BR122021024771B1 - Uso de uma combinação de inibidores de jak1/2e pi3ksigma no tratamento de mielofibrose - Google Patents
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Abstract
USO DE UMA COMBINAÇÃO DE INIBIDORES DE JAK1/2E PI3KSIGMA NO TRATAMENTO DE MIELOFIBROSE. Esta invenção refere-se a métodos de tratamento de malignidades de células-B, utilizando uma combinação de inibidores de JAK1 e/ou JAK2 e inibidores de PI3K (delta).
Description
[001] Esse pedido reivindica o benefício de prioridade de 61/976.815, depositado em 08 de abril de 2014, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[002] Essa invenção refere-se a métodos de tratamento de malignidades de células-B, utilizando uma combinação de inibidores de JAK1 e/ou JAK2 e inibidores de PI3Kδ.
[003] O receptor de células B (BCR) está presente em ambas as células B normais e malignas, na maior parte. O acoplamento do BCR fornece sinais de sobrevivência importantes e a interrupção do sinal do BCR pode conduzir à morte de células B. Estudos realizados com siRNA para inibir a expressão de BCR mostraram que a sinalização constitutiva pelo BCR é essencial para a sobrevivência e proliferação dos linfomas de células B humanas. O principal papel da sinalização de BCR nessas células parece ser a ativação da tirosina quinase do baço (Syk), que, por sua vez, leva a diversos eventos à jusante que promovem a sobrevivência celular, incluindo a ativação de tirosina qui- nase de Bruton (BTK), quinase de fosfatidilinositol 3 (PI3K) e ATK. Um número de malignidades de células B, incluindo linfomas de células B grandes difusas (DLBCL), demonstrou ser particularmente dependente de sinais de sobrevivência ao BCR, como evidenciado pela sua sensibilidade à inibição genética e farmacológica dos componentes de sinalização do BCR in vitro. Demonstrou-se que as células de DLBCL se unem à PI3K, aumentando a sinalização de NF-kB antiapóptico e os sinais de sobrevivência e que a inibição da via de PI3K/AKT sinergiza com a inibição de NF-kB em linhagens celulares de DLBCL assassinas in vitro.
[004] A ativação aberrante de JAKs, através da produção de cito- cinas e fatores de crescimento, também esteve associada com a proliferação aumentada de células malignas e com a sobrevivência em inúmeros tipos de tumores. As JAKs ativam inúmeras vias a jusante implicadas na proliferação e sobrevivência de células malignas, incluindo as STATs, uma família de importantes fatores de transcrição latentes. De relevância clínica, descobriu-se que os níveis de IL-10 e IL-6 no soro, que sinalizam por meio das JAKs, são elevados em pacientes com DLBCL em comparação aos controles normais (Gupta et al., 2012). Além disso, demonstrou-se que os pacientes com elevados níveis séricos de IL-10 têm uma sobrevivência livre de eventos mais curtas (Gupta et al, 2012). Dentro da família JAK de quinases, demons-trou-se que a JAK1 coopera com JAK2, JAK3 e TYK2 e desempenha uma função dominante na mediação da sinalização de inúmeras cito- cinas inflamatórias, incluindo IL-6, IL-10 e interferon.
[005] Em DLBCL, a ativação da via da JAK se dá por meio de mecanismos autócrinos e parácrinos. Nas células tumorais, a sinalização do BCR leva a um aumento na produção de IL-6 e de IL-10 através da ativação da via de NF-kB (Lam et al., 2008). Um subconjunto de DLBCLs foi caracterizado como tendo uma alta expressão de STAT3, IL-6 e/ou IL-10 e demonstrou-se que a inibição da JAK é cito- tóxica nessas linhagens celulares de DLBCL e sinergiza com os inibidores de NF-kB. Além da ativação da via de JAK/STAT através de vias autócrinas, o compartimento estromal também pode proporcionar uma fonte dessas citocinas de um modo parácrino (Hodge et al., 2005).
[006] Por essas razões, existe uma necessidade de desenvolver novas terapias que possam ser utilizadas para tratar malignidades de células B, como DLBCL. Essa invenção é direcionada a essa e outras necessidades.
[007] A FIG. 1A representa uma análise Western blot de sondagem para IL6 e IL10 para várias linhagens celulares de DLBCL.
[008] A FIG. 1B representa uma análise Western blot para actina e p-Stat3 para células de Pfeiffer tratadas com IL6 ou com IL10.
[009] A FIG. 2A descreve o % de inibição no ensaio de proliferação celular em células de Pfeiffer como uma função da concentração do composto 28 com o veículo (DMSO), DMSO+IL10 e DMSO+IL10+ruxolitinib.
[0010] A FIG. 2B descreve o % de inibição no ensaio de proliferação celular em células de Pfeiffer como uma função da concentração do composto 28 com o veículo (DMSO), DMSO+IL10 e DMSO+IL10+composto 7.
[0011] A FIG. 3 descreve o % de inibição no ensaio de proliferação celular em células de HBL-1 como uma função da concentração do composto 28 com o veículo (DMSO), DMSO+IL10 e DMSO+IL10+ruxolitinib.
[0012] A FIG. 4 descreve a análise Western blot de células de Pfeiffer após o tratamento com veículo (DMSO), ruxolitinib, Composto 28, Composto 28 e ruxolitinib, com ou sem IL-10.
[0013] A FIG. 5 descreve a análise Western bot de células de Pfeiffer após o tratamento com veículo (DMSO), Composto 7, Composto 28 ou Composto 28 e do Composto 7 com ou sem IL-10.
[0014] A FIG. 6 descreve o % de inibição no ensaio de proliferação celular em células de Pfeiffer como uma função da concentração do composto 28 com o veículo (DMSO), DMSO+IL10 e DMSO+IL10+composto 16.
[0015] A FIG. 7 representa a coloração da Anexina-V das células de Pfeiffer tratadas com o Composto 28 +/-Composto 16, apresentan- do uma indução de apoptose sinérgica a partir da terapia de combinação.
[0016] A FIG. 8 representa uma análise Western blot de células de Pfeiffer após o tratamento com o Composto 28 +/-Composto 16, mostrando o efeito sobre STAT3 e pAKT.
[0017] O presente pedido proporciona um método de tratamento de uma malignidade de células B em um paciente em necessidade, compreendendo a administração ao referido paciente de: (a) um inibidor de JAK1 e/ou JAK2; e (b) um inibidor de PI3Kδ.
[0018] O presente pedido proporciona ainda um método de tratamento de uma doença selecionada dentre: linfoma de células B grandes difusas, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma não Hodgkin, leucemia de células pilosas, linfoma de células do manto, linfoma linfo- cítico pequeno, linfoma folicular, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de zona marginal extranodal, linfoma de Hodgkin, linfoma de Burkitt, ma- croglobulinemia de Waldenstrom, leucemia prolinfocítica, leucemia lin- foblástica aguda, mielofibrose, linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), linfoma de células B grandes mediastinal (tímico), granulomatose linfomatoide, linfoma de zona marginal esplênica, lin- foma de efusão primária, linfoma intravascular de células B grande, leucemia de células plasmáticas, mielomatose extramedulares, mielo- ma latente (também conhecido como mieloma assintomático), gamo- patia monoclonal de significado indeterminado (MGUS), linfoma de células B grandes difusas semelhantes às células B ativadas (ABC) (ABC-DLBCL) e linfoma de células B grandes difusas de células B centrais germinais (GCB) (DLBCL-GCB) em um paciente em necessidade, compreendendo a administração ao referido paciente de: (a) um inibidor de JAK1 e/ou JAK2; e (b) um inibidor de PI3Kδ.
[0019] Em algumas modalidades dos métodos, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é selecionado dentre:
[0020] 3-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1-il]propanonitrila;
[0021] 3-[1-(6-cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila;
[0022] 3-(1-[1,3]oxazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila;
[0023] 4-[(4-{3-ciano-2-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila;
[0024] 4-[(4-{3-ciano-2-[3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirrol- 1-il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila;
[0025] {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3- [4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3- il}acetonitrila;
[0026] 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidina-1- carboxamida;
[0027] [3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[2- (trifluorometil)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4il)azetidin-3-il]acetonitrila;
[0028] [trans-1-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-3- (4-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]carbonil}piperazin-1- il)ciclobutil]acetonitrila;
[0029] {trans-3-(4-{[4-[(3-hidroxiazetidin-1-il)metil]-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila;
[0030] {trans-3-(4-{[4-{[(2S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila;
[0031] {trans-3-(4-{[4-{[(2R)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila;
[0032] 4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenóxi}piperidin-1-il)-3- [4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butanonitrila;
[0033] 5-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazina-2-carboxamida;
[0034] 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1- metiletil]benzamida;
[0035] 5-{3-(cianometil)-3-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H- pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazina-2-carboxamida;
[0036] {1-(cis-4-{[6-(2-hidroxietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4- il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-3-il}acetonitrila;
[0037] {1-(cis-4-{[4-[(etilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2- il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-3-il}acetonitrila;
[0038] {1-(cis-4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2- il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-3-il}acetonitrila;
[0039] {1-(cis-4-{[4-{[(3R)-3-hidroxipirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin- 4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;
[0040] {1-(cis-4-{[4-{[(3S)-3-hidroxipirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin- 4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;
[0041] {trans-3-(4-{[4-({[(1S)-2-hidróxi-1-metiletil]amino}metil)-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila;
[0042] {trans-3-(4-{[4-({[(2R)-2-hidroxipropil]amino}metil)-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila;
[0043] {trans-3-(4-{[4-({[(2S)-2-hidroxipropil]amino}metil)-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila;
[0044] {trans-3-(4-{[4-(2-hidroxietil)-6-(trifluorometil)piridin-2- il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]ciclobutil}acetonitrila;
[0045] ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hidroxietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2- b]piridin-1-il}tetra-hidro-2H-piran-2-il)acetonitrila;
[0046] 4-[3-(cianometil)-3-(3',5'-dimetil-1H,1'H-4,4'-bipirazol-1- il)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida;
[0047] e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos acima mencionados.
[0048] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é selecionado a partir de:
[0049] 7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H- tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona;
[0050] (S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H- tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona;
[0051] 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6- cloro-2-{1-[(2S)-2-hidroxipropil]azetidin-3-il}-3-metoxibenzonitrila;
[0052] 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6- cloro-2-[1-(2-hidroxietil)azetidin-3-il]-3-metoxibenzonitrila;
[0053] 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]- 6-ciano-2-etóxi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridina-2-carboxamida;
[0054] 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]- 5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil}pirrolidin-2-ona; e
[0055] N-{1-[5-cloro-8-(3-fluorofenil)cinolin-7-il]etil}-9H-purin-6- amina;
[0056] 4-cloro-3'-fluoro-3-metil-6-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]bifenil- 2-carbonitrila;
[0057] e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos acima mencionados.
[0058] O presente pedido também proporciona um inibidor de JAK1 e/ou JAK2 para utilização em combinação com o inibidor de PI3Kδ para o tratamento de uma malignidade de células B ou qualquer uma das doenças aqui abrangidas.
[0059] O presente pedido proporciona ainda a utilização de um inibidor de JAK1 e/ou JAK2 e de um inibidor de PI3Kδ para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma malignidade de células B ou qualquer uma das doenças aqui abrangidas.
[0060] O presente pedido proporciona, inter alia, um método de tratamento de uma doença selecionada dentre linfoma de células B grandes difusas, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma não Hodgkin, leucemia de células pilosas, linfoma de células do manto, linfoma linfocítico pequeno, linfoma folicular, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de zona marginal extranodal, linfoma de Hodgkin, linfoma de Burkitt, macroglobulinemia de Waldenstrom, leucemia prolinfocítica, leucemia linfoblástica aguda, mielofibrose, linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), linfoma de células B grandes mediastinal (tímico), granulomatose linfomatoide, linfoma de zona marginal esplênica, lin- foma de efusão primária, linfoma intravascular de células B grande, leucemia de células plasmáticas, mielomatose extramedulares, mielo- ma latente (também conhecido como mieloma assintomático), gamo- patia monoclonal de significado indeterminado (MGUS), linfoma de células B grandes difusas semelhantes às células B ativadas (ABC) (ABC-DLBCL) e linfoma de células B grandes difusas de células B centrais germinais (GCB) (DLBCL-GCB) em um paciente em necessidade, compreendendo a administração ao referido paciente de: (a) um inibidor de JAK1 e/ou JAK2; e (b) um inibidor de PI3Kδ.
[0061] Em algumas modalidades, o linfoma não Hodgkin é um lin- foma não Hodgkin (NHL) e é um NHL recidivo ou refratário ou um NHL folicular recorrente.
[0062] Em algumas modalidades, a doença é um linfoma de células B grandes difusas (DLBCL).
[0063] Em algumas modalidades, a doença é um linfoma de células B grandes difusas semelhantes às células B ativadas (ABC) (ABC- DLBCL) ou um linfoma de células B grandes difusas de células B centrais germinais (GCB) (GCB-DLBCL).
[0064] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 e o inibidor de PI3Kδ são administrados simultaneamente.
[0065] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 e o inibidor de PI3Kδ são administrados em sequência.
[0066] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é seletivo para JAK1 e JAK3 em relação a JAK1 e TYK2. Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é seletivo para JAK1 em relação a JAK2, JAK3 e TYK2. Por exemplo, alguns dos compostos aqui descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, preferencialmente inibe JAK1 em relação a um ou mais dentre JAK2, JAK3 e TYK2. Em algumas modalidades, os compostos inibem preferencialmente JAK1 sobre JAK2 (por exemplo, ter uma razão de JAK1/JAK2 IC50 > 1). Em algumas modalidades, os compostos ou sais são cerca de 10 vezes mais seletivos para JAK1 sobre JAK2. Em algumas modalidades, os compostos ou sais são cerca de 3 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 10 vezes, cerca de 15 vezes, ou cerca de 20 vezes mais se-letivos para JAK1 sobre JAK2 como calculado medindo IC50 em 1 mM de ATP (por exemplo, veja-se Exemplo A).
[0067] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é 3-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo [2,3-d] pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] pro- panonitrila. Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é (3R)-3-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo [2,3-d] pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] propanonitrila (ruxolitinib; também conhecido como INCB018424). Ru- xolitinib tem uma IC50 de menos de 10 nm a 1 mM de ATP (ensaio A), JAK1 e JAK2. 3-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo [2,3-d] pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il] propanonitrila e ruxolitinib podem ser produzidos pelo procedimento descrito na US 7598257 (Exemplo 67), depositado em 12 de dezembro de 2006, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é um sal de ácido fosfórico de (3R)-3-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo [2,3-d] pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] propanonitrila.
[0068] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é um composto da Tabela 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Os compostos na Tabela 1 são inibidores de JAK1 seletivos (seletivos sobre JAK2, JAK3 e TYK2). A IC50S é obtida pelo método de Ensaio A em 1 mM de ATP é mostrada na Tabela 1.
+ significa <10 nM (ver o Exemplo A quanto às condições do ensaio) ++ significa < 100 nM (ver o Exemplo A quanto às condições do ensaio) +++ significa < 300 nM (ver o Exemplo A quanto às condições do ensaio) aDados por enantiômero 1 bDados para o enantiômero 2
[0069] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.
[0070] Em algumas modalidades, o inibidor seletivo de JAK1 e/ou JAK2 é sal de ácido adípico de {1-{1-[3-fluoro-2- (trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin- 4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila.
[0071] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida ou um sal farmaceuticamente aceitável desta.
[0072] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é selecionado a partir de (R)-3-[1-(6-cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanenitrila, (R)-3-(1- [1,3]oxazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanenitrila, (R)-4-[(4-{3-ciano-2-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1- il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila, (R)-4-[(4-{3-ciano-2-[3-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3- fluorobenzonitrila ou (R)-4-(4-{3-[(dimethilamino)methil]-5- fluorophenoxy}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]butanonitrila (S)-3-[1-(6-cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanenitrila, (S)-3-(1- [1,3]oxazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanenitrila, (S)-4-[(4-{3-ciano-2-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1- il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila, (S)-4-[(4-{3-ciano-2-[3-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3- fluorobenzonitrila, (S)-4-(4-{3-[(dimetilamino)methil]-5- fluorofenóxi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]butanonitrila; e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos supramencionados.
[0073] Em algumas modalidades, os compostos da Tabela 1 são preparados pelos processos de síntese descritos na Publicação da Pa-tente US N° 2010/0298334, depositado em 21 de maio de 2010, Publi-cação da Patente US N° 2011/0059951, depositado em 31 de agosto de 2010, Publicação da Patente US N° 2011/0224190, depositado em 9 de março de 2011, Publicação da Patente US N° 2012/0149681, depositado em 18 de novembro de 2011, Publicação da Patente US N° 2012/0149682, depositado em 18 de novembro de 2011, Publicação da Patente US N° 2013/0018034, depositado em 19 de junho de 2012, Publicação da Patente US N° 2013/0045963, depositado em 17 de agosto de 2012, e Publicação da Patente US N° 2014/0005166, depositado em 17 de maio de 2013, cada um dos quais que é incorporado aqui por referência em sua totalidade.
[0074] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é selecionado dentre os compostos da Publicação de Patente US N° 2010/0298334, depositado em 21 de maio de 2010, Publicação da Patente US N° 2011/0059951, depositado em 31 de agosto de 2010, Publicação da Patente US N° 2011/0224190, depositado em 9 de março de 2011, Publicação da Patente US N° 2012/0149681, depositado em 18 de novembro de 2011, Publicação da Patente US N° 2012/0149682, depositado em 18 de novembro de 2011, Publicação da Patente US N° 2013/0018034, depositado em 19 de junho de 2012, Publicação da Patente US N° 2013/0045963, depositado em 17 de agosto de 2012, e Publicação da Patente US N° 2014/0005166, depositado em 17 de maio de 2013, cada um dos quais que é incorporado aqui por referência em sua totalidade.
[0075] Os inibidores de PI3Kδ aqui descritos podem ser seletivos. Por "seletivo" entende-se que o composto se liga a ou inibe uma qui- nase com uma maior afinidade ou potência, respectivamente, em comparação a pelo menos uma outra quinase. Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos são inibidores seletivos de PI3Kδ (por exemplo, em PI3Kα, PI3Kβ e PI3KY). Em algumas modalidades, a seletividade pode ser pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 50 vezes, pelo menos cerca de 100 vezes, pelo menos cerca de 200 vezes, pelo menos cerca de 500 vezes ou pelo menos cerca de 1000 vezes. A seletividade pode ser medida por métodos de rotina na técnica. Em algumas modalidades, a seletividade pode ser testada na concentração de ATP em Km para cada enzima. Em algumas modalidades, a seletividade dos compostos aqui descritos pode ser determinada pelos ensaios celulares associados com a atividade de quinase de PI3K específica.
[0076] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é um composto mostrado na Tabela 2. Os compostos da Tabela 2 foram testados no Ensaio B e demonstrou-se serem inibidores de PI3Kδ com as IC50s da Tabela 2. Tabela 2
+ significa <50 nM ++ significa de 50 nM a 200 nM +++ significa de 50 nM a 100 nM
[0077] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é selecionado dentre:
[0078] (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona;
[0079] (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona;
[0080] (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona;
[0081] (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etóxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona;
[0082] N-{(1S)-1-[5-cloro-8-(3-fluorofenil)cinnolin-7-il]etil}-9H-purin- 6-amina;
[0083] e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos acima mencionados.
[0084] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é (S)-7-(1- (9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo [3,2- a]pirimidin-5-ona ou um sal farmaceuticamente aceitável desta.
[0085] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é 4-[1-(4- amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)etil]-6-cloro-2-{1-[(2S)-2- hidroxipropil]azetidin-3-il}-3-metoxibenzonitrila, ou um sal farmaceuti- camente aceitável seu.
[0086] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é 4-[1-(4- amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cloro-2-[1-(2- hidroxietil)azetidin-3-il]-3-metoxibenzonitril ou um sal farmaceuticamen- te aceitável seu.
[0087] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é 5-{3-[1-(4- amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-ciano-2-etóxi-5- metilfenil}-N, N-dimetilpiridina-2-carboxamida ou um sal farmaceutica- mente aceitável seu.
[0088] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é selecionado a partir de:
[0089] 4-[(R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1- il)etil]-6-cloro-2-{1-[(2S)-2-hidroxipropil]azetidin-3-il}-3- metoxibenzonitrila;
[0090] 4-[1(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]- 6-cloro-2-[1-(2-hidroxietil)azetidin-3-il]-3-metoxibenzonitrila;
[0091] 5-{3-[1(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1- il)etil]-6-ciano-2-etóxi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridina-2-carboxamida;
[0092] 4-[(S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1- il)etil]-6-cloro-2-{1-[(2S)-2-hidroxipropil]azetidin-3-il}-3- metoxibenzonitrila;
[0093] 4-[1(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]- 6-cloro-2-[1-(2-hidroxietil)azetidin-3-il]-3-metoxibenzonitrila;
[0094] 5-{3-[1(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1- il)etil]-6-ciano-2-etóxi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridina-2-carboxamida;
[0095] e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos acima mencionados.
[0096] Em algumas modalidades, o inibidor de PI3Kδ é um composto da Patente Publ. US N° US 2011/0015212, depositada em 28 de junho de 2010, Patente Publ. US N° 2013/0059835, depositado em 31 de agosto de 2013, Patente Publ. US N° 2011/0183985, depositado em 17 de dezembro de 2010, ou Patente Publ. US N° 2012/0157430, depositado em 19 de dezembro de 2011, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0097] Em algumas modalidades, os compostos da Tabela 2 são preparados pelos métodos da Patente Publ. US N° US 2011/0015212, depositada em 28 de junho de 2010, Patente Publ. US N° 2013/0059835, depositado em 31 de agosto de 2013, Patente Publ. US N° 2011/0183985, depositado em 17 de dezembro de 2010, ou Patente Publ. US N° 2012/0157430, depositado em 19 de dezembro de 2011, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0098] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é (3R)-3-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d] pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]propanonitrila, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu; e (7-(1- (9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a] piri- midin-5-ona ou um sal farmaceuticamente aceitável seu.
[0099] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitrila, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu; e o inibidor de PI3Kδ é 7-(1- (9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2- a]pirimidin-5-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável sal seu.
[00100] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 e/ou JAK2 é 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil] benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu; e o inibidor de PI3Kδ é 7- (1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2- a]pirimidin-5-ona ou um sal farmaceuticamente aceitável seu.
[00101] Em algumas modalidades, o presente pedido proporciona um método para tratar um linfoma de células B grandes difusas em um paciente em necessidade, compreendendo administrar ao referido pa-ciente (3R)-3-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1-il] propanonitrila, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; e o inibidor de PI3Kδ é (7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3- metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona ou um sal farmaceuticamente aceitável desta.
[00102] Em algumas modalidades, o presente pedido proporciona um método para tratar um linfoma de células B grandes difusas em um paciente em necessidade, que compreende administrar ao referido pa-ciente {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; e 7-(1-(9H-purin-6- ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a] pirimidin-5-ona ou um sal farmaceuticamente aceitável desta.
[00103] Em algumas modalidades, o presente pedido proporciona um método para tratar um linfoma de células B grandes difusas em um paciente em necessidade, que compreende a administração ao referido paciente de 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il] azetidina-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1- metiletil] benzamida ou um sal farmaceuticamente aceitável desta; e 7- (1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo [3,2- a]pirimidin-5-ona ou um sal farmaceuticamente desta.
[00104] Os compostos descritos neste documento podem ser as-simétricos (por exemplo, com um ou mais estereocentros). Todos os estereoisômeros, como diastereômeros e enantiômeros, são visados, salvo quando houver indicação contrária. Os compostos que contêm átomos de carbono assimetricamente substituídos podem ser isolados em formas opticamente ativas ou racêmicas. Métodos de como preparar formas oticamente ativas a partir de materiais de partida oticamente inativos são conhecidos na técnica, como por resolução das misturas racêmicas ou por síntese estereosseletiva. Muitos isômeros geométricos de olefinas, ligações duplas de C=N, e similares também podem estar presentes nos compostos descritos neste documento, e todos esses isômeros estáveis são contemplados na presente invenção. Os isômeros geométricos Cis e trans da presente invenção são descritos e podem ser isolados como uma mistura de isômeros ou como formas isoméricas separadas.
[00105] Em algumas modalidades, os compostos têm a configuração (R). Em algumas modalidades, o composto tem a configuração (S).
[00106] A resolução de misturas racêmicas de compostos pode ser efetuada por qualquer um dos vários métodos conhecidos na técnica. Um método exemplar inclui a recristalização fracionada utilizando um ácido de resolução quiral que é, um ácido orgânico que forma um sal opticamente ativo. Os agentes de dissolução adequados para os métodos de recristalização fracionada são, por exemplo, ácidos optica- mente ativos, tais como as formas D e L do ácido tartárico, ácido dia- cetiltartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido mandélico, ácido málico, ácido lático ou os diversos ácidos canforsulfônicos opticamente ativos, tais como o e-ácido canforsulfônico. Outros agentes de dissolução adequados, por métodos de cristalização fracionada incluem formas estereoisomericamente puras de α-metilbenzilamina (por exemplo, formas de S e R ou formas diastereomericamente puras), 2- fenilglicinol, norefedrina, efedrina, N-metilefedrina, ciclo-hexiletilamina, 1,2-diaminociclo-hexano e semelhantes.
[00107] A dissolução de misturas racêmicas também podem ser re-alizadas pela eluição em uma coluna embalada com um agente de dissolução opticamente ativo (por exemplo, dinitrobenzoilfenilglicina). As composições de solvente de eluição adequadas podem ser determinadas por um versado na técnica.
[00108] Os compostos aqui descritos também incluem formas tau- toméricas. As formas tautoméricas resultam da troca de uma ligação simples por uma ligação dupla adjacente junto com a migração con-comitante de um próton. As formas tautoméricas incluem tautômeros prototrópicos que são estados de protonação isoméricos tendo a mesma fórmula empírica e carga total. Exemplos de tautômeros proto- trópicos incluem pares de cetona-enol, pares de amida-ácido imídico, pares de lactama-lactim, pares de amida-ácido imídico, pares de ena- mina-imina, e formas anulares, onde um próton pode ocupar duas ou mais posições de um sistema heterocíclico, por exemplo, 1H-e 3H- imidazol, 1H-, 2H-e 4H-1,2,4-triazol, 1H-e 2H-isoindol e 1H-e 2H- pirazol. As formas tautoméricas podem estar em equilíbrio ou esteri- camente bloqueadas em uma forma por substituição apropriada.
[00109] Os compostos descritos aqui também podem incluir todos os isótopos de átomos que ocorrem nos compostos intermediários ou finais. Isótopos incluem aqueles átomos com o mesmo número atômi- co, mas diferentes números de massa. Por exemplo, os isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério.
[00110] O termo "composto", como aqui utilizado, pretende incluir todos os estereoisômeros, isômeros geométricos, tautômeros, e os isótopos de estruturas representadas. Os compostos aqui identificados pelo nome ou estrutura como uma forma tautomérica particular, destinam-se a incluir outras formas tautoméricas, a menos que especificado de outra forma.
[00111] Todos os compostos, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser encontrados em conjunto com outras substâncias, tais como água e solventes (por exemplo, hidratos e solvatos) ou podem ser isolados.
[00112] Em algumas modalidades, os compostos descritos aqui, ou seus sais, estão substancialmente isolados. Por "substancialmente isolado" entende-se que o composto seja, pelo menos, parcial ou subs-tancialmente separado do ambiente no qual ele foi formado ou detectado. A separação parcial pode incluir, por exemplo, uma composição enriquecida nos compostos descritos aqui. A separação substancial pode incluir composições contendo pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 97%, ou pelo menos cerca de 99% em peso dos compostos descritos aqui, ou sal destes. Os métodos para isolar compostos e seus sais são rotina na técnica.
[00113] A expressão "farmaceuticamente aceitável" é aqui empregada para se referir a esses compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, no escopo do julgamento médico, adequado para utilização em contato com os tecidos dos seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, avaliados de acordo com uma relação ris- co/benefício razoável.
[00114] As expressões, "temperatura ambiente" e "temperatura do ambiente", tal como aqui utilizadas, são entendidas na técnica e referem-se geralmente a uma temperatura, por exemplo, uma temperatura de reação, que é cerca da temperatura da sala onde a reação é realizada, por exemplo, uma temperatura de cerca de 20°C a cerca de 30°C.
[00115] A presente invenção também inclui sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos aqui descritos. Tal como aqui utilizado, "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a derivados dos compostos divulgados em que o composto de origem é modificado através da conversão de um ácido ou uma fração de base existente na sua forma de sal. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, entre outros, sais de ácido mineral ou orgânico de resíduos básicos como aminas; alcalinos ou sais orgânicos de resíduos ácidos, como ácidos carboxílicos; e similares. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção incluem os sais não tóxicos convencionais do com-posto de origem formado, por exemplo, a partir de ácidos orgânicos ou inorgânicos não tóxicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da pre-sente invenção podem ser sintetizados a partir do composto de origem que contém uma fração básica ou acídica por métodos químicos con-vencionais. Geralmente, esses sais podem ser preparados fazendo reagir as formas de ácido ou base livres destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido apropriado em água ou num solvente orgânico, ou numa mistura dos dois; geralmente, meios não aquosos como éter, acetato de etila, álcoois (por exemplo, metanol, etanol, iso-propanol ou butanol) ou acetonitrila (ACN) são preferidos. Listas de sais adequados são encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 e Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[00116] Conforme usado neste documento, o termo "indivíduo" ou "paciente", usado de forma permutável, refere-se a qualquer animal, incluindo mamíferos, de preferência camundongos, ratos, outros roe-dores, coelhos, cães, gatos, suínos, gado, ovelhas, cavalos ou primatas, e mais preferivelmente seres humanos.
[00117] Em algumas modalidades, os inibidores são administrados em uma quantidade terapeuticamente eficaz. Conforme usado neste documento, a frase "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade do composto ativo ou do agente farmacêutico que provoca a resposta biológica ou medicinal que está sendo buscada em um tecido, sistema, animal, indivíduo ou humano por um pesquisador, veterinário, médico ou outro clínico. Em algumas modalidades, a dosagem do composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, administrado a um paciente ou indivíduo é de cerca de 1 mg a cerca de 2 g, cerca de 1 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 1 mg a cerca de 500 mg, cerca de 1 mg a cerca de 200 mg, cerca de 1 mg a cerca de 100 mg, cerca de 1 mg a 50 mg ou cerca de 50 mg a cerca de 500 mg.
[00118] Tal como aqui utilizado, o termo "tratar" ou "tratamento" refere-se a um ou mais de (1) inibição da doença; por exemplo, inibição de uma doença, condição ou desordem num indivíduo que sofre ou exibe a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou desordem (isto é, parar o desenvolvimento posterior da patologia e/ou sintomatologia); e (2) melhoramento da doença; por exemplo, melhoramento de uma doença, condição ou desordem num indivíduo que sofre ou exibe a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou desordem (isto é, inversão da patologia e/ou sintomatologia) tal como a diminuição da gravidade da doença.
[00119] Um ou mais agentes farmacêuticos adicionais, tais como, por exemplo, agentes quimioterapêuticos, agentes anti-inflamatórios, esteroides, imunossupressores, bem como os inibidores de quinase Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, c-Met, VEGFR, PDGFR, c-kit, IGF-1R, RAF, FAK, Akt mTOR, PIM e AKT (por exemplo, AKT1, AKT2 ou AKT3), tais como, por exemplo, aqueles descritos no documento WO 2006/056399, ou outros agentes, tais como anticorpos terapêuticos, podem ser utilizados em combinação com os compostos da presente invenção para o tratamento de doenças, distúrbios e condições associados a PI3K. Um ou mais agentes farmacêuticos adicionais podem ser administrados a um paciente simultaneamente ou sequencialmente.
[00120] Os anticorpos exemplificativos para utilização em terapia de combinação incluem, mas não estão limitados a, trastuzumab (por exemplo, anti-HER2), ranibizumab (por exemplo, anti-VEGF-A), be- vacizumab (nome comercial: Avastin, por exemplo, anti-VEGF, panitu- mumab (por exemplo, anti-EGFR), cetuximab (por exemplo, anti- EGFR), Rituxan (anti-CD20) e anticorpos direcionados a c-met.
[00121] Um ou mais dos seguintes agentes podem ser utilizados em combinação com os compostos da presente invenção e são apresentadas como uma lista não limitativa: um agente citostático, cisplatina, doxorubicina, taxotere, taxol, etoposido, irinotecano, camptostar, topotecano, paclitaxel, docetaxel, epotilonas, tamoxifeno, 5- fluorouracil, metoxtrexato, temozolomida, ciclofosfamida, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, Iressa, Tarceva, anticorpos para EGFR, Gleevec™, intron, ara-C, adriamicina, citoxano, gemcitabina, mostarda de uracil, clormetina, Ifosfamida, melfalano, clorambucil, Pi- pobromano, trietilenomelamina, Trietilenetiofosforamina, bussulfano, carmustina, lomustina, estreptozocina, dacarbazina, Floxuridina, cita- rabina, 6-Mercaptopurina, 6-Tioguanina, fosfato de Fludarabina, oxali- platina, leucovirina, ELOXATIN™, Pentostatina, Vinblastina, Vincristi- na, Vindesina, bleomicina, Dactinomicina, Daunorubicina, doxorubici- na, Epirubicina, Idarubicina, Mitramicina, desoxicoformicina, mitomici- na C, L-asparaginase, Teniposido 17 alfa.-Etinilestradiol, dietilestilbes- trol, testosterona, prednisona, fluoximesterona, propionato de dromos- tanolona, testolactona, megestrolacetato, metilprednisolona, metiltes- tosterona, prednisolona, triancinolona, clorotrianisseno, hidroxiproges- terona, aminoglutetimida, estramustina, medroxiprogesteroneacetato, leuprolida, flutamida, Toremifeno, goserelina, cisplatina, carboplatina, Hidroxiureia, Amsacrina, procarbazina, mitotano, mitoxantrona, Leva- misol, Navelbeno, Anastrazol, Letrazol, capecitabina, Reloxafina, Dro- loxafina, Hexa-metilmelamina, Avastina, herceptina, Bexxar, Velcade, Zevalin, Trisenox, Xeloda, vinorelbina, Porfímero, Erbitux, Liposomal, tiotepa, Altretamina, melfalano, Trastuzumabe, Lerozol, Fulvestrant, exemestano, Fulvestrant, Ifosfomida, Rituximab, C225, Campath, Clo- farabina, cladribina, afidicolon, rituxano, sunitinib, dasatinib, tezacitabi- na, Sml1, fludarabina, pentostatina, triapina, didox, trimidox, amidox, 3- AP, MDL-101.731, bendamustina (Treanda), ofatumumab ou GS-1101 (também conhecido como CAL-101).
[00122] Exemplos de quimioterapêuticos incluem inibidores de pro- teossoma (por exemplo, bortezomib), talidomida, revlimid, e agentes que danificam o DNA, tais como melfalano, doxorrubicina, ciclofosfa- mida, vincristina, etoposida, carmustina, e semelhantes.
[00123] Esteroides de exemplo incluem coriticosteroides, como a dexametasona ou prednisona.
[00124] Exemplos de inibidores de Bcr-Abl incluem os compostos, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, dos gêneros e espécies descritas na Pat. US N° 5.521.184, WO 04/005281 e US Ser. N° 60/578,491.
[00125] Exemplos adequados de inibidores de Flt-3 incluem com- postos, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como os divul-gados nos WO 03/037347, WO 03/099771 e WO 04/046120.
[00126] Inibidores da RAF adequados de exemplo incluem compostos, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como os descritos nos WO 00/09495 e WO 05/028444.
[00127] Inibidores de FAK adequados de exemplo incluem compostos, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, tal como divulgado nos WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595 e WO 01/014402.
[00128] Os inibidores de mTOR adequados exemplificativos incluem compostos, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como os descritos no WO 2011/025889.
[00129] Em algumas modalidades, os compostos da invenção podem ser utilizados em combinação com um ou mais de outros inibidores da quinase, incluindo imatinib, particularmente para o tratamento de doentes resistentes a imatinib ou outros inibidores de quinase.
[00130] Em algumas modalidades, os compostos da invenção podem ser utilizados em combinação com um agente quimioterapêutico no tratamento do câncer, tal como mieloma múltiplo, e pode melhorar a resposta ao tratamento, em comparação com a resposta a apenas o agente quimioterapêutico, sem exacerbação dos seus efeitos tóxicos. Exemplos de agentes farmacêuticos adicionais utilizados no tratamento de mieloma múltiplo, por exemplo, podem incluir, sem limitação, melfalano, melfalano e prednisona [MP], doxorrubicina, dexametasona e Velcade (bortezomib). Além disso, os agentes adicionais utilizados no tratamento de mieloma múltiplo incluem inibidores da quinase de Bcr-Abl, Flt-3, RAF e FAK. Efeitos aditivos ou sinérgicos são resultados desejáveis de combinar um inibidor de PI3K da presente invenção com um agente adicional. Além disso, a resistência de células de mieloma múltiplo para agentes, tais como dexametasona podem ser reversíveis por tratamento com um inibidor de PI3K da presente invenção. Os agentes podem ser combinados com o presente composto em uma forma de dosagem única ou contínua, ou os agentes podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente como formas de dosagem separadas.
[00131] Em algumas modalidades, um corticosteroide tal como a dexametasona é administrada a um paciente em combinação com os compostos da invenção, onde a dexametasona é administrada intermi-tentemente ao contrário de forma contínua.
[00132] Em algumas outras modalidades, as combinações dos compostos da invenção com outros agentes terapêuticos podem ser administrados a um paciente antes de, durante e/ou depois de um transplante de medula óssea ou transplante de células estaminais.
[00133] Quando empregues como produtos farmacêuticos, os compostos aqui descritos podem ser administrados na forma de composições farmacêuticas. Estas composições podem ser preparadas de um modo bem conhecido na técnica farmacêutica, e podem ser administrados por uma variedade de vias, dependendo de se o tratamento local ou sistêmico desejado está sobre a área a ser tratada. A administração pode ser tópica (incluindo oftálmica e as membranas mucosas, incluindo a distribuição vaginal e retal), pulmonar, (por exemplo, por inalação ou insuflação de pós ou aerossóis, incluindo por nebulização; intratraqueal ou intranasal), oral ou parenteral. A administração parenteral inclui injeção ou infusão intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular; ou administração intracraniana, por exemplo, intratecal ou intraventricular. A administração parentérica pode estar na forma de uma única dose de bolo, ou pode ser, por exemplo, por uma bomba de perfusão contínua. As composições farmacêuticas e formulações para a administração tópica podem incluir adesivos transdérmicos, pomadas, loções, cremes, géis, gotas, supositórios, sprays, líquidos e pós. Veículos farmacêuticos convencionais, aquosos, à base de pó ou oleosos, espessantes e similares podem ser necessários ou desejáveis. Esta invenção também inclui composições farmacêuticas que contêm, como ingrediente ativo, o composto descrito aqui ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, em combinação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis (excipi- entes). Em algumas modalidades, a composição é adequada para administração tópica. Em fazer as composições da invenção, o ingrediente ativo é tipicamente misturado com um excipiente, diluído por um ex- cipiente ou colocado dentro de uma tal transportadora na forma de, por exemplo, uma cápsula, saquinho, papel ou outro recipiente. Quando o excipiente serve como diluente, pode ser um sólido, semissólido ou material líquido, o qual atua como um veículo, transportador ou meio, para o ingrediente ativo. Assim, as composições podem estar na forma de comprimidos, pílulas, pós, pastilhas, sachês, cápsulas, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou em um meio líquido), pomadas contendo, por exemplo, até 10% em peso, do composto ativo, cápsulas de gelatina macias e duras, supositórios, soluções injetáveis estéreis e pós embalados estéreis.
[00134] Ao preparar uma formulação, o composto ativo pode ser moído para se obter o tamanho de partícula apropriada antes de combinar com os outros ingredientes. Se o composto ativo for substancialmente insolúvel, ele pode ser moído a um tamanho de partícula inferior a 200 mesh. Se o composto ativo for substancialmente solúvel em água, o tamanho de partícula pode ser ajustado pela moagem para fornecer uma distribuição substancialmente uniforme na formulação, por exemplo, cerca de 40 mesh.
[00135] Os compostos presentemente descritos podem ser moídos usando procedimentos de moagem conhecidos tais como moagem a úmido para se obter um tamanho de partícula apropriado para a formação de comprimidos e para outros tipos de formulação. Preparações finamente divididas (nanoparticulados) dos compostos descritos aqui podem ser preparados por processos conhecidos na técnica, por exemplo, ver Pedido Internacional No. WO 2002/000196.
[00136] Alguns exemplos de excipientes apropriados incluem, lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope e metilcelu- lose. As formulações podem incluir adicionalmente: agentes lubrificantes, tais como talco, estearato de magnésio e óleo mineral; agentes umidificantes; agentes de suspensão e emulsificantes; agentes con-servantes, tais como metil-e propil-hidróxi-benzoatos; agentes adoçantes; e agentes aromatizantes. As composições da invenção podem ser formuladas de modo a proporcionar uma liberação rápida, sustentada ou retardada do ingrediente ativo após a administração ao paciente, empregando-se os procedimentos conhecidos na técnica.
[00137] As composições podem ser formuladas numa forma de dosagem unitária, contendo cada dosagem desde cerca de 5 até cerca de 1000 mg (1 g), mais usualmente cerca de 100 mg a cerca de 500 mg do ingrediente ativo. O termo "formas de dosagem unitárias" refere-se a unidades fisicamente discretas apropriadas como doses unitárias para seres humanos e outros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de material ativo calculada para produzir o início desejado, tolerabilidade e/ou efeitos terapêuticos, em associação com um excipiente farmacêutico adequado.
[00138] Em algumas modalidades, as composições da invenção contêm de cerca de 5 a cerca de 50 mg do ingrediente ativo. Aqueles versados na técnica perceberão que isso abrange composições que contêm cerca de 5 a cerca de 10, cerca de 10 a cerca de 15, cerca de 15 a cerca de 20, cerca de 20 a cerca de 25, cerca de 25 a cerca de 30, cerca de 30 a cerca de 35, cerca de 35 a cerca de 40, cerca de 40 a cerca de 45 ou cerca de 45 a cerca de 50 mg do ingrediente ativo.
[00139] Em algumas formas de realização, as composições da presente invenção contêm desde cerca de 50 a cerca de 500 mg do ingrediente ativo. Aquele versado na técnica identificará que isso abrange composições contendo cerca de 50 a cerca de 100, cerca de 100 a cerca de 150, cerca de 150 a cerca de 200, cerca de 200 a cerca de 250, cerca de 250 a cerca de 300, cerca de 350 a cerca de 400, ou cerca de 450 a cerca de 500 mg do ingrediente ativo.
[00140] Em algumas modalidades, as composições da invenção contêm de cerca de 500 a cerca de 1000 mg do ingrediente ativo. Aquele versado na técnica identificará que isso abrange composições contendo de cerca de 500 a cerca de 550, cerca de 550 a cerca de 600, cerca de 600 a cerca de 650, cerca de 650 a cerca de 700, cerca de 700 a cerca de 750, cerca de 750 a cerca de 800, cerca de 800 a cerca de 850, cerca de 850 a cerca de 900, cerca de 900 a cerca de 950 ou cerca de 950 a cerca de 1000 mg do ingrediente ativo.
[00141] Dosagens semelhantes dos compostos descritos aqui podem ser utilizadas nos métodos e usos da invenção.
[00142] O composto ativo pode ser eficaz sobre uma escala larga de dosagem e é geralmente administrado em uma quantidade farma- ceuticamente eficaz. Será entendido, entretanto, que a quantidade dos compostos atualmente administrados será geralmente determinada por um médico, de acordo com as circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a via escolhida de administração, o composto real administrado, a idade, peso e resposta do paciente individual, a gravidade dos sintomas do paciente, e similares.
[00143] Para preparar composições sólidas, tais como comprimidos, o principal ingrediente ativo é misturado com um excipiente farmacêu- tico para formar uma composição sólida de pré-formulação contendo uma mistura homogênea de um composto da presente invenção. Ao se referir a essas composições de pré-formulação como homogêneas, o ingrediente ativo está tipicamente disperso uniformemente por toda a composição, para que a composição possa ser facilmente subdividida em formas de dosagem unitárias igualmente eficazes, tais como com-primidos, pílulas e cápsulas. Esta pré-formulação sólida então é subdi-vidida em formas de dosagem de unidade do tipo descrito acima con-tendo a partir, por exemplo, cerca de 0,1 a cerca de 1000 mg do ingre-diente ativo da presente invenção.
[00144] As pastilhas ou pílulas da presente invenção podem ser re-vestidas ou caso contrário compostas para prover uma forma de dosa-gem, proporcionando a vantagem de ação prolongada. Por exemplo, o comprimido ou pílula pode compreender um componente de dosagem interna e um de dosagem externa, o último estando na forma de um envelope sobre o anterior. Os dois componentes podem ser separados por uma camada entérica que serve para resistir à desintegração no estômago e permitir que o componente interno passe intacto no duodeno ou tenha uma liberação retardada. Uma variedade de materiais pode ser usada para tais camadas entéricas ou revestimentos, tais materiais, incluindo uma série de ácidos poliméricos e misturas de ácidos poliméricos com tais materiais, como goma-laca, álcool cetílico e acetato de celulose.
[00145] As formas líquidas, nas quais os compostos e as composições da presente invenção podem ser incorporados para a administração oral ou por injeção, incluem soluções aquosas, xaropes adequadamente aromatizados, suspensões aquosas ou oleosas, e emulsões aromatizadas com óleos comestíveis, com óleos comestíveis tais como óleo de semente de algodão, óleo de gergelim, óleo de coco, ou óleo de amendoim, bem como elixires e veículos farmacêuticos semelhan- tes.
[00146] As composições para inalação ou insuflação incluem soluções e suspensões em solventes aquosos ou orgânicos farmaceuti- camente aceitáveis, ou misturas dos mesmos, e pós. As composições de líquidos ou sólidos podem conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados como supradescrito. Em algumas modalidades, as composições são administradas pela via oral ou nasal respiratória para efeito local ou sistêmico. As composições podem ser nebulizadas através da utilização de gases inertes. Soluções de nebulização podem ser respiradas diretamente do dispositivo de nebulização ou o aparelho de nebulização pode ser associado a uma barraca de máscara de rosto, ou pressão positiva intermitente, máquina de respiração. As composições em solução, suspensão ou em pó também podem ser administradas, oralmente ou nasalmente, a partir de dispositivos que distribuem a formulação de uma forma apropriada.
[00147] As formulações tópicas podem conter um ou mais transpor-tadores convencionais. Em algumas modalidades, pomadas podem conter água e um ou mais transportadores hidrofóbicos selecionados a partir de, por exemplo, parafina líquida, éter de alquil de polioxietileno, propileno-glicol, vaselina branca e semelhantes. As composições da transportadora de cremes podem se basear em água na combinação com glicerol e um ou mais outros componentes, por exemplo, monoes- tearato de glicerila, PEG-Monoestearato de glicerila e álcool cetilestea- rílico. Os géis podem ser formulados álcool isopropílico e água, adequadamente em combinação com outros componentes tais como, por exemplo, glicerol, hidroxietil celulose e semelhantes. Em algumas modalidades, as formulações tópicas contêm, pelo menos, cerca de 0,1, pelo menos cerca de 0,25, pelo menos, cerca de 0,5, pelo menos cerca de 1, pelo menos cerca de 2, ou, pelo menos, cerca de 5% em peso do composto aqui descrito. As formulações tópicas podem ser ade- quadamente embaladas em tubos de, por exemplo, 100 g, o qual está opcionalmente associado com instruções para o tratamento da indicação selecionada, por exemplo, psoríase ou outras condições da pele.
[00148] A quantidade do composto ou composição farmacêutica administrada ao paciente irá variar dependendo do que está sendo administrado, o propósito da administração, tais como profilaxia ou terapia, o estado do paciente, da forma de administração e similares. Em aplicações terapêuticas, composições podem ser administradas a um paciente que já sofre de uma doença em quantidade suficiente para curar ou, pelo menos parcialmente controlar os sintomas da doença e suas complicações. Quantidades eficazes dependerão da condição da doença a ser tratada, bem como pelo julgamento do médico atendente, dependendo de fatores como a gravidade da doença, a idade, peso e condição geral do paciente e similares.
[00149] As composições administradas a um doente pode ser na forma de composições farmacêuticas descritas acima. Estas composições podem ser esterilizadas por técnicas de esterilização convencionais ou podem ser filtradas estéreis. As soluções aquosas podem ser embaladas para usar como é ou liofilizadas, a preparação liofilizada sendo combinada com uma transportadora aquosa estéril antes da administração. O pH das preparações compostas tipicamente será entre 3 e 11, mais preferencialmente de 5 a 9 e mais preferencialmente de 7 a 8. Será entendido que o uso de certos do antecedente de exci- pientes, transportadoras ou estabilizadores resultará na formação de sais farmacêuticos.
[00150] A dose terapêutica de um composto da presente invenção variará de acordo com, por exemplo, o uso particular para que o tratamento é feito, a forma de administração do complexo, a saúde e a condição do paciente e o julgamento do médico que prescreveu. A proporção ou a concentração de um composto da invenção em uma composição farmacêutica pode variar dependendo de um número de fatores, incluindo a dosagem, as características químicas (por exemplo, hidrofobicidade) e a via de administração. Por exemplo, os compostos descritos neste documento podem ser proporcionados numa solução de tampão fisiológica aquosa contendo cerca de 0,1 a cerca de 10% de peso/v do composto para administração parentérica. Algumas gamas de dosagem típicas são de cerca de 1 μg/kg a cerca de 1 g/kg de peso corporal por dia. Em algumas modalidades, o intervalo das doses varia entre cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia. A dosagem é provavelmente dependente de tais variáveis como o tipo e extensão da progressão da doença ou distúrbio, o estado geral de saúde do paciente particular, da eficácia biológica relativa do composto selecionado, da formulação do excipiente, e sua via de administração. As doses eficazes podem ser extrapoladas a partir de curvas de dose-resposta derivadas de sistemas de teste in vitro ou de modelo animal.
[00151] As composições da invenção podem ainda incluir um ou mais agentes farmacêuticos adicionais, tais como um agente quimiote- rapêutico, de esteroides, o composto anti-inflamatório, ou imunossu- pressor, exemplos dos quais estão listados aqui.
[00152] A presente invenção também inclui kits farmacêuticos úteis, por exemplo, no tratamento ou prevenção de doenças associadas a PI3K ou distúrbios, tais como o câncer, que incluem um ou mais recipientes que contêm uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. Tais kits podem incluir ainda, se desejado, um ou mais dos vários componentes do kit farmacêutico convencionais, tais como, por exemplo, recipientes com mais transportadores aceitáveis farmaceuticamente ou recipientes adicionais, etc., como ficará prontamente evidente para os versados na técnica. Instruções, quer como inserções ou como rótulos, indicando as quantidades dos componentes a serem administrados, guias para a administração, e/ou diretrizes para misturar os componentes, podem também ser incluídas no kit. EXEMPLOS Exemplo 1. ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hidroxietil]-1 H-imidazo[4,5- d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetra-hidro-2 H-piran-2-il)acetonitrila
[00153] A uma suspensão de brometo de metil trifenilfosfônio (5,63 g, 15,8 mmol) em tetra-hidrofurano (140 mL), adicionaram-se 2,5 M de n-butil-lítio em hexano (7,35 mL, 18,4 mmol). A solução vermelho escuro foi agitada a 0 ° C durante 1 h. Em seguida, uma solução de terc- butil (4R)-4-formil-2,2-dimetil-1,3-oxazolidina-3-carboxilato (de Aldrich, 3,01 g, 13,1 mmol) em tetra-hidrofurano (7,3 mL) foi adicionada gota a gota a 0 ° C. A solução vermelha foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante 12 h. Hexanos foram adicionados à mistura de reação na razão de 4:1 (v/v). A suspensão foi filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado. O resíduo resultante foi purificado por croma- tografia rápida (eluindo com 10% acetato de etila em hexanos) para gerar o composto desejado na forma de um óleo incolor (1,92 g, 64%).
[00154] A uma solução de terc-butil (4S)-2,2-dimetil-4-vinil-1,3- oxazolidina-3-carboxilato (1,90 g, 8,36 mmol) em metanol (83 mL) foi adicionado pmono-hidrato de ácido toluenossulfônico (0,80 g, 4,2 mmol) a 0 ° C. A mistura foi lentamente aquecida à temperatura ambiente durante uma noite. A mistura de reação foi diluída com uma solução saturada de NaHCO3 solução, concentrada e, em seguida, diluída com acetato de etil. A camada orgânica foi lavada com solução sat. de NaHCO3 (2x) e salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para gerar o produto desejado como um óleo incolor (1,187 g, 76%). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 5,81 (1H, m), 5,25 (2H, m), 4,90 (1H, m), 4,25 (1H, br s), 3,67 (2H, m), 1,45 (9H, s) ppm.
[00155] A um frasco foi carregado com terc-butil [(1S)-1- (hidroximetil)prop-2-en-1-il]carbamato (0,401 g, 2,14 mmol), tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (59 mg, 0,064 mmol), N,N'- (1S,2S)-ciclo-hexano-1,2-diilbis[2-(difenilfosfino)-1-naftamida] (150 mg, 0,19 mmol), e 4-dimetilaminopiridina (78 mg, 0,64 mmol). A mistura de reação foi purgada com N2 três vezes, e, em seguida, cloreto de meti- leno (21,3 mL) e 1,0 M de trietilborano em THF (130 μL, 0,13 mmol) foi adicionado sequencialmente. Depois de agitar durante 10 min, foi adi-cionado 2-viniloxirano (0,150 g, 2,14 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante uma noite. A reação foi diluída com diclorometano e solução sat. de NaHCO3 aquoso. A camada orgânica foi separada e seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo bruto foi purificado com cromatografia rápida (eluindo com 0-50% de acetato de etil/hexanos) para gerar o produto desejado (0,271 g, 49%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 5,85 (1H, m), 5,67 (1H, m), 5,84~5,17 (4H, m), 4,83 (1H, m), 4,30 (1H, br s), 3,83 (1H, m), 3,69 (1H, dd, J = 4,5 e 6,9 Hz), 3,54 (2H, m), 3,36 (1H, dd, J = 4,5 e 6,9 Hz), 1,45 (9H, s) ppm.
[00156] A uma mistura de tec-butil [(1S)-1-({[1-(hidroximetil)prop-2- en-1-il]óxi}metil)prop-2-en-1-il]carbamato (268 mg, 1,04 mmol) em cloreto de metileno (10 mL) foi adicionado com trietilamina (435 μL, 3,12 mmol). A mistura foi arrefecida a 0 oC e cloreto de acetil (150 μL, 2,1 mmol) foi adicionado gota a gota. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, depois lavada com água. A camada orgânica foi concentrada e o resíduo resultante foi purificado em gel de sílica (elu- indo com 20% acetato de etil/hexanos) para gerar o produto desejado (0,26 g, 85%). LCMS calculado para C10H18NO3 (M-100+H)+: m/z = 200,1; Encontrou: 200,1.
[00157] A um frasco de fundo redondo de 2 gargalos de 500 mL, benzilideno(dicloro)(1,3-dimesitilimidazolidin-2-id-2-il(triciclo- hexilfosforanil)rutênio (38 mg, 0,044 mmol) foi adicionado. Depois pur-gado com nitrogênio 3 vezes, diclorometano (anidro, 8 mL) foi adicionado seguido de acetato de 2-({(2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]but- 3-en-1-il}óxi)but-3-en-1-il (265 mg, 0,885 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 15 h. A mistura foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (eluindo com hexanos até 25% de EtOAc em hexanos) para gerar o produto desejado como um óleo marrom (0,205 g, 85%). LCMS calculado para C9H14NO5 (M+H-Bu+H)+: m/z = 216,1; Encontrou: 216,1. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 5,94 (0,17H, m), 5,84 (0,83H, m), 5,69 (1H, m), 4,89 (0,13H, m), 4,70 (0,83H, m), 4,25 (1H, m), 4,05 (4H, m), 3,56 (0,13H, m), 3,38 (0.87H, m), 2,04 (2,49H, s), 2,03 (0,51H, m), 1,38 (9H, s) ppm (o produto foi ~5:1 de mistura de trans e cis-isômeros).
[00158] A uma solução de acetato de {(5S)-5-[(tec- butoxicarbonil)amino]-5,6-di-hidro-2H-piran-2-il}metila (205 mg, 0,756 mmol) em cloreto de metileno (5,2 mL) foi adicionado cloreto de hidrogênio 4,0 M em dioxano (1,5 mL, 6,0 mmol). A solução de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida para gerar o produto desejado como um sólido branco. LCMS calculado para C8H14NO3 (M+ H)+: m/z = 172,1; Encontrou: 172,1.
[00159] Uma mistura de 7-cloro-6-nitrotieno[3,2-b]piridina (156 mg, 0,727 mmol), acetato de [(5S)-5-amino-5,6-di-hidro-2H-piran-2-il]metila (129 mg, 0,754 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,26 mL, 1,5 mmol) em álcool isopropílico (1,7 mL) foi aquecida a 90 oC durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada e purificada por cromatografia flash para gerar o produto desejado (0,21 g 83%). LCMS calculado para C15H16N3O5S (M+ H)+: m/z = 350,1; Encontrou: 350,0.
[00160] Uma mistura de acetato de {(5S)-5-[(6-nitrotieno [3,2-b] pi- ridin-7-il) amino]-5,6-di-hidro-2H-piran-2-il}metila (210 mg, 0,600 mmol) e paládio a 10% sobre carbono (0,21 g) em metanol (4,0 mL) foi submetido a uma pressão de balão de H2 à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia rápida (eluindo com 15% de metanol em diclorometano) para gerar o produto desejado (145 mg, 75%). LCMS calculado para C15H20N3O3S (M+ H)+: m/z = 322,1; Encontrou: 322.0.
[00161] Uma mistura de (2R)-2-hidroxipropanamida (131 mg, 1,47 mmol) e tetrafluoroborato de trietiloxônio (263 mg, 1,38 mmol) em THF (2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em etanol (0,85 mL) e adicionado a uma suspensão de acetato de {(5S)-5-[(6-aminotieno [3,2-b] piridin-7-il) amino] tetra-hidro-2H-piran-2-il} metil (145 mg, 0,451 mmol) em etanol (3,1 mL). A mistura foi agitada a 80 oC durante 1 h. A reação foi arrefe- cida até a temperatura ambiente e diluída com água (1,0 mL). Hidróxido de lítio (32,4 mg, 1,35 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com metanol e purificada com prep-LCMS (XBridge coluna C18, eluindo com um gradiente de acetonitrila/água contendo hidróxido de amônio a 0,1%, a uma taxa de fluxo de 60 mL/min) para gerar o produto desejado como um sólido branco ( 95 mg, 63%). LCMS calculado para C16H20N3O3S (M+ H)+: m/z = 334,1; Encontrou: 334,0.
[00162] A uma solução de (1R)-1-{1-[(3S)-6-(hidroximetil) tetra- hidro-2H-piran-3-il]-1H-imidazo [4,5-d] tieno [3,2-b] piridin-2-il} etanol (100 mg, 0,300 mmol) (etapa anterior) em cloreto de metileno (3,4 mL) e piridina (0,146 mL, 1,80 mmol ) foi adicionado cloreto de p-tolueno- sulfonila (57,2 mg, 0,300 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (1,8 mg, 0,015 mmol) a 0 ° C. A mistura de reação foi deixada a aquecer até a temperatura ambiente durante uma noite. A mistura de reação foi concentrada, diluída com metanol, e purificada por prep-LCMS (XBridge coluna C18, eluindo com um gradiente de acetonitrila/água contendo hidróxido de amônio a 0,1%, a uma taxa de fluxo de 60 mL/min) para gerar dois picos. Na HPLC analítica (Waters C18 Sunfire, 2,1 x 50 mm, 5 μM; taxa de escoamento de 3 mL/min; Volume de injeção de 2 μL; No gradiente de 2-80% de B em 3 minutos (A = água com 0,025% de TFA, B = acetonitrila)): primeiro pico de tempo de retenção (45,3 mg, 31%) de 1,81 minuto, LC MS calculada para C23H26N3O5S2 (M+ H)+: M/z = 488,1; Encontrou: 488,1. Segundo pico (8,5 mg, 5,8%) de tempo de retenção de 1,88 min, LCMS calculada para C23H26N3O5S2 (M + H) + : M/z = 488,1; Encontrou: 488,1.
[00163] Uma mistura de 4-metilbenzenossulfonato de ((2R, 5S)-5- {2-[(1R)-1-hidroxietil]-1H-imidazo [4,5-d] tieno [3,2-b] piridin-1-il} tetra- hidro-2 H-piran-2-il)metila (a partir do 1° pico da etapa anterior, 27 mg, 0,055 mmol) e cianeto de sódio (4,5 mg, 0,092 mmol) em dimetil sulfó- xido (0,4 mL) foi agitada a 50 °C durante 4 h. Após arrefecimento, a mistura foi diluída com metanol e purificada com prep-LCMS (XBridge coluna C18, eluindo com um gradiente de acetonitrila/água contendo hidróxido de amônio a 0,1%, a uma taxa de fluxo de 30 mL/min) para gerar o produto desejado (14,5 mg, 76%). LCMS calculado para C17H19N4O2S (M+ H)+: m/z = 343.1; Encontrou: 343,0. 1H RMN (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9,51 (1H, s), 8,45 (1H, d, J = 5,5 Hz), 7,97 (1H, d, J = 5.5 Hz), 5,31 (1H, m), 5,20 (1H, m), 4,31 (1H, m), 4,23 (1H, m), 4,02 (1H, m), 2,96 (1H, dd, J = 17,0 e 4,5 Hz), 2,85 (1H, dd, J = 17,0 e 4,5 Hz), 2,66 (1H, m), 2,26 (1H, m), 2,09 (1H, m), 1,73 (1H, m), 1,69 (3H, d, J = 6,5 Hz) ppm. Exemplo 1a. Hidrato de ((2R,5S)-5—{2-[(1R)-1-hidroxietil]-1 H- imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetra-hidro-2 H-piran-2-il)acetonitrila
[00164] ((2R, 5S)-5-{2-[(1R)-1-hidroxietil]-1H-imidazo [4,5-d] tieno [3,2-b] piridin-1-il} tetra-hidro-2H-piran-2-il) acetonitrila (52 mg, 0,15 mmol) do Exemplo 25 foi cristalizado a partir de uma mistura de aceto- nitrila (8 mL) e água (4 mL). O cristal em prisma incolor resultante cole-tado foi adequado para análise da estrutura cristalina por raios X.
[00165] Os dados de cristal apresentam: ~0,520 x 0,180 x 0,100mm, ortorrômbicos, P212121, a = 6,962(3) Â, b = 11,531(4) Â, c = 20,799(7) Â, Vol = 1669,6(10) Â3, Z = 4, T =-100.° C, Peso da fórmu- la = 359,42, Densidade = 1,430g/cm3, μ (Mo) = 0,22 mm-1.
[00166] A coleta de dados foi realizada em um sistema Bruker SMART APEX-II CCD, radiação MoKalpha, tubo de focagem padrão, potência de anodo = 50kV x 42mA, distância de cristal à placa = 5,0 centímetros, 512 x 512 pixels/quadro, centro de feixe = (256.13,253.14 ), quadros totais = 1151, oscilação/quadro = 0,50 °, exposição/quadro = 10,1 s/quadro, integração SAINT, hkl min/max = (-9, 9,-15, 15,-27, 27), entrada de dados para shelx = 17025, dados exclusivos = 3975, intervalo de dois teta = 3,92 a 55,72 °, integralidade de dois teta 55,72 = 99,80%, R(int-xl) = 0,0681, correção de SADABS aplicada.
[00167] Estrutura foi resolvida usando XS(Shelxtl), refinada usando o pacote de software shelxtl, refinamento por matriz completa de quadrados mínimos em F 2, dispersando fatores de Int. Tab. Tabelas de Vol C 4.2.6.8 e 6.1.1.4, número de dados = 3975, número de dispositivos de retenção = 0, número de parâmetros = 235, proporção de da- dos/parâmetro = 16,91, bondade de ajuste em F2 = 1,04, índices R [I> 4sigma (I)] R1 = 0,0505, wR2 = 0,1242, índices R (todos os dados) R1 = 0.0769, wR2 = 0,1401, diferença máxima de pico e furo = 0,724 e- 0,277 e/Â3, parâmetro Flack refinado =-0,12 (13), todos os átomos de hidrogênio CH foram refinados usando um modelo de percurso. Os hidrogênios OH foram encontrados a partir de um mapa de diferença e completamente refinados.
[00168] Os resultados mostraram que a unidade assimétrica contém uma molécula e uma água como mostrado com elipsoides térmicos atraídos para o nível de probabilidade de 50%. A estereoquímica em cada um dos três estereocentros (como indicada no nome e na estrutura do composto acima) foi confirmada. O parâmetro de Flack refinado para 0,28 (24) que indica a configuração enantiomérica correta. Exemplo 2. 4-[3-(Cianometil)-3-(3',5'-dimetil-1 H, 1' H-4,4'-bipirazol-1 - il)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida
[00169] A uma solução de ácido 2,4,5-trifluorobenzóico (5,00 g, 28,4 mmol) em acetonitrila (50 mL), foi adicionada N, N--dimetilformamida (40 μL), seguido da adição de cloreto de oxalila (3,60 mL, 42,6 mmol). Após 90 min, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi coevaporado com acetonitrila (50 mL). O resíduo foi então dissolvido em cloreto de metileno (50 mL). Essa solução foi adicionada gota a gota em uma mistura congelada (banho de gelo) de cloridrato de (2S)-1,1,1-trifluoropropan-2-amina (5,52 g, 36,9 mmol) (da SynQuest, 98% de ee) em tolueno ( 100 ml) e solução de hidróxido de sódio aquoso de 0,5 M (142 ml, 71,0 mmol). Após a adição, o banho de gelo foi removido e a reação foi deixada aquecer à temperatura ambiente. A reação foi agitada durante a noite. A camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno (50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura a 20% (75 mL) e água (2 x 75 mL), secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto desejado (6,49 g, 84%) que foi utilizado diretamente na etapa seguinte, sem purificação adicional. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,01 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,92 - 7,50 (m, 2H), 4,76 (m, 1H), 1,31 (d, J = 7,0 Hz, 3H) ppm. LCMS caculado para C10H8F6NO (M+1)+: m/z = 272,0; Encontrou: 272,0.
[00170] Uma mistura de 2,4,5-trifluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1- metiletil] benzamida (6,39 g, 23,6 mmol), azetidin-3-ol (3,19 g, 28,3 mmol) e 1,8-diazabiciclo [5.4.0]undec-7-eno (8,81 mL, 58,9 mmol) em acetonitrila (25 mL) foi agitada a 80 ° C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (75 mL) e lavada com HCl 1N (50 mL), 1 N de NaHCO3 (60 mL), salmoura a 20% (50 mL) e água (75 mL). As camadas aquosas foram extraídas com EtOAc (100 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto desejado (7,59 g, 91,8%). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,38 (dd, J = 8,9, 1,9 Hz, 1H), 7,27 (dd, J = 12,8, 6,5 Hz, 1H), 6,38 (dd, J = 12,3, 7,5 Hz, 1H), 5,71 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,74 (dp, J = 15,3, 7,6 Hz, 1H), 4,62 - 4,46 (m, 1H), 4,30 - 4,15 (m, 2H), 3,71 (m, 2H), 1,29 (d, J = 7,1 Hz, 3H) ppm. LCMS calculada para C13H14F5N2O2 (M+1)+: m/z = 325,1; Encontrou: 325,1.
[00171] A uma solução de 2,5-difluoro-4-(3-hidroxiazetidina-1-il)-N- [(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (7,57 g, 23,3 mmol) em cloreto de metileno (93 mL), foi adicionado diacetato de iodobenzeno (9,40 g, 29,2 mmol) e radical livre de 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidinilóxi (1,82 g, 11,7 mmol) (TEMPO) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi diluída com EtOAc (100 mL), lavada com 0,5 N de NaHCO3 (2x80 ml), salmoura a 20% (100 mL) e água (100 mL). As camadas aquosas foram extraídas com acetato de etila (75 mL). Os extratos orgânicos foram combinados, secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida em uma coluna de gel de sílica eluindo com 0% a 5% de acetato de etila em cloreto de metileno para gerar o produto bruto que foi recristalizado a partir de MTBE (50 mL) e heptano (100 mL) para gerar o produto desejado ( 5,44 g, 72%) como sólido incolor. 1H RMN (300 MHz, DMSO- d6) δ 8,52 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 12,5, 6,5 Hz, 1H), 6,63 (dd, J = 12,1, 7,6 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 2,1 Hz, 4H), 4,86 - 4,68 (m, 1H), 1,31 (d, J = 7,1 Hz, 3H) ppm. LCMS caculada para C13H12F5N2O2 (M+1)+: m/z = 323,1; Encontrou: 323,0.
[00172] Cianometilfosfonato de dietila (1,95 mL, 11,8 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução congelada (em banho de gelo) de 1.0 M de terc-butóxido de potássio em THF (11,8 mL, 11,8 mmol) que foi diluída com tetra-hidrofurano (12 mL). O banho foi removido e a reação foi aquecida à temperatura ambiente, e agitada durante 90 min. A solução da reação foi arrefecida com um banho de gelo novamente. A solução preparada acima foi então adicionada durante 12 min a uma solução congelada (em banho de gelo) de 2,5-difluoro-4-(3- oxoazetidina-1-il)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (4,00 g, 12,4 mmol) em tetra-hidrofurano (50 mL). A mistura de reação foi agitada durante 30 min. O banho de gelo foi removido e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante uma noite, em seguida, extinta pela adição de 20% de salmoura (75 mL) e acetato de etila (75 mL). A camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida em uma coluna de gel de sílica com acetato de etila em hexanos (0% a 30%) para obter o produto desejado (2,6 g). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,59 - 8,37 (m, 1H), 7,33 (dd, J = 12,5, 6,4 Hz, 1H), 6,59 (dd, J = 12,0, 7,4 Hz, 1H), 5,88 (m, 1H), 4,94 - 4,75 (m, 4H), 4,76 (m, 1H), 1,31 (d, J = 7,1 Hz, 3H) ppm. LCMS calculada para C15H13F5N3O (M+1)+: m/z = 346,1; Encontrou: 346,1.
[00173] Uma mistura de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)-1Hpirazol (1,00 g, 5,15 mmol), 4-[3-(cianometileno)azetidin-1-il]-2,5- difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (1,78 g, 5,15 mmol) e 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (0,31 mL, 2,1 mmol) em acetonitrila (20,2 mL) foi aquecida a 50 ° C durante uma noite. Após congelar, o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS calculada para C24H28BF5N5O3 (M+1)+: m/z = 540,2; Encontrou: 540,1.
[00174] Uma mistura de 4-{3-(cianometil)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]azetidina-1-il}-2,5-difluoro-N- [(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metil-etil]benzamida (329 mg, 0,610 mmol), 4- bromo-3,5-dimetil-1Hpirazol (206 mg, 1,18 mmol), tetra- quis(trifenilfosfina)paládio (0) (110 mg, 0,098 mmol) e carbonato de sódio (320 mg, 3,0 mmol) em 1,4-dioxano (10 mL)/água (5 ml ) foi purgada com nitrogênio e agitada a 110 ° C durante 1 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc, lavada com água e com salmoura, concentrada. O resíduo foi purificado primeiramente com gel de sílica (eluindo com 0-100% de EtOAc/hexanos seguido de 10% meta- nol/diclorometano) e, em seguida, por meio de prep-LCMS (coluna XBridge C18, eluindo com um gradiente de acetonitrila/água contendo 0,1% de hidróxido de amônio, a uma taxa de fluxo de 60 mL/min) para gerar o produto desejado (30 mg, 9,7%). 1H RMN (500 MHz, DMSO- d6) δ 12,17 (1H, s), 8,45 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,10 (1H, s), 7,70 (1H, s), 7,34 (1H, m), 6,61 (1H, s), 4,77 (1H, m), 4,62 (2H, d, J = 9,0 Hz), 4,39 (1H, d, J = 9,0 Hz), 3,64 (2H, s), 2,22 (6H, s), 1,31 (6H, d, J = 7,0 Hz) ppm. LCMS calculado para C23H23F5N7O (M+H)+: m/z = 508,2; Encontrou: 508,0.
[00175] Os compostos deste documento foram testados quanto à atividade inibidora de alvos de JAK de acordo com a análise in vitro descrita em Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94-104. Os domínios catalíticos de JAK1 humana (aa 837-1142), JAK2 (aa 8281132) e de JAK3 (aa 781-1124) foram expressos utilizando baculovírus em células de inseto e purificados. A atividade catalítica de JAK1, JAK2 ou JAK3 foi testada através da medição da fosforilação de um peptpídeo biotinilado. O peptídeo fosforilado foi detectado através de fluorescência determinada por tempo homogêneo (HTRF). IC50s dos compostos foram medidos para cada quinase nas reações de 40 mi- croL que contêm a enzima, ATP e 500 nM de peptídeo em tampão Tris de 50 mM (pH 7,8) com NaCl de 100 mM, DTT de 5 mM e 0,1 mg/ml (0,01%) de BSA. Para as medições de 1 mM de IC50 , a concentração de ATP nas reações foi de 1 mM. As reações foram realizadas à temperatura ambiente durante 1 hora e, em seguida, parada com 20 μL de EDTA de 45 mM, 300 nM de SA-APC, 6 nM de Eu-PY20 em tampão de ensaio (Perkin Elmer, Boston, MA). A ligação ao anticorpo marcado com Európio ocorreu durante 40 minutos e o sinal de HTRF foi medido em um leitor de placas de estrela PHERA (BMG, Cary, NC). Os dados para os inibidores de JAK1 e/ou JAK2 foram obtidos testando-se os compostos no ensaio do Exemplo A a 1 mM de ATP.
[00176] [Y-33P] O ATP (10 mCi/mL) foi adquirido junto à Perkin- Elmer (Waltham, MA). O substrato de quinase lipídica, 4,5-bifosfato de D-mio-fosfatidilinositol (PtdIns (4,5)P2) D (+)-sn-1,2-di-O- octanoilglicerila, 3-O-fosfo ligado (PIP2), CAS 204858-53-7, foi adquirido junto à Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3Kδ (p110δ/p85α) foi adquirida junto à Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS e CHAPS foram adquiridos junto à Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). As esferas de cintilação de aglutinina de germe de trigo (WGA) YSI SPA foram compradas junto à GE Healthcare Life Sciences (Piscataway, NJ).
[00177] A reação da quinase foi realizada em uma placa branca de matriz de poliestireno de 384 poços da Thermo Fisher Scientific, a um volume final de 25μL. Os inibidores foram inicialmente diluídos em série em DMSO e adicionados aos poços da placa antes de se adicionarem os demais componentes da reação. A concentração final de DMSO no ensaio foi de 0,5%. Os ensaios de PI3K foram realizados à temperatura ambiente em MOPS a 20 mM, pH 6,7, 10 mM de MgCl2, DTT a 5 mM e CHAPS a 0,03%. As reações foram iniciadas pela adição de ATP, a mistura de reação final foi de 20 μM de PIP2, 20 μM de ATP, 0,2 μCi de [y-33P] ATP e 4 nM de PI3Kδ. As reações foram incubadas durante 210 minutos e terminadas pela adição de 40 μL de esferas SPA em suspensão em tampão de têmpera: 150 mM de fosfato de potássio com pH 8,0, 20% de glicerol. 25 mM de EDTA, 400 μM de ATP. A concentração final de esferas de SPA foi igual a 1,0 mg/mL. Após a vedação de placa, as placas foram agitadas por uma noite à temperatura ambiente e centrifugadas a 1800 rpm durante 10 minutos, a radioatividade do produto foi determinada por contagem de cintilação em Topcount (Perkin-Elmer). A determinação de IC50 foi realizada pelo ajuste da curva de atividade de controle percentual em comparação ao registro da concentração do inibidor pelo uso do software GraphPad Prism 3.0. Os dados dos inibidores de PI3Kδ foram obtidos testando- se os compostos do ensaio do Exemplo B.
[00178] Os camundongos SCID fêmea, (5 a 8 semanas de idade, Charles River Laboratories, Wilmington, MA) foram inoculados com 1 x 107 de células tumorais (Pfeiffer, ATCC # CRL-2632, Manassas, VA) e matrigel (BD Biosciences # 354234) em 0,2 ml de solução salina estéril. A inoculação foi realizada subcutaneamente no flanco. Os fragmentos de tecido tumoral (cerca de 3 mm x 3 mm) foram coletados entre 3 a 6 semanas após a inoculação das células de cultivo e implantado por via subcutânea em vez da inoculação celular. Os fragmentos de tecido foram implantados como peças sólidas, utilizando uma pinça de ponta cega. O tratamento de camundongo com tumor foi iniciado de 15 a 25 dias após a inoculação do tumor, dependendo do tamanho do tumor. Os animais foram classificados para serem obtidos volumes de tumores médios aproximadamente equivalentes em cada grupo. O volume tumoral médio mínimo em todos os grupos foi de 150 mm3 no primeiro dia de tratamento e os grupos consistiram em 7 animais. O agente terapêutico experimental, Exemplo 347, foi administrado aos camundongos por via oral (PO). A frequência do tratamento foi de 2 vezes por dia, durante um mínimo de 14 dias por questão de eficácia. O tamanho dos tumores subcutâneos foi medido de duas a três vezes por semana utilizando um calibrador digital. O volume tumoral foi calculado medindo o tumor em 2 dimensões e utilizando a equação: volume = [comprimento x (largura 2)]/ 2; em que o número maior foi o comprimento e a menor número foi largura. Se múltiplos tumores tiverem sido formados, o volume final foi a soma dos tumores individuais submetidos à mesma equação: por exemplo, 2 tumores; Volume = {[L1 x (W1)2]/2} + {[L2 x (W2) 2]/2}. Os efeitos sobre o crescimento tumoral foram relatados como o percentual da inibição do crescimento tumoral (%TGI). O percentual da TGI foi calculado com a equação: (1-(Tx vol./vol. de con- trole))*100, onde o volume de controle foi o veículo ou o volume do tumor não tratado em um determinado dia e o volume de Tx foi qualquer volume tumoral no grupo de tratamento nesse mesmo dia. As diferenças estatísticas entre o tratamento e os controles de veículo fo- ram avaliadas utilizando ANOVA: teste de fator único.
[00179] O Composto 32c (Tabela 2 supra) foi avaliado como um agente único, no modelo de xenoenxerto de tumor humano de Pfeiffer de um linfoma de células B grandes difusas, um subtipo de NHL. Demonstrou-se que as células cancerosas de Pfeiffer são sensíveis aos efeitos antiproliferativos do Exemplo 347in vitro. Portanto, um modelo tumoral foi estabelecido com base na inoculação subcutânea de células de tumor em camundongos SCID imunocomprometidos e os camundongos com tumor receberam duas doses orais diariamente do veículo ou do Composto 32c em 0,3, 1, 3 ou 10 mg/kg durante 14 dias. O tratamento com o Composto 32c inibiu o crescimento tumoral em 22%, 24%, 36% e 58% (percentual de inibição do crescimento tumoral) com o aumento da dose.
[00180] Os materiais e métodos a seguir foram usados na análise Western blot infra. As células (5 milhões) foram lisadas em um volume de 300 μl do tampão de lise. As frações solúveis foram coletadas por centrifugação. 25 μl de lisado de células foram carregados em géis de poliacrilamida de tris-glicina e submetidas à eletroforese. As proteínas foram transferidas para a membrana de nitrocelulose e sondadas com anticorpos da tecnologia de sinalização celular para as seguintes pro-teínas: fosfo-Stat3 Y705, fosfo-Akt S473, pim1, pim2, pim3, c-myc, fos- fo-p70S6K, fosfo-S6, fosfo-Bad S112 e actina.
[00181] Os níveis elevados de IL-6 e IL-10 foram observados em várias linhagens celulares de DLBCL (Fig. 1A). Demonstrou-se que IL6 e IL10 também ativam a sinalização de JAK/STAT com IL10 sendo um ativador mais forte da sinalização de JAK/STAT de IL6 através de um painel de linhagens celulares de DLBCL (Fig. 1B). Estão presentes al- tos níveis de IL6 e IL10 no soro dos pacientes com DLBCL e se corre-lacionam com a menor sobrevida livre de eventos e com uma maior pontuação do Índice Internacional de Prognósticos.
[00182] As células de linfoma de células B grandes difusas foram semeadas a 2000 células/poço em placas de cultivo de 96 poços na ausência ou presença de 10 ng/ml de IL10. Os compostos foram adici-onados a essas células após a diluição em DMSO, em primeiro lugar, seguindo-se a diluição em meio de cultivo (concentração de 4x). As células foram cultivadas em uma incubadora durante 3 dias com 5% de CO2. A proliferação celular foi avaliada utilizando o ensaio de célula de brilho de titulação (Promega, Madison, WI). O ensaio de proliferação celular foi realizada pela primeira vez em células de Pfeiffer (célula do linfoma de células B grandes difusas de células B centrais germinais (GCB) (GCB-DLBCL)) e células HBL-1 (linfoma de células B grandes difusas semelhantes às células B ativadas (ABC) (ABC- DLBCL)).
[00183] A FIG. 2A representa o % de inibição no ensaio de proliferação celular em células de Pfeiffer na forma de uma função da concentração do Composto 28 (um inibidor de PI3Kδ) com veículo (DMSO), DMSO+IL10, e DMSO+IL10+ruxolitinib (um inibidor de JAK1/JAK2). A FIG. 2B representa o % de inibição no ensaio de proliferação celular em células de Pfeiffer como uma função da concentração do Composto 28 (um inibidor de PI3Kδ) com veículo (DMSO), DMSO+IL10 e DMSO+IL10+Composto 7 (um inibidor seletivo de JAK1). Os resultados mostram que IL-10 faz com que as células de Pfeiffer resistentes à inibição de PI3Kδ, mas que essa resistência pode ser revertida pelo bloqueio da sinalização de JAK1 e/ou JAK2. Assim, um efeito sinérgico sobre a proliferação de células de Pfeiffer quando um inibidor de PI3Kδ e um inibidor de JAK1 e/ou JAK2 são usados em combinação. A sinergia foi igualmente observada sem a IL10. A indução de apoptose também foi observada com essa combinação.
[00184] Resultados semelhantes foram observados em células HBL-1 com ruxolitinib. Por conseguinte, a FIG. 3 representa o % de inibição no ensaio de proliferação celular em células de HBL-1 na forma de uma função da concentração do Composto 28 (um inibidor de PI3Kδ) com veículo (DMSO), DMSO+IL10, e DMSO+IL10+ruxolitinib (um inibidor de JAK1/JAK2).
[00185] As células de Pfeiffer foram tratadas durante 24 horas com um veículo (DMSO), ruxolitinib (18424), composto 28 ou composto 28 e ruxolitinib (18424) com ou sem IL-10 e em seguida submetidas à análise Western blot para investigar as seguintes proteínas: fosfo- STAT3 Y705, fosfo-Akt S473, Pim2, c-Myc, fosfo-p70S6K, fosfo-S6, fosfo-Bad S112 e actina. A FIG. 4 mostra que a expressão induzida por IL-10 de Pim2 é bloqueada por ruxolitinib (um inibidor de JAK1/JAK2). IL6 e IL10 promovem a sobrevivência celular através da expressão de Pim2, que é dependente da atividade de JAK1. A FIG. 4 mostra também uma redução sinérgica de c-Myc e P-S6 na presença de um tratamento combinado com Composto 28 e ruxolitinib. A redução da proteína de c-Myc pode ser responsável pelo efeito sinérgico do tratamento de combinação.
[00186] As células de Pfeiffer foram tratadas durante 24 horas com um veículo (DMSO), composto 7, composto 28 ou composto 28 e composto 7 com ou sem IL-10 e em seguida submetidas à análise Western blot para investigar as seguintes proteínas: fosfo-STAT3 Y705, fosfo-Akt S473, Pim2, c-Myc, fosfo-p70S6K, fosfo-S6, fosfo-Bad S112 e actina. A FIG. 5 mostra que a expressão induzida por IL-10 de Pim2 é bloqueada por um inibidor seletivo de JAK1 (Composto 7).
[00187] Para testar os efeitos de IL-10 sobre o crescimento celular e a sensibilidade à inibição da via de BCR, a linhagem celular de Pfeiffer foi usada como sistema modelo de DLBCL. As células de Pfeiffer são do subtipo de células B do centro germinativo (GCB) de DLBCL, demonstrou-se que expressam PI3Kδ, são sensíveis à inibição de PI3Kδ e ativam a via de JAK/STAT em resposta a várias citocinas, como mostrado acima. As células de Pfeiffer foram tratadas por 3 dias com várias concentrações do composto 28 na presença ou ausência de IL-10 e 1 μM do composto 16, e o crescimento celular foi medido pelo uso de uma leitura de ATP (ver a tabela abaixo). Como mostrado na FIG. 6, a presença de IL-10 alterou a potência do Composto 28 em ~10 vezes (IC50= 0,67 μM,-a IL-10; IC50= 6,36 μM, +IL-10). A adição do inibidor de JAK1, Composto 16, reverteu esse efeito, de maneira que a combinação foi ~ 50 vezes mais potente. Nesse sistema, o inibidor de JAK1, isoladamente, não teve efeito (IC50 > 1 μM). Além disso, como mostrado na FIG. 7 (mostrando coloração Anexina-V das células de Pfeiffer tratadas durante 3 dias em 10% de FBS + IL10; o composto 16 foi testado em 1 μM), a inibição da PI3Kδ em conjunto com a sinalização de JAK1 levou a um aumento da apoptose enquanto que nenhum agente, isoladamente, teve efeito significativo.
[00188] Para avaliar os efeitos sobre vias de sinalização à jusante, as células de Pfeiffer foram tratadas com o Composto 28 +/-Composto 16 durante 4 horas e depois estimuladas com IL-10 durante 15 minutos. Os extratos foram analisados por Western blot para pAKT e pSTAT3. Como mostrado na FIG. 8, a via de AKT foi constitutivamente ativada nas células de Pfeiffer. O bloqueio da sinalização de PI3Kδ levou à completa inibição de pAKT, enquanto que o tratamento com o inibidor de JAK1 não teve efeito algum. Em contraste, o Composto 16 levou à inibição da fosforilação de STAT3, enquanto que o inibidor de PI3Kδ não o fez. A combinação de ambos os compostos foi necessária para bloquear ambas as vias.
[00189] Todas as patentes, publicações de patentes e artigos de periódicos referidos supra são aqui incorporados por referência na sua totalidade.
Claims (12)
1. Uso de (a) um inibidor de JAK1/2, que é (3R)-3- ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] propano- nitrila, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um ini-bidor de PI3Kδ, que é 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazol[3,4- d]pirimidin-1-il)etil]-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil} pirrolidin-2-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado por ser para a preparação de um medicamento para o tratamento de mielofibrose.
2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor de JAK1/2 é sal do ácido (3R)-3-ciclopentil-3-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] propanonitrila fosfórico.
3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é selecionado de: (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo [3,4-d] pirimi- din-1-il) etil) -5-cloro-2- etoxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona; (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo [3,4-d] pirimi- din-1-il) etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona; (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo [3,4-d] pirimi- din-1-il) etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona; e (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo [3,4-d] pirimi- din-1-il) etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona; ou sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos acima mencionados.
4. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2- ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
5. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2- ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
6. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2- ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
7. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2- ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
8. Uso de (a) um inibidor de JAK1/2 e (b) um inibidor de PI3Kδ, caracterizado por ser para a preparação de um medicamento para o tratamento de mielofibrose, em que: (a) o inibidor de JAK1/2 é (3R)-3-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo [2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila sal de ácido fosfórico; e (b) o inibidor de PI3Kδ é selecionado de: (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona; (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona; (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil)pirrolidin-2-ona; e (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2-ona; e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos acima mencionados.
9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirrolidin-2- ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
10. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirroli- din-2-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
11. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil- 1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirroli- din-2-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
12. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PI3Kδ é (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-cloro-2-etoxi-6-fluorofenil) pirroli- din-2-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
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