓剂基质，但适当时可使用各种替代物。
用于经直肠/经阴道施用的调配物可调配为立即释放和/或调节释放。调节释放调配物包括延迟释放型、持续释放型、脉冲释放型、受控释放型、靶向释放型和程控释放型。
本发明化合物亦可直接向眼睛或耳朵施用，通常呈等渗、pH值经调节之无菌生理盐水中的微粉化悬浮液或溶液的滴剂形式。适合于经眼及经耳施用的其他调配物包括软膏、可生物降解(例如可吸收凝胶海绵体、胶原蛋白)及不可生物降解(例如聚硅氧烷)植入物、晶圆、透镜及粒状或囊状系统，例如非离子表面活性剂囊泡(niosome)或脂质体。诸如交联聚丙烯酸、聚乙烯醇、玻尿酸、纤维素聚合物(例如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素或甲基纤维素)的聚合物或杂多糖聚合物(例如结冷胶)可与防腐剂(如苯扎氯铵)一起并入。此类调配物亦可通过离子导入疗法来递送。
用于经眼/耳施用的调配物可调配为立即释放和/或调节释放。调节释放调配物包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放或程控释放调配物。
其他技术
本发明化合物可与可溶性大分子实体(如环糊精及其适合的衍生物或含聚乙二醇的聚合物)组合，以便改良用于前述施用模式中之任一者中其溶解度、溶解速率、味觉遮蔽、生物利用度和/或稳定性。
例如，发现药物-环糊精复合物一般适用于大部分剂型及施用途径。可使用包合复合物与非包合复合物两者。作为与药物直接复合的替代方案，环糊精可用作辅助添加剂，亦即用作载剂、稀释剂或增溶剂。最常用用于此等目的的是α-环糊精、β-环糊精及γ-环糊精，其实例可见于PCT公开第WO 91/11172、WO 94/02518及WO 98/55148号中，其揭示的内容以全文引用之方式并入本文中。
剂量
所施用之活性化合物的量将视所治疗的个体、病症或病状的严重程度、施用速率、化合物的配置以及处方医师的判断而定。然而，有效剂量通常呈单次或分次剂量在每天每公斤体重约0.001至约100mg，优选地约1至约35mg/kg/天之范围内。对于70kg人类而言，此将相当于每天约0.05至约7000g、优选地每天约0.1至约2500g。在一些情况下，低于前述范围下限的剂量浓度可更适合，而在其他情况下，可在不产生任何有害副作用的情况下使用再更大剂量，其中此类较大剂量通常分为用于在一整天中施用的若干较小剂量。
分装式套组(Kit-of-parts)
因为需要施用活性化合物之组合，例如，为达到治疗特定疾病或病状的目的，在本发明的范畴内，其中至少一者含有根据本发明化合物之两种或更多种药物组合物宜呈适合于组合物共施用的套组形式组合。因此，本发明的套组包括两种或更多种独立药物组合物，其中之至少一者含有本发明化合物，以及用于分别保持所述组合物的构件，如容器、分次瓶或分次箔包。此套组的一个实例为常用于片剂、胶囊及其类似者的封装的泡罩封装。
本发明的套组尤其适用于施用不同剂型(例如经口及胃肠外)，用于以不同给药时间间隔施用各别组合物，或用于针对彼此滴定各别组合物。为有助于遵从性，套组通常包括施用指导，且可具备记忆辅助。
组合疗法
如本文所用，术语“组合疗法”是指依序或同时施用本发明化合物以及至少一种额外医药剂或药剂(例如抗癌剂、疫苗、抗细菌剂、抗病毒剂或抗寄生虫剂)。
如上所指出，本发明化合物可与一或多种额外抗癌剂(如抗癌剂)组合使用。本发明化合物在某些肿瘤中的功效可通过与其他经批准的或实验癌症疗法(例如辐射、手术、化学治疗剂、靶向疗法、抑制肿瘤中失调之其他信号传导路径的药剂及其他免疫增强剂(如PD-1拮抗剂等))组合来增强。
当使用组合疗法时，一或多种额外药剂可与本发明化合物相继或同时施用。在一个实施方案中，在施用本发明化合物之前，向哺乳动物(例如人类)施用额外药剂。在另一实施方案中，在施用本发明化合物之后，向哺乳动物(例如人类)施用额外试剂。在另一实施方案中，在施用本发明化合物之同时向哺乳动物(例如人类)施用额外试剂。
本发明亦涉及一种用于在哺乳动物(包括人类)中治疗异常细胞生长的药物组合物，其包含一定量的如上文所定义的本发明化合物(包括该化合物或其药学上可接受的盐的水合物、溶剂合物、多晶型物、异构体、前药和/或代谢物)以及一或多种(优选地一至三种)抗癌治疗剂。
在特定实施方案中，本发明化合物可与一或多种以下组合施用：靶向剂，例如PI3激酶、mTOR、PARP、Kras、IDO、TDO、ALK、ROS、MEK、VEGF、FLT3、AXL、ROR2、EGFR、FGFR、Src/Abl、RTK/Ras、Myc、Raf、PDGF、AKT、c-Kit、erbB、CDK2、CDK4、CDK4/CDK6、CDK5、CDK7、CDK9、SMO、CXCR4、HER2、GLS1、EZH2或Hsp90的抑制剂，或免疫调节剂，例如PD-1拮抗剂、PD-L1拮抗剂、CTLA-4拮抗剂、OX40激动剂、4-1BB激动剂或CD80激动剂。
在其他实施方案中，本发明化合物可与护理剂标准物组合施用，该护理剂标准物例如是他莫昔芬(tamoxifen)、多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、顺铂(cisplatin)、卡培他滨(capecitabine)、吉西他滨(gemcitabine)、长春瑞滨(vinorelbine)、依西美坦(exemestane)、来曲唑(letrozole)、氟维司群(fulvestrant)、阿那曲唑(anastrozole)或曲妥珠单抗(trastuzumab)。
合成方法
式I化合物可通过下述方法，连同有机化学技术中已知的合成方法或本领域技术人员已知的修饰及转化来制备。本文所用的起始物质可购得或可通过此项技术中已知的常规方法[例如标准参考书(如Compendium of Organic Synthetic Methods,第I-XII卷(Wiley-Interscience出版))中所揭示的那些方法]制备。优选方法包括但不限于以下所描述的方法。
在以下合成序列中之任一者期间，可能必需和/或需要保护任何有关分子上的敏感性或反应性基团。此可借助于常规保护基团达成，例如以下文献中所述的保护基：T.W.Greene,Protective Groups in Organic Chemistry,John Wiley&Sons,198；T.W.Greene；及P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Chemistry,John Wiley&Sons,1991；及T.W.Greene及P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Chemistry,John Wiley&Sons,1999，其特此以引用之方式并入。
式I化合物或其药学上可接受的盐可根据下文所论述的反应流程制备。除非另有指示，否则所述流程中的取代基如上文所定义。
产物的分离及纯化是通过一般技能化学工作者已知的标准程序实现。
本领域技术人员应了解，流程、方法及实施例中使用的不同符号、上标及下标是出于说明便利性和/或反映流程中引入其的次序而使用，且不意欲必须对应于随附权利要求书中的符号、上标或下标。此外，本领域技术人员将认识到在许多情况下，这些化合物将为混合物和对映异构体，其可在合成流程之不同阶段使用常规技术分离，例如但不限于结晶、正相层析、逆相层析和手性层析，从而得到单一的对映异构体。流程表示适用于合成本发明化合物的方法。其不以任何方式限制本发明的范畴。
本发明化合物根据本文提供的例示性程序及本领域技术人员已知的其变化来制备。
在整个实施例中使用以下缩写：“Ac”意谓乙酰基；“ACN”意谓乙腈；“BOC”、“Boc”或“boc”意谓N-叔丁氧基羰基；“Bu”意谓丁基；“tBu”意谓叔丁基；“DCM”(CH2Cl2)意谓二氯甲烷；“de”意谓非对映体过量；“DMF”意谓N,N-二甲基甲酰胺；“DMSO”意谓二甲基甲酰胺；“ee”意谓对映异构体过量；“Et”意谓乙基；“EtOAc”意谓乙酸乙酯；“EtOH”意谓醇；“i-Pr”或“iPr”意谓异丙基；“Me”意谓甲基；“MeOH”意谓甲醇；“MS”意谓质谱；“MTBE”意谓甲基叔丁基醚；“Ph”意谓苯基；“THF”意谓四氢呋喃；“SFC”意谓超临界流体色谱法；“TLC”意谓薄层色谱法；“Rf”意谓保留因子；“～”意谓大约；“RT”意谓包括环境温度的室温(通常为20℃至25℃)；“h”意谓小时；“min”意谓分钟；“equiv”意谓当量；“sat.”意谓饱和。
式I化合物可通过下文呈现的通用方法中所描述的程序制备或通过其常规变型来制备。除非另有指示，否则所述方法中的取代基如本文所定义。尽管R4在式I化合物中，但无论R4是R4-i还是R4-ii，对应合成途径内使用的中间体将为明显的。本发明亦涵盖用于制备式I化合物(除其中所用的任何新颖中间体之外)的任何一或多种此等方法。本领域技术人员将了解，以下反应可经冷却、加热、在微波照射下加热或在流动化学条件下操作。应进一步理解，可能需要或期望以与所述方法中所描述之次序不同的次序来进行转化，或修改一或多种转化，以提供本发明之所需化合物。
方法A
Figure BDA0003920000840000261
方法A提供其中R3b为氢的式I化合物的制备。在方法A中，使必需偶合搭配物或胺之间进行交叉偶合或亲核芳族取代，其中R1是如式I(或其经保护形式)中，得到A-2。对于式A-1之二氯吡啶，V为N(CH3)2、OH、哌啶、吗啉、OMe、OEt或OiPr。使A-2甲酰化接着得到醛A-3。随后与Ellman亚磺酰胺(Ellman's sulfinamide)缩合得到式A-4化合物。式A-4化合物的还原及碱介导的环化得到式A-5化合物。或者，其中R1为环丙基甲基的式I化合物，式A-5化合物可使用本文所描述的制造中间体15c的合成途径来制备。在下一步骤中，式A-5的氯吡啶与式A-6的羧酸之间的铱及镍介导的去羧基光氧化还原偶合得到式A-7化合物。在此步骤中，A-6的R3a取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。另外，R7和R8取代基可为H、Boc、替代性保护基或烷基；或者，R3a和R8取代基可为如最终产物式I中所需之环状系统的一部分。在钯或铜催化下使式A-7化合物与溴吡啶三唑A-8偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，得到式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，A-8的R4N取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。
Figure BDA0003920000840000271
使溴吡啶酯A-9进行肼分解(J.Med.Chem.,60(2),722-748；2017)，接着使相应酰肼A-10与二甲基甲酰胺二甲基缩醛反应，得到甲脒A-11。甲脒A-11与胺的缩合产生三唑A-8。
方法B
Figure BDA0003920000840000272
方法B提供其中R3a和R3b为氢的式I化合物的制备。在方法B的第一步中，自式A-3(V＝N(CH3)2、OH、哌啶、吗啉、OMe、OEt或OiPr)的化合物，与必需之氨基烷基锌酸盐进行Negishi交叉偶合(Negishi cross coupling)得到式B-1化合物。在此步骤中，R7和R8取代基为H、如式I中所示之烷基或Boc或替代性保护基。随后与Ellman亚磺酰胺之缩合、还原以及碱介导的环化得到式B-2化合物。在钯或铜催化存在下与溴吡啶三唑B-3偶合，并随后在标准条件下裂解任何保护基，产生式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，B-3的R4D取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。
Figure BDA0003920000840000273
式B-4的内酰胺转化为式B-5的O-烷基亚氨酸酯。在此步骤中，式B-4的R4D取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。式B-5的O-烷基亚氨酸酯与式A-10的酰基肼的环化得到式B-3化合物。
方法C
Figure BDA0003920000840000274
方法C提供其中R3b为甲基的式I化合物的制备。在方法C的第一步中，使式A-5化合物与式C-1的硼酸酯之间进行钯介导的交叉偶合，接着使烯烃或烯属烃进行铁介导的氢化叠氮化(hydroazidation)，还原，以及任选地对所得胺进行保护，得到式C-2化合物。在此步骤中，式C-1的R3a取代基和A-5的R1取代基应由所需产物式I或其受保护的变体表示。在钯或铜催化下使式C-2化合物与溴吡啶三唑A-8交叉偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，得到式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，A-8的R4N取代基应由与最终产物式I的R4或其受保护之变体中所需的相同部分表示。
方法D
Figure BDA0003920000840000281
方法D提供其中R3b为甲基的式I化合物的制备。在方法D的第一步中，在铜或钯催化下使式C-2化合物与溴吡啶D-1偶合，得到式D-2化合物。在此步骤中，C-2的R1、R7、R8和R3a取代基以及式D-1的R4C取代基应由与最终产物D-3或其受保护之变体中所需的相同部分表示。R7和/或R8亦可视情况由此步骤中的保护基表示。式D-2化合物与必需的胺之反应得到式D-3化合物。在此步骤中，R4N取代基应由与最终产物D-3或其受保护之变体中所需的相同部分表示。式D-3化合物中任何保护基的裂解最终得到式I-A的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。
Figure BDA0003920000840000282
为获得式D-1化合物，式A-10化合物与适当酰基氯化物进行反应，得到式D-4化合物。在此步骤中，酰基氯化物的R4C取代基由最终产物式I或其受保护的变体表示。式D-4化合物的环化提供式D-1化合物。
方法E
Figure BDA0003920000840000283
方法E提供其中R3b为氢的式I化合物的制备。在方法E之第一步中，
i.使式A-5化合物与三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡之间进行钯介导的交叉偶合，接着水解乙烯醚，得到式E-1的酮，其中R3a取代基应由与最终产物式I中所需的相同部分表示；或者
ii.使式A-5化合物与氰化锌之间进行钯介导的交叉偶合，接着与烷基格林纳试剂反应，得到式E-1之酮，其中R3a取代基应由与最终产物式I中所需的相同部分表示。
在此步骤中，A-5的R1取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。
自式E-1化合物，
i.还原酮，接着以甲磺酸盐或氯化物形式活化，用叠氮化合物置换并还原，以及任选地进行保护，得到式A-7化合物(R7和R8均为H，或R7为H且R8为Boc或替代性保护基)；或者
ii.还原酮，接着以甲磺酸盐或氯化物形式活化，用烷基胺置换并还原，以及任选地进行保护，得到式A-7化合物(R7和/或R8均为H、烷基、Boc或替代性保护基)；或者
iii.与亚磺酰胺缩合，接着还原，得到式A-7化合物(R7为H且R8为SOtBu)。
在钯或铜催化下使式A-7化合物与溴吡啶三唑A-8偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，得到式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，A-8的R4N取代基在R4内应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。
方法F
Figure BDA0003920000840000291
方法F提供其中R3b为氢的式I化合物的制备。在方法F中，在钯或铜催化下使式A-7化合物与溴吡啶三唑B-3偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，得到式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，B-3的R4C取代基以及式A-7的R1、R7、R8和R3a取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。在此步骤中，式A-7的R7和/或R8取代基亦可由Boc或另一保护基表示。
方法G
Figure BDA0003920000840000292
方法G提供其中R3b为氢的式I化合物的制备。在方法G的第一步中，式D-1的溴吡啶与必需的胺进行反应以得到式G-1化合物。在此步骤中，R4C和R4N取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。在钯或铜催化下使式G-1化合物与A-7偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，得到式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，式A-7的R1、R7、R8和R3a取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。在此步骤中，式A-7的R7和/或R8取代基亦可由Boc或另一保护基表示。
方法H
Figure BDA0003920000840000293
方法H提供其中R3b为甲基的式I化合物的制备。在方法H的第一步中，在钯或铜催化下使式C-2化合物与溴吡啶三唑B-3偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，得到式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，C-2的R1、R7、R8和R3a取代基以及式B-3的R4D取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。式C-2的之R7和/或R8亦可视情况由此步骤中的保护基表示。
方法I
Figure BDA0003920000840000301
方法I提供其中R3b为甲基的式I化合物的制备。在方法I的第一步中，在钯或铜催化下使式C-2化合物与溴吡啶三唑G-1偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，得到式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮，其中R3b为甲基。在此步骤中，C-2的R1、R7、R8和R3a取代基以及式G-1的R4C和R4N取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。式C-2的R7和/或R8亦可视情况由此步骤中的保护基表示。
方法J
Figure BDA0003920000840000302
方法J提供其中R3b为氢的式I化合物的制备。在方法J的第一步中，保护式J-1的醇以得到式J-2化合物(例如X＝OTBDMS)。式J-2化合物转化为式J-3的O-烷基亚氨酸酯。式J-3的O-烷基亚氨酸酯与式A-10的酰基肼的环化得到式J-4化合物。式J-4化合物经历在钯或铜催化下与A-7化合物偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，得到式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，A-7的R1、R7、R8和R3a取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。在此步骤中，式A-7的R7和/或R8取代基亦可视情况由此步骤中的保护基表示。
或者，为获得式I化合物(其中R4为R4-ii且R4D为经F原子(X＝氟)取代的烷基)，自式J-4化合物(X为受保护的羟基)裂解保护基，提供其中X为羟基的式J-4化合物。接着可将醇转化成烷基氟，以得到其中X为氟的式J-4化合物。
方法K
Figure BDA0003920000840000311
方法K提供其中R3a和R3b为氢的式I化合物的制备。在方法K中，式J-4化合物(X为氟)经历在钯或铜催化下与式B-2化合物偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，产生式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，B-2的R1、R7和R8取代基以及式J-4的X取代基应由与最终产物式I或其受保护之变体中所需的相同部分表示。式B-2的R7和/或R8亦可视情况由此步骤中的保护基表示。
方法L
Figure BDA0003920000840000312
在方法L的第一步中，式L-1化合物经历Wittig烯化作用(Wittig olefination)，以得到式L-2化合物。式L-2化合物经还原及后续皂化得到式L-3化合物。在这些步骤中，L-1的R4D取代基以及L-2和L-3的R4D和R4F取代基及后续中间体由最终产物式I(在R4内)或其受保护的变体表示。或者，一些式L-3化合物可商购。在下一步骤中，式L-3化合物经历与式A-10化合物反应，以得到式L-4化合物。环化式L-4化合物，得到式L-5的噁二唑。先前进行式L-5化合物之热或酸介导的脱保护，随后环化，得到式L-6化合物。式L-6化合物经历在钯或铜下与式A-7、B-2或C-2化合物偶合，接着在标准条件下裂解任何保护基，产生式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。式I的R1、R2、R3a和R3b取代基视其在A-7、B-2或C-2或其受保护之变体的先前方法中的定义而定。
方法M
Figure BDA0003920000840000321
方法M提供其中R3a和R3b为氢的式I化合物的制备。在方法M中，在钯或铜催化下使式B-2化合物与溴吡啶三唑A-8偶合，得到式I之受保护的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。在此步骤中，式B-2的R1、R7和R8取代基以及式A-8的R4N取代基应由与最终产物式I中所需之相同部分表示，或由其受保护之变体表示或由保护基(例如，R7＝Boc)表示。在标准条件下裂解任何保护基产生式I的吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮。
制备合成中间体
对于本文中所制备的中间体及实施例，在已知立体化学之情况下，立体化学如所绘制，且名称指定特定立体化学，如(R)或(S)。已知如本文中所指定之立体化学，因为化合物是自已知、手性起始物质或外消旋混合物合成，且某些实施例或中间体的立体化学是使用X射线结晶证实。在后者的情况下，其他实施例或中间体的立体化学将随后基于上述实施例或中间体的已知手性及合成途径来推断。在已知立体化学但分离对映异构体之情况下，“或1”或“或2”为处于手性碳原子。在名称中，具有拆分但未证实的立体化学中心的碳是以符号“ξ”识别。在该碳处绘制的键表示立体化学；意谓，该碳将具有绘制的键构象(实心楔状物)或相反构象(散列楔状物)。参见例如实施例6a及实施例6b。外消旋化合物由标注“&1”指示，且键经绘制为成分确定的立体化学含义，碳将具有绘制的键构象(实心楔状物)或相反构象(散列楔状物)。参见例如中间体15。
中间体1：2-溴-6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶
Figure BDA0003920000840000322
步骤1：6-溴吡啶-2-碳酰肼(1a)
Figure BDA0003920000840000323
向6-溴-2-吡啶甲酸甲酯(16.0g，74.0mmol)于MeOH(120mL)中的溶液内添加肼单水合物(5.23g，88.8mmol，85％)，然后在室温下搅拌混合物16小时。将所得溶液浓缩至大约一半体积，且接着通过添加40mL甲基叔丁基醚且搅拌10分钟来湿磨。过滤所得白色固体且在真空下干燥，得到标题化合物(1a)(15g，94％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.82(br.s,1H),8.13(dd,J＝0.9,7.5Hz,1H),7.76-7.71(m,1H),7.64(dd,J＝0.9,8.0Hz,1H),4.08(br.s,2H)。(C6H6BrN3O)的m/z(ESI)为217.5(M+H)+。
步骤2：N'-[(6-溴吡啶-2-基)羰基]-N,N-二甲基亚肼基甲酰胺(1b)
Figure BDA0003920000840000331
在80℃下搅拌6-溴吡啶-2-碳酰肼(1a)(15.0g，69.4mmol)于二甲基甲酰胺二甲基缩醛(80mL)中的溶液16小时。减压浓缩所得混合物，得到残余物。向此残余物中添加甲基叔丁基醚(60mL)且搅拌40分钟。过滤所得黄色固体且干燥，得到标题化合物(1b)(16g，85％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),8.06(s,1H),8.01-7.97(m,1H),7.91(t,J＝7.7Hz,1H),7.80(dd,J＝1.0,7.8Hz,1H),2.84(s,6H)。(C9H11BrN4O)的m/z(ESI)为272.7(M+H)+。
步骤3：中间体1
向烧瓶中装入N'-[(6-溴吡啶-2-基)羰基]-N,N-二甲基亚肼基甲酰胺(1b)(2.0g，7.4mmol)、乙胺(0.5mL，333mg，7.4mmol)、乙酸(3mL)及MeCN(15mL，0.5M)。在95℃下加热溶液16小时。添加EtOAc(10mL)和H2O(10mL)。添加固体K2CO3直至水层之pH为约pH8。分离各层，然后用EtOAc(3×30mL)萃取水层。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩至干燥。残余物用EtOAc(0.3mL)及石油醚(3mL)浆化5分钟。通过过滤收集固体，得到呈淡黄色固体的中间体1(1.5g，80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,1H),8.19(dd,J＝7.7,0.9Hz,1H),7.99-7.90(m,1H),7.79(dd,J＝8.0,0.9Hz,1H),4.47(q,J＝7.2Hz,2H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H)；(C9H9BrN4)的m/z(APCI+)为252.7(M+H)+。
中间体2：(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑
Figure BDA0003920000840000332
步骤1：{(2S)-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-5-氧代戊-2-基}氨基甲酸叔丁酯(2a)
Figure BDA0003920000840000333
将(4S)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]戊酸(600mg，2.76mmol)于THF(13.8mL，0.2M)中的溶液冷却至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(于EtOAc中的50％溶液，3.62mL，6.08mmol)，随后移除浴且在室温下搅拌反应混合物30分钟。接着，添加N,N-二异丙基乙胺(2.89mL，16.6mmol)及6-溴吡啶甲酰肼(656mg，3.04mmol)，然后在室温下搅拌反应混合物22小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。反应物用水(15mL)淬灭，然后用EtOAc(20mL)转移至分液漏斗中。分离各层，且依次用20％柠檬酸(20mL)、NaHCO3饱和溶液(20mL)及盐水(20mL)洗涤有机相。有机萃取物接着经MgSO4干燥，过滤且浓缩至干燥，得到呈灰白色固体的标题化合物(2a)(1.07g，93％产率)，其不经进一步纯化即进行。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.76(br.s,1H),9.36(br.s,1H),8.15(dd,J＝0.9,7.5Hz,1H),7.77-7.71(m,1H),7.69-7.64(m,1H),4.45(br.d,J＝1.0Hz,1H),3.91(br.s,1H),2.47-2.35(m,2H),2.00-1.89(m,1H),1.75-1.66(m,1H),1.48(s,9H),1.22(d,J＝6.6Hz,3H)。(C11H15BrN4O2)的LCMS m/z(APCI)为315.0(M+H-Boc)+。
步骤2：{(2S)-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基]丁-2-基}氨基甲酸叔丁酯(2b)
Figure BDA0003920000840000341
向{(2S)-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-5-氧代戊-2-基}氨基甲酸叔丁酯(2a)(290mg，0.698mmol)于DCM(2.8mL，0.25M)中的溶液内添加三乙胺(0.292mL，2.09mmol)及对甲苯磺酰氯(160mg，0.838mmol)。在室温下搅拌混合物16小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。添加乙二胺(0.047mL，0.698mmol)以清除过量的对甲苯磺酰氯；在添加期间，立即形成沉淀。在室温下搅拌30分钟之后，用20％柠檬酸(5mL)洗涤反应物且分离各层。用DCM(5mL)萃取水层，接着用盐水(10mL)洗涤合并的有机层，经MgSO4干燥，过滤且浓缩至干燥，得到呈淡黄色固体的标题化合物(2b)(274mg，98％产率)，其不经进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(dd,J＝0.9,7.6Hz,1H),7.76-7.69(m,1H),7.68-7.65(m,1H),4.39(br.s,1H),3.85(br.s,1H),3.08-3.01(m,2H),2.17-2.03(m,1H),2.03-1.90(m,1H),1.44(s,9H),1.22(d,J＝6.6Hz,3H)。(C11H13BrN4O)的LCMS m/z(APCI)为297.0(M+H-Boc)+。
步骤3：中间体2
向微波小瓶中装入{(2S)-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基]丁烷-2-基}氨基甲酸叔丁酯(2b)(150mg，0.378mmol)及三氟乙醇(1.89mL，0.2M)，且密封，随后在微波中加热至180℃持续30分钟。LCMS分析显示起始物质耗尽。浓缩反应混合物，且残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至1:10MeOH/EtOAc)纯化，得到呈褐色胶质固体之中间体2(74.3mg，71％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(d,J＝7.7Hz,1H),7.74(t,J＝7.8Hz,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,1H),5.22-5.08(m,1H),3.21-3.16(m,1H),3.16-3.02(m,2H),2.55-2.44(m,1H),1.60(d,J＝6.6Hz,3H)。(C11H11BrN4)的LCMS m/z(APCI)为279.1(M+H)+。通过SFC(10至60％甲醇(0.5％ NH3)在400至450巴下的二氧化碳中测定为单一对映异构体，梯度时间＝2分钟，流动速率＝4mL/分钟，Chiralpack IC-U 50mm×3mm×1.6μm柱)。中间体2的立体化学是基于步骤1中使用(4S)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]戊酸来指定。
通过小分子X射线结晶学明确建立中间体2的绝对构象。在装备有Mo Kα辐射(λ＝0.71073)的Bruker APEX II Ultra CCD衍射仪上执行单晶X射线衍射研究。晶体按原样使用(通过自二氯甲烷的蒸气扩散生长)，将0.200×0.075×0.060mm无色晶体安装于具有帕拉顿油(paratone oil)的冷冻环上。使用Φ及ω扫描在100(2)K下在氮气流中收集数据。使用暴露时间1s(视2θ范围而定)，结晶检测器距离为45mm，扫描宽度为0.80°。100.0％完成对θ之25.242°的数据收集。将数据使用Bruker SAINT软件程序整合且使用SADABS软件程序缩放。通过直接方法(SHELXS)的溶液产生与所提出结构完全相符的定相模型。通过全矩阵最小平方(SHELXL-2014)各向异性地改进所有非氢原子。使用骑乘模型置放所有碳结合氢原子。使用SHELXL-2014中的适当HFIX命令相对于其母原子限定其位置。已使用适当HFIX命令改进C-H、N-H及O-H氢原子的位置。结晶数据概述于表1中。
表1
Figure BDA0003920000840000342
Figure BDA0003920000840000351
中间体3：(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑
Figure BDA0003920000840000352
步骤1：{(2S)-1-[甲氧基(甲基)氨基]-1-氧代丁烷-2-基}氨基甲酸叔丁酯(3a)
Figure BDA0003920000840000353
将(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁酸(2.0g，9.84mmol)于THF(49.2mL，0.2M)中的溶液冷却至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(于EtOAc中的50％溶液，12.9mL，21.6mmol)，随后移除浴且使反应混合物升温至室温且搅拌30分钟。接着，添加N,N-二异丙基乙胺(10.3mL，59.0mmol)及甲氧基(甲基)胺盐酸盐(1.06g，10.8mmol)，然后在室温下搅拌反应混合物18小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。反应物用水(40mL)淬灭且用EtOAc(40mL)转移至分液漏斗中。分离各层，且依次用20％柠檬酸(40mL)、NaHCO3饱和溶液(40mL)及盐水(40mL)洗涤有机相。有机萃取物接着经MgSO4干燥，过滤且浓缩至干燥，得到呈黄色油状物的标题化合物(3a)(1.29g，53％产率)，其不经进一步纯化即进行。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.28-5.12(m,1H),4.74-4.52(m,1H),3.79(s,3H),3.23(s,3H),1.85-1.73(m,1H),1.64-1.54(m,1H),1.46(s,9H),0.96(t,J＝7.5Hz,3H)。(C11H22N2O4)的LCMS m/z(APCI)为247.1(M+H)+。
步骤2：(S)-(1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3b)
Figure BDA0003920000840000361
将{(2S)-1-[甲氧基(甲基)氨基]-1-氧代丁烷-2-基}氨基甲酸叔丁酯(3a)(1.29g，5.25mmol)于THF(26.2mL，0.2M)中的溶液冷却至0℃。在0℃下将氢化锂铝(于2-MeTHF中的2.3M溶液，2.51mL，5.77mmol)逐滴添加至溶液中。在0℃下搅拌反应混合物40分钟。LCMS分析显示起始物质耗尽。反应物用EtOAc(10mL)及1M HCl(10mL)淬灭，然后转移至分液漏斗中。分离各层且用EtOAc(3×10mL)萃取水相。合并的有机萃取物接着经MgSO4干燥，过滤，且浓缩至干燥。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至100％ EtOAc)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(3b)(0.575g，59％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.60(s,1H),5.09(br.s,1H),4.22(br.s,1H),2.04-1.90(m,1H),1.73-1.64(m,2H),1.48(s,9H),0.99(t,J＝7.5Hz,3H)。
步骤3：(2E，4S)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]己-2-烯酸乙酯(3c)
Figure BDA0003920000840000362
向(S)-(1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3b)(575mg，3.07mmol)于DCM(6.14mL，0.5M)中的溶液内添加(乙氧基羰基亚甲基)三苯基磷烷(1.60g，4.61mmol)。在室温下搅拌反应混合物17小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。在添加异丙醇(8.5mL，0.36M)及氯化锌(1.26g，9.21mmol)以沉淀三苯基氧化膦之前，将反应浓缩至干燥。在室温下搅拌30分钟之后，过滤反应混合物且浓缩至干燥。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至100％EtOAc)纯化，得到呈无色油状物的标题化合物(3c)(653mg，83％产率，E/Z异构体的比率>20:1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.86(dd,J＝5.4,15.6Hz,1H),5.94(dd,J＝1.7,15.7Hz,1H),4.50(br.s,1H),4.31-4.16(m,3H),1.65-1.63(m,1H),1.60-1.51(m,1H),1.47(s,9H),1.32-1.30(m,3H),0.99-0.95(m,3H)。(C8H15NO2)的LCMS m/z(APCI)为158.2(M+H-Boc)+。
步骤4：(4S)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]己酸乙酯(3d)
Figure BDA0003920000840000363
向(2E,4S)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]己-2-烯酸乙酯(3c)(653mg，2.54mmol)于甲醇(12.7mL，0.2M)中的溶液内添加钯/碳(10％w/w，270mg，0.254mmol)。将反应小瓶抽成真空且在动态真空下用H2再填充10秒。接着在室温下在1atm H2下搅拌反应混合物18小时。在室温下搅拌混合物17小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。经
Figure BDA0003920000840000364
过滤反应物且浓缩至干燥。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至100％ EtOAc)纯化，得到呈无色油状物的标题化合物(3d)(589mg，90％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.37-4.23(m,1H),4.20-4.11(m,2H),3.61-3.46(m,1H),2.42-2.33(m,2H),1.93-1.82(m,1H),1.71-1.62(m,1H),1.57-1.51(m,1H),1.46(s,9H),1.44-1.38(m,1H),1.30-1.26(m,3H),0.94(t,J＝7.4Hz,3H)。
步骤5：(4S)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]己酸(3e)
Figure BDA0003920000840000371
向(4S)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]己酸乙酯(3d)(589mg，2.27mmol)于THF(11.4mL，0.2M)及MeOH(5.7mL，0.4M)中的溶液内添加LiOH(544mg，22.7mmol)于水(2.84mL，0.8M)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物24小时。在添加水及1M HCl之前浓缩反应物直至达至pH 5。用EtOAc(3×20mL)萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且浓缩至干燥，得到呈浅黄色油状物的标题化合物(3e)(260mg，50％产率)，其不经进一步纯化即使用。
步骤6：{(3S)-6-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-6-氧代己烷-3-基}氨基甲酸叔丁酯(3f)
Figure BDA0003920000840000372
将(4S)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]己酸(3e)(260mg，1.12mmol)于THF(5.6mL，0.2M)中的溶液冷却至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(于EtOAc中的50％溶液，1.47mL，2.47mmol)，随后移除浴且在室温下搅拌反应混合物30分钟。接着，添加N,N-二异丙基乙胺(1.17mL，6.74mmol)及6-溴吡啶甲酰肼(267mg，1.24mmol)，然后在室温下搅拌反应混合物18小时。反应物用水(15mL)淬灭且用EtOAc(20mL)转移至分液漏斗中。分离各层，且依次用20％柠檬酸(20mL)、NaHCO3饱和溶液(20mL)及盐水(20mL)洗涤有机相。有机萃取物接着经MgSO4干燥，过滤，且浓缩至干燥。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至100％ EtOAc)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(3f)(241g，50％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.76(br.s,1H),9.29(br.s,1H),8.15(d,J＝6.8Hz,1H),7.76-7.71(m,1H),7.68-7.64(m,1H),4.45-4.31(m,1H),3.69(br.s,1H),2.45-2.37(m,2H),2.04-1.94(m,1H),1.69-1.62(m,1H),1.49(s,9H),1.45(br.d,J＝7.3Hz,2H),0.99(t,J＝7.5Hz,3H)。(C12H17BrN4O2)的LCMS m/z(APCI)为329.0(M+H-Boc)+。
步骤7：{(3S)-1-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基]戊烷-3-基}氨基甲酸叔丁酯(3g)
Figure BDA0003920000840000373
向{(3S)-6-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-6-氧代己烷-3-基}氨基甲酸叔丁酯(3f)(241mg,0.561mmol)于DCM(2.2mL，0.25M)中的溶液内添加三乙胺(0.235mL，1.68mmol)及对甲苯磺酰氯(128mg，0.673mmol)。在室温下搅拌混合物16小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。添加乙二胺(0.038mL，0.561mmol)以清除过量之对甲苯磺酰氯；在添加期间，立即形成沉淀。在室温下搅拌30分钟之后，用20％柠檬酸(5mL)洗涤反应物且分离各层。用DCM(5mL)萃取水层，接着用盐水(10mL)洗涤合并的有机层，经MgSO4干燥，过滤且浓缩至干燥。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至100％ EtOAc)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(3g)(178g，77％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(dd,J＝0.7,7.6Hz,1H),7.77-7.72(m,1H),7.68-7.65(m,1H),4.35(br.d,J＝8.2Hz,1H),3.65(br.s,1H),3.07(dt,J＝6.1,10.0Hz,2H),2.21-2.11(m,1H),1.93-1.83(m,1H),1.65-1.61(m,1H),1.53-1.48(m,1H),1.46(s,9H),0.98(t,J＝7.4Hz,3H)。(C12H15BrN4O)的LCMS m/z(APCI)为311.0(M+H-Boc)+。
步骤8：中间体3
向微波小瓶中装入{(3S)-1-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基]戊烷-3-基}氨基甲酸叔丁酯(3g)(178mg，0.431mmol)及三氟乙醇(2.16mL，0.2M)，且密封，随后在微波中加热至180℃持续60分钟。LCMS分析显示起始物质耗尽。浓缩反应混合物，且残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至1:10MeOH/EtOAc)纯化，得到呈无色油状物的中间体3(116mg，91％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(dd,J＝0.7,7.7Hz,1H),7.67(t,J＝7.9Hz,1H),7.49(dd,J＝0.7,7.8Hz,1H),4.90-4.83(m,1H),3.07-2.89(m,3H),2.58-2.49(m,1H),2.04-1.97(m,1H),1.83-1.70(m,1H),0.96(t,J＝7.5Hz,3H)。(C12H13BrN4)的LCMSm/z(APCI)为293.0(M+H)+。通过SFC(10至60％甲醇(0.5％ NH3)在400至450巴的二氧化碳中测定为97.4％ee，梯度时间＝2分钟，流动速率＝4mL/分钟，Kromasil(R,R)Whelk-O 50mm×3mm×1.8μm柱)。立体化学是基于在第一步中使用(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁酸来指定。通过小分子X射线结晶学明确建立中间体3的绝对构象。
表2提供在装备有Mo Kα辐射(λ＝0.71073)之Bruker APEX II Ultra CCD衍射仪上执行的单晶X射线衍射研究。晶体按原样使用(通过自乙酸乙酯:甲醇(10:1)的蒸气扩散生长)。将0.180×0.065×0.055mm无色晶体安装于具有帕拉顿油的冷冻环上。使用Φ及ω扫描在100(2)K下在氮气流中收集数据。使用曝露时间2s(视2θ范围而定)，结晶检测器距离为45mm，扫描宽度为0.80°。100.0％完成对θ之25.242°的数据收集。将数据使用BrukerSAINT软件程序整合且使用SADABS软件程序缩放。通过直接方法(SHELXS)的溶液产生与所提出结构完全相符的定相模型。通过全矩阵最小平方(SHELXL-2014)各向异性地改进所有非氢原子。使用骑乘模型置放所有碳结合氢原子。使用SHELXL-2014中之适当HFIX命令相对于其母原子限定其位置。已使用适当HFIX命令改进C-H、N-H及O-H氢原子的位置。
表2
Figure BDA0003920000840000381
Figure BDA0003920000840000391
中间体4：(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-{6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000392
步骤1：{2-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]吡啶-4-基}(哌啶-1-基)甲酮(4a)
Figure BDA0003920000840000393
在100℃下搅拌(2,6-二氯吡啶-4-基)(哌啶-1-基)甲酮(600mg，2.32mmol)及(2R)-2-甲基吡咯烷(591mg，6.95mmol)于DMF(1.5mL)中的溶液16小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将反应物冷却至室温，添加H2O(40mL)，且用DCM(3×40mL)萃取反应物。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(24g SiO2，0至20％ EtOAc/庚烷)纯化，得到标题化合物(4a)(664mg，93％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.44(d,J＝1.0Hz,1H),6.21(d,J＝1.0Hz,1H),4.12(q,J＝7.1Hz,1H),3.72-3.62(m,2H),3.54(ddd,J＝10.5,7.6,2.9Hz,1H),3.40-3.28(m,2H),2.10-2.04(m,2H),1.75-1.62(m,4H),1.26(t,J＝7.2Hz,1H),1.21(d,J＝6.3Hz,2H；(C16H22ClN3O)的m/z(APCI+)为308.2(M+H)+。
步骤2：2-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛(4b)
Figure BDA0003920000840000394
向DMF(473mg，6.47mmol)于DCM(3.0mL)中的溶液内添加POCl3(992mg，6.47mmol)。搅拌混合物10分钟，且接着添加{2-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]吡啶-4-基}(哌啶-1-基)甲酮(4a)(664mg，2.16mmol)于DCM(3.0mL)中之溶液。在回流下搅拌混合物15小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将反应物浓缩至干燥且缓慢倾入NaHCO3饱和溶液(30mL)中。用DCM(3×30mL)萃取混合物。合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(24g SiO2，0至40％ EtOAc/庚烷)纯化，得到标题化合物(4b)(568mg，78％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.07(s,1H),5.99(s,1H),4.13-4.65(m,1H),3.68-3.83(m,1H),3.55-3.68(m,2H),3.35-3.55(m,1H),2.98-3.20(m,2H),1.88-2.17(m,3H),1.71-1.83(m,2H),1.55-1.67(m,3H),1.46-1.55(m,1H),1.31-1.42(m,1H),1.17-1.26(m,3H)；(C17H22ClN3O2)的m/z(APCI+)为336.1(M+H)+。
步骤3：N-[(E)-{2-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-基}亚甲基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4c)
Figure BDA0003920000840000401
在45℃下搅拌2-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛(4b)(432mg，1.29mmol)、(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(187mg，1.54mmol)及Ti(OEt)4(880mg，3.86mmol)于THF(10.0mL)中的混合物16小时。LCMS分析显示约25％剩余起始物质。再分批添加(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(62.4mg，0.515mmol)及Ti(OEt)4(293mg，1.29mmol)且在50℃下搅拌混合物16小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将反应冷却至室温。用DCM(50mL)稀释混合物，且用饱和NaHCO3溶液(35ml)及盐水(35mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈白色胶状物的标题化合物(4c)(495mg，88％产率)，其不经进一步纯化即使用。(C21H31ClN4O2S)之m/z(APCI+)为440.2(M+H)+。
步骤4：4-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(4d)
Figure BDA0003920000840000402
将N-[(E)-{2-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-基}亚甲基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4c)(495mg，1.13mmol)于THF(15.0mL)中之溶液冷却至0℃，且接着添加LiBH4(2.0M于THF中，620mL，1.24mmol)溶液。在0℃下搅拌混合物2小时且接着添加NaOMe之溶液(25％之MeOH溶液，2.5mL，10.1mmol)。使反应升温至室温且接着搅拌16小时。用DCM(60mL)稀释反应物且用NH4Cl饱和水溶液(60mL)及盐水(60mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，50至100％ EtOAc/庚烷)纯化，得到呈无色泡沫状的标题化合物(4d)(199mg，产率70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.68(s,1H),6.45(s,1H),4.35(s,2H),4.21-4.14(m,1H),3.58(ddd,J＝10.5,7.6,2.8Hz,1H),3.39(q,J＝8.9Hz,1H),2.13-1.97(m,2H),1.75(dt,J＝5.2,2.6Hz,1H),1.23(d,J＝6.3Hz,3H)。假定一个氢原子被水峰遮蔽；(C12H14ClN3O)的m/z(APCI+)为252.3(M+H)+。
步骤5：6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲腈(4e)
Figure BDA0003920000840000411
在微波中将4-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(4d)(438mg，1.74mmol)、Zn(CN)2(306mg，2.6mmol)、DMF(15mL)及Pd(PPh3)4(100mg，0.09mmol)的混合物加热至140℃持续30分钟。用DCM稀释反应物且过滤。用DCM洗涤滤饼。真空浓缩滤液，然后通过快速液相色谱法(SiO2，0至100％1:1EtOAc:DCM/庚烷)纯化粗化合物，得到呈黄色固体的标题化合物(4e)(375mg，89％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.00-6.94(m,1H),6.46-6.32(m,1H),4.55(s,2H),4.29-4.19(m,1H),3.61(ddd,J＝2.6,7.6,10.3Hz,1H),3.46-3.34(m,1H),2.22-2.02(m,3H),1.86-1.72(m,1H),1.25(d,J＝6.4Hz,3H)；(C13H14N4O)的m/z(APCI+)为243.1(M+H)+。
步骤6：4-乙酰基-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(4f)
Figure BDA0003920000840000412
在冰/水浴下向6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲腈(4e)(355mg，1.47mmol)于THF(15mL)中的溶液内添加MeMgBr(4.88mL，14.7mmol，3.0M于THF中)。在此温度下搅拌所得混合物10分钟，接着升温至室温且允许搅拌2小时。在0℃下用2N HCl(6mL)淬灭混合物且在室温下搅拌15分钟。混合物用饱和NaHCO3溶液中和且用DCM(3×40mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗化合物通过快速液相色谱法(SiO2，20％至50％ EtOAc/庚烷)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(4f)(190mg，50％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)6.98(s,1H),6.59(br.s,1H),4.70(s,2H),4.28(br.t,J＝5.7Hz,1H),3.64(ddd,J＝2.6,7.5,10.1Hz,1H),3.48-3.38(m,1H),2.70(s,3H),2.19-2.10(m,2H),2.08-2.01(m,1H),1.79(td,J＝2.6,5.0Hz,1H),1.30(d,J＝6.2Hz,3H)；(C14H17N3O2)的m/z(APCI+)为260.2(M+H)+。
步骤7：中间体4
向40mL小瓶中添加4-乙酰基-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(4f)(200mg，0.77mmol)、(S)-叔丁基亚磺酰胺(187mg，1.54mmol)、THF(1.54mL)及Ti(OEt)4(1.54mmol，0.323mL)。将小瓶加盖且加热至80℃持续48小时。接着将反应物冷却至-78℃(干冰/丙酮浴)且逐滴冷却三仲丁基硼氢化锂(1.54mmol，1.54mL，1.0M于THF中)。在-78℃下搅拌所得混合物3小时。使混合物升温至室温，然后逐滴用饱和NH4Cl(2mL)淬灭，接着添加DCM(20mL)及盐水(20mL)。经由
Figure BDA0003920000840000413
过滤混合物，且用DCM(40mL)洗涤。收集有机层，且用DCM(20mL)萃取水层。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质通过快速液相色谱法(SiO2，溶剂0至10％ MeOH/EtOAc)纯化，得到呈黄色泡沫状的中间体4(127mg，45％产率)。(C18H28N4O2S)的m/z(APCI+)为365.3(M+H)+。立体化学基于步骤1中使用(2R)-2-甲基吡咯烷及步骤7中使用(S)-叔丁基亚磺酰胺来指定。
中间体5：(S,R)-2-甲基-N-[(1R)-1-{6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000421
步骤1：6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-丙酰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(5a)
Figure BDA0003920000840000422
将6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲腈(4e)(808mg，3.33mmol)于THF(8.0mL)中的溶液冷却至0℃，且接着用溴化乙基镁溶液(3.0M于Et2O中，11.1mL，33.3mmol)处理。在室温下搅拌混合物1小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将反应冷却至0℃且通过添加2N HCl淬灭。在室温下搅拌混合物10分钟，通过添加NaHCO3饱和溶液中和，接着用DCM(2×30mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(24g SiO2，0至100％ EtOAc/庚烷)纯化，得到呈黄色油状物的标题化合物(5a)(646mg，71％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.01(s,1H),6.41(br.s,1H),4.73(s,2H),4.39-4.22(m,1H),3.66(ddd,J＝2.6,7.4,10.1Hz,1H),3.52-3.38(m,1H),3.30-3.14(m,2H),2.26-2.10(m,2H),2.06-2.01(m,1H),1.81(td,J＝2.5,5.1Hz,1H),1.31(d,J＝6.2Hz,3H),1.24(t,J＝7.3Hz,3H)；(C15H19N3O2)的m/z(APCI+)为274.2(M+H)+。
步骤2：(S,S)-2-甲基-N-[(1E)-1-{6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}亚丙基]丙烷-2-亚磺酰胺(5b)
Figure BDA0003920000840000423
向6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-丙酰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(5a)(640mg，2.34mmol)于THF(2.0mL)中的溶液内添加(S)-(-)-2-甲基l-2-丙烷亚磺酰胺(568mg，4.68mmol)及Ti(OEt)4(2.14g，9.37mmol)。在90℃下搅拌混合物23小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。使混合物冷却至室温且接着添加盐水(40mL)及DCM(30mL)。搅拌混合物10分钟且接着经由
Figure BDA0003920000840000424
过滤。分离各层。用DCM(30mL)萃取水层。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈白色泡沫状的标题化合物(5b)(779mg，88％产率)，其直接用于下一步骤中。(C19H28N4O2S)的m/z(APCI+)为377.2(M+H)+。
步骤3：中间体5
将(S,S)-2-甲基-N-[(1E)-1-{6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}亚丙基]丙烷-2-亚磺酰胺(5b)(654mg，1.40mmol)于THF(12.0mL)中的溶液冷却至-78℃，且接着用三仲丁基硼氢化锂(1.0M于THF中，2.5mL，2.5mmol)逐滴处理。在-78℃下搅拌混合物1.5小时。添加额外的三仲丁基硼氢化锂(1.0M，0.417mL，0.417mmol)且在-78℃下再搅拌混合物1.5小时。混合物用MeOH淬灭，用盐水(50mL)稀释，且用DCM(2×50mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(12g SiO2，0至10％ MeOH/DCM)纯化，得到呈黄色胶状物之中间体5(300mg，57％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,1H),6.48(s,1H),5.14(d,J＝6.6Hz,1H),4.35(s,2H),4.27-4.14(m,2H),3.59-3.44(m,1H),3.29-3.18(m,1H),2.14-2.01(m,2H),1.98-1.81(m,3H),1.73-1.60(m,1H),1.20(d,J＝6.2Hz,3H),1.07(s,9H),0.86-0.73(m,3H)；(C19H30N4O2S)的m/z(APCI+)为379.2(M+H)+。
立体化学是基于在合成中间体4之步骤1中使用的(2R)-2-甲基吡咯烷及步骤2中的(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺来指定。通过小分子X射线结晶学明确建立中间体5的绝对构象。
表3提供确认中间体5之立体化学的X射线衍射数据。在装备有Cu Kα辐射
Figure BDA0003920000840000431
之Bruker Microstar APEX II CCD衍射仪上执行单晶X射线衍射研究。明确指定绝对立体化学(Flack＝0.003(12))。在4℃下自醚/戊烷生长中间体5之晶体。将0.12×0.04×0.02mm片无色晶体安装于具有帕拉顿油的冷冻环上。使用Φ及ω扫描在100(2)K下在氮气流中收集数据。取决于使用1.25°之扫描宽度之每帧之2θ范围，结晶检测器距离为45mm且暴露时间为4、6、8、10、14或20秒。97.0％完成对θ之67.500°的数据收集。将数据使用Bruker SAINT软件程序整合且使用SADABS软件程序缩放。通过直接方法(SHELXS)之溶液产生与所提出结构完全相符的定相模型。通过全矩阵最小平方(SHELXL-2014)各向异性地改进所有非氢原子。使用骑乘模型置放所有碳结合氢原子。使用SHELXL-2014中之适当HFIX命令相对于其母原子限定其位置。
表3
Figure BDA0003920000840000432
Figure BDA0003920000840000441
中间体6：4-(2-氨基丙烷-2-基)-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000442
在室温下向6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲腈(4e)(213mg，0.88mmol)于THF(9mL)中的悬浮液中添加氯化镧(III)双(氯化锂)络合物(1.76mmol，2.93mL，0.6M)。在室温下搅拌所得混合物30分钟，接着冷却至-78℃(干冰/丙酮浴)且逐滴添加甲基锂(3.52mmol，2.20mL，1.6M)。在-78℃下搅拌所得混合物1小时，接着使其升温至室温。用饱和NH4Cl(20mL)淬灭混合物，且接着添加盐水(20mL)及DCM(20mL)。在室温下搅拌混合物5分钟，且经由
Figure BDA0003920000840000443
过滤。收集有机层，且用DCM(20mL)萃取水层。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，溶剂0至10％ MeOH/DCM)纯化，得到呈淡棕色固体之中间体6(157mg，65％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),6.42(s,1H),4.56(s,2H),4.17(br.t,J＝5.7Hz,1H),3.50(ddd,J＝2.4,7.2,9.8Hz,1H),3.30-3.22(m,1H),2.07-2.02(m,1H),2.00-1.92(m,2H),1.68(td,J＝2.4,4.9Hz,1H),1.41(s,3H),1.40(s,3H),1.20(d,J＝6.2Hz,3H)；(C15H22N4O)的m/z(APCI+)为275.2(M+H)+。
中间体7：(5R)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-(氟甲基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑
Figure BDA0003920000840000444
步骤1：(5R)-5-(氟甲基)吡咯烷-2-酮(7a)
Figure BDA0003920000840000445
用铝箔覆盖(5R)-5-(溴甲基)吡咯烷-2-酮(600mg，3.37mmol)于CH3CN(6.74mL,0.5M)中的溶液以排除光。向此溶液中一次性添加AgF(1.07g，8.43mmol)于CH3CN(12.5mL，0.27M)中的悬浮液。在室温下在黑暗中搅拌反应物36小时。反应物经
Figure BDA0003920000840000446
过滤，且浓缩至干燥。粗残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％ EtOAc至1:1EtOAc/丙酮)纯化，得到呈无色油状物的标题化合物(7a)(173mg，44％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.17(br.s,1H),4.49-4.17(m,2H),4.01-3.84(m,1H),2.44-2.28(m,2H),2.27-2.16(m,1H),1.88-1.75(m,1H)。19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-224.58(s,1F)。
步骤2：(2R-2-(氟甲基)-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(7b)
Figure BDA0003920000840000451
向(5R)-5-(氟甲基)吡咯烷-2-酮(7a)(170mg，1.45mmol)于CH3CN(6.74mL，0.5M)中的溶液内添加Boc2O(348mg，1.60mmol)及4-(二甲基氨基)吡啶(17.7mg，0.145mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。TLC分析(2:1EtOAc:丙酮)显示起始物质耗尽。浓缩反应混合物且通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至100％ EtOAc)纯化，得到呈无色油状物的标题化合物(7b)(277mg，88％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.78-4.42(m,2H),4.40-4.25(m,1H),2.76-2.62(m,1H),2.50-2.39(m,1H),2.29-2.14(m,1H),2.13-2.03(m,1H),1.56(s,9H).19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-233.52(s,1F)。
步骤3：[(2R)-1-氟-5-肼基-5-氧代戊-2-基]氨基甲酸叔丁酯(7c)
Figure BDA0003920000840000452
经由注射器向(2R)-2-(氟甲基)-5-氧代吡咯烷-1-甲酸三级乙酯(7b)(1.78g，8.19mmol)于THF(41.0mL，0.2M)中的溶液内添加单水合肼(1.3mL，41.0mmol)。在室温下搅拌混合物30分钟。TLC分析(1:1庚烷:EtOAc)显示起始物质耗尽。浓缩反应混合物，且接着添加EtOAc(50mL)及NH4Cl饱和水溶液(50mL)。分离各层，且用EtOAc(3×50mL)萃取水层。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤且浓缩至干燥，得到呈白色固体的标题化合物(7c)(1.6g，78％产率)，其不经进一步纯化即获得。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.15-5.00(m,1H),4.52-4.44(m,1H),4.39-4.33(m,1H),3.93-3.75(m,1H),2.40(br.s,2H),2.00-1.81(m,2H),1.46(s,9H).19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-232.02(s,1F)。
步骤4：{(2R)-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-1-氟-5-氧代戊烷-2-基}氨基甲酸叔丁酯(7d)
Figure BDA0003920000840000453
使6-溴吡啶-2-甲酸(1.4g，6.93mmol)于THF(34.7mL，0.2M)中的溶液冷却至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(于EtOAc中之50％溶液，9.1mL，15.2mmol)，随后移除浴且在室温下搅拌反应混合物30分钟。接着，添加N,N-二异丙基乙胺(7.24mL，41.6mmol)及[(2R)-1-氟-5-肼基-5-氧代戊烷-2-基]氨基甲酸叔丁酯(7c)(1.90g，7.62mmol)且在室温下搅拌反应混合物17小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。用水(30mL)淬灭反应物且用EtOAc(50mL)转移至分液漏斗中。分离各层，且依次用20％柠檬酸(30mL)、NaHCO3饱和溶液(30mL)及盐水(30mL)洗涤有机相。有机萃取物接着经MgSO4干燥，过滤且浓缩至干燥，得到呈黄色固体的标题化合物(7d)(2.37g，78％产率)，其不经进一步纯化即进行。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.74(br.s,1H),9.15(br.s,1H),8.14(d,J＝7.5Hz,1H),7.77-7.71(m,1H),7.70-7.65(m,1H),4.95(br.d,J＝9.2Hz,1H),4.62-4.36(m,2H),4.12-3.98(m,1H),2.49-2.37(m,2H),2.03-1.95(m,2H),1.49(s,9H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-232.01(s,1F)。(C11H14BrFN4O2)的LCMS m/z(APCI)为333.1(M+H-Boc)+。
步骤5：{(2R)-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-1-氟丁烷-2-基}氨基甲酸叔丁酯(7e)
Figure BDA0003920000840000461
向{(2R)-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-1-氟基-5-氧代戊烷-2-基}氨基甲酸叔丁酯(7d)(2.3g，5.3mmol)于DCM(21.2mL，0.25M)中的溶液内添加三乙胺(2.22mL，15.9mmol)及对甲苯磺酰氯(1.21g，6.37mmol)。在室温下搅拌反应物1.5小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。添加乙二胺(0.355mL，5.31mmol)以清除过量的对甲苯磺酰氯，在添加期间，立即形成沉淀。在室温下搅拌30分钟之后，用20％柠檬酸(20mL)洗涤反应物且分离各层。用DCM(40mL)萃取水层，接着合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤且浓缩至干燥，得到呈淡黄色固体的标题化合物(7e)(2.07mg，94％产率)，其不经进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(d,J＝7.6Hz,1H),4.90-4.69(m,1H),4.55(br.d,J＝2.8Hz,1H),4.43(br.s,1H),4.08-3.84(m,1H),3.15-3.05(m,2H),2.29-2.06(m,2H),1.45(s,9H).19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-231.82(s,1F)。(C11H12BrFN4O)的LCMS m/z(APCI)为315.0(M+H-Boc)+。
步骤6：中间体7
向微波小瓶中装入{(2R)-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-1-氟丁烷-2-基}氨基甲酸叔丁酯(7e)(1.00mg，2.41mmol)及三氟乙醇(10.4mL，0.17M)，且密封，随后在微波中加热至180℃持续30分钟。LCMS分析显示起始物质耗尽。浓缩反应混合物，且残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至1:10MeOH/EtOAc)纯化，得到呈黄色油状物之中间体7(564mg，78％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(d,J＝7.3Hz,1H),7.79-7.73(m,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,1H),5.26-5.01(m,2H),4.89-4.71(m,1H),3.25-3.08(m,3H),2.96-2.85(m,1H).19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-235.95(s,1F)。(C11H10BrFN4)的LCMS m/z(APCI)为297.0(M+H)+。立体化学基于步骤1中使用的(5R)-5-(溴甲基)吡咯烷-2-酮来指定。
中间体8：甲基({6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000462
步骤1：({3-甲酰基-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-2-基}甲基)甲基氨基甲酸叔丁酯(8a)
Figure BDA0003920000840000471
2-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛(4b)(600mg，1.79mmol)及PdCl2(dppf)(261mg，0.357mmol)于1,4-二噁烷(25.0mL)中的溶液经N2鼓泡5分钟且接着加热至80℃。在80℃下添加{[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]甲基}(氯)锌*(0.158M于THF中，39.6mL)的溶液，然后在相同温度下再搅拌混合物35分钟。LCMS分析显示起始物质耗尽。将混合物冷却至30℃且经由
Figure BDA0003920000840000472
过滤。用DCM(5×10mL)洗涤滤饼且滤液浓缩至干燥。将残余物与自平行反应运行获得的粗物质以相同方式与100mg的2-氯-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛组合。混合物通过快速液相色谱法(SiO2，1:1EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色胶状物的标题化合物(8a)(900mg，97％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),6.40-6.06(m,1H),4.91-4.45(m,2H),4.52-3.92(m,1H),3.69-3.47(m,3H),3.21-3.00(m,2H),2.98-2.84(m,3H),2.22-1.82(m,3H),1.83-1.66(m,1H),1.59(s,4H),1.41(s,7H),1.19(d,J＝18.2Hz,8H)。(C24H36N4O4)的m/z(ESI+)为445.4(M+H)+。
*如Angew.Chem.Int.Ed.2014,53,2678中所制备。
步骤2：甲基{[3-{(E)-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)亚氨基]甲基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(8b)
Figure BDA0003920000840000473
在50℃下搅拌({3-甲酰基-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-2-基}甲基)甲基氨基甲酸叔丁酯(8a)(1.40g，3.15mmol)、Ti(OEt)4(1.44g，6.30mmol)及(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(573mg，4.72mmol)于THF(50.0mL)中的混合物18小时。再分批添加Ti(OEt)4(359mg，1.57mmol)及(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(115mg，0.945mmol)且在50℃下再搅拌混合物20小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。用Na2CO3饱和溶液(150mL)淬灭反应物且添加DCM(100mL)。混合物经由
Figure BDA0003920000840000474
过滤且分离各层。用DCM(100mL)萃取水层。合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈黄色固体的标题化合物(8b)(1.7g，>99％产率)。(C28H45N5O4S)之m/z(ESI+)为548.5(M+H)+。
步骤5：中间体8
在0℃下向甲基{[3-{(E)-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)亚氨基]甲基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(8b)(1.72g，3.41mmol)于THF(20.0mL)中的溶液内添加LiBH4(68.6mg，3.15mmol)。在0℃下搅拌混合物1小时。TLC分析显示起始物质耗尽。使混合物升温至室温且添加NaOMe(30％之MeOH溶液，6.24g，34.6mmol)的溶液。搅拌混合物16小时。LCMS分析显示形成所需产物物质。将反应物浓缩至干燥。将残余物溶解于EtOAc(40mL)中且用H2O(40mL)洗涤。用EtOAc(30mL)萃取水层。合并的有机层用盐水(60mL)洗涤且经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，EtOAc)纯化，得到呈白色固体的中间体8(750mg，66％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.04-6.79(m,1H),6.68(s,1H),4.56-4.43(m,2H),4.43-4.33(m,2H),4.27-4.16(m,1H),3.58(ddd,J＝2.5,7.3,10.0Hz,1H),3.45-3.30(m,1H),3.01-2.91(m,3H),2.17-1.96(m,3H),1.80-1.72(m,1H),1.53-1.37(m,9H),1.26-1.23(m,3H)；(C19H28N4O3)之m/z(ESI+)为361.2(M+H)+。
立体化学是基于在合成中间体4之步骤1中使用(2R)-2-甲基吡咯烷来指定。
中间体9：甲基({6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000481
步骤1：2-氯-N,N-二甲基-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]吡啶-4-甲酰胺(9a)
Figure BDA0003920000840000482
将2,6-二氯-N,N-二甲基吡啶-4-甲酰胺(30.0g，137mmol)及N-甲基丙烷-2-胺(50.1g，685mmol)于MeCN(120mL)中之混合物分配于三个密封反应容器中且各自在100℃下搅拌60小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。合并反应混合物且浓缩至干燥。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，1:1EtOAc/石油醚)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(9a)(30.5g，87％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.45(d,J＝0.9Hz,1H),6.31(d,J＝1.0Hz,1H),4.82(p,J＝6.8Hz,1H),3.08(s,3H),2.97(s,3H),2.83(s,3H),1.16(d,J＝6.7Hz,6H)；(C12H18ClN3O)之m/z(ESI+)为255.9(M+H)+。
步骤2：2-氯-3-甲酰基-N,N-二甲基-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]吡啶-4-甲酰胺(9b)
Figure BDA0003920000840000483
在5至15℃下向DMF(21.9g，299mmol)于DCE(120mL)中的溶液内逐滴添加POCl3(45.9g，299mmol)。在室温下搅拌混合物15分钟且添加2-氯-N,N-二甲基-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]吡啶-4-甲酰胺(9a)(25.5g，99.7mmol)。在65℃下搅拌混合物16小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将反应物冷却至室温且逐滴添加至Na2CO3饱和水溶液(900mL)中。用DCM(2×300mL)萃取混合物。合并的有机层用盐水洗涤(5×500mL)且经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，1:1EtOAc/石油醚)纯化，得到呈棕色固体的标题化合物(9b)(23.7g，84％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.19(s,1H),6.25(br.s,1H),3.12(s,3H),3.02-2.85(m,3H),2.77(s,3H),1.22(br.d,J＝6.5Hz,6H)；(C13H18ClN3O2)的m/z(ESI+)为283.9(M+H)+。
步骤3：2-氯-N,N-二甲基-3-{(E)-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)亚氨基]甲基}-6-[甲基(丙基-2-基)氨基]吡啶-4-甲酰胺(9c)
Figure BDA0003920000840000491
在50℃下搅拌2-氯-3-甲酰基-N,N-二甲基-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]吡啶-4-甲酰胺(9b)(23.7g，83.5mmol)、(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(12.1g，100mmol)及Ti(OEt)4(38.1g，167mmol)于THF(250mL)中的混合物20小时。LMCS分析显示起始物质之耗尽。将反应物浓缩至干燥。残余物用NaHCO3饱和溶液(300mL)搅拌30分钟。过滤该混合物。用H2O(3×80mL)及石油醚(3×50mL)冲洗滤饼且在真空下干燥，得到呈黄色固体的标题化合物(9c)(32.3g，99％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.07(s,1H),6.74(s,1H),5.36-5.10(m,1H),3.30(s,3H),3.26(s,3H),3.10(s,3H),1.54(d,J＝6.7Hz,6H),1.49(s,9H)；(C17H27ClN4O2S)的m/z(ESI+)为387.2(M+H)+。
步骤4：4-氯-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(9d)
Figure BDA0003920000840000492
将2-氯-N,N-二甲基-3-{(E)-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)亚氨基]甲基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]吡啶-4-甲酰胺(9c)(32.3g，83.5mmol)于THF(200mL)中的溶液冷却至0℃且添加LiBH4(1.82g，83.5mmol)。在室温下搅拌混合物1小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。添加NaOMe(165g，919mmol)且在室温下搅拌混合物16小时。过滤反应混合物且用EtOAc(3×200mL)洗涤滤饼。将合并的滤液浓缩至干燥。将残余物溶解于DCM(300mL)中且用H2O(500mL)洗涤。用DCM(2×300mL)萃取水层。合并的有机层用盐水(500mL)洗涤且经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。在DCM(50mL)及石油醚(120mL)之混合物中浆化固体30分钟。通过过滤收集固体。在真空下干燥滤饼，得到呈灰白色固体的标题化合物(9d)(11.3g，56％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19(s,1H),6.79(s,1H),4.82(p,J＝6.7Hz,1H),4.35(d,J＝1.2Hz,2H),2.88(s,3H),1.18(d,J＝6.7Hz,6H)；(C11H14ClN3O)的m/z(ESI+)为239.9(M+H)+。
步骤5：6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲酸甲酯(9e)
Figure BDA0003920000840000501
在80℃下在50psi的CO氛围下搅拌4-氯-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(9d)(11.3g，47.1mmol)、PdCl2(dppf)(2.16g，2.95mmol)及TEA(14.3g，141mmol)于MeOH(200mL)中的混合物40小时。TLC分析(1:1EtOAc/石油醚)显示起始物质耗尽。将反应物浓缩至干燥。将残余物溶解于H2O(200mL)中且用DCM(2×150mL)萃取。合并的有机层用盐水(200mL)洗涤且经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。用DCM(50mL)浆化残余物30分钟且通过过滤收集固体。滤饼用石油醚(3×5mL)洗涤且真空干燥。滤液通过快速液相色谱法(SiO2，40％至70％ EtOAc/DCM)纯化。将含产物的馏份浓缩至干燥且与以上滤饼合并，得到呈黄色固体的标题化合物(9e)(12.3g，99％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12(s,1H),6.79(s,1H),4.89(p,J＝6.6Hz,1H),4.68(d,J＝1.1Hz,2H),3.97(s,3H),2.96(s,3H),1.21(d,J＝6.7Hz,6H)；(C13H17N3O3)的m/z(ESI+)为263.9(M+H)+。
步骤6：4-(羟基甲基)-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(9f)
Figure BDA0003920000840000502
在0℃下向6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲酸甲酯(9e)(1.0g，3.80mmol)于THF(60mL)中的混合物内逐滴添加LiAlH4(2.5M于THF中，1.67mL，4.18mmol)的溶液。在0℃下搅拌混合物1小时且接着在20℃下搅拌16小时。TLC分析(1:1EtOAc/石油醚)展示起始物质耗尽。通过添加20％ NaOH水溶液(0.5mL)淬灭混合物。向混合物中添加Na2SO4(4g)。搅拌混合物30分钟且接着过滤。将滤液浓缩至干燥，得到呈黄色固体的标题化合物(9f)(890mg，99％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.04(s,1H),6.82(s,1H),4.85(p,J＝6.6Hz,1H),4.67(d,J＝4.7Hz,2H),4.33(s,2H),4.09(t,J＝4.6Hz,1H),2.92(s,3H),1.20(d,J＝6.7Hz,6H)；(C12H17N3O2)的m/z(ESI+)为236.0(M+H)+。
步骤7：{6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基甲磺酸盐(9g)
Figure BDA0003920000840000503
在0℃下在N2氛围下向4-(羟基甲基)-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(9f)(890mg，3.78mmol)及TEA(957mg，9.46mmol)于THF(20.0mL)中的混合物内逐滴添加MsCl(953mg，8.23mmol)。在0℃下搅拌混合物。LCMS分析显示起始物质耗尽。用Na2CO3饱和水溶液(30mL)稀释反应物且用EtOAc(2×20mL)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈黄色固体的标题化合物(9g)(1.2g，99％产率)，其不经进一步纯化即使用。(C13H19N3O4S)的m/z(ESI+)为314.0(M+H)+。
步骤8：4-[(甲基氨基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(9h)
Figure BDA0003920000840000511
向{6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基甲磺酸盐(9g)(1.18g，3.78mmol)于THF(20.0mL)中的混合物内添加甲胺(2.0M于THF中，37.8mL，75.6mmol)溶液。搅拌混合物1小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将混合物浓缩至干燥，得到呈棕色固体的标题化合物(9h)(940mg，99％产率)，其不经进一步纯化即使用。(C13H20N4O)的m/z(ESI+)为249.0(M+H)+。
步骤9：中间体9
向4-[(甲基氨基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(9h)(940mg，11.4mmol)及TEA(1.15g，11.4mmol)于DCM(20.0mL)中的溶液内添加Boc2O(1.65mg，7.57mmol)。搅拌混合物30分钟。LCMS分析显示起始物质耗尽。将反应物浓缩至干燥。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，EtOAc)纯化，得到呈黄色固体的中间体9(600mg，46％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.81(s,1H),6.57-6.42(m,1H),4.91(p,J＝6.6Hz,1H),4.48(s,2H),4.35(d,J＝12.4Hz,2H),2.92(s,3H),2.88(s,3H),1.48(s,5H),1.41(s,4H),1.17(d,J＝6.7Hz,6H)；(C18H28N4O3)的m/z(ESI+)为349.2(M+H)+。
中间体10：(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000512
步骤1：6-[甲基(丙基-2-基)氨基]-1-氧代2,3-二氢-1-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲腈
Figure BDA0003920000840000513
在微波中将4-氯-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(9d)(706mg，2.95mmol)、Zn(CN)2(519mg，4.42mmol)、DMF(10mL)及Pd(PPh3)4(170mg，0.147mmol)的混合物加热至140℃持续30分钟。反应物用DCM稀释且过滤。用DCM洗涤滤饼。真空浓缩滤液，以得到呈黄色固体的标题化合物(10a)(544mg，80％产率)，其无需进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)9.01(s,1H),7.13(s,1H),4.80(td,J＝6.7,13.4Hz,1H),4.47(s,2H),2.89(s,3H),1.15(d,J＝6.7Hz,6H)；(C12H14N4O)的m/z(APCI+)为231.2(M+H)+。步骤2：6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-4-丙酰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(10b)
Figure BDA0003920000840000521
将6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲腈(10a)(511mg，2.22mmol)于THF(20.0mL)中的悬浮液冷却至0℃，且接着用溴化乙基镁溶液(3.0M于Et2O中，7.40mL，22.2mmol)处理。在室温下搅拌混合物1小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将反应物冷却至0℃且通过添加饱和NH4Cl(60mL)淬灭，接着用DCM(2×80mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(24g SiO2，0至100％EtOAc/庚烷)纯化，得到呈黄色泡沫状的标题化合物(10b)(125mg，22％产率)。(C14H19N3O2)的m/z(APCI+)为262.2(M+H)+。
步骤3：中间体10
向6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-4-丙酰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(10b)(124mg，0.475mmol)于THF(6.0mL)中的溶液内添加(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(92mg，0.759mmol)及Ti(OEt)4(433mg，1.90mmol)。在回流下搅拌混合物42小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。使混合物冷却至-78℃且接着用三仲丁基硼氢化锂(1.0M于THF中，1.9mL，1.90mmol)溶液逐滴处理。在-78℃下搅拌混合物4小时。混合物用MeOH淬灭，用盐水(30mL)稀释，且用DCM(20×2mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(12g SiO2，0至10％ MeOH/DCM)纯化，得到呈黄色固体的中间体10(72mg，41％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),6.64(s,1H),5.25(d,J＝6.7Hz,1H),4.94(quin,J＝6.7Hz,1H),4.34(s,2H),4.21(q,J＝6.7Hz,1H),2.84(s,3H),1.98-1.80(m,2H),1.13(dd,J＝3.6,6.7Hz,6H),1.06(s,9H),0.83(t,J＝7.3Hz,3H)。(C18H30N4O2S)的m/z(APCI+)为367.2(M+H)+。立体化学是基于步骤2中使用的(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺来指定。中间体11：{[6-(二甲基氨基)-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基]甲基}甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000522
步骤1：2-氯-6-(二甲基氨基)-N,N-二甲基吡啶-4-甲酰胺(11a)
Figure BDA0003920000840000531
在0至10℃下在N2氛围下向装有2,6-二氯吡啶-4-甲酸甲酯(58.0g，281mmol)的3.0L圆底烧瓶中添加N,N-二甲胺(38.1g，845mmol)。添加THF(200mL)。经3小时添加i-PrMgCl之溶液(2.0M的THF溶液，352mL，704mmol)，使反应温度维持在0至10℃下。在0℃下再搅拌反应物10分钟，且随后在25℃下搅拌18小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。反应物在冰浴中冷却且通过添加冷NH4Cl饱和水溶液(500mL)淬灭，维持反应温度<20℃。添加EtOAc(500mL)且分离各层。用EtOAc(500mL)萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤且经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将所得油状物溶解于庚烷(200mL)中且经旋转蒸发器浓缩直至固体形成。搅拌悬浮液0.5小时且通过过滤收集固体。用己烷(3×50mL)洗涤滤饼。将滤饼于1:20的EtOAc/石油醚(100mL)中浆化且通过过滤收集固体。滤饼用1:20EtOAc/石油醚(3×30mL)洗涤且接着在真空下干燥，得到呈浅黄色固体的标题化合物(11a)(51g，80％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.49(d,J＝0.7Hz,1H),6.35(d,J＝0.9Hz,1H),3.13-3.09(m,9H),2.98(s,3H)；(C10H14ClN3O)的m/z(ESI+)为227.9(M+H)+。
步骤2：2-氯-6-(二甲基氨基)-3-甲酰基-N,N-二甲基吡啶-4-甲酰胺(11b)
Figure BDA0003920000840000532
两组反应平行运行。在15至25℃下，在搅拌下，向含有DMF(250mL)的圆底烧瓶中添加POCl3(85.9g，560mmol)。在15至25℃下搅拌混合物15分钟且接着添加2-氯-6-(二甲基氨基)-N,N-二甲基吡啶-4-甲酰胺(11a)(25.5g，112mmol)。在50℃下搅拌混合物16小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将两种反应物合并，且接着通过缓慢倾倒于冷Na2CO3饱和水溶液中淬灭，维持pH值约9。用EtOAc(4×1.0L)萃取混合物。合并的有机物用盐水(5×600mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将粗产物与两个额外反应运行以相同方式与7.5g及5.0g的2-氯-6-(二甲基氨基)-N,N-二甲基吡啶-4-甲酰胺组合。将物质溶解于EtOAc(200mL)中且浆化20分钟。过滤悬浮液。用EtOAc(2×50mL)洗涤滤饼。在1:1之石油醚/EtOAc(80mL)中将滤饼浆化20分钟。过滤悬浮液且用1:1之石油醚/EtOAc(60mL)洗涤滤饼。将滤饼真空干燥。将合并的滤液浓缩至干燥。残余物用1:1的石油醚/EtOAc(100mL)浆化30分钟。过滤悬浮液且滤饼用1:1的石油醚/EtOAc(2×50mL)洗涤且真空干燥。合并的干燥固体于石油醚(200mL)中浆化10分钟且通过过滤收集固体。滤饼用石油醚(100mL)洗涤且真空浓缩。合并的滤液真空浓缩至约50mL且接着静置2天。通过过滤收集所得固体且滤饼用3:2之石油醚/EtOAc(2×50mL)洗涤。将固体合并为呈黄色固体的标题化合物(11b)(52g，经合并的反应组产率为73％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.21(d,J＝0.6Hz,1H),6.28(d,J＝0.6Hz,1H),3.19(s,6H),3.13(s,3H),2.77(s,3H)；(C11H14ClN3O2)的m/z(ESI+)为255.9(M+H)+。
步骤3：{[6-(二甲基氨基)-4-(二甲基胺甲酰基)-3-甲酰基吡啶-2-基]甲基l}甲基氨基甲酸叔丁酯(11c)
Figure BDA0003920000840000541
在N2氛围下使二甲基氨基甲酸叔丁酯(3.41g，23.5mmol)及N,N,N,N-四亚甲基二胺(3.27g，28.2mmol)于135mL THF中的混合物冷却至-55℃。缓慢添加s-BuLi的溶液(1.4M的环己烷溶液，20.1mL，28.2mmoL)，维持溶液温度小于-52℃(内部)。在-55℃下再搅拌混合物30分钟，且接着用ZnCl2的溶液(1.9M的2-甲基四氢呋喃溶液，14.8mL，28.2mmol)处理，维持反应温度小于-52℃。在-55℃下再搅拌溶液40分钟且接着升温至室温以提供{[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]甲基}(氯)锌(c＝0.195M)之溶液。一部分预成型锌酸酯溶液(90.2mL，17.6mmoL)在N2氛围下转移至烘干的250mL圆底烧瓶中，且浓缩至干燥，得到白色泡沫。烧瓶用N2回填。向独立烧瓶中装入2-氯-6-(二甲基氨基)-3-甲酰基-N,N-二甲基吡啶-4-甲酰胺(11b)(3.0g，10mmol)、PdCl2(dppf)(0.858g，1.17mmol)、1,4-二噁烷(50mL)及H2O(0.159g，8.8mmol)。经由套管插入将悬浮液转移至含有锌酸盐之烧瓶中，且接着在80℃下搅拌混合物80分钟。LCMS显示用一些剩余起始物质形成产物物质。添加{[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]甲基}(氯)锌溶液(2.0mL)之额外等分试样且在80℃下搅拌混合物20分钟。未观测到额外转化。使反应物冷却至0℃且通过添加NH4Cl饱和水溶液(10mL)及H2O(20mL)淬灭。在0℃下搅拌混合物20分钟，且接着经由
Figure BDA0003920000840000542
衬垫过滤。用EtOAc萃取滤液(4次)。合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(80g SiO2，0％至100％之EtOAc/庚烷纯化。所得白色泡沫用MTBE湿磨且在真空下浓缩，得到呈浅黄色固体的标题化合物(11c)(3.8g，95％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(d,J＝6.8Hz,1H),6.45(s,1H),4.71(s,2H),3.15(s,6H),2.99(s,3H),2.90(s,3H),2.75(s,3H),1.33(d,J＝69.8Hz,9H)；(C18H28N4O4)的m/z(ESI+)为365.3(M+H)+。
步骤4：{[6-(二甲基氨基)-4-(二甲基胺甲酰基)-3-{(E)-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)亚氨基]甲基}吡啶-2-基]甲基}甲基氨基甲酸叔丁酯(11d)
Figure BDA0003920000840000543
向{[6-(二甲基氨基)-4-(二甲基胺甲酰基)-3-甲酰基吡啶-2-基]甲基l}甲基氨基甲酸叔丁酯(11c)(3.0g，8.0mmol)及(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(1.2g，9.88mmol)于THF(40mL)中的溶液内添加Ti(OEt)4(5.63g，24.7mmol)。在50℃搅拌混合物隔夜。使反应物冷却至室温，用DCM(50mL)稀释，且通过添加NaHCO3饱和溶液(20mL)淬灭。剧烈搅拌溶液20分钟，且接着经由
Figure BDA0003920000840000544
衬垫过滤。用DCM洗涤
Figure BDA0003920000840000545
(3次)。合并的滤液经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(80g SiO2，0至100％ EtOAc/庚烷)纯化，得到呈无色泡沫状的标题化合物(11d)(3.89g，97％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(s,1H),6.46(s,1H),4.77-4.55(m,2H),3.12(s,6H),2.95(s,3H),2.93(s,3H),2.74(s,3H),1.41(s,4H),1.20(s,5H),1.12(s,9H)；(C22H37N5O4S)的m/z(ESI+)为468.4(M+H)+。
步骤5：中间体11
在N2氛围下向装入{[6-(二甲基氨基)-4-(二甲基胺甲酰基)-3-{(E)-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)亚氨基]甲基}吡啶-2-基]甲基}甲基氨基甲酸叔丁酯(11d)(3.89，8.32mmol)的圆底烧瓶中添加THF(42mL)。使混合物冷却至0℃且接着用LiBH4的溶液(2.0MTHF溶液，4.37mL，8.73mmol)处理。在0℃下搅拌混合物1小时且接着添加NaOMe的溶液(25％的MeOH溶液，17.1mL，74.9mmol)。使反应物缓慢升温至室温且搅拌16小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。混合物用EtOAc稀释且用NH4Cl饱和水溶液及盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(80g SiO2，0至100％ EtOAc/庚烷)纯化，得到呈无色泡沫状的中间体11(1.7g，64％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(s,1H),6.68(s,1H),4.42(s,2H),4.23(s,2H),3.06(s,6H),2.86(s,3H),1.36(m,9H)；(C16H24N4O3)的LCMSm/z(ESI+)为321.2(M+H)+。
中间体12：2-溴-6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶
Figure BDA0003920000840000551
在95℃下搅拌N'-[(6-溴吡啶-2-基)羰基]-N,N-二甲基亚肼基甲酰胺(1b)(29.0g,106.8mmol)及丙烷-1-胺(31.6g,534mmoL)于MeCN(440mL)及乙酸(110mL)中的混合物16小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将反应物浓缩至干燥。将残余物溶解于H2O(50mL)中且用1N NaOH(约500mL)碱化至pH值约9。用EtOAc(3×150mL)萃取混合物。合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物用EtOAc(50mL)浆化10分钟且通过过滤收集固体。用石油醚(2×50mL)洗涤滤饼且真空干燥，得到呈黄色固体状的标题化合物(中间体12)(21.0g，74％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),8.20(dd,J＝0.7,7.8Hz,1H),7.98-7.91(m,1H),7.78(dd,J＝0.7,8.0Hz,1H),4.45-4.36(m,2H),1.77(sxt,J＝7.4Hz,2H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H)；(C10H11BrN4)的m/z(ESI+)为266.7(M+H)+。
中间体13：(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000552
步骤1：4-乙酰基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000553
在0℃下将甲基溴化镁(9.11g，76.4mmol，25.9mL，3.0M)添加至6-(异丙基(甲基)氨基)-1-氧代-2,3-二氢-1-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲腈(中间体10a)(1.76g，7.64mmol)于THF(70mL，c＝0.11M)中的溶液内。在此温度下搅拌混合物10分钟且接着升温至室温且搅拌3小时。接着在室温下用2M HCl(7mL)逐滴淬灭混合物且搅拌30分钟。添加NaHCO3饱和溶液(70mL)以中和溶液且用DCM(3×100mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥且真空浓缩。所得残余物通过快速液相色谱法(40g SiO2，10至40％ EtOAc/庚烷)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(13a)(553mg，29％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(s,1H)7.06(s,1H)4.88(br.d,J＝6.72Hz,1H)4.49(s,2H)2.94(s,3H)2.61(s,3H)1.19(d,J＝6.60Hz,6H)；(C13H17N3O2)的m/z(APCI+)为248.2(M+H)+。
步骤2：中间体13
在90℃下在N2下加热加热4-乙酰基-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(13a)(8.10g，32.75mmol)、(S)-叔丁基亚磺酰胺(7.94g，65.5mmol)于Ti(OEt)4(29.9g，131mmol)中之于THF(100mL)中的混合物72小时，且通过LCMS监测反应物。随后将反应物冷却至0℃且在0℃下逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(1M于THF中，131mmol，131mL)。在0℃下搅拌混合物3小时。在0至5℃下用饱和NH4Cl(200mL)及盐水(200mL)淬灭混合物。经由
Figure BDA0003920000840000561
衬垫过滤悬浮液，且用DCM(500mL)洗涤滤饼。分离滤液层且用DCM(2×100mL)萃取水层。合并的有机层用盐水(250mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(SiO2，0至10％ MeOH/DCM)纯化，得到呈黄色固体的中间体13(10g，87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.83(br.s,1H),6.75(s,1H),4.89-4.76(m,1H),4.48-4.39(m,1H),4.37-4.26(m,3H),2.83(s,3H),1.55(d,J＝6.6Hz,3H),1.19-1.07(m,15H)。(C17H28N4O2S)的m/z(APCI+)为353.2(M+H)+。立体化学系基于步骤1中使用之(S)-叔丁基亚磺酰胺来指定。
中间体14：(S,R)-2-甲基-N-[(1S)-1-{6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000562
在N2下，在100℃下4-乙酰基-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(4f)(4000mg，15.43mmol)、(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2240mg，18.5mmol)于Ti(OEt)4(20mL)中的混合物搅拌20小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。将黄色溶液冷却至0℃且用THF(50mL)稀释。在0℃下逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(38.6mmol，38.6mL，1M于THF中)。接着在10℃下搅拌混合物20小时。LCMS显示起始物质剩余。在0℃下再逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(38.6mmol，38.6mL 1M于THF中)且在10℃下再搅拌混合物2小时。TLC分析展示起始物质耗尽。在0至5℃下用NH4Cl饱和水溶液(200mL)淬灭混合物。经由
Figure BDA0003920000840000563
衬垫过滤悬浮液，且用EtOAc(2×50mL)洗涤滤饼。分离滤液层且用EtOAc(2×20mL)萃取水层。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物。残余物首先通过快速液相色谱法(SiO2，EtOAc/MeOH＝10:1)纯化且随后通过制备型HPLC(ACSSH-CA；方法柱：YMC Triart C18 250×50mm×7μm列；水(0.05％氢氧化铵v/v)-ACN，得到呈灰白色固体的中间体14(2.5g，44％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.70(s,1H),6.47(br.s,1H),4.57-4.34(m,4H),4.20(br.t,J＝5.9Hz,1H),3.64-3.53(m,1H),3.47-3.35(m,1H),2.20-1.99(m,3H),1.77(br.dd,J＝2.5,4.7Hz,1H),1.64(d,J＝6.5Hz,3H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H),1.22(s,9H)。(C18H28N4O2S)的m/z(ESI)为365.1(M+H)+。立体化学是基于使用(R)-叔丁基亚磺酰胺来指定。
中间体15：{2-甲氧基-1-[6-(1-甲基环丙基)-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000571
步骤1：3-氰基-2-羟基-6-(1-甲基环丙基)吡啶-4-甲酸乙酯(15a)
Figure BDA0003920000840000572
将2-氰基乙酰胺(10.0g，119mmol)及TEA(12.0g，119mmol)于EtOH(50mL)中的混合物加热至65℃(内部温度)，直至固体溶解为止，且接着添加3-(1-甲基环丙基)-3-氧代丙酸乙酯(24.6g，124mmol)。在65℃下搅拌混合物2小时。LCMS分析(1:10EtOAc/石油醚)显示起始物质耗尽。将反应物冷却至10℃。通过过滤收集所得沉淀。滤饼用MTBE(3×10mL)洗涤且真空干燥。将滤液浓缩至干燥。添加EtOH(10mL)且接着添加MTBE(30mL)。通过过滤收集所得固体。滤饼用EtOH(5mL)及MTBE(2×10mL)洗涤且真空干燥。合并固体，得到呈黄色固体的标题化合物(15a)(25.0g，85％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.74(br.s,1H),6.63(br.s,1H),4.36(q,J＝7.1Hz,2H),1.45-1.27(m,6H),1.16-1.06(m,2H),0.92-0.75(m,2H)。
步骤2：2-氯-3-氰基-6-(1-甲基环丙基)吡啶-4-甲酸乙酯(15b)
Figure BDA0003920000840000573
在30℃下向3-氰基-2-羟基-6-(1-甲基环丙基)吡啶-4-甲酸乙酯(15a)(24.0g，97.5mmol)于MeCN(487mL)中的溶液内逐滴添加POCl3(74.7g，487mmol)。在65℃下搅拌混合物60小时。TLC分析(EtOAc)显示起始物质耗尽。将溶液浓缩以移除剩余POCl3。将残余物倾至冰上且用NaHCO3饱和溶液碱化至pH约8。用EtOAc(2×100mL)萃取混合物。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速液相色谱法(1:10EtOAc/石油醚)纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物(15b)(21.9g，85％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(s,1H),4.50(q,J＝7.2Hz,2H),1.55(s,3H),1.50-1.40(m,5H),1.03(q,J＝3.9Hz,2H)；(C13H13ClN2O2)的m/z(ESI+)为264.9(M+H)+。
步骤3：4-氯-6-(1-甲基环丙基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(15c)
Figure BDA0003920000840000581
向2-氯-3-氰基-6-(1-甲基环丙基)吡啶-4-甲酸乙酯(15b)(2.5g，9.44mmol)于EtOH(500mL)中的溶液内添加阮尼镍(Raney Ni)(2.0g 34.1mmol)。在30℃下在30psi的H2氛围下搅拌黑色混合物48小时。TLC分析(1:10EtOAc/石油醚)显示起始物质耗尽。混合物经由
Figure BDA0003920000840000583
衬垫过滤。滤饼用MeOH(250mL)洗涤。将合并的滤液浓缩至干燥。残余物于EtOAc(5mL)中浆化20分钟且过滤悬浮液。滤饼用EtOAc(2mL)洗涤，且在真空下干燥，得到呈灰色固体的标题化合物(15c)(1.1g，52％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.66(br.s,1H),7.23-7.05(m,1H),4.56-4.34(m,2H),1.55(br.s,3H),1.39-1.11(m,2H),0.99-0.66(m,2H)；(C11H11ClN2O)之m/z(ESI+)为222.8(M+H)+。
步骤4：中间体15
向40mL小瓶中装入4-氯-6-(1-甲基环丙基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(15c)(200mg，0.898mmol)、Cs2CO3(644mg，1.98mmol)、N-(叔丁氧基羰基)-O-甲基丝氨酸(394mg，1.80mmol)、NiCl2·乙二醇二甲醚(39.5mg，0.18mmol)、吡啶-2-基-N-氰基脒(26.3mg，0.180mmol)、双[2-(2,4-二氟苯基)-5-甲基吡啶]-4,40-二-叔丁基-2,20-联吡啶六氟磷酸铱(III)(18.2mg，0.018mmol)及无水DMF(27mL)。混合物经N2鼓气2分钟且在15至25℃下用365nm光照射18小时(风扇速度5200r/分钟，搅拌速率1200r/分钟，100％ LED)。将混合物浓缩且通过快速液相色谱法(SiO2，10至20％[0％ MeOH/EtOAc]于石油醚中)纯化，得到黄色固体。通过制备型HPLC(柱：YMC Triart C18 150×25μm×5μm，水(0.05％氢氧化铵v/v)-CAN)之纯化，提供呈白色固体的中间体15(315mg，32％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(s,1H),6.77(s,1H),5.66(d,J＝8.0Hz,1H),4.94(d,J＝6.3Hz,1H),4.63-4.48(m,2H),3.77(dd,J＝8.9,5.0Hz,1H),3.58-3.44(m,1H),3.26(s,3H),1.62(s,3H),1.45(s,9H),1.30(q,J＝3.6Hz,2H),0.88(q,J＝3.4Hz,2H)；(C19H27N3O4)的m/z(ESI+)为362.3(M+H)+。
实施例：
本文中制备的实施例具有基于使用具有确认立体化学的中间体(例如实施例1和2)或基于使用由立体特异性起始物质制备的中间体(例如实施例3和4)指定的立体化学。
实施例1：4-[(1R)-1-氨基丙基]-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2，3-二氢-1H-吡咯并[3，4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000582
步骤1：(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-(2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000591
在40mL小瓶(加盖)在100℃(阻断温度)加热(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-{6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亚磺酰胺(中间体5)(63.0mg，0.17mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体2)(147mg，0.528mmol)、K3PO4(336mg，1.59mmol)、Pd2(dba)3(30.4mg，0.0528mmol)及XantPhos(61.1mg，0.106mmol)于1,4-二噁烷(4.5mL，c＝0.1M)中的混合物18小时。经由
Figure BDA0003920000840000592
过滤混合物，用DCM洗涤。真空浓缩滤液且通过快速液相色谱法(SiO2，0至10％MeOH/DCM)纯化粗化合物，得到呈浅黄色泡沫状的标题化合物(194mg，64％产率)。(C29H40N8O2S)的m/z(APCI+)为577.3(M+H)+。
步骤2：实施例1
将4N HCl于1,4-二噁烷(1.01mmol，0.252mL，4M)中的溶液添加至(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-(2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亚磺酰胺(194mg，0.336mmol)于MeOH(12mL)中之悬浮液中。在室温下搅拌所得混合物2小时。在减压下移除挥发物。粗产物通过手性SFC(Phenomenex Lux Cellulose-14.6×100mm 3μm柱，含30％MeOH+10mM NH3的CO2，在120巴下，4mL/分钟)纯化，得到呈淡黄色固体的实施例1(146mg，92％产率，>99％de)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝8.3Hz,1H),8.01(t,J＝8.0Hz,1H),7.91(d,J＝7.7Hz,1H),6.67(s,1H),5.22-5.03(m,3H),4.33-4.21(m,2H),3.60-3.50(m,1H),3.41-3.32(m,1H),3.06-2.98(m,1H),2.97-2.89(m,1H),2.88-2.76(m,1H),2.37-2.27(m,1H),2.09-1.86(m,5H),1.69-1.62(m,1H),1.44(d,J＝6.4Hz,3H),1.15(d,J＝6.2Hz,3H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H)；(C26H32N8O)的m/z(APCI+)为473.2(M+H)+；[α]D22＝+37.0°(c＝0.1M，MeOH)。
表4提供确认实施例1的立体化学的单晶X射线衍射数据。在装备有Cu Kα辐射
Figure BDA0003920000840000593
Figure BDA0003920000840000594
之Bruker Microstar APEX II CCD衍射仪上执行单晶X射线衍射研究。实施例1的晶体自乙腈/戊烷生长。将0.25×0.2×0.15mm片无色晶体安装于具有帕拉顿油之冷冻环上。使用Φ及ω扫描在100(2)K下在氮气流中收集数据。取决于使用1.00°之扫描宽度之每帧的2θ范围，结晶检测器距离为40mm且暴露时间为2或10秒。99.4％完成对θ之67.679°的数据收集。将数据使用Bruker SAINT软件程序整合且使用SADABS软件程序缩放。通过直接方法(SHELXS)之溶液产生与所提出结构完全相符的定相模型。通过全矩阵最小平方(SHELXL-2014)各向异性地改进所有非氢原子。使用骑乘模型置放所有碳结合氢原子。使用SHELXL-2014中之适当HFIX命令相对于其母原子限定其位置。
表4
Figure BDA0003920000840000595
Figure BDA0003920000840000601
实施例2：4-[(1R)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000602
步骤1：(S,S)-N-[(1R)-1-(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000603
在N2下，向(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-{6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亚磺酰胺(中间体4)(50mg，0.14mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体3)(42.2mg，0.144mmol)及K3PO4(87.4mg，0.412mmol)于1,4-二噁烷(3mL)中的混合物内添加Pd2(dba)3(12.6mg，0.014mmol)及XantPhos(15.9mg，0.027mmol)。在添加之后，混合物经N2鼓泡2分钟。将所得混合物密封且在85℃下搅拌18小时。真空浓缩反应混合物，且残余物通过快速液相色谱法(SiO2，10％EtOAc/MeOH)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(60mg，76％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J＝8.2Hz,1H),8.18(d,J＝7.4Hz,1H),7.93(t,J＝8.0Hz,1H),6.76(s,1H),5.11-5.02(m,2H),4.99-4.93(m,1H),4.61-4.49(m,2H),4.34-4.27(m,1H),3.67-3.57(m,1H),3.46-3.35(m,1H),3.11-3.01(m,3H),2.65(td,J＝3.7,7.9Hz,1H),2.19-2.08(m,3H),2.07(s,1H),1.86-1.79(m,1H),1.79(br.d,J＝2.3Hz,1H),1.69(d,J＝6.4Hz,3H),1.31-1.28(m,3H),1.22(s,9H),1.02(t,J＝7.5Hz,3H)；(C30H40N8O2S)的m/z(ESI+)为577.5(M+H)+；[α]D22＝+85.3°(c＝0.1M,MeOH)。
步骤2：实施例2
在0℃下，向(S,S)-N-[(1R)-1-(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(60mg,0.10mmol)于EtOAc(5mL)中的溶液内逐滴添加于EtOAc(3mL)中的4M HCl。在20℃下搅拌混合物1小时。在真空中浓缩反应混合物。向残余物中添加EtOAc(10mL)及水(10mL)。水层用饱和NaHCO3碱化且用DCM(10mL×3)萃取。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。冻干残余物16小时，得到呈浅黄色固体的实施例2(47mg，95％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(d,J＝8.3Hz,1H),8.09-8.02(m,1H),8.02-7.97(m,1H),6.58(s,1H),5.33(d,J＝17.1Hz,1H),5.10(d,J＝17.1Hz,1H),4.99(br.t,J＝6.1Hz,1H),4.29-4.19(m,1H),4.12(q,J＝6.9Hz,1H),3.55(br.t,J＝8.0Hz,1H),3.04-2.85(m,3H),2.58-2.55(m,1H),2.11-1.96(m,4H),1.79-1.66(m,2H),1.36(d,J＝6.5Hz,3H),1.24-1.20(m,3H),0.93(t,J＝7.4Hz,3H)；(C26H32N8O)的m/z(ESI+)为473.4(M+H)+。
实施例3：4-[(1S)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000611
步骤1：(S,R)-N-[(1S)-1-(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000612
在N2下向(S,R)-2-甲基-N-[(1S)-1-{6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亚磺酰胺(中间体14)(2000mg，5.487mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体3)(1610mg，5.49mmol)及K3PO4(3490mg，16.5mmol)于1,4-二噁烷(30mL)中的悬浮液内添加Pd2(dba)3(502mg，0.549mmol)及XantPhos(635mg，1.10mmol)。在添加之后，混合物用氩气鼓泡2分钟。将所得混合物密封且在85℃下搅拌18小时。TLC分析显示起始物质耗尽。在搅拌下用H2O(100mL)稀释混合物且过滤所得悬浮液。分离水性滤液。用DCM(100mL)洗涤固体。有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到黄色残余物(3g)，通过快速液相色谱法(SiO2，0至10％ MeOH/EtOAc)纯化，得到黄色固体。将固体溶解于DCM(50mL)中且添加硅-SH(4g)。使黄色混合物回流20分钟。过滤混合物，且用DCM/MeOH(10:1)洗涤滤饼。浓缩滤液。再重复用硅-SH处理三次，得到呈黄色固体的标题化合物(2.3g，72.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(dd,J＝0.7,8.4Hz,1H),8.18(dd,J＝0.7,7.6Hz,1H),7.97-7.87(m,1H),6.76(s,1H),5.19-5.11(m,1H),5.03-4.94(m,2H),4.65-4.57(m,1H),4.57-4.51(m,1H),4.24(br t,J＝6.1Hz,1H),3.66-3.56(m,1H),3.48-3.39(m,1H),3.13-2.98(m,3H),2.71-2.59(m,1H),2.21-2.03(m,4H),1.87-1.75(m,2H),1.68(d,J＝6.5Hz,4H),1.30(d,J＝6.2Hz,3H),1.24(s,9H),1.02(t,J＝7.5Hz,3H)。(C30H40N8O2S)的m/z(ESI)为577.5(M+H)+。
步骤2：实施例3
在0℃下向(S,R)-N-[(1S)-1-(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2300mg，3.988mmol)于EtOAc(10mL)中的溶液内添加于EtOAc(20mL)中的4M HCl。在添加之后，在15℃下搅拌混合物1小时。通过LCMS监测反应。浓缩所得黄色悬浮液，得到残余物，将其溶解于H2O(30mL)中且用EtOAc(25mL)萃取。用饱和NaHCO3溶液将水层碱化至pH约8，且用DCM(3×35mL)萃取水层。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到固体，向其中添加DCM(50mL)。溶液经由玻璃微纤维过滤器GF/F(～0.7μm)过滤四次。浓缩滤液，得到黄色固体，通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150×40mm×5μm，水(0.05％氢氧化铵v/v)-CAN，梯度时间12分钟，流动速率25mL/分钟)。此提供呈黄色固体的实施例3(1.5g，79.6％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝8.0Hz,1H),8.08-7.90(m,2H),6.51(s,1H),5.26(d,J＝16.8Hz,1H),5.08-4.92(m,2H),4.23(br.t,J＝5.8Hz,1H),4.09(q,J＝6.5Hz,1H),3.53(br.t,J＝7.5Hz,1H),3.30-3.23(m,1H),3.07-2.83(m,3H),2.62-2.53(m,1H),2.16-1.85(m,6H),1.77-1.64(m,2H),1.33(d,J＝6.5Hz,3H),1.21(d,J＝6.0Hz,3H),0.93(t,J＝7.3Hz,3H)。(C26H32N8O)的m/z(ESI)为473.4(M+H)+。
实施例4：4-[(1R)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000621
步骤1：(S,S)-N-[(1R)-1-(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000631
在具有冷凝器的100mL烧瓶中，在N2下在100℃下加热(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亚磺酰胺(中间体13)(627mg，1.78mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体3)(521mg，1.78mmol)、K3PO4(1.13g，5.34mmol)、Pd2(dba)3(102mg，0.178mmol)及XantPhos(206mg，0.356mmol)于1,4-二噁烷(17.8mL，c＝0.1M)中的溶液18小时。将混合物冷却至室温，过滤且用DCM(20mL)洗涤。在减压下浓缩滤液。残余物通过快速液相色谱法(24g，SiO2，0至10％ MeOH/DCM)纯化，得到呈乳黄色固体的标题化合物(808mg，80％)。(C29H40N8O2S)之m/z(APCI+)为565.3(M+H)+。
步骤2：实施例4
将HCl于1,4-二噁烷(1.07mL，4.29mmol)中的4N溶液添加至(S,S)-N-[(1R)-1-(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(808mg，1.43mmol)于MeOH(14.3mL，c＝0.1M)中的溶液内。在室温下搅拌混合物2小时。在减压下移除挥发性物质。粗产物通过手性SFC(Phenomenex Lux Cellulose-1 21×250mm柱，含30％ MeOH+10mM NH3的CO2保持在120巴，100mL/分钟下)纯化，得到呈淡黄色固体的实施例4(345mg，52％产率，>99％de，>99％纯)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(dd,J＝1.0,8.1Hz,1H),8.07-8.01(m,1H),8.00-7.93(m,1H),6.78(s,1H),5.34-5.28(m,1H),5.17-5.10(m,1H),5.02-4.95(m,1H),4.89(td,J＝6.7,13.4Hz,1H),4.18(q,J＝6.7Hz,1H),3.01-2.94(m,2H),2.93(s,3H),2.62-2.54(m,2H),2.09-1.97(m,1H),1.84-1.72(m,1H),1.41(d,J＝6.6Hz,3H),1.20(d,J＝6.6Hz,6H),0.92(t,J＝7.5Hz,3H)；(C25H32N8O)的m/z(APCI+)为461.3(M+H)+。[α]D22＝+120.5°(c＝0.1M，MeOH)。
实施例5：4-[(1R)-1-氨基丙基]-2-{3-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000632
步骤1：(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-(2-{3-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003920000840000641
在40mL小瓶(加盖)中，在100℃加热(S,S)-2-甲基-N-(1-{6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}丙基)丙烷-2-亚磺酰胺(中间体10)(63mg，0.17mmol)、(5S)-3-(3-溴苯基)-5-甲基l-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体2)(48mg，0.172mmol)、K3PO4(109mg，0.516mmol)、Pd2(dba)3(9.88mg，0.0172mmol)及XantPhos(19.9mg，0.0344mmol)于1,4-二噁烷(4.5mL，c＝0.1M)中的混合物18小时。在减压下移除挥发物。残余物通过快速液相色谱法(12g，SiO2，0至10％ MeOH/DCM)纯化，得到呈乳黄色泡沫状的标题化合物(74.0mg，76％)。(C29H40N8O2S)之m/z(APCI+)为565.3(M+H)+。
步骤2：实施例5
将HCl于1,4-二噁烷(0.164mL，0.655mmol)中的4N溶液添加至(S,S)-2-甲基-N-[(1R)-1-(2-{3-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亚磺酰胺(74mg，0.13mmol)于MeOH(5.0mL，c＝0.026M)中的溶液。在室温下搅拌混合物2小时。在减压下移除挥发物。粗产物通过手性SFC(Phenomenex Lux Cellulose-1 4.6×100mm3μm柱，含5至60％ MeOH+10mM NH3的CO2经3.0分钟缓慢升温，在120巴下，4mL/分钟)纯化，得到呈淡黄色固体的实施例5(11.6mg，19％产率，>99％de，>95％纯)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.3Hz,1H),8.35(br.s,2H),8.07(t,J＝8.0Hz,1H),8.00-7.90(m,1H),6.91(d,J＝0.9Hz,1H),5.27-5.07(m,3H),5.01(br.s,1H),4.37(br.s,1H),3.14-2.97(m,2H),2.94(d,J＝1.5Hz,3H),2.92-2.85(m,1H),2.42-2.35(m,1H),2.06-1.91(m,2H),1.50(d,J＝6.1Hz,3H),1.19(d,J＝6.6Hz,3H),1.15(d,J＝6.6Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)；(C25H32N8O)的m/z(APCI+)为461.3(M+H)+。[α]D22＝+75.9°(c＝0.2M，MeOH)。
实施例6：4-[(1ξ)-1-氨基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000642
6a和6b的立体化学是以理解两种异构体为分离的(参见前述中间体部分之描述)任意描绘。
步骤1：{2-甲氧基-1-[6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000651
用氮气鼓泡{2-甲氧基-1-[6-(1-甲基环丙基)-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(中间体15)(136mg，0.376mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体2)(105mg，0.376mmol)、K3PO4(240mg，1.13mmol)及1,4-二噁烷(12mL)之溶液2分钟。向此混合物中添加Pd2(dba)3(34.5mg，0.038mmol)及XantPhos(43.5mg，0.075mmol)。将反应物加热至85℃且使其在此温度下搅拌18小时。使反应物冷却且与在43mg规模上进行的相同反应组合(中间体15)。浓缩经合并的混合物且经由快速液相色谱法(SiO2，10:1EtOAc/MeOH)纯化，接着制备型TLC(SiO2，10:1EtOAc/MeOH)得到呈黄色固体的标题化合物(170mg，61％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(dd,J＝12.2,8.3Hz,1H),8.20-8.10(m,1H),8.01-7.84(m,1H),5.66(d,J＝8.0Hz,1H),5.35-5.11(m,3H),5.03(d,J＝11.7Hz,1H),3.60-3.46(m,2H),3.27(d,J＝8.5Hz,3H),3.16-2.94(m,4H),2.50(d,J＝8.7Hz,2H),2.39(s,2H),1.71(s,3H),1.43(s,9H),1.33(q,J＝2.3Hz,2H),0.92(t,J＝2.6Hz,2H)。(C30H37N7O4)的m/z(ESI)为460.2(M+H)+。
步骤2：实施例6
在0℃下向{2-甲氧基-1-[6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.304mmol)于DCM(5mL)中的溶液内逐滴添加于EtOAc(3mL)中的4M HCl溶液。在20℃下搅拌反应物1小时且接着浓缩。所得残余物用H2O(15mL)稀释且用饱和NaHCO3溶液碱化至pH约8。用DCM(3×8mL)萃取混合物，且用盐水(20mL)洗涤经合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到黄色固体。所得固体经由制备型SFC(柱：Daicel Chiralpak 250mm×30mm×10μm，0.1％ NH3·H2O EtOH)纯化，得到：
如实施例6a之第一洗脱异构体(30mg，21％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(d,J＝7.9Hz,1H),8.08(t,J＝7.8Hz,1H),7.99(d,J＝7.8Hz,1H),7.57(s,1H),5.48(d,J＝18.1Hz,1H),5.30(d,J＝18.1Hz,1H),5.12(br.t,J＝6.5Hz,1H),4.30(t,J＝6.3Hz,1H),3.65-3.52(m,2H),3.30-3.26(m,3H),3.13-2.86(m,3H),2.40(br.dd,J＝8.4,11.9Hz,3H),1.59-1.52(m,6H),1.31-1.24(m,2H),0.89(d,J＝2.9Hz,2H)。(C25H29N7O)的m/z(ESI)为560.3(M+H)+。[α]D22＝+66.1°(c＝0.1M，MeOH)。
如实施例6b之第二洗脱异构体(33mg，23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(d,J＝7.9Hz,1H),8.07(t,J＝7.9Hz,1H),7.99(d,J＝7.3Hz,1H),7.55(s,1H),5.44(d,J＝18.1Hz,1H),5.31(d,J＝18.1Hz,1H),5.16(br.t,J＝6.6Hz,1H),4.29(t,J＝6.4Hz,1H),3.55(d,J＝6.4Hz,2H),3.25(s,3H),3.13-2.86(m,3H),2.40(br.dd,J＝8.2,11.6Hz,1H),2.12(br.s,2H),1.59-1.48(m,6H),1.30-1.23(m,2H),0.88(d,J＝3.1Hz,2H)。(C25H29N7O)的m/z(ESI)为560.2(M+H)+。[α]D22＝+41.5°。
额外本发明化合物是通过修改本文中例示的方法来制备且呈现于表5、表6和表7中。除非另外指明，否则所有具有手性碳的化合物制备和/或分离为如结构中所描绘的单一对映异构体。手性由化合物名称进一步表示，该名称将每个手性碳的特定立体化学指定为(R)或(S)。当所有手性碳如此称为已知立体化学时，该立体化学是基于使用已知手性起始物质和/或经由X射线结晶学确认经解析对映异构体。一些化合物由外消旋中间体制备且通过适当手性制备型SFC方法拆分成单一对映异构体。在已知立体化学但分离对映异构体之情况下，“或1”或“或2”为处于手性碳原子。在名称中，具有解析但未证实之立体化学中心之碳系以符号“ξ”识别。在该碳处绘制之键表示立体化学；意谓，该碳将具有绘制之键构象(实心楔状物)或相反构象(散列楔状物)。参见例如实施例101和102。获得时，在IUPAC名称之后提供旋亮度(αD22或αD20)，简单地提供为α。
表5
Figure BDA0003920000840000661
Figure BDA0003920000840000671
Figure BDA0003920000840000681
Figure BDA0003920000840000691
Figure BDA0003920000840000701
Figure BDA0003920000840000711
Figure BDA0003920000840000721
Figure BDA0003920000840000731
*圆括号内的字母为制备实施例的方法。
^除非另外指明，否则为[M+H]+。
实施例100：4-(2-氨基丙烷-2-基)-2-[6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000741
在120℃下用微波辐射加热4-(2-氨基丙烷-2-基)-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(中间体6)(63.0mg，0.23mmol)、2-溴-6-(4-乙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶(中间体1)(58.1mg，0.230mmol)、K2CO3(69.8mg，0.505mmol)、CuI(10.9mg,0.058mmol)及N,N-二甲基伸乙基二胺(0.115mmol，0.0125mL)于CH3CN(3.0mL)中的混合物30分钟。移除挥发性物质，且通过快速液相色谱法(SiO2，0至10％ MeOH/DCM)纯化残余物。产物通过HPLC(Phenemonex Gemini NX C18柱，150×21.2mm，5μm.移动A：水10mM乙酸铵，移动B：乙腈)进一步纯化，提供呈淡黄色固体的实施例100(49.3mg，49％产率)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),8.62(d,J＝8.4Hz,1H),8.11-8.04(m,1H),8.03-7.90(m,1H),6.55(s,1H),5.40(s,2H),4.65(q,J＝7.2Hz,2H),4.24-4.19(m,1H),3.29-3.33(m,2H,假定；被水峰部分遮挡),2.16-2.03(m,2H),1.98-1.89(m,1H),1.71-1.69(m,1H),1.50(t,J＝7.1Hz,3H),1.47(d,J＝5.9Hz,6H),1.22(d,J＝6.2Hz,3H)；(C24H30N8O)之m/z(APCI+)为447.3(M+H)+。
表6
Figure BDA0003920000840000742
Figure BDA0003920000840000751
Figure BDA0003920000840000761
Figure BDA0003920000840000771
Figure BDA0003920000840000781
Figure BDA0003920000840000791
Figure BDA0003920000840000801
Figure BDA0003920000840000811
Figure BDA0003920000840000821
Figure BDA0003920000840000831
Figure BDA0003920000840000841
Figure BDA0003920000840000851
Figure BDA0003920000840000861
Figure BDA0003920000840000871
*圆括号内的字母为制备实施例的方法。
^除非另外指明，否则为[M+H]+。
实施例200：2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基氨基)甲基]-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000872
步骤1：[(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)甲基]甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000873
在具有冷凝器的100mL烧瓶中，在N2下在100℃下加热甲基({6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体8)(752mg，2.09mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体3)(612mg，2.09mmol)、K3PO4(1.33g,6.26mmol)、Pd2(dba)3(120mg,0.209mmol)及XantPhos(241mg，0.417mmol)于1,4-二噁烷(20.9mL，c＝0.1M)中的混合物18小时。将混合物冷却至室温，过滤且用DCM(20mL)洗涤。在减压下浓缩滤液。残余物通过快速液相色谱法(24g，SiO2，0至10％ MeOH/DCM)纯化，得到呈乳黄色固体的标题化合物(1.13mg，85％)。(C31H40N8O3)的m/z(APCI+)为573.30(M+H)+。
步骤2：实施例200
将HCl于1,4-二噁烷(4.42mL，17.7mmol)中的4N溶液添加至[(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)甲基]甲基氨基甲酸叔丁酯(1.01g，1.77mmol)于DCM(22.1mL，c＝0.08M)中的溶液内。在室温下搅拌混合物2小时。在减压下移除挥发性物质。粗产物通过SFC(具有甲醇及10mM NH3之Zymor SPHER HADP柱)纯化，得到呈乳黄色固体的实施例200(640mg，77％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(br.s,1H),8.60(dd,J＝0.9,8.3Hz,1H),8.17-8.06(m,1H),8.04-7.95(m,1H),6.76(s,1H),5.28(d,J＝16.6Hz,1H),5.09-4.91(m,2H),4.45-4.19(m,3H),3.73-3.61(m,1H),3.49-3.37(m,1H),3.09-2.87(m,3H),2.76(s,3H),2.61-2.54(m,1H),2.15-1.96(m,4H),1.80-1.64(m,2H),1.21(d,J＝6.2Hz,3H),0.93(t,J＝7.4Hz,3H)。(C26H32N8O)的m/z(APCI+)为473.3(M+H)+。[α]D22＝+76.0°(c＝0.1M，MeOH)。
实施例201：2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲基氨基)甲基]-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000881
步骤1：[(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)甲基]甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000882
向配备有磁性搅拌棒的螺帽烧瓶中添加甲基({6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体9)(294mg，0.84mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体3)(260mg，0.88mmol)、K3PO4(537mg，2.53mmol)、Pd2(dba)3(78.0mg，0.084mmol)、XantPhos(97.6mg，0.17mmol)及1,4-二噁烷(16.9mL，0.05M)。混合物用N2鼓泡5分钟，随后密封烧瓶且加热至85℃持续22小时。LCMS分析显示起始物质耗尽。浓缩反应混合物，且残余物通过快速液相色谱法(SiO2，100％庚烷至1:10MeOH/EtOAc)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(344mg，73％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.72-8.65(m,1H),8.13(d,J＝7.5Hz,1H),7.91(t,J＝7.9Hz,1H),6.89(s,1H),5.13-4.85(m,4H),4.25-4.08(m,1H),3.10-2.96(m,6H),2.96-2.93(m,3H),2.66-2.58(m,1H),2.07-1.94(m,1H),1.87-1.74(m,1H),1.53(s,1H),1.50-1.35(m,9H),1.23(dd,J＝2.8,6.6Hz,6H),1.00-0.87(m,3H)；(C30H40N8O3)的LCMS m/z(APCI)为561.3(M+H)+。
步骤2：实施例201
向装备有磁性搅拌棒且含有[(2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)甲基]甲基氨基甲酸叔丁酯(344mg，0.62mmol)及CH2Cl2(12.3mL，0.05M)的烧瓶中添加HCl(4M于1,4-二噁烷中，1.53mL，6.2mmol)。在室温下搅拌20小时之后，LCMS分析显示起始物质耗尽。将甲苯(5mL)添加至反应烧瓶中且浓缩反应混合物。使粗残余物通过强离子交换(SCX)管以移除残余HCl且浓缩，得到呈黄色固体的实施例201(278mg，98％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.59(d,J＝7.8Hz,1H),8.11-8.03(m,1H),8.00-7.96(m,1H),6.77(s,1H),5.76(s,1H),5.25(s,1H),5.08(s,3H),3.84(s,2H),3.01-2.88(m,6H),2.61-2.54(m,1H),2.39(s,3H),2.05-1.93(m,1H),1.80-1.67(m,1H),1.16(d,J＝6.7Hz,6H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H)；(C25H32N8O)的LCMS m/z(APCI)为461.3(M+H)+。
实施例202：2-{6-[(5R)-5-(氟甲基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-4-[(甲氨基)甲基]-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000891
步骤1：[(2-{6-[(5R)-5-(氟甲基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)甲基]甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000892
在N2下向甲基({6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体8)(90mg，0.25mmol)、(5S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑(中间体7)(74.2mg，0.250mmol)及K3PO4(159mg，0.749mmol)于1,4-二噁烷(8mL)中的混合物内添加Pd2(dba)3(22.9mg，0.025mmol)及XantPhos(28.9mg，0.0499mmol)。在添加之后，混合物用N2鼓泡2分钟。将所得混合物密封且在85℃下搅拌18小时。向反应混合物中添加盐水(30mL)。用EtOAc(20mL×2)萃取混合物。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩，得到棕色固体(250mg)。物质通过快速液相色谱法(SiO2，DCM/EtOAc＝1:1)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(120mg，83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝8.3Hz,1H),8.16(d,J＝7.6Hz,1H),7.96-7.86(m,1H),6.72(s,1H),5.40(d,J＝30.1Hz,1H),5.01(dd,J＝48.3,16.6Hz,4H),4.71(d,J＝14.5Hz,1H),4.26-4.05(m,1H),3.59(t,J＝8.7Hz,1H),3.39(q,J＝9.0,8.4Hz,1H),3.22-3.05(m,3H),3.02(s,3H),2.92-2.82(m,1H),2.19-1.96(m,4H),1.77-1.71(m,1H),1.43(s,9H),1.26(d,J＝6.3Hz,3H)。(C30H37FN8O3)的LCMS m/z(ESI)为577.2(M+H)+。
步骤2：实施例202
在0℃下向[(2-{6-[(5R)-5-(氟甲基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基)甲基]甲基氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.208mmol)于DCM(8mL)中的悬浮液内逐滴添加于EtOAc(4mL，4M)中之HCl。在室温下搅拌混合物2小时且通过LCMS监测。随后将反应混合物冷却至0℃且添加于EtOAc(5.0mL，4M)中之HCl。在室温下搅拌混合物30分钟。真空浓缩混合物，得到黄色固体(100mg)。向残余物中添加水(10mL)且用EtOAc(10mL)洗涤。冻干水层16小时，得到呈黄色固体的实施例202(94mg，88％，HCl盐)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.21-9.00(m,2H),8.61(d,J＝8.3Hz,1H),8.14-8.08(m,1H),8.06-8.02(m,1H),6.75(s,1H),5.43-5.29(m,1H),5.23(d,J＝16.6Hz,1H),5.09-4.91(m,3H),4.40-4.29(m,3H),3.70-3.59(m,1H),3.13-2.92(m,3H),2.79-2.71(m,4H),2.15-1.96(m,3H),1.77-1.70(m,1H),1.21(d,J＝6.3Hz,3H)。(C25H29FN8O)的LCMS m/z(ESI)为477.4(M+H)+。
表7
Figure BDA0003920000840000901
Figure BDA0003920000840000911
Figure BDA0003920000840000921
*圆括号内的字母为制备实施例的方法。
^除非另外指明，否则为[M+H]+。
实施例300：6-(二甲基氨基)-4-[(甲基氨基)甲基]-2-[6-(4-丙基l-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
Figure BDA0003920000840000922
步骤1：({6-(二甲基氨基)-1-氧代-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基)甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003920000840000931
用N2脱气{[6-(二甲基氨基)-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基]甲基}甲基氨基甲酸叔丁酯(中间体11)(1.33g，4.15mmol)、2-溴-6-(4-丙基l-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶(中间体12)(1.16g，4.36mmol)、Pd2(dba)3(380mg，0.415mmol)、XantPhos(480g，0.830mmol)及K3PO4(2.64g，12.5mmoL)于1,4-二噁烷(46mL)中的混合物5分钟，且接着在85℃下搅拌16小时。通过LCMS分析反应物，其显示起始物质耗尽。将混合物冷却至室温，经由
Figure BDA0003920000840000932
衬垫过滤，且在真空下浓缩。用EtOAc(15mL)将残余物浆化10分钟且通过过滤收集固体。用EtOAc(4×)洗涤滤饼，且接着在真空下干燥。残余物通过快速液相色谱法法(40g SiO2，0-100％ EtOAc/庚烷，接着10％ MeOH/EtOAc)纯化，得到淡黄色固体。将物质溶解于1:9EtOH/DCM中且用超纯Si-硫基SiO2(1.59g)处理。搅拌混合物2小时且过滤。用1:9EtOH/DCM洗涤滤饼且在真空下浓缩经组合之滤液。将残余物溶解于1:9EtOH/DCM中且用超纯Si-硫基SiO2(1.32g)处理。搅拌混合物3小时且接着过滤。用1:9EtOH/DCM洗涤滤饼且浓缩经组合的滤液。将残余物溶解于1:9EtOH中且用超纯Si-硫基SiO2(1.22g)处理。搅拌混合物16小时且接着过滤。用1:9EtOH/DCM洗涤滤饼。将合并的滤液浓缩至干燥，得到呈淡黄色固体的标题化合物(2.08g，95％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),8.61(d,J＝8.4Hz,1H),8.09(t,J＝8.0Hz,1H),7.97(d,J＝7.6Hz,1H),6.82(s,1H),5.05(d,J＝11.7Hz,2H),4.56(s,2H),4.52-4.46(m,2H),3.09(s,6H),2.92(s,3H),1.88-1.76(m,2H),1.40-1.19(m,9H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H)；(C26H34N8O3)的LCMS m/z(ESI+)为507.4(M+H)+。
步骤2：实施例300
在0℃下向({6-(二甲基氨基)-1-氧代-2-[6-(4-丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-基}甲基)甲基氨基甲酸叔丁酯(1.96g，3.87mmol)于MeOH(20mL)中之悬浮液中缓慢添加HCl(4.0M，于1,4-二噁烷中，19.3mL，77.4mmol)。在0℃下搅拌混合物3小时且接着使其缓慢升温至室温。在室温下搅拌混合物16小时。将反应物浓缩至干燥。将固体溶解于1:9MeOH/DCM(80mL)中，冷却至0℃，且随后用饱和Na2CO3溶液(25mL)搅拌20分钟。分离混合物。用1:19MeOH/DCM(3×50mL)萃取水层。合并的有机层用H2O(2×30mL)洗涤且经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。在40℃下在EtOAc中将固体浆化40分钟。通过过滤收集固体。滤饼用EtOAc洗涤且接着在真空烘箱中在30℃下干燥16小时以提供呈黄色固体的实施例300(1.42g，90％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,1H),8.62(dd,J＝8.4,1.0Hz,1H),8.11-8.04(m,1H),8.00(dd,J＝7.7,1.0Hz,1H),6.78(s,1H),5.14(s,2H),4.57(dd,J＝7.9,6.5Hz,2H),3.80(s,2H),3.09(s,6H),2.35(s,3H),1.88(h,J＝7.4Hz,2H),0.93(t,J＝7.4Hz,3H)；(C21H26N8O)的LCMS m/z(ESI+)为407.3(M+H)+。
生物分析及数据
HPK1生物化学酶分析
HPK1酶抑制通过使用基于荧光的螯合增强荧光(CHEF)方法(1)及通过使用专用荧光肽底物来量测，其中半胱氨酸残基用基于磺酰氨基-8-羟基喹啉(sulfonamido-oxine)的衍生物烷基化，得到称为C-Sox(CSx)的氨基酸。反应在96孔板中以50μL体积进行，且含有0.5nM人类全长自体磷酸化重组HPK1(对于生产方法参见以下)、3μM磷酸受体肽底物(Ac-[CSx]HSLPRFNR-胺肽底物，亦称为AQT0178，AssayQuant Technologies Inc.,Hopkinton,MA)、测试化合物(11剂量，3倍连续稀释，最终2％DMSO)；或仅DMSO、0.002％ Tween-20、1mMDTT及2.5mM MgCl2于50mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)缓冲液，pH 7.8，且通过添加45μMATP启动，然后开始20分钟的预培育。最初反应速度通过用Tecan M1000盘读取器(TecanGroup Ltd.,
Figure BDA0003920000840000941
Zürich,Switzerland)在30℃下跟踪肽荧光(λex＝360nm，λem＝500nm)15分钟来确定。抑制常数(Ki)值如下计算：使用非线性回归方法及实验测量的表观ATP Km(19μM)，针对紧密结合竞争性抑制，将初始反应速度拟合至Morrisone等式(2)。由动力学和结晶学研究显示抑制剂为ATP竞争性的。
产生自体磷酸化全长重组HPK1
编码全长人类HPK1(Genbank NM_001042600.2)的DNA序列在GenScript处合成且含有有限数目的沉默碱基变化以消除某些限制性核酸内切酶识别位点，并融合至编码烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus；TEV)可裂解N端聚组氨酸纯化标签的DNA序列。重组杆状病毒通过使用Bac-to-Bac方法(InVitrogen)制备并用于感染9L Sf21昆虫细胞。所有纯化步骤均在4℃下进行。将含有重组HPK1的细胞在每75mL含有以下物质的缓冲液中裂解：50mMHEPES-NaOH，pH 7.5；250mM NaCl；1mM三(2-羧基乙基)膦(TCEP)；10μM亮肽素(leupeptin)(Sigma)；10μM E-64蛋白(Sigma)及一片“不含EDTA”的蛋白酶抑制剂片剂(Roche)，以15,000×g离心1小时，然后使上清液通过5mL的ProBond IMAC树脂(InVitrogen)。在洗涤之后，HPK1用12.5mL的50mM HEPES-NaOH，pH 7.5；400mM NaCl；250mM咪唑-HCl pH 7.5；1mMTCEP；2μM亮肽素及2μM E-64洗脱。相对于0.8L的50mM HEPES-NaOH，pH 7.5；400mM NaCl；20mM咪唑-HCl pH 7.5；1mM TCEP；2uM亮肽素；2uM E-64；2mM ATP-NaOH pH 7.3；5mM MgCl2及1mg TEV，将洗脱的HPK1透析过夜(此步骤同时允许降低咪唑浓度，为后续的反向IMAC层析步骤做准备，通过TEV蛋白酶移除聚组氨酸纯化标签，以及在MgATP存在下HPK1的自体磷酸化)。将去标签及自体磷酸化的HPK1调节至40mM咪唑-HCl，pH 7.5，然后由类似平衡的10mL ProBond树脂柱中通过。将通过柱之去标签的HPK1浓缩至大约7mL，并进一步通过凝胶过滤经Superdex 26/60尺寸排阻柱(GE Healthcare)纯化，平衡并在41.7mM HEPES-NaOH缓冲液(pH 7.5，含有417mM NaCl和0.417mM TCEP)中处理。合并含有HPK1的峰值馏份，然后通过使用离心浓缩器(Millipore)浓缩至大约2.5mL。通过添加50％(v/v)甘油将浓缩的HPK1调节至20％(v/v)甘油，产生25mM HEPES-NaOH，pH 7.5；250mM NaCl；0.25mM TCEP及20％(v/v)甘油的最终调配物。如通过Bradford分析(Pierce试剂)及使用牛血清白蛋白(Pierce2mg/mL标准品)作为蛋白质标准品所测定，最终蛋白质浓度为大约1mg/mL。质谱分析指示自体磷酸化的HPK1每单体平均含有15个磷酸酯。在液氮中急骤冷冻酶的等分试样并在-80℃下储存。由于克隆策略，最终产物在全长蛋白质的N端处含有甘氨酸-丝氨酸延伸序列。
N端加标签的全长HPK1(SEQ ID NO.1)的最终DNA序列包含在移除纯化标签之后的固相线之后的序列(加下划线)，其编码全长HPK1及额外5'-GGATCC BamH I克隆位点序列(SEQ ID NO.3)：
Figure BDA0003920000840000942
此提供(SEQ ID NO.1)：
Figure BDA0003920000840000951
Figure BDA0003920000840000961
N端加标签的全长HPK1(SEQ ID NO.2)的最终蛋白质序列包含在移除纯化标签之后的固相线之后的序列(加下划线)，其中自BamH I克隆位点序列(SEQ ID NO.4)编码额外N端GlySer序列：
Figure BDA0003920000840000962
此产生(SEQ ID NO.2)：
Figure BDA0003920000840000963
基于细胞的分析
磷酸化-SLP-76(Ser376)均质时间分辨
荧光(HTRF)分析
Jurkat细胞以90,000个细胞/孔接种于90μL之含有10％ FBS的RPMI 1640生长培养基中，然后在37℃下在有5％ CO2下培育过夜。第二天，化合物用DMSO自11点3倍稀释曲线之10mM的最高剂量连续稀释。化合物在中间1:100稀释至生长培养基中，之后用0.1％ DMSO1:10稀释于细胞上，使最终浓度为10μM至0.1nM。在用化合物预处理30分钟之后，在37℃下在有5％ CO2下使用200μg/mL之F(ab)2复合抗CD3(纯系UCTH1)刺激细胞15分钟。用冰冷PBS中止刺激并通过离心收集细胞，之后溶解于Cisbio溶解缓冲剂(Cisbio,Bedford,MA)中。将溶胞物转移至含有抗磷酸化-SLP-76-穴醚络合物加抗磷酸化-SLP-76-d2 HTRF抗体的白色低容量盘中，且根据制造商的方案(Cisbio,Bedford,MA)在室温下避光培育过夜。HTRF经Perkin Elmer Envision来测量，并且IC50值通过浓度-反应曲线拟合利用四参数非线性回归分析来计算。
化合物的生物活性数据提供于表8中。HPK1 CHEF的数据提供于表8中，具有列标题HPK1 Ki(μM)。细胞磷酸化SLP-76(Ser376)均质时间分辨荧光(HTRF)分析的数据提供于表8中，具有列标题pSLP76 IC50(μM)。对于这两种分析中的每一者，对应相邻列提供分析中测试化合物的次数。
生物化学选择性激酶分析
PRKD2(PKD2)和RPS6KA2(RSK3)激酶分析基于磷酸化及非磷酸化肽对蛋白水解裂解的差异敏感性，在Thermo Fisher Scientific,Inc.(Madison,WI)处，使用其InvitrogenTMSelectScreenTM荧光共振能量转移(FRET)Z'-LYTETM技术，ATP之Km-含量下进行。人类重组全长GST加标签的PRKD2(PKD2)及RPS6KA2(RSK3)由Thermo FisherScientific,Inc.(Madison,WI)生产。在10μL反应中进行激酶分析。PRKD2(PKD2)反应含有含0.64至5.84ng酶、25μM ATP(约Km)、2μM Ser/Thr 17(Z'-LYTETM肽底物)、10mM MgCl2、0.01％ BRIJ-35、1mM EGTA的50mM HEPES，pH 7.5。类似地进行RPS6KA2(RSK3)反应，且含有0.5至9ng酶，或10μM ATP(约Km)及2μM Ser/Thr 06肽。在1小时激酶反应培育之后，将5μL之1:256及1:4096稀释的Z'-LYTETM显色试剂A分别添加至PRKD2(PKD2)及RPS6KA2(RSK3)反应中。测量激酶反应的程度，导致肽底物的FRET信号变化，然后相对于DMSO对照量测针对各激酶的抑制并报告为重复量测的平均值。各50％抑制浓度(IC50)测定是基于10剂量重复量测，使用来自IDBS(Guildford,United Kingdom)的XLfit软件拟合标准四参数IC50方程式。将剂量反应曲线拟合至模型编号205(S形剂量反应模型)。PRKD2 IC50与HPK1 Ki之比率以及RSK3IC50与HPK1 Ki之比率提供于靠近PRKD2 IC50及RSK3 IC50之列的各别列中。
其中R3a和R3b中之至少一者不为氢的α支链胺类似物相对于非α支链胺化合物(例如实施例300)大大提高了相对于其他激酶(包括PRKD2和RSK3)对HPK1的选择性。相对于非环状化合物，例如实施例300，在R4为(R4-ii)的情况下，环状、稠合三唑，例如式I-B化合物提供生物化学和细胞效能的改良。
表8
Figure BDA0003920000840000971
Figure BDA0003920000840000981
Figure BDA0003920000840000991
表8中之空白框意谓未获得的数据。
本说明书中所引用的所有公开案及专利申请案均以全文引用的方式并入本文中。一般本领域技术人员将显而易见，可在不脱离所附权利要求范围之精神或范畴的情况下对其作出某些改变和修改。
Figure IDA0003974973520000011
Figure IDA0003974973520000021
Figure IDA0003974973520000031
Figure IDA0003974973520000041
Figure IDA0003974973520000051
Figure IDA0003974973520000061
Figure IDA0003974973520000071
Figure IDA0003974973520000081
Figure IDA0003974973520000091
Figure IDA0003974973520000101
Figure IDA0003974973520000111
Figure IDA0003974973520000121

Claims (22)

1.一种式I化合物或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0003920000830000011
其中：
R1为(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基、-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基及(C3-C6)环烷基被0或1个为羟基、氰基、(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代，其中：
R5和R6各自独立地为氢或被0、1或2个独立地选自卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基和羟基中的取代基取代的(C1-C6)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成(4至8元)杂环烷基，该(4至8元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自以下组中的取代基取代：卤素、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基和卤代(C1-C6)烷氧基；
R2为N(R7)(R8)，其中：
R7和R8各自独立地为氢或被0或1个为卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基或羟基的取代基取代的(C1-C6)烷基；或
R7为氢或为被0或1个为卤素、(C1-C6)烷氧基、氰基或羟基的取代基取代的(C1-C6)烷基；且R8与其所连接的氮一起以及与R3a及其所连接的碳一起形成(4至6元)杂环烷基，该(4至6元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自卤素、羟基、(C1-C3)烷基、卤代(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基和卤代(C1-C6)烷氧基的取代基取代；或
R7和R8与其所连接的氮一起形成(4至6元)杂环烷基，该(4至6元)杂环烷基被0、1或2个独立地选自以下组中的取代基取代：卤素、羟基、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基和卤代(C1-C6)烷氧基；
R3a为氢或被0或1个为羟基或(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；
R3b为氢或(C1-C3)烷基，其限制条件为当R4为(R4-i)时，R3a和R3b皆不为H；
R4为(R4-i)或(R4-ii)：
Figure FDA0003920000830000012
Figure FDA0003920000830000021
其中：
R4N为(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基被0或1个为羟基的取代基取代；
R4C为氢、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基和卤代(C1-C6)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代；
R4D为氢、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基和卤代(C1-C6)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代；
R4E为氢、卤素、氰基、羟基或(C1-C6)烷基；及
R4F为氢、卤素、氰基、羟基、(C1-C6)烷基、卤代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代(C1-C6)烷氧基或(C3-C6)环烷基，其中所述(C1-C6)烷基和卤代(C1-C6)烷基被0或1个为羟基、氰基或(C1-C6)烷氧基的取代基取代。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R4为(R4-i)；
R4N为(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基；及
R4C为氢或(C1-C3)烷基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1为-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C3-C6)环烷基为环丙基且被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代，其中所述(C1-C6)烷基为甲基；
R5和R6各自独立地为氢或(C1-C3)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代的(5元)杂环烷基；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自独立地为氢或为甲基的(C1-C6)烷基；
R3a为被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；及
R3b为氢或(C1-C3)烷基。
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R4为(R4-ii)；
R4D为氢、(C1-C6)烷基或卤代(C1-C6)烷基，其中所述(C1-C6)烷基被0或1个为羟基的取代基取代；
R4E为氢；及
R4F为氢、(C1-C6)烷基或卤代(C1-C6)烷基，其中所述(C1-C6)烷基被0或1个为羟基的取代基取代。
5.根据权利要求1或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1为-N(R5)(R6)或(C3-C6)环烷基，其中所述(C3-C6)环烷基为环丙基且被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代，其中所述(C1-C6)烷基为甲基；
R5和R6各自独立地为氢或(C1-C3)烷基，或
R5和R6与其所连接的氮一起形成被0或1个为(C1-C6)烷基的取代基取代的(5元)杂环烷基；
R2为N(R7)(R8)，其中R7和R8各自独立地为氢或为甲基的(C1-C6)烷基；
R3a为氢或被0或1个为(C1-C3)烷氧基的取代基取代的(C1-C3)烷基；及
R3b为氢或(C1-C3)烷基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为2-甲基-吡咯烷-1-基或2(R)-甲基-吡咯烷-1-基。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7和R8各自为氢。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为氢；而R8为(C1-C3)烷基。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3b为氢，且其中R2、R3a和R3b的取向提供式I(R)或式I(S)化合物：
Figure FDA0003920000830000031
10.根据权利要求1和4-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基、(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基或(5R)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基，其中所述甲基被0或1个为F或OH的取代基取代。
11.根据权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基或(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基，其中所述甲基被0或1个为F或OH的取代基取代。
12.一种化合物，其为：
4-[1-氨基丙基]-2-{6-[5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[1-氨基乙基]-2-{6-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[1-氨基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1s,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[1-氨基乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[1-氨基丙基]-2-{3-[5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或
4-[1-氨基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受的盐。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中所述化合物为：
4-[(1R)-1-氨基丙基]-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1R)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1S)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1R)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1R)-1-氨基丙基]-2-{3-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]苯基}-6-[甲基(丙烷-2-基)氨基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；
4-[(1R)-1-氨基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或
4-[(1S)-1-氨基-2-甲氧基乙基]-6-(1-甲基环丙基)-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受的盐。
14.一种化合物，其具有以下结构：
Figure FDA0003920000830000041
15.一种化合物，其为4-[(1R)-1-氨基丙基]-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受的盐。
16.一种化合物，其为4-[(1R)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受的盐。
17.一种化合物，其为4-[(1S)-1-氨基乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]三唑-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯烷-1-基]-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其药学上可接受的盐。
18.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受之载剂或赋形剂。
19.一种用于治疗哺乳动物之异常细胞生长的方法，其包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述异常细胞生长为癌症。
21.一种用于治疗哺乳动物之异常细胞生长的方法，其包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，并且还包括施用一定量的额外抗癌治疗剂，这些量一起有效治疗所述癌症。
22.根据权利要求20所述的方法，其中所述癌症选自以下组中：乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、食道癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌和甲状腺癌。
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