JP2017532047A5 - - Google Patents

Claims (15)

1. ヒト多能性幹細胞の分化によって生着可能なヒトケラチノサイト幹細胞を提供する方法であって、
   （ａ）規定された基本培地の存在下において浮遊培養で多能性幹細胞の凝集体を形成させること；
   （ｂ）開始凝集体の形成を促すために、レチノイン酸および骨形成タンパク質４（ＢＭＰ４）を含有する開始培地の存在下において浮遊培養で凝集体を培養すること；
   （ｃ）ケラチノサイト前駆細胞を含む細胞集団の形成を促すために、コレラ毒素および（トランスフォーミング増殖因子ベータレセプター１（ＴＧＦβＲ１）キナーゼ阻害剤を含有するケラチノサイト前駆体培地中で開始凝集体を培養すること；および
   （ｄ）生着可能なケラチノサイト幹細胞を含む細胞集団の形成を促すために、コレラ毒素および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を含むケラチノサイト幹細胞成熟培地中でケラチノサイト前駆細胞を培養すること、
   を含み、ケラチノサイト幹細胞がサイトケラチン１５及びＣＤ４９ｆを発現する、方法。
2. ケラチノサイト幹細胞を、コレラ毒素およびＴＧＦβＲ１キナーゼ阻害剤を含有するケラチノサイト幹細胞維持培地中における培養中で維持することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
3. ケラチノサイト幹細胞を、集団が少なくとも５倍に倍加するまで維持する、請求項２に記載の方法。
4. ケラチノサイト幹細胞の純度が少なくとも９０％である、請求項１に記載の方法。
5. 多能性幹細胞が人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞である、請求項１に記載の方法。
6. 多能性幹細胞を、（ｉ）工程（ａ）の前に、血清を含まない培地中で、及び／又は（ｉｉ）工程（ａ）の前に、非細胞性マトリックス成分上で、培養する、請求項１に記載の方法。
7. 工程（ａ）で使用される培地が、化学的に規定された培地である、請求項１に記載の方法。
8. 工程（ａ）における培養が約１日間実施される、工程（ｂ）における培養が約１日〜約５日間実施される、工程（ｃ）における培養が約８日間〜約１４日間実施される、及び／又は工程（ｄ）における培養が約４日間〜約８日間実施される、請求項１に記載の方法。
9. 工程（ａ）における培養がミオシン軽鎖キナーゼ阻害剤の存在下で実施される、請求項１に記載の方法。
10. ケラチノサイト前駆細胞培地が、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１）、サイクリックＡＭＰ類似体、ナイアシンアミド、アスコルビン酸、またはこれらの組み合わせをさらに含む、請求項１に記載の方法。
11. 工程（ｃ）及び／又は工程（ｄ）における培養が接着培養として実施される、請求項１に記載の方法。
12. 工程（ｃ）及び／又は工程（ｄ）における培養が細胞外マトリックス成分又は非細胞性マトリックス成分上で実施される、請求項１に記載の方法。
13. ケラチノサイト前駆細胞がサイトケラチン１４および／またはｐ６３を発現している、請求項１に記載の方法。
14. ケラチノサイト前駆細胞培地に含まれるカルシウムのレベルが約０．２ｍＭを超えるものではない、請求項１に記載の方法。
15. ケラチノサイト幹細胞成熟培地が、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、サイクリックＡＭＰ類似体、ナイアシンアミド、またはこれらの組み合わせをさらに含む、請求項１に記載の方法。