JP2017526339A - 抗Axl抗体 - Google Patents
抗Axl抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017526339A JP2017526339A JP2016573964A JP2016573964A JP2017526339A JP 2017526339 A JP2017526339 A JP 2017526339A JP 2016573964 A JP2016573964 A JP 2016573964A JP 2016573964 A JP2016573964 A JP 2016573964A JP 2017526339 A JP2017526339 A JP 2017526339A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- axl
- domain
- seq
- binding
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/71—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
Abstract
Description
配列番号1→5F11VHコードヌクレオチド配列
配列番号2→5F11VLコードヌクレオチド配列
配列番号3→5F11VHコードアミノ酸配列
配列番号4→5F11VLコードアミノ酸配列
配列番号5→5F11VHCDR1コードアミノ酸配列
配列番号6→5F11VHCDR2コードアミノ酸配列
配列番号7→5F11VHCDR3コードアミノ酸配列
配列番号8→5F11VLCDR1コードアミノ酸配列
配列番号9→5F11VLCDR2コードアミノ酸配列
配列番号10→5F11VLCDR3コードアミノ酸配列
配列番号11→5F11VHFR1コードアミノ酸配列
配列番号12→5F11VHFR2コードアミノ酸配列
配列番号13→5F11VHFR3コードアミノ酸配列
配列番号14→5F11VHFR4コードアミノ酸配列
配列番号15→5F11VLFR1コードアミノ酸配列
配列番号16→5F11VLFR2コードアミノ酸配列
配列番号17→5F11VLFR3コードアミノ酸配列
配列番号18→5F11VLFR4コードアミノ酸配列
配列番号19→ヒトAxlコードアミノ酸配列
配列番号20→マウス(murine)Axlコードアミノ酸配列
配列番号21→ヒトTyro3コードアミノ酸配列
配列番号22→ヒトMerコードアミノ酸配列
5F11VHドメイン(配列番号3)と、配列番号7のアミノ酸配列を有するVHCDR3、及び任意選択で配列番号6及び配列番号5から選択されるアミノ酸配列を有する1つ又は複数のVHCDRを含むVHドメインとからなる群から選択される抗体VHドメイン;及び/又は
5F11VLドメイン(配列番号4)と、配列番号8、配列番号9及び配列番号10から選択されるアミノ酸配列を有する1つ又は複数のVLCDRを含むVLドメインとからなる群から選択される抗体VLドメイン;
を含む。
Axlに対する高い親和性
本明細書に記載する5F11抗体は、高い親和性でヒトAxlに結合する。実施例4に記載するように、5F11抗体は、5.80×10−12MのKDを有することが判明した。これは、抗Axl抗体について記載される依然として最も低いKDである。
一般に、「特異的」及び「特異的に結合する」という用語は、抗体が、その特定の結合パートナー以外の分子と有意な結合を何ら示さない状況を指すのに用いられ得る。例えば、ヒトAxlに「特異的に結合する」抗体は、マウスAxlに対する有意な結合を何ら示さない。
(1)実施例2において、5F11は、ヒトTAM受容体チロシンキナーゼファミリーの他のメンバーである、hMer及びhTyro3由来の組換え抗原に対して有意な結合を示さない。
(2)実施例3では、5F11は、ヒトAxlに強力に結合するが、マウスAxlに対する結合は全く示さない(これは、マウス及びヒトAxlの両方に強力に結合すると共に、(これより弱く)ヒトTyro3に結合する、マウスAxlリガンド、マウスGas6とは対照的である)。
本明細書に記載する5F11抗体は、その標的であるAxlに結合すると、良好な細胞内在化を示す。内在化は、抗体が、サポリン(Saporin)などの細胞毒素に結合すると観察される(例11及び図11を参照)。
一部の実施形態では、抗Axl抗体は、細胞表面(例えば、腫瘍細胞表面)上のAxl受容体発現の下方制御を誘導する。
抗体
この用語は、天然であるか又は部分的若しくは完全に合成により生成されたかのいずれにかかわらず、免疫グロブリンを表す。この用語はまた、抗体抗原結合ドメインを含む任意のポリペプチド又はタンパク質も包含する。抗体抗原結合ドメインを含む抗体断片は、全抗体(例えば、標準的構成でVH、CH1、CH2、CH3、VL、及びCLドメインを含むIgG抗体)、又は標的抗原に対する結合活性を保持する全抗体の断片を含む。こうした断片として、Fv(断片可変)、Fab(断片抗体結合)及びF(ab’)2断片、並びに単鎖Fv抗体(scFv)、dsFv、ミニボディ、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムscFv、TandAb、バイボディ(bi−body)、トリボディ(tri−body)、κ(λ)ボディ、BiTE、DVD−lg、SIP、SMIP、又はDARTが挙げられる。さらに、それらの抗体及び断片は、例えば、欧州特許出願公開第239400A号明細書に記載のように、ヒト化抗体であってもよい。例えば、モノクローナル及びポリクローナル抗体、組換え抗体、抗体のタンパク質分解及び組換え断片(Fab、Fv、scFv、ダイアボディ)、単一ドメイン抗体(VHH、sdAb、ナノボディ、IgNAR、VNAR)、及び抗体に無関係なタンパク質であって、限定はしないが、下記のような抗体様特異的結合(抗体模倣物)を有するように操作されているものである。
これは、抗原を認識して、特異的に結合し、且つその抗原の相補性部分又は全部である領域を含む抗体分子の一部を表す。抗原が大きい場合、抗体は、抗原の特定部分にのみ結合し得るが、この部分は、エピトープと呼ばれる。抗原結合ドメインは、1つ又は複数の抗体可変ドメイン(例えば、VHドメインから構成されるいわゆるFd抗体断片)によって提供され得る。抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域(VL)と抗体重鎖可変領域(VH)を含むのが好ましい。
ヒトAxl
本明細書で用いられるとき、「ヒトAxl」は、受容体チロシンキナーゼのヒトTAMファミリーのAxlメンバーを指す。一部の実施形態では、ヒトAxlポリペプチドは、Genbankアクセッション番号AAH32229、バージョン番号AAH32229.1 GI:21619004、記録更新日:2012年3月6日、01:18PM(配列番号19)に対応する。一実施形態では、ヒトAxlポリペプチドをコードする核酸は、Genbankアクセッション番号M76125、バージョン番号M76125.1 GI:292869、記録更新日:2010年6月23日、08:53AMに対応する。
本明細書で用いられるとき、「マウスAxl」は、受容体チロシンキナーゼのマウスTAMファミリーのAxlメンバーを指す。一部の実施形態では、マウスAxlポリペプチドは、Genbankアクセッション番号AAH46618、バージョン番号AAH46618.1 GI:55777082、記録更新日:2012年3月6日、01:36PM(配列番号20)に対応する。一実施形態では、マウスAxlポリペプチドをコードする核酸は、Genbankアクセッション番号NM_009465、バージョン番号NM_009465.4 GI:300794836、記録更新日:2014年3月12日、03:52PMに対応する。
本明細書で用いられるとき、「ヒトTyro3」は、受容体チロシンキナーゼのヒトTAMファミリーのTyro3メンバーを指す。一部の実施形態では、ヒトTyro3ポリペプチドは、Genbankアクセッション番号Q06418、バージョン番号Q06418.1 GI:1717829、記録更新日:2014年4月22日、12:07PM(配列番号21)に対応する。一実施形態では、ヒトTyro3ポリペプチドをコードする核酸は、Genbankアクセッション番号BC051756、バージョン番号BC051756.1 GI:30704372、記録更新日:2012年3月6日、01:43PMに対応する。
本明細書で用いられるとき、「ヒトMer」は、受容体チロシンキナーゼのヒトTAMファミリーのMerメンバーを指す。一部の実施形態では、ヒトMerポリペプチドは、Genbankアクセッション番号AAI14918、バージョン番号AAI14918.1 GI:109732052、記録更新日:2012年3月6日、04:21PM(配列番号22)に対応する。一実施形態では、ヒトMerポリペプチドをコードする核酸は、Genbankアクセッション番号NM_006343、バージョン番号NM_006343.2 GI:66932917、記録更新日:2014年3月16日、08:52PMに対応する。
本明細書で用いられるとき、「BSA」は、ウシ血清アルブミンを指す。一部の実施形態では、BSAは、Genbankアクセッション番号CAA76847、バージョン番号CAA76847.1 GI:3336842、記録更新日:2011年1月7日、02:30PMに対応する。
これは、一般に、「包含する」、すなわち、1つ又は複数の特徴又は成分の存在を可能にするという意味で用いられる。
これは、本発明の抗体、又はそのような抗体をコードする核酸が、概して本発明に従うものである状況を指す。抗体及び核酸は、それらが天然に結合している材料、例えば、他のポリペプチドなど、又はそれらの天然の環境、若しくはその調製がin vitro若しくはin vivoで実施される組換えDNA技術による場合には、それらが調製された環境(例えば、細胞培養物)にそれらと一緒に存在する核酸を含まないか、又は実質的に含まない。抗体及び核酸は、希釈剤又はアジュバントと一緒に製剤化しても(formulated)、また実用目的で単離してもよく、例えば、抗体は、免疫アッセイで使用するマイクロプレートのコーティングに用いられる場合、通常、ゼラチン若しくは他の担体と混合され、或いは診断又は治療に用いられる場合には、薬学的に許容される担体若しくは希釈剤と混合される。抗体は、自然に、若しくは異種真核細胞(例えば、CHO若しくはNS0(ECACC85110503)細胞)の系によりグルコシル化されていてもよく、又は非グルコシル化であってもよい(例えば、原核細胞での発現により生成される場合)。
「実質的に記載される通り」とは、本発明の関連CDR又はVH若しくはVLドメインが、指定の領域(その配列は本明細書に記載される)と同一であるか、又は高度に類似しているかのいずれかであることを意味する。「高度に類似している」とは、CDR及び/又はVH若しくはVLドメインに、1〜5つ、好ましくは1〜4つ、例えば、1〜3つ又は1若しくは2つ、又は3若しくは4つのアミノ酸置換がなされていてもよいと考慮される。
本発明のCDRを担持するための構造は、一般に、再編成された免疫グロブリン遺伝子によりコードされる天然のVH及びVL抗体可変ドメインのCDRに対応する位置にCDRが位置している、抗体の重鎖若しくは軽鎖配列又はその実質的部分からなる。免疫グロブリン可変ドメインの構造及び位置は、以下:(Kabat,E.A.et al,Sequences of Proteins of Immunological Interest.4th Edition.US Department of Health and Human Services.1987、及びその更新内容を参照にして決定することができ、現在ではインターネットでも入手可能である(http://immuno.bme.nwu.edu、又はいずれかの検索エンジンを用いて「Kabat」を検索)。
本発明の別の態様は、Axlエピトープに特異的な抗体を取得する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載するVHドメインのアミノ酸配列における1つ又は複数のアミノ酸の付加、欠失、置換又は挿入により、VHドメインのアミノ酸配列変異体であるVHドメインを提供し、任意選択で、こうして提供されたVHドメインのアミノ酸配列を1つ又は複数のVLドメインと組み合わせるステップ、及びVHドメイン又は1つ若しくは複数のVH/VL組み合わせを試験して、Axlに特異的な抗体又は抗体抗原結合ドメインを特定するステップを含む。前記VLドメインは、アミノ酸配列を有し、これは、実質的に本明細書に記載される通りである。
(a)置換しようとするCDR3を含むか、又はCDR3コード領域を欠失しているかのいずれかであるVHドメインをコードする核酸の出発レパトアを用意するステップ;
(b)前記レパトアを、VHCDR3について実質的に本明細書に記載される通りのアミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせるステップであって、それにより、前記ドナー核酸がレパトア内のCDR3領域に挿入されて、VHドメインをコードする核酸の産物レパトアを提供する、ステップ;
(c)前記産物レパトアの核酸を発現させるステップ;
(d)Axlに特異的な抗体を選択するステップ;及び
(e)前記抗体又はそれをコードする核酸を回収するステップ
を含む。
本明細書で用いられるとき、「キメラ」抗体又は「ヒト化」抗体又は「CDR移植」抗体は、本明細書に記載する抗Axl抗体の任意の組み合わせ、又はそれに由来する任意のCDRと非マウス、好ましくはヒト抗体由来の1つ又は複数のタンパク質若しくはペプチドとの組み合わせを含む。
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi;www.atcc.org/phage/hdb.html;www.sciquest.com/;www.abcam.com/;www.antibodyresource.com/onlinecomp.html;www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html;www.mgen.uni−heidelberg.de/SD/IT/IT.html;www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm;www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html;www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/;www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/mikeimages.html;www.antibodyresource.com/;mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html.www.immunologylink.com/;pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.html;www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/;www.pebio.com/pa/340913/340913.html;www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/;www.m.ehime−u.ac.jp/.about.yasuhito/Elisa.html;www.biodesign.com/table.asp;www.icnet.uk/axp/facs/davies/links.html;www.biotech.ufl.edu/.about.fccl/protocol.html;www.isac−net.org/sites_geo.html;aximt1.imt.uni−marburg.de/.about.rek/AEPStart.html;baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/links1.html;www.recab.uni−hd.de/immuno.bme.nwvu.edu/;www.mrc−cpe.cam.ac.uk/imt−doc/public/INTRO.html;www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html;imgt.cnusc.fr:8104/;www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html;antibody.bath.ac.uk/;abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html;www.unizh.ch/.about.honegger/AHOseminar/Slide01.html;www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/;www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm;www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/humanisation/TAHHP.html;www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html;www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html;www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.about.fmolina/Web−pages/Pept/spottech.html;www.jerini.de/fr_products.htm;www.patents.ibm.con/ibm.html.Kabat et al.Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Dept.Health(1983)(これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる)。
本発明の抗体は、検出可能又は機能性標識で標識してもよい。検出可能な標識としては、[131I]又は[99Tc]などの放射性標識があり、これらは、放射性免疫複合体の分野において公知の従来の化学を用いて、本発明の抗体に結合することができる。標識は、セイヨウワサビペルオキシダーゼなどの酵素標識も含む。標識はさらに、ビオチンなどの化学的部分も含み、これは、特定のコグネイト検出可能部分、例えば、標識アビジン若しくはストレプトアビジンへの結合により検出することができる。標識は、FITCなどの蛍光標識を含むのが好ましい。
修飾抗体及び抗原結合断片は、抗体に直接若しくは間接的に共有結合した1つ又は複数の有機部分を含んでよい。本明細書に記載する抗体又は抗原結合断片に結合した各有機部分は、独立に、親水性ポリマー基、脂肪酸基、又は脂肪酸エステル基であってよい。本明細書で用いられるとき、「脂肪酸」という用語は、モノカルボン酸及びジカルボン酸を包含する。「親水性ポリマー基」は、この用語が本明細書で用いられるとき、オクタンよりも水に可溶性の有機ポリマーを指す。例えば、ポリリシンは、オクタンよりも水に可溶性である。このように、ポリリシンの共有結合により修飾される抗体は、本開示により包含される。本明細書に記載する抗体を修飾するのに好適な親水性ポリマーは、直鎖又は分岐状のいずれであってもよく、例えば、ポリ−アルカングリコール、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)、モノメトキシ−ポリエチレングリコール(mPEG)、PPGなど、炭水化物(例えば、デキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖など)、親水性アミノ酸のポリマー(例えば、ポリ−リシン、ポリ−アルギニン、ポリ−アスパラギン酸塩など)、ポリ−アルカンオキシド(例えば、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシドなど)、並びにポリビニルピロリドンが挙げられる。本明細書に記載する抗体を修飾する親水性ポリマーは、個別の分子実体として、約800〜約150,000ダルトンの分子量を有する。例えば、PEG5000及びPEG20,000(添え字は、ポリマーの平均分子量(ダルトン)である)を用いることができる。親水性ポリマー基は、1〜約6のアルキル、脂肪酸又は脂肪酸エステル基で置換することができる。脂肪酸又は脂肪酸エステル基で置換された親水性ポリマーは、好適な方法を用いることにより調製することができる。例えば、アミン基を含むポリマーを脂肪酸又は脂肪酸エステルのカルボン酸塩と結合させてから、脂肪酸又は脂肪酸エステル上の活性化カルボン酸塩(例えば、N,N−カルボニルジイミダゾールで活性化)をポリマー上のヒドロキシル基と結合させることができる。
本発明はまた、化学療法剤若しくは薬物、増殖阻害剤、毒素(例えば、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源のタンパク質毒素、酵素的に活性毒素、若しくはそれらの断片)、又は放射性同位体などの1種又は複数種の細胞傷害剤に結合した本明細書に記載の抗Axl抗体を含む免疫複合体も提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大又は低減するように改変される。抗体に対するグリコシル化部位の付加又は欠失は、1つ又は複数のグリコシル化部位が形成又は除去されるように、アミノ酸配列を改変することによって、好都合に達成され得る。
いくつかの実施形態では、1つ又は複数のアミノ酸修飾を本明細書に記載の抗体のFc領域に導入し、これにより、Fc領域変異体を作製することができる。Fc領域変異体は、1つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾(例えば、置換)を含むヒトFc領域配列(例えば、ヒトIgG1、IgG2、IgG3若しくはIgG4 Fc領域)を含んでよい。
いくつかの実施形態では、抗体の1つ又は複数の残基がシステイン残基で置換される、「thioMAb」などのシステイン改変抗体を作出することが望ましい場合もある。
本発明の抗体は、ヒト又は動物被験者、好ましくはヒトの診断又は治療の方法に使用されるように設計される。
ヒトAxlに対して高い特異性を有する抗体を用いて、治療利益をもたらし得る臨床的適応は、Axlが過剰発現される、又はAxl拮抗作用が臨床的利益をもたらすあらゆる状態を含む。こうした状態として、免疫障害、心臓血管障害、血栓症、糖尿病、免疫チェックポイント障害、又は癌、とりわけ転移性癌などの増殖性疾患が挙げられる。さらに、Axlは、多くの上皮起源の癌において、ある役割を果たすこともわかっている。
本発明はまた、構成性Axl活性化を阻害するステップも提供し、この方法は、構成性Axlを阻害するために本明細書に開示する抗Axl抗体のいずれかの有効量を個体に投与するステップを含む。
本発明の抗体は、通常、医薬組成物の形態で投与され、この組成物は、抗体に加えて、少なくとも1つの成分を含み得る。
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、鼻内、気管支内、局所(口腔及び舌下)、膣又は非経口(皮下、筋内、静脈内、動脈内及び皮内)、腹腔内若しくは髄腔内投与のために改変してもよい。製剤は、静脈内又は皮下投与される製剤であるのが好ましい。
当業者は、過度の実験なしに、被験者に投与する、本発明の組成物のうちの1つの適切な用量を容易に決定することができる。典型的には、医師は、個別の患者について最も好適となる実際の投与量を決定することができ、これは、使用される特定の薬剤の活性、薬剤の代謝安定性及び作用の長さ、年齢、体重、健康状態、性別、食事、投与方法及び時間、排出速度、薬物併用、特定の状態の重症度、並びに受療中の個別の療法を含む様々な要因に応じて変動し得る。
組成物は、単独で、又は治療しようとする状態に応じて同時に若しくは順次、他の療法と組み合わせて投与してもよい。例えば、本発明の抗体若しくはそのコンジュゲートを抗癌単剤療法として、又は後述する他の癌療法との併用療法で使用してもよい。他の療法は、非ステロイド抗炎症薬(例えば、アスピリン、イブプロフェン若しくはケトプロフェン)又はモルヒネなどのオピエートなどの鎮痛薬、或いは制吐薬の好適量の投与を含み得る。
イピリムマブ(Ipilimumab)及びトレメリムマブ(Tremelimumab)などのCTLA−4ターゲティング剤。
ペムブロリズマブ(Pembrolizumab)、ミボルマブ(Mivolumab)及びAMP−514/MEDI0680などのPD−1ターゲティング剤。
MPDL3280A、MEDI4736、MSB0010718C及びBMS−936559などのBD−L1ターゲティング剤。
ウレルマブ(Urelumab)及びPF−05082566などの4−1BBターゲティング剤。
MEDI6469、MEDI6383(rOX40L)及びMOXR0916などのOX−40ターゲティング剤。
TRX518などのGITRターゲティング剤。
CDX−1127などのCD27ターゲティング剤。
CP−870、893などのCD40ターゲティング剤。
BMS−986016などのLAG3ターゲティング剤。
これらの薬剤として、以下のものが挙げられる:アルキル化剤、例えば、ブスルファンなどのスルホン酸アルキル;
クロラムブシル、シクロホスファミド、エストラムスチン、イソスファミド、メクロレタミン、メルファラン、及びウラムスチンなどのナイトロジェンマスタード、チオテパなどのエチレンイミン誘導体;
カルムスチン、ロムスチン、及びストレプトゾシンなどのニトロソウレア、ダカルバジン、プロカルバジン、及びテモゾールアミド(temozolamide)などのトリアゼン;
シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、及びピコプラチン、オナプラチン(onnaplatin)、テトラプラチン、スピロプラチン、イプロプラチン、クロロ(ジエチレンジアミノ)−塩化白金(II)、ジクロロ(エチレンジアミノ)−白金(II)、ジアミノ(2−エチルマロナト)白金(II)、(1,2−ジアミノシクロヘキサン)マロナト白金(II)、(4−カルボキシフタロ)−(1,2−ジアミノシクロヘキサン)白金(II)、(1,2−ジアミノシクロヘキサン)−(イソシトラト)白金(II)、及び(1,2−ジアミノシクロヘキサン)−シス−(ピルバト)白金(II)などの白金化合物;
メトトレキサート、ペルメトレキセド、ラルチトレキセド、及びトリメトキセドなどの抗葉酸化合物を含む抗代謝物;
アザシチジン、カペシタビン、シタラビン、エダトレキセート、フロクスウリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、及びトロキサシタビンなどのピリミジン類似体;
クラドリビン、クロロデオキシアデノシン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、及びチオグアニンなどのプリン類似体;
ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ポルフィロマイシンなどの抗腫瘍抗生物質、並びにダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びバルルビシンなどのアントラサイクリンを含む天然産物;
ビンカアルカロイド、ビンブラスチン、ビンベシル、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビンなどの有糸分裂阻害剤;
L−アスパラギナーゼ及びPEG−L−アスパラギナーゼなどの酵素;
タキサンパクリタキセル及びドセタキセルなどの微小管ポリマー安定剤;
カンプトテシンイリノテカン及びテポテカンなどのトポイソメラーゼI阻害剤;ポドフィロトキシン、アムサクリン、エトポシド、テニポシド、ロソキサントロン及びアクチノマイシンなどのトポイソメラーゼII阻害剤;
フルオキシメステロン及びテストラクトンなどのアンドロゲンを含むホルモン及びホルモンアンタゴニスト、
ビカルタミド、シプロテロン、フルタミド、及びニルタミドなどの抗アンドロゲン;
デキサメタゾン及びプレドニゾンなどのコルチコステロイド;
アミノグルテチミド、アナストロゾール、エキセメスタン、ホルメスタン、及びレトロゾールなどのアロマターゼ阻害剤;
ジエチルスチルベストロールなどのエストロゲン;
フルベストラント、ラロキシフェン、タモキシフェン、及びトレミフィンなどの抗エストロゲン;
アバレリクス、ブセレリン、ゴセレリン、ロイプロリド、ヒストレリン、デソレリン、酢酸ナファレリン及びトリプトレリンなどの黄体形成ホルモン放出ホルモン(LHRH)アゴニスト及びアンタゴニスト;
メドロキシプロゲステロン酢酸エステル及び酢酸メゲストロールなどプロゲスチン、並びにレボチロキシン及びリオチロニンなどの甲状腺ホルモン;
ペリホシン、エンザスタウリン塩酸塩、及びトリシルビンを含むPKB経路阻害剤;
セマフォア(semaphore)及びSF1126などのPI3K阻害剤;
ラパマイシン及び類似体などのmTOR阻害剤;
セリシクリブ、アルボシジブ、及び7−ヒドロキシスタウロスポリンなどのCDK阻害剤;
セレコキシブなどのCOX−2阻害剤;
トリコスタチンA、スベロイルアニリドヒドロキサム酸、及びクラミドシンなどのHDAC阻害剤;
テモゾロミドなどのDNAメチラーゼ阻害剤;並びに
アルトレタミン、三酸化ヒ素、サリドマイド、レナリドミド、硝酸ガリウム、レバミゾール、ミトタン、ヒドロキシ尿素、オクトレオチド、プロカルバジン、スラミン、メトキサレン及びナトリウムポルフィマーなどの光作用性化合物、並びにボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤を含むその他の多種薬剤。
機能性治療薬、例えば、遺伝子治療薬;
アンチセンス療法薬;
エルロチニブ塩酸塩、ゲフィチニブ、イマチニブメシレート、及びセマキサニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤;
ソラフェニブなどのRAF阻害剤;
レチノイド及びレキシノイドなどの遺伝子発現調節剤、例えば、アダパレン、ベキサロテン、トランス−レチノイン酸、9−シス−レチノイン酸、及びN−(4−ヒドロキシフェニル)レチンアミド;
アレムツマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、イブリツモマブチウキセタン、リツキシマブ、及びトラスツズマブなどのモノクローナル抗体を含む表現型指定療法薬;
エムタンシンなどの免疫毒素、I−トシツモバブなどの放射性免疫複合体、本明細書に記載する分子標的のいずれか1つをターゲティングする結合剤、例えば、アプタマー、
並びに癌ワクチン。
インターフェロン−[α]2a及びインターフェロン−[α]2bなどのインターフェロン、並びにアルデスロイキン、デニロイキンジフチトクス、及びオプレルベキンなどのインターロイキン。1−(6,7−ジヒドロ−5H−ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[1,2−c]ピリダジン−3−イル)−N3−((7−(S)−ピロリジン−1−イル)−6,7,8,9−テトラヒドロ−5H−ベンゾ[7]アニュレン−2−イル)−1H−1,2,4−トリアゾール−3,5−ジアミン(BGB324/R428)、スイス特許第5451098号明細書(Roche)、並びにPCT/米国特許出願第07/089177号明細書、米国特許出願公開第2010/021275号明細書、及びPCT/欧州特許第2011/004451号明細書(参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているAxl阻害剤。
アミホスチン、及びデキスラゾキサンなどの細胞保護剤;
パミドロン酸塩及びゾレドロン酸などのホスホン酸塩;並びに
エポエチン、ダルベオペチン、フィルグラスチム、PEG−フィルグラスチム、及びサルグラモスチムなどの刺激因子。
以下のパラグラフに、いくつかの具体的に考慮される本発明の実施形態及び組み合わせを記載する。
5F11VHドメイン(配列番号3)と、配列番号7のアミノ酸配列を有するVHCDR3、及び任意選択で配列番号6及び配列番号5から選択されるアミノ酸配列を有する1つ又は複数のVHCDRを含むVHドメインとからなる群から選択される抗体VHドメイン;及び/又は
5F11VLドメイン(配列番号4)と、配列番号8、配列番号9及び配列番号10から選択されるアミノ酸配列を有する1つ又は複数のVLCDRを含むVLドメインとからなる群から選択される抗体VLドメイン;
を含む、抗体。
(i)10−3Mを超えるKDでマウスAxlに結合し;
(ii)10−3Mを超えるKDでヒトMerに結合し;及び/又は
(iii)10−3Mを超えるKDでヒトTyro3に結合する、抗体。
(i)1H12抗体と同じエピトープ、又は
(ii)1H12抗体により結合されるエピトープとオーバーラップするエピトープ
に結合する、パラグラフ1〜20のいずれか1つに記載の抗体。
5F11VHドメインのアミノ酸配列(配列番号3)における1つ又は複数のアミノ酸の付加、欠失、置換又は挿入により、1つ又は複数のVHドメインであって、各々が5F11VHドメインのアミノ酸配列変異体である1つ又は複数のVHドメインを提供し、任意選択で、このようにして提供された1つ又は複数のVHドメインアミノ酸配列変異体を、1つ又は複数のVLドメインと組み合わせて、1つ又は複数のVH/VL組み合わせを提供するステップ;及び/又は
5F11VLドメインのアミノ酸配列(配列番号4)における1つ又は複数のアミノ酸の付加、欠失、置換又は挿入により、5F11VLドメインのアミノ酸配列変異体であるVLドメインを提供し、及びこのようにして提供された1つ又は複数のVLドメインアミノ酸配列変異体を、1つ又は複数のVHドメインと組み合わせて、1つ又は複数のVH/VL組み合わせを提供するステップ;及び
VHドメインアミノ酸配列変異体、又は1つ若しくは複数のVH/VL組み合わせを試験して、Axlに結合する抗体を特定するステップ
を含む、方法。
置換しようとするCDR3を含むか、又はCDR3コード領域を欠失しているかのいずれかである1つ又は複数のVHドメインをコードする出発核酸を用意し、及び前記出発核酸を、配列番号7のVHCDR3アミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせるステップであって、それにより、前記ドナー核酸が出発核酸のCDR3領域に挿入されて、VHドメインをコードする産物核酸を提供する、ステップ;又は
置換しようとするCDR3を含むか、又はCDR3コード領域を欠失しているかのいずれかである1つ又は複数のVLドメインをコードする出発核酸を用意し、及び前記出発核酸を、配列番号10のVLCDR3アミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせるステップであって、それにより、前記ドナー核酸が出発核酸のCDR3領域に挿入されて、VLドメインをコードする産物核酸を提供する、ステップ;
VHドメインをコードする前記産物核酸の核酸を発現させ、及び任意選択で、このようにして生成されたVHドメインを、1つ又は複数のVLドメインと組み合わせて、VH/VL組み合わせを提供し、且つ/又はVLドメインをコードする前記産物核酸の核酸を発現させ、及びこのようにして生成されたVLドメインを、1つ又は複数のVHドメインと組み合わせて、VH/VL組み合わせを提供するステップ;
Axlに結合するVHドメイン又はVH/VL組み合わせを含む抗体を選択するステップ;及び
Axlに結合する前記抗体、及び/又はAxlに結合する抗体をコードする核酸を回収するステップ;
を含む、方法。
ヒトAxl受容体に対するモノクローナル抗体(MAb)は、ヒトIgG1Fcドメインに融合したヒトAxlの細胞外ドメインを含む組換え抗原で、免疫応答性OF1マウス(Charles River)の免疫により作製した(rhAxl−Fc;R&D Systems)。
結合実験は全て、25℃で、Biacore3000計器(GE Healthcare)を用いて実施した。393.0、303.6及び364.0共鳴単位(RU)の表面密度でのアミン結合をそれぞれ用いて、ヒトTAM受容体ファミリーのメンバー、すなわち、Axl(rhAxl−Fcキメラ;R&D Systems,Cat.no.154−AL)、Mer(rhMer−Fcキメラ;R&D Systems,Cat.no.891−MR)及びTyro3(rhTyro3/Dtk−Fcキメラ;R&D Systems,Cat.no.859−DK)の細胞外ドメインに対応する可溶性組換え抗原をCM5センサーチップの表面に固定化した。Biacoreランは、結合分析ウィザードを用いて、自動式で実施した。HBS−EPバッファー(GE Healthcare)中に濃度10μg/mLでMAb5F11を含有するサンプルを、抗原を固定化した表面に30μL/分の流量で3分間注射し(結合)、その後5分間の解離を実施した。
結合実験は、25℃で、Biacore3000計器(GE Healthcare)を用いて実施した。1,308.0、2,115.9及び1,429.0RUの表面密度でのアミン結合をそれぞれ用いて、ヒトAxl(rhAxl−Fcキメラ;R&D Systems,Cat.no.154−AL)、マウスAxl(rmAxl−Fcキメラ;R&D Systems,R&D Systems:Cat.no.854−Ax)及びヒトTyro3(rhTyro3/Dtk−Fcキメラ;R&D Systems,Cat.no.859−DK)に対応する可溶性組換え抗原をCM5センサーチップの表面に固定化した。Biacoreランは、結合分析ウィザードを用いて、自動式で実施した。
Biacore3000計器(GE Healthcare)を用いた表面プラズモン共鳴測定により、抗Axl抗体5F11の親和性測定を25℃で実施した。抗原を塗布した固体表面として、密度190RUで固定化したrhAxl−Fcキメラ(R&D Systems,Cat.no.154−AL)を有するセンサーチップCM5を使用した。
Biacore3000計器(GE Healthcare)及びBinding Analysisウィザードを用い、2つのサンプルの数サイクルの注射により、競合結合試験を実施した。第1のサンプルとして、飽和濃度のMAb5F11(666.7nM又は100μg/mL)を、rhAxl−Fcを塗布した(アミン結合を用いて)CM5センサーチップの表面に30μL/分の流量で3分間注射してから、2.5分の安定化(HBS−EPバッファーのみ)の後、第2のサンプルを注射した。次の第2サンプルを使用した:組換えヒト(rh)Gas6(R&D Systems,Cat.no.885−GS)、組換えマウス(rm)Gas6(R&D Systems,Cat.no.986−GS/CF)及び1群の抗Axl抗体、例えば、Mab1、Mab3、MAB154(R&D Systems,Cat.no.MAB154);全て濃度25μg/mL。対照として、MAb5F11を第2サンプルとして同じ条件下(25μg/mL)で使用した。第2サンプルを3分間注射してから、2.5分の安定化(バッファーのみ)の後、流量50μL/分の再生溶液(10mM HCl、1M NaCl)の30秒の注射により、表面の再生を行った。
ウェスタンブロット分析のために、推定分子量が71.7kDa(還元条件下のSDS−PAGEにおける100〜110kDaに相当)の組換えヒト(rh)Axl−Fcキメラ(R&D Systems,Cat.no.154−AL)と、推定分子量が78.9kDa(還元条件下のSDS−PAGEにおける100〜110kDaに相当)のrhMer−Fc(R&D Systems,Cat.no.891−MR)を抗原として用いた。抗原を含有するサンプルを還元剤(Life Technologies)の存在及び非存在下で変性させてから、NuPAGE3〜8%トリス−酢酸ポリアクリルアミド(PAA)ゲル、1.0mm×12ウェル(Invitrogen)のウェルにロードした。分子量マーカとして、SeeBlue Plus2 Prestained MWマーカ(Novex LC5925)を使用した。
ハイブリドーマ5F11細胞を標準的条件下で増殖させた。標準的プロトコルに従うmRNA単離及びcDNA合成のために、5×106個の細胞を使用した。重鎖及び軽鎖可変領域をコードする遺伝子(それぞれ、VH及びVL)のPCR増幅のために、マウスIgG Library Primer Set(Progen,Heidelberg,Germany,Cat.no.F2010)を使用した。様々なプライマー組み合わせを用いたPCR増幅によって、VH遺伝子については7つの異なるプライマー組み合わせを用いたPCRから14の配列が、またVL遺伝子については2つの異なるプライマー組み合わせを用いたPCRから5つの配列が得られた。クローンVH4(D8−7)及びVκ3(H4−3)の配列を、IMGTデータベースとのヌクレオチドアラインメントにより決定して、対応する生殖系列配列との最も高い相同性に基づき、さらなる試験のために選択した。
哺乳動物細胞(GeneArt)での発現のためのコドン最適化により合成遺伝子を作製するために、マウスハイブリドーマ5F11から得られたVH及びVL配列を使用した。これらのマウスVH及びVL遺伝子は、哺乳動物細胞での抗体生成に好適な発現ベクターにおいて、ヒトIgG1重及び軽(C−κ)鎖の定常ドメインをコードする遺伝子エレメントとフレーム内で連結させた。キメラ(マウス可変/ヒト定常)IgG1抗体の生成は、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞における一過性発現の後、プロテインAアフィニティークロマトグラフィーを用いた精製により達成した。精製キメラ抗体(>95%純度)を、Axl陽性乳癌細胞株MDA−MB−231との結合についてフローサイトメトリーで分析した。比較のために、親マウスMAb5F11を使用した。フローサイトメトリーのために、培養中の接着細胞をPBSで洗浄し、1分間のトリプシン(0.25%)処理の後、完全な脱離のために培養皿をたたくことよって、脱離させた。組織培養フラスコ中に完全培地を添加することによりトリプシンをクエンチした後、細胞をPBSで洗浄した。洗浄ステップ中に、200gで5分の遠心分離により、細胞を回収した。0.02%ウシ血清アルブミン(BSA)を含有するPBS中の総濃度のために抗体を希釈した。室温で20分間105個の細胞を含む200μLの細胞懸濁液を用いて、細胞染色を実施した。細胞結合抗体を、APC結合ロバ抗ヒト又は抗マウスIgG(H+L)F(ab’)2断片(Jackson ImmunoResearch)でそれぞれ検出した。PBS/0.02%BSAを用いた2回の洗浄ステップの後、細胞を200μLに再懸濁させ、氷上に維持してから、Accuri C6フローサイトメータ(BD Biosciences)での分析に付した。図8に示す結果から、MDA−MB−231細胞に対するキメラ抗体の強力な結合が判明した。
Biacore3000計器(GE Healthcare)を用いて、抗Axlキメラ(マウス可変/ヒト定常IgG1)抗体ch5F11の親和性測定を25℃で実施した。抗原を塗布した固体表面として、密度190RUで固定化したrhAxl−Fcキメラ(R&D Systems,Cat.no.154−AL)を有するセンサーチップCM5を使用した。
カニクイザル(cynomolgus)及びアカゲザル(rhesus)(それぞれ、cyno−Axl及びrhe−Axl)由来のAxl受容体の細胞外部分を含む組換えAxl−Fcキメラタンパク質をCHO細胞での一過性発現により作製した。それぞれ1,345.0及び1,515.9RUの表面密度でのアミン結合を用いて、CM5センサーチップの表面上に組換えcyno−Axl及びrhe−Axlを固定化した。陽性対照として、同じ条件下で生成されたhu−Axl−Fcキメラを1,234.9RUの密度で同じチップに固定化した。
免疫毒素の作製のために、FabFc−ZAPヒトコンジュゲート(4.5nM最終濃度)(Advanced Targeting Systems,Cat.no.IT−65)を用いて、キメラMAbch5F11を植物毒素サポリン(Saporin)に非共有結合させた。Axl陽性腫瘍細胞株MDA−MB−231(ヒトトリプルネガティブ乳癌)を用いて、腫瘍細胞生存性に対するch5F11−サポリン内在化の作用を試験した。10%FBS、L−グルタミン(4mM)、ストレプトマイシン(5μg/ml)及びペニシリン(5U/ml)を補充したDMEM/F−12培地を含む96ウェルプレート中にウェル当たり800個の細胞を接種して、16時間にわたり結合させた。様々な希釈度の免疫毒素ch5F11−サポリンと一緒に、細胞を72時間インキュベートした。細胞の生存性は、CLARIOstar(登録商標)マイクロプレートリーダ(BMG LABTECH)を用いて、XTT/PMSアッセイを実施することにより測定した。
配列番号1[VHドメイン(nt)]
GAGGTGAAGCTGGTGGAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAGATACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGATAGCAGTACGATAAACTATACGCCATCTCTAAAGGATAAATTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTGCAAGCCCTTATTACTACGGCCCCTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGACTATCCACTGGC
配列番号2[VLドメイン(nt)]
GACATTGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCAGAGGGCCATCATCTCCTGCAAGGCCAGCCAAAGTGTCAGTTTTGCTGGTACTAGTTTAATGCACTGGTACCAACAGAAGCCAGGACAGCAACCCAAACTCCTCATCTATCGTGCATCCAACCTAGAAGCTGGATTTCCTACCAGGTTTAGTGGCAGTGGGTCTAGGACAGACTTCACCCTCAATATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCAAAGTAGGGAATATCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAGTCAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCC
配列番号3[VHドメイン(aa)]
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCASPYYYGPFAYWGQGTLVTVSA
配列番号4[VLドメイン(aa)]
DIVLTQSPASLAVSLGQRAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYQQKPGQQPKLLIYRASNLEAGFPTRFSGSGSRTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSREYPRTFGGGTKLEVK
配列番号5[重鎖CDR1]
GFDFSRYWMS
配列番号6[重鎖CDR2]
EINPDSSTINYTPSLKDKFIISRDNA
配列番号7[重鎖CDR3]
PYYYGPFAY
配列番号8[軽鎖CDR1]
KASQSVSFAGTSLMH
配列番号9[軽鎖CDR2]
RASNLEA
配列番号10[軽鎖CDR3]
QQSREYPRT
配列番号11[重鎖FR1]
EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAAS
配列番号12[重鎖FR2]
WVRQAPGKGLEWIG
配列番号13[重鎖FR3]
KNTLYLQMSKVRSEDTALYYCAS
配列番号14[重鎖FR4]
WGQGTLVTVSA
配列番号15[軽鎖FR1]
DIVLTQSPASLAVSLGQRAIISC
配列番号16[軽鎖FR2]
WYQQKPGQQPKLLIY
配列番号17[軽鎖FR3]
GFPTRFSGSGSRTDFTLNIHPVEEEDAATYYC
配列番号18[軽鎖FR4]
GGGTKLEVK
配列番号19[ヒトAxl]
MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFVGNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILELADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCLVFLGHQTFVSQPGYVGLEGLPYFLEEPEDRTVAANTPFNLSCQAQGPPEPVDLLWLQDAVPLATAPGHGPQRSLHVPGLNKTSSFSCEAHNAKGVTTSRTATITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCTLQAVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLGSLHPHTPYHIRVACTSSQGPSSWTHWLPVETPEGVPLGPPENISATRNGSQAFVHWQEPRAPLQGTLLGYRLAYQGQDTPEVLMDIGLRQEVTLELQGDGSVSNLTVCVAAYTAAGDGPWSLPVPLEAWRPGQAQPVHQLVKEPSTPAFSWPWWYVLLGAVVAAACVLILALFLVHRRKKETRYGEVFEPTVERGELVVRYRVRKSYSRRTTEATLNSLGISEELKEKLRDVMVDRHKVALGKTLGEGEFGAVMEGQLNQDDSILKVAVKTMKIAICTRSELEDFLSEAVCMKEFDHPNVMRLIGVCFQGSERESFPAPVVILPFMKHGDLHSFLLYSRLGDQPVYLPTQMLVKFMADIASGMEYLSTKRFIHRDLAARNCMLNENMSVCVADFGLSKKIYNGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWSFGVTMWEIATRGQTPYPGVENSEIYDYLRRGNRLKQPADCLDGLYALMSRCWELNPQDRPSFTELREDLENTLKALPPAQEPDEILYVNMDEGGGYPEPPGAAGGADPPTQPDPKDSCSCLTAAEVHPAGRYVLCPSTTPSPAQPADRGSPAAPGQEDGA
配列番号20[マウスAxl]
MGRVPLAWWLALCCWGCAAHKDTQTEAGSPFVGNPGNITGARGLTGTLRCELQVQGEPPEVVWLRDGQILELADNTQTQVPLGEDWQDEWKVVSQLRISALQLSDAGEYQCMVHLEGRTFVSQPGFVGLEGLPYFLEEPEDKAVPANTPFNLSCQAQGPPEPVTLLWLQDAVPLAPVTGHSSQHSLQTPGLNKTSSFSCEAHNAKGVTTSRTATITVLPQRPHHLHVVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCNLQAVLSDDGVGIWLGKSDPPEDPLTLQVSVPPHQLRLEKLLPHTPYHIRISCSSSQGPSPWTHWLPVETTEGVPLGPPENVSAMRNGSQVLVRWQEPRVPLQGTLLGYRLAYRGQDTPEVLMDIGLTREVTLELRGDRPVANLTVSVTAYTSAGDGPWSLPVPLEPWRPGQGQPLHHLVSEPPPRAFSWPWWYVLLGALVAAACVLILALFLVHRRKKETRYGEVFEPTVERGELVVRYRVRKSYSRRTTEATLNSLGISEELKEKLRDVMVDRHKVALGKTLGEGEFGAVMEGQLNQDDSILKVAVKTMKIAICTRSELEDFLSEAVCMKEFDHPNVMRLIGVCFQGSDREGFPEPVVILPFMKHGDLHSFLLYSRLGDQPVFLPTQMLVKFMADIASGMEYLSTKRFIHRDLAARNCMLNENMSVCVADFGLSKKIYNGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWSFGVTMWEIATRGQTPYPGVENSEIYDYLRQGNRLKQPVDCLDGLYALMSRCWELNPRDRPSFAELREDLENTLKALPPAQEPDEILYVNMDEGGSHLEPRGAAGGADPPTQPDPKDSCSCLTAADVHSAGRYVLCPSTAPGPTLSADRGCPAPPGQEDGA
配列番号21[ヒトTyro3]
MALRRSMGRPGLPPLPLPPPPRLGLLLAALASLLLPESAAAGLKLMGAPVKLTVSQGQPVKLNCSVEGMEEPDIQWVKDGAVVQNLDQLYIPVSEQHWIGFLSLKSVERSDAGRYWCQVEDGGETEISQPVWLTVEGVPFFTVEPKDLAVPPNAPFQLSCEAVGPPEPVTIVWWRGTTKIGGPAPSPSVLNVTGVTQSTMFSCEAHNLKGLASSRTATVHLQALPAAPFNITVTKLSSSNASVAWMPGADGRALLQSCTVQVTQAPGGWEVLAVVVPVPPFTCLLRDLVPATNYSLRVRCANALGPSPYADWVPFQTKGLAPASAPQNLHAIRTDSGLILEWEEVIPEAPLEGPLGPYKLSWVQDNGTQDELTVEGTRANLTGWDPQKDLIVRVCVSNAVGCGPWSQPLVVSSHDRAGQQGPPHSRTSWVPVVLGVLTALVTAAALALILLRKRRKETRFGQAFDSVMARGEPAVHFRAARSFNRERPERIEATLDSLGISDELKEKLEDVLIPEQQFTLGRMLGKGEFGSVREAQLKQEDGSFVKVAVKMLKADIIASSDIEEFLREAACMKEFDHPHVAKLVGVSLRSRAKGRLPIPMVILPFMKHGDLHAFLLASRIGENPFNLPLQTLIRFMVDIACGMEYLSSRNFIHRDLAARNCMLAEDMTVCVADFGLSRKIYSGDYYRQGCASKLPVKWLALESLADNLYTVQSDVWAFGVTMWEIMTRGQTPYAGIENAEIYNYLIGGNRLKQPPECMEDVYDLMYQCWSADPKQRPSFTCLRMELENILGQLSVLSASQDPLYINIERAEEPTAGGSLELPGRDQPYSGAGDGSGMGAVGGTPSDCRYILTPGGLAEQPGQAEHQPESPLNETQRLLLLQQGLLPHSSC
配列番号22[ヒトMer]
MKINNEEIVSDPIYIEVQGLPHFTKQPESMNVTRNTAFNLTCQAVGPPEPVNIFWVQNSSRVNEQPEKSPSVLTVPGLTEMAVFSCEAHNDKGLTVSKGVQINIKAIPSPPTEVSIRNSTAHSILISWVPGFDGYSPFRNCSIQVKEADPLSNGSVMIFNTSALPHLYQIKQLQALANYSIGVSCMNEIGWSAVSPWILASTTEGAPSVAPLNVTVFLNESSDNVDIRWMKPPTKQQDGELVGYRISHVWQSAGISKELLEEVGQNGSRARISVQVHNATCTVRIAAVTKGGVGPFSDPVKIFIPAHGWVDYAPSSTPAPGNADPVLIIFGCFCGFILIGLVLYISLAIRKRVQETKFGNAFTEEDSELVVNYIAKKSFCRRAIELTLHSLGVSEELQNKLEDVVIDRNLLILGKILGEGEFGSVMEGNLKQEDGTSLKVAVKTMKLDNSSQREIEEFLSEAACMKDFSHPNVIRLLGVCIEMSSQGIPKPMVILPFMKYGDLHTYLLYSRLETGPKHIPLQTLLKFMVDIALGMEYLSNRNFLHRDLAARNCMLRDDMTVCVADFGLSKKIYSGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWAFGVTMWEIATRGMTPYPGVQNHEMYDYLLHGHRLKQPEDCLDELYEIMYSCWRTDPLDRPTFSVLRLQLEKLLESLPDVRNQADVIYVNTQLLESSEGLAQGSTLAPLDLNIDPDSIIASCTPRAAISVVTAEVHDSKPHEGRYILNGGSEEWEDLTSAPSAAVTAEKNSVLPGERLVRNGVSWSHSSMLPLGSSLPDELLFADDSSEGSEVLM
Claims (58)
- Axlに結合する抗体であって、
5F11VHドメイン(配列番号3)と、配列番号7のアミノ酸配列を有するVHCDR3、及び任意選択で配列番号6及び配列番号5から選択されるアミノ酸配列を有する1つ又は複数のVHCDRを含むVHドメインとからなる群から選択される抗体VHドメイン;及び/又は
5F11VLドメイン(配列番号4)と、配列番号8、配列番号9及び配列番号10から選択されるアミノ酸配列を有する1つ又は複数のVLCDRを含むVLドメインとからなる群から選択される抗体VLドメイン;
を含む、抗体。 - 配列番号5、配列番号6及び配列番号7の前記アミノ酸配列を有するVHCDRを含む抗体VHドメインを含み、Axlに対する結合について、前記5F11VHドメイン(配列番号3)及び前記5F11VLドメイン(配列番号4)を含む抗体のAxl結合ドメインと競合する、請求項1に記載の抗体。
- 前記5F11VHドメイン(配列番号3)を含む、請求項1又は2に記載の抗体。
- 前記5F11VLドメイン(配列番号4)を含む、請求項3に記載の抗体。
- 請求項1〜4のいずれか一項に記載の抗体の変異体であって、1つ若しくは複数のフレームワーク領域及び/又は1つ若しくは複数のCDRに1つ又は複数のアミノ酸配列改変を含む、変異体。
- 前記5F11VHドメイン(配列番号3)及び前記5F11VLドメイン(配列番号4)により形成されるAxl抗原結合部位の親和性と等しいか、又はそれより良い親和性でAxlに結合する、請求項1〜5のいずれか一項に記載の抗体であって、前記抗体の親和性及び前記抗原結合部位の親和性が同じ条件下で測定される、抗体。
- scFv抗体分子を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体。
- 抗体定常領域を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体。
- 全抗体を含む、請求項8に記載の抗体。
- 単一ドメイン抗体、Fv、scFv、dsFv、Fd、Fab、F(ab’)2、ミニボディ、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムscFv、TandAb、バイボディ、トリボディ、κ(λ)ボディ、BiTE、DVD−lg、SIP、SMIP、又はDARTなどの抗原結合抗体断片である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体。
- 抗原に結合する能力に加えて、別の機能特性をもたらす追加アミノ酸を含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の抗体。
- 6×10−12M以下のKDでAxlに結合する、請求項1〜10のいずれか一項に記載の抗体。
- 5×10−12M以下のKDでAxlに結合する、請求項1〜10のいずれか一項に記載の抗体。
- 2×107M−1s−1以上のKonでAxlに結合する、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体。
- 3×107M−1s−1以上のKonでAxlに結合する、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記AxlがヒトAxlである、請求項1〜12のいずれか一項に記載の抗体。
- 霊長類Axlに特異的に結合する、請求項1〜13のいずれか一項に記載の抗体。
- 請求項1〜17のいずれか一項に記載の抗体であって、
(i)10−3Mを超えるKDでマウスAxlに結合し;
(ii)10−3Mを超えるKDでヒトMerに結合し;及び/又は
(iii)10−3Mを超えるKDでヒトTyro3に結合する、抗体。 - 前記抗体がキメラ抗体である、請求項1〜18のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記抗体がヒト化抗体である、請求項1〜18のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記抗体が、
(i)1H12抗体と同じエピトープ、又は
(ii)前記1H12抗体により結合される前記エピトープとオーバーラップするエピトープ
に結合する、請求項1〜20のいずれか一項に記載の抗体。 - 前記抗体が細胞表面に存在するAxlと結合した後に内在化される、請求項1〜21のいずれか一項に記載の抗体。
- 検出可能な標識、酵素、又は毒素に、任意選択でペプチジル結合又はリンカーを介して結合される、請求項1〜22のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記毒素が、MMAE及びMMAFを含む群から選択される、請求項23に記載の抗体。
- 前記検出可能な標識がFITCである、請求項23に記載の抗体。
- 請求項1〜22のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項1〜22のいずれか一項に記載の抗体の抗体VH若しくはVLドメインをコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
- 請求項26に記載の核酸で形質転換された宿主細胞。
- 抗体又は抗体VH若しくはVLドメインを生成する方法であって、前記抗体又は抗体VH若しくはVLドメインの生成のための条件下で、請求項27に記載の宿主細胞を培養するステップを含む、方法。
- 前記抗体又は抗体VH若しくはVL可変ドメインを単離するステップ及び/又は精製するステップをさらに含む、請求項28に記載の方法。
- 少なくとも1つの追加成分を含む組成物に、前記抗体又は抗体VH若しくはVL可変ドメインを製剤化するステップをさらに含む、請求項28又は29に記載の方法。
- Axlに結合する抗体を取得する方法であって、
5F11VHドメインのアミノ酸配列(配列番号3)における1つ又は複数のアミノ酸の付加、欠失、置換又は挿入により、1つ又は複数のVHドメインであって、各々が前記5F11VHドメインのアミノ酸配列変異体である1つ又は複数のVHドメインを提供し、任意選択で、このようにして提供された1つ又は複数のVHドメインアミノ酸配列変異体を、1つ又は複数のVLドメインと組み合わせて、1つ又は複数のVH/VL組み合わせを提供するステップ;及び/又は
5F11VLドメインのアミノ酸配列(配列番号4)における1つ又は複数のアミノ酸の付加、欠失、置換又は挿入により、前記5F11VLドメインのアミノ酸配列変異体であるVLドメインを提供し、及びこのようにして提供された1つ又は複数のVLドメインアミノ酸配列変異体を、1つ又は複数のVHドメインと組み合わせて、1つ又は複数のVH/VL組み合わせを提供するステップ;及び
前記VHドメインアミノ酸配列変異体、又は1つ若しくは複数のVH/VL組み合わせを試験して、Axlに結合する抗体を特定するステップ;
を含む、方法。 - Axlに結合する抗体を取得する方法であって、
置換しようとするCDR3を含むか、又はCDR3コード領域を欠失しているかのいずれかである1つ又は複数のVHドメインをコードする出発核酸を用意し、及び前記出発核酸を、配列番号7のVHCDR3アミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせるステップであって、それにより、前記ドナー核酸が前記出発核酸のCDR3領域に挿入されて、VHドメインをコードする産物核酸を提供する、ステップ;又は
置換しようとするCDR3を含むか、又はCDR3コード領域を欠失しているかのいずれかである1つ又は複数のVLドメインをコードする出発核酸を用意し、及び前記出発核酸を、配列番号10のVLCDR3アミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせるステップであって、それにより、前記ドナー核酸が前記出発核酸のCDR3領域に挿入されて、VLドメインをコードする産物核酸を提供する、ステップ;
VHドメインをコードする前記産物核酸の核酸を発現させ、及び任意選択で、このようにして生成された前記VHドメインを、1つ又は複数のVLドメインと組み合わせて、VH/VL組み合わせを提供し、且つ/又はVLドメインをコードする前記産物核酸の核酸を発現させ、及びこのようにして生成された前記VLドメインを、1つ又は複数のVHドメインと組み合わせて、VH/VL組み合わせを提供するステップ;
Axlに結合するVHドメイン又はVH/VL組み合わせを含む抗体を選択するステップ;及び
Axlに結合する前記抗体、及び/又はAxlに結合する前記抗体をコードする核酸を回収するステップ
を含む、方法。 - Axlに結合する前記抗体が、VHドメイン及びVLドメインを含む抗体断片である、請求項31又は32に記載の方法。
- 前記抗体断片がscFv抗体分子である、請求項33に記載の方法。
- 前記抗体断片がFab抗体分子である、請求項33に記載の方法。
- 全抗体に前記抗体断片の前記VHドメイン及び/又は前記VLドメインをもたらすステップをさらに含む、請求項34又は35に記載の方法。
- Axlに結合する前記抗体、又はAxlに結合する前記抗体の抗体VH若しくはVL可変ドメインを、少なくとも1つの追加成分を含む組成物に製剤化するステップをさらに含む、請求項31〜36のいずれか一項に記載の方法。
- Axlに結合する抗体を、Axl又はAxlの断片に結合させるステップをさらに含む、請求項28〜37のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1〜22のいずれか一項に記載のAxlに結合する抗体を、Axl又はAxlの断片に結合させるステップを含む、方法。
- 前記結合がin vitroで起こる、請求項38又は39に記載の方法。
- Axl又はAxlの断片に対する抗体の結合の量を測定するステップを含む、請求項38〜40のいずれか一項に記載の方法。
- Axlの過剰発現を特徴とする疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における前記抗体の使用をさらに含む、請求項28〜37のいずれか一項に記載の方法。
- 別の治療薬と組み合わせた請求項1〜25のいずれか一項に記載の抗体、又はその免疫複合体。
- 薬学的に許容される賦形剤と一緒に、請求項1〜25のいずれか一項に記載の抗体、又はその免疫複合体を含む組成物。
- 別の治療薬をさらに含む、請求項44に記載の組成物。
- 前記別の治療薬が、免疫チェックポイント阻害剤(ICI)などの免疫チェックポイント調節剤(ICM)である、請求項43に記載の抗体又は請求項45に記載の組成物。
- 治療方法での使用のための、請求項1〜25、43、若しくは46のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項44〜46のいずれか一項に記載の組成物。
- 増殖性疾患を治療する方法での使用のための、請求項47に記載の抗体又は組成物。
- 前記増殖性疾患が、AMLなどの癌である、請求項48に記載の抗体又は組成物。
- 前記癌が転移性癌である、請求項49に記載の抗体又は組成物。
- Axlの過剰発現を特徴とする疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における、請求項1〜25、43、若しくは46のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項44〜46のいずれか一項に記載の組成物の使用。
- Axlの過剰発現を特徴とする疾患又は障害の治療の方法であって、請求項1〜25、43、若しくは46のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項44〜46のいずれか一項に記載の組成物を、前記疾患若しくは障害を有するか、又は前記疾患若しくは障害を発症するリスクがある患者に投与するステップを含む、方法。
- 前記抗体が、転移性癌細胞をターゲティングするように医薬組成物の送達を指令する、請求項48に記載の方法。
- Axlの過剰発現を特徴とする疾患又は障害の検出のための診断薬の製造における、請求項1〜25、43、若しくは46のいずれか一項に記載の抗体と、転移性癌細胞に対する前記抗体の結合の測定を可能にする1種又は複数種の試薬との使用。
- Axlの過剰発現を特徴とする疾患又は障害の診断の方法であって、請求項1〜25、43、若しくは46のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項44〜46のいずれか一項に記載の組成物と、転移性癌細胞に対する前記抗体の結合の測定を可能にする1種又は複数種の試薬とを、前記疾患若しくは障害を有するか、又は前記疾患若しくは障害を発症するリスクがある患者に投与するステップを含む、方法。
- 請求項1〜25、43、又は46のいずれか一項に記載の抗体と、転移性癌細胞に対する前記メンバーの結合の測定を可能にする1種又は複数種の試薬とを含む、診断キット。
- 請求項1〜25、43、若しくは46のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項44〜46のいずれか一項に記載の組成物を含む、キット。
- 薬学的に許容される賦形剤と一緒に、有効量の請求項1〜25、43、または46のいずれか一項7に記載の抗体を有効成分として含む、医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1410825.2 | 2014-06-18 | ||
GBGB1410825.2A GB201410825D0 (en) | 2014-06-18 | 2014-06-18 | Anti-axl antibodies |
PCT/EP2015/063704 WO2015193430A1 (en) | 2014-06-18 | 2015-06-18 | Anti-axl antibodies |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017526339A true JP2017526339A (ja) | 2017-09-14 |
JP2017526339A5 JP2017526339A5 (ja) | 2018-05-10 |
JP6787796B2 JP6787796B2 (ja) | 2020-11-18 |
Family
ID=51266760
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016573964A Active JP6787796B2 (ja) | 2014-06-18 | 2015-06-18 | 抗Axl抗体 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9975953B2 (ja) |
EP (1) | EP3157575B1 (ja) |
JP (1) | JP6787796B2 (ja) |
KR (1) | KR102408356B1 (ja) |
CN (2) | CN113321732A (ja) |
AU (1) | AU2015276155B2 (ja) |
CA (1) | CA2952113A1 (ja) |
GB (1) | GB201410825D0 (ja) |
MX (1) | MX2016016886A (ja) |
WO (1) | WO2015193430A1 (ja) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201410826D0 (en) | 2014-06-18 | 2014-07-30 | Bergenbio As | Anti-axl antibodies |
CN107074948B (zh) | 2014-07-11 | 2022-01-28 | 根马布股份公司 | 结合axl的抗体 |
EP3229836B1 (en) * | 2014-12-09 | 2019-11-13 | Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) | Human monoclonal antibodies against axl |
AU2015366213B2 (en) * | 2014-12-18 | 2021-10-07 | Bergenbio Asa | Anti-Axl antagonistic antibodies |
GB201506411D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Bergenbio As | Humanized anti-axl antibodies |
GB201509338D0 (en) * | 2015-05-29 | 2015-07-15 | Bergenbio As | Combination therapy |
CA2991805A1 (en) * | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Genmab A/S | Axl-specific antibody-drug conjugates for cancer treatment |
AU2017248644B2 (en) * | 2016-04-15 | 2019-10-31 | Bioatla, Llc | Anti-Axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof |
GB201610902D0 (en) | 2016-06-22 | 2016-08-03 | Bergen Teknologioverforing As And Bergenbio As | Anti-Axl Antagonistic Antibodies |
CN107973854B (zh) * | 2017-12-11 | 2021-05-04 | 苏州银河生物医药有限公司 | Pdl1单克隆抗体及其应用 |
JP2021523379A (ja) | 2018-05-14 | 2021-09-02 | ベルゲンビオ アーエスアー | 血清バイオマーカー |
CN110540592B (zh) * | 2018-05-29 | 2022-08-09 | 杭州尚健生物技术有限公司 | 结合axl蛋白的抗体及其应用 |
EP3870331A1 (en) * | 2018-10-25 | 2021-09-01 | F. Hoffmann-La Roche AG | Modification of antibody fcrn binding |
GB201912059D0 (en) | 2019-08-22 | 2019-10-09 | Bergenbio As | Combaination therapy of a patient subgroup |
US20230090552A1 (en) | 2020-01-08 | 2023-03-23 | Synthis Therapeutics, Inc. | Alk5 inhibitor conjugates and uses thereof |
GB202004189D0 (en) | 2020-03-23 | 2020-05-06 | Bergenbio As | Combination therapy |
KR20230013241A (ko) | 2020-04-08 | 2023-01-26 | 베르겐바이오 에이에스에이 | 항바이러스 요법을 위한 axl 억제제 |
GB202006072D0 (en) | 2020-04-24 | 2020-06-10 | Bergenbio Asa | Method of selecting patients for treatment with cmbination therapy |
GB202104037D0 (en) | 2021-03-23 | 2021-05-05 | Bergenbio Asa | Combination therapy |
CN113444180B (zh) * | 2021-06-16 | 2023-03-31 | 上海鑫湾生物科技有限公司 | 靶向axl蛋白的抗体及其抗原结合片段、其制备方法和应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011014457A1 (en) * | 2009-07-27 | 2011-02-03 | Genentech, Inc. | Combination treatments |
WO2012175691A1 (en) * | 2011-06-22 | 2012-12-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-axl antibodies and uses thereof |
JP2013538553A (ja) * | 2010-06-18 | 2013-10-17 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗axl抗体及び使用方法 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2918605A1 (en) | 2007-11-12 | 2015-09-16 | U3 Pharma GmbH | Axl antibodies |
CN101918452A (zh) | 2007-11-15 | 2010-12-15 | 中外制药株式会社 | 与Anexelekto结合的单克隆抗体及其利用 |
WO2010131733A1 (ja) | 2009-05-15 | 2010-11-18 | 中外製薬株式会社 | 抗axl抗体 |
RU2014101707A (ru) | 2011-06-22 | 2015-07-27 | Инсерм (Энститю Насьональ Де Ля Сантэ Э Де Ля Решерш Медикаль) | АНТИ-Axl АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ |
EP2589609A1 (en) | 2011-11-03 | 2013-05-08 | Pierre Fabre Medicament | Antigen binding protein and its use as addressing product for the treatment of cancer |
EA036739B1 (ru) * | 2011-12-05 | 2020-12-15 | Новартис Аг | Антитела к рецептору эпидермального фактора роста 3 (her3) |
GB201410826D0 (en) | 2014-06-18 | 2014-07-30 | Bergenbio As | Anti-axl antibodies |
AU2015366213B2 (en) * | 2014-12-18 | 2021-10-07 | Bergenbio Asa | Anti-Axl antagonistic antibodies |
-
2014
- 2014-06-18 GB GBGB1410825.2A patent/GB201410825D0/en not_active Ceased
-
2015
- 2015-06-18 WO PCT/EP2015/063704 patent/WO2015193430A1/en active Application Filing
- 2015-06-18 CA CA2952113A patent/CA2952113A1/en active Pending
- 2015-06-18 EP EP15729850.6A patent/EP3157575B1/en active Active
- 2015-06-18 MX MX2016016886A patent/MX2016016886A/es active IP Right Grant
- 2015-06-18 US US15/318,023 patent/US9975953B2/en active Active
- 2015-06-18 AU AU2015276155A patent/AU2015276155B2/en active Active
- 2015-06-18 CN CN202110419463.1A patent/CN113321732A/zh active Pending
- 2015-06-18 CN CN201580042718.XA patent/CN106573980B/zh active Active
- 2015-06-18 JP JP2016573964A patent/JP6787796B2/ja active Active
- 2015-06-18 KR KR1020177001481A patent/KR102408356B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011014457A1 (en) * | 2009-07-27 | 2011-02-03 | Genentech, Inc. | Combination treatments |
JP2013538553A (ja) * | 2010-06-18 | 2013-10-17 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗axl抗体及び使用方法 |
WO2012175691A1 (en) * | 2011-06-22 | 2012-12-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-axl antibodies and uses thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102408356B1 (ko) | 2022-06-13 |
US20170107290A1 (en) | 2017-04-20 |
JP6787796B2 (ja) | 2020-11-18 |
CN113321732A (zh) | 2021-08-31 |
KR20170020874A (ko) | 2017-02-24 |
CN106573980B (zh) | 2021-05-04 |
MX2016016886A (es) | 2017-11-15 |
CA2952113A1 (en) | 2015-12-23 |
WO2015193430A1 (en) | 2015-12-23 |
CN106573980A (zh) | 2017-04-19 |
AU2015276155B2 (en) | 2020-11-19 |
AU2015276155A1 (en) | 2017-01-05 |
EP3157575B1 (en) | 2019-02-20 |
GB201410825D0 (en) | 2014-07-30 |
US9975953B2 (en) | 2018-05-22 |
EP3157575A1 (en) | 2017-04-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230406941A1 (en) | Anti-AXL Antagonistic Antibodies | |
US20220185897A1 (en) | Anti-axl antibodies | |
JP6787796B2 (ja) | 抗Axl抗体 | |
US11732048B2 (en) | Anti-axl antagonistic antibodies |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180320 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180320 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190129 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190415 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190917 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191203 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20200107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200430 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20200901 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20201006 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20201029 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6787796 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |