JP2017524656A - 最適な骨形成のための血清リンの効果的かつ効率的な制御 - Google Patents

最適な骨形成のための血清リンの効果的かつ効率的な制御 Download PDF

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Abstract

本発明は、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）などの低リン酸血症性疾患を治療するための組成物及び方法を提供する。本方法は、抗ＦＧＦ２３リガンドを含有する医薬組成物を被験者に投与することを伴い、該医薬品の投与計画は、ＦＧＦ２３活性の効果的かつ効率的な制御に到達するように設計される。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１４年６月９日出願の米国特許仮出願番号第６２／００９，４７４号に基づく優先権を主張するものであり、この開示の全体が、全ての目的について参照として本明細書中に援用される。
本発明は、骨形成を調節する有効成分を含む組成物、及び該組成物を使用する方法に関する。
電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイル、すなわち、コンピューター読み取り可能な形式による配列表の副本（ファイル名：ＵＬＰＩ＿０２２＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日：２０１５年５月１５日、ファイルサイズ３１キロバイト）の内容は、その全体を参照により本明細書に援用する。
線維芽細胞増殖因子−２３（ＦＧＦ２３またはＦＧＦ−２３）は、腎臓からのリン酸塩の再吸収の作用を介してリン酸塩レベルを調節するホルモンである。ＦＧＦ２３は、ＦＧＦ１５との配列相同性を用いたデータベース検索から導出された配列に基づいて、ＰＣＲ法を用いて最初にマウスからクローニングした。ヒトＦＧＦ２３は、マウスＦＧＦ２３との配列相同性を用いることでクローニングした（Ｙａｍａｓｈｉｔａ， Ｔ．ら， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２７７： ４９４−４９８， ２０００）。
最近の研究により、リン酸塩代謝の理解に新たな光明を投じている。リン酸塩は、体内で重要な機能を有しており、いくつかの機序は、ビタミンＤ、副甲状腺ホルモン、及びフォスファトニン（例えば、ＦＧＦ２３）を含むリン酸塩バランスを調節するために進化してきた。低及び高リン酸塩血症につながるリン酸塩ホメオスタシスの疾患は、一般的であり、臨床的及び生化学的な結果を有する。
先の知見にもかかわらず、異常なＦＧＦ２３シグナル伝達に関する疾患などの異常なリン酸塩代謝に関する疾患を治療するためのより効果的な方法や、治療の有効性を評価するためのより効果的な方法の必要性が依然として残っている。本発明は、このニーズを満たし、そのような疾患を効果的に治療するための組成物及び方法を提供する。
本発明は、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画が、慢性投与中の投与サイクル内におけるＦＧＦ２３のリン酸塩レベルと調節レベルとの関係への理解に基づいて決定することができるという発見に、部分的には基づいている。そのため、本発明は、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画を決定するための方法を提供する。本発明はまた、ＦＧＦ２３に関連する状態または疾患を治療するための方法を提供する。抗ＦＧＦ２３リガンドは、種々の疾患を治療するために使用することができる。いくつかの他の実施形態では、疾患は、そのような治療を必要とする被験者中の異常なＦＧＦ２３シグナル伝達に関連する。いくつかの他の実施形態では、疾患は、そのような治療を必要とする被験者中の異常なＦＧＦ２３活性に関連する。いくつかの他の実施形態では、疾患は、そのような治療を必要とする被験者中の異常に高いＦＧＦ２３活性に関連する。いくつかの他の実施形態では、疾患は、常染色体優性低リン酸血症性くる病／骨軟化症（ＡＤＨＲ）、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）、常染色体劣性低リン酸血症性くる病（ＡＲＨＲ）、線維性骨異形成症（ＦＤ）、線維性骨異形成症（ＭＡＳ／ＦＤ）を合併したマックキューン−オールブライト症候群、Ｊａｎｓｅｎ骨幹端軟骨形成不全症（Ｊａｎｓｅｎ症候群）、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、腫瘍性骨軟化症（ＴＩＯ）、慢性代謝性アシドーシス、及び異所性石灰化からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、疾患は、ＸＬＨである。いくつかの実施形態では、本方法は、そのような治療を必要とする被験者に抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、有効量の抗ＦＧＦ２３リガンドを被験者に投与する。
本発明の一態様によれば、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、被験者中の抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定することができる。
抗ＦＧＦ２３リガンドのＰＤパラメーターとしては、血清リン（例えば、ＡＵＣ血清リン（投与間隔内のＡＵＣ血清リンなど）、またはピーク値とトラフ値の血清リン）、Ｔｍｐ／ＧＦＲ、血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ、及び血清２５−ヒドロキシビタミンＤが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドは、抗ＦＧＦ２３抗体、ＦＧＦ２３アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＦＧＦ２３の小分子阻害剤、ＦＧＦ２３アンタゴニスト、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドは、抗ＦＧＦ２３抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６から選択される１つまたは複数のＣＤＲ配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、投与サイクルにわたってリン酸塩の十分な増加または所定の産生をもたらす。いくつかの実施形態では、投与計画は、リン酸塩の所定の範囲内でリン酸塩の安定的な増加をもたらす。いくつかの実施形態では、投与計画は、リン酸塩のベースラインレベルを上回る約０．５〜約１．５ｍｇ／ｄＬの血清リンの安定的な増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、慢性の抗ＦＧＦ２３リガンド療法中に結合ＦＧＦ２３レベルを増加させるのに十分な結合剤をもたらす。
いくつかの実施形態では、投与計画は、すなわち、投与サイクル中にＮａＰｉ輸送体活性を低下させることなくＮａＰｉ輸送体への持続的な効果をもたらす投与頻度を含む。
いくつかの実施形態では、投与計画は、２週間ごとに（すなわち、Ｑ２Ｗ）抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することなど、月１回の投与計画よりも頻繁に抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含む。
いくつかの実施形態では、投与計画は、骨再形成の増加をもたらす。
さらにいくつかの他の実施形態では、本発明は、そのような治療を必要とする被験者に有効量の抗ＦＧＦ２３リガンドを約２週間ごとに投与することによって、疾患を治療及び／または予防するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、投与は、疾患を治療するための統計的に有意な治療効果をもたらす。いくつかの実施形態では、被験者は、常染色体優性低リン酸血症性くる病／骨軟化症（ＡＤＨＲ）、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）、常染色体劣性低リン酸血症性くる病（ＡＲＨＲ）、線維性骨異形成症（ＦＤ）、線維性骨異形成症（ＭＡＳ／ＦＤ）を合併したマックキューン−オールブライト症候群、Ｊａｎｓｅｎ骨幹端軟骨形成不全症（Ｊａｎｓｅｎ症候群）、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、腫瘍性骨軟化症（ＴＩＯ）、慢性代謝性アシドーシス、及び異所性石灰化からなる群から選択される疾患を有する。いくつかの実施形態では、疾患は、異所性石灰化である。
本発明の別の態様によれば、ＦＧＦ２３に関連する状態または疾患を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される投与計画に従って、１つまたは複数の抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含む。
本発明のさらに別の態様によれば、骨再形成を増加させる方法も提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、そのような治療を必要とする被験者に有効量の抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドは、マーカーの増加を引き起こす。いくつかの実施形態では、マーカーは、血清１型プロコラーゲン／Ｎ末端（Ｐ１ＮＰ）、カルボキシ末端コラーゲン架橋（ＣＴＸ）、オステオカルシン、ＢＡＬＰ、及び血清ＣＴｘ並びに尿ＮＴＸ／クレアチニン比からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、被験者は、常染色体優性低リン酸血症性くる病／骨軟化症（ＡＤＨＲ）、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）、常染色体劣性低リン酸血症性くる病（ＡＲＨＲ）、線維性骨異形成症（ＦＤ）、線維性骨異形成症（ＭＡＳ／ＦＤ）を合併したマックキューン−オールブライト症候群、Ｊａｎｓｅｎ骨幹端軟骨形成不全症（Ｊａｎｓｅｎ症候群）、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、腫瘍性骨軟化症（ＴＩＯ）、慢性代謝性アシドーシス、及び異所性石灰化からなる群から選択される疾患を有する。いくつかの実施形態では、被験者は、ＸＬＨを有する。いくつかの他の実施形態では、本方法は、異常なＦＧＦ２３、例えば、高いＦＧＦ２３活性及び／またはレベルにより引き起こされた１つまたは複数の状態に関連する骨再形成を増加させる。
第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員についての治験日による平均（±ＳＤ）の血清リン値を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員についての治験日による平均（±ＳＤ）のＴｍＰ／ＧＦＲレベルを示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した患者における血清リンのＡＵＣｌａｓｔ（左パネル）及びＡＵＣｎ（右パネル）対ＴｍＰ／ＧＦＲのＡＵＣｌａｓｔ（左パネル）及びＡＵＣｎ（右パネル）の散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員についてノモグラムから算出したＴｍＰ／ＧＦＲ対ノモグラムから手作業で読み取ったＴｍＰ／ＧＦＲの散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員について４回の投与間隔の経時的な平均（±ＳＤ）の１，２５（ＯＨ）２Ｄレベル（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、経時的な平均（±ＳＤ）の総ＦＧＦ２３及び未結合ＦＧＦ２３値を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の薬物動態分析について、経時的な（４回の投与間隔中の）平均（±ＳＤ）のＫＲＮ２３濃度を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ベースラインからの血清リン変化のＡＵＣ対血清ＫＲＮ２３ ＡＵＣの散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の薬物動態分析において、ベースラインからのＴＭＰ／ＧＦＲ変化のＡＵＣ対血清ＫＲＮ２３ ＡＵＣの散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の薬物動態分析において、ベースラインからの血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ変化のＡＵＣ対血清ＫＲＮ２３ ＡＵＣの散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の薬物動態分析において、集団ＰＫ−ＰＤモデル予測からのＫＲＮ２３で治療したＸＬＨを有する成人被験者におけるＫＲＮ２３濃度と血清リンのベースラインからの変化との関係を示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員の経時的な平均（±ＳＤ）の血清リン値を示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員の経時的な平均（±ＳＤ）のＴｍＰ／ＧＦＲレベルを示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員の経時的な平均（±ＳＤ）の１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルを示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、経時的な平均（±ＳＤ）の総インタクトＦＧＦ２３値を示す。 Ｘ染色体連鎖低リン血症病態生理学、及び抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３による治療の提案モデルを示す。 提案されたフェーズ２治験設計の概略図を示す。 抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３のＱ２Ｗ投与計画で治療した小児患者における血清リンレベルを示す。 抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３のＱ４Ｗ投与計画で治療した小児患者における血清リンレベルを示す。 Ｑ２Ｗ投与計画またはＱ４Ｗ投与計画で、抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３で治療した小児患者における血清リンレベルの並列比較を示す。 抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３のＱ２Ｗ投与計画で治療した小児患者におけるＴｍＰ／ＧＲＦレベルを示す。 抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３のＱ４Ｗ投与計画で治療した小児患者におけるＴｍＰ／ＧＲＦレベルを示す。 Ｑ２Ｗ投与計画またはＱ４Ｗ投与計画で、抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３で治療した小児患者におけるＴｍＰ／ＧＲＦレベルの並列比較を示す。 Ｑ２Ｗ投与計画またはＱ４Ｗ投与計画で、抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３で治療した小児患者における血清アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）レベルの並列比較を示す。
定義
本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合の動詞「を含む」及びその活用形は、この単語に続くものが含まれるが、具体的に言及されていないものが除外されないことを意味するよう、その非限定的な意義で使用される。
「ａ」または「ａｎ」という用語は、その実体の１つまたは複数を指す；例えば、「遺伝子（ａ ｇｅｎｅ）」は、１つまたは複数の遺伝子または少なくとも１つの遺伝子を指す。従って、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つまたは複数の」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書において互換的に使用される。加えて、文脈が、唯一の要素が存在することを明らかに要求するのでない限り、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」による「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」の言及は、１つよりも多くの要素が存在する可能性を除外しない。
本発明は、単離された、キメラ、組換え、または合成ポリヌクレオチド配列を提供する。本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド配列」、「核酸配列」、「核酸断片」、及び「単離された核酸断片」という用語は、本明細書において互換的に使用され、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡを包含し、一本鎖または二本鎖並びにその化学修飾があろうとなかろうと包含する。これらの用語は、ヌクレオチド配列などを包含する。ポリヌクレオチドは、合成、非天然または改変ヌクレオチド塩基が含有されていてもよい、一本鎖または二本鎖のＲＮＡまたはＤＮＡのポリマーであってもよい。ＤＮＡポリマーの形態のポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、またはそれらの混合物の１つまたは複数のセグメントを含んでなってもよい。ヌクレオチド（通常、それらの５’−一リン酸の形態で見られる）は、次のような一文字名によって言及される。「Ａ」は、アデニル酸またはデオキシアデニル酸（それぞれＲＮＡまたはＤＮＡ）、「Ｃ」は、シチジル酸またはデオキシシチジル酸、「Ｇ」は、グアニル酸またはデオキシグアニル酸、「Ｕ」は、ウリジル酸、「Ｔ」は、デオキシチミジル酸、「Ｒ」は、プリン（ＡまたはＧ）、「Ｙ」は、ピリミジン（ＣまたはＴ）、「Ｋ」は、ＧまたはＴ、「Ｈ」は、ＡまたはＣまたはＴ、「Ｉ」は、イノシン、及び「Ｎ」は、任意のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、単離されたもの、キメラ、組換え、または合成ポリヌクレオチド配列は、本発明の遺伝子マーカーから導出される。
本発明はまた、タンパク質またはポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質またはポリペプチドは、単離されたもの、精製されたもの、キメラ、組換え、または合成である。本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸ポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状または分枝状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。また、この用語には、天然にまたは介入によって、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションによって修飾されたアミノ酸ポリマーも包含される。また、この定義には、例えば、１つまたは複数のアミノ酸の類似体（例えば、非天然アミノ酸などが含まれる）、並びに当該技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。ポリペプチドは、単鎖または会合した鎖として存在できる。本発明のポリペプチドは、種々の形態（例えば、天然、融合、グリコシル化、非グリコシル化、脂質化、非脂質化、リン酸化、非リン酸化、ミリストイル化、非ミリストイル化、単量体、多量体、微粒子、変性など）を取ることができる。いくつかの実施形態では、タンパク質またはポリペプチドの配列は、本発明の遺伝子マーカーから導出される。
本明細書で使用される単一文字のアミノ酸略語は、当該技術分野で標準的な意味を有し、本明細書で記載される全てのペプチド配列は、Ｎ末端が左方に、Ｃ末端が右方で慣習に従って書かれている。
本明細書で使用する場合、「ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分」という用語は、ＦＧＦ２３、またはＦＧＦ２３の活性を直接的または間接的に調節することができる他の成分、またはＦＧＦ２３によって直接的または間接的に調節することができる成分を指す。そのような成分としては、Ｓａｐｉｒ−Ｋｏｒｅｎ ａｎｄ Ｌｉｖｓｈｉｔｓに記載されるもの（Ｂｏｎｅ ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ， ＩＢＭＳ ＢｏｎｅＫＥｙ， ８：２８６−３００， （２０１１））、Ｑｕａｒｌｅｓ（ＦＧＦ２３， ＰＨＥＸ， ａｎｄ ＭＥＰＥ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ−Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ １ Ｊｕｌｙ ２００３， Ｖｏｌ． ２８５， ｎｏ． Ｅ１−Ｅ９）、及びＭａｒｔｉｎ ａｎｄ Ｑｕａｒｌｅｓ（Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ Ｆｇｆ２３ Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ａ Ｂｏｎｅ−Ｋｉｄｎｅｙ Ａｘｉｓ Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｎｄ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ＦＧＦｓ ａｎｄ Ｋｌｏｔｈｏｓ， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｍｅｄｉａ， ＬＬＣ， ｌａｎｄｅｒｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）が挙げられるが、これらに限定されない、これらの開示の各々の全体が、全ての目的について参照として本明細書中に援用される。
本明細書で使用する場合、「線維芽細胞増殖因子受容体」または「ＦＧＦＲ」という用語は、一般には、細胞外リガンド結合ドメイン、単一膜貫通ヘリックス、及びチロシンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインを含む、ＦＧＦによって及ぼされたシグナルを細胞内部へ伝達するのに必要なＦＧＦに特異的な受容体を指す。ＦＧＦＲ細胞外ドメインは、３種類の免疫グロブリン様（Ｉｇ様）ドメイン（Ｄ１、Ｄ２、及びＤ３）、ヘパリン結合ドメイン並びに酸性ボックスからなる。
「抗原」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体によって認識することが可能な分子を指す。抗原は、例えば、ペプチドまたはその修飾形態であってもよい。抗原は、１つまたは複数のエピトープを含み得る。
「エピトープ」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体によって特異的に認識される抗原の一部である。エピトープは、例えば、ペプチド（例えば、本発明のペプチド）の一部を含み得る、またはからなり得る。エピトープは、直鎖エピトープ、連続エピトープ、またはコンフォメーションエピトープであってもよい。
本明細書で使用する場合、「抗ＦＧＦ２３リガンド」という用語」は、ＦＧＦ２３の活性を直接的または間接的に阻害する分子を指す。阻害は、ＤＮＡレベル、転写レベル、転写後レベル、翻訳レベル、及び／または翻訳後レベルで起こり得る。そのような分子としては、抗ＦＧＦ２３抗体、ＦＧＦ２３アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＦＧＦ２３の小分子阻害剤、ＦＧＦ２３アンタゴニスト、並びにＦＧＦ２３シグナル伝達経路の１つまたは複数の成分と相互作用することで、ＦＧＦ２３を間接的に阻害する任意の分子が挙げられるが、これらに限定されない。
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、本明細書で使用する場合、ポリクローナル及びモノクローナル抗体を含み、ヒト抗原結合ドメインを含む任意の免疫学的結合剤または分子を広く指す。重鎖の定常ドメインのタイプに応じて、全抗体は、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのうちの１つに割り当てられ、本発明の抗体は、これらのクラスのうちのいずれか１つであってもよい。これらのいくつかは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などのようなサブクラスまたはアイソタイプにさらに分けられる。免疫グロブリンの種々のクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、及びμと称される。免疫グロブリンの種々のクラスのサブユニット構造及び３次元構成は周知である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ及び／またはＩｇＭが使用される。「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙまたはａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語を使用する場合、これは、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などのインタクト抗体、並びにＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片などのそのタンパク質分解断片を含むことを意図すると理解すべきである。キメラ抗体；ヒト及びヒト化抗体；組換え及び操作された抗体、並びにそれらの断片が本発明の範囲にさらに含まれる。さらに、抗体の可変領域をコードするＤＮＡを、他の抗体をコードするＤＮＡに挿入してキメラ抗体を産生することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。単鎖抗体も本発明の範囲内である。
「単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）」という用語によって、免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変領域が短鎖（通常、セリン、グリシン）リンカーによって一緒に連結された融合体を意図する。単鎖抗体は、抗原結合能を有し、免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖の可変領域に相同または相似なアミノ酸配列を含む単鎖複合ポリペプチドであり得る（連結ＶＨ−ＶＬまたは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））。ＶＨとＶＬがともに、天然モノクローナル抗体の配列をコピーしてもよく、該鎖の一方または両方が、米国特許第５，０９１，５１３号（その全内容は引用により本明細書に組み込まれる）に記載の型のＣＤＲ−ＦＲ構築物を含むものであってもよい。軽鎖及び重鎖の可変領域に相似な個々のポリペプチドは、ポリペプチドリンカーによって一緒に保持されている。そのような単鎖抗体の作製方法は、特に、ＶＨ鎖とＶＬ鎖のポリペプチド構造をコードするＤＮＡが既知である場合、例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，０９１，５１３号、及び同第５，０９６，８１５号（各々の全内容は引用により本明細書に組み込まれる）に記載の方法に従って達成され得る。
「軽鎖」という用語は、完全長の軽鎖及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長の軽鎖は、可変領域ドメイン、ＶＬ、及び定常領域ドメイン、ＣＬを含む。軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端に位置する。軽鎖は、κ鎖及びλ鎖を含む。
「重鎖」という用語は、完全長の重鎖及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長の重鎖は、可変領域ドメイン、ＶＨ、及び３つの定常領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。ＶＨドメインは、ポリペプチドのアミノ末端に、ＣＨドメインは、カルボキシル末端に位置し、ＣＨ３が、ポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭ及びＩｇＥを含む任意のアイソタイプのものであり得る。
３つの相補性決定領域が、重鎖可変領域に存在し、それらは、第１相補性決定領域（ＣＤＲ１）、第２相補性決定領域（ＣＤＲ２）、及び第３相補性決定領域（ＣＤＲ３）である。重鎖可変領域における３つの相補性決定領域は、重鎖相補性決定領域と総称する。同様に、３つの相補性決定領域が軽鎖可変領域に存在し、それらは、第１相補性決定領域（ＣＤＲ１）、第２相補性決定領域（ＣＤＲ２）、及び第３相補性決定領域（ＣＤＲ３）である。軽鎖可変領域における３つの相補性決定領域は、軽鎖相補性決定領域と総称する。これらのＣＤＲの配列は、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ＵＳ Ｄｅｐｔ． Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）などに記載の方法を用いることで決定することができる。
抗原結合タンパク質、例えば、抗体または免疫グロブリン鎖（重鎖または軽鎖）の「免疫学的に機能的な断片」（または単に「断片」）という用語は、本明細書で使用する場合、完全長の鎖中に存在する少なくともいくつかのアミノ酸を欠いているが抗原と特異的に結合することが可能な抗体の一部（その部分がどのように入手されたかまたは合成されたかにかかわらず）を含む、抗原結合タンパク質である。そのような断片は、特異的に標的抗原と結合し、所定のエピトープに対する特異的結合において、インタクト抗体を含む他の抗原結合タンパク質と競合するという点において、生物学的に活性である。一態様では、そのような断片は、完全長の軽鎖または重鎖に存在する少なくとも１つのＣＤＲを保持し、いくつかの実施形態では、単一の重鎖及び／または軽鎖またはその部分を含む。これらの生物学的に活性な断片は、組換えＤＮＡ技術により作製することができ、またはインタクト抗体を含む抗原結合タンパク質の酵素的または化学的開裂により作製することができる。免疫学的に機能的な免疫グロブリン断片には、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体、及び単鎖抗体が含まれ、限定されないが、ヒト、マウス、ラット、ラクダ類、またはウサギを含むいずれの哺乳類起源に由来してもよい。本明細書に開示される抗原結合タンパク質の機能性部分、例えば、１つまたは複数のＣＤＲを、第２のタンパク質または小分子と共有結合させることにより、二機能性の治療特性を有するかまたは延長された血清半減期を有する、体内の特定の標的を被験者とする治療薬を作製し得るということが、さらに考慮される。
「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」は、１つまたは２つの重鎖断片を含み、抗体のＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインを含んでもよい。２つの重鎖断片が存在する場合、２つの重鎖断片は、２つ以上のジスルフィド結合及びＣＨ３ドメインの疎水性の相互作用により連結されている。Ｆｃ領域は、天然由来（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡなどに由来するＦｃ領域）であってもよく、または天然由来の重鎖断片またはＦｃ配列を構成する断片に導入された、１つまたは複数の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０など）変異、欠失、または挿入を含む操作された配列であってもよい。
「Ｆａｂ’断片」は、２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成され、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成し得るように、１つの軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメイン、さらにＣＨ１及びＣＨ２ドメイン間の領域を含む１つの重鎖の一部とを含む。
「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合が形成されるように、２つの軽鎖と、ＣＨ１及びＣＨ２ドメイン間の定常領域の一部を含む２つの重鎖とを含む。従って、Ｆ（ａｂ’）２断片は、２つの重鎖間のジスルフィド結合により連結されている２つのＦａｂ’断片からなる。
「Ｆｖ領域」は、重鎖及び軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
当業者によって理解されるように、「抗体」という用語によって包含される免疫学的結合試薬は、全抗体、二量体、三量体、及び多量体抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、組換え及び操作された抗体、並びにそれらの断片を含む、全ての抗体及びそれらの抗原結合断片に及ぶ。従って、「抗体」という用語を用いて、抗原結合領域を有する任意の抗体様分子を指し、本用語は、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、ＴａｎｄＡｂ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、ｄｓＦｖ、ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｄ、直鎖状抗体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体断片、バイボディ、トリボディ（それぞれ、ｓｃＦｖ−Ｆａｂ融合、二重特異性または三重特異性）、ｓｃ−ダイアボディ、カッパ（ラムダ）ボディ（ｓｃＦｖ−ＣＬ融合）、二重特異性Ｔ細胞結びつけ（ＢｉＴＥ）（Ｔ細胞を誘引するためのｓｃＦｖ−ｓｃＦｖタンデム型）、双対可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ（二重特異性形式）、小免疫タンパク質（ＳＩＰ）（ミニボディの一種）、ＳＭＩＰ（「小モジュール免疫薬理学的」）ｓｃＦｖ−Ｆｃ二量体、ＤＡＲＴ（ｄｓ安定化ダイアボディ「二重親和性再標的化」）、１つまたは複数のＣＤＲを含む小抗体模倣物などの抗原結合ドメインを含む抗体断片を含む。様々な抗体に基づく構築物及び断片を調製及び使用するための技術は、当該技術分野で周知である（参照により明確に本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔら，１９９１を参照されたい）。ダイアボディは、具体的には、欧州特許第４０４，０９７号明細書及び国際公開第９３／１１１６１号明細書にさらに説明され、一方で、直鎖状抗体は、Ｚａｐａｔａら（１９９５）にさらに説明される。
抗体は、従来の技術を使用して断片化することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体をペプシンで処理することによって生成することができる。得られたＦ（ａｂ’）２断片を処理し、ジスルフィド架橋を還元し、Ｆａｂ’断片を産生することができる。パパイン消化は、Ｆａｂ断片の形成につながり得る。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ＴａｎｄＡｂ、ｄｓ−ｓｃＦｖ、二量体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体断片、並びに他の断片を、組換え技術によって合成するか、あるいは化学的に合成することもできる。抗体断片を産生するための技術が当該技術分野で周知であり、説明されている。例えば、Ｂｅｃｋｍａｎら，２００６、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ，２００５、Ｌｅ Ｇａｌｌら，２００４、Ｒｅｆｆ ＆ Ｈｅａｒｄ，２００１、Ｒｅｉｔｅｒら，１９９６、及びＹｏｕｎｇら，１９９５の各々は、効果的な抗体断片の産生をさらに説明し、それを可能にする。
抗体または抗体断片を、天然に産生するか、あるいは完全に、または部分的に合成的に産生することができる。従って、抗体は、任意の適切な供給源、例えば、組換え供給源由来であってもよく、及び／またはトランスジェニック動物、もしくはトランスジェニック植物で、またはＩｇＹ技術を使用することにより、卵子で産生することができる。従って、抗体分子は、インビトロまたはインビボで産生することができる。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片は、３つのＣＤＲドメインを含む抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）と、３つのＣＤＲドメインを含む抗体重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む。前記ＶＬ及びＶＨは、概して、抗原結合部位を形成する。
本明細書で使用する場合、「Ｆｖ」断片は、完全な抗原認識及び結合部位を含有する、最小の抗体断片である。この領域は、密接した非共有結合会合で、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体を有する。各々の可変ドメインの３つの超可変領域（ＣＤＲ）が相互作用し、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で抗原結合部位を画定するのは、この配置内である。集合的に、６つの超可変領域（ＣＤＲ）は、抗原結合特異性を抗体に付与する。しかしながら、抗体の軽鎖可変ドメインからの３つのＣＤＲと、重鎖可変ドメインからの３つのＣＤＲの存在は、抗原結合に必ずしも必要ではないことは、当該技術分野で十分に立証されている。従って、上述の古典的な抗体断片よりも小さい構築物が有効であることが知られている。例えば、ラクダ抗体（Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら，１９９３；Ａｒｂａｂｉ Ｇｈａｈｒｏｕｄｉら，１９９７）は、広範囲に及ぶ抗原結合レパートリーを有するが、軽鎖を欠いている。また、ＶＨドメインのみ（Ｗａｒｄら，１９８９、Ｄａｖｉｅｓ ａｎｄ Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，１９９５）またはＶＬドメインのみ（ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｕｃｋｅｎら，２００１）を含む単一ドメイン抗体での結果は、これらのドメインが、許容される高親和性で抗原に結合できることを示す。従って、３つのＣＤＲは、効果的に抗原に結合することができる。
単一のＣＤＲ、または２つのＣＤＲが効果的に抗原を結合することも知られている。第１の例として、ＧＦＰなどの異種タンパク質内に挿入されるＶＨ ＣＤＲ３領域が、異種タンパク質上に抗原結合能を付与することを示すことで例示されるように、単一のＣＤＲを、異種タンパク質内に挿入し、異種タンパク質上に抗原結合能を付与することができる（Ｋｉｓｓら，２００６；Ｎｉｃａｉｓｅら，２００４）。２つのＣＤＲが効果的に抗原に結合し、親抗体が保有するよりも優れた特性をさらに付与することができることが、さらになお知られている。例えば、親抗体由来の２つのＣＤＲ（ＶＨ ＣＤＲ１及びＶＬ ＣＤＲ３領域）は、親分子の抗原認識特性を保持するが、腫瘍に浸透する優れた能力を有することが示された（Ｑｉｕら，２００７）。天然の親抗体に類似する様式で、ＣＤＲを配向するために、これらのＣＤＲドメインを適切なリンカー配列（例えば、ＶＨ ＦＲ２由来）と結合することは、さらに良好な抗原認識を産生した。従って、適切なフレームワーク領域が親抗体に見出される立体配座を維持するための手段によって配向される、２つのＣＤＲドメイン（例えば、１つはＶＨドメイン由来、及び１つはＶＬドメイン由来、例えば、２つのＣＤＲドメインのうちの１つがＣＤＲ３ドメインである）を含む抗原結合抗体模倣物を構築することが可能であることは、当該技術分野において既知である。従って、本発明のいくつかの抗体は、６つのＣＤＲ領域（３つは軽鎖由来、及び３つは重鎖由来）を含み得るが、６つのＣＤＲ領域より少ない、または１つもしくは２つ程度のＣＤＲ領域を有する抗体も、本明細書によって包含される。加えて、重鎖または軽鎖のみからのＣＤＲを有する抗体も企図される。
特定の重鎖ＣＤＲ領域とともに使用するための軽鎖ＣＤＲ領域は、本明細書の他の箇所に記載されている。しかしながら、本発明の重鎖可変領域とともに使用するための３つのＣＤＲを含む他の軽鎖可変領域も企図される。本発明の重鎖可変領域とともに使用することができ、かつＦＧＦ２３に結合する抗体を生み出す適切な軽鎖可変領域を、当業者は容易に同定することができる。例えば、本発明の重鎖可変領域を、単一軽鎖可変領域、または軽鎖可変領域のレパートリーと組み合わせ、得られた抗体をＦＧＦ２３への結合に関して試験することができる。本発明の重鎖可変領域の異なる軽鎖可変領域との相当な数のそのような組み合わせが、ＦＧＦ２３に結合する能力を保持するであろうことが予測されるであろう。
同様の方法を用いて、本発明の軽鎖可変領域と組み合わせて使用するための代替的な重鎖可変領域を同定することができる。特定の実施形態において、抗体または抗体断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域の全てまたは一部を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域、またはその一部である。さらに、抗体または抗体断片は、カッパ軽鎖定常領域、もしくはラムダ軽鎖定量領域の全てまたは一部、あるいはそれらの一部を含むことができる。そのような定常領域の全てまたは一部は、天然に産生されるか、または完全に、もしくは部分的に合成であり得る。そのような定常領域における適切な配列は、当該技術分野において周知であり、立証されている。重鎖及び軽鎖由来の定常領域の全ての補体が、本発明の抗体に含まれる場合、そのような抗体は、典型的には、「全長」抗体、または「全」抗体と本明細書で称される。
「機能的断片」は、抗体の一部（部分断片）であり、抗体の抗原への１つまたは複数の作用を有する。言い換えれば、機能的断片とは、抗原への結合能、抗原への反応性、または抗原の認識能を保持した断片を指す。例としては、Ｆｖ、ジスルフィド安定化Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、及びこれらのポリマーなどが挙げられる。より具体的に述べれば、例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ｄｓＦｖ、及びＣＤＲを含むペプチドが挙げられる（Ｄ． Ｊ． Ｋｉｎｇ．， Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．， １９９８ Ｔ． Ｊ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ）。
本発明の抗体は、本発明のＦＧＦ２３に対する抗体または抗体の機能的断片に放射性同位元素、低分子の作用物質、高分子の作用物質、タンパク質などを化学的あるいは遺伝子工学的に結合させた誘導体などの抗体の誘導体を包含する。本発明の抗体の誘導体は、本発明のＦＧＦ２３に対する抗体もしくは抗体の機能的断片のＨ鎖（重鎖）あるいはＬ鎖（軽鎖）のアミノ末端側あるいはカルボキシ末端側、抗体もしくは抗体の機能的断片中の適当な置換基または側鎖、さらには抗体または抗体の機能的断片中の糖鎖などに放射性同位元素、低分子の作用物質、高分子の作用物質、タンパク質などを化学的手法（抗体工学入門、金光修著、地人書館、１９９４）などにより結合させることにより製造することができる。加えて、タンパク質を結合させた抗体の誘導体は、本発明のＦＧＦ２３に対する抗体及び抗体の機能的断片をコードするＤＮＡと、結合させたいタンパク質をコードするＤＮＡを連結させて発現用ベクターに挿入し、該発現ベクターを適当な宿主細胞へ導入し、発現させることにより製造される。
本発明では、「ヒト抗体」とは、ヒト由来の抗体遺伝子の発現産物である抗体として定義する。ヒト抗体は、後述のように、ヒト抗体遺伝子座を導入し、ヒト抗体を産生する能力を有するトランスジェニック動物に抗原を投与することにより得ることができる。これらのトランスジェニック動物としては、マウスが挙げられる。ヒト抗体を産生し得るマウスの作出方法は、例えば、国際公開第ＷＯ２００２／４３４７８号に記載されている。
ポリペプチドの「変異体」は、別のポリペプチド配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸残基が、アミノ酸配列に挿入、該アミノ酸配列から欠失、及び／または該アミノ酸配列に置換されたアミノ酸配列を含む。変異体には、融合タンパク質が含まれる。
ポリペプチドの「誘導体」とは、挿入、欠失、または置換変異体とは性質が異なる何らかの方法で化学的に修飾されている、例えば、別の化学的部分への結合を介して修飾されているポリペプチドである。
本明細書を通して、ポリペプチド、核酸、宿主細胞などの生物材料との関連において使用される「天然由来の」という用語は、天然で見られる材料を指す。
「同一性」という用語は、配列のアライメント及び比較によって判断される、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子間の配列の関係を指す。「同一性パーセント」とは、比較される分子中のアミノ酸間またはヌクレオチド間の同一の残基の割合（％）を指し、比較される分子の最小のサイズのものに基づいて算出される。これらの算出においては、アライメント中のギャップ（存在する場合）を、特定の数理モデルまたはコンピュータープログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって扱わなければならない。整列された核酸またはポリペプチドの同一性を算出するために使用し得る方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， （Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．編）， （１９８８） Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ， （Ｓｍｉｔｈ， Ｄ． Ｗ．編）， １９９３， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ； Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ， Ｐａｒｔ Ｉ， （Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ａ． Ｍ．， ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ｈ． Ｇ．編）， １９９４， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ： Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ； ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ， Ｇ．， （１９８７） Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ； Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ， （Ｇｒｉｂｓｋｏｖ， Ｍ． ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．編）， １９９１， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｍ． Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ； ａｎｄ Ｃａｒｉｌｌｏら， （１９８８） ＳＩＡＭ Ｉ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ． ４８：１０７３に記載されるものが挙げられる。
同一性パーセントの算出においては、比較される配列を、配列間において最適に一致が得られるように整列させる。同一性パーセントを決定するために使用されるコンピュータープログラムは、例えば、ＧＣＧプログラムパッケージであってもよく、それには、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら， （１９８４） Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １２：３８７； Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓ．）が含まれる。コンピューターアルゴリズムＧＡＰが、配列同一性パーセントを決定しようとする２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチドを整列させるために使用される。配列は、それらそれぞれのアミノ酸またはヌクレオチドの最大の一致（アルゴリズムによって判断される「一致スパン」）をもたらすように整列させる。ギャップ開始ペナルティ（平均値対角の３倍で算出され、「平均値対角」は、使用される比較マトリックスの対角の平均値である；「対角」は、特定の比較マトリックスによって、それぞれの完全なアミノ酸一致に割り当てられるスコアまたは数字である）及びギャップ伸長ペナルティ（通常、ギャップ開始ペナルティの１／１０倍である）、並びにＰＡＭ ２５０またはＢＬＯＳＵＭ ６２などの比較マトリックスが、アルゴリズムとともに使用される。特定の実施形態において、標準の比較マトリックス（ＰＡＭ ２５０比較マトリックスに関してはＤａｙｈｏｆｆら， （１９７８） Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：３４５−３５２；ＢＬＯＳＵＭ ６２比較マトリックスに関してはＨｅｎｉｋｏｆｆら，（１９９２） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８９：１０９１５−１０９１９を参照されたい）は、アルゴリズムによっても使用される。
ＧＡＰプログラムを使用してポリペプチドまたはヌクレオチド配列の同一性パーセントを決定するための推奨パラメーターは、以下の通りである：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら， １９７０年， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３〜４５３
比較マトリックス：上記のＨｅｎｉｋｏｆｆら， １９９２年からの、ＢＬＯＳＵＭ ６２；
ギャップペナルティ：１２（しかし末端ギャップについてはゼロペナルティ）
ギャップ長ペナルティ：４
類似性の閾値：０
２つのアミノ酸配列を整列させるためのあるアライメントスキームは、２つの配列の短い領域のみの一致をもたらすこともあり、この小さなアライメント領域は、２つの完全長の配列間に有意な関係がなくても、非常に高い配列同一性を有し得る。そのため、所望により、標的ポリペプチドの少なくとも５０個の隣接するアミノ酸にわたるアライメントをもたらすように、選択されたアライメントの方法（例えば、ＧＡＰプログラム）を調節することができる。
「治療すること」及び「治療」という用語は、本明細書で使用する場合、臨床結果を含む有益または所望の結果を得るためのアプローチを指し、治療する疾病または状態の１つまたは複数の測定可能なマーカーにおけるわずかな変化または改善も包含し得る。治療とは、通常、状態、疾病、疾患、損傷、または損害の少なくとも１つの症状を減らすのに効果的である。臨床改善のマーカーの例は、当業者には明らかであろう。例としては、以下のうちの１つまたは複数：疾病がもたらす１つまたは複数の症状の重症度及び／または頻度の低下、疾病の程度の低減、疾病の安定（例えば、疾病の悪化の防止または遅延）、疾病の進行の遅延または速度低下、疾病状態の緩和、疾病を治療するのに必要とされる１つまたは複数の他の薬物の用量の減少、及び／または生活の質の増加などが挙げられるが、これらに限定されない。
「予防法（Ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）」または「予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、または「予防的治療（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、１つまたは複数の症状及び／またはそれらの根本原因の発生または重症度を予防または減らすこと、例えば、疾病または状態を発症しやすい被験者における疾病または状態の予防を指す（例えば、危険性の高い、遺伝性素因、環境要因、素因疾病または疾患などの結果として）。
本明細書で同義に使用される「疾患」または「疾病」という用語は、身体またはその臓器及び／または組織のうちの１つの状態における、臓器機能及び／または組織機能の働きを妨害するか、または乱し（例えば、臓器機能不全を引き起こす）、及び／または疾病に苦しむ被験者に不快感、機能不全、苦痛などの症状、またはさらには死を引き起こす、任意の変化を指す。
「薬学的に許容される」とは、生物学的ではない物質、またはさもなければ望ましくない物質を意味し、すなわち、その物質は、任意の有意な望ましくない生物学的作用を引き起こすことなく、または有害な様式でそれが含有される組成物の他の成分のうちのいずれとも相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み込まれ得る。薬学的担体または賦形剤を指すために「薬学的に許容される」という用語が使用される場合、担体または賦形剤が、毒物学的試験及び製造試験の必要な基準を満たしていること、またはアメリカ食品医薬品局によって作成された非活性成分ガイド（Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ）に含まれることを示唆する。
「有効量」という用語は、所望の治療結果をもたらす１つまたは複数の化合物の量を指す。有効量は、１つまたは複数の用量内に含むことができ、すなわち、単回投与または複数回投与が、所望の治療エンドポイントを達成するのに必要とされ得る。
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用する場合、著しく悪いまたは有害な副作用を必要に応じて引き起こすことなく、状態を治療する、または損傷もしくは損害を減らすもしくは予防するのに必要な１つまたは複数の作用物質のレベルまたは量を指す。
「予防有効量」とは、疾病または状態を発症しやすい及び／または疾病または状態を発症し得る被験者に投与した場合に、将来の疾病または状態の重症度を予防または減らすのに十分な作用物質の量を指す。
本発明の方法によれば、「被験者」という用語及びその変形語は、本明細書で使用する場合、疾病または状態を有する、有すると疑われる、または発症する危険性のある任意の被験者を含む。適当な被験者（または患者）としては、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはモルモット）、牧畜、家畜、またはペット（例えば、ネコ、イヌ）が含まれる。非ヒト霊長類、及び好ましくはヒト患者が含まれる。「危険性のある」被験者は、検出可能な疾病を有する場合もあり、または有さない場合もあり、本明細書に記載の診断法または治療法の前に検出可能な疾病を呈しているかもしれず、または呈していないかもしれない。「危険性のある」とは、被験者が本明細書に記載される状態の発症と相関する測定可能なパラメーター（それらは、本明細書に記載される）である１つまたは複数のいわゆる危険因子を有することを示す。これらの危険因子のうちの１つまたは複数を有する被験者は、これらの危険因子（複数を含む）を有しない被験者よりも本明細書に記載される状態を発症する可能性が高い。そのような危険因子の一例は、臨床的に正常な試料と比較して本発明のバイオマーカーの増加または減少である。
特定の実施形態において、治療のパラメーターまたは他の指標を測定する場合、「増加した」または「減少した」量またはレベルは、「統計的に有意な」量を含み得る。ある結果が、偶然生じた可能性の低いものであれば、通常、それは統計的に有意であると言う。試験または結果の有意性のレベルは、伝統的には、事象が偶然生じた可能性が低いことを受け入れるのに必要なエビデンスの量に関する。場合によっては、統計的有意性は、帰無仮説が実際には真であるのに帰無仮説を棄却する判断を下す（第一種過誤または「偽陽性判定」として知られる判断）確率であると定義され得る。この判断は、ｐ値を用いて行われる場合が多く、ｐ値が有意なレベル未満であれば帰無仮説は棄却される。ｐ値が小さいほど結果の有意性は高い。また、統計的有意性を判定するためにベイズ因子が利用される場合もある（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ Ｓ．， Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ １３０：１００５−１３， １９９９を参照されたい）。いくつかの実施形態では、「増加した」または「減少した」量またはレベルは、所定の標準量、または以前または早期の時点と比べて決定された時点の量の約１．１×、１．２×、１．３×、１．４×、１．５×、２×、２．５×、３×、３．５×、４×、４．５×、５×、６×、７×、８×、９×、１０×、１５×、２０×、２５×、３０×、４０×、または５０×以上または以下である。
本発明の組成物によって治療されるヒト被験者は、完全応答または部分応答を示し得る。完全応答（ＣＲ）とは、本明細書で使用する場合、別段の指示がない限り、全ての測定可能及び測定不可能な症状の消失、及び治療中の患者において新たな症状が現れないことを指す。部分応答（ＰＲ）とは、本明細書で使用する場合、別段の指示がない限り、少なくとも１つの測定可能な及び測定不可能な症状が著しく減少する、または治療中の患者において新たな症状が現れないことを指す。
「リン酸塩」は、身体の軟組織に無機形態または有機形態で分散される。非骨リン酸塩は、全身含有量の２０％未満を含む。残りは、骨基質中に保存される。従って、骨格は、リン酸塩の主要な蓄積である。成人における血清リンの正常な範囲は、約２．５〜約４．５ｍｇ／ｄＬであり、子供は高く、年齢で変化し、例えば、５〜１２歳の子供における血清リンの正常な範囲は、約２．９〜約５．７ｍｇ／ｄＬである（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら，血清無機リンの正常な範囲、及び先天性の低リン酸血症の診断における判別としてのその利用。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ １９６０；２０：３６４−３７９；Ｂｕｒｒｉｔｔら，健康な子供における１９個の生物学的変数の小児の基準間隔。Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎ Ｐｒｏｃ １９９０；６５：３２９-３３６、その全体を参照により本明細書に組み込まれる）。血清リンが減少すると、ＰＴＨ及びビタミンＤの活性を介して骨から再吸収される。腎臓は、リン酸塩ホメオスタシスを調節する主要な臓器である。濾過されたリン酸は、腎臓内に再吸収され、ＮａＰｉ−２Ａ及びＮａＰｉ−２Ｃの助けを借りて腎近位尿細管細胞を横切って輸送される。
「副甲状腺ホルモン」（ＰＴＨ）は、血清カルシウム濃度及び血清リン濃度の調節因子である。低カルシウム血症は、ＰＴＨの産生を刺激し、ビタミンＤ、１，２５（ＯＨ）２ビタミンＤの活性型を合成する酵素である近位尿細管２５（ＯＨ）ビタミンＤ １−α−ヒドロキシラーゼの発現を増加させ得る。１，２５（ＯＨ）２ビタミンＤは、腎遠位曲尿細管におけるカルシウム再吸収を増加させる。また、骨から細胞外液へのカルシウムの放出は、増加した破骨細胞骨吸収を介してＰＴＨによって刺激される。１，２５（ＯＨ）２ビタミンＤは、腸管でのカルシウム及びリン酸吸収を増加させ、破骨細胞活性を増加させることによって、骨からのリン酸塩の可動化を増加させる。ＰＴＨ及びビタミンＤ両方の産生は、負のフィードバックループにおける線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）２３の影響を受ける。
「ＦＧＦ２３」は、リン酸塩ホメオスタシスの内分泌調節因子であり、ホスフェート消耗疾患である「常染色体優性低リン酸血症性くる病（ＡＤＨＲ）」を罹患している患者の変異遺伝子として最初に同定された（Ａｎｏｎｙｍｏｕｓ．， 「Ａｕｔｏｓｏｍａｌ Ｄｏｍｉｎａｎｔ Ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔａｅｍｉｃ Ｒｉｃｋｅｔｓ ｉｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＦＧＦ２３」， Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ２６（３）：３４５−３４８（２０００））。ＦＧＦ２３は、先端刷子縁膜におけるＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体ＮａＰｉ−２Ａ及びＮａＰｉ−２Ｃの産物量を減らすことによって、腎近位尿細管におけるリン酸塩の再吸収を阻害する（Ｂａｕｍら， 「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−２３ ｏｎ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｉｎ Ｐｒｏｘｉｍａｌ Ｔｕｂｕｌｅｓ」， Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ６８（３）：１１４８−１１５３（２００５）；Ｐｅｒｗａｄら， 「Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ ２３ Ｉｍｐａｉｒｓ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ａｎｄ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｉｎ Ｖｉｖｏ ａｎｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ２５−ｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ Ｄ−１ａｌｐｈａ−ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ」， Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｎａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２９３（５）：Ｆ１５７７−１５８３（２００７）；Ｌａｒｓｓｏｎら， 「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ２３ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｐｈａ１（Ｉ） ｃｏｌｌａｇｅｎ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｘｈｉｂｉｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ， ｏｓｔｅｏｍａｌａｃｉａ， ａｎｄ ｄｉｓｔｕｒｂｅｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ」， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４５（７）：３０８７−３０９４（２００４））。ＦＧＦ２３のリン酸塩尿活性は、不活性Ｎ末端断片（Ｙ２５〜Ｒ１７９）及びＣ末端断片（Ｓ１８０〜Ｉ２５１）を産生する、ＦＧＦ２３アミノ酸配列の１７７位及び１７８位にそれぞれ対応する１７６ＲＸＸＲ１７９（配列番号１１）モチーフ（ここで、「ＸＸ」は、「ＨＴ」として定義する）でのタンパク質切断によってダウンレギュレートされる（Ｇｏｅｔｚら， 「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｋｌｏｔｈｏ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｍｏｄｅ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ １９ Ｓｕｂｆａｍｉｌｙ Ｍｅｍｂｅｒｓ」， Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２７（９）：３４１７−３４２８（２００７））。ＦＧＦ受容体（ＦＧＦＲ）１は、ＦＧＦ２３のリン酸塩尿作用の主要なメディエーターである（Ｌｉｕら， 「ＦＧＦＲ３ ａｎｄ ＦＧＦＲ４ ｄｏ ｎｏｔ Ｍｅｄｉａｔｅ Ｒｅｎａｌ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＦＧＦ２３」， Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １９（１２）：２３４２−２３５０（２００８））；Ｇａｔｔｉｎｅｎｉら， 「ＦＧＦ２３ Ｄｅｃｒｅａｓｅｓ Ｒｅｎａｌ ＮａＰｉ−２ａ ａｎｄ ＮａＰｉ−２ｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉａ ｉｎ ｖｉｖｏ Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ ｖｉａ ＦＧＦ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ １」， Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２９７（２）：Ｆ２８２−Ｆ２９１（２００９））。加えて、クロソ、老化抑制剤として最初に説明したタンパク質（Ｋｕｒｏ−ｏら， 「Ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｋｌｏｔｈｏ Ｇｅｎｅ Ｌｅａｄｓ ｔｏ ａ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ｒｅｓｅｍｂｌｉｎｇ Ａｇｉｎｇ」， Ｎａｔｕｒｅ ３９０（６６５５）：４５−５１（１９９７））は、そのリン酸塩尿活性を及ぼすために、その標的組織中でＦＧＦ２３による共受容体として必要とされる（Ｋｕｒｏｓｕら， 「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−２３ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ Ｋｌｏｔｈｏ」， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１（１０）：６１２０−６１２３（２００６））；Ｕｒａｋａｗａら， 「Ｋｌｏｔｈｏ Ｃｏｎｖｅｒｔｓ Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ＦＧＦ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｏ ａ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ＦＧＦ２３」， Ｎａｔｕｒｅ ４４４（７１２０）：７７０−７７４（２００６）；及びＧｏｅｔｚ Ｒ，ら（Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｔａｉｌ ｏｆ ＦＧＦ２３ ａｌｌｅｖｉａｔｅｓ ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉａ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ＦＧＦ２３−ＦＧＦＲ−Ｋｌｏｔｈｏ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ． ２００９．）。クロソは、ＦＧＦ２３の同族ＦＧＦＲに構成的に結合し、ＦＧＦＲ−クロソ二元複合体は、ＦＧＦ２３への結合親和性の増強を示す（（Ｋｕｒｏｓｕら， 「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−２３ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ Ｋｌｏｔｈｏ」， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１（１０）：６１２０−６１２３（２００６）；Ｕｒａｋａｗａら， 「Ｋｌｏｔｈｏ Ｃｏｎｖｅｒｔｓ Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ＦＧＦ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｏ ａ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ＦＧＦ２３」， Ｎａｔｕｒｅ ４４４（７１２０）：７７０−７７４（２００６））。免疫共沈降研究において、タンパク質切断（Ｙ２５〜Ｒ１７９）の不活性Ｎ末端断片は、ＦＧＦＲ−クロソ二元複合体に結合しないが、ＦＧＦ２３（Ｙ２５〜Ｉ２５１）の成熟した完全長形態は、ＦＧＦＲ−クロソ二元複合体に結合することが実証された（Ｇｏｅｔｚら， 「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｋｌｏｔｈｏ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｍｏｄｅ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ １９ Ｓｕｂｆａｍｉｌｙ Ｍｅｍｂｅｒｓ」， Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２７（９）：３４１７−３４２８（２００７））。ＫＬ及びＦＧＦＲ１ｃが共発現されると、インビトロでの高レベルなＦＧＦ２３シグナル伝達が発生し、この活性は、ＦＧＦＲ−ＦＧＦ２３−ＫＬ会合を分断する抗ＦＧＦ２３抗体によって遮断することができる（Ｕｒａｋａｗａ Ｉ，ら Ｋｌｏｔｈｏ ｃｏｎｖｅｒｔｓ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ＦＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｏ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ＦＧＦ２３． Ｎａｔｕｒｅ ２００６；４４４：７７０−７７４；Ａｏｎｏ Ｙ，ら Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ａｎｔｉ−ＦＧＦ２３ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉｃ Ｒｉｃｋｅｔｓ／Ｏｓｔｅｏｍａｌａｃｉａ． Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ． ２００９）。
ＦＧＦ２３は、腎ビタミンＤ１−α−ヒドロキシラーゼの発現を減少させ、異化２５（ＯＨ）Ｄ−２４−ヒドロキシラーゼの発現を増加させることで、血中１，２５（ＯＨ）２Ｄ濃度を減少させることによって、近位尿細管におけるリン酸再吸収を減少させる機能を有する。ＦＧＦ２３のインビボ過剰発現は、ＡＤＨＲ、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）、及び腫瘍性骨軟化症（ＴＩＯ）を罹患している患者と同様に、低リン酸血症、くる病／骨軟化症をもたらす（Ｌａｒｓｓｏｎ Ｔ，ら Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ２３ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｐｈａ１（Ｉ） ｃｏｌｌａｇｅｎ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｘｈｉｂｉｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ， ｏｓｔｅｏｍａｌａｃｉａ， ａｎｄ ｄｉｓｔｕｒｂｅｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ２００４；１４５：３０８７−３０９４；Ｓｈｉｍａｄａ Ｔ，ら ＦＧＦ−２３ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉｃ ｒｉｃｋｅｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｔｙｐｅ ＩＩａ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２００４；３１４：４０９−４１４．）。一方、１，２５（ＯＨ）２Ｄは、ＦＧＦ２３プロモーターのインビトロ活性及びインビボ産生を刺激し（Ｋｏｌｅｋ ＯＩ，ら １ａｌｐｈａ， ２５−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ Ｄ３ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＦＧＦ２３ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｂｏｎｅ： ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｌｉｎｋ ｉｎ ａ ｒｅｎａｌ−ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ−ｓｋｅｌｅｔａｌ ａｘｉｓ ｔｈａｔ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ． Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００５；２８９：Ｇ１０３６−Ｇ１０４２；Ｌｉｕ Ｓ，ら Ｎｏｖｅｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ Ｆｇｆ２３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｙｐ ｂｏｎｅ． Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ２００９；２３：１５０５−１５０８；Ｓｈｉｍａｄａ Ｔ，ら ＦＧＦ−２３ ｉｓ ａ ｐｏｔｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ． Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ ２００４；１９：４２９−４３５）、これは、負のフィードバックプロセスが腎臓と骨の間にあることを示唆している。
「クロソ」タンパク質は、腎臓で主に発現される１３０−ｋＤａの１回膜貫通タンパク質である（Ｍａｔｓｕｍａｒａら， 「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｋｌｏｔｈｏ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｔｗｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｋｌｏｔｈｏ ｐｒｏｔｅｉｎ」， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２４２（３）：６２６−６３０（１９９８）、その全体を参照により本明細書に組み込まれる）。クロソの膜結合アイソフォームに加えて、代替的なスプライシング及びタンパク質切断は、血液循環で見られるクロソの２つの可溶性アイソフォームを生じさせる（Ｉｍｕｒａら， 「Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｋｌｏｔｈｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｓｅｒａ ａｎｄ ＣＳＦ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｃｌｅａｖａｇｅ ｉｎ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｋｌｏｔｈｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｃｅｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ」， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５６５（１−３）：１４３−１４７（２００４）；Ｋｕｒｏｓｕら， 「Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｇｉｎｇ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ｔｈｅ ｈｏｒｍｏｎｅ Ｋｌｏｔｈｏ」， Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０９（５７４２）：１８２９−１８３３（２００５）；Ｍａｔｓｕｍｕｒａら， 「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｋｌｏｔｈｏ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｔｗｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｋｌｏｔｈｏ ｐｒｏｔｅｉｎ」， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２４２（３）：６２６−６３０（１９９８）；Ｓｈｉｒａｋｉ−Ｉｉｄａら， 「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｋｌｏｔｈｏ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｔｗｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ」， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ４２４（１−２）：６−１０（１９９８）、それら全体を参照により本明細書に組み込まれる）。クロソ遺伝子は、老化抑制遺伝子として機能することが、観察により示唆される。
ＦＧＦＲ１、転写物変異体１は、メンバー間及び進化を通じて高度に保存される線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）ファミリーのメンバーである。完全長の代表的なタンパク質は、３つの免疫グロブリン様ドメイン、単一疎水性膜貫通セグメント、及び細胞質チロシンキナーゼドメインから構成される細胞外領域からなる。タンパク質の細胞外部分は、線維芽細胞成長因子と相互作用し、下流シグナルのカスケードを作動させて、最終的に、有糸分裂誘発及び分化に影響を及ぼす。この特定のファミリーメンバーは、酸性及び塩基性の両方の線維芽細胞成長因子に結合し、肢誘導に関与する。この遺伝子の突然変異は、プファイファー症候群、ジャクソン−ウェイス症候群、アントレー・ビクスラー症候群、骨空洞性異形成症、及び常染色体優性カルマン症候群に関連している。Ｉｔｏｈら， 「Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｈｏｒｔｅｒ Ｆｏｒｍ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｂａｓｉｃ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｄｅｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ｉｔｓ ｃＤＮＡ」， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １６９（２）： ６８０−６８５（１９９０）；Ｄｏｄｅら， 「Ｋａｌｌｍａｎｎ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ： Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ？」， Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ８２（１１）：７２５−３４（２００４）；Ｃｏｕｍｏｕｌら， 「Ｒｏｌｅｓ ｏｆ ＦＧＦ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ」， Ｂｉｒｔｈ Ｄｅｆｅｃｔｓ Ｒｅｓ Ｃ Ｅｍｂｒｙｏ Ｔｏｄａｙ ６９（４）：２８６−３０４（２００３）を参照されたい。それら全体を参照により本明細書に組み込まれる。あるいは、異なるタンパク質アイソフォームをコードするスプライス変異体について記載している；しかしながら、全ての変異体が完全に特徴付けられてはいない。
「ヒトＦＧＦ２３」は、配列番号１２の配列を有し、マウスＦＧＦ２３は、配列番号１３の配列を有する。ＦＧＦ２３は、スブチリシン様前駆体タンパク質変換酵素（ＳＰＣ）部位Ｒ１７６ＨＴＲ１７９／Ｓ１８０（配列番号１４）にて、細胞内タンパク質分解を介して不活性化される。いくつかのＦＧＦ２３変異体、例えば、Ｒ１７６Ｑ、Ｒ１７９Ｑ、及びＲ１７９Ｗは、この部位を破壊し、タンパク質の完全長活性型を安定化し、ＡＤＨＲ症状をもたらす。ヒトクロソは、配列番号１５の配列を有する。
哺乳類において、ＦＧＦは、４つのＦＧＦ受容体（ＦＧＦＲ１〜４、例えば、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、ＦＧＦＲ３ｃ、及びＦＧＦＲ４などの多重スプライス変異体で同様に発現される）のセットを介して、その活性を調整する。各ＦＧＦ受容体は、リガンド結合により活性化され、ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）、ＲＡＦ１、ＡＫＴ１、及びＳＴＡＴを含む下流シグナル伝達経路をもたらす細胞内チロシンキナーゼドメインを含有する（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら， （２００８） ＢｉｏＤｒｕｇｓ ２２：３７−４４）。ＦＧＦＲ１〜３の「ｃ」レポータースプライス変異体は、β−クロソに特異的な親和性を示し、ＦＧＦ２１に対する内在性受容体として働くことが、いくつかの報告書において提示されている（Ｋｕｒｏｓｕら， （２００７） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２８２：２６６８７−２６６９５、Ｏｇａｗａら， （２００７） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０４：７４３２−７４３７、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら， （２００８） Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２１５：１−７）。β−クロソ、及びＦＧＦＲ４の両方が豊富に発現している肝臓では、ＦＧＦ２１は、β−クロソとＦＧＦＲ４の複合体にＦＧＦ２１が強く結合するにもかかわらず、ＭＡＰＫのリン酸化を誘導しない。３Ｔ３−Ｌ１細胞、及び白色脂肪組織において、ＦＧＦＲ１は、最も豊富にある受容体であり、それゆえ、この組織におけるＦＧＦ２１のメインの機能性受容体は、β−クロソとＦＧＦＲ１ｃの複合体である可能性が最も高い。ＦＧＦＲ遺伝子の代替スプライシングは、多数のＦＧＦＲアイソフォームを産生する。
「高リン血症」は、血中のリン酸塩レベルが異常に上昇する電解質障害である。カルシウムレベルは、組織中のカルシウムとリン酸塩の沈殿により低下する（低カルシウム血症）ことが多い。平均のリンレベルは、約０．８１ｍｍｏｌ／Ｌ〜約１．４５ｍｍｏｌ／Ｌの間であるべきである。兆候及び症状としては、異所性石灰化、二次性副甲状腺機能亢進症、及び腎性骨異栄養症が挙げられるが、これらに限定されない。高リン血症は、腎臓のリン酸塩排出障害及び／または巨大な細胞外液リン酸塩負荷により引き起こされ得る。リン酸塩排出障害は、副甲状腺機能低下症（例えば、発達性、自己免疫、手術後または放射線療法後、またはカルシウムセンシング受容体の活性化突然変異）、副甲状腺抑制（例えば、副甲状腺非依存性高カルシウム血症、ビタミンＤまたはビタミンＡ中毒、サルコイドーシス、他の肉芽腫性疾患、固定化、骨融解性転移、ミルク・アルカリ症候群、または重篤な高マグネシウム血症または低マグネシウム血症）、偽性副甲状腺機能低下症、末端肥大症、腫瘍状石灰化症、またはヘパリン療法によるものであり得る。巨大な細胞外液リン酸塩負荷は、外因性リン酸塩の急速投与、広範な細胞障害または壊死（例えば、圧挫損傷、横紋筋融解症、異常高熱、劇症肝炎、細胞障害性療法、または重篤な溶血性貧血）、または細胞透過性リン酸塩シフトによるものであり得る。
これに対して、低リン酸血症は、正常な範囲の２．２〜４．９ｍｇ／ｄｌを下回る血清リン濃度を指す（Ｄｗｙｅｒら， 「Ｓｅｖｅｒｅ ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉａ ｉｎ ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ， 「Ｎｕｔｒ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ ７（６）：２７９−２８３（１９９２）；Ａｌｏｎら， 「Ｃａｌｃｉｍｉｍｔｅｔｉｃｓ ａｓ ａｎ ａｄｊｕｖａｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｆａｍｉｌｉａｌ ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉｃ ｒｉｃｋｅｔｓ」， Ｃｌｉｎ Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ ３（３）：６５８−６６４（２００８）、それら全体を参照により本明細書に組み込まれる）。
低リン酸血症は、腎リン酸消耗（常染色体優性低リン酸血症性くる病（ＡＤＨＲ）、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）、常染色体劣性低リン酸血症性くる病（ＡＲＨＲ）、線維性骨異形成症（ＦＤ）、線維性骨異形成症（ＭＡＳ／ＦＤ）を合併したマックキューン−オールブライト症候群、Ｊａｎｓｅｎ骨幹端軟骨形成不全症（Ｊａｎｓｅｎ症候群）、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、腫瘍性骨軟化症（ＴＩＯ）、及び慢性代謝性アシドーシスなど）、他の遺伝性または後天性腎リン酸消耗疾患、アルコール性及び糖尿病性ケトアシドーシス、急性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ＣＯＰＤの薬物療法、敗血症、臓器（特に、腎臓）移植からの回復、非経口鉄投与、サリチル酸塩中毒、重篤な外傷、スクラルファート及び／または制酸薬による慢性治療、機械的人工換気法、摂食障害（神経性無食欲症及び神経性過食症など）、またはリフィーディング症候群によるものであり得る。
「腎リン酸消耗」は、リン酸の腎尿細管再吸収が損傷している遺伝性または後天性の状態を指す。腎リン酸消耗は、マックキューン−オールブライト症候群（ＭＡＳ）及び骨の線維性骨異形成症（ＦＤ）を罹患している患者のおよそ５０％で発生する。ＦＧＦ２３の血清レベルは、正常な年齢一致対照と比較してＦＤ／ＭＡＳ患者で増加し、腎リン酸消耗を罹患していないものと比較してリン酸消耗を罹患しているＦＤ／ＭＡＳ患者で著しく高く、かつ、疾患活性を評価するのに一般に使用される骨代謝疾患の指標と相関していることが報告されている（Ｒｉｍｉｎｕｃｃｉら， ＦＧＦ−２３ ｉｎ ｆｉｂｒｏｕｓ ｄｙｓｐｌａｓｉａ ｏｆ ｂｏｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｒｅｎａｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｗａｓｔｉｎｇ， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． １１２：６８３−６９２（２００３））。
方法
本発明によれば、治療を受けている被験者における抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて、抗ＦＧＦ２３リガンドを使用する方法、特に、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画を決定する方法を提供する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の抗ＦＧＦ２３リガンドは、ＦＧＦ２３に関連する状態、例えば、ＦＧＦ２３が正常レベルよりも高い状態の治療に使用される。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドを用いて、常染色体優性低リン酸血症性くる病／骨軟化症（ＡＤＨＲ）、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）、常染色体劣性低リン酸血症性くる病（ＡＲＨＲ）、線維性骨異形成症（ＦＤ）、線維性骨異形成症（ＭＡＳ／ＦＤ）を合併したマックキューン−オールブライト症候群、Ｊａｎｓｅｎ骨幹端軟骨形成不全症（Ｊａｎｓｅｎ症候群）、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、腫瘍性骨軟化症（ＴＩＯ）、慢性代謝性アシドーシス、及び異所性石灰化を治療する。
いくつかの他の実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドを用いて、低リン酸血症または腎リン酸消耗に関連する疾患または状態を治療する。
本発明によれば、抗ＦＧＦ２３リガンドは、ＦＧＦ２３活性及び／またはＦＧＦ２３シグナル伝達経路における１つまたは複数の成分を調節する、例えば、ダウンレギュレートすることで、ＦＧＦ２３の活性をダウンレギュレートすることができる任意の有効成分または活性物質を含み得る。いくつかの実施形態では、活性物質は、小分子である。いくつかの実施形態では、活性物質は、抗体などのポリペプチドである。いくつかの実施形態では、活性物質は、ｓｉＲＮＡなどのポリヌクレオチドである。本明細書で使用する場合、「活性」という用語は、ゲノムＤＮＡレベル、転写レベル、転写後レベル、翻訳レベル、翻訳後レベルで所与の標的の活性を指し、遺伝子コピー数、ｍＲＮＡ転写速度、ｍＲＮＡ量、ｍＲＮＡ安定性、タンパク質翻訳速度、タンパク質安定性、タンパク質修飾、タンパク質活性、タンパク質複合体活性などを含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３の活性を調節する。いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分の遺伝子コピー数を調節する。いくつかの実施形態では、活性物質は、治療前の遺伝子コピー数と比較した場合に、遺伝子コピー数を０．５×、１．０×、１．５×、２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、９×、１０×、１００×、１０００×、１００００×またはそれ以上に増やすかまたは減らすことができる。
いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分のｍＲＮＡ量を調節する。いくつかの実施形態では、活性物質は、治療前のｍＲＮＡ量と比較した場合に、ｍＲＮＡ量を０．５×、１．０×、１．５×、２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、９×、１０×、１００×、１０００×、１００００×またはそれ以上に増やすかまたは減らすことができる。
いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分のタンパク質レベルを調節する。いくつかの実施形態では、活性物質は、治療前のタンパク質レベルと比較した場合に、タンパク質レベルを０．５×、１．０×、１．５×、２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、９×、１０×、１００×、１０００×、１００００×またはそれ以上に増やすかまたは減らすことができる。
いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質活性または安定性を調節する。いくつかの実施形態では、活性物質は、治療前の安定性と比較した場合に、活性または安定性を増やすかまたは減らすことができる。
いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分の酵素活性を調節する。いくつかの実施形態では、活性物質は、治療前の安定性と比較した場合に、酵素活性を増やすかまたは減らすことができる。
ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分の活性は、当業者に公知の任意の適当な方法によって決定することができる。いくつかの実施形態では、生体試料は、被験者から採取し、分析される。いくつかの実施形態では、生体試料は、次いで、ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分、例えば、遺伝子増幅数、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｃＲＮＡ、タンパク質などの活性について評価される。
いくつかの実施形態では、生体試料由来のｍＲＮＡは、活性のレベルを決定するために直接使用される。いくつかの実施形態では、レベルは、ハイブリダイゼーションによって判断される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、当該技術分野で公知の方法を用いてｃＤＮＡ（相補的ＤＮＡ）コピーに変換される。いくつかの特定の実施形態において、ｃＤＮＡは、蛍光標識または他の検出可能な標識で標識される。次いで、ｃＤＮＡを、複数の被験者プローブを含有する基質にハイブリダイズする。被験者プローブは、一般には、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で遺伝子署名の少なくとも１つのＤＮＡ配列にハイブリダイズする。特定の実施形態において、複数のプローブは、ハイブリダイゼーション条件下で遺伝子バイオマーカー由来の配列にハイブリダイズすることができる。いくつかの実施形態では、条件は、６５℃で６×ＳＳＣ（０．９Ｍ ＮａＣｌ、０．０９Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．４）を用いることを含む。プローブは、核酸を含んでもよい。「核酸」という用語は、合成、天然に存在し、及び非天然に存在し、参照核酸と同様の結合特性を有し、かつ参照ヌクレオチドと同様に代謝される公知のヌクレオチド類似体または改変された骨格残基もしくはリンケージを包含する。そのような類似体の例としては、限定されないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホナート、キラルメチルホスホナート、ペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。検出方法には、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロット分析、遺伝子発現分析、マイクロアレイ分析、遺伝子発現チップ分析、ハイブリダイゼーション技術（ＦＩＳＨを含む）、発現ビードチップアレイ、及びクロマトグラフィー、並びに当該技術分野で公知の任意の他の技術が含まれ得るが、これらに限定されない。ＤＮＡを検出する方法には、ＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、デジタルＰＣＲ、ハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨを含む）、マイクロアレイ分析、ＳＮＰ検出アッセイ、ＳＮＰ遺伝子型決定アッセイ、及びクロマトグラフィー、並びに当該技術分野で公知の任意の他の技術が含まれ得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現レベルは、活性のレベルを決定するために使用される。ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分のタンパク質発現レベルは、当業者に公知の任意の適当な方法によって決定することができる。タンパク質を検出、量子化、及び比較するための任意の適当な方法は、Ｔｓｃｈｅｓｃｈｅ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ＩＳＢＮ Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ， ２０１１， ＩＳＢＮ ３１１０２５２３６８、９７８３１１０２５２３６１）、Ｇｏｌｕｃｈら（Ｃｈｉｐ−ｂａｓｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｍａｒｋｅｒｓ， ＰｒｏＱｕｅｓｔ， ２００７， ＩＳＢＮ ０５４９４６３４５３、９７８０５４９４６３４５０）、Ｓｐｅｉｃｈｅｒ（Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｇｅｎｏｍｅ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， ２００４， ＩＳＢＮ ００８０５１５３０４、９７８００８０５１５３０４）、Ａｌｂａｌａら（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｒｒａｙｓ， Ｂｉｏｃｈｉｐｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， ２００３， ＩＳＢＮ ０２０３９１１１２１、９７８０２０３９１１１２９）、Ｗａｌｋｅｒ（Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ， ２００２， ＩＳＢＮ ０８９６０３９４０４、９７８０８９６０３９４０７）、Ｆｕｎｇ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｒｒａｙｓ： Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ， ２００４， ＩＳＢＮ １５９２５９７５９９、９７８１５９２５９７５９８）、及びＢｉｅｎｖｅｎｕｔ（Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ， ２００５， ＩＳＢＮ １４０２０３３１８４、９７８１４０２０３３１８６）に記載のものなどを使用することができる。これらの各々は、それら全体を全ての目的について参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、バイオマーカーのタンパク質発現レベルは、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ウェスタンブロット法、タンパク質免疫染色法、タンパク質免疫沈降法、免疫電気泳動、免疫ブロット法、ＢＣＡアッセイ、分光測光法、質量分析法または酵素アッセイ、またはそれらの組み合わせによって検出され、測定される。バイオマーカーレベルの検出、定量化、及び比較に関するさらなる方法については、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ編、Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ．（２０１０）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌａｓｔ編、Ｃｏｌｉｇａｎ， Ｊｏｈｎ Ｅ．，ら（２０１０）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ編、Ｅｇｌｉ， Ｍａｒｔｉｎ（２０１０）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ編、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ， Ａｎｄｒｅａｓ Ｄ．（２０１０）；及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３編、Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｊｏｓｅｐｈ（２００１）を参照されたい。これらの全ては、それら全体を参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分に向けられる抗体は、活性物質として使用することができる。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２３を正に制御するＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分に向けられる抗体、またはＦＧＦ２３によって正に制御されるＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分に向けられる抗体は、活性物質として使用することができる。
いくつかの実施形態では、活性物質は、ヒト被験者におけるＦＧＦ２３活性を直接減らすことができる。いくつかの実施形態では、活性物質は、シグナル伝達経路における１つまたは複数の上流または下流成分の活性を調節することにより、ヒト被験者におけるＦＧＦ２３活性を間接的に減少させることができる。いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３を正に調節する１つまたは複数の上流成分の活性を減少させる、またはＦＧＦ２３を負に調節するシグナル伝達経路における１つまたは複数の上流成分の活性を増加させることができる。いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３によって正に調節される１つまたは複数の下流成分の活性を減少させる、またはＦＧＦ２３によって負に調節されるシグナル伝達経路における１つまたは複数の下流成分の活性を増加させることができる。
任意の特定の理論に束縛されることを望むわけではないが、本発明の作用物質は、１つまたは複数の機序を介して作用することができる。そのような機序としては、（１）ＦＧＦ２３活性の阻害；（２）ＦＧＦ２３−クロソ−ＦＧＦ受容体複合体活性の阻害；（３）近位尿細管におけるリン酸再吸収の増加；（４）腎ビタミンＤ１−α−ヒドロキシラーゼの活性の増加；（５）異化２５（ＯＨ）Ｄ−２４−ヒドロキシラーゼの活性の減少；及び／または（６）１，２５（ＯＨ）２Ｄ濃度の増加が挙げられるが、これらに限定されない。
活性物質は、化学化合物または組成物、生体分子、またはそれらの組み合わせであってもよい。いくつかの実施形態では、活性物質は、小分子である。本明細書で使用する場合、「小分子」という用語は、５００ＭＷ未満の分子量を有する分子を指し、薬物は、非ペプチジルまたはペプチド物質である。いくつかの実施形態では、活性物質は、抗体である。いくつかの実施形態では、活性物質は、抗体である。いくつかの実施形態では、活性物質は、ｓｉＲＮＡなどのポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、活性物質は、ＦＧＦ２３を正に調節する、またはＦＧＦ２３によって正に調節されるＦＧＦ２３シグナル伝達経路における成分の活性を減少する、阻害する、または遅延することができる１つまたは複数の抗体を含有する。いくつかの実施形態では、成分は、ＦＧＦ２３−クロソ−ＦＧＦ受容体複合体のメンバーであってもよい。いくつかの実施形態では、成分は、ＦＧＦ２３である。いくつかの実施形態では、作用物質は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書で記載される抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドは、配列番号１〜６のものなどの１つまたは複数の抗ＦＧＦ２３ ＣＤＲを含む活性物質である。
いくつかの実施形態では、活性物質は、配列番号１のアミノ酸配列で示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２のアミノ酸配列で示されるＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列で示されるＣＤＲ３のいずれか１つを有する重鎖可変領域、または３つの重鎖ＣＤＲの少なくとも２つまたは全てを有する重鎖可変領域を含む、ヒトＦＧＦ２３に対する抗体またはその機能的断片である。
いくつかの実施形態では、ヒトＦＧＦ２３に対する抗体またはその機能的断片は、配列番号４のアミノ酸配列で示されるＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列で示されるＣＤＲ２、配列番号６のアミノ酸配列で示されるＣＤＲ３のいずれか１つを有する軽鎖可変領域、または３つの軽鎖ＣＤＲの少なくとも２つまたは全てを有する軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２３抗体は、配列番号１、２、３、４、５、及び／または６のアミノ酸配列を有するＣＤＲを含有する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２３抗体は、配列番号１６を含む重鎖可変領域と配列番号１７を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２３抗体は、配列番号７の重鎖と配列番号８の軽鎖とを有するＫＲＮ２３である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２３抗体は、配列番号９の重鎖と配列番号１０の軽鎖とを有するＣ１０である。
本発明の抗体のＣＤＲ配列は、特に限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、任意の１つまたは複数のＣＤＲ、より好ましくは、重鎖の３つのＣＤＲ、さらにより好ましくは、配列番号１〜６で表されるＣＤＲ配列の６つのＣＤＲを含む抗体である。ＣＤＲ以外のアミノ酸配列は、特に限定されない。いくつかの他の実施形態では、抗ＦＧＦ２３抗体は、いわゆるＣＤＲ移植抗体を含み、ＣＤＲ以外のアミノ酸配列は、他の抗体、特に、他の種の抗体由来である。これらのうちで、ヒト化抗体またはヒト抗体（ここで、ＣＤＲ以外のアミノ酸配列は、ヒト由来である）が好ましい。１つまたは複数のアミノ酸残基の付加、欠失、置換及び／または挿入を、必要に応じてＦＲに導入することができる。公然知られた方法を、ヒト化抗体またはヒト抗体を作製するための方法として適用することができる。
いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２３に対する抗体は、米国特許第７３１４６１８号、同第７２２３５６３号、同第７７４５４０６号、同第７９４７８１０号、同第７２２３５６３号、同第７７４５４０６号、または同第７９４７８１０号、または米国特許出願公開第２０１２００６４５４４号または同第２０１１０１８２９１３号に記載のもののいずれか１つであり、これらの各々は、それら全体を全ての目的について参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、活性物質は、ｓｉＲＮＡである。例えば、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ｄｓＲＮＡｉ、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）技術は、ＦＧＦ２３シグナル伝達経路における１つまたは複数の成分のＲＮＡ転写物を標的にするために本発明で使用することができる。アンチセンスＲＮＡ技術は、細胞内の特定のｍＲＮＡにおいて見い出される配列に対して相補的か、もしくはアンチセンスであるＲＮＡ分子（またはＲＮＡ誘導体）を細胞内に発現すること、または導入することを含む。ｍＲＮＡと会合することによって、アンチセンスＲＮＡは、コードされた遺伝子産物の翻訳を阻害することができる。
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、サイレンシングされる遺伝子と配列が相同な二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）により開始される、動物及び植物における配列特異的、転写後遺伝子サイレンシングまたは転写遺伝子サイレンシングのプロセスである。ＲＮＡｉ技術は、例えば、Ｅｌｉｂａｓｈｉｒ，ら， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ２６： １９９ （２００２）； ＭｃＭａｎｕｓ ＆ Ｓｈａｒｐ， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ． Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ３： ７３７ （２００２）；ＰＣＴ出願国際公開公報第０１／７５１６４号；Ｍａｒｔｉｎｅｚら， Ｃｅｌｌ １１０：５６３ （２００２）； Ｅｌｂａｓｈｉｒら， 前記； Ｌａｇｏｓ−Ｑｕｉｎｔａｎａら， Ｃｕｒｒ． Ｂｉｏｌ． １２：７３５ （２００２）； Ｔｕｓｃｈｌら， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｈｅｃｈｎｏｌ． ２０：４４６ （２００２）； Ｔｕｓｃｈｌ， Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ． ２： ２３９ （２００１）； Ｈａｒｂｏｒｔｈら， Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ． １１４： ４５５７ （２００１）；ら， ＥＭＢＯ Ｊ． ２０：６８７７ （２００１）； Ｌａｇｏｓ−Ｑｕｉｎｔａｎａら， Ｓｃｉｅｎｃｅ． ２９４： ８５３８ （２００１）； Ｈｕｔｖａｇｎｅｒら， ｌｏｃ ｃｉｔ， ８３４； Ｅｌｂａｓｈｉｒら， Ｎａｔｕｒｅ． ４１１：４９４ （２００１）において論議される。
「ｄｓＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ分子」または「二本鎖ＲＮＡエフェクター分子」という用語は、二本鎖高次構造である少なくとも約１９ヌクレオチドまたはそれより長いヌクレオチドの領域を含有する少なくとも部分的に二本鎖のリボ核酸分子を指す。二本鎖ＲＮＡエフェクター分子は、２本の別々のＲＮＡ鎖から形成された二重鎖の二本鎖ＲＮＡであり得る、または少なくとも部分的に二本鎖のヘアピン高次構造（すなわち、ヘアピンｄｓＲＮＡまたはステムループｄｓＲＮＡ）を採ることができる自己相補性領域を有する単一ＲＮＡ鎖であり得る。種々の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、リボヌクレオチドから完全になる、またはＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドなどのリボヌクレオチド及びデオキシヌクレオチドの混合物からなる。ｄｓＲＮＡは、分子のある１セグメントにおけるヌクレオチドが、分子の別の１セグメントにおけるヌクレオチドと塩基対形成するように、自己相補性領域を有する単一の分子であり得る。一態様では、自己相補性領域同士は、分子の別の部分に対する相補性を欠き、よって一本鎖を維持する、少なくとも約３〜４ヌクレオチドまたは約５、６、７、９〜１５ヌクレオチドもしくはそれより長い領域（すなわち、「ループ領域」）によって連結される。そのような分子は、短い一本鎖５’及び／または３’末端を場合によって有する、部分的に二本鎖のステムループ構造をとる。一態様では、ヘアピンｄｓＲＮＡの自己相補性領域または二重鎖ｄｓＲＮＡの二本鎖領域は、エフェクター配列及びエフェクター相補体（例えば、ヘアピンｄｓＲＮＡにおける一本鎖ループ領域によって連結された）を含む。エフェクター配列またはエフェクター鎖は、ＲＩＳＣに組み入れられるまたはこれと会合する二本鎖領域または二重鎖の鎖である。一態様では、二本鎖ＲＮＡエフェクター分子は、標的遺伝子のＲＮＡに対する逆向きの相補体、または逆鎖複製中間体、または標的遺伝子の抗ゲノムプラス鎖または非ｍＲＮＡプラス鎖配列である、少なくとも１９連続したヌクレオチドエフェクター配列、好ましくは、１９〜２９、１９〜２７もしくは１９〜２１ヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡエフェクター分子は、「ヘアピンｄｓＲＮＡ」、「ｄｓＲＮＡヘアピン」、「短ヘアピンＲＮＡ」、または「ｓｈＲＮＡ」、すなわち、少なくとも１５〜１００ヌクレオチド（ｎｔ）（例えば、１７〜５０ｎｔ、１９〜２９ｎｔ）の少なくとも１つのストレッチが、同じＲＮＡ分子（単一ＲＮＡ鎖）に位置する相補配列と塩基対形成し、前記配列及び相補配列が、少なくとも約４〜７ヌクレオチド（または約９〜約１５ｎｔ、約１５〜約１００ｎｔ、約１００〜約１０００ｎｔ）の不対領域により離間されている、およそ４００〜５００ヌクレオチド未満または１００〜２００ｎｔ未満のＲＮＡ分子であり、これは、塩基相補性の２領域により作製されるステム構造の上に一本鎖ループを形成する。ｓｈＲＮＡ分子は、阻害しようとする標的配列と相同かつ相補的な約１７〜約１００ｂｐ；約１７〜約５０ｂｐ；約４０〜約１００ｂｐ；約１８〜約４０ｂｐ；または約１９〜約２９ｂｐの二本鎖ステム領域と、塩基相補性の２つの領域により作製されたステム構造の上に一本鎖ループを形成する少なくとも約４〜７ヌクレオチドまたは約９〜約１５ヌクレオチド、約１５〜約１００ｎｔ、約１００〜約１０００ｎｔの不対ループ領域とを含む、少なくとも１つのステムループ構造を含む。しかしながら、ある配列とその直後にその逆向きの相補体を含むＲＮＡ分子は、無意味な「スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）」配列により離間していなくてもステムループ高次構造を採る傾向があるため、「ループ領域」または「ループ配列」を含むことが厳密には必要とされないことが認識されるであろう。
さらに他の実施形態では、本発明で使用される抗ＦＧＦ２３リガンドは、本発明で使用される１つまたは複数の活性物質と、人工膜小胞（リポソーム、脂質ミセルなどを含む）、微粒子またはマイクロカプセルなどのビヒクルとを含む医薬組成物で提供することができる。
経口使用を意図した組成物は、固体または流体のいずれの単位剤形で調製してもよい。流体の単位剤形は、当該技術分野で公知の医薬組成物の製造手順に従って調製することができ、そのような組成物は、薬学的に洗練された、口当たりの良い製剤を提供するため、甘味料、香味料、着色剤、及び保存料からなる群から選択される１つまたは複数の作用物質を含有してもよい。エリキシル剤は、糖及びサッカリンなどの適当な甘味料を含む含水アルコール（例えば、エタノール）ビヒクルを、芳香族香味料と共に使用して調製される。懸濁液は、水性ビヒクルを、アラビアゴム、トラガカントゴム、メチルセルロースなどの懸濁化剤の助けを借りて調製することができる。
錠剤などの固形製剤は、有効成分を、錠剤の製造に適当な、非毒性かつ薬学的に許容される賦形剤との混合物として含有する。これらの賦形剤には、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸などの造粒剤及び崩壊剤；例えば、デンプン、ゼラチン、またはアラビアゴムなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、または滑石のような潤滑剤；並びに、リン酸二カルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、硫酸カルシウム、デンプン、ラクトース、メチルセルロース、及び機能的に類似した材料など、他の従来の成分が含まれ得る。錠剤はコーティングしなくてもよいし、あるいは、公知の技術によってコーティングを施し、胃腸管における崩壊と吸収を遅延させ、これにより、より長期間にわたる持続的作用を与えてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延物質を使用してもよい。
経口使用のための製剤は、有効成分が不活性固体希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合されている硬ゼラチンカプセルとして、あるいは、有効成分が水または油性媒質（例えば、ラッカセイ油、流動パラフィン、またはオリーブ油）と混合されている軟ゼラチンカプセルとして提供してもよい。軟ゼラチンカプセルは、該化合物のスラリーを、許容可能な植物油、軽流動ワセリン、または他の不活性油で、機械によりカプセル封入することにより調製される。
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適当な賦形剤と混合した活性物質を含有する。そのような賦形剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、及びアラビアゴムのような懸濁化剤であり；分散剤または湿潤剤は、天然由来のホスファチド、例えば、レシチン、または脂肪酸とアルキレンオキシドとの縮合物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、または長鎖脂肪アルコールとエチレンオキシドとの縮合物、例えば、ヘプタ−デカエチレンオキシセタノール、または脂肪酸とヘキシトールとから誘導される部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール、または脂肪酸とヘキシトール無水物とから誘導される部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物、例えば、モノオレイン酸ポリエチレンソルビタンなどであってもよい。水性懸濁液はまた、１つまたは複数の保存料、例えば、エチルもしくはｎ−プロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１つまたは複数の着色剤、１つまたは複数の香味料、またはスクロースもしくはサッカリンなどの１つまたは複数の甘味料を含有してもよい。
油性懸濁液は、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油、もしくはヤシ油などの植物油、または流動パラフィンのような鉱物油に有効成分を懸濁することにより調製してもよい。油性懸濁液は、例えば、蜜ろう、固形パラフィン、またはセチルアルコールのような増粘剤を含有してもよい。上述のような甘味料、及び香味料を添加し、口当たりのよい経口製剤を提供してもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤を添加して保存してもよい。
水の添加による水性懸濁液の調製に適当な分散性粉末及び顆粒は、有効成分を、分散剤もしくは湿潤剤、懸濁化剤、及び１つまたは複数の保存料との混合物の形態で提供する。適当な分散剤もしくは湿潤剤及び懸濁化剤の例としては、上述のものが挙げられる。追加の賦形剤、例えば、甘味料、香味料、及び着色剤を含有させてもよい。
本発明の医薬組成物は、水中油型エマルションの形態としてもよい。油相は、例えば、オリーブ油もしくはラッカセイ油のような植物油、または、例えば、流動パラフィンのような鉱物油、あるいはこれらの混合物としてもよい。適当な乳化剤は、天然由来のゴム、例えば、アラビアゴムまたはトラガカントゴム；天然由来のホスファチド、例えば、ダイズ、レシチン；並びに、脂肪酸及びヘキシトールに由来するエステルもしくは部分エステル、無水物、例えば、モノオレイン酸ソルビタン、及びエチレンオキシドと前記部分エステルとの縮合生成物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであってもよい。エマルションは、甘味料及び香味料を含有してもよい。
医薬組成物は、滅菌注射用の水性または油性懸濁液の形態としてもよい。この懸濁液は、前述のような適当な分散剤もしくは湿潤剤と懸濁化剤とを使用して、公知の技術に従って調製してもよい。滅菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液としてもよく、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液としてもよい。使用してもよい許容可能なビヒクル及び溶媒として、水、リンゲル液、及び等張食塩水が挙げられる。加えて、滅菌された固定油が、溶媒または懸濁媒として従来使用されている。この目的のために、合成のモノまたはジグリセリドを含むあらゆる無刺激性固定油を使用してもよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も、注射剤の製剤に使用できる。局所麻酔薬、保存料、及び緩衝剤などの補助剤を、注射用溶液または懸濁液に含有させることもできる。
いくつかの実施形態では、適当な送達システムには、時間放出、遅延放出、持続放出、または制御放出送達システムを含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、持続放出マトリックスなどの制御放出システムで送達することができる。持続放出マトリックスの非限定例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、Ｌａｎｇｅｒら， １９８１， Ｊ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｍａｔｅｒ． Ｒｅｓ．， １５： １６７−２７７及びＬａｎｇｅｒ， １９８２， Ｃｈｅｍ． Ｔｅｃｈ．， １２：９８−１０５に記載のようなポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート））、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号,ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸及びガンマエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら， １９８３， Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ， ２２：５４７−５５６）、非分解性エチレン−酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒら，上記）、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注入可能な微小球）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が挙げられる。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内注入、埋め込み式浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、または他の投与方式を使用して投与することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ，前出；Ｓｅｆｔｏｎ， ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ． １４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら， Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３２１：５７４（１９８９）を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出システムは、治療標的、例えば、肝臓の近傍に配置することができ、このため、全身用量の一部だけが必要とされる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、「Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ」、前出、２巻、１１５〜１３８頁（１９８４）を参照されたい）。他の制御放出システムは、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））による総説において論じられている。いくつかの実施形態では、組成物は、皮下注射を介して投与することができる。
いくつかの実施形態では、組成物の放出は、破裂において生じる。放出が破裂において生じるシステムの例としては、例えば、組成物がポリマー性マトリックス中に封入されるリポソーム中に捕捉されるシステム、特定の刺激（例えば、温度、ｐＨ、光、または分解酵素）に対して感受性であるリポソーム、及び組成物がマイクロカプセルコア分解酵素と一緒に、イオン的にコートされたマイクロカプセルによって封入されるシステムが挙げられる。
いくつかの実施形態では、組成物の放出は、緩徐／持続的である。阻害剤の放出が緩徐でありかつ持続的であるシステムの例としては、例えば、組成物がマトリックス内にある形態で含まれる浸食システム、及び組成物が、例えば、ポリマーによって制御された速度で放出される浸出システムが挙げられる。そのような持続放出システムは、例えば、ペレット、またはカプセルの形態であり得る。
本発明に従って投与される組成物の他の実施形態は、非経口、経肺、経鼻、及び経口を含む種々の投与経路に対する、微粒子形態、保護コーティング、プロテアーゼ阻害剤、または透過促進剤を組み込む。
本発明の医薬組成物は、単独で、または他の医薬組成物と併用して使用することができる。本発明の医薬組成物は、薬物の直腸投与のための座薬の形態で、一緒または別々に投与してもよい。これらの組成物は、薬物と、常温では固体であるが、直腸温度では液体であり、それ故に直腸で融解して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤を混合して調製することができる。このような物質としては、カカオバター及びポリエチレングリコールが挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、異常なリン状況、ＦＧＦ２３シグナル伝達、または骨形成に関連する疾患を治療するのに適当な追加の医薬組成物と一緒に被験者に投与することができる。
他の医薬組成物及び医薬組成物の調製方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」（以前の「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」）；Ｇｅｎｎａｒｏ， Ａ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， Ｐａ．（２０００）に記載されている。
いくつかの実施形態では、本発明の組成物の投与は、経口、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内滴下、埋め込み、腔内または膀胱内滴下、耳内、動脈内、病巣内、経皮、または粘膜への塗布で行ってもよい。阻害剤は、薬学的に許容される担体とともに投与してもよい。
投与される用量は、一定の制約を受けるものではないが、通常は有効量であろう。それは、通常、その所望の薬理学的及び生理学的効果を達成するために、活性遊離薬物の代謝による放出を基にして用量処方物から生成される薬理学的に活性な遊離形態のモル基準での等量であろう。組成物は、単位剤形で製剤化してもよい。「単位剤形」という用語は、ヒト被験者及び他の哺乳類に対する単一用量として適切な身体的に個別の単位を指し、各単位は、適切な薬学的賦形剤と関連して、所望の治療効果をもたらすように算出された所定量の活性物質を含有する。
本発明によれば、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定することができる。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画には、一回用量当たりの量、投与頻度（例えば、毎日、毎週、または毎月）、投与サイクル当たりの総量、投与間隔、投与変動、投与サイクル当たりのパターンまたは改変、最大累積用量、またはウォームアップ用量、または任意のそれらの組み合わせが挙げられるが、限定されるものではない。いくつかの他の実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、投与頻度、例えば、毎月を含む。
さらにいくつかの他の実施形態では、投与計画は、そのような用量の頻度と組み合わせて、一回用量当たりの所定量または固定量を含む。例えば、抗ＦＧＦ２３抗体の投与計画は、被験者に投与されている抗体のそのような用量の頻度と組み合わせて、一回用量当たりの抗ＦＧＦ２３抗体の固定量を含む。いくつかの実施形態では、一回用量当たりの抗ＦＧＦ２３抗体の固定量には、限定するものではないが、約０．００１ｍｇ／体重ｋｇ、約０．００２ｍｇ／体重ｋｇ、約０．００３ｍｇ／体重ｋｇ、約０．００４ｍｇ／体重ｋｇ、約０．００５ｍｇ／体重ｋｇ、約０．００６ｍｇ／体重ｋｇ、約０．００７ｍｇ／体重ｋｇ、約０．００８ｍｇ／体重ｋｇ、約０．００９ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０１ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０２ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０３ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０４ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０５ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０６ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０７ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０８ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０９ｍｇ／体重ｋｇ、約０．１ｍｇ／体重ｋｇ、約０．２ｍｇ／体重ｋｇ、約０．３ｍｇ／体重ｋｇ、約０．４ｍｇ／体重ｋｇ、約０．５ｍｇ／体重ｋｇ、約０．６ｍｇ／体重ｋｇ、約０．７ｍｇ／体重ｋｇ、約０．８ｍｇ／体重ｋｇ、約０．９ｍｇ／体重ｋｇ、約１ｍｇ／体重ｋｇ、約２ｍｇ／体重ｋｇ、約３ｍｇ／体重ｋｇ、約４ｍｇ／体重ｋｇ、約５ｍｇ／体重ｋｇ、約６ｍｇ／体重ｋｇ、約７ｍｇ／体重ｋｇ、約８ｍｇ／体重ｋｇ、約９ｍｇ／体重ｋｇ、約１０ｍｇ／体重ｋｇ、約１５ｍｇ／体重ｋｇ、約２０ｍｇ／体重ｋｇ、約３０ｍｇ／体重ｋｇ、約３５ｍｇ／体重ｋｇ、約４０ｍｇ／体重ｋｇ、約４５ｍｇ／体重ｋｇ、約５０ｍｇ／体重ｋｇ、約６０ｍｇ／体重ｋｇ、約７０ｍｇ／体重ｋｇ、約８０ｍｇ／体重ｋｇ、約９０ｍｇ／体重ｋｇ、約１００ｍｇ／体重ｋｇ、約２００ｍｇ／体重ｋｇ、約３００ｍｇ／体重ｋｇ、約４００ｍｇ／体重ｋｇ、約５００ｍｇ／体重ｋｇまたはそれ以上を含む。
いくつかの他の実施形態では、一回用量当たりの抗ＦＧＦ２３抗体の固定量は、限定するものではないが、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、または１．０ｍｇ／ｋｇまたは２．０ｍｇ／ｋｇを含み、例えば、皮下投与される。
本発明によれば、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定することができる。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、抗ＦＧＦ２３リガンドで治療した被験者の集団において、抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される。いくつかの他の実施形態では、集団サイズは、少なくとも２０、３０、４０、５０、またはそれ以上の被験者を含む。いくつかの他の実施形態では、集団サイズは、１つまたは複数のＰＤパラメーターの分析の統計的有意性を提供する。いくつかの他の実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、抗ＦＧＦ２３リガンドで治療した単一被験者における抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される。例えば、１つまたは複数のＰＤパラメーターは、抗ＦＧＦ２３リガンドで治療した被験者中で一定時間測定した後、被験者の投与計画は、測定された被験者のＰＤパラメーターに基づいて修正することができる。言い換えれば、１つまたは複数のＰＤパラメーターを用いて、抗ＦＧＦ２３リガンドでの治療下で被験者の投与計画を「調整する（ｔａｉｌｏｒ）」ことができる。
いくつかの他の実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、１つまたは複数のＰＤパラメーターの所定レベルまたは活性に基づいて決定される。例えば、そのような所定レベルまたは活性は、患者集団を抗ＦＧＦ２３リガンドで治療し、１つまたは複数のＰＤパラメーターの所望または標準のレベルまたは活性を決定することを介して得ることができる。
一般に、薬力学（ＰＤ）は、身体または微生物もしくは体内または体上の寄生生物における薬物の生化学的及び生理学的効果、薬物作用の機序、及び薬物濃度と効果の関係の研究である。薬力学は、薬物が身体に及ぼすことの研究として要約されることが多い。本発明の活性物質の効果は、治療に関連する１つまたは複数のＰＤパラメーターの変化をモニタリングすることによって決定することができ、活性物質の効果的な投与計画を決定することができる。いくつかの実施形態では、投与計画は、１つまたは複数のＰＫパラメーターからの任意の入力せずに、または１つまたは複数のＰＫパラメーターを考慮せずに決定される。いくつかの他の実施形態では、投与計画は、１つまたは複数のＰＫパラメーターが、投与計画がすでに十分であるかまたは適切であるかを示す場合であっても修正される。
本発明の活性物質の投与計画を決定するために本発明で使用することができるＰＤパラメーターとしては、血清リン、ＴｍＰ／ＧＦＲ（リン酸塩の糸球体濾過量に対する腎細管最大再吸収率）、最大ＴｍＰ／ＧＦＲ、血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ、及び血清２５−ヒドロキシビタミンＤが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、血清リンは、ＡＵＣ血清リン、例えば、ＡＵＣｌａｓｔ、ＡＵＣｉｎｆ、または投与間隔内のＡＵＣｎまたはピーク値とトラフ値の血清リンを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の活性物質の投与計画は、慢性抗ＦＧＦ２３リガンド療法中にＦＧＦ２３レベルの任意の変化に対して十分な結合剤を提供するように、１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される。いくつかの他の実施形態では、本発明の活性物質の投与計画は、例えば、成人または子供の正常なＦＧＦ２３レベルまたは活性の少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％、９８％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、または１２０％以内にＦＧＦ２３レベルまたは活性をもたらすように、１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される。いくつかの他の実施形態では、本発明の活性物質の投与計画は、例えば、正常なＦＧＦ２３レベルまたは活性の２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、または３０％を超えて正常なＦＧＦ２３レベルまたは活性から逸脱しないＦＧＦ２３の安定レベルまたは活性を維持するように、１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される。
いくつかの実施形態では、投与計画は、１つまたは複数のＰＤパラメーターの正常化または安定化を達成するために、１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、１つまたは複数のＰＤパラメーターが、任意の毒性の問題を起こすことなく、出来る限り長く及び／または出来る限り安定的にベースラインレベルを出来る限り上回ることを保つように決定される。例えば、投与計画は、血清リンを、例えば、最小または許容可能な変動性でベースラインを上回って安定レベルで保つように決定される。さらにいくつかの他の実施形態では、投与計画は、１つまたは複数のＰＤパラメーターを所定レベルあたり、例えば、所定の標準レベルに保つように決定される。例えば、一実施形態では、投与計画は、血清リンを所定の標準レベルで、例えば、ベースラインを上回って約０．５〜１．５ｍｇ／ｄＬの安定的な増加を保つように決定される。別の実施形態では、投与計画は、血清リンを所定の標準レベルで、例えば、ベースラインを上回って約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３ｍｇ／ｄＬの安定的な増加を保つように決定される。
いくつかの実施形態では、投与計画は、例えば、投与サイクル中にＮａＰｉ輸送体活性を実質的に低下させることなくＮａＰｉ輸送体の持続的な効果をもたらすように決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、安定なＮａＰｉ輸送体レベルまたは活性、例えば、正常なＮａＰｉ輸送体レベルまたは活性の、例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、または３０％を超えて正常なＮａＰｉ輸送体レベルまたは活性から逸脱しないＮａＰｉ輸送体レベルまたは活性をもたらすように決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、骨再形成の増加をもたらすように決定される。
本明細書で使用する場合、ＰＤパラメーターのレベルが所定の標準レベルのレベルに向かう場合、正常化と呼ばれる。本明細書で使用する場合、ＰＤパラメーターのレベルが所定の標準レベルのレベルからの変動が減少する場合、安定化と呼ばれる。
本明細書で使用する場合、「所定の標準レベル」という用語は、被験者の特定の集団における特定の抗ＦＧＦ２３リガンド療法に対して効果的な投与計画をもたらす１つまたは複数のＰＤパラメーターの平均値、代表的な特性、または特徴を表す基準化されたデータまたはデータセットから得られたレベルを指す。そのような特性または特徴は、転写物量、転写物の安定性、転写速度、翻訳速度、翻訳後修飾、タンパク質産物量、タンパク質安定性、及び／またはタンパク質酵素活性、などが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、被験者の特定の集団は、約５、約１０、約２０、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約１０００、約５０００、約１０，０００、またはそれ以上の個別の被験者からなる。所定の活性プロファイルは、被験者の特定の集団が全て薬剤に曝される前、最中、後に収集された基準化されたデータセットまたはデータセットであることができる。いくつかの実施形態では、特定の集団は、抗ＦＧＦ２３リガンドの効果的な投与計画下における被験者からなる。
いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、血清リンである。いくつかの実施形態では、投与計画は、血清リンの曲線下面積（ＡＵＣ）に基づいて決定される。いくつかの実施形態では、ＡＵＣは、ＡＵＣｌａｓｔ、ＡＵＣｉｎｆ、またはＡＵＣｎである。いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、投与間隔内の血清リンのＡＵＣである。いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、ピーク値とトラフ値の血清リンである。いくつかの実施形態では、投与計画は、所定の血清リンレベルに近いまたは該レベルを上回る治療中に血清リンレベルを維持するように決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、患者におけるベースラインレベルと比較した場合に、投与サイクル中の患者におけるリンの適切で安定的な増加をもたらすように決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、患者におけるベースラインレベルを上回る比較的安定的な血清リンレベルを維持するように決定される。例えば、いくつかの実施形態では、約０．５〜約１．５ｍｇ／ｄＬの血清リンの安定的な増加は、十分である可能性が高い。
いくつかの実施形態では、患者が成人である場合、ベースライン血清リンレベルは、約２．５〜約４．５ｍｇ／ｄＬである。いくつかの実施形態では、患者が５〜１２歳の子供である場合、ベースライン血清リンレベルは、約２．９〜約５．７ｍｇ／ｄＬである。いくつかの実施形態では、患者が成人である場合、所定の血清リンレベルは、ベースライン、例えば、約２．５〜約４．５ｍｇ／ｄＬよりも約０．５ｍｇ〜１．５ｍｇ／ｄＬ高い。いくつかの実施形態では、患者が５〜１２歳の子供である場合、所定の血清リンレベルは、約２．９〜約５．７ｍｇ／ｄＬのベースラインよりも約０．５ｍｇ〜１．５ｍｇ／ｄＬ高い。いくつかの実施形態では、患者の年齢に応じて、所定の血清リンレベルは、約２．５ｍｇ／ｄＬ、約２．６ｍｇ／ｄＬ、約２．７ｍｇ／ｄＬ、約２．８ｍｇ／ｄＬ、約２．９ｍｇ／ｄＬ、約３．０ｍｇ／ｄＬ、約３．１ｍｇ／ｄＬ、約３．２ｍｇ／ｄＬ、約３．３ｍｇ／ｄＬ、約３．４ｍｇ／ｄＬ、約３．５ｍｇ／ｄＬ、約３．６ｍｇ／ｄＬ、約３．７ｍｇ／ｄＬ、約３．８ｍｇ／ｄＬ、約３．９ｍｇ／ｄＬ、約４．０ｍｇ／ｄＬ、約４．１ｍｇ／ｄＬ、約４．２ｍｇ／ｄＬ、約４．３ｍｇ／ｄＬ、約４．４ｍｇ／ｄＬ、約４．５ｍｇ／ｄＬ、約４．６ｍｇ／ｄＬ、約４．７ｍｇ／ｄＬ、約４．８ｍｇ／ｄＬ、約４．９ｍｇ／ｄＬ、約５．０ｍｇ／ｄＬ、約５．１ｍｇ／ｄＬ、約５．２ｍｇ／ｄＬ、約５．３ｍｇ／ｄＬ、約５．４ｍｇ／ｄＬ、約５．５ｍｇ／ｄＬ、約５．６ｍｇ／ｄＬ、約５．７ｍｇ／ｄＬ、約５．８ｍｇ／ｄＬ、約５．９ｍｇ／ｄＬ、約６．０ｍｇ／ｄＬ、約６．１ｍｇ／ｄＬ、約６．２ｍｇ／ｄＬ、約６．３ｍｇ／ｄＬ、約６．４ｍｇ／ｄＬ、約６．５ｍｇ／ｄＬ、約６．６ｍｇ／ｄＬ、約６．７ｍｇ／ｄＬ、約６．８ｍｇ／ｄＬ、約６．９ｍｇ／ｄＬ、約７．０ｍｇ／ｄＬ、約７．１ｍｇ／ｄＬ、約７．２ｍｇ／ｄＬ、約７．３ｍｇ／ｄＬ、約７．４ｍｇ／ｄＬ、約７．５ｍｇ／ｄＬ、約７．６ｍｇ／ｄＬ、約７．７ｍｇ／ｄＬ、約７．８ｍｇ／ｄＬ、約７．９ｍｇ／ｄＬ、またはそれ以上である。いくつかの他の実施形態では、本発明の活性物質の投与計画は、例えば、成人または子供の正常な血清リンレベルまたは活性の少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％、９８％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、または１２０％以内に血清リンレベルまたは活性をもたらすように、１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される。いくつかの他の実施形態では、本発明の活性物質の投与計画は、例えば、正常な血清リンレベルまたは活性の２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、または３０％を超えて正常な血清リンレベルまたは活性から逸脱しない血清リンの安定レベルまたは活性を維持するように、１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される。
いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、Ｔｍｐ／ＧＦＲ（リン酸塩の糸球体濾過量に対する腎細管最大再吸収率、Ｂａｒｔｈら， Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２０００；３７： ７９−８１を参照されたい）である。いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、ピーク値とトラフ値のＴｍｐ／ＧＦＲである。いくつかの実施形態では、投与計画は、所定のＴｍｐ／ＧＦＲに近いまたは該Ｔｍｐ／ＧＦＲを上回る治療中にＴｍｐ／ＧＦＲを維持するように決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、患者におけるベースラインレベルと比較した場合に、投与サイクル中の患者におけるＴｍｐ／ＧＦＲの適切な増加をもたらすように決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、患者におけるベースラインレベルを上回る比較的安定的なＴｍｐ／ＧＦＲを維持するように決定される。いくつかの実施形態では、所定のＴｍｐ／ＧＦＲは、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、またはそれ以上である。
いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤである。いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、ピーク値とトラフ値の血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤである。いくつかの実施形態では、投与計画は、所定の血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤに近い、同様である、または上回る治療中に血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤを維持する目的で決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、患者におけるベースラインレベルと比較した場合に、投与サイクル中の患者における血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤの適切な増加をもたらすように決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、患者におけるベースラインレベルを上回る比較的安定的な血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤを維持するように決定される。いくつかの実施形態では、所定の血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤは、約４０ｐｇ／ＭＬ、約４５ｐｇ／ＭＬ、約５０ｐｇ／ＭＬ、約５５ｐｇ／ＭＬ、約６０ｐｇ／ＭＬ、約６５ｐｇ／ＭＬ、約７０ｐｇ／ＭＬ、約７５ｐｇ／ＭＬ、約８０ｐｇ／ＭＬ、約８５ｐｇ／ＭＬ、約９０ｐｇ／ＭＬ、約９５ｐｇ／ＭＬ、約１００ｐｇ／ＭＬ、約１０５ｐｇ／ＭＬ、約１１０ｐｇ／ＭＬ、約１１５ｐｇ／ＭＬ、約１２０ｐｇ／ＭＬ、約１２５ｐｇ／ＭＬ、約１３０ｐｇ／ＭＬ、約１３５ｐｇ／ＭＬ、約１４０ｐｇ／ＭＬ、約１４５ｐｇ／ＭＬ、約１５０ｐｇ／ＭＬ、約１５５ｐｇ／ＭＬ、約１６０ｐｇ／ＭＬ、約１６５ｐｇ／ＭＬ、約１７０ｐｇ／ＭＬ、約１７５ｐｇ／ＭＬ、約１８０ｐｇ／ＭＬ、約１８５ｐｇ／ＭＬ、約１９０ｐｇ／ＭＬ、約１９５ｐｇ／ＭＬ、約２００ｐｇ／ＭＬ、またはそれ以上である。
いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、血清２５−ヒドロキシビタミンＤである。いくつかの実施形態では、ＰＤパラメーターは、ピーク値とトラフ値の血清２５−ヒドロキシビタミンＤである。いくつかの実施形態では、投与計画は、所定の血清２５−ヒドロキシビタミンＤに近い、同様である、または上回る治療中に血清２５−ヒドロキシビタミンＤを維持する目的で決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、患者におけるベースラインレベルと比較した場合に、投与サイクル中の患者における血清２５−ヒドロキシビタミンＤの適切な増加をもたらすように決定される。いくつかの実施形態では、投与計画は、患者におけるベースラインレベルを上回る比較的安定的な血清２５−ヒドロキシビタミンＤを維持するように決定される。いくつかの実施形態では、所定の血清２５−ヒドロキシビタミンＤは、約２５ｎｍｏｌ／Ｌ、約２６ｎｍｏｌ／Ｌ、約２７ｎｍｏｌ／Ｌ、約２８ｎｍｏｌ／Ｌ、約２９ｎｍｏｌ／Ｌ、約３０ｎｍｏｌ／Ｌ、約３１ｎｍｏｌ／Ｌ、約３２ｎｍｏｌ／Ｌ、約３３ｎｍｏｌ／Ｌ、約３４ｎｍｏｌ／Ｌ、約３５ｎｍｏｌ／Ｌ、約３６ｎｍｏｌ／Ｌ、約３７ｎｍｏｌ／Ｌ、約３８ｎｍｏｌ／Ｌ、約３９ｎｍｏｌ／Ｌ、約４０ｎｍｏｌ／Ｌ、約４１ｎｍｏｌ／Ｌ、約４２ｎｍｏｌ／Ｌ、約４３ｎｍｏｌ／Ｌ、約４４ｎｍｏｌ／Ｌ、約４５ｎｍｏｌ／Ｌ、約４６ｎｍｏｌ／Ｌ、約４７ｎｍｏｌ／Ｌ、約４８ｎｍｏｌ／Ｌ、約４９ｎｍｏｌ／Ｌ、約５０ｎｍｏｌ／Ｌ、約５１ｎｍｏｌ／Ｌ、約４２ｎｍｏｌ／Ｌ、約５３ｎｍｏｌ／Ｌ、約５４ｎｍｏｌ／Ｌ、約５５ｎｍｏｌ／Ｌ、約５６ｎｍｏｌ／Ｌ、約５７ｎｍｏｌ／Ｌ、約５８ｎｍｏｌ／Ｌ、約５９ｎｍｏｌ／Ｌ、約６０ｎｍｏｌ／Ｌ、約６１ｎｍｏｌ／Ｌ、約６２ｎｍｏｌ／Ｌ、約６３ｎｍｏｌ／Ｌ、約６４ｎｍｏｌ／Ｌ、約６５ｎｍｏｌ／Ｌ、約６６ｎｍｏｌ／Ｌ、約６７ｎｍｏｌ／Ｌ、約６８ｎｍｏｌ／Ｌ、約６９ｎｍｏｌ／Ｌ、約７０ｎｍｏｌ／Ｌ、約７１ｎｍｏｌ／Ｌ、約７２ｎｍｏｌ／Ｌ、約７３ｎｍｏｌ／Ｌ、約７４ｎｍｏｌ／Ｌ、約４５ｎｍｏｌ／Ｌ、約７６ｎｍｏｌ／Ｌ、約７７ｎｍｏｌ／Ｌ、約７８ｎｍｏｌ／Ｌ、約７９ｎｍｏｌ／Ｌ、約８０ｎｍｏｌ／Ｌ、またはそれ以上である。
いくつかの実施形態では、投与計画は、１つまたは複数のＰＫパラメーターに基づいて決定された投与計画よりも頻繁に抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含む。いくつかの他の実施形態では、投与計画は、月１回の投与計画よりも頻繁に抗ＦＧＦ２３リガンド、例えば、抗ＦＧＦ２３抗体を投与することを含む。例えば、投与計画は、約３日ごと、約５日ごと、約毎週、約１０日ごと、約２週間ごと、約１７日ごと、約３週間ごと、約２５日ごとまたはそれ以上に抗ＦＧＦ２３リガンド、例えば、抗ＦＧＦ２３抗体を投与することを含む。
本発明の別の態様によれば、１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定された投与計画に従って、１つまたは複数の抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを介してＦＧＦ２３関連疾患を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２３関連疾患は、ＦＧＦ２３またはＦＧＦ２３シグナル伝達経路の１つまたは複数の成分に直接的または間接的に関する任意の状態または疾患を含む。例えば、一実施形態では、ＦＧＦ２３関連疾患は、ＸＬＨまたはＴＩＯである。いくつかの他の実施形態では、投与計画は、月２回、例えば、固定用量で抗ＦＧＦ２３抗体を使用することを含む。
本発明はまた、例えば、骨再形成の増加を介してＦＧＦ２３関連疾患を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、疾患は、骨疾患である。いくつかの実施形態では、本方法は、治療を必要とする患者において骨再形成を誘導することを含む。いくつかの実施形態では、骨再形成は、抗ＦＧＦ２３抗体などの抗ＦＧＦ２３リガンドによって誘導される。いくつかの実施形態では、投与は、疾患を治療するための統計的に有意な治療効果を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドは、マーカーのベースラインレベルと比較して、患者におけるマーカーの増加を引き起こす。いくつかの実施形態では、マーカーは、血清１型プロコラーゲン／Ｎ末端（Ｐ１ＮＰ）、カルボキシ末端コラーゲン架橋（ＣＴＸ）、オステオカルシン、ＢＡＬＰ、血清ＣＴｘ及び尿ＮＴＸ／クレアチニン比からなる群から選択される。
一般に、骨再形成は、間葉性骨芽細胞系と造血性破骨細胞系との相互作用に依存する一連の高度に調節されたステップを伴う。最初の「活性化」ステージは、大きな多核化破骨細胞の分化、移動、及び融合をもたらす破骨細胞と骨芽細胞前駆細胞との相互作用を伴う。骨再形成は、ＰＴＨ、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ、及びカルシトニンを含むホルモンと、成長ホルモン、グルココルチコイド、及びエストロゲンなどのいくつかの他の全身ホルモンとによって全身的に調節される。骨再形成の局所的調節因子としては、サイトカイン（ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＬＩ−６、ＩＬ−１１、ＯＤＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＦＮ、ＯＰＧ、及びＩＬ−１ｒａ）、プロスタグランジン、破骨細胞分化因子、コロニー刺激因子（例えば、Ｍ−ＣＳＦ及びＧＭ−ＣＳＦ）、ロイコトリエン、一酸化窒素、及び成長因子（例えば、ＩＧＦ、ＴＧＦβ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、及びＰＴＨｒＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明はまた、月１回の投与計画よりも頻繁な投与計画、例えば、２週間ごとの投与計画で、有効量の抗ＦＧＦ２３リガンドをそのような治療を必要とする被験者に投与することによって、ＦＧＦ２３関連疾患を治療及び／または予防するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドは、約１、１．５、２、２．５、３、または３．５週ごとに被験者に投与する。いくつかの実施形態では、被験者は、異常なＦＧＦ２３シグナル伝達に関連する疾患、例えば、常染色体優性低リン酸血症性くる病／骨軟化症（ＡＤＨＲ）、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）、常染色体劣性低リン酸血症性くる病（ＡＲＨＲ）、線維性骨異形成症（ＦＤ）、線維性骨異形成症（ＭＡＳ／ＦＤ）を合併したマックキューン−オールブライト症候群、Ｊａｎｓｅｎ骨幹端軟骨形成不全症（Ｊａｎｓｅｎ症候群）、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、腫瘍性骨軟化症（ＴＩＯ）、慢性代謝性アシドーシス、及び異所性石灰化からなる群から選択される疾患を有する。いくつかの実施形態では、疾患は、異所性石灰化である。
本発明はまた、血清リンレベルを制御する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、抗ＦＧＦ２３リガンドをそのような治療を必要とする被験者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、月１回の投与計画よりも頻繁な投与計画、例えば、２週間ごとの投与計画で、抗ＦＧＦ２３リガンドを被験者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＧＦ２３リガンドは、約１週ごと、約１．５週ごと、約２週ごと、約２．５週ごと、約３週ごと、または約３．５週ごとに被験者に投与する。いくつかの実施形態では、本方法は、被験者中の血清リンレベルを安定化または正常化する。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、血清リンレベルを所定レベル近くに保つように血清リンレベルの揺れを最小限にする。
以下の実施例は、本発明の種々の態様を例証する。実施例は、当然のことながら本発明の特定の実施形態のみの単なる説明に過ぎず、本発明の範囲に対する制限を設けるものではないことを理解すべきである。
実施例１−Ｘ染色体連鎖低リン血症を有する成人被験者におけるＫＲＮ２３の第１フェーズＩ／ＩＩ、非盲検、反復投与、用量漸増治験
概要：
治験責任医師及び研究センター：全部で３２人の被験者を、米国及びカナダで６つのサイトに登録した。
開発の臨床フェーズ：フェーズ１／２。
主要目的：本治験の主要目的は、Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）を有する成人被験者におけるＫＲＮ２３皮下（ＳＣ）投与の反復投与の安全性及び有効性を評価することであった。
副次的目的：本治験の副次的目的は、薬力学（ＰＤ）、薬物動態（ＰＫ）、免疫原性、及び生活の質（ＱｏＬ）におけるＫＲＮ２３ ＳＣ投与の反復投与の効果を評価することであった。
骨サブスタディの目的：骨ミネラル密度及び骨質におけるプラセボと比較して、ＫＲＮ２３ ＳＣ投与の反復投与の効果を評価すること。
治験設計及び方法論：これは、ＸＬＨを有する成人被験者におけるＫＲＮ２３のフェーズＩ／ＩＩ、非盲検、用量漸増、及び多施設治験であった。治験設計は、３つの期間：スクリーニング期、治療期、及び追跡調査期から構成した。スクリーニング期中、被験者全員は、スクリーニング来診をした（スクリーニング期の最長期間は、３０日であった）。スクリーニング来診（来診１）後、全ての適格な被験者を、ベースライン（０日目）で治療期に登録し、ＫＲＮ２３の初回用量０．０５ｍｇ／ｋｇ ＳＣを投与した。被験者は、０．０５ｍｇ／ｋｇ→０．１ｍｇ／ｋｇ→０．３ｍｇ／ｋｇ→０．６ｍｇ／ｋｇの段階的用量漸増を用いて、ＫＲＮ２３の最大で４回投与（２８日ごとに１回投与）で治療した。被験者内の用量漸増は、用量漸増アルゴリズムで導かれた血清リンレベルと、他の安全性観察（すなわち、有害事象［ＡＥ］モニタリング、安全性研究所パラメーター、免疫原性、及び理学的検査所見）とに基づいた。治療期の完了時に、被験者は、追跡調査期（最大１０日）中に病院で最終評価を受けた。
骨サブスタディは、種々の骨パラメーターにおける単盲検ＫＲＮ２３対プラセボの効果を評価するために、被験者の一部で計画した。被験者は、このサブスタディ、及びベースライン時及び治験終了時（１２０日目）の末梢骨定量的コンピューター断層撮影法（ｐＱＣＴ）及び二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＸＡ）スキャンを含む追加の臨床的評価に参加するための追加の適格性基準の評価を受けた。腸骨稜の生検は、延長治験（第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験）に入った、サブスタディにおける被験者に対して行った。出資者は、見越し額低迷のため骨サブスタディを中止した。
診断：ＸＬＨの臨床診断が裏付けられ、かつ、インタクト線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ２３）レベル＞３０ｐｇ／ｍＬ、リン酸塩の糸球体濾過量に対する腎細管最大再吸収率（ＴｍＰ／ＧＦＲ）＜２．０ｍｇ／ｄＬ、ｅＧＦＲ≧６０ｍＬ／分（コッククロフト・ゴールト式を用いて）、及び補正血清カルシウムレベル＜１０．８ｍｇ／ｄＬ（血清アルブミンが＜４．０ｇ／ｄＬである場合）の少なくとも１８歳の男性及び女性の被験者。
（計画及び分析した）被験者数：およそ４２人の被験者を計画し；３３人の被験者をスクリーニングして、登録し（治験の非盲検部分に３０人；骨サブスタディに３人）；骨サブスタディでスクリーニングした３人の被験者のうちの１人は、適格性基準を満たさず、治療の割付前に治験を中止した。
試験製品、用量及び投与方式、バッチ番号：
ＳＣ注射用のＫＲＮ２３：ＫＲＮ２３を０．０５、０．１、０．３、または０．６ｍｇ／ｋｇで腹部に皮下投与した。
非盲検部分：５ｍＬ単回使用バイアル（バッチ番号：ＹＵ００８Ｂ）で１０ｍｇ／ｍＬ。
骨サブスタディ：５ｍＬ単回使用バイアル（バッチ番号：ＹＵ００８Ｅ）で１０ｍｇ／ｍＬ。
比較薬剤、用量、及び投与方式、バッチ番号：
非盲検部分：無
骨サブスタディ：腹部へのＳＣ投与用のＫＲＮ２３プラセボ（バッチ番号：ＰＹＵ１２０４１３Ａ）。
治療期：治療期は、最長で１１０日であった。治験の全期間は、延長治験に入った被験者ではおよそ１５０日であり、延長治験に入っなかった被験者では１９５日を計画した。
エンドポイント：
有効性：主要な有効性エンドポイントは、投与後の血清リンレベルが、≦２．５ｍｇ／ｄＬ；＞２．５ｍｇ／ｄＬであるが≦３．５ｍｇ／ｄＬ、＞３．５ｍｇ／ｄＬであるが≦４．５ｍｇ／ｄＬ；及び＞４．５ｍｇ／ｄＬである被験者の数及びパーセントであった。
薬力学：副次的ＰＤエンドポイントは、以下におけるベースラインからの変化を含めた：
・血清リン；ベースラインからの血中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）；血清リンレベルが＞２．５ｍｇ／ｄＬである時間間隔。
・ＴｍＰ／ＧＦＲ及び血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ［１，２５（ＯＨ）２Ｄ］。
・血清２５−ヒドロキシビタミンＤ［２５（ＯＨ）Ｄ］、総カルシウム、イオン化カルシウム、カルシトニン、インタクト副甲状腺ホルモン（ｉＰＴＨ）；リン酸塩の尿細管再吸収の２時間尿中測定（ＴＲＰ）、カルシウム／クレアチニン比、カルシウム排泄分画（ＦＥＣａ）；及びリン、カルシウム、クレアチニンの２４時間尿中測定、及びカルシウム／クレアチニン比。
・性ホルモン：エストラジオール、テストステロン、遊離テストステロン、及び性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）。
・骨形成バイオマーカー（骨アルカリホスファターゼ［ＢＡＬＰ］、１型プロコラーゲンのＮ−プロペプチド［Ｐ１ＮＰ］、及びオステオカルシン）及び骨吸収バイオマーカー（１型コラーゲンのカルボキシ末端架橋テロペプチド［ＣＴｘ］）及びオステオカルシン及び１型コラーゲンのアミノ末端架橋テロペプチド（尿中ＮＴｘ）。
薬物動態：
・ＳＣ投与の複数回投与後のＫＲＮ２３のＰＫパラメーターの特徴付け。
・累積用量からＫＲＮ２３用量レベルの集団ＰＫの特徴付け。
生活の質：
・スタディ３６項目簡易健康調査バージョン２（ＳＦ−３６ｖ２）及びウェスタンオンタリオ及びマクマスター大学変形性関節症指数（ＷＯＭＡＣ）に基づいて、患者報告アウトカム（ＰＲＯ）におけるベースラインからの変化。
安全性：安全性には、治験薬への重症度及び関係、及び臨床検査室評価（血液学、化学、及び尿検査）におけるベースラインからの臨床的に有意な変化、バイタルサイン、身体及び脳神経検査、心臓コンピューター断層撮影（ＣＴ）／冠動脈カルシウムスコアリング及び大動脈カルシウムスコアリング、腎臓超音波検査、心電図（ＥＣＧ）；及び抗ＫＲＮ２３抗体評価による、有害事象を有する被験者の数及びパーセントを含めた。加えて、ｐＱＣＴにより測定された前腕及び脛骨における骨パラメーターの変化、及びＤＸＡスキャンにより測定された腰椎及び大腿近位部における骨ミネラル密度及び他の骨パラメーターの変化について骨サブスタディで評価した。
統計方法：観察回数、平均、標準偏差、中央値、最小値及び最大値を含む、継続的なデータのベースラインからの絶対値変化を記述的にまとめた。頻度カウント及びパーセントを用いてカテゴリー変数をまとめた。全てのデータ概要は、以下の治療群：非盲検治療（ＫＲＮ２３）、骨サブスタディ（ＫＲＮ２３及びプラセボ）における単盲検治療、及び総ＫＲＮ２３について提示した。測定した薬力学的パラメーターには、他の生化学的パラメーターと共に、血清リンレベル、ＴｍＰ／ＧＦＲ、及び血清１，２５（ＯＨ）２Ｄを含めた。これらの薬力学的パラメーターにおけるベースラインからの変化の曲線下面積は、１２０日間の治療、または離脱前ぎりぎりに測定した時点（ＡＵＣｌａｓｔ）、及び４回の投与間隔（ＡＵＣ１、ＡＵＣ２、ＡＵＣ３、及びＡＵＣ４）の各々について算出し、ＡＵＣｎは、投与間隔「ｎ」のベースライン（すなわち、初回投与前）からのＡＵＣであった。治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）を報告した被験者の数及びパーセントを、治療群別に評価した。
薬物動態及びＰＫ−ＰＤ法：血清ＫＲＮ２３濃度データ及びＰＫパラメーターについて記述統計学を使用した。血清ＫＲＮ２３試料は、非コンパートメント法を用いて分析した。ＰＫパラメーター（ゼロから最後に測定した濃度［ＡＵＣｌａｓｔ］の血清濃度時間曲線下面積、ゼロから無限大［ＡＵＣｉｎｆ］の血清濃度時間曲線下面積、見かけの分布容積［Ｖ／Ｆ］、見かけのクリアランス［ＣＬ／Ｆ］、及び４回目の投与間隔後の最終消失半減期［ｔ１／２］）は、１日目〜１２０日目の全ての累積用量の被験者血清濃度を用いて推定した。加えて、各投与間隔ｎ中に、ｎ回目の投与間隔［ＡＵＣｎ］の血清濃度時間曲線下面積、最大血清濃度［Ｃｍａｘ，ｎ］、投与前血清濃度（Ｃｍｉｎ，ｎ）、及び最高血漿中濃度到達時間［ｔｍａｘ，ｎ］を推定した。散布図を生成して、ＰＫ及びＰＤ測定値のＡＵＣｎ及びＡＵＣｌａｓｔを用いたＰＫ−ＰＤ相関を検証した。濃度（血清ＫＲＮ２３）と効果（ベースラインからの血清リン増加）の関係を経験的Ｅｍａｘモデルによって記述した。
全体治験設計及び計画：このフェーズＩ／ＩＩ、非盲検、用量漸増多施設治験を計画し、ＸＬＨを有するおよそ４２人の男性及び女性の成人被験者を登録した。４２人の被験者のうち、１８人は、骨サブスタディを行うように計画した。本治験の非盲検部分に参加している被験者は、１２０日の期間にわたって２８日ごとに皮下（ＳＣ）投与した最大で４回のＫＲＮ２３の投与（０．０５、０．１、０．３、及び０．６ｍｇ／ｋｇ）を受けた。全被験者は、ＫＲＮ２３の初回用量０．０５ｍｇ／ｋｇ ＳＣを受けた。ＫＲＮ２３の被験者内段階的用量漸増は、用量漸増アルゴリズム及び安全性評価（すなわち、ＡＥモニタリング、安全性研究所パラメーター、免疫原性、及び理学的検査所見）で導かれた血清リンレベルに基づいた。骨サブスタディに参加している被験者は、単盲検ＫＲＮ２３またはプラセボのいずれかに無作為化され、１２０日の期間にわたって２８日ごとに皮下投与した最大で４回のＫＲＮ２３の投与（０．０５、０．１、０．３、及び０．６ｍｇ／ｋｇ）を受けた。
治験薬投与：被験者は、０．０５ｍｇ／ｋｇ→０．１ｍｇ／ｋｇ→０．３ｍｇ／ｋｇ→０．６ｍｇ／ｋｇの段階的用量漸増を用いて、投与日：０日目、２８日目、５６日目、及び８４日目に腹部（臍孔を取り巻く１インチ半径は避ける）にＳＣ注射（複数を含む）を介してＫＲＮ２３を受けた。被験者は、予定された臨床、検査室、ＰＫ及びＰＤ評価のために各投与サイクル（４回の投与サイクル）の３日目、７日目、１２日目、１８日目、及び２６日目に帰宅した。全ての来診は、治験来診前に少なくとも８時間は絶食状態（すなわち、水以外の飲食を控えて）で行った。
ベースラインでの疾患の特徴：有効性分析における被験者について、有効性分析セットにおける被験者全員の血清リン、ＴｍＰ／ＧＦＲ、１，２５（ＯＨ）２Ｄ、及びインタクトＦＧＦ２３のレベルを含むベースライン疾病特徴を以下の表に示す。全体として、ベースラインでの平均の血清リン及びＴｍＰ／ＧＦＲレベルは、正常な参照範囲の下限値を下回っていた。ベースラインでは、全体の平均１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、被験者全員について正常な参照範囲内であった。ベースラインのＦＧＦ２３レベルは、５２．８〜４６２０ｐｇ／ｍＬの範囲であった。
薬物動態／薬力学試料採取：ＫＲＮ２３のＰＫを評価するための血液試料は、以下の表３に示す試料採取計画に従って、被験者全員から採取した。血清試料は、有効な生物学的分析法を用いてＫＲＮ２３濃度について分析した。
ＰＤパラメーターを評価するための試料は、投与日（０日目、２８日目、５６日目、及び８４日目）、各投与サイクルの３日目、７日目、１２日目、１８日目、及び２６日目、並びに１２０日目（追跡来診／早期離脱）に採取した。加えて、骨バイオマーカーを測定するための血液試料は、ベースライン時（０日目）、各投与サイクルの投与前時間（２８日目、５６日目、及び８４日目）及び追跡来診（１２０日目）時に採取した。
薬物濃度測定：血清試料は、有効なサンドイッチ酵素結合免疫吸着（ＥＬＩＳＡ）法を用いて、Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｉｒｉｎ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ， Ｉｎｃ．（ＫＫＣ）（以前は、Ｋｉｒｉｎ Ｐｈａｒｍａ ＵＳＡ， Ｉｎｃ．）でＫＲＮ２３について分析した。ＫＲＮ２３アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）は、５０ｎｇ／ｍＬであった。標準曲線は、ＫＲＮ２３について５０〜３０００ｎｇ／ｍＬの範囲を有した。ＰＤパラメーターのための全ての血液と尿試料は、市販のアッセイキット及び／または有効なアッセイ法を用いて、中央検査室で分析した。
結果の概要
暴露：全部で２８人の被験者をＫＲＮ２３で治療し（本治験の非盲検部分に２７人、骨サブスタディに１人）、１人の被験者を骨サブスタディにおいてプラセボで治療した。投与したＫＲＮ２３の平均の総用量は、投与間隔１、２、３、及び４中で、それぞれ、０．０５±０．００ｍｇ／ｋｇ、０．１０±０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．２８±０．０６ｍｇ／ｋｇ、及び０．４８±０．１６ｍｇ／ｋｇであった。骨サブスタディにおけるプラセボ群の１人の被験者は、プラセボの４回の投与を全て受けた。
治験母集団：ＫＲＮ２３で治療した２８人の被験者のうち、年齢の中央値は、４１．９歳（範囲：１９〜６６歳）であり；過半数（６７．９％；１９／２８）は、女性であり、及び大半（９６．４％；２７／２８）は、白人／コーカサス人であり、１人は、黒人／アフリカ系アメリカ人／アフリカ系カリブ人であった。ＫＲＮ２３で治療した被験者の身長の中央値は、１４９．７ｃｍ（範囲：１２１．９〜１７０．２ｃｍ）であり、体重の中央値は、７０．１ｋｇ（範囲：４６．４〜１２１．９ｋｇ）であった。ＫＲＮ２３で治療した被験者の肥満度指数の中央値は、３０．７ｋｇ／ｍ２（範囲：１９．７〜６７．６ｋｇ／ｍ２）であった。全体として、ベースラインでの平均の血清リン及びＴｍＰ／ＧＦＲレベルは、正常な参照範囲の下限値を下回っていた。ベースラインでは、全体の平均１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、ＫＲＮ２３で治療した被験者の正常な参照範囲内であった。ベースラインのＦＧＦ２３レベルは、ＫＲＮ２３で治療した被験者について５２．８〜４６２０．０ｐｇ／ｍＬの範囲であった。
有効性結果：血清リンレベルが＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬであった、ＫＲＮ２３で治療した被験者の一部は、１回目、２回目、３回目、及び４回目の投与間隔で、それぞれ、７日目（最大効果の時間）に、ベースライン時（１回目の投与間隔での０日目）の３．７％から１４．８％、３７．０％、７４．１％、及び７０．４％に増加した。血清リンレベルは、任意の時点で、任意の被験者で４．５ｍｇ／ｄＬを超えなかった。
薬力学的分析：実際の試料採取時間を使用して、ＰＫパラメーターを算出した。各投与サイクルのＰＫパラメーターは、全ての用量のサイクル及びＰＫパラメーターを、４回の投与サイクル中に受けた総用量に基づいて推定した観察ＰＫプロファイルに基づいて推定した。以下のＰＫパラメーターは、非コンパートメント分析法によって血清濃度−時間データからＫＲＮ２３について決定した：
パラメーター 定義
ＡＵＣｌａｓｔ 線形台形則を用いて決定した全投与サイクル（１２０日目または早期離脱）にわたる時間０から最後に測定可能な濃度の時間までの血中濃度時間曲線下面積
ＡＵＣｉｎｆ 線形台形則を用いて決定した全投与サイクルにわたる時間０から無限大までの血中濃度時間曲線下面積
ＡＵＣｎ ｎ回目の投与サイクル中の血中濃度時間曲線下面積
ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ 外挿に基づくＡＵＣｉｎｆのパーセント
Ｃｍａｘ，ｎ ｎ回目の投与サイクル中の最大観察血清濃度
Ｃｍｉｎ，ｎ ｎ回目の投与サイクル終了時の投与前に観察された血清濃度
ｔｍａｘ，ｎ ｎ回目の投与サイクル中の最大観察血清濃度の時間
ｔ１／２ ｌｎ２／λｚとして算出した４回目の投与サイクル後の最終消失半減期、ここで、λｚは、排出相に関連する速度定数である
ＣＬ／Ｆ １２０日間の治療／ＡＵＣｉｎｆ中の総用量として算出した見かけの血清クリアランス
Ｖｚ／／Ｆ ４回目の投与サイクル後にＣＬ／Ｆ／λｚとして算出した最終排出相に基づく見かけの分布容積
ＡＵＣ演算目的で、欠落している血清レベルは、隣接点間の補間のせいではなかった。アッセイの定量下限を下回る全ての血清濃度は、ゼロとして扱った。
ＡＵＣ１、ＡＵＣ２、ＡＵＣ３、及びＡＵＣ４は、それぞれ、投与サイクル１（０日目〜２８日目）、投与サイクル２（２８日目〜５６日目）、投与サイクル３（５６日目〜８４日目）、及び投与サイクル４（８４日目〜１２０日目）に推定した。
血清ＫＲＮ２３濃度のＰＫ分析は、Ｐｈｏｅｎｉｘ（商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）（バージョン６．３、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ−Ａ Ｃｅｒｔａｒａ（商標）Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）によって非コンパートメント分析法を用いて行った。グラフィカル表示は、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ（登録商標）（Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ， Ｉｎｃ．、Ｐｏｉｎｔ Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ）で生成した。
薬力学的結果：
・平均のＫＲＮ２３用量は、初回投与（プロトコル当たりの初回投与）の０．０５ｍｇ／ｋｇ ＳＣから４回目の投与の０．４８±０．１６ｍｇ／ｋｇまで各連続投与で増加した。
・平均の血清リンは、各投与後の７日目までに最大レベルに達成した後、減少し、後続投与前に投与前レベルには到達しなかった。血清リンの増加は、特に、３回目及び４回目の投与の後に、大きさで臨床的に意義あるものであった。
・ピーク値とトラフ値の（投与前）平均の血清リンレベル並びにＡＵＣｎは、連続投与と共に増加した。平均の最大血清リンレベルは、初回投与後の２．２１±０．３３ｍｇ／ｄＬから４回目の投与後の３．０３±０．４２ｍｇ／ｄＬに増加した。
・ＴｍＰ／ＧＦＲ結果は、血清リンで観察されたものと同じパターンをたどった。初回投与後の平均の最大ＴｍＰ／ＧＦＲは、１．９３±０．４５ｍｇ／ｄＬであり；これは、４回目の投与後に２．９７±０．６７ｍｇ／ｄＬに増加した。ＴｍＰ／ＧＦＲの増加の大きさは、血清リンのものと同様であり、臨床的に意義あるものであった。
・平均の血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、各投与後の３日目〜７日目に最大レベルに増加した後、次の投与前にベースラインレベル近くに戻った。あるいは、観察されたパターンは、血清リン及びＴｍＰ／ＧＦＲで見られたものと同じであった。
・ＦＧＦ２３と血清リンのベースラインレベル間の相関はなかった。同様に、血清リンの増加は、ベースラインのＦＧＦ２３レベルと相関しなかった。
・ＫＲＮ２３治療の意義ある効果は、他の血清と尿ＰＤパラメーターのベースラインからの平均変化で観察されなかった。他の血清と尿ＰＤパラメーターの平均値は、ベースラインと比較して、ＫＲＮ２３投与後に変化しなかった。血清パラメーターには、２５（ＯＨ）Ｄ、総カルシウム、イオン化カルシウム、カルシトニン、ｉＰＴＨ、エストラジオール、遊離テストステロン、総テストステロン、及びＳＨＢＧが含まれた。尿マーカーには、ＴＲＰ、カルシウム／クレアチニン比、及びＦＥＣａの２時間測定値、及びリン、カルシウム、クレアチニン、及びカルシウム／クレアチニン比の２４時間測定値が含まれた。
・骨形成（ＢＡＬＰ、Ｐ１ＮＰ、及びオステオカルシン）及び骨吸収（ＣＴｘ及びＮＴｘ／クレアチニン）の血清マーカーは、ＫＲＮ２３投与後に増加する傾向があった。
薬力学的分析：簡単に言えば、ベースラインからの変化に対する曲線下面積（ＡＵＣ）は、１２０日間の治療、または離脱前ぎりぎりに測定した時点（ＡＵＣｌａｓｔ）、及び４回の投与間隔（ＡＵＣ１、ＡＵＣ２、ＡＵＣ３、及びＡＵＣ４）の各々について、以下のＰＤパラメーターごとに算出した。
・カルシウムホメオスタシス：アルブミン、イオン化カルシウム、補正カルシウム
・ＰＤパラメーター：カルシトニン、インタクトＰＴＨ、血清クレアチニン、血清リン、血清総カルシウム
・ビタミンＤ：１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（１，２５（ＯＨ２）Ｄ）、２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５（ＯＨ）Ｄ）
・骨バイオマーカー：骨アルカリホスファターゼ、ｃ−テロペプチド（ＣＴＸ）、ｎ−テロペプチド（ＮＴＸ）、ＮＴＸ／クレアチニン比、オステオカルシン、プロコラーゲン１（Ｐ１ＮＰ）
・性ホルモン：エストラジオール、テストステロン、遊離テストステロン及び性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）
・２４時間尿：カルシウム、カルシウム／クレアチニン比、クレアチニン、リン酸塩
・２時間尿：クレアチニン、ランダムカルシウム、カルシウム／クレアチニン比、カルシウム排泄分画（ＦＥＣａ）、リン、リン酸の腎尿細管再吸収（ＴＲＰ）、Ｔｍｐ／ＧＦＲを算出した。
ＰＤパラメーターについて、ＡＵＣ１、ＡＵＣ２、ＡＵＣ３、及びＡＵＣ４は、それぞれ、投与サイクル１（０日目〜２８日目）、投与サイクル２（２８日目〜５６日目）、投与サイクル３（５６日目〜８４日目）、及び投与サイクル４（８４日目〜１２０日目）に推定した。血清ＰＤ ＡＵＣｌａｓｔは、０日目〜１２０日目または早期離脱から推定した。投与前試料がｎ回目の投与間隔で採取されなかった場合、前の投与間隔からの最後の試料を投与前試料として使用した。
薬物動態及びＰＫ−ＰＤ関係：
・ＰＫ暴露（Ｃｍａｘ，ｎ、Ｃｍｉｎ，ｎ、ＡＵＣｎ値）は、４回の投与間隔にわたって平均のｔｍａｘ値と同様に用量に比例した増加した。４回目の投与間隔後に推定した終末半減期は、１６．４±５．８日であった。
・血清ＫＲＮ２３及びリン濃度は、各投与後のおよそ同じ時点（およそ７日目）で最大レベルに到達し、それらの濃度は、平行して増減し、経験的Ｅｍａｘモデルによって記述される直接的なＰＫ−ＰＤ関係を支持した。血清リンレベルの増加に伴うＫＲＮ２３の最大効果（Ｅｍａｘ）は、１．７８８ｍｇ／ｄＬであり、Ｅｍａｘの５０％（ＥＣ５０）に到達するＫＲＮ２３濃度は、２７４２ｎｇ／ｍＬであった。
・血清リン、ＴｍＰ／ＧＦＲ、及び１，２５（ＯＨ）２Ｄにおけるベースラインからの変化のＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔは、ＫＲＮ２３ ＰＫ暴露（ＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔ）の増加と共に直線的に増加した。
・ＫＲＮ２３治療の意義ある効果は、他のＰＤパラメーター（血清アルブミン、イオン化カルシウム、補正カルシウム、カルシトニン、ｉＰＴＨ、クレアチニン、総カルシウム、２５（ＯＨ）Ｄ、エストラジオール、遊離テストステロン、総テストステロン、ＳＨＢＧ；及び２時間尿中ＴＲＰ、カルシウム／クレアチニン比、及びＦＥＣａ；及び２４時間尿中カルシウム、カルシウム／クレアチニン比、クレアチニン、及びリン酸塩）のベースラインからの変化のＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔで観察されなかった。
・ベースラインからの骨形成マーカー（ＢＡＬＰ、Ｐ１ＮＰ、及びオステオカルシン）及び骨吸収マーカー（ＣＴｘ及びＮＴｘ／クレアチニン比）変化のＡＵＣ対ＫＲＮ２３ ＡＵＣは、ＫＲＮ２３治療後に正のトレンドの増加を示した。
生活の質：２台のＰＲＯ機器（ＳＦ−３６ｖ２及びＷＯＭＡＣ）を用いて、ＫＲＮ２３治療は、ＸＬＨを有する被験者の健康状態に意義ある改善をもたらした：
・１０個全てのＳＦ−３６ｖ２測定値は、ベースラインと比較して治療終了時に改善を示し、統計的に有意な改善が、３つの測定値（身体の健康［ＲＰ］、肉体的苦痛［ＢＰ］、及び身体的構成要素の概略［ＰＣＳ］による役割制限；ｐ＜０．０５）について観察された。多重度について補正した場合、ＲＰのみが、統計的に有意であった（ｐｍ＜０．０５）。
・３つ全てのＷＯＭＡＣ測定値は、ベースラインと比較して治療終了時に改善を示し、統計的に有意な改善が、２つの測定値（身体機能及びこわばり；ｐ＜０．０５）について観察された。
・一般的な米国母集団と比較して、治験母集団は、ベースラインＢＰ、身体機能（ＰＦ）、ＲＰ、及びＰＣＳスコアにおいて大きな欠陥を示した。治験終了時に、ＲＰの欠陥を除去し（ｐ＜０．０５）、ＰＦ、ＢＰ、及びＰＣＳの欠陥を低くした。他の全てのスコアは、健康増進（社会機能［ＳＦ］、情緒的問題［ＲＥ］、バイタリティ［ＶＴ］、精神衛生［ＭＨ］、精神的構成要素概観［ＭＣＳ］、及び全身の健康［ＧＨ］による役割制限）の方に改善を示した。
・変形性関節症を有する患者と比較して、治験母集団に対する疾病測定値のベースライン負荷は、８つのスケール（ＲＰ、ＲＥ、ＢＰ、ＰＦ、ＰＣＳ、ＶＴ、ＭＨ、及びＭＣＳ）で同じようであり、ＧＨ及びＳＦで著しく良好であった。治験終了時に、全てのスコアは、変形性関節症を有する患者と比較して、治験母集団のＲＰで観察された統計的に有意な（ｐ＜０．０５及びｐｍ＜０．０５）改善と共に改善した。
・ＱｏＬスコアの変化は、以下の臨床測定値と中程度の相関（相関に対して０．３の閾値）があった：
−ＢＰ、ＧＨ、及びこわばりスコアにおけるベースラインからの変化は、ＫＲＮ２３ ＰＫ暴露（ＡＵＣｌａｓｔ）と中程度の相関があった；
−ＢＰ及びＲＥスコアにおけるベースラインからの変化は、ベースラインからの血清リン及びＴｍＰ／ＧＦＲ変化（ＡＵＣｌａｓｔ）と中程度の相関があった；
−疼痛スコアにおけるベースラインからの変化は、ベースラインからの１，２５（ＯＨ）２Ｄ変化（ＡＵＣｌａｓｔ）と中程度の相関があった。
安全性結果：
・ＫＲＮ２３は、この被験者集団における４回の用量漸増のＳＣ投与で耐容性良好であった。
・死亡またはＳＡＥの報告は無かった。１人の被験者は、ＴＥＡＥ（注射部位の蕁麻疹）のため治験から離脱した。この事象は、ＫＲＮ２３の３回目の投与後の５７日目に確認され、中程度の強さで、恐らく治験薬と関連していると考えられた。被験者は、プレドニゾン及びジフェンヒドラミンで治療した。
・ほぼ被験者全員（２５人の被験者（８９．３％）は、ＫＲＮ２３で治療し、１人の被験者は、プラセボで治療した）は、治験中に少なくとも１人がＴＥＡＥを有した。ＫＲＮ２３で治療した被験者の最も一般的な（少なくとも５人の被験者に対して報告された）ＴＥＡＥは、鼻咽頭炎（８人の被験者、２８．６％、それぞれ）、関節痛（７人の被験者、２５．０％）、及び下痢、背部痛、及びレストレスレッグス症候群（５人の被験者、１７．９％、それぞれ）であった。
・治療関連ＴＥＡＥは、ＫＲＮ２３で治療した１０人の被験者（３５．７％）に対して報告され；未治療関連ＴＥＡＥは、プラセボ群における１人の被験者に対して報告された。下痢は、ＫＲＮ２３で治療した１人以上の被験者（２人の被験者、７．１％）に対して報告された唯一の治療関連ＴＥＡＥであった。全てのＴＥＡＥは、ＫＲＮ２３で治療した２人の被験者（１人は、重篤な筋肉痛を有し、１人は、重篤な外傷後疼痛を有した）を除いて、軽度または中程度の強さであると考えられた。生命に関わるまたは致命的なＴＥＡＥは、報告されなかった。
・治験中の検査値異常の観察可能なパターンは存在しなかった。３人の被験者は、ＴＥＡＥ（好中球数減少、鉄欠乏性貧血、血液クレアチンホスホキナーゼ増大）であると治験責任医師によって見なされた検査値異常を有した；しかしながら、これらは、臨床的に有意であるとは見なされず、治療を必要とはせず、被験者の治験からの中止をもたらさなかった。
・治療効果を示唆した、得られた他の安全性パラメーター（バイタルサイン、身体及び脳神経検査所見、心臓ＣＴスキャン、腎臓超音波検査、及び心電図）のパターンに変化は観察されなかった。
・投与後に抗ＫＲＮ２３抗体を発症した被験者はいなかった。注射部位反応（蕁麻疹）を経験した１人の被験者に対して、陽性抗ＫＲＮ２３抗体は検出されなかった。他の被験者は、任意の過敏反応を経験しなかった。
・ＫＲＮ２３治療後の血清カルシウム濃度、カルシウムの尿中排泄、腎石灰沈着症、または冠動脈カルシウムスコアの増加は認められなかった。
結論：全体として、本治験においてＸＬＨを有する患者における、ＫＲＮ２３の血清リンへの持続的な効果、投与間隔中のＴｍＰ／ＧＦＲ及び血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベル；４回の投与後のＱｏＬスコアの改善；血清リンレベルにおける血清ＫＲＮ２３濃度及び増加の直接的なＰＫ−ＰＤ関係；及び良好な安全性プロファイルは、ＸＬＨを有する患者におけるＫＲＮ２３の潜在的な有用性を示唆する。
Ｘ染色体連鎖低リン血症を有する成人被験者におけるＫＲＮ２３の有効性、薬力学、及び薬物動態パラメーターの分析
主要な有効性−血清リンレベル
被験者は、≦２．５ｍｇ／ｄＬ、＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬ、＞３．５〜≦４．５ｍｇ／ｄＬ、または＞４．５ｍｇ／ｄＬの最大血清リンレベルを有する。ベースライン（１回目の投与間隔の０日目）で、ＫＲＮ２３で治療した被験者の大半（２６人の被験者、９６．３％）は、２．５ｍｇ／ｄＬを下回る血清リンレベルを有し；１人の被験者は、＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬのレベルを有した：
治験の最初の１２０日間中に、ＫＲＮ２３で治療した被験者の血清リンレベルが＞２．５ｍｇ／ｄＬであった平均総時間は、２７．８±１７．９日であった。骨サブスタディにおいてプラセボで治療した１人の被験者について、血清リンレベルは、治験終了（来診２６）（２．０ｍｇ／ｄＬ）までベースライン（１．６ｍｇ／ｄＬ）から本質的に変化しないままであり、投与後レベルは、１．５〜２．１ｍｇ／ｄＬの範囲であった。
各投与間隔中に、最大血清リンレベルは、７日目に達成した：
７日目の血清リンレベルが＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬの、ＫＲＮ２３で治療した被験者の割合は、投与間隔１の１４．８％から投与間隔２、３、及び４に、それぞれ、３７．０％、７４．１％、及び７０．４％に増加した。
９１日目（４回の投与間隔の７日目）に、ＫＲＮ２３で治療した被験者の過半数（１９人の被験者、７０．４％）は、＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルを有し；３人の被験者（１１．１％）は、２．５ｍｇ／ｄＬを下回るレベルを有し、４人（１４．８％）は、＞３．５〜≦４．５ｍｇ／ｄＬのレベルを有した。１１０日目（４回の投与間隔の２６日目）までに、１２人（４４．４％）の被験者は、＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルを有し、１４人（５１．９％）は、２．５ｍｇ／ｄＬを下回るレベルを有した。血清リンレベルは、任意の被験者において任意の時点で４．５ｍｇ／ｄＬを超えなかった。
要約すれば、ＫＲＮ２３の平均の最大効果は、４回目の投与間隔後の７日目に起きた。全部で２３人の被験者（８５．２％）は、＞２．５ｍｇ／ｄＬ及び≦４．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルを有した。
薬力学的結果
血清リン
平均の血清リンレベルを以下の表６にまとめ、図１にグラフで示す。
平均のＫＲＮ２３用量は、投与間隔１、２、３、及び４で、それぞれ、０．０５±０．０、０．１０±０．０１、０．２８±０．０６、及び０．４８±０．１６ｍｇ／ｋｇであった。４回の各投与間隔中に、平均血清リン濃度は、７日目までに最大濃度に増加した後、次の投与前に減少した；投与前及び投与後の両方のレベルは、投与回数が１２０日の治療期中に増すにつれて増加した。用量が１回目の投与間隔から４回目の投与間隔に増加するにつれて、最大平均血清リン濃度は、２．２１±０．３３ｍｇ／ｄＬから３．０３±０．４２ｍｇ／ｄＬに増加し、各投与前の平均血清リン濃度は、１．８９±０．３３から２．２７±０．３２ｍｇ／ｄＬに増加し、平均ＡＵＣｎは、５．６８±５．０４から２８．２０±１２．４３ｍｇ 日／ｄＬに増加した。
血清リンのピーク値とトラフ値の変動は、各投与間隔中は少なかった。４回の投与間隔で、平均血清リン濃度は、ピーク値（３．０３±０．４２ｍｇ／ｄＬ）とトラフ値（２．２７±０．３２ｍｇ／ｄＬ）の間で０．７６ｍｇ／ｄＬの差（３３％）で変動した。被験者間の変動もまた、血清リン濃度で少なかった。４回目の投与間隔で、血清リンレベルの被験者間の変動は、トラフ値及びピーク値の両方の濃度（＝ＳＤ／平均×１００％；０．４２／３．０３×１００％）でたった１４％であった。
リン酸塩の糸球体濾過量に対する腎細管最大再吸収率
ＫＲＮ２３の複数回投与で治療した被験者の平均のＴｍＰ／ＧＦＲ値を以下の表７にまとめ、図２にグラフで示す。
４回の各投与間隔中に、平均ＴｍＰ／ＧＦＲは、７日目までに最大レベルに増加した後、次の投与前に減少した；投与前及び投与後の両方のレベルは、投与回数が１２０日の治療期中に増すにつれて増加した。用量が１回目の投与間隔から４回目の投与間隔に増加するにつれて、最大平均ＴｍＰ／ＧＦＲは、１．９３±０．４５ｍｇ／ｄＬから２．９７±０．６７ｍｇ／ｄＬに増加し、各投与前の平均ＴｍＰ／ＧＦＲは、１．６０±０．３６から２．０５±０．３４ｍｇ／ｄＬに増加し、平均ＡＵＣｎは、５．２３±６．１２ｍｇ・日／ｄＬから２８．５５±１３．４０ｍｇ・日／ｄＬに増加した。
血清リンのＡＵＣｌａｓｔ及びＡＵＣｎ対ＴｍＰ／ＧＦＲのＡＵＣｌａｓｔの散布図を図３に示す。血清リンとＴｍＰ／ＧＦＲは、直線的に相関していた（ピアソン相関は、それぞれ、０．８２８及び０．９００）。
ベースラインからの血清リン変化のＡＵＣｌａｓｔ（６３．５９±３１．５８ｍｇ・日／ｄＬ）とベースラインからのＴｍＰ／ＧＦＲ変化のＡＵＣｌａｓｔ（６８．４２±３７．９６ｍｇ・日／ｄＬ）は、同様であった。
文献で報告された方程式を用いて算出した平均ＴｍＰ／ＧＦＲ値対ノモグラムから手作業で読み取った平均ＴｍＰ／ＧＦＲ値を図４に示す。高い相関係数（ピアソン相関＝０．９９６３）は、算出したＴｍＰ／ＧＦＲの使用が、ノモグラムから手作業で読み取ったＴｍＰ／ＧＦＲに匹敵することを示している。従って、算出したＴｍＰ／ＧＦＲ値をこの報告書に示す。骨サブスタディにおいてプラセボで治療した１人の被験者について、ＴｍＰ／ＧＲＦレベルは、治験終了（来診２６）（１．６ｍｇ／ｄＬ）までベースライン（１．３ｍｇ／ｄＬ）から本質的に変化しないままであり、投与後レベルは、１．３〜１．８ｍｇ／ｄＬの範囲であった。
１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ
ＫＲＮ２３で治療した被験者の平均の血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルを図５にグラフで示す。
４回の各投与間隔中に、平均の血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、３日目または７日目までに最大濃度に増加した後、次の投与前にベースラインレベル近くに戻った；投与前及び投与後の両方のレベルは、投与回数が１２０日の治療期中に増すにつれて増加した。用量が１回目の投与間隔から４回目の投与間隔に増加するにつれて、最大平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、５３．１±２５．４４から９４．１±４５．９９ｐｇ／ｍＬに増加し、各投与前の平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、３６．６±１４．２５から４３．８±１３．７２ｐｇ／ｍＬに増加し、平均ＡＵＣｎは、１４４．８１±２０９．１２から１０１５．６１±４８３．１０ｐｇ・日／ｍＬに増加した。表８を参照されたい：
骨サブスタディにおいてプラセボで治療した１人の被験者について、１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、治験終了（来診２６）（５３．０ｐｇ／ｍＬ）までベースライン（６７ｐｇ／ｍＬ）から本質的に変化しないままであり、投与後レベルは、４６〜７０ｐｇ／ｍＬの範囲であった。
他の薬力学的結果
ベースラインでの血清インタクトＦＧＦ２３レベルにおける平均値を以下の表９にまとめる。個々のリン濃度対ベースラインでのインタクトＦＧＦ２３レベルの散布図を生成し、これら２つのベースラインパラメーター間の相関は観察されなかった（データ不図示）。
ＫＲＮ２３で治療した被験者の経時的な平均の血清全レベルと未結合ＦＧＦ２３レベルとを以下の表１０及び１１にそれぞれまとめる。
総ＦＧＦ２３の投与前濃度は、ＫＲＮ２３の投与回数と共に増加し、４回目の投与間隔後（１１０日目、最後の投与後の２６日目）に最大レベルに到達した。従って、減少傾向が、治験終了（１２０日目、最後の投与後の３６日目）まで観察された（図６）。総ＦＧＦ２３は、ベースラインで１２０．２±９３．９ｐｇ／ｍＬであり、１１０日目に１２２４４６±７９４５０ｐｇ／ｍＬに増加した。未結合ＦＧＦ２３の投与前濃度は、総ＦＧＦ２３と同様のパターンに従い、同じスケールでプロットした場合に、総ＦＧＦ２３と比較して無視できる程度であった（図６）。未結合ＦＧＦ２３は、ベースラインで１００±５８ｐｇ／ｍＬであり、１１０日目に７０２４±５０３５ｐｇ／ｍＬに増加した。未結合ＦＧＦ２３はＫＲＮ２３投与後に増加したが、総ＦＧＦ２３のわずかごく一部であった（１１０日目に５．７４％）。
プラセボ群における１人の被験者については予想した通り、未結合ＦＧＦ２３は、投与前（６２．７ｐｇ／ｍＬ）から治験終了（５９．８ｐｇ／ｍＬ）まで本質的にとどまり、５９．８〜９０．５ｐｇ／ｍＬの範囲であった。
ベースラインからの血清リン変化のＡＵＣｌａｓｔ対ベースラインのインタクトＦＧＦ２３の散布図を生成し、血清リンのＡＵＣｌａｓｔとベースラインのインタクトＦＧＦ２３の間に相関はなかった（ピアソン相関＝０．０９４３）。
以下のＰＤパラメーター：血清中の２５（ＯＨ）Ｄ、総カルシウム）、イオン化カルシウム、カルシトニン、及びｉＰＴＨ、または尿中の他のＰＤパラメーター、例えば、２時間尿中ＴＲＰ、２時間尿中カルシウム／クレアチニン比、２時間尿中ＦＥＣａ、２４時間尿中リン、２４時間尿中カルシウム、２４時間尿中クレアチニン、２４時間尿中カルシウム／クレアチニン比について、ＫＲＮ２３で治療した被験者の経時的な平均値にトレンドは見られなかった。
経時的に平均のエストラジオール、テストステロン、遊離テストステロン、及びＳＨＢＧが観察された。これらのパラメーターにおける経時的な平均値にトレンドは見られなかった。
骨形成パラメーター
経時的に平均の血清ＢＡＬＰ、Ｐ１ＮＰ、及びオステオカルシン値も観察された。平均のＰ１ＮＰレベルは、０日目の６４．１±３０．７ｎｇ／ｍＬから治験終了時（１２０日目）に１２３．０±７５．１ｎｇ／ｍＬに増加した。数値の増加は、血清オステオカルシン（０日目の２９．３±１７．７ｎｇ／ｍＬから治験終了時の１２０日目に４２．３±２５．７ｎｇ／ｍＬ）及びＢＡＬＰ（０日目の２８．３±１２．８ｍｃｇ／Ｌから治験終了時の１２０日目に３８．１±２３．３ｍｃｇ／Ｌ）でも見られた。
骨サブスタディにおいてプラセボで治療した１人の被験者について、血清ＢＡＬＰ及びＰ１ＮＰの平均値は、経時的には本質的に変化しないままであった（ＢＡＬＰは、０日目に２０．７ｍｃｇ／Ｌ、治験終了時の１２０日目に２０．６ｍｃｇ／Ｌであり；オステオカルシンは、０日目に１７．１ｎｇ／ｍＬ、治験終了時の１２０日目に１９．４ｎｇ／ｍＬであった）。数値の低下は、平均血清Ｐ１ＮＰレベルで確認された（０日目の９１．０ｎｇ／ｍＬから治験終了時の１２０日目に６０．０ｎｇ／ｍＬ）。
骨吸収パラメーター
経時的に平均の血清ＣＴｘ及びＮＴｘ／クレアチニン比値が観察された。数値の増加は、血清ＣＴｘ（０日目の７５２．０±３８９．５ｐｇ／ｍＬから治験終了時の１２０日目に９４７．３±５０４．７ｐｇ／ｍＬ）及びＮＴｘ／クレアチニン比（０日目の４１．８±２０．３ｎｍｏＬ・ＢＣＥ／ｍｍｏＬから治験終了時の１２０日目に５６．９±３４．０ｎｍｏＬ・ＢＣＥ／ｍｍｏＬ）で確認された。
骨サブスタディにおいてプラセボで治療した１人の被験者について、ＣＴｘは、経時的には本質的に変化しないままであった（０日目に６１３．０ｐｇ／ｍＬ、治験終了時の１２０日目に５７０．０ｐｇ／ｍＬ）。数値の増加は、ＮＴｘ／クレアチニン比で確認された（０日目の２５．０ｎｍｏＬ・ＢＣＥ／ｍｍｏＬから治験終了時の１２０日目に４０．０ｎｍｏＬ・ＢＣＥ／ｍｍｏＬ）。
薬物動態結果
非コンパートメント分析
各投与間隔で投与した総用量の概要を以下の表１２に示す。
ＫＲＮ２３の平均血清濃度を図７にグラフで示す。ＫＲＮ２３のＰＫパラメーターの概要を以下の表１３及び表１４に示す。
平均のｔｍａｘ値は、４回の投与間隔にわたって同様であり、７．００〜８．５０日の範囲であった。個々のｔｍａｘ値は、全投与間隔にわたって１．９６〜１９．９日の範囲であった。平均のＣｍａｘ，ｎ、Ｃｍｉｎ，ｎ、及びＡＵＣｎ値は、投与間隔１〜４における用量の増加に比例して増加した。ＡＵＣｌａｓｔの被験者間の変動は、３０％であった。Ｃｍａｘ，ｎ及びＣｍｉｎ，ｎの被験者間の変動は、４回全ての投与間隔にわたって、それぞれ、３２％〜３８％及び３６％〜５６％の範囲であった。投与間隔４における最後の投与後のＫＲＮ２３の平均ｔ１／２値は、１６．４±５．８日であった（個々の値は、５．５８〜２９．５日の範囲であった）。４つ全ての間隔で算出したＫＲＮ２３の平均のＣＬ／Ｆ及びＶｚ／Ｆは、それぞれ、０．１８６±０．０７８ｍＬ／ｈｒ／ｋｇ及び９８．３±３４．６ｍＬ／ｋｇであった。
薬物動態及び薬力学的関係
血清リンのＰＫ−ＰＤ相関：ベースラインからの血清リン変化のＡＵＣｎ及びＡＵＣｌａｓｔ対ＫＲＮ２３のＡＵＣｎ及びＡＵＣｌａｓｔのプロットを図８にそれぞれ示す。ベースラインからの血清リン変化のＡＵＣｎは、ＫＲＮ２３のＡＵＣｎの増加と共に直線的に増加した（ｒ＝０．６１２）。ベースラインからの血清リン変化のＡＵＣｌａｓｔは、ＫＲＮ２３のＡＵＣｌａｓｔの増加と共に直線的に増加した（ｒ＝０．６８０）。
ＴｍＰ／ＧＦＲのＰＫ−ＰＤ相関：ベースラインからのＴｍＰ／ＧＦＲ変化のＡＵＣｎ及びＡＵＣｌａｓｔ対ＫＲＮ２３のＡＵＣｎ及びＡＵＣｌａｓｔのプロットを図９にそれぞれ示す。ベースラインからのＴｍＰ／ＧＦＲ変化のＡＵＣｎは、ＫＲＮ２３のＡＵＣｎの増加と共に直線的に増加した（ｒ＝０．８１０）。ベースラインからの血清リン変化のＡＵＣｌａｓｔは、ＫＲＮ２３のＡＵＣｌａｓｔの増加と共に直線的に増加した（ｒ＝０．６９８）。
１，２５−ジヒドロキシビタミンＤのＰＫ−ＰＤ相関：ベースラインからの１，２５（ＯＨ）２Ｄ変化のＡＵＣｎ及びＡＵＣｌａｓｔ対ＫＲＮ２３のＡＵＣｎ及びＡＵＣｌａｓｔのプロットを図１０にそれぞれ示す。ベースラインからの１，２５（ＯＨ）２Ｄ変化のＡＵＣｎは、ＫＲＮ２３のＡＵＣｎの増加と共に直線的に増加した（ｒ＝０．４１７）。ベースラインからの１，２５（ＯＨ）２Ｄ変化のＡＵＣｌａｓｔは、ＫＲＮ２３のＡＵＣｌａｓｔの増加と共に直線的に増加した（ｒ＝０．２７２）。
他のＰＤマーカーのＰＫ−ＰＤ相関：他のＰＤパラメーターの個々のＡＵＣ対ＫＲＮ２３のＡＵＣのプロットは、相関を示さなかった；これらには、アルブミン、イオン化カルシウム、補正カルシウム、カルシトニン、ｉＰＴＨ、クレアチニン、総カルシウム、２５（ＯＨ）Ｄ、ＮＴｘ、エストラジオール、遊離テストステロン、総テストステロン、ＳＨＢＧの血清測定値；カルシウム、カルシウム／クレアチニン比、クレアチニン、リン酸塩の２４時間尿中測定値；及びクレアチニン、ランダムカルシウム、カルシウム／クレアチニン比、ＦＥＣａ；リン、及びＴＲＰの２時間尿中測定値が含まれた。これらの結果は、ＫＲＮ２３の複数回投与がこれらのＰＤパラメーターのいずれにも影響を及ぼさなかったことを示唆している。
骨マーカーのＰＫ−ＰＤ相関：ベースラインからの骨形成マーカー（ＢＡＬＰ、Ｐ１ＮＰ、及びオステオカルシン）及び骨吸収マーカー（ＣＴｘ及びＮＴｘ／クレアチニン比）変化のＡＵＣ対ＫＲＮ２３のＡＵＣの散布図は、ＫＲＮ２３治療後に増加する正の傾向を示した。さらなる詳細をＰＫ−ＰＤ報告書で提示する。
リン濃度とＫＲＮ２３濃度におけるベースラインからの変化間の母集団ＰＫ−ＰＤ分析の結果を以下の表１５及び図１１にまとめる。
血清ＫＲＮ２３濃度と血清リンレベルの増加とのＰＫ−ＰＤ関係をＥｍａｘモデルによって記述した。Ｅｍａｘモデルは、低ＭＯＦで示されるように、線形モデルよりも良好なものを示すものと思われた。血清リンレベルの最大効果の増加は、１．７８８ｍｇ／ｄＬ（Ｅｍａｘ）であった。最大効果の５０％に到達するＫＲＮ２３濃度（ＥＣ５０）は、２７４２ｎｇ／ｍＬであった。
各投与サイクルにおけるＫＲＮ２３用量と投与した総用量の概要を以下の表１６に示す。
ＫＲＮ２３の平均血清濃度を図７に示す。ＫＲＮ２３のＰＫパラメーターの概要を表１３〜表１４に示す。単位変換によるＰＫパラメーターの概要を表１７に示す。
２７人の被験者全員は、投与サイクル１中に０．０５ｍｇ／ｋｇのＫＲＮ２３開始用量を受けた；２７人の被験者のうち２６人は、投与サイクル２で０．１ｍｇ／ｋｇ用量を受け；２７人の被験者のうち２５人は、投与サイクル３で０．３ｍｇ／ｋｇのＫＲＮ２３用量を受けた。投与サイクル４中に、２６人の被験者のうち１６人は、０．６ｍｇ／ｋｇのＫＲＮ２３用量を受け、２６人の被験者のうち９人は、０．３ｍｇ／ｋｇ用量を受け、２６人の被験者のうち１人は、０．１ｍｇ／ｋｇ用量を受けた。投与した平均値±ＳＤのＫＲＮ２３用量は、投与サイクル１、２、３、及び４中で、それぞれ、０．０５±０．００ｍｇ／ｋｇ、０．１０±０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．２８±０．０６ｍｇ／ｋｇ、及び０．４８±０．１６ｍｇ／ｋｇであった。４回の投与サイクルにわたる総用量の平均値±ＳＤは、０．８９±０．２２ｍｇ／ｋｇであった。
平均のｔｍａｘ値は、４回の投与サイクルにわたって同様であり、７．００〜８．５０日の範囲であった。個々のｔｍａｘ値は、全投与サイクルにわたって１．９６〜１９．９日の範囲であった。平均のＣｍａｘ，ｎ、Ｃｍｉｎ，ｎ、及びＡＵＣｎ値は、投与サイクル１〜４における用量の増加に比例して増加した。ＡＵＣｌａｓｔの被験者間の変動は、３０％であった。Ｃｍａｘ，ｎ及びＣｍｉｎ，ｎの被験者間の変動は、４回全ての投与サイクルにわたって、それぞれ、３２％〜３８％及び３６％〜５６％の範囲であった。
投与サイクル４における最後の投与後のＫＲＮ２３のｔ１／２値の平均値±ＳＤは、１６．４±５．８３日であった（個々の値は、５．５８〜２９．５日の範囲であった）。４つ全てのサイクルで算出したＫＲＮ２３のＣＬ／Ｆ及びＶｚ／Ｆの平均値±ＳＤは、それぞれ、４．４８±１．８７ｍＬ／日／ｋｇ及び９８．３±３４．６ｍＬ／ｋｇであった。
薬物動態結論：
・ＫＲＮ２３（Ｃｍａｘ，ｎ、Ｃｍｉｎ，ｎ、ＡＵＣｎ値で評価）へのＰＫ暴露は、用量比例的に用量の増加と共に増加した。
・ＫＲＮ２３の平均の終末半減期は、１６．４日（範囲：５．５８〜２９．５日）であった。
・平均のｔｍａｘ値は、４回の投与サイクルにわたって同様であり、７．００〜８．５０日（範囲：１．９６〜１９．９日）の範囲であった。
ＰＫ−ＰＤ相関結論：
・血清リンにおけるベースラインからの変化のＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔは、ＫＲＮ２３のＰＫ暴露（ＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔ）の増加と共に直線的に増加した。
・ＴｍＰ／ＧＦＲにおけるベースラインからの変化のＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔは、ＫＲＮ２３のＰＫ暴露（ＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔ）の増加と共に直線的に増加した。
・１，２５−ジヒドロキシビタミンＤにおけるベースラインからの変化のＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔは、ＫＲＮ２３のＰＫ暴露（ＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔ）の増加と共に直線的に増加した。
・ＫＲＮ２３治療の意義ある効果は、ほとんどのＰＤパラメーター（アルブミン、イオン化カルシウム、補正カルシウム、カルシトニン、インタクトＰＴＨ、クレアチニン、総カルシウム、２５−ヒドロキシビタミンＤ、ＮＴＸ、エストラジオール、遊離テストステロン、総テストステロン、血清中ＳＨＢＧ；カルシウム、カルシウム／クレアチニン比；クレアチニン、２４時間尿中リン酸塩；クレアチニン、ランダムカルシウム、カルシウム／クレアチニン比、ＦＥＣａ、リン、２時間尿中ＴＲＰ）のベースラインからの変化のＡＵＣｎまたはＡＵＣｌａｓｔにおいて観察されなかった。
・骨アルカリホスファターゼ、ＣＴＸ、ＮＴＸ／クレアチニン比、オステオカルシン、Ｐ１ＮＰの増加は、ＫＲＮ２３治療後に観察されたが、ＫＲＮ２３暴露との相関は、弱かった。
実施例２：第２フェーズＩ／ＩＩ臨床治験
治験設計及び方法論：これは、上述の第１フェーズＩ／ＩＩ臨床治験から適格なＸＬＨ被験者からなる拡張フェーズＩ／ＩＩの非盲検、単一群、反復投与、多施設長期延長治験である。治験設計は、２つの期間：治療期と追跡調査期からなる。ベースラインでは、被験者は、本治験への適格性について評価した。本治験のＫＲＮ２３非盲検部分に登録した全ての適格な被験者は、用量漸増アルゴリズムと安全性評価で導かれた、第１フェーズＩ／ＩＩ治験の治験終了の来診（来診２６、１２０日目）からの血清リンレベルに基づいて、ＫＲＮ２３の初回用量を受けた。治療期中、各被験者は、２８日ごとに１回（最大で１２回投与）、非盲検のＫＲＮ２３皮下投与を受ける。次の被験者内の用量漸増は、治験及び安全性評価のための用量漸増アルゴリズムで導かれた血清リンレベルに基づく。治療期中、被験者は、来診１〜４８の合計で４８回の予定された臨床評価を受ける。これらの定期評価のうちの少なくとも１２回は、病院来診を必要とするが、残りの３６回の来診は、病院で、及び／または在宅医療従事者が行うことができる。治療期の完了時に、被験者は、治験終了の来診（来診４９）、及び追跡調査期中に追加の往診または病院来診（来診５０）を受ける。被験者は、合計でおよそ１３．５カ月間：治療期中はおよそ１１カ月（４８週間／３３６日）と追跡調査期中のおよそ２．５カ月に参加する。第１フェーズＩ／ＩＩの骨サブスタディからの適格な被験者は、このサブスタディの拡張部分に参加していてもよい。被験者は、第１フェーズＩ／ＩＩ治験で受けた同じレジメンを継続することであった。骨サブスタディは、見越し額低迷により２０１３年８月に閉鎖し；最初に提案された分析はできない場合もある。治験用の安全性評価には、治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）モニタリング、安全性研究所パラメーター、免疫原性、及び理学的検査所見が含まれる。
両方の治験開始基準を申し分なく満たした被験者は、適格であった。治験母集団には、ＸＬＨの臨床診断が裏付けられ、かつ、インタクト線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ２３）レベル＞３０ｐｇ／ｍＬ、リン酸塩の糸球体濾過量に対する腎細管最大再吸収率（ＴｍＰ／ＧＦＲ）＜２．０ｍｇ／ｄＬ、（ｅＧＦＲ）≧６０ｍＬ／分（コッククロフト・ゴールト式を用いて）、及び補正血清カルシウムレベル＜１０．８ｍｇ／ｄＬ（血清アルブミンが＜４．０ｇ／ｄＬである場合）の少なくとも１８歳の男性及び女性の被験者が含まれた。
（計画及び分析した）被験者数：最大で３５人の被験者を計画し；２３人の被験者をスクリーニングして、登録し（治験の非盲検部分に２１人；骨サブスタディに２人）；被験者全員は、適格性基準を満たし、治験に登録した。
試験製品、用量及び投与方式、バッチ番号：骨サブスタディにおける非盲検ＫＲＮ２３及びＫＲＮ２３治療：ＳＣ注射用のＫＲＮ２３を、０．０５、０．１０、０．３０、０．６０、または１．０ｍｇ／ｋｇで腹部に２８日ごとに一回ＳＣ注射で投与した（バッチ番号：ＹＵ００８Ｂ、ＹＵ００８Ｅ、ＹＵ００８Ｆ、ＹＵ００９Ａ、ＹＵ００９Ｂ、ＹＵ０１１Ａ、及びＹＵ０１１Ｂ）。被験者は、必要に応じて０．０３ｍｇ／ｋｇに減少させてもよい。
比較薬剤、用量、及び投与方式、バッチ番号：骨サブスタディ：ＳＣ注射用のＫＲＮ２３プラセボを、腹部に２８日ごとに一回ＳＣ注射で投与した（バッチ番号：ＰＹＵ０９０９０８Ｃ及びＰＹＵ１２０４１３Ａ）。
治療期：本治験の治療期は、最長でおよそ１１カ月（４８週間／３３６日）の治療期と、２．５カ月の追跡調査期で、合計でおよそ１３．５カ月であった。
エンドポイント：
一次：主要なエンドポイントは、以下の評価を介してＫＲＮ２３ ＳＣ投与の反復投与の安全性及び有効性を評価するように設計された：
・治験薬への重症度及び関係による有害事象（ＡＥ）の数及び％
・バイタルサイン、検査室試験、身体検査、心電図（ＥＣＧ）、腎臓超音波検査及び心臓コンピューター断層撮影（ＣＴ）／冠動脈カルシウムスコアリング（ＣＣＳ）及び大動脈カルシウムスコアリング（ＡＣＳ）における臨床的に有意な変化の数
・投与後の血清リンレベルが、≦２．５ｍｇ／ｄＬ；＞２．５ｍｇ／ｄＬであるが≦３．５ｍｇ／ｄＬ、＞３．５ｍｇ／ｄＬであるが≦４．５ｍｇ／ｄＬ；及び＞４．５ｍｇ／ｄＬである被験者の数及び％
・抗ＫＲＮ２３抗体を発症する被験者の数
二次：副次的ＰＤエンドポイントは、治療群による以下のパラメーターを評価するために設計された；変化は、（来診２、第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験の０日目）から算出した：
・血清リンレベルの変化
・カルシウムホメオスタシス：１，２５（ＯＨ）２Ｄ（１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ）、２５（ＯＨ）Ｄ（２５−ヒドロキシビタミンＤ）、総カルシウム、イオン化カルシウム、カルシトニン、及びｉＰＴＨ（インタクト副甲状腺ホルモン）の変化
・２時間尿から測定した際の、ＴｍＰ／ＧＦＲ比、リン酸の腎尿細管再吸収（ＴＲＰ）、尿カルシウム／クレアチニン比、及びカルシウム排泄分画（ＦＥＣａ）の変化
・２４時間尿から測定した際の、尿中リン酸塩、カルシウム、クレアチニン、及び尿カルシウム／クレアチニン比の変化
・骨バイオマーカー：血清ＢＡＬＰ（骨アルカリホスファターゼ）、Ｐ１ＮＰ（１型プロコラーゲンのＮ−プロペプチド）、ＣＴｘ（１型コラーゲンのカルボキシ末端架橋テロペプチド）、及びオステオカルシン、及び尿中ＮＴｘ（１型コラーゲンのアミノ末端架橋テロペプチド）の変化
・性ホルモン：エストラジオール、テストステロン、遊離テストステロン、及び性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）の変化
・第１及び第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験の両方の治験にわたる累積用量からＫＲＮ２３の集団ＰＫの特徴付け
・ＳＦ−３６ｖ２（アウトカム・スタディ３６項目簡易健康調査バージョン２）及びＷＯＭＡＣ（ウェスタンオンタリオ及びマクマスター大学変形性関節症指数）におけるＱｏＬ評価の変化
結果の概要：この臨床治験概要は、２０１３年８月１２日のデータ締切日時点で入手可能な予備データに基づいている。
暴露：全部で２２人の被験者をＫＲＮ２３で治療し（本治験の非盲検部分に２１人、骨サブスタディに１人）、１人の被験者を骨サブスタディにおいてプラセボで治療した。初回の投与間隔（投与間隔１）では、平均のＫＲＮ２３用量は、０．５４１±０．２０３９ｍｇ／ｋｇであった。次の投与間隔では、平均のＫＲＮ２３用量は、増加し、狭い範囲（０．７３３±０．２８１７ｍｇ／ｋｇ〜０．８６５±０．２６１８ｍｇ／ｋｇ）で変動した。ＫＲＮ２３で治療した被験者（１９／２２、８６．４％）のほとんどは、データ締切日時点で１２回全ての計画投与を受け；プラセボで治療した１人の被験者は、データ締切日時点でプラセボの３回の投与を受けた。
治験母集団：ＫＲＮ２３で治療した２２人の被験者のうち、年齢の中央値は、４２．５歳（範囲：２０〜６７歳）であり；過半数（１３／２２、５９．１％）は、女性であり、及び大半（２１／２２、９５．５％）は、白人／コーカサス人であり、１人（４．５％）は、黒人／アフリカ系アメリカ人／アフリカ系カリブ人であった。身長の中央値は、１４８．７９ｃｍ（範囲：１２１．９〜１７０．２ｃｍ）であり、体重の中央値は、７５．３０ｋｇ（範囲：５１．３〜１２４．３ｋｇ）であった。
ベースラインでの血清リン及びＴｍＰ／ＧＦＲレベルは、被験者全員の正常な参照範囲の下限値を下回っていた。ベースラインでは、全体の平均１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、正常な参照範囲内であった。ベースラインの未結合インタクトＦＧＦ２３レベルは、ＫＲＮ２３で治療した被験者について５４〜２６８ｐｇ／ｍＬの範囲であった。
有効性結果：
・治療前のベースラインでは、被験者全員は、＜２．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルを有した。ＫＲＮ２３投与後、最大ＰＤ効果（ピーク）の時間は、７日目及び１４日目に観察された。ＫＲＮ２３の初回投与後、被験者の７７．１％（７日目）及び８１．８％（１４日目）は、＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬの標的範囲内で血清リンレベルが増加した。このピーク効果は、４５．５％〜８１．８％の範囲で、治験を通じて比較的一致していた。標的範囲内の被験者のパーセントは、７日目と１４日目で概ね同様であった。＞４．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルは、治験中の任意の時点で、任意の被験者に対して報告されなかった。
薬力学的結果：
・１２回の各投与間隔中に、ＫＲＮ２３で治療した被験者の平均血清リン濃度は、７日目または１４日目までに実質的に増加した後、減少したが、投与間隔の終了時にベースラインを上回ったままであった。全被験者は、全ての来診でベースラインからの増加を経験した。平均血清リン濃度は、治療前のベースライン時の１．８５±０．２８２ｍｇ／ｄＬから投与間隔１の１４日目に最大レベルの２．８７±０．３９２ｍｇ／ｄＬに増加し、最大レベルは、治験を通じて２．７１±０．４２８ｍｇ／ｄＬ〜２．９６±０．４６８ｍｇ／ｄＬの範囲内のままであった。投与後２５日目に、被験者の３３％〜５７％は、標的範囲（＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬ）内であり、投与間隔の終了時に、被験者の２３．８％〜３８．１％は、標的範囲（＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬ）内のままであった。
・ＴｍＰ／ＧＦＲは、過剰ＦＧＦ２３のＫＲＮ２３介在阻害がリンレベルを増加させる提案された機序である。ＴｍＰ／ＧＦＲ結果は、血清リンで観察されたものと同じパターンをたどった。平均のＴｍＰ／ＧＦＲは、治療前のベースラインレベルの１．５６４±０．３０１２から、各投与間隔の１４日目に最大範囲の２．４０８±０．７２０５ｍｇ／ｄＬ〜２．９２１±０．５９９０ｍｇ／ｄＬに増加した。ＴｍＰ／ＧＦＲの増加の大きさは、臨床的に意義あるものであり、血清リンの増加と密接に相関している。
・１２回の各投与間隔中に、平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、７日目までに最大レベルに増加した後、次の投与前にベースラインに匹敵するレベルに減少した。
・ベースラインと比較して、ＫＲＮ２３投与後の他の血清と尿ＰＤパラメーターの経時的な平均値にトレンドは見られなかった。血清パラメーターには、２５（ＯＨ）Ｄ、総カルシウム、イオン化カルシウム、カルシトニン及びｉＰＴＨが含まれた。尿マーカーには、ＴＲＰ、カルシウム／クレアチニン比、及びＦＥＣａの２時間測定値、及びリン、カルシウム、クレアチニン、及びカルシウム／クレアチニン比の２４時間測定値が含まれた。
・骨形成及び吸収のバイオマーカーは、治療効果を示すことができる。Ｐ１ＮＰは、第１フェーズＩ／ＩＩ臨床治験のベースライン時の６９．６±２９．８６ｎｇ／ｍＬから最大で１７０．４±１００．７９ｎｇ／ｍＬに増加した。これは、１４８．１％のパーセント変化の増加を表す。増加は、全てのベースライン後の測定で観察された。平均の血清オステオカルシン及びＢＡＬＰも増加したが、治験を通じてそれ程ではなかった。骨吸収パラメーター（Ｃｔｘ及びＮＴｘ）におけるベースラインからの増加も観察された。
ＰＫ及びＰＫ−ＰＤ関係：母集団ＰＫ分析は、治験最終報告書に含まれるであろう。任意のＰＫ−ＰＤ関係分析は、治験最終報告書に含まれるであろう。
生活の質：第２フェーズＩ／ＩＩ臨床治験中の被験者のＱｏＬ評価からのデータ分析は、本報告日の時点では入手できず、治験最終報告書に含まれるであろう。
安全性結果：
・ＫＲＮ２３は、この被験者集団における最大で１２回投与のＳＣ投与で耐容性良好であった。
・治験で報告された死亡または生命に関わるＴＥＡＥは無かった。ＳＡＥは、ＫＲＮ２３で治療した３人の被験者に対して報告された（頸椎脊椎管狭窄症、乳癌、及び高血圧性クリーゼ；各々、１人の被験者）。ＫＲＮ２３で治療した２人の被験者は、ＫＲＮ２３に関連すると思われるＴＥＡＥ：１人の被験者でＤＬＴと見なされた重篤なまたは消耗性のレストレスレッグス症候群（ＲＬＳ）と、ＤＬＴと見なされないが、他の被験者の中止をもたらす中程度の腎結石症とにより治験を中止した。
・ＴＥＡＥは、治験中に、ＫＲＮ２３で治療した被験者のほとんど（２０被験者、９０．９％）、及びプラセボで治療した１人の被験者に対して報告された。ＫＲＮ２３治療群で、最も一般的なＴＥＡＥ（少なくとも３人の被験者に対して報告された）は、注射部位反応、副鼻腔炎、及び関節痛（それぞれ、５人の被験者、２２．７％）；腹部不快感、背部痛、四肢疼痛及び目まい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓ）（それぞれ、４人の被験者、１８．２％）；及び目まい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、倦怠感、ウイルス性胃腸炎、鼻咽頭炎、頭痛、及びＲＬＳ（それぞれ、３人の被験者、１３．６％）。
・治療関連ＴＥＡＥは、ＫＲＮ２３で治療した１４人の被験者（６３．６％）に対して報告された。注射部位反応（５人の被験者、２２．７％）；関節痛及びＲＬＳ（それぞれ、３人の被験者、１３．６％）；及び注射部位疼痛（２人の被験者、９．１％）は、ＫＲＮ２３で治療した２人以上の被験者に対して報告された治療関連として分類された唯一のＴＥＡＥであった。重篤なまたは障害を引き起こすＴＥＡＥは、ＫＲＮ２３で治療した５人の被験者（２２．７％）に対して報告された：治験薬にはおそらく関連しない乳癌、治験薬におそらく関連するＲＬＳ、治験薬には関連しない筋肉痛及び高血圧性クリーゼ、治験薬には関連しない頸椎脊椎管狭窄症、及び治験薬には関連しない外傷後疼痛及び四肢疼痛。
・治験中に臨床的に有意な検査値異常の目に見えるパターンは存在しなかった。４人の被験者は、治験責任医師によってＴＥＡＥであると見なされた検査値異常を有した：治験薬におそらく関連する中程度の好中球数減少及び白血球数減少；治験薬におそらく関連する軽度の血圧低下；治験薬には関連しない軽度の血中トリグリセリド増加；及び治験薬にはおそらく関連しない軽度のアラニンアミノトランスフェラーゼ増加及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ増加、並びに治験薬におそらく関連する軽度の血中クレアチンホスホキナーゼ増加。これらの事象は、重篤または臨床的に有意であるとは見なされず、治療を必要とはせず、被験者の治験からの中止をもたらさなかった。
・関連性のある心臓への副作用は、心臓ＣＴスキャンまたはＥＣＧで見られなかった。ＥＣＧの別々の独立した心臓専門医評価は、（第１または第２フェーズＩ／ＩＩ臨床治験における）治療前ＥＣＧと第２フェーズＩ／ＩＩ臨床治験における治療後ＥＣＧとを比較した場合、ＥＳＴＥＳ基準によるＬＶＨの証拠または変化は示されなかった。
・腎臓への副作用は、腎臓超音波検査で見られなかった、ｉＰＴＨ、血清、及び２４時間尿中カルシウムの治療関連の変化は見られなかった。臨床的に有意な異所性鉱質形成変化は観察されなかった。
・治療関連の副作用を示唆する他の安全性パラメーター（バイタルサイン、身体及び脳神経検査所見）のパターンに変化は観察されなかった。
・投与後に抗ＫＲＮ２３抗体を発症した、または過敏反応を発症した被験者はいなかった。
・腎臓を含む、治験した任意の骨外性組織における石灰化が増加した証拠はなかった。
結論：
本治験からこれまでのデータは、ＫＲＮ２３がＳＣ投与後にＦＧＦ２３作用を遮断するモデルと一致しており、リン酸の腎尿細管再吸収（ＴｍＰ／ＧＦＲ）の増加により血清リンレベルの持続的な増加をもたらす。過剰なＦＧＦ２３の阻害に基づいて、増加した１，２５（ＯＨ）２Ｄも、予想通りに観察された。骨形成及び吸収マーカーの増加も観察された。まとめると、これらのバイオマーカーの変化は、ＫＲＮ２３が骨質の臨床改善をもたらし、くる病に関連する変化に拮抗し、ＸＬＨを有する患者の下肢の弯曲、疼痛、及び低背の特徴などの身体的な結果を最終的には改善するという仮説を支持する。
２８日ごとに皮下投与されたＫＲＮ２３（ほとんどの場合、０．６または１．０ｍｇ／ｋｇ）が、ピークの血清リンレベルを、治療前の平均のベースラインレベルである１．８５ｍｇ／ｄＬから２．５〜３．５ｍｇ／ｄＬの範囲に改善することが、本治験からの入手可能なデータにより実証された。この改善は、４８週間（３３６日）の期間及び１２回のＫＲＮ２３投与にわたって持続する。
ＫＲＮ２３治療がＴｍＰ／ＧＦＲを改善し；その効果が各治療後にほぼ２８日間にわたって持続し、４８週間及び１２回投与で維持されることが、データにより実証された。この結果は、ＫＲＮ２３が腎臓のリン酸ナトリウム共輸送体の低下に拮抗し、尿細管におけるリン酸再吸収の効率の実質的な増加をもたらすという概念と一致している。ＴｍＰ／ＧＦＲの増加の大きさは、臨床的に意義あるものであり、血清リンと相関しており、過剰ＦＧＦ２３のＫＲＮ２３介在阻害が所望の効果を達成するという推定機序を示唆している。
ＫＲＮ２３治療が血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベル増加させることも、本治験からのデータにより示されている。これは、ＫＲＮ２３が、血清２５ヒドロキシビタミンＤを、腸内でのリン酸吸収を能動的に刺激する１，２５ジヒドロキシ形態に変換するのに必要な１−アルファヒドロキシラーゼの発現低下に拮抗するという概念と一致している。骨形成及び吸収のバイオマーカーの改善は、骨再形成の増加を示唆している。これらの改善、さらに、血清リンの増加は、ＸＬＨを有する患者における骨質を改善する機序であると予想される。
ＫＲＮ２３は、最大で１．０ｍｇ／ｋｇで皮下投与した最大で１２回の薬剤投与による４８週間の期間にわたってＸＬＨ成人被験者で耐容性良好であった。死亡または生命に関わるＴＥＡＥは発生しなかった。治療関連ＴＥＡＥには、注射部位反応；関節痛及びＲＬＳ；及び注射部位疼痛が含まれた。（治療薬関連とは思われない、または、治療薬関連ではないと評価した）ＳＡＥは、３人の被験者に対して報告された。治療関連の副作用を示唆する検査値異常の目に見える臨床的に有意なトレンドは見られなかった。
腎臓の石灰化は、ＫＲＮ２３治療前のベースライン時の被験者で頻繁に見られ、これは、リン酸塩療法前による可能性が高い。ＫＲＮ２３のこれまでの臨床データ（本治験では、腎臓超音波検査及び超高速心臓ＣＴスキャンを使用するものを含む）は、これら最も高感受性の２つの臓器における石灰化の著しい新規出現または任意の増加は同定されなかった。加えて、血清または尿中カルシウムまたはＰＴＨの増加は観察されず、リンレベルは正常の上限を決して超えなかったため、異所性鉱質形成に通常関連する主要な生化学的パラメーターは、この長期観察治験にわたってＫＲＮ２３投与で発生しなかった。
結論として、ＫＲＮ２３治療は、耐容性良好であり、４８週間の治療を通じて各投与間隔で血清リン、ＴｍＰ／ＧＦＲ、及び血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルを増加させた。的外れの効果は観察されなかった。これらの臨床的に意義あるものは、薬力学的及び生化学的マーカーで増加し、ＸＬＨを有する成人被験者における良好な安全性プロファイルは、ＸＬＨを有する患者に対するＫＲＮ２３治療の潜在的な有用性を示唆する。
有効性評価
ベースラインの疾患特徴
有効性分析セットにおける被験者の血清リン、ＴｍＰ／ＧＦＲ、１，２５（ＯＨ）２Ｄ、及び未結合インタクトＦＧＦ２３のレベルを含むベースラインの疾病特徴を以下の表１８に示す。ベースラインでの血清リン及びＴｍＰ／ＧＦＲレベルは、被験者全員の正常な参照範囲の下限値を下回っていた。ベースラインでは、全体の平均１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、正常な参照範囲内であった（Ｋｒａｔｚ ２０１２）。ベースラインの未結合インタクトＦＧＦ２３レベルは、ＫＲＮ２３で治療した被験者について５４〜２６８ｐｇ／ｍＬの範囲であった。
主要な有効性−血清リンレベル
治療前のベースライン（来診２、第１フェーズＩ／ＩＩ臨床治験の０日目）で、ＫＲＮ２３で治療した２２人の被験者（１００％）全てと、プラセボで治療した１人の被験者は、＜２．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルを有した。２８日の各投与間隔中に、最大血清リンレベル（ピーク値）は、７日目または１４日目に達成した（表１９）。最初のＫＲＮ２３治療（投与間隔１）後の７日目及び１４日目に、大多数の被験者（１７〜１８人の被験者、７７．３％〜８１．８％）の血清リンレベルは、＜２．５ｍｇ／ｄＬから、＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬの標的範囲に増加した。このピーク効果は、４５．５％〜８１．８％の範囲で、治験を通じて比較的一致していた。標的範囲内の被験者のパーセントは、治験期を通じて７日目と１４日目の両方で概ね同様であった。７日目または１４日目のピーク血清リンレベルは、治験を通じて、ＫＲＮ２３で治療した０〜３人の被験者（０〜１３．６％）で＞３．５〜≦４．５ｍｇ／ｄＬの範囲に増加したが、＞４．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルは、任意の時点で、任意の被験者に対して報告されなかった。
データの各行は、その来診／時点で入手可能なデータを示し、各来診での被験者の総数（及び関連パーセント）は、データが欠けている場合には、最大で２２人（または１００％）まで追加しなくてもよいことに留意されたい。血清リンが各時点で標的範囲（＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬ）内のままであった被験者のパーセントは、その時点でこれらの被験者全員について得られたかどうかにかかわらず、任意のＫＲＮ２３投与回数を受けた２２人全員の被験者に基づいた分母で算出した。データ締切日時点で、３人の被験者は、計画されたＫＲＮ２３投与の全てを受けず（１人の被験者は、１回の投与を受け、中止した；１人の被験者は、５回の投与を受け、１人の被験者は、７回の投与を受け、治験にとどまった）、いくつかの時点で、血清リンデータは、治療され、治験にとどまった被験者全員について入手可能ではなかった。従って、場合によっては、算出したパーセントは、＞２．５ｍｇ／ｄＬの血清リンを達成した被験者の応答率を過小評価している場合がある。
骨サブスタディにおいてプラセボで治療した１人の被験者について、血清リンレベルは、ベースライン（１．６０ｍｇ／ｄＬ）から本質的に変化しないままであり、投与後レベルは、１．７０〜２．００ｍｇ／ｄＬの範囲であった。
要約すれば、ＫＲＮ２３は、ピーク値またはトラフ値のいずれかで、ほぼ全てのデータポイントで被験者全員におけるベースラインからの血清リンレベルを増加させ、治療したほとんどの被験者は、目的の治療目標（＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬ）を達成した。この効果は、最長で４８週間維持した。
薬力学的結果
血清リン：平均の血清リンレベルを図１２にグラフで示す。
用量は、ピーク値とトラフ値のリンレベル及び予め定められた調整レジメンに基づいて調整されるので、ＫＲＮ２３用量は、被験者ごと、及び治験の期間を通じて変動する。平均のＫＲＮ２３用量は、治験において０．５４１±０．２０３９ｍｇ／ｋｇ〜０．８６５±０．２６１８ｍｇ／ｋｇの範囲であった。
１２回の各投与間隔中に、平均血清リン濃度は、７日目または１４日目までに臨床的に意義ある最大レベルに増加した後、減少したが、次の投与前に投与前レベルには戻らなかった。全被験者は、全ての来診でベースラインからの増加を経験した。これらの被験者の平均血清リン濃度は、治療前のベースライン時（第１フェーズＩ／ＩＩ臨床治験０日目）の１．８５±０．２８２ｍｇ／ｄＬから投与間隔１の１４日目に最大レベルの２．８７±０．３９２ｍｇ／ｄＬに増加し、最大レベルは、治験を通じて２．７１±０．４２８ｍｇ／ｄＬ〜２．９６±０．４６８ｍｇ／ｄＬの範囲内のままであった。血清リンにおけるベースラインからの最大平均変化は、治験を通じて０．８７±０．４４４ｍｇ／ｄＬ〜１．１０±０．４１２ｍｇ／ｄＬの範囲内のままであった（表２０）。投与間隔の終了時（０日目）の平均血清リン濃度は、ベースラインを上回ったままであり、その範囲は、２．２５±０．３５３ｍｇ／ｄＬ〜２．５２±０．４３６ｍｇ／ｄＬであった。
投与間隔の７日目または１４日目の最大平均血清リン値から以下の投与間隔の０日目の最小値までのピーク値とトラフ値の変動は、治験を通じて少なかった。例えば、２．９６±０．４６８ｍｇ／ｄＬ（来診１０、投与間隔３、７日目）の最大平均ピーク値は、２．４２±０．３９６ｍｇ／ｄＬ（来診１３、投与間隔４、０日目）のトラフ値に、０．５４ｍｇ／ｄＬの差（２２．３％）で続いた。２．２５±０．３５３ｍｇ／ｄＬ（来診５、投与間隔２、０日目）及び２．２５±０．３０１（来診４５、投与間隔１２、０日目）の最小平均トラフ値は、２．８７±０．３９２ｍｇ／ｄＬ（来診３、投与間隔１、１４日目）及び２．７１±０．４２８ｍｇ／ｄＬ（来診４２、投与間隔１１、７日目）の前の投与間隔のピーク値に、それぞれ、０．６２ｍｇ／ｄＬ（２７．６％）及び０．４６ｍｇ／ｄＬの差（２０．４％）で続いた。入手可能なピーク値−トラフ値の１１対のうちの１０個の差は、１７．９％〜２７．６％の範囲内であり；経時的に一貫したＰＤ効果を示した。被験者間の変動も、血清リン濃度について比較的少なかった。例えば、投与後血清リンレベルの被験者間変動（ＳＤ／平均×１００％）は、治験開始時（投与間隔１〜２）及び治験終了時（投与間隔１１〜１２）の両方のトラフ値及びピーク値の対の濃度について１３．４％〜１５．８％の範囲内であった。これらの結果は、最小の変動と一貫したＰＤ効果を強調するものである。
リン酸塩／糸球体濾過量の腎細管最大再吸収率
各投与間隔での各ＫＲＮ２３投与後の１４日目及び２５日目に採取した２時間尿サンプルを使用して、ＴｍＰ／ＧＦＲを算出した。平均のＴｍＰ／ＧＦＲ値を図１３にグラフで示す。
ＴｍＰ／ＧＦＲは、過剰ＦＧＦ２３のＫＲＮ２３介在阻害がリンレベルを増加させる提案された機序である。ＴｍＰ／ＧＦＲは、血清リンと同じパターンをたどり、ＫＲＮ２３治療後に増加した血清リンレベルが、主に、腎近位尿細管からのリン再吸収の増加によるものであることを示唆した。全投与間隔及び被験者全員において、平均のＴｍＰ／ＧＦＲは、ベースライン（来診２、本治験の０日目）と比較して、１４日目に臨床的に有意な量まで増加した後、次の投与前に投与前レベルに向かって減少した（表２３）。平均のＴｍＰ／ＧＦＲは、各投与間隔の１４日目に、ベースラインレベルの１．５６４±０．３０１２から、２．４０８±０．７２０５ｍｇ／ｄＬ〜２．９２１±０．５９９０ｍｇ／ｄＬの範囲内のレベルに増加し；ベースラインからの１４日目の変化は、０．８４９±０．７６６５〜１．３５２±０．５８９２の範囲であった。２５日目のＴｍＰ／ＧＦＲレベルは、２．１９５±０．３８１９ｍｇ／ｄＬ〜２．５５１±０．６５３８ｍｇ／ｄＬの範囲であり、ベースラインからの変化は、０．６３６±０．３０８５〜１．００４±０．６７７７の範囲であった。
骨サブスタディにおいてプラセボで治療した１人の被験者について、ＴｍＰ／ＧＦＲレベルは、データ締切日時点（来診８、投与間隔２、２５日目）に完了した最終評価（１．６５０ｍｇ／ｄＬ）までベースライン（１．２５０ｍｇ／ｄＬ）からほとんど変化しないままであり、投与後レベルは、１．５５０〜２．０００ｍｇ／ｄＬの範囲であった。
１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ
ＫＲＮ２３で治療した被験者の平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルを図１４にグラフで示す。
１２回の各投与間隔中に、平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、７日目までに最大レベルに増加した後、次の投与前にベースラインに匹敵するレベルに減少した。１，２５（ＯＨ）２Ｄのピークレベルが最初から最後の投与間隔まで経時的に減少する傾向がある（表２４）。ベースライン（来診２、第１フェーズＩ／ＩＩ臨床治験の０日目）の平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、３６．４±１２．６４であり、各投与間隔の７日目に、５３．１±２０．２８ｐｇ／ｍＬ〜９２．０±４３．２１ｐｇ／ｍＬの範囲内で最大に増加した。血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルにおけるベースラインからの７日目の最大変化は、治験を通じて１９．６±１５．９１ｐｇ／ｍＬ〜６３．４±３５．５２ｐｇ／ｍＬの範囲内のままであった。
骨サブスタディにおいてプラセボで治療した１人の被験者について、１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、データ締切日時点（来診１０、投与間隔３、７日目）に完了した最終評価（５０．０ｐｇ／ｍＬ）までベースライン（６７．０ｐｇ／ｍＬ）からほとんど変化しないままであり、投与後レベルは、３４．０〜７２．０ｐｇ／ｍＬの範囲であった。
他の薬力学的結果
ベースラインでの全ての血清インタクトＦＧＦ２３レベルの平均値を記録した。全てのＦＧＦ２３ ＥＣＬＡアッセイは、血清中で錯体化または未結合であるかどうか、ＫＲＮ２３の存在下で内因性ＦＧＦ２３を測定する。標準（組換えヒトＦＧＦ２３［ｒｈＦＧＦ２３］）及び試料を緩衝マトリクス中で過剰量のＫＲＮ２３でインキュベートした後、アッセイで検出する。アッセイは、試料中の全ての内因性ＦＧＦ２３を表すＫＲＮ２３／ＦＧＦ２３複合体を測定する。血清中の内因性ＦＧＦ２３／ＫＲＮ２３複合体は、ｒｈＦＧＦ２３／ＫＲＮ２３複合体標準曲線に対して平行な線形応答を生じないため、アッセイは制限される。そのため、ＥＣＬＡを用いた総ＦＧＦ２３の全ての結果は、標準曲線に対するものであり、内因性ＦＧＦ２３濃度の増加または減少のトレンドを記述することにしか使用できない。
第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験においてＫＲＮ２３で治療すべきであった被験者について、平均の血清総インタクトＦＧＦ２３レベルは、ＫＲＮ２３での任意の治療前に、ベースライン（来診２、第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験の０日目）で９４．７±１０５．１９ｐｇ／ｍＬであった。本治験でＫＲＮ２３治療を完了後、この値は、第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験（来診１、投与間隔１、０日目）における最初の来診時に４２１００．０±３１５２４．８８ｐｇ／ｍＬに増加した。平均の血清総インタクトＦＧＦ２３は、一般的に、第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験におけるＫＲＮ２３投与回数の増加と共にさらに増加し、来診４５（投与間隔１２、０日目）（図１５Ａ）で最大の５１０８１８．８±３５４６４９．０７ｐｇ／ｍＬに到達した。
未結合ＦＧＦ２３のアッセイは、多量の結合ＦＧＦ２３の存在下で行うことが困難であり、遊離ＦＧＦ２３のレベルが、循環で実際に遊離しているか、またはアッセイで単に解離しているのかを確信するのは困難である。開発したようにアッセイを用いることで、未結合インタクトＦＧＦ２３の平均レベルは、ＫＲＮ２３で治療した被験者において来診３３を通じて総インタクトＦＧＦ２３のものと同様のパターンをたどった後；未結合形態の平均値は、来診３７、４１、及び４５で減少し、来診４９で再び上昇した（図１５Ｂ）。平均の未結合インタクトＦＧＦ２３レベルは、ベースラインで１０３．５±６２．７７ｐｇ／ｍＬであり、来診３３で２５２８３．３±３３８１０．４２ｐｇ／ｍＬに増加し、来診４９で２５６５７．９±１３４６１．８６ｐｇ／ｍＬに増加した。未結合インタクトＦＧＦ２３はＫＲＮ２３投与後に増加したが、総インタクトＦＧＦ２３のごく一部のみを表し；未結合形態の平均ピーク値は、総インタクトＦＧＦ２３のものの５％である。従って、これがこの文脈において正確であるかどうかを判断するのは難しい。
ＫＲＮ２３治療は、総インタクト及び未結合インタクトＦＧＦ２３の見かけの増加にかかわらず、血清リンレベルの増加をもたらし、これは、遊離かどうかにかかわらず、見かけの遊離ＦＧＦ２３が、この文脈ではインビボで活性しなかったことを示唆するであろう。
血清リン及びＴｍＰ／ＧＦＲにおけるＫＲＮ２３治療の効果とは異なり、以下のＰＤパラメーター：血清中の２５（ＯＨ）Ｄ、総カルシウム、イオン化カルシウム、カルシトニン、及びｉＰＴＨ、または尿中の他のＰＤパラメーター、例えば、２時間尿中ＴＲＰ、２時間尿中カルシウム／クレアチニン比、２時間尿中ＦＥＣａ、２４時間尿中リン、２４時間尿中カルシウム、２４時間尿中クレアチニン、２４時間尿中カルシウム／クレアチニン比について、ＫＲＮ２３で治療した被験者の経時的な平均値にトレンドは見られなかった。
ＫＲＮ２３で治療した被験者の経時的に平均のエストラジオール、テストステロン、遊離テストステロン、及びＳＨＢＧについても計測した。これらのパラメーターにおける経時的な平均値にトレンドは見られなかった。
骨バイオマーカー
骨形成パラメーター：骨形成及び吸収のバイオマーカーは、治療効果を示す指標となり得る。経時的な平均の血清ＢＡＬＰ、Ｐ１ＮＰ、及びオステオカルシン値を測定した。Ｐ１ＮＰは、第１フェーズＩ／ＩＩ臨床治験のベースライン時の６９．６±２９．８６ｎｇ／ｍＬから来診１７に最大で１７０．４±１００．７９ｎｇ／ｍＬに増加した。これは、１４８．１％のパーセント変化の増加を表す。値は、来診３３／投与間隔９／０日目に１５５．２±７５．９５ｎｇ／ｍＬに上昇したままだった。血清オステオカルシン及びＢＡＬＰも増加したが、治験を通じてそれ程ではなかった。これらのデータは、ＫＲＮ２３が骨形成を増加させ、骨質を改善し、くる病の変化に拮抗し、骨の形状を回復させる機序になり得ることを示唆している。
骨吸収パラメーター：経時的な平均の血清ＣＴｘ及びＮＴｘ値を測定した。ＫＲＮ２３で治療した被験者について、血清ＣＴｘにおいて（来診１／投与間隔１／０日目の８４５．１±３４５．７７ｐｇ／ｍＬから、来診１７／投与間隔５／０日目の１０９０．５±５７０．５５ｐｇ／ｍＬ、及び来診３３／投与間隔９／０日目の１１５７．２±５４２．２５ｐｇ／ｍＬに）数値の増加が見られた。これらのＣＴＸの変化は、ベースラインからおよそ７３％の変化程度である。ＮＴｘも（来診１／投与間隔１／０日目の２４６．２±５７８．６５ｎｍの骨コラーゲン相当量［ＢＣＥ］／ｍＬから、来診１７／投与間隔５／０日目の３４６．５±６１１．５０ｎｍ ＢＣＥ、及び来診３３／投与間隔９／０日目の３４４．６±５６６．５５ｎｍ ＢＣＥに）増加した。
これらのデータは、ＫＲＮ２３が骨吸収並びに骨形成を増加させることを示し、この骨再形成及び代謝回転の増加、さらには、血清リンレベルの正常化は、ＫＲＮ２３が骨質を改善させる重要な生理学的機序であると思われる。
有効性結論
・本治験では、血清リンは、有効性エンドポイント及び重要なＰＤパラメーターと考える。治療前のベースラインでは、被験者全員は、＜２．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルを有した。ＫＲＮ２３投与後、最大ＰＤ効果（ピーク）の時間は、７日目及び１４日目に観察された。ＫＲＮ２３の初回投与後、被験者の７７．１％（７日目）及び８１．８％（１４日目）は、＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬの標的範囲内で血清リンレベルが増加した。このピーク効果は、４５．５％〜８１．８％の範囲で、治験を通じて比較的一致していた。標的範囲内の被験者のパーセントは、７日目と１４日目で概ね同様であった。＞４．５ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルは、治験中の任意の時点で、任意の被験者に対して報告されなかった。
薬力学
・ＴｍＰ／ＧＦＲは、過剰ＦＧＦ２３のＫＲＮ２３介在阻害がリンレベルを増加させる提案された機序である。ＫＲＮ２３は、ＴｍＰ／ＧＦＲを増加させ；ＴｍＰ／ＧＦＲの増加の大きさは、臨床的に意義あるものであり、血清リンの増加と密接に相関している。観察されたＰＤ効果は、リン再吸収及び遠位尿細管のレベル血清リンを増加させることで所望の臨床効果を達成するＫＲＮ２３作用の推定機序を強調するものである。
・１２回の各投与間隔中に、平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、７日目までに最大レベルに増加した後、次の投与前にベースラインに匹敵するレベルに減少した。１，２５ビタミンＤは、ＫＲＮ２３の作用機序に密接に関連した別のＰＤパラメーターであり、同じ時間プロファイルに従って増加し：投与後に急速に増加し、７日目にピークに達し、投与間隔の終了時にベースラインレベルの方に戻った。
・全ての他の代謝パラメーター：２５（ＯＨ）Ｄ、総カルシウム、イオン化カルシウム、カルシトニン及びｉＰＴＨ；ＴＲＰ、カルシウム／クレアチニン比、及びＦＥＣａの尿中測定値、及びリン、カルシウム、クレアチニン、及びカルシウム／クレアチニン比の２４時間尿中測定値は、著しく変化しなかった。従って、的外れの効果は観察されなかった；的確なＰＤパラメーター、本質的には、血清リン及び１，２５（ＯＨ）２Ｄの変化は、カルシウム及びＰＴＨの代謝を変化させないように思われた。
・骨形成のマーカーは、特に、Ｐ１ＮＰを著しく増加させ、骨吸収のマーカー、ＣＴｘ及びＮＴｘは、少ない程度ではありながらも増加した。これらの結果は、ＫＲＮ２３が骨再形成を増加させ、ＸＬＨを有する患者の骨質に改善をもたらし得ることを示す。
骨石灰化の最大の正味産生には、ＸＬＨの治療における投与サイクルにわたって一貫して十分なレベルのリン酸塩を必要とする。本発明は、総結合ＦＧＦ２３レベルの変化がＫＲＮ２３による治療中に発生し、適切なＫＲＮ２３薬物ＰＫとまだ残っているＰＤ効果にもかかわらず、各月１回サイクルの後半中に治療効果が減退する典型的なパターンを持つ複雑なＰＫ／ＰＤ関係をもたらすという観察に部分的に基づいている。
ＦＧＦ２３産生は、先行データによって予測し得ない方法でＰＫ／ＰＤの管理の恩恵を受けることができる抗ＦＧＦ２３作用物質による治療中に増加する。ＫＲＮ２３モノクローナル抗体薬物ＰＫデータは、月１回の注射が適切な療法であり得ると示しているが、増加したレベルの血漿結合ＦＧＦ２３レベルは、血清リン促進活性の低下をもたらし得る。血清リンプールは、全身リン酸塩のたった１％しか含まず、１カ月サイクルの後半中に降下し始めると思われ、投与サイクルの後半中に正味の骨形成活性が低下する可能性につながる。リン酸塩レベルは、リン酸塩レベルの低下をサポートするために身体で誘導された骨のリン酸塩回復のパターンが変化しているため、身体の正味のリン酸塩バランスの影響を理解するのに十分なほど減少しないかもしれない。月１回投与し、月２回の投与を使用しないことを教示するための予測されたＰＫ予測計画にもかからわず、反復投与にわたってリン酸塩の低下が増すことと、より高い結合ＦＧＦ２３産生とを示すＰＤデータにより、抗ＦＧＦ２３作用物質の潜在的に最適な投与は、ｑ２週の投与になる。これは、子供に特に有利であり得る。
起こっている第２の変化は、投与サイクル中がリン酸再吸収の低下の可能性であり、これは、月１回投与サイクルの後半中にリン酸塩輸送体発現が少なくなったことによると思われる。輸送体発現が増加し、減少する循環パターンは、効率の低い循環産生をもたらした後、サイクルが輸送体発現を上昇させ、ＫＲＮ２３の落下効果中に輸送体を再び劣化させる際にＮａ Ｐｉ共輸送体の破壊をもたらす可能性がある。月２回のより頻繁な投与中には、ＦＧＦ２３のより効率的な一貫した捕捉が、ＦＧＦ２３の月１回の投与効果と不釣り合いな安定した輸送体発現の増加からリン酸再吸収の累積の正味の効果をもたらすであろうと予想される。２週間ごとに輸送体の破壊を引き起こさないことで、輸送体タンパク質自身のＰＫは、輸送体の累積効果とリン酸再吸収の不釣り合いな恩恵をもたらすかもしれない。従って、血清リンの比例するＰＤ効果の代わりに、より頻繁な投与は、ＮａＰｉ輸送体の累積を低下させることなく累積効果をもたらし、より高いリン酸塩レベルの達成が可能になるであろう。
ＦＧＦ２３関連疾患を治療する既存の解決策は、月１回の投与が十分であると明確に示唆しているフェーズ１の固体ＰＫデータに基づいたＦＧＦ２３抗体（例えば、ＫＲＮ２３）の月１回投与であり、成人などの、特に、必要とするリン酸塩が少ない患者に効果的な用量であり得る。より高いリン酸塩を必要とする小児または患者では、結合ＦＧＦ２３の増加したレベル、及びリン酸塩の関連ＰＤ曲線は、月２回の投与間隔で最適に供給されるであろう。
本発明は、月１回よりも月２回での予想外の投与効果への新たな見識である。これは、血清リンのＡＵＣ、かつ、骨治療の恩恵の可能性によって決定された月１回の投与効果に不釣り合いである同じ月１回の総用量に対してリン酸塩レベルが増加し、かつ、安定的であることを通じて現れるであろう。
実施例３：ＫＲＮ２３によるＦＧＦ２３の阻害が、骨再形成の増加をもたらす
本発明の発明者らは、成人及び子供においてＸＬＨにより引き起こされた骨軟化症の病理学的変化の治療及び回復において、ＦＧＦ２３（例えば、ＫＲＮ２３）に対する抗体によるＦＧＦ２３の阻害の特異的効果を観察した。ＫＲＮ２３による治療は、以前から知られるように、リン酸塩ホメオスタシスを矯正する。新規及び予想外のことは、ＦＧＦ２３の阻害が、Ｐ１ＮＰ（血清１型プロコラーゲン／Ｎ末端）及びオステオカルシンなどの骨形成のマーカーの増加や、骨再吸収ＣＴＸ（カルボキシ末端コラーゲン架橋）のマーカーの増加も観察されると共に骨再形成の著しい増加を活性化している。以下の表１８〜２１を参照されたい。低い骨再形成は、骨軟化症の組織病理学的変化の特徴、特に、石灰化した骨が無いことによる破骨細胞活性が欠けていることを説明する長い「石灰化」遅延時間や類骨及び類骨壁厚の増加を反映している。ＦＧＦ２３の遮断により、腎リン酸再吸収、１，２５ビタミンＤ産生、及び増加した骨石灰化を変化させることが予測されるが、臨床データは、骨再形成（形成及び再吸収）の増加が、骨軟化症に拮抗し、骨構造、骨密度を回復させ、湾曲を防ぎながら骨質を改善し、骨格の正常な形成を可能にすることも示唆している。
骨形成及び再吸収の増加は、ＸＬＨの基礎となる骨病理学、特に、骨軟化症が治癒され得る新規の追加の機序である。本発明は、骨形成及び再吸収のマーカーの測定が、骨の再生や、石灰化の低い骨の正常な層板に石灰化した骨への置換を監視する方法でもあり得ることも前提としている。これは能動的に管理され得るため、ＫＲＮ２３または同様のＦＧＦ２３作用物質の投与は、骨治癒に関連するスコアとして骨吸収及び合成マーカーに基づいて調節してもよい。
ＸＬＨの以前の治療は、経口リン酸塩及びカルシトリオールまたは他のビタミンＤ類似体による補充療法からなり、この治療は、ＸＬＨ疾病のいくつかの側面を改善し得るが、骨再形成を増加させないため、この患者において骨軟化症を改善し得るのかどうか不明である。骨軟化症は、ＸＬＨを有する成人患者が、骨疼痛、微小及び疲労骨折、骨折治癒の遅延を有する理由である。ＸＬＨモデルマウスにＦＧＦ２３抗体を投与する以前の研究での生検データは、骨軟化症から正常な骨への変化、及び骨再形成の組織形態計測の変化を示している。Ａｏｎｏら（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ａｎｔｉ−ＦＧＦ２３ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉｃ Ｒｉｃｋｅｔｓ／Ｏｓｔｅｏｍａｌａｃｉａ． Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ． ２００９）を参照されたい。
本発明は、これらの臨床的な合併症を改善するために、骨再形成を活性化する必要があることを示している。この効果は、現在の標準治療では決して観察されていない。従って、本発明は、骨再形成を活性化することによって、ＸＬＨなどの異常なＦＧＦ２３シグナル伝達による疾患を治療するための新規方法を提供する。例えば、図１６によれば、ＸＬＨ患者において、増加したＦＧＦ２３ポリペプチドは、血清リン及び１，２５（ＯＨ）２Ｄの減少をもたらし、骨石灰化の減少（骨軟化症）をもたらす。骨軟化症は、次に、破骨細胞活性及び骨再形成の減少をもたらす。その結果、患者は、骨奇形、骨折、及び遅い骨折治癒などの弱い骨質や疼痛を経験する。ＫＲＮ２３などの抗ＦＧＦ２３リガンドの投与は、ＦＧＦ２３シグナル伝達を阻害し、血清リン及び１，２５（ＯＨ）２Ｄを正常化するため、骨石灰化の増加と骨軟化症の矯正をもたらす。その結果、破骨細胞及び骨芽細胞活性及び骨再形成は、上方調節され、質の悪い骨を正常な層板骨と置換し、最終的には、骨の健康の回復及び骨折治癒をもたらす。
実施例４：Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）を有する小児患者における抗ＦＧＦ２３抗体、ＫＲＮ２３の薬力学及び安全性を評価するための無作為化、非盲検、用量設定、フェーズ２治験
論理的根拠：
Ｘ染色体連鎖低リン血症（ＸＬＨ）は、腎リン酸消耗の疾患であり、くる病の最も一般的な遺伝性形態である。ＸＬＨ患者において、高循環レベルの線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ２３）は、腎臓の正常なリン酸再吸収を損ねる。低リン酸血症及び低正常循環１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（１，２５（ＯＨ）２Ｄ）レベルは、典型的な生化学的所見である。低血清リンレベルは、骨の低石灰化や、くる病、下肢の弯曲、及び小人症を含む関連異常をもたらす。現在の標準治療（ＳＯＣ）療法は、適切な用量の活性ビタミンＤ代謝産物と組み合わせた経口リン酸塩の複数回毎日投与からなる。ＳＯＣ療法は、高い法令遵守及びモニタリングと共に行うと、骨疾患を改善できるが、骨異常及び成長異常に完全に対応しないことが多く、疾病の病態生理学的原因：高ＦＧＦ２３レベルによって誘導された腎リン酸消耗を標的にもしない。ＳＯＣ療法は、腎石灰沈着症、高カルシウム尿症、及び副甲状腺機能亢進症などの潜在的なリスクを回避するために慎重なモニタリングも必要とする。より効果的で、安全かつ便利な治療が明確に必要とされている。
ＫＲＮ２３は、結合してＦＧＦ２３活性を阻害することによって正常なリン酸塩ホメオスタシスを回復させてＸＬＨを治療するために開発されている組換え完全ヒトモノクローナルＩｇＧ１抗体である。３つの臨床試験を、ＸＬＨを有する成人に実施している。フェーズ１治験は、ＫＲＮ２３の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを確立した。フェーズ１／２治験及び関連延長治験は、リン酸塩代謝におけるＫＲＮ２３の薬力学（ＰＤ）、及びリン酸塩−カルシウム鉱物制御系の関連測定値を評価した。これらの治験からの安全性データは、最大で１．０ｍｇ／ｋｇの単回投与及び月１回の反復投与におけるＫＲＮ２３は、ＸＬＨ成人被験者で耐容性良好であった。ＫＲＮ２３は、骨生理学、構造及び機能の改善が期待されるように、血清リンレベルを十分に増加させた。これらのデータは、ＸＬＨに関連する最も重篤な身体及び健康の症状を経験する子供においてＫＲＮ２３の治療利益を評価するためにさらなる治験の開始を支持するものである。現在は、小児ＸＬＨ患者において承認された治療はなく、未だ満たされない高い医療ニーズがある。
ＸＬＨを有する成人及び子供は、同じ原因となる欠陥を有するが、異なるステージの疾患である。幼少期には、正常なリンレベルは骨形成を促進するためにより高いが、成人では、正常な範囲は、骨形成に対する需要が減少するのと同期してより低くなる。従って、プラトー状態にせずに治療効果を最大にし、血清リンレベルを正常な範囲近くにし、トラフ値を最小にするために、より少量で、より頻繁な投与が、小児低リン酸血症性患者には好ましい。このフェーズ２治験は、複数回投与で投与したＫＲＮ２３のＰＤ及び安全性、及び小児ＸＬＨ患者の投与レジメンについて調べる。
本治験は、２つの期間：１６週の個別用量設定期と４８週の治療期とからなる。ＫＲＮ２３の用量反応は、３つの初回用量レベルで評価する。月１回（Ｑ４）及び週２回（すなわち、隔週；Ｑ２）の投与計画についても比較する。ＫＲＮ２３投与は、血清リンレベルに従って、必要に応じて４週間ごとに個別に調整される。その目的は、カルシウム制御系の変化を最小にしながら、安定した血清リンレベルを標的範囲で達成することである。本治験で採取したデータは、投与戦略を確立し、ＸＬＨを有する子供においてフェーズ３臨床試験の設計及びエンドポイント選択の情報を提供する。
目的
治験の目的は：
・安全性及びＰＤ効果に基づいて、小児ＸＬＨ患者のＫＲＮ２３の用量及び投与計画を同定すること
・異所性鉱質形成リスク、心臓血管効果、及び免疫原性プロファイルを含む、ＸＬＨを有する子供を治療するためのＫＲＮ２３の安全性プロファイルを確立すること
・小児ＸＬＨ患者の月１回（Ｑ４）及び週２回（Ｑ２）投与レジメンで試験したＫＲＮ２３用量のＰＫ／ＰＤを特徴付けること
・小児ＸＬＨ患者の骨の健康のマーカーでＫＲＮ２３治療のＰＤ効果を決定すること
・骨の健康及び奇形、筋力、及び運動機能へのＫＲＮ２３の臨床効果の予備評価を得ること
・小児ＸＬＨ患者の疼痛、身体障害、及び生活の質を含む、患者報告アウトカムへのＫＲＮ２３の効果の予備評価を得ること
治験設計及び方法論：
本治験は、無作為化した、多施設、非盲検、用量設定、フェーズ２治験である。本治験は、ＸＬＨを有する５〜１２歳の思春期前の子供で実施し、合計で６４週間の月１回（Ｑ４、２８日±３日）または週２回（Ｑ２、１４日±２日）の皮下（ＳＣ）注射を介して投与したＫＲＮ２３のＰＤ及び安全性を評価する。本治験は、１６週の個別用量設定期と、それに続く４８週の治療期とからなる。本治験は、ＸＬＨと骨疾病のＸ線写真の証拠とを有するおよそ３０人の小児患者を登録する。被験者は、無作為化する前に、かつ治験期間を通じて経口リン酸塩及びビタミンＤ代謝産物療法を中断する必要がある。
本治験では３つのコホートが存在する（ｎ＝コホート当たり１０）；各々は、Ｑ４（ｎ＝５）及びＱ２（ｎ＝５）投与群である。被験者は、各コホート内のＱ４またはＱ２投与計画に、１：１に無作為化し；無作為化は、被験者の性別で階層化する。性別バランスのレベルを維持するために、いずれかの性の２０人未満の患者を本治験に登録することができる。コホートは、順次登録される。第１コホートは、最低用量（０．２ｍｇ／ｋｇ Ｑ４及び０．１ｍｇ／ｋｇ Ｑ２）を調べ、最初に登録される。この小児母集団における追加の予防測定として、第２コホート（０．４ｍｇ／ｋｇ Ｑ４及び０．２ｍｇ／ｋｇ Ｑ２）は、第１コホートの４番目の被験者が４週目の来診を完了するまで投与を開始できない。第３コホートは、最も高い初回用量（０．６ｍｇ／ｋｇ Ｑ４及び０．３ｍｇ／ｋｇ Ｑ２）を投与する。
最初の１６週の用量設定期は、標的のピークＰＤ効果を達成するのに必要なＫＲＮ２３用量を同定することを目的とする。その目的は、血清リンレベルを標的範囲に維持する個別化されたＫＲＮ２３用量を同定することであるが、用量レベルは、Ｑ４レジメンの２．０ｍｇ／ｋｇ及びＱ２レジメンの１．０ｍｇ／ｋｇを超えるべきではない。本治験の標的とする空腹時血清リンの範囲は、ＫＲＮ２３のピークＰＤ効果に基づいて、３．５〜４．５ｍｇ／ｄＬ（１．１３〜１．４５ｍｍｏｌ／Ｌ）である。
用量は、投与２週間後の（ピーク値）空腹時血清リンレベルに基づいて、必要に応じて４週間ごとに調整される。ＫＲＮ２３用量の用量設定スキーム（表２２）は、ピークの空腹時血清リンレベルが標的範囲外であるべきであるガイドラインとして使用される。血清リンレベルは上昇しているが、用量設定期の終わりまでに許容可能な標的範囲にまだ到達していない場合、用量設定は、安全性に関する懸念がないならば、標的範囲に到達するまで治療期に継続することができる。
用量設定期の最後に、３０人の被験者の集団は、本質的に、１５人の被験者の２つの群からなり、各々は、Ｑ４週間またはＱ２週間の頻度のいずれかで、ＫＲＮ２３の投与を個別に最適化した。安全性の分析及びＰＤデータの選択について、用量設定期（１６週目）の終了時に計画する。治療期の最初の２４週間後（４０週目）に第２分析を計画し、治療結果をベースライン（投与前）と比較する。図１７は、全体治験設計の概略図を提供する。
被験者数：
およそ３０人の小児被験者を本治験に登録する。治験から離脱するまたは治験から除外する被験者は、その都度置き換えてもよい。
試験対象及び除外の診断及び基準：
本治験に参加する資格のある個人は、以下の基準の全てを満たさなければならない：
１）成長板が開いたものを含む５〜１２歳の男性または女性
２）乳房及び精巣発生（≧８歳の子供においてのみ評価した）に基づいてタナーステージ２以下
３）以下のうちの１つによって支持されたＸＬＨの診断：
・適切なＸ連鎖遺伝を有する患者または直接関連する家族の一員のＰＨＥＸ変異を確認
・Ｋａｉｎｏｓアッセイによる血清ｉＦＧＦ２３レベル≧３０ｐｇ／ｍＬ
４）以下のものを含むＸＬＨに関連する生化学的所見：
・血清リン≦２．８ｍｇ／ｄＬ（０．９０４ｍｍｏｌ／Ｌ）＊
・年齢調整された正常な範囲内の血清クレアチニン＊
５）年齢及び性別の身長＜２５％百分率（ＣＤＣ２０００当たり）で定義された小人症
６）手首及び／または膝のくる病、及び／または大腿骨／脛骨の湾曲を含む、能動骨疾患のＸ線写真の証拠
７）歴史的成長、生化学的及び放射線データ、及び病歴を収集するための事前診療記録へのアクセスを自ら進んで提供する意思があること
８）治験の性質を説明した後、かつ、任意の研究関連の手順前に書面または口頭での同意（可能な場合）及び法的に権限のある代表者による書面によるインフォームド・コンセントを提供すること
９）治験責任医師の意見で、治験の全ての態様を完了すること、治験来診スケジュールを忠実に守ること、かつ評価を遵守することを自ら進んでできなければならない。

以下の除外基準のいずれかを満たす個人は、本治験に参加する資格がない：
１）スクリーニング来診２前の１４日以内に薬理学的ビタミンＤ代謝産物または類似体（例えば、カルシトリオール、ドキセルカルシフェロール、及びパリカルシトール）を使用；スクリーニング期中に洗浄を行う
２）スクリーニング来診２前の７日以内に経口リン酸塩を使用；スクリーニング期中に洗浄を行う
３）スクリーニング来診１前の７日以内に水酸化アルミニウム制酸薬（例えば、Ｍａａｌｏｘ（登録商標）及びＭｙｌａｎｔａ（登録商標））、全身性コルチコステロイド、及びチアジドを使用
４）スクリーニング来診１前の１年以内に成長ホルモンを使用
５）スクリーニング来診１前の２年間に６カ月またはそれ以上にわたってビスホスホネートを使用
６）以下のスケールに基づいて、腎臓超音波検査グレード≧３の腎石灰沈着症の存在：
０＝正常
１＝延髄錐体のまわりにかすかな高エコー源性隔壁
２＝錐体全体をぼんやりと満たすエコーを有するより強いエコー源性隔壁
３＝錐体を通じて均一に強いエコー
４＝石形成：錐体の先端でのエコーの孤立病巣
７）臨床試験期内に、ステープル、８つのプレートまたは骨切り術を含む、計画または推奨された整形外科手術
８）年齢調整された正常限界外の血清カルシウムレベルと定義された低カルシウム血症または高カルシウム血症＊
９）治験責任医師によって判断された三次性副甲状腺機能亢進症の証拠
１０）スクリーニング来診１前の２カ月以内にＰＴＨ（例えば、Ｓｅｎｓｉｐａｒ（登録商標）、シナカルセット）を抑制する薬物を使用
１１）治験責任医師の視点から、被験者の治療の遵守を低くするまたは治験を完了させないリスクが高い任意の状態の存在または履歴
１２）治験参加に干渉するかまたは安全性に影響を及ぼす併発疾患または状態の存在
１３）ヒト免疫不全ウイルス抗体、Ｂ型肝炎表面抗原、及び／またはＣ型肝炎抗体に対して陽性
１４）反復感染歴または感染しやすい傾向、または公知の免疫不全歴または免疫不全になりやい傾向
１５）スクリーニング来診１前の９０日以内に治療モノクローナル抗体を使用、または、任意のモノクローナル抗体に対するアレルギーまたはアナフィラキシー反応歴
１６）治験責任医師の判断において、被験者の副作用のリスクを高くするＫＲＮ２３賦形剤に対しる任意の過敏症の存在または過敏症歴
１７）スクリーニング前の３０日以内に任意の治験薬または治験医療機器を使用、または、全ての予定された治験評価の完了前に任意の治験薬が必要である。
＊スクリーニング来診２で採取した一晩空腹時（最低８時間）値に基づいて決定される基準
治験薬、用量、及び投与方式：ＫＲＮ２３は、１０ｍｇ／ｍＬまたは３０ｍｇ／ｍＬの濃度で１ｍＬのＫＲＮ２３を含有する単回使用５ｍＬバイアル中の滅菌した、透明の、無色で、保存料無しの溶液である。被験者は、ＳＣ注射を介して腹部、上腕及び大腿部に治験薬を受け；注射部位は、注射ごとに回転させる。被験者は、最低用量群から始めたコホートに連続して登録され、投与計画（Ｑ２またはＱ４）（図２．１）に無作為化した後、３．５〜４．５ｍｇ／ｄＬ（１．１３〜１．４５ｍｍｏｌ／Ｌ）の範囲の標的一晩空腹時血清リンを達成するように個別に用量設定する。このプロトコルで許された最大用量は、Ｑ４レジメンで２．０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ２レジメンで１．０ｍｇ／ｋｇである。
対照療法、用量及び投与方式：治験設計は非盲検で；被験者全員が治験薬を受ける。プラセボまたは対照療法は本治験で投与しない。
治療期：本治験は、２つの期間：１６週の個別用量設定期と、それに続く４８週の治療期とからなる。本治験において計画した治療期間は、６４週間である。
評価の基準：
薬力学＊：
・血清リン
・血清１，２５（ＯＨ）２Ｄ
・尿中リン
・リン酸再吸収：リン酸塩の糸球体濾過量に対する腎細管最大再吸収率（ＴｍＰ／ＧＦＲ）、及びリン酸の腎尿細管再吸収（ＴＲＰ）
・骨バイオマーカー：１型プロコラーゲンのＮ−プロペプチド（Ｐ１ＮＰ）、１型コラーゲンのカルボキシ末端架橋テロペプチド（ＣＴｘ）、及びアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）
血液及び尿は、投与計画当たり、８時間の最小一晩空腹時間後と、薬剤投与（該当する場合）前とに採取すべきである。
有効性−骨の健康：
・成長：身長、座高、腕の長さ、及び脚の長さを測定する。身長に基づいた成長率は、病歴データが入手可能であれば、治療前及び治療後に得られる。
・くる病及び骨端（成長板）異常の重篤度：疾患特異的な定性的なＸ線画像所見の全般的変化（ＲＧＩ−Ｃ）スコアリングシステム及び栄養性くる病のために開発した修正バージョンスケールを用いて、両側性の後前方向（ＰＡ）手／手首及び前後方向（ＡＰ）膝Ｘ線写真のセントラルリーディング
・顆頭間距離及び果間距離で評価された下肢変形。直立した長下肢の画像で観察された下肢変形及び湾曲に関する特定の異常についても、定性的なＲＧＩ−Ｃスコアリングシステムを用いて評価する
・前腕及び脛骨のＸｔｒｅｍｅＣＴで評価した（機器の利用可能性に応じて選択部位で行った）皮質及び骨梁小室での骨鉱物の密度または含有量
有効性−臨床アウトカム：
・歩行能力：６分歩行試験（６ＭＷＴ）の総距離及び予測正常パーセント
・粗大運動機能：走行速度、敏捷性、及び強度を評価するための、運動神経向上のＢｒｕｉｎｉｎｋｓ−Ｏｓｅｒｅｔｓｋｙ試験−第２版（ＢＯＴ−２）サブテスト
・筋力：以下の筋肉群：胆大把持、膝屈曲、膝伸展、股関節屈筋、股関節伸展、及び股関節外転筋における両側性のハンドヘルドダイナモメトリー（ＨＨＤ）
・機能的障害及び疼痛：北米小児整形外科学会小児のアウトカムデータ収集器（ＰＯＳＮＡ ＰＯＤＣＩ）
・健康関連の生活の質：子供の健康調査用のＳＦ−１０（ＳＦ−１０）
薬物動態：
・血清ＫＲＮ２３（投与前レベル）
安全性評価：安全性は、有害事象（ＡＥ）及び重篤な有害事象（ＳＡＥ）の発生、頻度、及び重症度によって評価され、例えば、ベースラインから予定された時点までの臨床的に有意な変化である。一般的安全性の変数としては、
・バイタルサイン及び体重
・区間病歴及び身体検査
・ＧＦＲ
・対象となる追加のＫＲＮ２３／ＸＬＨ生化学的パラメーター（血清２５（ＯＨ）Ｄ、アミラーゼ、クレアチニン、及びｉＦＧＦ２３［合計、結合、及び非結合］）を含む、化学、血液学、及び尿検査
・抗ＫＲＮ２３抗体試験及び用量制限毒性
・併用薬が挙げられる。
異所性石灰化安全性評価としては、
・腎臓超音波
・ＥＣＨＯ及びＥＣＧ
・血清カルシウム、リン及びｉＰＴＨ；尿中カルシウム及びクレアチニンが挙げられる。
データモニタリング委員会（ＤＭＣ）：代謝性骨疾患及び子供への臨床試験の実施における専門家を含む独立したＤＭＣは、トライアルを通じて定期的に被験者の安全性を監視するために、アドバイザーの立場として行動する。ＤＭＣは、四半期データレビューの会合にも参加する。
統計方法：統計評価の完全な説明については、統計解析計画書で提供される。
試料サイズ：コホート当たり１０の試料サイズは、０．０５の両側有意水準で標準偏差を０．７ｍｇ／ｄＬ以下と想定すると、少なくとも０．８ｍｇ／ｄＬのベースラインからの血清リン増加を検出するために少なくとも９０％の検出力を提供する。加えて、３０人の被験者（Ｑ４またはＱ２レジメン当たり１５人の被験者）の総試料サイズは、０．４の標準偏差と０．０５の両側有意水準を想定すると、２つの投与計画間の０．５ｍｇ／ｄＬの差を検出するために少なくとも９０％の検出力を提供する。リン酸塩及び鉱物制御は、ＫＲＮ２３によるこれまでの臨床経験に基づいて適切に検出される。骨の健康に対する検出力の程度は、未知の予想される作用程度に依る。しかしながら、適切なリン酸塩制御の検出力は、経口リン酸塩置換療法により以前の経験に基づいて、骨の健康が改善する可能性をもたらすべきである。
薬力学的及び有効性分析：２つの投与計画を比較するＰＤ及び有効性の分析は、ベースラインとして０週目とともに４０週目及び６４週目に行う。加えて、ＰＤ及び安全性データは、各コホートが用量設定期（１６週目）を完了した後に、コホートごと、及びコホート内の投与レジメンごとにまとめる。記述統計学を使用して、データをまとめる。連続変数では、平均値、標準誤差、中央値、最小値、及び最大値を提供する。離散データでは、頻度及びパーセント分布を提供する。経時変化、及び有効性とＰＤ変数との関連性をまとめ、評価する。
安全性分析：任意の量の治験薬を受ける被験者全員が安全性分析に含まれる。各コホート及びコホート内の各投与レジメンの安全性を評価する。
実施例１の複数回投与の用量漸増フェーズ１／２治験は、ＸＬＨ成人被験者で行った。ＫＲＮ２３は、２８日に１回投与した４回の被験者内漸増用量（０．０５ｍｇ／ｋｇ→０．１ｍｇ／ｋｇ→０．３ｍｇ／ｋｇ→０．６ｍｇ／ｋｇ）のＳＣ投与後に耐容性良好であった。標的範囲（＞２．５〜≦３．５ｍｇ／ｄＬ）の血清リンレベルを有するＫＲＮ２３で治療した被験者の割合は、ＫＲＮ２３用量レベルとともに増加したが、任意の時点で、任意の被験者で正常の上限（４．５ｍｇ／ｄＬ）を超えなかった。血清ＫＲＮ２３濃度と血清リンレベルとの直接的なＰＫ−ＰＤ関係は、本治験で確認された。実施例２の関連延長治験において、月１回投与したＫＲＮ２３の最大で１．０ｍｇ／ｋｇの用量は、４８週の期間にわたってＸＬＨ成人被験者で耐容性良好であった。
ＸＬＨを有する成人及び子供は、同じ原因となる欠陥を有するが、異なるステージの疾患である。幼少期には、正常なリンレベルは骨形成を促進するためにより高いが、成人では、正常な範囲は、骨形成に対する需要が減少するのと同期してより低くなる。ＸＬＨの治療の成功には、血清リンレベルの持続的な増加が必要である（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら２０１１）。血清リンレベルを正常な範囲近くに維持することによって治療効果を最大にし、かつ、トラフ値を最小にするために、より少量で、より頻繁な投与が、小児低リン酸血症性患者には好ましい。従って、本治験の重要な目的は、小児ＸＬＨ患者の両方の最適なＫＲＮ２３投与計画を決定し、高カルシウム尿症、高カルシウム血症、及び副甲状腺機能亢進症を回避しながら、くる病の改善及び関連臨床的帰結を可能にする許容可能な用量を同定することである。
本治験の用量設定目的は、血清リンレベルを標的範囲で維持する個別化されたＫＲＮ２３用量を同定することである。用量設定は、３つの別個の投与コホートで漸進的に行われ、各々は、異なる初回用量レベルと投与レジメン（Ｑ４またはＱ２）を評価する。３つ全てのコホートの開始用量は、成人ＸＬＨで治験した最も高い用量（１ｍｇ／ｋｇを月１回投与）を下回る。用量漸増は、血清リンのＰＤ効果、安全性、及び忍容性に基づいて個別に用量設定される。投与は、段階的に開始し、かつ用量設定し、１６週間にわたって制御し、年齢調整された正常の上限を下回る標的範囲で血清リンレベルを達成する。
成長している子供におけるリンの必要量は成人よりも多いため、設計は、用量レベルをＱ４レジメンでは２．０ｍｇ／ｋｇに、Ｑ２レジメンでは１．０ｍｇ／ｋｇに増加させる提案を提供する。成人ＸＬＨ患者におけるＫＲＮ２３の以前の研究は、任意の「的外れ」効果について示していなかったため、安全性プロファイルは、ＰＤ効果、本質的に、増加した血清リンにのみ関連していると予測される。血清リンの標的範囲は、正常の上限をはるかに下回って定義されるため、用量関連の安全性の問題の可能性は低い。これらの以前の研究からのリン酸塩制御の有効性データは、リン酸塩代謝が明確に異なる小児患者の場合であっても、またはそうでなくても０．６〜１．０ｍｇ／ｋｇで有効なプラトー状態が存在することも示唆している。従って、成人データに基づいて予測された用量が、許容された安全範囲内で許容可能な血清リン増加を達成するのに不十分である場合には、プロトコルは、徐々により高い用量に適応するような柔軟性を制限することができる。
本治験の標的の空腹時血清リン範囲は、投与後およそ１４日目であるＫＲＮ２３のピークＰＤ効果に基づいて、３．５〜４．５ｍｇ／ｄＬ（１．１３〜１．４５ｍｍｏｌ／Ｌ）である。標的範囲は、子供における正常値の低〜中の範囲を表す。このレベルは、異所性鉱質形成のリスクを最小限にしながら、くる病及び他の骨欠陥を改善するのに十分である。用量は、以下に詳述する用量設定スキームに従って、投与２週間後の（ピーク値）空腹時血清リンレベルに基づいて、必要に応じて４週間ごとに調整される。用量設定スキーム（表２３）は、ピークの空腹時血清リンレベルが標的範囲外であるべきである用量調節のガイドラインとして使用される。血清リンレベルは上昇しているが、用量設定期の終わりまでに許容可能な標的範囲にまだ到達していない場合、用量設定は、安全性に関する懸念がないならば、標的範囲に到達するまで治療期に継続することができる。
本治験において計画した治療期間は、６４週間である。本治験は、２つの期間：１６週の個別用量設定期と、それに続く４８週の治療期とからなる。
実施例５：小児フェーズ２治験からの予備結果
この実施例は、ＫＲＮ２３のＱ２Ｗ投与が、血清リンレベルの安定かつ着実な増加をもたらすが、Ｑ４Ｗ投与計画が、より大きな血清リンのピーク値及びトラフ値を生むことを示す。
この実施例では、Ｑ２Ｗ治療群に、３つのコホート：（１）０．１ｍｇ／ｋｇの初回用量、（２）０．２ｍｇ／ｋｇの初回用量、及び（３）０．３ｍｇ／ｋｇの初回用量で、１８人のＸＬＨ患者がいた。Ｑ４Ｗ治療群に、３つのコホート：（１）０．２ｍｇ／ｋｇの初回用量、（２）０．４ｍｇ／ｋｇの初回用量、及び（３）０．６ｍｇ／ｋｇの初回用量で、１８人の患者もいた。患者は、５〜１２歳の年齢の範囲であり、平均年齢は８．２歳であった。
実施例４で示したように、本治験において計画した治療期間は、６４週間であり、２つの期間：１６週の個別用量設定期と、それに続く４８週の治療期とからなる。１６週間の治療にわたるＱ２Ｗ治療群の血清リンレベルを図１８に示し、これは、ＫＲＮ２３による１６週間の治療中の血清リンレベルの比較的着実かつ安定な増加を示す。対照的に、Ｑ４Ｗ治療群の血清リンレベルは、図１９に示すように、より大きなピーク値及びトラフ値を示した。全てのコホートにわたるＱ２Ｗ治療群対Ｑ４Ｗ治療群の血清リンレベルの並列比較を図２０に示す。２４週間を通じたＱ２Ｗ及びＱ４Ｗ治療群の血清リンレベルの数字で示した例示を以下の表２４に示す。
血清リンレベルによる観察と同様に、Ｑ２Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルも、Ｑ４Ｗ治療群と比較してより着実かつより安定したペースで増加した。１６週間の治療を通じたＱ２Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルを図２１に示すが、Ｑ４Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルを図２２に示す。全てのコホートにわたるＱ２Ｗ治療群対Ｑ４Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルの並列比較を図２３に示す。２４週間を通じたＱ２Ｗ及びＱ４Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルの数字で示した例示を以下の表２５に示す。
１，２５（ＯＨ）２Ｄのレベルは、血清リンと同様のプロファイルに従った。２８週間を通じたＱ２Ｗ及びＱ４Ｗ治療群の１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルの数字で示した例示を以下の表２６に示す。
骨バイオマーカー血清アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）のレベルも測定し、図２４に示すように、両方の治療レジメンについて経時的な減少を示した。
安全性の観点から、重篤な有害事象は、１６週間の治療を通じて観察されず、中断につながる有害事象はなかった。これは、ＫＲＮ２３がＱ２Ｗ及びＱ４Ｗ投与計画の最初の１６週間を通じて安全かつ耐容性良好であったことを示唆している。成人で観察されたものと同様に、血清及び尿中カルシウムレベルに観察可能な変化は存在せず、平均ｉＰＴＨの変化は最小であった。最後に、ＦＧＦ２３レベルは、以下の表２７に示すように、ＫＲＮ２３治療にわたって増加が見られた。
結論として、血清リンレベルの用量反応は、成人及び小児患者で同様であるように思われ、Ｑ２Ｗレジメンでのはるかに着実かつより安定的な増加と比較して、Ｑ４Ｗレジメンで顕著なピーク値及びトラフ値が観察された。この実施例での結果は、１ｍｇ／ｋｇのＫＲＮ２３治療薬に応答しておよそ１ｍｇ／ｄＬの血清リンレベルの増加をさらに示している。さらに、ＴｍＰ／ＧＦＲ及び１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、一般的に、Ｑ２Ｗ及びＱ４Ｗ投与に応答した血清リンレベルと同じプロファイルに従い、Ｑ２Ｗ投与治療群において経時的により安定かつ着実に増加した。
本明細書で引用されたあらゆる特許、特許出願、及び刊行物の特許請求の範囲、図面、及び／または添付図面を含む開示は、それら全体を参照することで本明細書に組み込まれる。
他に定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する分野において当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書で記載されるものと同様であるかまたは等しい任意の方法及び材料を本発明の実施において使用できるが、好ましい方法及び材料を本明細書に記載する。引用した全ての刊行物、特許、及び特許刊行物は、全ての目的において、それら全体を参照し、本明細書に組み込まれる。
本明細書において考察される出版物は、本出願の出願日の前のその開示に関してのみ提供する。本明細書に記載するもののいずれも、以前の発明によりこのような出版物に先行するものとは本発明が見なされないことを受け入れるものとして解釈されるべきではない。
本発明は、その特定の実施態様と関連付けて記載されているが、さらなる改変が可能であることを理解されたい。本出願は、一般に、本発明の原理に従って本発明の任意の改変、使用、または適合を包含するように意図され、それらには本発明が属する技術分野で公知のまたは慣例の実施の範囲内であり、そして添付の請求の範囲に従い本明細書中前記の本質的な特徴に適用され得るような本発明の開示からの逸脱が含まれる。
第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員についての治験日による平均（±ＳＤ）の血清リン値を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員についての治験日による平均（±ＳＤ）のＴｍＰ／ＧＦＲレベルを示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した患者における血清リンのＡＵＣｌａｓｔ（左パネル）及びＡＵＣｎ（右パネル）対ＴｍＰ／ＧＦＲのＡＵＣｌａｓｔ（左パネル）及びＡＵＣｎ（右パネル）の散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員についてノモグラムから算出したＴｍＰ／ＧＦＲ対ノモグラムから手作業で読み取ったＴｍＰ／ＧＦＲの散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員について４回の投与間隔の経時的な平均（±ＳＤ）の１，２５（ＯＨ）２Ｄレベル（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、経時的な平均（±ＳＤ）の総ＦＧＦ２３及び未結合ＦＧＦ２３値を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の薬物動態分析について、経時的な（４回の投与間隔中の）平均（±ＳＤ）のＫＲＮ２３濃度を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析において、ベースラインからの血清リン変化のＡＵＣ対血清ＫＲＮ２３ ＡＵＣの散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の薬物動態分析において、ベースラインからのＴＭＰ／ＧＦＲ変化のＡＵＣ対血清ＫＲＮ２３ ＡＵＣの散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の薬物動態分析において、ベースラインからの血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ変化のＡＵＣ対血清ＫＲＮ２３ ＡＵＣの散布図を示す。 第１フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の薬物動態分析において、集団ＰＫ−ＰＤモデル予測からのＫＲＮ２３で治療したＸＬＨを有する成人被験者におけるＫＲＮ２３濃度と血清リンのベースラインからの変化との関係を示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員の経時的な平均（±ＳＤ）の血清リン値を示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員の経時的な平均（±ＳＤ）のＴｍＰ／ＧＦＲレベルを示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、ＫＲＮ２３で治療した被験者全員の経時的な平均（±ＳＤ）の１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルを示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、経時的な平均（±ＳＤ）の総インタクトＦＧＦ２３値を示す。 第２フェーズＩ／ＩＩ臨床試験中の有効性分析について、経時的な平均 （±ＳＤ）の総未結合インタクトＦＧＦ２３値を示す。 Ｘ染色体連鎖低リン血症病態生理学、及び抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３による治療の提案モデルを示す。 提案されたフェーズ２治験設計の概略図を示す。 抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３のＱ２Ｗ投与計画で治療した小児患者における血清リンレベルを示す。 抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３のＱ４Ｗ投与計画で治療した小児患者における血清リンレベルを示す。 Ｑ２Ｗ投与計画またはＱ４Ｗ投与計画で、抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３で治療した小児患者における血清リンレベルの並列比較を示す。 抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３のＱ２Ｗ投与計画で治療した小児患者におけるＴｍＰ／ＧＲＦレベルを示す。 抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３のＱ４Ｗ投与計画で治療した小児患者におけるＴｍＰ／ＧＲＦレベルを示す。 Ｑ２Ｗ投与計画またはＱ４Ｗ投与計画で、抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３で治療した小児患者におけるＴｍＰ／ＧＲＦレベルの並列比較を示す。 Ｑ２Ｗ投与計画またはＱ４Ｗ投与計画で、抗ＦＧＦ２３抗体ＫＲＮ２３で治療した小児患者における血清アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）レベルの並列比較を示す。
ＴｍＰ／ＧＦＲは、過剰ＦＧＦ２３のＫＲＮ２３介在阻害がリンレベルを増加させる提案された機序である。ＴｍＰ／ＧＦＲは、血清リンと同じパターンをたどり、ＫＲＮ２３治療後に増加した血清リンレベルが、主に、腎近位尿細管からのリン再吸収の増加によるものであることを示唆した。全投与間隔及び被験者全員において、平均のＴｍＰ／ＧＦＲは、ベースライン（来診２、本治験の０日目）と比較して、１４日目に臨床的に有意な量まで増加した後、次の投与前に投与前レベルに向かって減少した（表２１）。平均のＴｍＰ／ＧＦＲは、各投与間隔の１４日目に、ベースラインレベルの１．５６４±０．３０１２から、２．４０８±０．７２０５ｍｇ／ｄＬ〜２．９２１±０．５９９０ｍｇ／ｄＬの範囲内のレベルに増加し；ベースラインからの１４日目の変化は、０．８４９±０．７６６５〜１．３５２±０．５８９２の範囲であった。２５日目のＴｍＰ／ＧＦＲレベルは、２．１９５±０．３８１９ｍｇ／ｄＬ〜２．５５１±０．６５３８ｍｇ／ｄＬの範囲であり、ベースラインからの変化は、０．６３６±０．３０８５〜１．００４±０．６７７７の範囲であった。
１２回の各投与間隔中に、平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、７日目までに最大レベルに増加した後、次の投与前にベースラインに匹敵するレベルに減少した。１，２５（ＯＨ）２Ｄのピークレベルが最初から最後の投与間隔まで経時的に減少する傾向がある（表２２）。ベースライン（来診２、第１フェーズＩ／ＩＩ臨床治験の０日目）の平均血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルは、３６．４±１２．６４であり、各投与間隔の７日目に、５３．１±２０．２８ｐｇ／ｍＬ〜９２．０±４３．２１ｐｇ／ｍＬの範囲内で最大に増加した。血清１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルにおけるベースラインからの７日目の最大変化は、治験を通じて１９．６±１５．９１ｐｇ／ｍＬ〜６３．４±３５．５２ｐｇ／ｍＬの範囲内のままであった。
実施例３：ＫＲＮ２３によるＦＧＦ２３の阻害が、骨再形成の増加をもたらす
本発明の発明者らは、成人及び子供においてＸＬＨにより引き起こされた骨軟化症の病理学的変化の治療及び回復において、ＦＧＦ２３（例えば、ＫＲＮ２３）に対する抗体によるＦＧＦ２３の阻害の特異的効果を観察した。ＫＲＮ２３による治療は、以前から知られるように、リン酸塩ホメオスタシスを矯正する。新規及び予想外のことは、ＦＧＦ２３の阻害が、Ｐ１ＮＰ（血清１型プロコラーゲン／Ｎ末端）及びオステオカルシンなどの骨形成のマーカーの増加や、骨再吸収ＣＴＸ（カルボキシ末端コラーゲン架橋）のマーカーの増加も観察されると共に骨再形成の著しい増加を活性化している。以下の表２３〜２６を参照されたい。低い骨再形成は、骨軟化症の組織病理学的変化の特徴、特に、石灰化した骨が無いことによる破骨細胞活性が欠けていることを説明する長い「石灰化」遅延時間や類骨及び類骨壁厚の増加を反映している。ＦＧＦ２３の遮断により、腎リン酸再吸収、１，２５ビタミンＤ産生、及び増加した骨石灰化を変化させることが予測されるが、臨床データは、骨再形成（形成及び再吸収）の増加が、骨軟化症に拮抗し、骨構造、骨密度を回復させ、湾曲を防ぎながら骨質を改善し、骨格の正常な形成を可能にすることも示唆している。
用量は、投与２週間後の（ピーク値）空腹時血清リンレベルに基づいて、必要に応じて４週間ごとに調整される。ＫＲＮ２３用量の用量設定スキーム（表２７）は、ピークの空腹時血清リンレベルが標的範囲外であるべきであるガイドラインとして使用される。血清リンレベルは上昇しているが、用量設定期の終わりまでに許容可能な標的範囲にまだ到達していない場合、用量設定は、安全性に関する懸念がないならば、標的範囲に到達するまで治療期に継続することができる。
本治験の標的の空腹時血清リン範囲は、投与後およそ１４日目であるＫＲＮ２３のピークＰＤ効果に基づいて、３．５〜４．５ｍｇ／ｄＬ（１．１３〜１．４５ｍｍｏｌ／Ｌ）である。標的範囲は、子供における正常値の低〜中の範囲を表す。このレベルは、異所性鉱質形成のリスクを最小限にしながら、くる病及び他の骨欠陥を改善するのに十分である。用量は、以下に詳述する用量設定スキームに従って、投与２週間後の（ピーク値）空腹時血清リンレベルに基づいて、必要に応じて４週間ごとに調整される。用量設定スキーム（表２８）は、ピークの空腹時血清リンレベルが標的範囲外であるべきである用量調節のガイドラインとして使用される。血清リンレベルは上昇しているが、用量設定期の終わりまでに許容可能な標的範囲にまだ到達していない場合、用量設定は、安全性に関する懸念がないならば、標的範囲に到達するまで治療期に継続することができる。
実施例４で示したように、本治験において計画した治療期間は、６４週間であり、２つの期間：１６週の個別用量設定期と、それに続く４８週の治療期とからなる。１６週間の治療にわたるＱ２Ｗ治療群の血清リンレベルを図１８に示し、これは、ＫＲＮ２３による１６週間の治療中の血清リンレベルの比較的着実かつ安定な増加を示す。対照的に、Ｑ４Ｗ治療群の血清リンレベルは、図１９に示すように、より大きなピーク値及びトラフ値を示した。全てのコホートにわたるＱ２Ｗ治療群対Ｑ４Ｗ治療群の血清リンレベルの並列比較を図２０に示す。２４週間を通じたＱ２Ｗ及びＱ４Ｗ治療群の血清リンレベルの数字で示した例示を以下の表２９に示す。
血清リンレベルによる観察と同様に、Ｑ２Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルも、Ｑ４Ｗ治療群と比較してより着実かつより安定したペースで増加した。１６週間の治療を通じたＱ２Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルを図２１に示すが、Ｑ４Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルを図２２に示す。全てのコホートにわたるＱ２Ｗ治療群対Ｑ４Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルの並列比較を図２３に示す。２４週間を通じたＱ２Ｗ及びＱ４Ｗ治療群のＴｍＰ／ＧＦＲレベルの数字で示した例示を以下の表３０に示す。
１，２５（ＯＨ）２Ｄのレベルは、血清リンと同様のプロファイルに従った。２８週間を通じたＱ２Ｗ及びＱ４Ｗ治療群の１，２５（ＯＨ）２Ｄレベルの数字で示した例示を以下の表３１に示す。
安全性の観点から、重篤な有害事象は、１６週間の治療を通じて観察されず、中断につながる有害事象はなかった。これは、ＫＲＮ２３がＱ２Ｗ及びＱ４Ｗ投与計画の最初の１６週間を通じて安全かつ耐容性良好であったことを示唆している。成人で観察されたものと同様に、血清及び尿中カルシウムレベルに観察可能な変化は存在せず、平均ｉＰＴＨの変化は最小であった。最後に、ＦＧＦ２３レベルは、以下の表３２に示すように、ＫＲＮ２３治療にわたって増加が見られた。

Claims (20)

  1. 抗ＦＧＦ２３リガンドの使用方法であって、
    そのような治療を必要とする被験者に有効量の抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含み、
    前記抗ＦＧＦ２３リガンドの投与計画は、前記被験者中の前記抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定される、前記方法。
  2. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドの前記ＰＤパラメーターが、投与間隔内のＡＵＣ血清リン、ピーク値とトラフ値の血清リン、Ｔｍｐ／ＧＦＲ、血清１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ、及び血清２５−ヒドロキシビタミンＤからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  3. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドが、抗ＦＧＦ２３抗体、ＦＧＦ２３アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＦＧＦ２３の小分子阻害剤、及びＦＧＦ２３アンタゴニストからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  4. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドが、抗ＦＧＦ２３抗体である、請求項１に記載の方法。
  5. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６から選択される１つまたは複数のＣＤＲ配列を含む、請求項１に記載の方法。
  6. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドの前記投与計画が、投与サイクルにわたって所定レベルの血清リンをもたらす、請求項１に記載の方法。
  7. 前記投与計画が、投与サイクル中にＮａＰｉ輸送体活性を低下させることなくＮａＰｉ輸送体への持続的な効果をもたらす投与頻度を含む、請求項１に記載の方法。
  8. 前記投与計画が、２週間ごとに抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含む、請求項１に記載の方法。
  9. 前記投与計画が、骨再形成の増加をもたらす、請求項１に記載の方法。
  10. ＦＧＦ２３に関する状態の治療方法であって、
    そのような治療を必要とする被験者に有効量の抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含み、
    前記抗ＦＧＦ２３リガンドは、前記被験者中の前記抗ＦＧＦ２３リガンドの１つまたは複数のＰＤパラメーターに基づいて決定された投与計画で投与される、前記方法。
  11. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドが、抗ＦＧＦ２３抗体である、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記被験者が、ＸＬＨを有する、請求項１０に記載の方法。
  13. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドが、抗体であり、前記投与計画が、２週間ごとに前記抗ＦＧＦ２３抗体を投与することを含む、請求項１０に記載の方法。
  14. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドの前記投与計画が、投与サイクルにわたって所定レベルの血清リンをもたらす、請求項１０に記載の方法。
  15. 骨再形成の増加方法であって、
    そのような治療を必要とする被験者に有効量の抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含み、
    前記抗ＦＧＦ２３リガンドは、血清１型プロコラーゲン／Ｎ末端（Ｐ１ＮＰ）及びカルボキシ末端コラーゲン架橋（ＣＴＸ）からなる群から選択されるマーカーの増加を引き起こす、前記方法。
  16. 前記被験者が、ＸＬＨを有する、請求項１５に記載の方法。
  17. ＦＧＦ２３に関する状態の治療方法であって、
    そのような治療を必要とする被験者に有効量の抗ＦＧＦ２３リガンドを投与することを含み、
    前記抗ＦＧＦ２３リガンドは、２週間ごとにまたは４週間ごとに投与される、前記方法。
  18. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドが、抗ＦＧＦ２３抗体である、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記被験者が、ＸＬＨを有する、請求項１７に記載の方法。
  20. 前記抗ＦＧＦ２３リガンドが、抗体であり、前記投与計画が、２週間ごとに前記抗ＦＧＦ２３抗体を投与することを含む、請求項１７に記載の方法。
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